KR101674224B1

KR101674224B1 - Composition comprising the extracts of Hericium erinaceus for preventing or treating brain disease

Info

Publication number: KR101674224B1
Application number: KR1020110116965A
Authority: KR
Inventors: 조경옥; 김성윤; 정경훈; 김영옥; 이상원
Original assignee: 가톨릭대학교 산학협력단
Priority date: 2011-11-10
Filing date: 2011-11-10
Publication date: 2016-11-23
Also published as: KR20130051677A

Abstract

본 발명은 노루궁뎅이 버섯 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌손상 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로서, 노루궁뎅이 버섯으로부터 추출한 추출물을 마우스 동물모델에 섭취하게 한 후, 뇌손상을 유발시켰을 경우 뇌손상에 의한 뇌 신경세포의 세포사멸 억제 효과가 노루궁뎅이 버섯 추출물을 섭취하지 않은 대조군 마우스에 비해 현저하게 우수하다는 사실을 확인함으로써 노루궁뎅이 버섯 추출물을 뇌손상의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물로 사용할 수 있다는 사실을 제공한다. 뿐만 아니라 노루궁뎅이 버섯은 안전하게 식용 가능한 버섯으로 인정받고 있어 뇌손상 질환 증상을 개선 또는 예방할 수 있는 기능성 건강 식품의 제조에도 사용할 수 있는 효과가 있다. The present invention relates to a composition for preventing or treating cerebral damage diseases, comprising an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient, which comprises an extract obtained from a mushroom, Of the present invention is significantly superior to the control mice that did not ingest the mushroom extract of Aspergillus oryzae, the extract of Aspergillus oryzae may be used as a pharmaceutical composition for preventing or treating brain damage . In addition, it has an effect that it can be used for the production of a functional health food which can be improved or prevented from symptoms of cerebral injury disease because it is recognized as a safe edible mushroom.

Description

[0001] The present invention relates to a composition for preventing or treating cerebral damage comprising an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient,

본 발명은 노루궁뎅이 버섯 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌손상의 예방 또는 치료용 조성물과 건강기능성 식품에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for preventing or treating brain damage and a health functional food comprising an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

뇌신경세포의 손상은 크게 두 가지 기전에 의해 유발되는데, 첫째는 뇌세포막 전압의 변화에 의한 유리아미노산의 증가에 의한 것이며, 둘째는 직접적인 산화성 스트레스(Oxidative stress)에 의한 세포독성(cytotoxicity)의 증가에 의한 것으로 알려져 있다(Coyle,J.T et,al(1993), Oxidative Stress, glutamate and neurodegenerative disorders., science, 262:689-695).Cerebral nerve cell damage is largely caused by two mechanisms: first, by increase of free amino acid by changes in brain cell membrane voltage; second, by increase of cytotoxicity by direct oxidative stress (Coyle, JT et al. (1993), Oxidative Stress, glutamate and neurodegenerative disorders., Science, 262: 689-695).

특히, 뇌손상에 의해 유발될 수 있는 뇌질환 중, 발작(seizure)은 중추신경계에서 신경세포들이 과도하게 흥분하여 뇌세포막 전압의 변화에 의해 “흥분과 억제의 정상적인 균형”이 변화하여 나타나는 현상이며 과도한 흥분이 발생하는 부위에 따라 크거나 작은 경련을 수반한다. 이러한 발작은 인구의 5-10%에서 사는 동안 최소한 1회 이상 경험한다. In particular, among brain diseases that may be caused by brain damage, seizure is a phenomenon in which the nerve cells in the central nervous system are excessively excited and the "normal balance of excitation and inhibition" changes due to changes in brain cell membrane voltage Depending on where the excessive excitement occurs, it may involve large or small cramps. These seizures occur at least once during the 5-10% of the population.

또한, 간질(epilepsy)은 이러한 종류의 원인질환에 의해 발작이 반복되어 만성화된 질환을 말한다. 간질발작을 유발하는 원인은 수없이 많으나 뇌 염, 뇌 외상, 발열성 질환, 뇌졸중, 뇌 암, 유전질환, 약물 등이 원인이 될 수 있으며, 간질발작은 크게 부분발작과 전신발작으로 나뉜다. 부분발작은 대뇌피질의 일부분에서 시작되는 발작을 의미하며, 전신발작은 부분발작 없이 대뇌양쪽반구 피질의 광범위한 부분에서 동시에 일어나는 발작을 의미한다. 부분발작이 전신발작으로 진행하는 경우도 있다. Also, epilepsy refers to a disease in which seizures are repeated and chronicized by this kind of causative disease. The causes of epileptic seizures are numerous, but can be caused by brain inflammation, brain trauma, febrile illness, stroke, brain cancer, genetic diseases, drugs, etc. Epileptic seizures are divided into partial seizures and general seizures. A partial seizure refers to a seizure that begins at a portion of the cerebral cortex, and a systemic seizure refers to a seizure that occurs at the same time in a wide range of both hemispheric cortices without partial seizures. Partial seizures may progress to generalized seizures.

간질발작 중 성인에서 가장 많이 볼 수 있는 것은 측두엽간질증후군이며 그 원인으로는 해마의 경화가 가장 큰 원인으로 볼 수 있다. 해마 경화는 반복적 발작, 뇌 외상, 발열성 경련, 뇌염, 뇌 저산소증, 뇌 저포도당증 등 여러 위해 자극의 병리학적 최종 결과이다. 경화된 해마에서는 특히 CA1과 CA3 영역의 피라밋 세포가 소실되며, 신경세포 사이의 비정상적인 연접 및 성상아교세포의 증식이 관찰된다. Among epileptic seizures, the most common symptom in adults is temporal lobe epilepsy syndrome, which is the most likely cause of hippocampal sclerosis. Hippocampal sclerosis is the pathologic end result of multiple stimuli such as recurrent seizures, brain trauma, febrile seizures, encephalitis, brain hypoxia, hypoglycemia of the brain and the like. In the hardened hippocampus, the pyramidal cells in the CA1 and CA3 regions disappear, and abnormal junctions between neurons and proliferation of astrocytic cells are observed.

한편 해마경화가 만성 간질발작의 원인이 되기도 하는데, 그 이유는 과립세포에서 기원한 이끼섬유(mossy fiber)가 연접할 피라밋 세포가 사라졌음으로 인해 다시 과립세포의 수상돌기에 연접하여 회귀성 흥분성 신경회로를 형성하기 때문인 것으로 알려졌다. 따라서 발작은 해마경화를 유발하고 해마경화는 다시 발작을 유발하는 악순환이 발생하게 된다. 해마경화증에서는 궁극적으로 해마의 크기가 작아지는 현상을 초래하게 되며, 간질발작의 후유증으로는 기억상실 외에도 우울증과 불안증 등 정신과적 질환이 나타날 수도 있으며 심한 경우 사망에 이르기도 한다.On the other hand, hippocampal sclerosis is a cause of chronic epileptic seizures because of the disappearance of the pyramidal cells that are associated with mossy fibers originating from granule cells, which are then linked to the dendrites of granule cells, Which is known to form. Thus, seizures cause hippocampal sclerosis and hippocampal sclerosis causes a vicious circle that causes seizures again. In hippocampal sclerosis, the size of the hippocampus is eventually reduced. The sequelae of epileptic seizures may lead to psychiatric disorders such as depression and anxiety, in addition to memory loss, and even death in severe cases.

이러한 간질발작을 치료하는 방법으로 크게 원인질환의 제거와 약물을 이용한 발작의 억제이다. 간질발작의 원인이 분명한 경우에는 그 원인질환을 수술 등을 이용해 제거하나 대부분의 경우 원인질환이 불분명하므로 간질발작 억제제를 이용하여 발작의 재발을 억제한다. 만일, 발작의 억제와 함께 흥분독성으로 인한 신경세포의 사멸을 방어할 수 있는 약물이 환자들에게 제공될 수 있다면 보다 효과적으로 치료할 수 있다. The treatment of these seizure epilepsy is largely the elimination of causative diseases and the suppression of seizures using drugs. If the cause of epileptic seizures is clear, the cause of epilepsy is removed by surgery, but in most cases, the cause of the epilepsy is unclear, so the epileptic seizure inhibitor is used to suppress seizure recurrence. If drugs can be provided to patients to prevent neuronal death due to excitotoxicity with inhibition of seizures, they can be treated more effectively.

이에 간질발작으로 인한 해마 신경세포의 사멸이 주로 N-methyl-D-aspartate(NMDA) 수용체를 경유하는 glutamate의 독성에 기인하기 때문에 NMDA 수용체 차단제인 dizocilpine(MK-801)을 이용하여 발작으로 유발한 신경세포의 사멸을 억제하려는 시도가 있었고, Brandt 등(Neuroscience 118: 727-740, 2003)은 동물실험을 통해 kainate로 간질지속상태(status epilepticus)를 유발시키고 발작 후 90분에 dizocilpine을 투여하면 변연계의 손상이 거의 완전히 보호되었다고 보고한 바 있다. 그러나 아직까지 이러한 물질은 안정성을 인정받지 못해 사람에서 실용화되지는 못하고 있는 실정이다.In this study, we investigated the effects of seizure-induced seizure-induced neuronal cell death by using the NMDA receptor blocker, dizocilpine (MK-801), mainly due to the toxicity of glutamate via the N-methyl-D-aspartate In an attempt to inhibit neuronal cell death, Brandt et al. (Neuroscience 118: 727-740, 2003) induced an epilepticus with kainate in an animal study and treated dizocilpine 90 minutes after seizure, Of the injuries were almost completely protected. However, these materials have not yet been approved for human use because they are not recognized as safe.

따라서 해마에서의 신경세포 손상으로 인한 뇌손상 질환을 효과적으로 치료할 수 있으면서 동시에 부작용이 없는 새로운 치료제를 천연물에서 발굴할 필요성이 있다. Therefore, there is a need to find a new therapeutic agent that can effectively treat brain damage diseases caused by damage of nerve cells in the hippocampus, and at the same time, without side effects, from natural products.

이에 본 발명자들은 노루궁뎅이 버섯 추출물이 뇌손상이 유발되는 경우, 뇌조직 내에서 뇌 신경세포의 세포사멸을 억제하는 효과가 우수함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.Thus, the inventors of the present invention have completed the present invention by confirming that the extract of Aspergillus oryzae has excellent effect of inhibiting the cell death of brain nerve cells in brain tissue when brain injury is induced.

따라서 본 발명의 목적은 노루궁뎅이 버섯 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌손상 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating brain damage diseases, which comprises an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

또한, 본 발명의 다른 목적은 노루궁뎅이 버섯 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌손상 질환의 개선 또는 예방용 건강기능성 식품을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a health functional food for improving or preventing cerebral damage diseases, which comprises Aspergillus oryzae mushroom extract as an active ingredient.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 노루궁뎅이 버섯 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌손상 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In order to accomplish the object of the present invention, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating brain damage diseases, comprising an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 노루궁뎅이 버섯 추출물은 에탄올 추출물일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the Mushroom extract may be an ethanol extract.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 노루궁뎅이 버섯 추출물은 40mg/kg~250mg/kg의 양으로 함유된 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the extract of Mushroom mushroom may be contained in an amount of 40 mg / kg to 250 mg / kg.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 뇌손상 질환은 간질 또는 발작일 수 있다. In one embodiment of the invention, the brain injury disorder may be epilepsy or seizure.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 간질 또는 발작은 필로카르핀(Pilocarpine)에 의해 유도된 것일 수 있다. In one embodiment of the invention, the epilepsy or seizure may be one induced by pilocarpine.

또한, 본 발명은 노루궁뎅이 버섯 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌손상 질환의 개선 또는 예방용 건강기능성 식품을 제공한다.The present invention also provides a health functional food for improving or preventing cerebral damage diseases, which comprises an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 간질 또는 발작은 필로카르핀(Pilocarpine)에 의해 유도된 것일 수 있다.In one embodiment of the invention, the epilepsy or seizure may be one induced by pilocarpine.

본 발명의 노루궁뎅이 버섯 추출물을 마우스에 경구 투여한 후, 뇌손상을 유발시켰을 경우 뇌손상에 의한 뇌 신경세포의 세포사멸 억제 효과가 노루궁뎅이 버섯 추출물을 섭취하지 않은 대조군 마우스에 비해 현저하게 우수하다는 사실을 확인함으로써 노루궁뎅이 버섯 추출물을 뇌손상의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물로 사용할 수 있는 효과가 있고, 나아가 노루궁뎅이 버섯은 안전하게 식용 가능한 버섯으로 인정받고 있어 뇌손상 질환 증상을 개선 또는 예방할 수 있는 기능성 건강식품의 소재로서 사용할 수 있는 효과가 있다. It was found that the effect of inhibiting brain apoptosis of brain nerve cells by brain injury when administered orally to mice in the present invention is remarkably superior to that of control mice not consuming extract of Aspergillus oryzae By confirming the fact, it is possible to use as a pharmaceutical composition for preventing or treating brain damage, and furthermore, it is recognized as a mushroom which can be safely edible, so that it can improve or prevent symptoms of brain damage disease There is an effect that it can be used as a material for a functional health food.

도 1은 본 발명의 노루궁뎅이 버섯 추출물을 섭취한 마우스와 상기 추출물을 섭취하지 않은 마우스에 발작을 유도시킨 후, 뇌 조직 내의 해마에서 신경세포의 세포사멸 정도를 Cresyl violet 염색방법으로 분석한 결과를 나타낸 것으로서, A는 대조군으로서 본 발명의 추출물을 처리하지 않은 군, D는 60mg/kg의 노루궁뎅이 버섯 추출물을, G는 300mg/kg의 노루궁뎅이 버섯 추출물을 투여한 군에서 관찰한 것을 나타낸 것이며, B, C, E, F, H, I는 각 상단의 도면을 확대한 사진을 나타낸 것이고, C, F 및 I는 해마의 CA3 지역에서의 세포사멸 정도를 관찰한 사진을 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 노루궁뎅이 버섯 추출물 대신 도토리 추출물을 섭취시킨 후의 뇌조직 내에서의 세포사멸 억제 정도를 Cresyl violet 염색방법 분석한 결과를 나타낸 것으로서, A는 추출물을 처리하지 않은 군, D는 60mg/kg, G는 300mg/kg의 도토리 추출물을 투여한 군을 관찰한 사진을 나타낸 것이며, B, C, E, F, H, I는 각 상단의 도면을 확대한 사진을 나타낸 것이다.
도 3은 발작 유발로 손상된 뇌의 해마에서 본 발명의 노루궁뎅이 버섯 추출물의 뇌보호 효과를 NeuN에 대한 면역조직화학법으로 관찰한 결과로서, A는 대조군으로서 본 발명의 추출물을 처리하지 않은 군, B는 60mg/kg, C는 300mg/kg의 노루궁뎅이 버섯 추출물을 처리한 군에서 NeuN 양성 세포를 현미경으로 관찰한 사진을 나타낸 것이고, D는 각 군의 NeuN 양성 세포수를 막대그래프로 나타낸 것이다. FIG. 1 is a graph showing the results of Cresyl violet staining for neuronal cell death in hippocampus in brain tissues after inducing seizures in mice fed with the extract of Aspergillus oryzae and the extracts of the present invention. As shown in the figure, A shows the group treated with the extract of the present invention as a control group, D shows 60 mg / kg of the mushroom extract of Ganoderma lucidum, and G shows the group observed with 300 mg / B, C, E, F, H, and I are photographs showing enlargement of the upper diagram, and C, F and I are photographs showing the degree of cell death in the CA3 region of the hippocampus.
FIG. 2 is a graph showing the results of Cresyl violet staining for the inhibition of cell death in brain tissues after Acorn extract supplemented with the extract of Acari sp. Mothi according to the present invention. B, C, E, F, H, and I show enlarged photographs of the top of each group. FIG.
FIG. 3 shows the results of immunohistochemistry of NeuN for the brain-protective effect of the extract of Aspergillus oryzicola from the brain hippocampus damaged by seizure induction. In FIG. 3, A represents the group not treated with the extract of the present invention as a control group, B is 60 mg / kg, C is 300 mg / kg, and D is the number of NeuN positive cells in each group as a bar graph.

본 발명은 노루궁뎅이 버섯 추출물이 뇌손상 시 뇌 신경세포의 세포사멸을 억제하는 효과를 통해 뇌보호 작용을 한다는 사실을 확인함으로써, 노루궁뎅이 버섯 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌손상 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.The present invention provides a method for preventing or treating brain damage diseases comprising an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient by confirming the fact that the extracts of Aspergillus oryzae have a brain protective effect by inhibiting the cell death of brain nerve cells during brain injury The present invention is characterized by providing a pharmaceutical composition.

노루궁뎅이 버섯(Hericium erinaceus)은 산호버섯과에 속하는 버섯으로 가을철 활엽수의 고목이나 생목에서 발생하며 중국에서는 원숭이 머리버섯, 곰머리 버섯으로 알려져 있으며, 일본에서는 야마부시타케(Yamabushitake), 우리 나라에서는 노루궁뎅이의 털모양과 비슷하다고 하여 노루궁뎅이 버섯으로 알려져 있다. Hericium erinaceus is a coral mushroom and belongs to the mature fallwood trees and leaves of autumn. It is also known as monkey head mushroom and bear head mushroom in China. In Japan, Yamabushitake (Yamabushitake) It is said to be similar to the hair of the buttocks, and is known as a sparrow mushroom.

이러한 노루궁뎅이 버섯에는 탄수화물, 단백질, 아미노산, 효소, 무기염류 및 비타민 등이 풍부하고, 항암 및 면역기능을 증대시키는 효능이 있다고 알려져 있으며, 최근에는 항암효과를 가진 성분을 비롯하여 다양한 생리활성물질을 함유하고 있는 것으로 보고된 바 있다(Kawagishi, H., Shimada, A., Hosokawa, S., Mori, H., Sakamoto, H., Ishiguro, Sakemi, S., Bordner, J., Kojima, and Furukawa, S. (1996) Erinacines E, F and G stimulators of nerve growth factor(NGF)-synthesis from the mycelia of Hericium erinaceum. Tetrahedron Letters 37, 7399-7402). 따라서 노루궁뎅이 버섯은 고부가가치 식품원료로의 사용이 기대되고 있으나 식품학적 또는 약리학적 유용활성 및 성분에 관한 연구는 아직까지 체계적으로 이루어지지 않고 있다.It is known that the mushroom is rich in carbohydrates, proteins, amino acids, enzymes, inorganic salts and vitamins, and has an anticancer and immunological function. In recent years, it has been known to contain various physiologically active substances (Kawagishi, H., Shimada, A., Hosokawa, S., Mori, H., Sakamoto, H., Ishiguro, Sakemi, S., Bordner, J., Kojima, and Furukawa, S. (1996) Erinacines E, F and G stimulators of nerve growth factor (NGF) -synthesis from the mycelia of Hericium erinaceum. Tetrahedron Letters 37, 7399-7402). Therefore, it is anticipated to use Mushroom as a high-value-added food raw material, but studies on the pharmacological and pharmacological activities and components have not yet been systematically conducted.

이에 본 발명자들은 노루궁뎅이 버섯의 추출물을 제조하고, 제조된 추출물이 뇌손상으로 인한 뇌 신경세포의 사멸을 억제하는 활성이 우수함을 실시예를 통해 확인하였는데, 본 발명의 일실시예에 따르면, 건조된 노루궁뎅이 버섯을 분쇄한 다음, 에탄올을 사용하여 에탄올 추출물을 수득하고, 수득한 에탄올 추출물을 마우스 에 섭취시킨 다음, 필로카르핀(Pilocarpine)으로 뇌손상을 유발시켜 발작을 일으킨 후, 뇌 조직 내에서 신경세포의 사멸 억제 정도를 분석하였다.Thus, the inventors of the present invention have confirmed through an example that an extract of Mushroom mushroom is produced and that the produced extract has excellent activity of inhibiting brain nerve cell death due to brain damage. According to one embodiment of the present invention, The obtained ethanol extract was taken into a mouse, and then Pilocarpine was used to induce brain injury to cause seizure. Then, the extract was applied to brain tissues And the degree of inhibition of neuronal cell death was analyzed.

그 결과, 본 발명의 노루궁뎅이 버섯의 에탄올추출물을 투여한 군이 상기 추출물을 투여하지 않은 군에 비해 뇌손상으로 인한 뇌 신경세포의 세포사멸이 월등히 억제되는 것으로 나타났으며, 또한, 노루궁뎅이 버섯의 에탄올추출물 함량을 달리하여 섭취시킨 결과, 60mg/kg의 양으로 섭취시킨 군이 300mg/kg의 양으로 섭취시킨 군에 비해 뇌세포의 세포사멸 억제 효과가 월등히 향상된 것으로 나타났다(도 1 참조).As a result, it was found that the group administered with the ethanol extract of Norfolk mushroom of the present invention significantly suppressed the cell death of the brain neurons due to brain damage as compared with the group not administered the extract, (Fig. 1). As a result, it was found that the group ingesting 60 mg / kg significantly enhanced the cell death inhibition effect of brain cells compared with the group ingested with 300 mg / kg.

반면, 치매에 대한 뇌세포 활성 및 보호 효과가 있는 것으로 알려져 있는 도토리 추출물을 본 발명의 노루궁뎅이 버섯 추출물 대신 마우스에 섭취하게 한 후, 뇌손상을 유발시킨 다음, 뇌손상에 따른 뇌세포의 세포사멸 억제 정도를 분석한 결과에서는 도토리 추출물은 뇌세포의 세포사멸을 억제하는 활성이 거의 없는 것으로 나타났다. 즉, 도토리 추출물을 처리하지 않은 군과 도토리 추출물을 처리한 군의 세포사멸 정도가 거의 유사한 것으로 나타났다(도 2 참조).On the other hand, acorn extract, which is known to have brain cell activity and protective effect against dementia, is ingested into mice instead of the extract of the mushroom extract of the present invention, and then brain damage is induced. Then, As a result of the inhibition analysis, acorn extract showed little activity to inhibit cell death of brain cells. That is, the degree of apoptosis of the acorn extract-treated group and acorn extract-treated group were almost similar (see FIG. 2).

따라서 상기 결과를 통해 본 발명자들은 본 발명의 노루궁뎅이 버섯 추출물이 뇌손상 시 뇌세포의 세포사멸을 효과적으로 억제하여 뇌손상을 예방 및 치료할 수 있다는 사실을 알 수 있었다.Therefore, the inventors of the present invention have found that the extract of Mushroom mushroom of the present invention can prevent and treat brain damage by effectively inhibiting apoptosis of brain cells during brain injury.

뿐만 아니라, 본 발명의 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 노루궁뎅이 버섯 추출물이 뇌 손상시 뇌보호 효과가 있는지를 NeuN에 대한 면역조직화학법을 통해 분석하였는데, 즉, 앞서 수행한 바와 동일하게 노루궁뎅이 버섯 추출물을 60mg/kg 및 300mg/kg으로 각각 마우스에 섭취시킨 다음, 필로카르핀(Pilocarpine)으로 뇌손상을 유발시킨 후, 뇌신경세포의 존재여부를 확인할 수 있는 NeuN 양성 세포의 존재 정도를 분석하였는데, 그 결과, 노루궁뎅이 버섯 추출물을 처리하지 않은 군에 비해 상기 추출물을 처리한 군의 경우, NeuN 양성 세포의 양이 2배 이상으로 존재하는 것으로 나타났으며, 특이하게도 NeuN 양성 세포의 세포수는 60mg/kg의 노루궁뎅이 버섯 추출물을 처리한 군이 300mg/kg으로 처리한 군에 비해 월등히 많은 것으로 나타났다(도 3 참조).In addition, according to another embodiment of the present invention, whether or not the extract of Mushroom mushroom extract of the present invention has brain protection effect in brain damage was analyzed by immunohistochemistry for NeuN, that is, The mice were fed with 60 mg / kg and 300 mg / kg of the extract of Mushroom mushroom, respectively. The mice were then challenged with Pilocarpine to induce brain injury. The presence of NeuN positive cells As a result, the amount of NeuN positive cells was found to be more than 2 times that of the group treated with the extract of Aspergillus oryzae, and in particular, the cells of NeuN positive cells (Fig. 3), compared with the group treated with 300 mg / kg of the group treated with 60 mg / kg of the mushroom extract.

따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 본 발명의 노루궁뎅이 버섯 추출물이 뇌손상 유발시 뇌 신경세포를 보호하는 활성이 뛰어나다는 사실을 알 수 있었고, 특히 해마에 존재하는 뇌 신경세포를 보호할 수 있음을 알 수 있었으며, 목적하는 최대의 효과를 얻기 위해 노루궁뎅이 버섯 추출물을 적정 함량으로 사용하는 것이 중요하다는 사실을 알 수 있었다.Accordingly, the inventors of the present invention have found that the extract of Mushroom mushroom of the present invention is excellent in the protection of brain nerve cells in inducing brain injury, and in particular, it is possible to protect brain nerve cells present in the hippocampus , And it was found that it is important to use an appropriate amount of Mushroom extract of Araliaceae to obtain the desired maximum effect.

특히 본 발명의 일실시예들을 통해 노루궁뎅이 버섯 추출물을 40mg/kg~250mg/kg의 양으로 사용하는 것이 적절하다는 사실을 알 수 있었다. 이는 40mg/kg 미만으로 상기 추출물을 사용하면 목적하고자 하는 효과, 즉 뇌손상 보호 효과를 유도할 수 없으며, 250mg/kg를 초과하여 함유한 경우, 오히려 250mg/kg 이하의 양을 사용한 경우에 비해 뇌손상 보호 효과가 저하되기 때문에 상기 범위 내의 양을 사용하는 것이 바람직하다. Particularly, it has been found through the embodiments of the present invention that it is appropriate to use the extract of Mushroom mushroom in an amount of 40 mg / kg to 250 mg / kg. In contrast, when the extract is used in an amount of less than 40 mg / kg, the desired effect, that is, the effect of protecting the brain damage can not be induced. When the amount of the extract is more than 250 mg / kg, It is preferable to use an amount within the above range because the damage protection effect deteriorates.

그러므로 본 발명은 노루궁뎅이 버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 뇌손상 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공할 수 있다. Therefore, the present invention can provide a pharmaceutical composition for preventing or treating cerebral damage diseases containing an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

본 발명에서 사용할 수 있는 상기 노루궁뎅이 버섯은 시중에 판매되고 있는 것이라면 모두 사용가능하고, 상기 추출물은 종래 천연으로부터 추출물을 수득하는 방법을 통해 수득할 수 있다. 종래 방법으로는 열수추출법, 용매추출법 등이 있으며, 바람직하게는 에탄올 용매를 이용한 추출방법을 사용할 수 있고, 더욱 바람직하게는 70% 에탄올을 사용하여 추출할 수 있다.The mushroom, which can be used in the present invention, can be used as long as it is commercially available, and the extract can be obtained by a method of obtaining an extract from a natural source. Conventional methods include a hot water extraction method and a solvent extraction method. Preferably, an extraction method using an ethanol solvent can be used, and more preferably, 70% ethanol can be used for extraction.

또한, 본 발명에 따른 상기 노루궁뎅이 버섯 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌손상 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 뇌손상 질환을 치료할 수 있는 치료 및 예방용 약제의 제조에 사용할 수 있으며, 상기 추출물을 그 자체 또는 약학적으로 허용되는 담체(carrier), 부형제(forming agent), 희석제 등과 혼합하여 분말, 과립, 정제, 캡슐제 또는 주사제 등의 제형으로 제조되어 사용될 수 있다. 또한, 이들을 경구 또는 비경구투여용 제제와 같은 단위투여형 또는 수회투여형 제제로 제형화하여 뇌손상 질환을 예방 또는 치료할 수 있는 효과를 갖는 치료 제로 사용할 수 있다.In addition, the pharmaceutical composition for preventing or treating brain injury disease comprising the extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient according to the present invention can be used for the preparation of medicines for treating and preventing brain damage diseases, Granules, tablets, capsules, injections, or the like by mixing the active ingredient with the active ingredient or a pharmaceutically acceptable carrier, a forming agent, a diluent or the like. In addition, they can be formulated into unit dosage forms such as oral or parenteral dosage forms, or they can be used as a therapeutic agent having an effect of preventing or treating brain damage diseases.

또한, 상기 노루궁뎅이 버섯 추출물은 약학적으로 유효한 양으로 함유될 수 있고, 상기에서 약학적으로 유효한 양이란 뇌손상 질환을 예방, 치료 또는 개선하기에 충분한 양을 말한다. In addition, the extract may be contained in a pharmacologically effective amount, and the pharmacologically effective amount is an amount sufficient to prevent, treat or ameliorate a brain damage disease.

본 발명에 따른 노루궁뎅이 버섯 추출물의 약학적으로 유효한 양은 0.5 ~ 50 mg/day/체중kg, 바람직하게는 0.5 ~ 25 mg/day/체중kg이다. 그러나 상기 약학적으로 유효한 양은 질환 증상의 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.The pharmacologically effective amount of the extract of Mushroom mushroom according to the present invention is 0.5 to 50 mg / day / kg body weight, preferably 0.5 to 25 mg / day / kg body weight. However, the pharmaceutically effective amount may be appropriately changed depending on the severity of the disease symptoms, the age, body weight, health condition, sex, administration route and treatment period of the patient.

또한, 상기 약학적 조성물은 유효성분인 노루궁뎅이 버섯 추출물 이외에도 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형 등으로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당분야의 적정한 방법으로 또는 Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다.In addition, the pharmaceutical composition may further comprise at least one pharmaceutically acceptable carrier in addition to the effective ingredient of the extract of Aspergillus oryzae. The pharmaceutically acceptable carrier may be a mixture of saline, sterilized water, Ringer's solution, buffered saline, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol and one or more of these components. If necessary, an antioxidant, , And other conventional additives such as a bacteriostatic agent may be added. In addition, a diluent, a dispersant, a surfactant, a binder, and a lubricant may be additionally added to formulate the composition for injectable use such as an aqueous solution, a suspension or an emulsion. Furthermore, it can be suitably formulated according to the disease or the composition, using the methods disclosed in the art or by the method disclosed in Remington's Pharmaceutical Science (recent edition), Mack Publishing Company, Easton PA.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있다. 상기 붕해제로는 전분글리콜산나트륨, 크로스포비돈, 크로스카멜로스나트륨, 알긴산, 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 카르복시 메틸셀룰로오스 나트륨, 키토산, 구아검, 저치환도히드록시프로필셀룰로오스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 폴라크릴린 칼륨 등이 있다. 또한, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 약제학적으로 허용가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨, 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용가능한 첨가제는 상기 약학적 조성물에 대해 0.1~90 중량부 포함되는 것이 바람직하다. The pharmaceutical composition according to the present invention may further contain conventionally used excipients, disintegrants, sweeteners, lubricants, flavors, and the like. Examples of the disintegrant include sodium starch glycolate, crospovidone, croscarmellose sodium, alginic acid, carboxymethylcellulose calcium, carboxymethylcellulose sodium, chitosan, guar gum, low substituted hydroxypropylcellulose, magnesium aluminum silicate, Potassium and the like. In addition, the pharmaceutical composition according to the present invention may further comprise a pharmaceutically acceptable additive, wherein the pharmaceutically acceptable additives include starch, gelatinized starch, microcrystalline cellulose, lactose, povidone, colloidal silicon dioxide, Corn starch, powdered cellulose, hydroxypropyl cellulose, opaques, sodium starch glycolate, carnauba wax, synthetic aluminum silicate, stearic acid, magnesium stearate, calcium stearate, calcium stearate, calcium phosphate, calcium hydrogen phosphate, lactose, mannitol, Aluminum stearate, calcium stearate, white sugar, dextrose, sorbitol, talc, and the like can be used. The pharmaceutically acceptable additives according to the present invention are preferably contained in an amount of 0.1 to 90 parts by weight based on the pharmaceutical composition.

본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증 정도에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 kg당 본 발명의 약학적 조성물을 1일 0.0001 내지 50 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.05 내지 25 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The preferred dosage of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the degree of absorption, inactivation rate and excretion rate of the active ingredient in the body, age, sex and condition of the patient, and severity of the disease to be treated, have. For the desired effect, however, in the case of oral administration, administration of the pharmaceutical composition of the present invention is generally 0.0001 to 50 mg / kg per day, preferably 0.05 to 25 mg / kg per 1 kg of body weight per day to an adult It is good to do. The administration may be carried out once a day or divided into several times. The dose is not intended to limit the scope of the invention in any way.

뿐만 아니라 본 발명에 따른 노루궁뎅이 버섯 추출물은 뇌손상 질환의 증상을 개선 또는 예방할 수 있는 식품학적 조성물로도 사용할 수 있는데, 예컨대, 식품의 주원료, 부원료, 식품 첨가제, 기능성 식품 또는 음료로 용이하게 활용할 수 있다.In addition, the extract of Aspergillus oryzaeus according to the present invention can be used as a food composition capable of improving or preventing the symptoms of brain damage diseases. For example, it can be easily used as a main ingredient, additives, food additives, .

본원에서 상기 “식품”이란, 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 것을 말한다. As used herein, the term " food " means a natural product or a processed product containing one or more nutrients, preferably a state capable of being directly eaten through a certain degree of processing, , Food, food additives, functional foods and beverages.

본원발명에 따른 뇌손상 질환의 증상을 예방 또는 개선하는 효과를 갖는 노루궁뎅이 버섯 추출물을 함유하는 식품용 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 추가로, 본원발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실 음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다. Examples of the foods to which the food composition containing the extract of Aspergillus oryzaeus having the effect of preventing or ameliorating the symptoms of brain damage diseases according to the present invention can be added include various foods, beverages, gums, tea, vitamins , And functional foods. In addition, in the present invention, the food may include special nutritive foods (e.g., crude oil, spirits, baby food, etc.), meat products, fish meat products, tofu, mackerel, noodles (Such as soy sauce, soybean paste, kochujang, mixed potatoes), sauces, confectionery (eg, snacks), candies, chocolate, gums, ice cream, milk products (eg, fermented milk, cheese, But are not limited to, pickled foods (various kinds of kimchi, pickles, etc.), beverages (e.g., fruit drinks, vegetable beverages, beverages, fermented beverages and the like) and natural seasonings (e.g. The food, beverage or food additive may be prepared by a conventional production method.

또한, 상기 “기능성 식품”이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 구체적으로는 건강 기능성 식품일 수 있다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다. The above-mentioned " functional food " refers to a food group which is imparted with added value to function and express the function of the food by physical, biochemical or biotechnological techniques, or to control the bio-defense rhythm of the food composition, Refers to a food prepared by processing a body so as to sufficiently express the body's control function on the body, such as recovery, and the like. Specifically, it may be a health functional food. The functional food may include a food-acceptable food-aid additive, and may further comprise suitable carriers, excipients and diluents conventionally used in the production of functional foods.

또한, 본원발명에서 상기“음료”란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함한다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 신경세포 보호를 위한 본 발명의 조성물을 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. In the present invention, the term " beverage " means a general term for drinking or enjoying a taste, and includes a functional beverage. The beverage contains the composition of the present invention for the protection of nerve cells as an essential ingredient at the indicated ratio, and there is no particular limitation to the other ingredients, and it may contain various flavors or natural carbohydrates as an additional ingredient .

나아가 상기 기술한 것 이외에 본원발명의 뇌손상 질환을 예방 또는 개선할 수 있는 효과를 갖는 식품용 조성물을 함유하는 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으며, 상기 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. Furthermore, in addition to the above-described foods, the food containing the food composition having the effect of preventing or ameliorating the brain damage disease of the present invention may contain various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), synthetic flavors and natural flavors A carbonating agent used in flavoring agents, coloring agents and fillers (cheese, chocolate etc.), pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloid thickening agents, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, Etc., and these components can be used independently or in combination.

따라서 본 발명은 노루궁뎅이 버섯 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌손상 질환의 개선 또는 예방용 건강기능성 식품을 제공할 수 있다.Accordingly, the present invention can provide a health functional food for improving or preventing cerebral damage diseases comprising an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

본 발명의 상기 건강기능성 식품은 본 발명에 따른 조성물의 양이 전체 식품 중량의 0.001중량% 내지 90중량%로 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.1중량% 내지 40중량%로 포함할 수 있고, 음료의 경우, 100ml를 기준으로 0.01g 내지 20g, 바람직하게는 0.3g 내지 10g의 비율로 포함할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 건강 조절을 목적으로 하는 장기간 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로 사용될 수 있으므로 상기 범위에 한정되는 것은 아니다.The health functional food of the present invention may contain 0.001% to 90% by weight, preferably 0.1% to 40% by weight, of the total amount of the composition according to the present invention, May be contained in an amount of 0.01 to 20 g, preferably 0.3 to 10 g, based on 100 ml, but may be less than the above range for health and hygiene purposes or long-term intake for health control purposes , Since the active ingredient has no problem in terms of safety, it can be used in an amount of more than the above range, so it is not limited to the above range.

또한, 본 발명에 따른 노루궁뎅이 버섯 추출물로 예방 또는 치료할 수 있는 상기 뇌손상 질환은 뇌손상으로 유발될 수 있는 모든 질환을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 간질 또는 발작일 수 있다. 또한, 상기 간질 또는 발작은 이러한 질환을 일으키는 독성 물질로 야기된 질환일 수 있으며, 바람직하게는 필로카르핀(Pilocarpine)에 의해 유도된 간질 또는 발작일 수 있다.
In addition, the brain damage disease which can be prevented or treated with the extract of Aspergillus odorus according to the present invention may include all diseases which can be caused by brain damage, and may be epilepsy or seizure. In addition, the epilepsy or seizure may be a disease caused by a toxic substance causing such disease, and may be preferably epilepsy or seizure induced by pilocarpine.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples. However, these examples are intended to further illustrate the present invention, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

<< 실시예Example 1> 1>

노루궁뎅이Spindle 버섯의 에탄올 추출물 제조 Production of ethanol extract of mushroom

시중에서 구입한 노루궁뎅이 버섯을 완전히 건조시킨 후, 100mesh 정도의 크기로 분쇄한 다음, 분쇄물 100g에 70%의 에탄올을 1L 첨가하고 상온에서 추출하여 노루궁뎅이 버섯의 에탄올 추출물을 수득하였다. 이후 하기에서 수행하는 실시예에서는 앞서 수득한 에탄올 추출물을 70℃에서 감압 농축한 농축 에탄올 추출물을 사용하였다.
The mushroom was completely dried and then milled to a size of about 100 mesh. Then, 1 L of 70% ethanol was added to 100 g of the pulverized product, and the extract was extracted at room temperature to obtain an ethanol extract of Mushroom mushroom. In the following examples, concentrated ethanol extracts obtained by concentrating the ethanol extracts obtained above under reduced pressure at 70 ° C were used.

<< 실시예Example 2> 2>

노루궁뎅이Spindle 버섯 추출물의 뇌손상으로부터 뇌세포 보호 활성 측정 Measurement of brain cell protection activity from brain damage of mushroom extract

<2-1> 마우스 모델 준비 및 <2-1> Mouse model preparation and 노루궁뎅이Spindle 추출물의 투여 Administration of the extract

본 발명자들은 상기 실시예 1에서 수득한 노루궁뎅이 버섯의 에탄올 추출물이 뇌손상 시 뇌손상으로부터 신경세포를 보호하는 효과가 있는지를 확인하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다. 먼저 6주령의 수컷 마우스인 C57BL/6(코아텍으로부터 구입, 한국)를 표준 사육조건 하(22± 1℃의 온도, 주광조건: 오전 8~오후 8시)에서 사육하였고 이들 마우스를 이용한 모든 실험은 가톨릭대학교 윤리 위원회및 NIH의 규정에 따라 수행하였다. The present inventors conducted the following experiment to determine whether the ethanol extract of Mushroom Mushroom obtained in Example 1 had an effect of protecting nerve cells from brain damage upon brain injury. First, a 6-week-old male mouse, C57BL / 6 (purchased from Koatech, Korea), was raised under standard rearing conditions (temperature of 22 ± 1 ° C, daylight condition: 8:00 am to 8:00 pm) Was conducted in accordance with Catholic University Ethics Committee and NIH regulations.

이렇게 사육된 수컷 마우스들은 상기 실시예 1에서 수득한 노루궁뎅이 버섯의 에탄올 추출물을 60mg/kg 및 300mg/kg의 양으로 각각 섭취시켰으며, 매일 상기 추출물을 섭취시켜 14일간 사육하였다. 이때 본 발명에 따른 노루궁뎅이 버섯 추출물의 뇌세포 보호 효과를 정확하게 분석하기 위해 대조군으로 노루궁뎅이 버섯추출물 대신 도토리 추출물(도토리 에탄올 추출물)을 섭취시켰다. 14일 동안 추출물을 섭취시켜 사육한 이후, 발작 자극을 주었는데, 즉 아트로핀 메틸니트레이트(atropine methylnitrate; 2mg/kg) 및 테르부탈린 헤미설페이트염(terbytaline hemisulfate salt;2mg/kg)을 각 마우스에 투여한 후 30분이 경과된 다음, 필로카르핀 히드로클로라이드(pilocarpine hydrochloride; 280mg/kg)를 투여하였다. 이후 발작 유발 여부를 자세히 모니터링 하였으며, 발작 단계를 Racine scale(Racine, 1972)에 따라 다음과 같이 5단계로 분류하였다: 제1단계-안면 클로누스(facial clonus), 제2단계- 두진(head nodding), 제3단계- 앞다리 클로누스(forelimb clonus), 제4단계- 뒷다리로 서기(rearing) 및 제5단계- 뒷다리로 서기 및 넘어짐(rearing and falling). 발작 반응을 2시간 동안 유도시킨 후, 디아제팜(diazepam; 10mg/kg)을 투여하여 발작유도를 정지시킨 다음, 모든 마우스들을 30±1℃의 온도에서 5일동안 수분 첨가된 유동식을 공급하여 사육하였고, 상기 마우스들은 발작유도 후 1주일째 치사하여 이후 실험을 수행하였다.
The male rats thus fed were fed with the ethanol extracts of Pseudomonas aeruginosa obtained in Example 1 at the doses of 60 mg / kg and 300 mg / kg, respectively, and the extracts were taken every day for 14 days. At this time, acorn extract (acorn ethanol extract) was taken as a control group in order to accurately analyze the brain cell protection effect of the extract of Mushroom mushroom according to the present invention. After 14 days of feeding, the animals were fed with seizure stimulation, ie, atropine methylnitrate (2 mg / kg) and terbutaline hemisulfate salt (2 mg / kg) After 30 minutes, pilocarpine hydrochloride (280 mg / kg) was administered. Thereafter, seizure induction was closely monitored and seizure stages were classified into five stages according to the Racine scale (Racine, 1972): 1st stage - facial clonus, 2nd stage - head nodding Step 3 - forelimb clonus, step 4 - rearing on the hind leg, and step 5 - rearing and falling on the hind legs. Seizure induction was stopped by administering the seizure response for 2 hours, followed by administration of diazepam (10 mg / kg). All mice were then fed with a fluid diet added with water for 5 days at a temperature of 30 1 캜 , The mice were sacrificed one week after induction of seizure and the experiment was performed thereafter.

<2-2> <2-2> CresylCresyl violetviolet 염색 분석 Dye analysis

상기 실시예 <2-1>에서 발작을 유도한 마우스 모델에 본 발명의 노루궁뎅이 버섯 추출물을 투여하였을 경우, 뇌 신경세포의 세포사멸을 억제할 수 있는지를 조사하기 위해 Cresyl violet 염색을 수행하였다. 먼저 상기 마우스들로부터 뇌 조직을 분리한 후, 조직을 슬라이스 형태로 절단하고 100% 에탄올로부터 에탄올 함량을 줄여가면서 최종적으로는 물을 사용하면서 상기 조직들을 수화시켰다. 이후 조직들을 0.1% Cresyl violet 용액으로 15분 동안 반응시킨 다음, 0.1% 글라시아 아세테이트산이 함유된 95% 에탄올 용액으로 탈염색시킨 후, 70%~100%의 에탄올로 순차적으로 탈수시킨 다음, 100% 크실렌 용액으로 반응시켰다. 이후 각 조직들을 현미경(BX51, 올림푸스, 일본)을 사용하여 관찰하였다.
Cresyl violet staining was performed to investigate whether or not the extract of the present invention had inhibited apoptosis of brain neurons in the mouse model of seizure induction in Example <2-1> above. First, brain tissues were separated from the mice, the tissues were cut into slices, and the tissues were hydrated using water, while reducing the ethanol content from 100% ethanol. Then, the tissues were reacted with 0.1% Cresyl violet solution for 15 minutes, followed by de-staining with a 95% ethanol solution containing 0.1% glacial acetic acid, followed by dehydration with 70% to 100% Lt; / RTI > Each tissue was then observed using a microscope (BX51, Olympus, Japan).

<2-3> 면역조직화학염색법<2-3> Immunohistochemical staining

Cresyl violet 염색 방법 이외에도 신경세포의 표지자인 NeuN에 대한 면역조직화학염색법을 통해 본 발명의 노루궁뎅이 버섯 추출물이 뇌세포를 보호하는 활성이 있는지를 조사하였는데, 상기 <2-2>에서 사용한 마우스의 뇌조직 절편을 0.1M PBS 용액(pH 7.4)으로 5분씩 3회 세척하였고, 3% 과산화수소 및 10% 메탄올이 함유된 0.1M PBS 용액으로 상기 조직들을 배양하여 조직내의 퍼옥시다제 활성을 억제시켰다. 이후, 각 절편들을 10% normal goat 혈청이 함유된 0.01M PBS 용액으로 1시간 동안 블록킹 시킨 다음, 4℃에서 NeuN (1:100, Chemicon International Inc., Temecula, CA, USA)에 대한 항체로 밤새도록 반응시켰다. 반응 후, anti-mouse IgG(1:500, Vector Laboratories)을 사용하여 상온에서 2시간 동안 반응시켰다. 이후, 0.1% diaminobenzidine tetrahydrochloride 및 0.005% H₂O₂ 가 함유된 0.05 M Tris HCl (pH 7.4)으로 가시화 시킨 다음, 현미경(BX51, Olympus)을 사용하여 관찰하였다.
In addition to the Cresyl violet staining method, immunohistochemical staining for NeuN, a marker of neuron cells, was performed to examine whether or not the extract of Mulberry Mushroom of the present invention has an activity to protect brain cells. The tissue sections were washed three times for 5 minutes with 0.1 M PBS solution (pH 7.4), and the tissues were incubated with 0.1 M PBS solution containing 3% hydrogen peroxide and 10% methanol to inhibit peroxidase activity in the tissues. The sections were then blocked with 0.01 M PBS containing 10% normal goat serum for 1 hour and then incubated overnight at 4 ° C with antibodies against NeuN (1: 100, Chemicon International Inc., Temecula, Calif., USA) Respectively. After the reaction, the cells were allowed to react at room temperature for 2 hours using anti-mouse IgG (1: 500, Vector Laboratories). After visualization with 0.05 M Tris HCl (pH 7.4) containing 0.1% diaminobenzidine tetrahydrochloride and 0.005% H ₂ O _{2, it} was observed using a microscope (BX51, Olympus).

<2-4> <2-4> NeuNNeuN -- 양성세포수Number of positive cells 측정 분석 Measurement analysis

상기 <2-2>에서 사용한 각 마우스의 뇌조직 절편을 NeuN에 대해 면역염색한 후, 현미경(BX51, Olympus)을 사용하여 관찰하였으며, NeuN에 양성을 보이는 세포들은 해마의 CA1에서 CA3 피라밋세포층에 있는 세포들의 수로 측정하였다. 모든 결과들은 one-way ANOVA 방법으로 분석하였다.
NeuN-positive cells were observed in the hippocampal CA1 and in the CA3 pyramidal cell layer (Fig. 2B). The mouse neurons were immunostained for NeuN using a microscope (BX51, Olympus) The number of cells was measured. All results were analyzed by one-way ANOVA.

이상과 같은 실험을 수행한 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 발작이 유도된 마우스에 본 발명의 노루궁뎅이 버섯의 에탄올 추출물을 투여한 군의 경우, 상기 추출물을 투여하지 않은 대조군에 비해 뇌조직 내의 뇌세포의 세포사멸이 월등히 억제된 것을 알 수 있었으며, 특히 60mg/kg의 양으로 노루궁뎅이 버섯 추출물을 처리한 경우가 300mg/kg로 처리한 경우에 비해 더 우수한 세포보호 효과가 있는 것으로 나타났다.
As a result of the above experiment, as shown in Fig. 1, in the group to which seaweed-induced mice were administered the ethanol extract of the mushroom of the present invention, compared with the control group in which the extract was not administered, The cell death was significantly suppressed. Especially, the treatment with the extract of Myrtle myrtle extract at 60 mg / kg showed better cytoprotective effect than the treatment with 300 mg / kg.

한편, 노루궁뎅이 버섯 추출물 대신 치매에 대한 뇌신경세포 보호 효과가 있는 것으로 알려진 도토리 추출물을 투여한 군의 경우, 도 2에 나타낸 바와 같이 발작에 의한 뇌손상에 따른 뇌세포의 세포사멸을 효과적으로 억제하지 못하는 것으로 나타났다.
On the other hand, in the group administered with acorn extract, which is known to have a protective effect on brain cells against dementia in place of the extract of Aspergillus oryzicola, as shown in Fig. 2, Respectively.

또한, 신경세포 표지자에 대한 면역조직화학법을 수행하여 분석한 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 발작 유도로 손상된 뇌의 해마에서 노루궁뎅이 버섯 추출물을 투여한 군과 그렇지 않은 군을 대상으로 신경세포 존재를 확인하는 NeuN 양성 세포를 관찰한 결과, 노루궁뎅이 버섯 추출물을 투여한 군은 그렇지 않은 군에 비해 NeuN 양성 세포가 거의 2배 이상으로 존재하는 것으로 나타났다. 한편, 노루궁뎅이 버섯 추출물을 60mg/kg 및 300mg/kg의 양으로 투여한 군을 비교한 결과, 300mg/kg으로 투여한 군은 대조군과 거의 유사한 세포수를 보이고 있어 노루궁뎅이 추출물에 의한 효과를 거의 유도하지 못하고 있는 반면, 60mg/kg으로 투여한 군의 경우에는 NeuN 양성 세포가 대조군에 비해 월등히 많은 것으로 나타났다.
In addition, as shown in FIG. 3, immunohistochemistry was performed on neuron markers. As shown in FIG. 3, in the brain hippocampus damaged by seizure induction, As a result of observing NeuN positive cells confirming the presence of NeuN positive cells, NeuN positive cells were found to be present more than twice as much as those not treated with NeuN mushroom extract. On the other hand, when the extracts were administered at doses of 60 mg / kg and 300 mg / kg, the group administered with 300 mg / kg showed similar numbers of cells to that of the control group, . However, in the group administered with 60 mg / kg, NeuN positive cells were significantly higher than the control group.

따라서 이러한 결과를 통해 본 발명자들은 본 발명의 노루궁뎅이 버섯 추출물이 뇌손상을 받은 뇌조직에서 뇌 신경세포의 세포사멸을 억제하는 활성을 나타내어 궁극적으로 뇌 신경세포를 보호하는 활성을 갖는다는 사실을 알 수 있었고, 특히 발작 또는 간질과 같은 질환의 치료에 유용하게 사용할 수 있음을 알 수 있었으며, 나아가 최대의 치료 또는 예방 효과를 위해 적정 농도, 보다 구체적으로 60mg/kg의 양으로 사용하는 것이 바람직하다는 사실을 알 수 있었다.
Accordingly, the inventors of the present invention have found that the extracts of Mushroom mushroom of the present invention have an activity of inhibiting the apoptosis of the brain nerve cells in the brain tissue damaged by brain injury, and ultimately have an activity of protecting the brain nerve cells And it can be used effectively for the treatment of diseases such as seizures or epilepsy. Furthermore, the fact that it is preferable to use an appropriate concentration, more specifically 60 mg / kg, for the maximum therapeutic or preventive effect And it was found.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.The present invention has been described with reference to the preferred embodiments. It will be understood by those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in an illustrative rather than a restrictive sense. The scope of the present invention is defined by the appended claims rather than by the foregoing description, and all differences within the scope of equivalents thereof should be construed as being included in the present invention.

Claims

A pharmaceutical composition for preventing or treating epilepsy or seizure comprising extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

The method according to claim 1,
The pharmaceutical composition for preventing or treating epilepsy or seizure, wherein the extract is an ethanol extract.

The method according to claim 1,
The pharmaceutical composition for preventing or treating epilepsy or seizure is characterized in that the extract of Mushroom mushroom is contained in an amount of 40 mg / kg to 250 mg / kg.

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The method according to claim 1,
Wherein said epilepsy or seizure is induced by Pilocarpine. &Lt; Desc / Clms Page number 24 >

A health functional food for prevention or improvement of epilepsy or seizure comprising an extract of Aspergillus oryzae as an active ingredient.

The method according to claim 6,
Wherein the extract of Mushroom mushroom is contained in an amount of from 40 mg / kg to 250 mg / kg for preventing or ameliorating seizures or seizures.

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The method according to claim 6,
Wherein said epilepsy or seizure is induced by pilocarpine. &Lt; RTI ID = 0.0 > 8. < / RTI >