KR101665176B1 - 성장촉진용 약학조성물 - Google Patents
성장촉진용 약학조성물 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101665176B1 KR101665176B1 KR1020140049477A KR20140049477A KR101665176B1 KR 101665176 B1 KR101665176 B1 KR 101665176B1 KR 1020140049477 A KR1020140049477 A KR 1020140049477A KR 20140049477 A KR20140049477 A KR 20140049477A KR 101665176 B1 KR101665176 B1 KR 101665176B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- growth hormone
- human growth
- pharmaceutical composition
- hgh
- phospholipid
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 230000012010 growth Effects 0.000 title abstract description 19
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 title abstract description 10
- 101000664737 Homo sapiens Somatotropin Proteins 0.000 claims abstract description 84
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 23
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 abstract description 16
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 abstract description 13
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 4
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 abstract 2
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 16
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 16
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 4
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 3
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 3
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 108010071584 oxidized low density lipoprotein Proteins 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- OQPAZKMGCWPERI-GUBZILKMSA-N Arg-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OQPAZKMGCWPERI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010013883 Dwarfism Diseases 0.000 description 2
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 2
- 230000036252 glycation Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000003725 proteoliposome Substances 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- ZPXCNXMJEZKRLU-LSJOCFKGSA-N Ala-His-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CN=CN1 ZPXCNXMJEZKRLU-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- 102000005666 Apolipoprotein A-I Human genes 0.000 description 1
- 108010059886 Apolipoprotein A-I Proteins 0.000 description 1
- MJINRRBEMOLJAK-DCAQKATOSA-N Arg-Lys-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N MJINRRBEMOLJAK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N Asp-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N Asp-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JDDYEZGPYBBPBN-JRQIVUDYSA-N Asp-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JDDYEZGPYBBPBN-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- CKNUKHBRCSMKMO-XHNCKOQMSA-N Gln-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)C(=O)O CKNUKHBRCSMKMO-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 1
- MADFVRSKEIEZHZ-DCAQKATOSA-N Gln-Gln-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N MADFVRSKEIEZHZ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- XZUUUKNKNWVPHQ-JYJNAYRXSA-N Gln-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O XZUUUKNKNWVPHQ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- NHMRJKKAVMENKJ-WDCWCFNPSA-N Gln-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NHMRJKKAVMENKJ-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- ARYKRXHBIPLULY-XKBZYTNZSA-N Gln-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ARYKRXHBIPLULY-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- KBKGRMNVKPSQIF-XDTLVQLUSA-N Glu-Ala-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KBKGRMNVKPSQIF-XDTLVQLUSA-N 0.000 description 1
- DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N Glu-Asp-Gly Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O DSPQRJXOIXHOHK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- LVCHEMOPBORRLB-DCAQKATOSA-N Glu-Gln-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C(O)=O LVCHEMOPBORRLB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PHONAZGUEGIOEM-GLLZPBPUSA-N Glu-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PHONAZGUEGIOEM-GLLZPBPUSA-N 0.000 description 1
- CUXJIASLBRJOFV-LAEOZQHASA-N Glu-Gly-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O CUXJIASLBRJOFV-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- RAUDKMVXNOWDLS-WDSKDSINSA-N Glu-Gly-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RAUDKMVXNOWDLS-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- XOFYVODYSNKPDK-AVGNSLFASA-N Glu-His-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N XOFYVODYSNKPDK-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- JDUKCSSHWNIQQZ-IHRRRGAJSA-N Glu-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JDUKCSSHWNIQQZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- NNQDRRUXFJYCCJ-NHCYSSNCSA-N Glu-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NNQDRRUXFJYCCJ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- CQGBSALYGOXQPE-HTUGSXCWSA-N Glu-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O CQGBSALYGOXQPE-HTUGSXCWSA-N 0.000 description 1
- OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N Gly-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N Gly-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- JPVGHHQGKPQYIL-KBPBESRZSA-N Gly-Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 JPVGHHQGKPQYIL-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- OMNVOTCFQQLEQU-CIUDSAMLSA-N His-Asn-Asp Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N OMNVOTCFQQLEQU-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 101000642577 Homo sapiens Growth hormone variant Proteins 0.000 description 1
- 101000958041 Homo sapiens Musculin Proteins 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- LRAUKBMYHHNADU-DKIMLUQUSA-N Ile-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)CC1=CC=CC=C1 LRAUKBMYHHNADU-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- IVXJIMGDOYRLQU-XUXIUFHCSA-N Ile-Pro-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IVXJIMGDOYRLQU-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- NLZVTPYXYXMCIP-XUXIUFHCSA-N Ile-Pro-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O NLZVTPYXYXMCIP-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- KTNGVMMGIQWIDV-OSUNSFLBSA-N Ile-Pro-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KTNGVMMGIQWIDV-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- PELCGFMHLZXWBQ-BJDJZHNGSA-N Ile-Ser-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N PELCGFMHLZXWBQ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N Isophenergan Chemical compound C1=CC=C2N(CC(C)N(C)C)C3=CC=CC=C3SC2=C1 PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XIRYQRLFHWWWTC-QEJZJMRPSA-N Leu-Ala-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XIRYQRLFHWWWTC-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- UILIPCLTHRPCRB-XUXIUFHCSA-N Leu-Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N UILIPCLTHRPCRB-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- YORLGJINWYYIMX-KKUMJFAQSA-N Leu-Cys-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O YORLGJINWYYIMX-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- BKTXKJMNTSMJDQ-AVGNSLFASA-N Leu-His-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N BKTXKJMNTSMJDQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- AUBMZAMQCOYSIC-MNXVOIDGSA-N Leu-Ile-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O AUBMZAMQCOYSIC-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N Leu-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- PXHCFKXNSBJSTQ-KKUMJFAQSA-N Lys-Asn-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O PXHCFKXNSBJSTQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- TWPCWKVOZDUYAA-KKUMJFAQSA-N Lys-Phe-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O TWPCWKVOZDUYAA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- WGBMNLCRYKSWAR-DCAQKATOSA-N Met-Asp-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN WGBMNLCRYKSWAR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PZUUMQPMHBJJKE-AVGNSLFASA-N Met-Leu-Arg Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N PZUUMQPMHBJJKE-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- KYJHWKAMFISDJE-RCWTZXSCSA-N Met-Thr-Met Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCSC KYJHWKAMFISDJE-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- WYBVBIHNJWOLCJ-UHFFFAOYSA-N N-L-arginyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCCN=C(N)N WYBVBIHNJWOLCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- WSXKXSBOJXEZDV-DLOVCJGASA-N Phe-Ala-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC=CC=C1 WSXKXSBOJXEZDV-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- XOHJOMKCRLHGCY-UNQGMJICSA-N Phe-Pro-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XOHJOMKCRLHGCY-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 108010003201 RGH 0205 Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- OBXVZEAMXFSGPU-FXQIFTODSA-N Ser-Asn-Arg Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CO)N)CN=C(N)N OBXVZEAMXFSGPU-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- FIDMVVBUOCMMJG-CIUDSAMLSA-N Ser-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO FIDMVVBUOCMMJG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MMAPOBOTRUVNKJ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asp-Ser Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O MMAPOBOTRUVNKJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- VQBCMLMPEWPUTB-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VQBCMLMPEWPUTB-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- IXZHZUGGKLRHJD-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IXZHZUGGKLRHJD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- NUEHQDHDLDXCRU-GUBZILKMSA-N Ser-Pro-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O NUEHQDHDLDXCRU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- FVFUOQIYDPAIJR-XIRDDKMYSA-N Ser-Trp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CO)N FVFUOQIYDPAIJR-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- OJRNZRROAIAHDL-LKXGYXEUSA-N Thr-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OJRNZRROAIAHDL-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- VYEHBMMAJFVTOI-JHEQGTHGSA-N Thr-Gly-Gln Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O VYEHBMMAJFVTOI-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- CYCGARJWIQWPQM-YJRXYDGGSA-N Thr-Tyr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CYCGARJWIQWPQM-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- BVDHHLMIZFCAAU-BZSNNMDCSA-N Tyr-Cys-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O BVDHHLMIZFCAAU-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- CNLKDWSAORJEMW-KWQFWETISA-N Tyr-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CNLKDWSAORJEMW-KWQFWETISA-N 0.000 description 1
- HRHYJNLMIJWGLF-BZSNNMDCSA-N Tyr-Ser-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 HRHYJNLMIJWGLF-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- LMSBRIVOCYOKMU-NRPADANISA-N Val-Gln-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N LMSBRIVOCYOKMU-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- VTIAEOKFUJJBTC-YDHLFZDLSA-N Val-Tyr-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N VTIAEOKFUJJBTC-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003217 anti-cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 108010052670 arginyl-glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000003012 bilayer membrane Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 108010042598 glutamyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010028295 histidylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 108010076756 leucyl-alanyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 108010048818 seryl-histidine Proteins 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 108010015666 tryptophyl-leucyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/27—Growth hormone [GH], i.e. somatotropin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
- A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/2013—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
본 발명은 재조합벡터를 이용하여 제조된 사람성장호르몬-1에 인지질 및 아포지단백질을 유효성분으로 포함하는 약학조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따라 혼합 제제화된 사람성장호르몬-1을 유효성분으로 함유하는 약학조성물을 이용하면 기존의 주사 투여를 통한 성장호르몬 투여 횟수를 감소시키면서 성장촉진 효과를 극대화할 수 있으므로, 성장호르몬 치료를 받아야 하는 환자들에게 비용 절감 및 주사투여에 따른 불편함을 감소시킬 수 있다.
또한 본 발명에 따라 혼합 제제화된 사람성장호르몬-1을 유효성분으로 함유하는 약학조성물은 동맥경화 억제 효과를 나타내는 것이 확인됨에 따라 동맥경화 예방 또는 치료용 약학조성물로도 사용될 수 있다.
또한 본 발명에 따라 혼합 제제화된 사람성장호르몬-1을 유효성분으로 함유하는 약학조성물은 동맥경화 억제 효과를 나타내는 것이 확인됨에 따라 동맥경화 예방 또는 치료용 약학조성물로도 사용될 수 있다.
Description
왜소증 환자의 키 성장 촉진 또는 당뇨 등으로 손상된 말초 조직의 세포 및 조직 성장을 촉진하기 위해, 사람성장호르몬-1, 인지질 및 아포지단백질을 유효성분으로 포함하여 제제화된 약학조성물에 관한 것이다.
성장호르몬은 동물의 뇌하수체에서 분비되는 단백질로서 191개의 아미노산으로 구성된 펩타이드 호르몬이다. 이러한 성장호르몬은 오래전부터 동물체로부터 분리되어 주로 왜소증환자들의 치료에 사용되어 왔으며, 단백질의 손실을 억제하고 장년 또는 노인에게 생리학적인 노화 현상을 지연시키는 작용이 밝혀짐에 따라 다양한 질병 치료에 사용될 수 있는데, 성장호르몬을 지속적으로 투여하면 체중, 근육 및 지방의 무게 등을 증가시켜 노화로 인한 질병을 예방할 수 있으며, 일시적인 투여를 통하여 혈장 내의 인슐린 및 IGF-1의 농도를 증가시킴으로써 소변 내의 단백질 농도를 감소시킬 수 있다. 이외에도 간의 무게와 크기를 증가시키고 근육, 뼈 및 연결조직 등의 말단 조직에서 단백질의 합성을 증가시킬 수 있다.
종래의 성장호르몬은 주로 사체의 뇌하수체로부터 추출되어 사용되었으나, 이렇게 추출된 성장호르몬을 투여받은 환자들에게 크로이트펠트-야콥병과 같은 질병이 유발되는 것이 밝혀짐에 따라 사체로부터 분리한 성장호르몬의 사용을 매우 제한하였으며 이에 따라 대체할 수 있는 성장호르몬 생산 방법에 대한 연구가 진행되었다.
그 대체 방법으로 유전공학의 발달과 더불어 미생물을 이용하여 생산한 재조합 성장호르몬은 대량생산 및 공급이 가능하고 다른 질환의 감염 위험이 적으므로 왜소증 치료제 및 대부분의 재조합 성장호르몬을 치료제 시장의 대부분을 차지하게 되었다. 그러나 유전자 재조합 방식의 성장호르몬은 거대 단백질로 경구투여가 불가능하여 체내 투여 방법으로 주사기를 이용한 근육주사 방법으로 이루어지고 있다. 이에 따라 재조합 성장호르몬은 대량 생산될 수 있음에도 불구하고 일정한 치료 기간 동안 요구되는 비용이 상당하고 주사를 이용해야 하는 불편함이 있으며, 현행 투여량에 비해 그 효과는 크지 않음에 따라, 적은 투여 횟수로 성장호르몬의 효과를 극대화할 수 있는 기술의 개발이 필요한 실정이다.
상기 문제점을 해결하기 위하여, 본 발명은 재조합 단백질인 사람성장호르몬-1에 인지질 및 아포지단백질을 혼합하여 제제화한 성장촉진용 조성물을 제공함으로써, 사람성장호르몬-1의 안정성을 증가시키고 높은 용해도의 제제화를 가능하게 하여 적은 투여 횟수로도 성장촉진 또는 동맥경화 예방 효과를 극대화할 수 있는 약학조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 사람성장호르몬-1, 인지질 및 아포지단백질을 포함하는 성장촉진용 약학조성물을 제공한다.
상기 사람성장호르몬-1은 사람성장호르몬-1 유전자를 포함하며, 도 1과 같은 개열지도를 갖는 pET30a 벡터를 이용하여 제조된 융합단백질일 수 있다.
상기 사람성장호르몬-1은 서열번호 1과 같은 아미노산 서열로 표시될 수 있다.
상기 약학조성물은 사람성장호르몬-1: 인지질: 아포지단백질을 1: 9 내지 950: 0.5 내지 5의 중량비로 포함할 수 있다.
또한 본 발명은 사람성장호르몬-1, 인지질 및 아포지단백질을 포함하는 동맥경화 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공한다.
본 발명에 따라 재조합벡터를 이용하여 제조된 사람성장호르몬-1에 인지질 및 아포지단백질을 혼합하여 제제화한 약학조성물은 기존의 성장호르몬보다 안정하면서 높은 용해도를 나타내었으며, 기존의 성장호르몬보다 향상된 성장 촉진 효과가 확인되었다. 따라서 본 발명에 따라 혼합 제제화된 사람성장호르몬-1을 유효성분으로 함유하는 약학조성물을 이용하면 기존의 주사를 이용한 성장호르몬 투여 횟수를 감소시키면서 성장촉진 효과를 극대화할 수 있으므로, 성장호르몬 치료를 받아야 하는 환자들에게 비용 절감 및 주사 투여에 따른 불편함을 감소시킬 수 있다.
또한 본 발명에 따라 혼합 제제화된 사람성장호르몬-1을 유효성분으로 함유하는 약학조성물은 동맥경화 억제 효과를 나타내는 것이 확인됨에 따라 동맥경화 예방 또는 치료용 약학조성물로도 사용될 수 있다.
도 1은 유전자 클로닝을 위해 사람성장호르몬-1 유전자가 삽입된 pET30a 벡터의 개열지도 및 사람성장호르몬-1 유전자 삽입 방법을 나타낸 것이다.
도 2는 형질전환된 미생물을 통하여 발현된 사람성장호르몬-1을 IPTG로 분리한 후 확인한 결과로, 도 1A는 PCR결과이며, 도 1B는 15% SDS-PAGE겔을 이용한 전기영동 결과 및 웨스턴블롯팅 결과이다.
도 3은 혼합 제제화된 사람성장호르몬-1, 인지질 및 아포지단백질을 8-25% native gel 전기 영동으로 확인한 결과이다.
도 4는 혼합 제제화된 사람성장호르몬-1, 인지질 및 아포지단백질의 2차 구조를 확인한 결과이다.
도 5는 혼합제제화된 사람성장호르몬-1의 저밀도 지단백질(LDL) 산화 억제 효과 확인한 결과이다.
도 6은 혼합제제화된 사람성장호르몬-1의 항당화효과를 확인한 결과이다.
도 7은 혼합제제화된 사람성장호르몬-1의 저밀도 지단백질(LDL) 탐식 억제 효과를 확인한 오일-레드 O 염색결과이다.
도 8은 꼬리가 절단된 제브라피쉬에 혼합제제화된 사람성장호르몬-1을 근육주사 하고 144시간 후 성장촉진 효과를 확인한 사진이다.
도 9는 꼬리가 절단된 제브라피쉬에 혼합제제화된 사람성장호르몬-1을 근육주사 후 시간경과에 따라 성장촉진 효과를 확인한 그래프이다.
도 2는 형질전환된 미생물을 통하여 발현된 사람성장호르몬-1을 IPTG로 분리한 후 확인한 결과로, 도 1A는 PCR결과이며, 도 1B는 15% SDS-PAGE겔을 이용한 전기영동 결과 및 웨스턴블롯팅 결과이다.
도 3은 혼합 제제화된 사람성장호르몬-1, 인지질 및 아포지단백질을 8-25% native gel 전기 영동으로 확인한 결과이다.
도 4는 혼합 제제화된 사람성장호르몬-1, 인지질 및 아포지단백질의 2차 구조를 확인한 결과이다.
도 5는 혼합제제화된 사람성장호르몬-1의 저밀도 지단백질(LDL) 산화 억제 효과 확인한 결과이다.
도 6은 혼합제제화된 사람성장호르몬-1의 항당화효과를 확인한 결과이다.
도 7은 혼합제제화된 사람성장호르몬-1의 저밀도 지단백질(LDL) 탐식 억제 효과를 확인한 오일-레드 O 염색결과이다.
도 8은 꼬리가 절단된 제브라피쉬에 혼합제제화된 사람성장호르몬-1을 근육주사 하고 144시간 후 성장촉진 효과를 확인한 사진이다.
도 9는 꼬리가 절단된 제브라피쉬에 혼합제제화된 사람성장호르몬-1을 근육주사 후 시간경과에 따라 성장촉진 효과를 확인한 그래프이다.
본 발명은 사람성장호르몬-1, 인지질 및 아포지단백질을 포함하는 성장촉진용 약학조성물을 제공한다.
상기 사람성장호르몬-1은 사람성장호르몬-1 유전자를 포함하며, 도 1과 같은 개열지도를 갖는 pET30a 벡터를 이용하여 제조된 융합단백질일 수 있다.
상기 사람성장호르몬-1은 서열번호 1과 같은 아미노산 서열로 표시될 수 있다.
상기 약학조성물은 사람성장호르몬-1: 인지질: 아포지단백질을 1: 9 내지 950: 0.5 내지 5의 중량비로 포함할 수 있다.
상기 약학조성물에서 상기 인지질은 이중막 제공 및 계면활성제 역할을 수행하며, 상기 범위의 함량을 벗어나면 프로테오리포솜의 형성과 유지에 장애가 발생하는 등의 문제가 야기될 수 있다.
또한 상기 약학조성물에서 상기 아포지단백질은 인지질 이중막의 구조를 강화하고 성장호르몬과의 상호작용을 강화하는 역할을 수행하며, 상기 범위의 함량을 벗어나면 프로테오리포솜의 형성과 유지에 장애가 발생하는 등의 문제가 야기될 수 있다.
또한 본 발명은 사람성장호르몬-1, 인지질 및 아포지단백질을 포함하는 동맥경화 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공한다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
<
실시예
1> 재조합 벡터를 이용한 사람성장호르몬-1 생산 과정
1-1. 사람성장호르몬-1 유전자
클로닝
ATCC로부터 구입한 pHGH107 (ATCC 40011) 벡터로부터 사람성장호르몬 (HGH-1) 유전자 증폭과 동시에 pET30a에 삽입하기 위한 제한효소 자리인 NdeI과 XhoI을 만들어 주기 위하여 정방향 프라이머 5`-GCC AGT CAT ATG ACC ATG TTC CCA ACT ATA CCA C -3'(서열번호 2), 역방향 프라이머 5`- ATG GTA ACG CTC GAG GAA GCC ACA GCT G- 3`(서열번호 3)를 사용하여 PCR을 수행하였다. 또한 NdeI과 XhoI을 사용하여 HGH-1과 pET30a를 잘라낸 후 HGH-1을 pET30a에 1과 같이 삽입하였다.
상기 클로닝된 pET30a-HGH1을 단백질 발현 균주인 대장균(E.coli)BL21에 형질전환하여 넣고 1ml IPTG 첨가하고 25℃, 4시간 동안 처리하여 단백질 발현을 유도하였다.
그 결과 서열번호 1과 같은 단백질의 아미노산 서열을 얻었다.
1-2. 사람성장호르몬-1 분리
단백질이 발현된 대장균을 세포 파쇄하여 Ni2 +-컬럼 크로마토그래피를 이용하여 사람성장호르몬-1(HGH-1)을 분리하고 HGH-1 항체(AAS13420E ; Antibody verify)를 이용하여 웨스턴 블롯팅으로 확인하였다.
그 결과, 도 2와 같이 사람성장호르몬-1(HGH-1)은 23kDa이며, 다이머(dimer) 형태로도 소량 존재하는 것이 확인되었으며, 상기 재조합 벡터로 생산된 사람성장호르몬-1(HGH-1)은 LB 배지 1L당 20 내지 30mg로 얻었다.
<
실시예
2> 인지질,
아포지단백질
및 사람성장호르몬-1의 혼합 제제
사람성장호르몬-1: 인지질: 아포지단백질을 중량비 1: 9 내지 950: 0.5 내지 5의 중량비로 혼합한 후 소디움 콜레이트를 첨가하여 제제화하고 24시간 동안 투석하여 염과 저분자물질들을 제거하였다.
상기 제제화된 사람성장호르몬-1 혼합 제제를 8-25% 네이티브 겔(native gel) 전기영동 후 상기 방법으로 제제화된 혼합 제제의 밴드를 확인하였다.
그 결과 도 3과 같이 인지질과 사람성장호르몬-1으로 제제화한 경우 67Å로 확인되었으며, 인지질: 아포지단백질: 사람성장호르몬-1으로 복합 제제화한 경우 밴드의 위치가 108Å 또는 56Å로 나타났다.
상기 결과는 복합제제화에 따른 구조변화로 판단됨에 따라 복합 제제의 2차 구조를 분석하였다.
그 결과 도 4와 같이 lipid-free HGH-1 알파-헬릭스 값은 약 52.7% 이었으며, lipid-bound 알파-헬릭스는 14.6%로 확인되었다. 또한 apoA-I 은 72%의 알파-헬릭스를 보이는데 비해 인지질 복합제제는 HGH-1 알파-헬릭스 값이 약 35.6%로 증가되었다.
상기 결과로부터 복합 제제화에 의해 알파-헬릭스가 증가된 것을 확인하였다.
<
실시예
3> 사람성장호르몬-1의 혼합 제제의 동맥경화 억제 효과 확인
3-1. 저밀도
지단백질
(
LDL
) 항산화 효과 확인
상기 실시예 2에서 제제화된 사람성장호르몬-1(HGH-1) 혼합 제제 0, 0.2, 1 또는 2μg에 각각 LDL 30 μg 과 Cu2 + 10 μM을 처리하여 4시간 동안 37℃ 항온 수조에서 반응시키고 HGH-1 혼합 제제의 저밀도 지단백질(LDL) 산화 억제 효과를 0.5% 아가로스 겔에 전기영동법으로 확인하였다.
그 결과 도 5A와 같이 저밀도 지단백질(LDL)의 산화가 저해될 수 록 0.5% 아가로스 겔에서 이동성이 느려지는데, HGH-1 농도의존적으로 LDL 산화가 억제되는 것이 확인되었다. 또한 도 5B와 같이 conjugated diene 생성 억제를 통하여 확인한 결과 특히, HGH-1 혼합물을 2μg으로 처리하였을 때, A234 가 약 81% 감소하였다.
상기 결과들로부터 사람성장호르몬-1(HGH-1) 혼합 제제의 농도 의존적으로 저밀도 지단백질(LDL)의 항산화 효과가 확인되었다.
3-2. 사람성장호르몬-1(
HGH
-1)의
항당화
효과 확인
1mg/mL HDL3 및 과당(Fructose)를 최종 100 mM 이 되게 처리하고, 저해제로 HGH-1 0.2μg (42.4 nM), 1μg (424.3 nM) 및 2μg (424.3 nM)을 첨가하여 37℃, 5% CO2 조건에서 인큐베이션하였다. 그 후 15% SDS 겔 및 FI값 확인을 통하여 HGH-1에 의한 과당의 당화 억제 효과를 확인하였다.
그 결과 도 6과 같이 HGH-1의 농도 의존적으로 과당의 당화가 억제되는 것을 확인하였으며, 특히 과당만 처리했을 때보다 2μg HGH-1을 처리하였을 때 당화가 265% 감소한 것을 확인하였다.
3-3. 저밀도
지단백질
(
LDL
) 탐색 억제 효과 확인
인체 단핵세포 주인 THP-1을 대식세포로 분화시킨 후 산화된 LDL(oxLDL)를 최종 50μg으로 탐식시키고 HGH-1 0.2μg (17.0 nM), 1μg (84.9 nM) 및 2μg (169.7 nM)을 첨가하고 37℃, 5% CO2 조건에서 48 시간 동안 배양한 후 오일-레드 O 로 염색하였다.
그 결과, 도 7과 같이 HGH-1 혼합 제제의 농도의존적으로 대식세포의 oxLDL 탐식작용이 감소되는 것을 오일-레드 O 염색을 통하여 확인되었다.
<
실시예
4> 인지질,
아포지단백질
및 사람성장호르몬-1의 혼합 제제의 성장 촉진 효과 확인
17주령 제브라피쉬(n=9)의 꼬리 지느러미를 절단 후 그룹당 3 마리씩 HGH-1 2 μg 또는 pA-1 2 μg 인지질을 각각 단독처리 군과 HGH-1 1μg 및 pA-1 1μg을 혼합하여 제제화된 HGH-1 처리군으로 나누어 48시간 마다 총 3회 근육에 투여하고 144시간까지 성장촉진 결과를 확인하였다.
그 결과 도 8과 같이 혼합제제 근육주사 144시간 후 제브라피쉬 성장효과가 HGH-1 또는 pA-1을 각각 단독 처리한 그룹보다 HGH-1 및 pA-1를 혼합하여 처리한 그룹에서 성장 촉진이 향상되었다. 또한 인지질과 혼합된 상태의 HGH-1 및 pA-1을 제제화하여 처리한 실험군에서 HGH-1 또는 pA-1을 각각 단독으로 처리한 그룹보다 약 82% 및 57% 증가한 성장 촉진 효과를 나타내었다.
또한 도 9와 같은 실험군으로 사람성장호르몬-1 혼합제제의 근육주사 후 시간경과에 따른 제브라피쉬의 성장촉진 효과를 확인한 결과, pA-I +HGH-1 lipid-bound의 성장촉진 능력이 가장 좋았고, lipid-free 상태에서도 pA-I +HGH-1 lipid-free의 성장촉진 능력이 가장 좋았다. 따라서 HGH-1의 성장촉진 능력이 apoA-I 에 의해서 더욱 향상될 수 있고, apoA-I 과 HGH-1은 시너지 효과를 나타내었다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> Research Cooperation Foundation of Yeungnam University
<120> Pharmaceutical composition for promoting growth
<130> ADP-2014-0094
<160> 3
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 202
<212> PRT
<213> Human growth hormone 1
<400> 1
Met Thr Met Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala
1 5 10 15
Met Leu Arg Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln
20 25 30
Glu Phe Glu Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu
35 40 45
Gln Asn Pro Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro
50 55 60
Ser Asn Arg Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg
65 70 75 80
Ile Ser Leu Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu
85 90 95
Arg Ser Val Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn
100 105 110
Val Tyr Asp Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met
115 120 125
Gly Arg Leu Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln
130 135 140
Thr Tyr Ser Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp Ala Leu Leu
145 150 155 160
Lys Asn Tyr Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met Asp Lys Val
165 170 175
Glu Thr Phe Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys
180 185 190
Gly Phe Leu Glu His His His His His His
195 200
<210> 2
<211> 34
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 2
gccagtcata tgaccatgtt cccaactata ccac 34
<210> 3
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 3
atggtaacgc tcgaggaagc cacagctg 28
Claims (5)
- 사람성장호르몬-1: 인지질: 아포지단백질을 1: 9 내지 950: 0.5 내지 5의 중량비로 포함하는 동맥경화 예방 또는 치료용 약학조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 사람성장호르몬-1은 사람성장호르몬-1 유전자를 포함하며, 도 1과 같은 개열지도를 갖는 pET30a 벡터를 이용하여 제조된 융합단백질인 것을 특징으로 하는 동맥경화 예방 또는 치료용 약학조성물.
- 청구항 1에 있어서, 상기 사람성장호르몬-1은 서열번호 1과 같은 아미노산 서열로 표시되는 것을 특징으로 하는 동맥경화 예방 또는 치료용 약학조성물.
- 삭제
- 삭제
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020140049477A KR101665176B1 (ko) | 2014-04-24 | 2014-04-24 | 성장촉진용 약학조성물 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020140049477A KR101665176B1 (ko) | 2014-04-24 | 2014-04-24 | 성장촉진용 약학조성물 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20150123408A KR20150123408A (ko) | 2015-11-04 |
KR101665176B1 true KR101665176B1 (ko) | 2016-10-13 |
Family
ID=54599891
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020140049477A KR101665176B1 (ko) | 2014-04-24 | 2014-04-24 | 성장촉진용 약학조성물 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR101665176B1 (ko) |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100241182B1 (ko) | 1997-08-22 | 2000-02-01 | 허영섭 | 인간 성장호르몬의 발현벡터 및 그를 이용한 인간 성장호르몬의 제조방법 |
KR100560102B1 (ko) * | 2004-06-25 | 2006-03-13 | 한국생명공학연구원 | 프로아포리포단백질 a-ⅰ 변이체와, 이를 포함하는고지혈증 또는 동맥경화증 예방 및 치료제 |
EP3449946A3 (en) * | 2005-12-19 | 2020-11-04 | PharmaIN Corporation | Hydrophobic core carrier compositions for delivery of therapeutic agents, methods of making and using the same |
KR101253399B1 (ko) * | 2010-10-26 | 2013-04-11 | 영남대학교 산학협력단 | 아포지단백질 a-i 및 그 변이체를 포함한 재조합 고밀도지단백질을 이용한 라파마이신 제형 |
-
2014
- 2014-04-24 KR KR1020140049477A patent/KR101665176B1/ko active IP Right Grant
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
대한내과학회지 제68권 제5호 제519-526면(2005). |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20150123408A (ko) | 2015-11-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP2254906B1 (en) | Protease stabilized, acylated insulin analogues | |
JP2008542364A (ja) | 副甲状腺ホルモン、緩衝液、および安定剤を含んでなる安定化された副甲状腺ホルモン組成物 | |
KR20050012224A (ko) | 그렐린 함유 의약 조성물 | |
AU2007298919A1 (en) | Protease resistant insulin analogues | |
KR20110017874A (ko) | 오래 작용하는 y2 및/또는 y4 수용체 작용제 | |
CN110831957B (zh) | Apoc-ii模拟肽 | |
US20200164033A1 (en) | Parathyroid hormone fusion polypeptide | |
EP3604538A1 (en) | Long-acting adrenomedullin derivative | |
KR101665176B1 (ko) | 성장촉진용 약학조성물 | |
JPH09504423A (ja) | 修飾マキサディランタンパク質、その調製と使用、および該タンパク質をコードするdna | |
KR101640304B1 (ko) | 성장촉진용 약학조성물 | |
US20020025933A1 (en) | GLP-2 derivatives | |
US10947274B1 (en) | Synthetic analgesic peptides of RgIA analogs | |
CN112442114A (zh) | 一种多肽及其应用 | |
Draghia-Akli et al. | Plasmid-based expression technology using growth hormone releasing hormone: a novel method for physiologically stimulating long-term growth hormone secretion | |
Rand-Weaver et al. | A rapid procedure for the isolation of bioactive growth hormone | |
AU2013205270B2 (en) | Protease stabilized, acylated insulin analogues |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A201 | Request for examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant | ||
FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20191001 Year of fee payment: 4 |