KR101719794B1 - Primer for diagnosis of Pythium ultimum and uses thereof - Google Patents
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Abstract
본 발명은 서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트를 포함하는 군으로부터 선택되는 적어도 하나 이상의 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum) 검출용 프라이머 세트 및 이를 이용하여 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 검출하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a primer set for detecting Pythium ultimum of at least one ginseng selected from the group consisting of primers set forth in SEQ ID NOS: 1 and 2, and a primer set for detecting Pythium ultimum ).
Description
본 발명은 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 진단하기 위한 프라이머에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 유전체를 추출하는 과정을 거치지 않고 직접 핵산 증폭 과정을 통해 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 진단할 수 있는 프라이머 및 이를 이용한 검출 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a primer for diagnosing Pythium ultimum of ginseng. More particularly, the present invention relates to a primer for diagnosing Pythium ultimum of ginseng , And a detection method using the primer.
인삼은 유묘 생산이 농사의 성패를 좌우할 만큼 중요한데, 대부분 재배 농가에서는 병원균에 오염된 인공 용토나 자재 등을 사용함으로 인하여 모잘록병에 의한 피해를 많이 보고 있다. 모잘록병은 파종상이나 육묘상의 지온이 낮고 다습하거나 산성 토양일 경우 병 발병이 더욱 심하게 발생한다. 특히 기온이 17℃~23℃의 저온일수록 피시움 울티멈(Pythium ultimum)의 번식력이 가장 활발해져 그 피해가 더욱 커져서 재파종을 해야 한다. Ginseng is important for seedling production to control the success of farming. Most of the ginseng farmers suffer damages due to the use of artificial soil and materials contaminated with pathogens. In the case of low temperature and low temperature of seedlings or soil moisture, mudrock disease occurs more severely when it is humid or acid soil. Especially, the lower temperature of 17 ℃ ~ 23 ℃, the more active the breeding power of Pythium ultimum, the more damage it will have to re-sowing.
일반적으로 작물에서 모잘록병을 일으키는 병원 미생물은 라이족토니아 솔라니(Rhizoctonia solani), 피시움 울티뭄(Pythium ultimum), 피시움 아파니데르마툼(P. aphanidermatum), 피시움 에치노카르품(P. echinocarpum), 피시움 부트레이(P. butleri), 덩굴쪼김병균(Fusarium oxysporum f. sp. spinaciae) 등이 알려져 있다. 특히 모잘록병균은 주로 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)이 주종을 이루고 있으며 인삼에서의 모잘록병도 같은 균에 의해 발생한다. 또한 피시움 울티멈(Pythium ultimum)은 모잘록병 뿐만 아니라 뿌리썩음병에도 관여되는 것으로 알려져 있다. In general, the pathogenic microorganisms causing the mosaicism in the crops are Rhizoctonia solani , Pythium ultimum , P. aphanidermatum , P. umphilocarpus ( P. echinocarpum , P. butleri , and Fusarium oxysporum sp. spinaciae are known. Especially, Pythium ultimum is the predominant strain of Mongolian disease , and Mongol disease of Ginseng is also caused by the same strain. Pythium ultimum is also known to be involved in root rot as well as pollen.
인삼의 모잘록병 및 뿌리썩음병은 매우 치명적이며 급속한 발병을 일으키는 대표적인 토양전염성 식물병으로써 대개 어린 인삼의 줄기부분을 가해하여 식물체를 고사시키며, 지제부가 갈색 내지 암갈색으로 변하며 마른 상태로 썩는 특징을 나타낸다. 모잘록병은 특히 그 발병형태에 따라 프리이머전스 모잘록병(pre-emergence damping-off)와 포스트이머전스 모잘록병(post-emergence damping-off)으로 구분되고 있다. The ginkgo biloba and root rot disease are very deadly and cause a rapid onset. It is a typical infectious plant disease. It usually causes the stem part of young ginseng to be torn down and the plant turns brown to dark brown. It is divided into pre-emergence damping-off and post-emergence damping-off depending on the onset of the disease.
또한, 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)은 균사에 격막이 없고 유주자를 형성하며, 유성생식후 난포자를 형성한다. 형태가 조류와 비슷해 조균류라 부르기도 하며, 노균병균목 안의 부패균과에 속하고 여기에는 피시움(Pythium)과 파이토프토라(Phytophthora)의 2속이 있다. Pythium ultimum also has no diaphragm in the mycelium, forms a host, and forms oocytes after sexual reproduction. It is also called bird fungus because its shape is similar to that of algae. It belongs to the fungi belonging to the fungi in the nociceptic fungi, and there are two genera of Pythium and Phytophthora.
피시움 울티뭄(Pythium ultimum)은 육상식물 뿐만 아니라 조류에도 기생하나 대부분은 토양이나 민물에서 부생생활을 하며, 세포막이 다른 곰팡이들과 달리 주로 섬유소(cellulose)로 구성되어 있으며, 스테롤(sterol)을 생체내에서 합성하지 못하는 곰팡이이다. Pythium ultimum is parasitic not only on terrestrial plants but also on algae, but most of them are by-products in soil or fresh water. Unlike other fungi, cell membranes are mainly composed of cellulose, and sterols It is a mold that can not synthesize in vivo.
인삼에서 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)균에 의한 증상은 인삼의 지제부가 수침상으로 물러 썩는 것으로 나타난다. 지금까지 모잘록병의 방제는 살균제 처리에 의한 토양소독과 종자침지 등 농약을 주로 사용하며, 발리다미신(validamycin), 코로피크린(choropicrin), 카프탄(captan), 타키가렌(tachigaren), 호마이(homai), 카프타폴(captafol), PCNB, 마넵(maneb)등의 농약류가 이용되고 있다.Symptoms caused by Pythium ultimum bacteria in ginseng are that the ginseng root is decomposed into a needle bed. Until now, the control of moss green mosaic disease has been mainly applied to pesticides such as soil disinfection and seed immersion by disinfectant treatment, and it has been widely used in the fields of validamycin, choropicrin, captan, tachigaren, homai, captafol, PCNB, and maneb are used.
또한, 최근 길항미생물을 이용한 생물학적 방제가 환경오염문제나 인축의 농약중독성 문제를 감소시킬 수 있는 친환경 방제법으로 인식되면서 각종 미생물비료나 미생물농약이 제제화되어 등록 및 시판되고 있다.Recently, biological control using antagonistic microorganisms has been recognized as an environmentally friendly control method that can reduce problems of environmental pollution and pesticide poisoning of human being, and various microbial fertilizers and microbial pesticides are formulated and registered and marketed.
그러나 종래의 국내외 미생물제제에 사용되는 길항미생물의 자체의 역가는 우수하나, 실제 재배에서는 그 역가가 현저히 감소하는 경향이 있다. 이는 근권정착 능력의 부족, 선택미생물의 현장 생존력 부족, 토착미생물과의 경합 부족, 온도에 저항력 부족 등 환경조건의 무시, 전달체계의 미흡이나 토양 우점화 방법의 미확립, 캐리어(carrier)의 편향적 사용 등의 문제점 때문이다. 그리고 미생물제제에 사용되는 유용미생물은 근권에서 생존하지 못하거나 뿌리 분비물에 저항하지 못하여 정착능력이 현저히 감소하여 그 효과를 볼 수가 없다는 문제 역시 존재한다.However, the antagonistic microorganisms used in conventional domestic and foreign microorganism preparations have excellent performance, but their activity tends to be significantly reduced in actual cultivation. This is due to the lack of the ability to settle in the rhizosphere, the lack of field viability of selective microorganisms, the lack of competition with indigenous microorganisms, the lack of resistance to temperature, the lack of delivery systems, And the like. There is also a problem that the useful microorganisms used in the microorganism preparation do not survive in the rhizosphere or resist the root secretion, and the ability to fix is remarkably reduced, so that the effect can not be seen.
결과적으로, 인삼에의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)에 의한 감염을 후에 치료하는 것보다 사전에 방지할 수 있는 것이 더욱 효과적이며 이를 빠르고 정확하게 진단해내는 것이 인삼재배의 효율을 높인다는 측면에서 시급하게 요구되는 실정이다.As a result, it is more effective to prevent infections caused by Pythium ultimum than to treat the infections caused by ginseng in advance, and it is more effective to diagnose them quickly and accurately. In order to improve the efficiency of ginseng cultivation, .
본 발명은 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)의 유전체를 추출하지 않고 직접 핵산 증폭에 의하여 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 진단할 수 있는 프라이머 및 이의 용도를 제공함으로써, 보다 신속하고 정확하게 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 진단할 수 있도록 하고자 한다.The present invention provides a primer capable of diagnosing Pythium ultimum of ginseng by direct nucleic acid amplification without extracting the genome of Pythium ultimum of ginseng and its use, I would like to be able to diagnose Pythium ultimum accurately.
본 발명의 일측면은 서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트를 포함하는 군으로부터 선택되는 적어도 하나 이상의 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum) 검출용 프라이머 세트를 제공할 수 있다.One aspect of the present invention can provide a primer set for detecting Pythium ultimum of at least one ginseng selected from the group consisting of the primer sets represented by SEQ ID NOS: 1 and 2.
또한, 상기 프라이머 세트는 direct PCR(polymerase chain reaction)에 사용하기 위한 것인 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum) 진단용 프라이머 세트를 제공할 수 있다.In addition, the primer set can provide a primer set for diagnosis of Pythium ultimum of ginseng for use in a direct PCR (polymerase chain reaction).
또한, 상기 프라이머 세트를 포함하는 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum) 검출용 조성물을 제공할 수 있다.Also, it is possible to provide a composition for detecting Pythium ultimum of ginseng comprising the primer set.
또한, 상기 검출용 조성물을 포함하는 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum) 검출용 키트를 제공할 수 있다.Also, a kit for detecting Pythium ultimum of ginseng containing the composition for detection can be provided.
또한, 본 발명의 일측면은 인삼 재배 토양 시료로부터 유래한 주형 DNA와 상기 프라이머 세트를 혼합하는 단계 및 상기 혼합 결과물을 PCR(polymerase chain reaction) 증폭시키는 단계를 포함하는 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 검출하는 방법을 제공할 수 있다.In addition, an aspect of the invention, the step and the mixing result of mixing a template DNA with a primer set derived from ginseng cultivated soil PCR (polymerase chain reaction) Fish help of ginseng, comprising the step of amplifying wool timum (Pythium ultimum < / RTI >
또한, 상기 PCR(polymerase chain reaction) 방법은 Direct PCR(polymerase chain reaction) 방법인 것인 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 검출하는 방법을 제공할 수 있다.In addition, the PCR (polymerase chain reaction) method can be a direct PCR (polymerase chain reaction) method, and can provide a method for detecting Pythium ultimum of ginseng.
또한, 상기 주형 DNA는 DNA 추출(extraction) 및 정제(purification) 과정 없이, 인삼 재배 토양을 용해 완충액(Lysis buffer)로 용해하여 준비한 것인 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 검출하는 방법을 제공할 수 있다.In addition, the template DNA is prepared by dissolving the ginseng cultivation soil with a lysis buffer without DNA extraction and purification, and a method of detecting Pythium ultimum of ginseng .
본 발명에 따른 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum) 진단용 프라이머는 genomic DNA 추출에 필요한 시간과 비용이 필요하지 않고, 핵산증폭과정이 고속의 빠른 주기로 실험할 수 있기 때문에 분석 시간을 크게 단축시킬 수 있으며, 상기의 프라이머의 개발을 통하여 토양에서 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)의 감염 여부를 신속하고 정확하게 진단할 수 있다.The Pythium ultimum diagnostic primer for ginseng according to the present invention does not require the time and cost required for genomic DNA extraction and can greatly shorten the analysis time because the nucleic acid amplification process can be performed at a high speed and at a high cycle rate Through the development of the above primers, it is possible to quickly and accurately diagnose the infection of Pythium ultimum in ginseng in soil.
도 1은 인삼 모잘로병 및 뿌리썩음병 유사 병징 프라이머의 특이성을 검정한 결과를 나타낸 것이다.FIG. 1 shows the results of testing the specificity of a ginseng moth alpaca and root rot-like disease-prone primer.
본 명세서에 있어서, "프라이머"는 카피하려는 핵산 가닥에 상보적인 단일 가닥 올리고뉴클레오티드 서열을 말하며, 프라이머 연장 산물의 합성을 위한 개시점으로서 작용할 수 있다. 하기 프라이머의 길이 및 서열은 연장산물의 합성을 시작하도록 허용해야 한다. 프라이머의 구체적인 길이 및 서열은 요구되는 DNA 또는 RNA 표적의 복합도(complexity)뿐만 아니라 온도 및 이온 강도와 같은 프라이머 이용 조건에 의존할 것이다.As used herein, "primer" refers to a single stranded oligonucleotide sequence complementary to a nucleic acid strand to be copied, and may serve as a starting point for synthesis of the primer extension product. The length and sequence of the following primers should be allowed to start the synthesis of the extension product. The specific length and sequence of the primer will depend on the primer usage conditions such as temperature and ionic strength, as well as the complexity of the desired DNA or RNA target.
서열번호 1 내지 2로 표시되는 염기서열은 본 발명의 일측면에 따른 실시예로서 제시되는 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 진단할 수 있는 프라이머의 염기서열을 나타낸다. 서열번호 1은 정방향(forward) 프라이머를 나타내며, 서열번호 2는 역방향(reverse) 프라이머를 나타낸다.The nucleotide sequence shown in SEQ ID NOS: 1 to 2 represents the nucleotide sequence of a primer capable of diagnosing Pythium ultimum of ginseng as an example according to one aspect of the present invention. SEQ ID NO: 1 represents a forward primer and SEQ ID NO: 2 represents a reverse primer.
본 발명에 따른 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum) 특이 프라이머는 genomic DNA 추출 과정을 거치지 않는 직접핵산증폭과정(direct polymerase chain reaction)을 통하여 고속의 온도 변화 주기에서 유전자 연쇄 증폭 반응이 안정적으로 이루어진다. 직접핵산증폭과정의 반응을 위해서는 98℃의 초기 고온과 64℃의 Tm 반응을 고속의 온도 변화 주기를 거치는 핵산증폭과정하에서 over heating이나 유전자 간섭없이 안정적으로 반응할 수 있는 프라이머 세트이다.The Pythium ultimum specific primer of ginseng according to the present invention is stable in the gene chain amplification reaction at a high temperature change cycle through a direct polymerase chain reaction without genomic DNA extraction . For the reaction of the direct nucleic acid amplification process, it is a set of primers capable of stably reacting at an initial high temperature of 98 ° C and a T m reaction of 64 ° C under overheating or gene interference under a nucleic acid amplification process through a high temperature cycle.
이하 본 발명의 일측면에 따른 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)의 진단을 할 수 있는 프라이머를 제작하기 위한 구체적인 실시예를 서술한다.Hereinafter, a specific embodiment for producing a primer capable of diagnosing Pythium ultimum of ginseng according to one aspect of the present invention will be described.
실시예 1. 프라이머의 제작Example 1. Preparation of primer
인삼에서 발생하는 모잘록병 및 뿌리썩음병 유사 병징(Pythium ultimum)에 대하여 NCBI의 염기서열을 수집하여 beta-tubulin 유전자에서 총 1세트 프라이머를 제작하였다. 프라이머에 대한 정보는 하기 표 1에 나타내었다. 2종의 프라이머를 조합하여 PCR을 수행한 결과, Pythium ultimum 특이적인 밴드 양상을 보였고, 다른 토양 병원균에는 증폭되지 않았다. 그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1을 참고하면, Lane 1은 100bp marker, Lane 2, 3, 4는 Pythium ultimum, Lane 5는 Cylindrocarpon destructance, Lane 6은 Cylindrocarpon discores, Lane 7은 Cladosporium sp., Lane 8은 Phytophthora capsici, Lane 9는 Acidovorax avenea, Lane 10은 Clavibacter michiganensis, Lane 11은 Psudomonas sp., Lane 12는 Fusarium oxysporum, Lane 13은 Verticillium sp., Lane 14는 Pythium sp., Lane 15는 Rhizoctonia sp., Lane 16은 Ralstonia sp.을 나타낸다.A total of 1 set of primers was prepared from the beta-tubulin gene by collecting the nucleotide sequence of NCBI against the germinosis- like disease and root rot-like disease ( Pythium ultimum ). Information on the primers is shown in Table 1 below. As a result of PCR using two kinds of primers, Pythium ultimum specific band pattern was observed, but it was not amplified in other soil pathogens. The results are shown in Fig. 1, Lane 1 is a 100 bp marker, Lane 2, 3 and 4 are Pythium ultimum , Lane 5 is Cylindrocarpon destructance, Lane 6 is Cylindrocarpon discores , Lane 7 is Cladosporium sp., Lane 8 is Phytophthora capsici , the Acidovorax avenea, Lane 10 is Clavibacter michiganensis, Lane 11 is Psudomonas sp., Lane 12 is a Fusarium oxysporum, Lane 13 is Verticillium sp., Lane 14 is a Pythium sp., Lane 15 is a Rhizoctonia sp., Lane 16 is Ralstonia sp. .
상기 각각의 프라이머쌍은 단독 또는 둘의 조합으로 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 진단할 수 있는 마커로 사용될 수 있다.Each of the primer pairs may be used alone or in combination of two as a marker capable of diagnosing Pythium ultimum of ginseng.
각 프라이머 또는 이들을 이용해 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 진단해내는 방법은 다음과 같다.The method of diagnosing Pythium ultimum of each primer or the ginseng using these primers is as follows.
먼저 인삼을 재배하는 토양 시료로부터 주형 DNA를 제작한다. 이러한 주형 DNA에 본 발명의 일측면에 따른 프라이머 세트를 혼합한다. 이렇게 혼합한 결과물을 PCR 증폭시키는 단계를 거치면 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)에 특이성을 보이지 여부를 진단할 수 있다.First, template DNA is prepared from a soil sample that grows ginseng. The template DNA is mixed with a primer set according to one aspect of the present invention. PCR amplification of the resultant mixture can be used to diagnose the specificity of Pythium ultimum of ginseng.
이때, 주형 DNA는 추출(extraction) 및 정제(purification) 과정 없이 인삼 종자 또는 인삼 식물체를 용해 완충액(Lysis buffer)로 용해하여 준비할 수 있다. 또한, PCR 증폭 시키는 단계는 direct PCR 방법을 이용할 수 있다.At this time, the template DNA can be prepared by dissolving the ginseng seeds or the ginseng plant with a dissolution buffer (Lysis buffer) without extraction and purification. In addition, direct PCR method can be used for PCR amplification step.
또한, 본 발명의 일측면에 따른 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)의 진단용 프라이머 조합과 그에 따른 PCR 산물의 크기를 아래 표 2에 나타내었다.In addition, the combination of the diagnostic primer for Pythium ultimum of ginseng and the size of the PCR product according to one aspect of the present invention is shown in Table 2 below.
크기(bp)PCR product
Size (bp)
PCR 결과, 토양 전염성 병원균인 Pythium ultimum 3종, Cylindrocarpon destructance 1종, Cylindrocarpon discores 1종, Cladosporium sp. 1종, Phytophthora capsici 1종, Acidovorax avenea 1종, Clavibacter michiganensis 1종, Psudomonas sp. 1종, Fusarium oxysporum 1종, Verticillium sp. 1종, Pythium sp. 1종, Rhizoctonia sp. 1종, Ralstonia sp. 1종에서는 전혀 반응이 일어나지 않았고, Pythium ultimum에 대하여만 특이적으로 반응하는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 도 1에서도 확인할 수 있다.As a result of the PCR, three Pythium ultimum , Cylindrocarpon destructance, one Cylindrocarpon discores , Cladosporium sp. 1 kinds, Phytophthora capsici 1 kinds, Acidovorax avenea 1 kinds, Clavibacter michiganensis 1 kinds, Psudomonas sp. 1 species, Fusarium oxysporum 1 species, Verticillium sp. 1 species, Pythium sp. 1 species, Rhizoctonia sp. 1 species, Ralstonia sp. In one species, no reaction occurred, and only Pythium ultimum was found to react specifically. These results can be seen in FIG.
실시예 2. 인삼 모잘록병 및 뿌리썩음병 유사 병징 진단용 프라이머를 이용한 Direct PCR 반응Example 2. Direct PCR reaction using a primer for diagnosis of ginseng mosaic disease and root rot disease
상기 실시예 1에서 제작한 2종의 프라이머 1 세트를 이용하여 PCR 반응을 수행하였다. PCR 조성은 하기 표 3에 기재한 바와 같으며, 98℃ 3분 → 95℃ 30초 → 95℃ 5초 → 64℃ 5초 → 72℃ 10초(35 사이클) → 72℃ 5분의 조건으로 진행하였다.PCR reaction was carried out using one set of two kinds of primers prepared in Example 1 above. The composition of the PCR was as shown in Table 3 below, and the PCR was carried out at 98 ° C. for 3 minutes → 95 ° C. for 30 seconds → 95 ° C. for 5 seconds → 64 ° C. for 5 seconds → 72 ° C. for 10 seconds (35 cycles) → 72 ° C. for 5 minutes Respectively.
(includes dNTPs and MgCl2)2x Direct PCR buffer
(includes dNTPs and MgCl 2 )
<110> Republic of Korea <120> Primer for diagnosis of Pythium ultimum and uses thereof <130> PAA14-0091-KR0 <160> 4 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pubt04F <400> 1 cgtcgtcgaa ccatacaatg 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pubt03R <400> 2 cagcacacac caagtggttc 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pubt04F(PCR) <400> 3 cgtcgtcgaa ccatacaatg 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pubt03R(PCR) <400> 4 cagcacacac caagtggttc 20 <110> Republic of Korea <120> Primer for diagnosis of Pythium ultimum and uses thereof <130> PAA14-0091-KR0 <160> 4 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pubt04F <400> 1 cgtcgtcgaa ccatacaatg 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Pubt03R <400> 2 cagcacacac caagtggttc 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> ≪ 223 > Pubt04F (PCR) <400> 3 cgtcgtcgaa ccatacaatg 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> ≪ 223 > Pubt03R (PCR) <400> 4 cagcacacac caagtggttc 20
Claims (7)
상기 혼합 결과물을 PCR(polymerase chain reaction) 증폭시키는 단계;를 포함하는 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 검출하는 방법.Mixing the template DNA derived from the ginseng cultivation soil sample with the primer set of the first aspect; And
And amplifying the resultant mixture by PCR (Polymerase Chain Reaction ). The method of detecting Pythium ultimum of ginseng.
상기 PCR(polymerase chain reaction) 방법은 Direct PCR(polymerase chain reaction) 방법인 것인 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 검출하는 방법.6. The method of claim 5,
Wherein the polymerase chain reaction (PCR) method is a Direct PCR (polymerase chain reaction) method, wherein the Pythium ultimum of ginseng is detected.
상기 주형 DNA는 DNA 추출(extraction) 및 정제(purification) 과정 없이, 인삼 재배 토양을 용해 완충액(Lysis buffer)로 용해하여 준비한 것인 인삼의 피시움 울티뭄(Pythium ultimum)을 검출하는 방법.6. The method of claim 5,
Wherein the template DNA is prepared by dissolving the ginseng cultivation soil in a lysis buffer without DNA extraction and purification, and detecting the Pythium ultimum of the ginseng.
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Non-Patent Citations (1)
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| Mycologia., Vol. 98, No. 3, pp. 410-422 (2006.05.)* |
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