KR101631704B1 - Composition for preparing hydrogel comprising mussel adhesive protein and method for preparing hydrogel using the same - Google Patents

Composition for preparing hydrogel comprising mussel adhesive protein and method for preparing hydrogel using the same Download PDF

Info

Publication number
KR101631704B1
KR101631704B1 KR1020140115359A KR20140115359A KR101631704B1 KR 101631704 B1 KR101631704 B1 KR 101631704B1 KR 1020140115359 A KR1020140115359 A KR 1020140115359A KR 20140115359 A KR20140115359 A KR 20140115359A KR 101631704 B1 KR101631704 B1 KR 101631704B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
tyr
lys
pro
gly
ser
Prior art date
Application number
KR1020140115359A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR20160026441A (en
Inventor
차형준
전은영
양윤정
황병희
Original Assignee
포항공과대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 포항공과대학교 산학협력단 filed Critical 포항공과대학교 산학협력단
Priority to KR1020140115359A priority Critical patent/KR101631704B1/en
Publication of KR20160026441A publication Critical patent/KR20160026441A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR101631704B1 publication Critical patent/KR101631704B1/en

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/52—Hydrogels or hydrocolloids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/54—Biologically active materials, e.g. therapeutic substances
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration

Abstract

본 발명은 홍합접착 단백질 기반의 광반응성 하이드로젤에 관한 것으로, 본 발명에 따른 광반응성 하이드로젤은 즉각적인 젤화 반응으로 형성될 수 있으며, 우수한 생체 접착력을 가지므로 원하는 생체 부위 내에 생체 접착제, 조직 충전제, 조직공학용 지지체, 또는 약물 전달용 담체 등으로서 이용될 수 있다.The present invention relates to a photoreactive hydrogel based on a mussel adhesive protein, and the photoreactive hydrogel according to the present invention can be formed by an immediate gelation reaction, and has excellent bioadhesive ability, so that a bioadhesive, a tissue filler, A tissue engineering support, a drug delivery carrier, and the like.

Description

홍합접착 단백질을 포함하는 하이드로젤 제조용 조성물 및 이를 이용한 하이드로겔의 생산방법 {Composition for preparing hydrogel comprising mussel adhesive protein and method for preparing hydrogel using the same}TECHNICAL FIELD The present invention relates to a composition for preparing a hydrogel comprising a mussel adhesive protein and a method for producing the same using a mussel adhesive protein,

본 발명은 홍합접착 단백질을 포함하는 하이드로젤 제조용 조성물 및 이를 이용한 하이드로겔의 생산방법, 홍합접착 단백질 기반의 생체 접착성 하이드로젤에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for preparing a hydrogel comprising a mussel adhesive protein, a method for producing a hydrogel using the composition, and a bioadhesive hydrogel based on a mussel adhesive protein.

하이드로젤(hydrogel)은 물 또는 체액 내에서 가교된 격자 안으로 많은 양의 물 또는 체액을 흡수하여 팽윤되며 삼차원적인 구조를 유지하는 재료를 의미한다. 팽윤된 이후에도, 열역학적으로 안정하게 존재하여 액체와 고체의 중간 형태에 해당하는 기계적 및 물리화학적 특성을 갖는다. 이러한 하이드로젤은 대게 생체 적합성, 높은 다공성 및 산소 투과도를 보이며, 생체 연조직과의 비슷한 물리적 특성을 나타낼 수 있다. 천연 및 합성 고분자 기반의 하이드로젤의 초기 응용분야는 렌즈 및 상처 드레싱 정도였지만, 현재에는 지혈제, 조직 접착제, 약물 전달용 담체, 조직 충전제, 세포 및 성장인자를 포함하는 조직 재생제 등의 조직 공학 분야로 그 폭이 넓어지고 있다.Hydrogel refers to a material that absorbs large amounts of water or body fluids into a crosslinked lattice in water or body fluids, swells and maintains a three-dimensional structure. Even after being swollen, it remains thermodynamically stable and has mechanical and physicochemical properties corresponding to the intermediate form of liquid and solid. Such hydrogels generally exhibit biocompatibility, high porosity and oxygen permeability, and may exhibit similar physical properties to biological soft tissues. The initial applications of natural and synthetic polymer-based hydrogels were lens and wound dressing, but nowadays tissue engineering applications such as hemostatic agents, tissue adhesives, drug delivery carriers, tissue fillers, and tissue regeneration agents including cells and growth factors And the width is widening.

이러한 하이드로젤을 제조하기 위해 다양한 가교 방법이 사용되는데, 대부분의 가교방법은 화학적 가교제를 사용하는 것이다. 구체적인 예로, 글루타알데하이드를 이용한 단백질의 가교의 경우, 글루타알데하이드는 아민기의 단백질 가교에 역할을 한다고 알려져 있지만, 라이신, 타이로신, 트립토판, 페닐알라닌을 비롯하여 히스티딘, 시스테인, 프롤린, 글라이신 등 다양한 아미노산 잔기들의 가교에 관여하는 것으로 알려져 있다. A variety of crosslinking methods are used to prepare such hydrogels, most of which involve the use of chemical crosslinkers. As a specific example, glutaraldehyde is known to play a role in the protein cross-linking of amine groups in the case of cross-linking of proteins using glutaraldehyde. However, various amino acid residues such as lysine, tyrosine, tryptophan, phenylalanine, histidine, cysteine, proline and glycine Are known to be involved in cross-linking.

그러나 글루타알데히드를 비롯한 대부분의 화학적 가교방법은 단백질 구조에 커다란 변화를 주고 세포 및 조직 독성을 갖기 때문에 세포와 함께 사용될 수 없다. 따라서, 화학적 가교방법은 세포 독성을 피하기 위해, 가교가 이미 형성된 지지체에 세포를 코팅하거나 주입해주기 때문에, 일정하게 세포가 분배된 지지체를 바로 얻을 수 없다. However, most chemical cross-linking methods, including glutaraldehyde, can not be used with cells because of their large changes in protein structure and their cellular and tissue toxicity. Therefore, in order to avoid cytotoxicity, the chemical crosslinking method can not immediately obtain a uniformly distributed cell support since the cells are coated or injected into the support on which crosslinking has already been established.

다른 예로, 광가교(photo cross-linking) 방법이 있는데 이는 쉬운 접근성, 짧은 시간내의 경화뿐만 아니라, 빛 투사 세기와 시간, 개시제(initiator) 및 모노머(monomer) 등의 함량 조절을 통한 물성 조절이 쉬우므로 조직 공학용 기술에서 많이 사용된다. Another example is the photo cross-linking method, which is easy to control due to its easy accessibility, curing within a short time, as well as light intensity and time, initiator and monomer content Therefore, it is widely used in tissue engineering technology.

그러나 주로 사용되는 자외선(UV)에 의한 중합방법은 세포의 생존에 치명적이므로 세포와 함께 사용할 수 없으며, 또한 이렇게 형성된 합성고분자들은 단백질 기반의 소재들보다 생친화성과 생분해성 및 생체 활성 물질과의 반응도 뒤떨어지므로, 나아가 궁극적으로는 in situ 생체 접착 소재로는 적합하지 않다.However, since the ultraviolet (UV) polymerization method, which is mainly used, is fatal to the survival of cells, it can not be used together with cells, and the synthetic polymers thus formed are more biodegradable and biodegradable than protein- It is ultimately unsuitable as an in situ bioadhesive material.

생체 접착제는 세포벽, 세포막, 단백질, DNA, 성장인자, 조직 등과 같은 다양한 생체 실에 부착 특성을 갖는 물질을 말하며, 지혈제 또는 조직 접착제, 조직 충전제, 조직 재생제 및 약물 전달 담체 등의 의학적 응용이 가능하다. The bioadhesive refers to a material having adhesion properties to various living rooms such as cell walls, cell membranes, proteins, DNA, growth factors, and tissues, and can be used for medical applications such as hemostatic agents or tissue adhesives, tissue fillers, tissue regeneration agents, and drug delivery carriers Do.

그러나 현재 의료용 생체 접착소재는 외과 수술 시에 발생하는 상처를 봉합하기 위한 보조제 역할을 할 뿐, 실제 의료용 생체 접착소재로 활용하기에 그 기능성과 물성이 부족한 수준이다. However, at present, bio-adhesive materials for medical use serve as an auxiliary agent for sealing wounds generated during surgical operations, and they are lacking in functionality and physical properties to be utilized as actual medical bio-adhesive materials.

따라서, 가장 기본적으로 의료용 접착제는 조직에 직접 접촉하므로 생체 적합성이 요구되며, 체내 환경 속에서 순간적으로 접착이 종결될 수 있는 접착력과 용이성 뿐만 아니라 오랜 기간 그 기능을 유지해야 한다. Therefore, the most basic medical adhesive needs to be biocompatible because it is in direct contact with the tissue, and it must maintain its function for a long period of time as well as adhesion and easiness to be instantaneously terminated in the body environment.

현재 상용화 및 실용화되고 있는 대표적인 생체 접착제로는 시아노아크릴레이트 계열의 순간 접착제, 피브린(fibrin) 글루 및 폴리우레탄계 접착제 등이 있다.Typical bioadhesives currently commercialized and practically used include cyanoacrylate-based instant adhesives, fibrin glue, and polyurethane-based adhesives.

시아노아크릴레이트는 빠른 시간에 개시제 없이 경화되고 높은 접착 강도를 갖지만, 충격에 약하고 내열성 및 내수성이 떨어지고 독성으로 인한 면역 반응을 야기시킨다. Cyanoacrylates cure without an initiator in a short period of time and have high adhesive strength, but are vulnerable to impact, poor heat resistance and water resistance, and cause an immune response due to toxicity.

또한, 피브린 기반의 생체 접착제는 실제의 실제 혈액응고 과정을 이용한 방법이기 때문에 비교적 우수한 생체 적합성과 생분해성을 가지지만, 합성 고분자 기반 접착제에 비해 현저히 낮은 수준의 접착력을 가지므로 수중 접착을 요하는 부위에는 사용이 매우 제한적이다. In addition, since the fibrin-based bioadhesive has a relatively good biocompatibility and biodegradability because it is the actual blood coagulation process, it has a significantly lower adhesive strength than the synthetic polymer based adhesive, The use is very limited.

폴리우레탄계 생체 접착제는 조직과의 높은 밀착성 및 유연성을 가지나, 합성 원료의 생체 독성을 줄여야 하는 문제점이 남아있다. 이처럼 현재 접착 소재들은 대부분이 화학합성 기반의 소재로 수분에 약하고 독성을 갖고 그 대안으로 제기되고 있는 생합성 기반의 바이오 접착 소재는 접착력 측면에서 크게 부족하다.The polyurethane-based bioadhesive has high adhesion with the tissue and flexibility, but has a problem of reducing the bio-toxicity of the synthetic raw material. As such, most of the adhesive materials currently used are biocompatible based materials, which are weak to water and toxic.

따라서, 생합성 기반의 생체 접착제를 하이드로젤의 원료로 사용하여 기존의 시아노아크릴레이트 계열의 순간 접착제, 피브린 글루 및 폴리우레탄계 접착제와 같은 화학합성 기반의 생체 접착제의 문제점을 개선하고, 화학적 가교 시 문제점을 해소한 하이드로젤에 대한 요구가 절실하다.Therefore, it is possible to improve the problems of chemical synthesis-based bioadhesives such as conventional cyanoacrylate-based instant adhesives, fibrin glue and polyurethane-based adhesives by using biosynthetic based bioadhesive as a raw material for hydrogel, There is a desperate need for a hydrogel.

국내공개특허공보 제10-2014-0027031호 (2014.3.6.자 공개)Korean Patent Laid-Open No. 10-2014-0027031 (published on March 6, 2014)

Ding, Yin et al. Langmuir(2013)29, pp.13299-13306.Ding, Yin et al. Langmuir (2013) 29, pp. 13299-13306.

따라서, 본 발명에서는, 종래에 사용되는 시아노아크릴레이트 계열의 순간 접착제, 피브린(fibrin) 글루 및 폴리우레탄계 접착제와 같은 생체 접착제의 문제점들을 극복하기 위해 기존의 우수한 접착력과 생물학적 기능성 및 생체 적합성을 가진 홍합접착 단백질 기반의 하이드로젤 및 이의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. Therefore, in order to overcome the problems of conventional adhesives such as cyanoacrylate-based instant adhesives, fibrin glue, and polyurethane-based adhesives, the present invention provides an adhesive composition having excellent adhesive strength, biological function and biocompatibility It is an object of the present invention to provide a hydrogel based on a mussel adhesive protein and a method for producing the same.

본 발명의 또 다른 목적은 가시광선을 이용한 가교 반응을 통해 홍합접착 단백질 기반의 하이드로젤 제조용 광가교성 조성물 및 이를 이용한 하이드로젤의 제조방법을 제공하고, 나아가 생체 접착력을 갖는 상처 치료 및 재생, 지혈제, 조직 접합, 조직공학용 지지체 등으로의 응용이 가능한 하이드로젤을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a photocrosslinkable composition for preparing a hydrogel based on a mussel adhesive protein through a crosslinking reaction using visible light and a method for producing the hydrogel using the same, A tissue joining method, a tissue joining method, a tissue engineering support, and the like.

구체적으로, 본 발명의 하나의 목적은 광반응성 및 생체접착성을 갖는 홍합접착 단백질과 전자수용체 및 광반응성 금속 리간드를 포함하는 하이드로젤 제조용 광가교성 조성물을 제공하는 것이다.Specifically, one object of the present invention is to provide a photocrosslinking composition for preparing a hydrogel comprising a mussel adhesive protein having photoreactive and bioadhesive properties, an electron acceptor and a photoreactive metal ligand.

본 발명의 또 하나의 목적은 광가교 반응을 통해 홍합접착 단백질에 포함된 타이로신 잔기가 다이-타이로신(di-tyrosine) 잔기를 형성하여 가교화하는 단계를 포함하는, 하이드로젤 제조용 조성물을 이용한 생체 접합성 하이드로젤의 제조방법을 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to provide a method for producing a bio-conjugation product using a composition for preparing a hydrogel, which comprises a step of cross-linking a tyrosine residue included in a mussel adhesive protein through a photocrosslinking reaction to form a di- And a method for producing the hydrogel.

본 발명의 또 하나의 목적은 상기 하이드로젤 제조용 조성물의 홍합접착 단백질에 포함된 타이로신 잔기가 광반응을 통해 다이-타이로신(di-tyrosine) 잔기를 형성하여 가교 된 단백질을 포함하는 생체 접합성 하이드로젤을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a hydrogel-containing bioadhesive hydrogel comprising a cross-linked protein, wherein the tyrosine residue contained in the mussel adhesive protein forms a di-tyrosine residue through a photoreaction, .

본 발명의 또 하나의 목적은 상기 하이드로젤을 포함하는 생체접착제를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a bioadhesive comprising the hydrogel.

본 발명의 또 하나의 목적은 상기 하이드로젤을 포함하는 조직공학용 지지체 또는 조직 충진재를 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a tissue engineering support or tissue filler comprising the hydrogel.

본 발명의 또 하나의 목적은 상기 하이드로젤을 포함하는 약물 전달용 담체를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a drug delivery carrier comprising the hydrogel.

하나의 양태로서, 본 발명은 가시광선을 이용한 빠르고 손쉬운 가교반응을 통해 홍합접착 단백질을 포함하는 광가교성 하이드로젤 제조용 조성물에 관한 것이다.In one aspect, the present invention relates to a composition for preparing a photocurable hydrogel comprising a mussel adhesive protein through a quick and easy crosslinking reaction using visible light.

본 발명에서는 홍합접착 단백질의 타이로신 잔기을 고려하여, 가시광선 영역 대의 빛에 의한 광반응성 금속 리간드와 전자수용체 사이의 전자 흐름을 이용한 타이로신 잔기 간의 결합을 유도하여 광가교물을 제조하고, 이를 포함하는 하이드로젤을 형성하였다. 이와 같이 제조된 홍합접착 단백질 하이드로젤이 생체 접착제로서의 우수한 효능을 나타낸다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.In the present invention, in consideration of the tyrosine residue of the mussel adhesive protein, the binding between the tyrosine residues using the electron flow between the photoreactive metal ligand and the electron acceptor due to light in the visible light region band is induced to produce a photocrosslinked product, Gel was formed. It was confirmed that the mussel adhesive protein hydrogel thus produced exhibited excellent efficacy as a bioadhesive agent, thereby completing the present invention.

본 발명자들은 의료용 생체접착소재에 적합한 제형 개발을 위해 홍합접착 단백질 기반의 광가교성 하이드로젤을 제조하였다. 상기 하이드로젤은 기존의 홍합접착 단백질의 생체 안정성 및 우수한 접착 능력을 갖추면서도, 홍합접착 단백질 용액과는 다르게 일정한 형태를 갖추고 있으므로 다루기 쉽고, 수 초에서 수 분내에 빠르고 효율적으로 제조가 가능하며, 하이드로젤 자체가 실제 조직과 비슷한 기계적 유연성을 가지고 있기 때문에 외과용 봉합사를 대신하는 등 실제 의료용 소재로의 개발 및 다양한 응용이 가능하다.The present inventors prepared a photo-crosslinkable hydrogel based on a mussel adhesive protein in order to develop a formulation suitable for medical bio-adhesive materials. The hydrogel has a biocompatibility and excellent adhesion ability of the conventional mussel adhesive protein, and has a uniform shape unlike the mussel adhesive protein solution. Therefore, the hydrogel is easy to handle and can be manufactured quickly and efficiently in a few seconds to several minutes, Since the gel itself has mechanical flexibility similar to that of the actual tissue, it can be developed as a practical medical material and can be applied in various applications such as replacing a surgical suture.

본 발명에서 용어, "하이드로젤(hydrogel)"이란, 물 또는 체액 내에서 가교된 격자 안으로 많은 양의 물 또는 체액을 흡수하여 팽윤되며 삼차원적인 구조를 유지하는 재료를 의미한다. 팽윤된 이후에도, 열역학적으로 안정하게 존재하여 액체와 고체의 중간 형태에 해당하는 기계적 및 물리화학적 특성을 갖는다. 이러한 하이드로젤은 대게 생체 적합성, 높은 다공성 및 산소 투과도를 보이며, 생체 연조직과의 비슷한 물리적 특성을 나타낼 수 있다. The term "hydrogel " in the present invention means a material that absorbs a large amount of water or body fluids into a crosslinked lattice in water or body fluids, swells and maintains a three-dimensional structure. Even after being swollen, it remains thermodynamically stable and has mechanical and physicochemical properties corresponding to the intermediate form of liquid and solid. Such hydrogels generally exhibit biocompatibility, high porosity and oxygen permeability, and may exhibit similar physical properties to biological soft tissues.

이하, 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명의 일구현에 따라, 홍합접착 단백질을 포함하는 하이드로젤 제조용 광가교성 조성물을 제공한다.According to one embodiment of the present invention, there is provided a photocrosslinkable composition for producing a hydrogel comprising a mussel adhesive protein.

상기 홍합접착 단백질의 농도가 10wt% 미만인 경우, 절대적인 타이로신 잔기의 양이 적어 전자 수용체의 농도를 높인다 해도 견고한 하이드로젤을 만들 수 없고, 단백질 농도가 30wt% 초과인 경우 점도가 급격히 높아져 다루기 불편하고, 전체적인 광가교가 아니라 빛을 쬐어주기 전부터 강렬하고 국소적인 결합이 일어나므로 균일한 결합으로 이루어진 하이드로젤을 만들 수 없다. 따라서, 다루기 쉽고 균일한 광가교를 유도할 수 있는 바람직한 홍합접착 단백질의 농도는 전체 조성물을 기준으로 10 내지 30wt%, 바람직하게는 20 내지 30wt%이다.When the concentration of the mussel adhesive protein is less than 10 wt%, a strong hydrogel can not be formed even when the concentration of the electron acceptor is low due to a small amount of the tyrosine residue, and when the protein concentration exceeds 30 wt%, the viscosity rapidly increases, It is not an overall photo-crosslinking, but a strong and local bonding occurs before light is applied, so that a uniformly bonded hydrogel can not be formed. Thus, the preferred concentration of mussel adhesive protein that can lead to a manageable and uniform photocrosslinking is 10 to 30 wt%, preferably 20 to 30 wt%, based on the total composition.

본 발명에서 "홍합접착 단백질"은 홍합에서 유래한 접착 단백질로, 바람직하게는 미틸러스 에둘리스 (Mytilus edulis), 미틸러스 갈로프로빈시얼리스 (Mytilus galloprovincialis) 또는 미틸러스 코루스커스 (Mytilus coruscus) 에서 유래한 홍합접착 단백질 또는 이의 변이체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.In the present invention, "mussel adhesive protein" is a mussel-derived adhesive protein, preferably Mytilus edulis), the US's tiller ropes Robin's going to Borealis City (Mytilus galloprovincialis), or US tiller nose Ruth Curse (Mytilus but are not limited to, mussel adhesive proteins or variants thereof derived from coruscus .

예를 들어, 본 발명의 홍합 접착 단백질은 상기 홍합 종에서 각각 유래한Mefp(Mytilus edulis foot protein)-1, Mefp-2, Mefp-3, Mefp-4, Mefp-5, Mgfp(Mytilus galloprovincialis foot protein)-1, Mgfp-2, Mgfp-3, Mgfp-4 및 Mgfp-5, Mcfp(Mytilus coruscus foot protein)-1, Mcfp-2, Mcfp-3, Mcfp-4, Mcfp-5, 및 Mcfp-5 또는 이의 변이체를 포함할 수 있으며, For example, the mussel adhesive proteins of the present invention may be derived from Mytilus edulis foot protein-1, Mefp-2, Mefp-3, Mefp-4, Mefp-5, Mgfp (Mytilus galloprovincialis foot protein ) -1, Mgfp-2, Mgfp-3, Mgfp-4 and Mgfp-5, Mytilus coruscus foot protein-1, Mcfp-2, Mcfp-3, Mcfp-4, Or variants thereof,

바람직하게는 fp(foot protein)-1 (서열번호 1), fp-2 (서열번호 5), fp-3 (서열번호 6), fp-4 (서열번호 7), fp-5(서열번호 8), 및 fp-6 (서열번호 9)로 이루어진 군에서 선택된 단백질, 또는 상기 군에서 선택된 1종 이상의 단백질이 연결되어 있는 융합 단백질, 또는 상기 단백질의 변이체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.Fp-2 (SEQ ID NO: 5), fp-3 (SEQ ID NO: 6), fp-4 (SEQ ID NO: 7), fp- ), And fp-6 (SEQ ID NO: 9), or a fusion protein in which at least one protein selected from the group is linked, or a variant of the protein.

또한, 본 발명의 홍합접착 단백질은 WO2006/107183호 또는 WO2005/092920에 기재된 모든 홍합접착 단백질을 포함한다. 바람직하게, 상기 홍합접착 단백질은 fp-151(서열번호 10), fp-131(서열번호 12), fp-353(서열번호13), fp-153(서열번호 14), fp-351(서열번호 15) 등의 융합 단백질을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In addition, the mussel adhesive proteins of the present invention include all the mussel adhesive proteins described in WO2006 / 107183 or WO2005 / 092920. Preferably, the mussel adhesive protein is selected from the group consisting of fp-151, fp-131, fp-353, fp-153, fp-351, 15). ≪ / RTI >

또한, 본 발명의 홍합접착 단백질은 fp-1(서열번호 1)에서 80번 정도 반복되는 데카펩타이드(서열번호 2)가 1 내지 12회 또는 그 이상으로 연속하여 연결된 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 바람직하게, 상기 서열번호 2의 데카펩타이드가 12회 연속하여 연결된 fp-1 variant 폴리펩타이드(서열번호 3)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In addition, the mussel adhesive protein of the present invention may include polypeptides in which the decapeptide (SEQ ID NO: 2) repeated about 80 times in fp-1 (SEQ ID NO: 1) is continuously linked 1 to 12 times or more. Preferably, the decapeptide of SEQ ID NO: 2 is but is not limited to fp-1 variant polypeptide (SEQ ID NO: 3) that is connected in 12 consecutive sequences.

또한, 본 발명에서 홍합접착 단백질은 접착력을 유지하는 전제 하에 상기 홍합접착 단백질의 카르복실 말단이나 아미노 말단에 추가적인 서열을 포함하거나 일부 아미노산이 다른 아미노산으로 치환된 것일 수 있다. 보다 바람직하게는 상기 홍합접착 단백질의 카르복실 말단 또는 아미노 말단에 RGD(Arg Gly Asp)를 포함하는 3 내지 25개의 아미노산으로 이루어진 폴리펩타이드가 연결된 것 일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In addition, in the present invention, the mussel adhesive protein may contain an additional sequence at the carboxyl terminal or amino terminal of the mussel adhesive protein under the premise of maintaining adhesive strength, or some amino acid may be substituted with another amino acid. More preferably, a polypeptide consisting of 3 to 25 amino acids including RGD (Arg Gly Asp) is linked to the carboxyl terminal or amino terminal of the mussel adhesive protein, but is not limited thereto.

상기 RGD를 포함하는 3 내지 25개의 아미노산은, 이에 한정되지 않지만 바람직하게는, RGD(Arg Gly Asp, 서열번호 16), RGDS(Arg Gly Asp Ser, 서열번호 17), RGDC(Arg Gly Asp Cys, 서열번호 18), RGDV(Arg Gly Asp Val, 서열번호 19), RGDSPASSKP(Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro, 서열번호 20), GRGDS(Gly Arg Gly Asp Ser, 서열번호 21), GRGDTP(Gly Arg Gly Asp Thr Pro, 서열번호 22), GRGDSP(Gly Arg Gly Asp Ser Pro, 서열번호 23), GRGDSPC(Gly Arg Gly Asp Ser Pro Cys, 서열번호 24) 및 YRGDS(Tyr Arg Gly Asp Ser, 서열번호 25)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.RGD (Arg Gly Asp, SEQ ID NO: 16), RGDS (Arg Gly Asp Ser, SEQ ID NO: 17), RGDC (Arg Gly Asp Cys, SEQ ID NO: 18), RGDV (Arg Gly Asp Val, SEQ ID NO: 19), RGDSPASSKP (Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro, SEQ ID NO: 20), GRGDS (Gly Arg Gly Asp Ser, SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 23), GRGDSP (Gly Arg Gly Asp Ser Pro Cys, SEQ ID NO: 24) and YRGDS (Tyr Arg Gly Asp Ser, SEQ ID NO: No. 25) may be used.

상기 홍합접착 단백질의 카르복실 말단 또는 아미노 말단에 RGD를 포함하는 3 내지 25개의 아미노산으로 이루어진 폴리펩타이드가 연결된 홍합접착 단백질의 변이체의 예로는, 이에 한정되지 않지만 바람직하게는, 서열번호 4의 아미노산 서열로 이루어진 fp-1 variant-RGD 폴리펩타이드 또는 서열번호 11의 아미노산 서열로 이루어진 fp-151-RGD 폴리펩타이드일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.Examples of mutants of the mussel adhesive protein to which the polypeptide consisting of 3 to 25 amino acids including RGD are linked at the carboxyl terminal or amino terminal of the mussel adhesive protein include, but are not limited to, the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 1 variant-RGD polypeptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, or an fp-151-RGD polypeptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11.

바람직하게, 본 발명은 타이로신 잔기들 사이의 가교 결합을 이용하므로, 5% 이상의 타이로신 잔기를 포함한 단백질이 바람직하다. 대부분의 홍합접착 단백질의 전체 아미노산 서열에서 타이로신이 차지하는 비중은 약 20 내지 30%이다. 천연 홍합접착 단백질 내의 타이로신은 수화과정을 통하여 OH기가 첨가된 DOPA의 형태로 존재하지만, 대장균에서 생산된 홍합접착 단백질은 타이로신 잔기들이 변형 없이 존재하므로, 그대로 이용하는 것이 가능하다.Preferably, since the present invention utilizes cross-linking between tyrosine residues, a protein comprising at least 5% tyrosine residues is preferred. The proportion of tyrosine in the total amino acid sequence of most mussel adhesive proteins is about 20-30%. Tyrosine in the natural mussel adhesive protein exists in the form of DOPA added with OH group through hydration process, but the mussel adhesive protein produced in Escherichia coli can be used as it is because the tyrosine residues exist without modification.

또한, 홍합접착 단백질을 용매에 용해시킬 때 산성 수용액에 20wt% 이상의 우수한 용해도로 용해될 수 있는 홍합접착 단백질을 이용하는 것이 바람직하다. 상기 용매는 산성 수성용매 또는 중성 수성용매일 수 있고, 상기 산성 수성용매는 인산, 아세트산, 포름산, 염산, 황산, 질산, 시트르산 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.In addition, when the mussel adhesive protein is dissolved in a solvent, it is preferable to use a mussel adhesive protein that can be dissolved in an acidic aqueous solution with an excellent solubility of 20 wt% or more. The solvent may be an acidic aqueous solvent or a neutral aqueous solvent, and the acidic aqueous solvent includes, but is not limited to, phosphoric acid, acetic acid, formic acid, hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid,

본 발명에 따른 하이드로젤 제조용 광가교성 조성물은 가시광선을 강하게 흡수하는 분자를 제공하기 위한 광반응성 금속 리간드 및 전자 수용체를 포함할 수 있다.The photocrosslinkable composition for preparing a hydrogel according to the present invention may comprise a photoreactive metal ligand and an electron acceptor to provide a molecule that strongly absorbs visible light.

상기 광반응성 금속 리간드는 루테니움(Ru(II)), 팔라디움(Pd(II)), 구리(Cu(II)), 니켈(Ni(II)), 망간(Mn(II)), 및 철(Fe(III))로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 예를 들어 [Ru(II)bpy3]Cl2를 이용하는 것이 바람직하나 이에 제한되지는 않는다. The photoreactive metal ligand is selected from the group consisting of ruthenium (Ru), palladium (Pd), copper (II), nickel (II), manganese (Mn) (Fe (III)). For example, it is preferable to use [Ru (II) bpy 3 ] Cl 2 , but it is not limited thereto.

상기 광반응성 금속 리간드의 농도가 광가교의 속도나 견고함에 미치는 영향은 미미하나 광가교가 견고하게 이루어지는 최소농도는 1 mM이고, 이 이상으로 사용해도 광가교에는 영향을 주지 않으나 세포를 활용하여 함께 사용될 경우 세포의 생존율을 높이기 위해 낮은 농도로 사용하는 것이 바람직하다. 따라서, 광반응성 금속 리간드의 농도는 1 내지 10 mM, 1 내지 5 mM, 또는 1 내지 2 mM, 바람직하게는 1 mM이다.Although the effect of the concentration of the photoreactive metal ligand on the speed or rigidity of the photocrosslinking is insignificant, the minimum concentration of the photocrosslinking is 1 mM, and even if the concentration is above this, it does not affect the photocrosslinking. It is preferable to use it at a low concentration to increase the cell survival rate. Accordingly, the concentration of the photoreactive metal ligand is 1 to 10 mM, 1 to 5 mM, or 1 to 2 mM, preferably 1 mM.

또한 상기 전자 수용체는 과황산염(sodium persulfate), 과아이오딘산염(periodate), 과브롬산염(perbromate), 과염소산염(perchlorate), 비타민(B12), 펜타아민클로로코발트(Pentaamminechlorocobalt(III)), 암모늄 세륨 질산염(ammonium cerium(IV) nitrate), 옥살산(oxalic acid), 및 이디티에이(EDTA)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. The electron acceptor may also be selected from the group consisting of sodium persulfate, periodate, perbromate, perchlorate, vitamin B12, pentaamminechlorocobalt (III), ammonium cerium It may be at least one selected from the group consisting of ammonium cerium (IV) nitrate, oxalic acid, and EDTA.

상기 전자 수용체의 함량은 하이드로젤의 견고성 및 단백질의 사용 가능한 모든 함량구간에서 균일한 광가교를 유도하기 위해서 5내지 80 mM, 5 내지 20 mM, 또는 10 내지 40 mM, 바람직하게는 10 내지 20 mM이다.The content of the electron acceptor is in the range of 5 to 80 mM, 5 to 20 mM, or 10 to 40 mM, preferably 10 to 20 mM, in order to induce uniform photo-crosslinking in the range of the solidity of the hydrogel and all usable contents of the protein to be.

또한 상기 홍합접착 단백질을 포함하는 하이드로젤 제조용 광가교성 조성물은 생리활성물질을 추가로 포함할 수 있으며, 상기 생리활성 물질은 세포, 단백질, 효소, 및 당으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으나 이에 한정되지 않는다.The photopatterning composition for preparing a hydrogel containing the mussel adhesive protein may further comprise a physiologically active substance. The physiologically active substance may be at least one selected from the group consisting of cells, proteins, enzymes, and sugars, It is not limited.

본 발명의 일구현예는 광가교성 및 생체접착성을 갖는 홍합접착 단백질 기반의 하이드로젤을 제공하는 것이다.One embodiment of the present invention is to provide a hydrogel based on a mussel adhesive protein having photo-crosslinking and bioadhesive properties.

바람직하게, 본 발명에서 홍합접착 단백질 기반의 하이드로젤은 홍합접착 단백질에 포함된 타이로신 잔기들 사이의 가교결합으로 형성된 하이드로젤일 수 있다. Preferably, the hydrogel based on mussel adhesive protein in the present invention may be a hydrogel formed by cross-linking between tyrosine residues contained in the mussel adhesive protein.

본 발명의 원료가 되는 해양 생명체인 홍합(mussel)은 접착 단백질을 생산 및 분비함으로써 홍합 자신을 바다 속의 바위 및 선박과 같은 젖은 고체 표면에 단단히 부착할 수 있어, 파도 와 같은 격변하는 환경 속에서 영향을 받지 않는다. 기존의 연구 결과, 홍합접착 단백질은 강력한 자연 접착제로, 화학합성 기반의 에폭시 수지보다 약 두 배 정도의 높은 인장강도를 나타내면서도 유연성을 지니고 있다. 또한 홍합접착 단백질은 플라스틱, 유리, 금속 및 생체 물질 등의 다양한 표면에 접착뿐만 아니라 젖은 표면에서의 접착도 가능하다.The mussel which is a raw material of marine life of the present invention produces and secretes an adhesive protein, so that the mussel itself can be firmly attached to a wet solid surface such as rocks and ships in the sea, . Previous studies have shown that the mussel adhesive protein is a strong natural adhesive and has about two times higher tensile strength than a chemically synthesized epoxy resin but also has flexibility. In addition, mussel adhesive proteins can adhere to wet surfaces as well as to various surfaces such as plastics, glass, metals and biomaterials.

본 발명자들은 이전의 연구에서 fp-1(서열번호 1)의 10 개 반복 아미노산이 6번 반복된 구조를, fp-5(서열번호 8)의 N- 말단과 C- 말단에 유전자 수준에서 연결시킨 새로운 형태의 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10)을 개발하였으며, 상기 재조합 홍합접착 단백질은 대장균에서 성공적으로 발현하여 대량생산이 가능하고, 아세트산을 이용한 단순한 정제 분리과정 덕분에 산업적 이용 가능성이 매우 높음을 확인한 바 있다 (WO2006/107183호 또는 WO2005/092920).We have previously shown that in a previous study, the structure in which 10 repeat amino acids of fp-1 (SEQ ID NO: 1) was repeated six times was linked at the gene level to the N- and C-termini of fp-5 A novel mussel adhesive protein fp-151 (SEQ ID NO: 10) was developed. The recombinant mussel adhesive protein was successfully expressed in E. coli and mass production was possible. Due to the simple purification separation process using acetic acid, (WO2006 / 107183 or WO2005 / 092920).

따라서, 바람직한 양태로서, 본 발명은 홍합접착 단백질의 타이로신 잔기들 사이의 결합을 개시 및 촉진시키는 단계를 포함하는, 상기 광반응성 및 생체 적찹성하이드로젤의 제조방법을 제공한다. Thus, in a preferred embodiment, the present invention provides a process for the preparation of said photoreactive and biochromic hydrogel, comprising initiating and facilitating binding between tyrosine residues of a mussel adhesive protein.

상기 방법은 홍합접착 단백질에 포함된 높은 비율의 타이로신 잔기들 사이의 결합을 유도하여 하이드로젤을 제조하는 것이다. 타이로신 잔기 간의 결합은 ruthenium tris-bipyridyldication(Ru(II)bpy3 2+)과 같은 금속 리간드가 녹아있는 수용액상에서 특히 449 내지 455 nm 파장을 가지는 가시광선을 강하게 흡수하여 분자의 광분해를 통해 이루어지는 것으로 알려져 있다. 420 내지 480 nm, 또는 449 내지 455 nm, 더욱 바람직하게는 약 452 nm 파장의 빛의 존재 하에, 이러한 금속 복합체(metal complex)는 과산화황산염과 같은 전자 수용체에 전자를 줄 수 있는 흥분된 상태로 광분해 된다. 이러한 광분해의 결과로, 산화제 역할을 하는 Ru(III)bpy3 3+및 sulfate 라디칼이 형성되는 것으로 알려져 있다. 생성된 Ru(III)bpy3 3+는 단백질 수용액 상에서 타이로신을 산화시켜 불안정한 타이로신 라디칼을 형성하고, 이 라디칼은 주변의 또 다른 타이로신 잔기와 반응하여 다이타이로신(dityrosine) 결합을 형성할 수 있다. 이때, 안정한 다이타이로신 결합을 형성하기 위해서는 수소 원자 제거가 필수적인데, 이 역할을 sulfate 라디칼이 하는 것으로 알려져 있다. The method involves inducing binding between the high proportion of tyrosine residues contained in mussel adhesive proteins to produce hydrogels. Tyrosine residues are known to strongly absorb visible light having a wavelength of 449 to 455 nm in an aqueous solution containing a metal ligand such as ruthenium tris-bipyridyldication (Ru (II) bpy 3 2+ ) through photolysis of the molecule have. In the presence of light at a wavelength of from 420 to 480 nm, or from 449 to 455 nm, and more preferably at a wavelength of about 452 nm, such a metal complex is photolyzed in an excited state capable of imparting electrons to an electron acceptor such as a peroxide sulphate . As a result of this photolysis, Ru (III) bpy 3 3+ and sulfate radicals, which act as oxidants, are known to form. The resulting Ru (III) bpy 3 3+ oxidizes tyrosine on the protein aqueous solution to form an unstable tyrosine radical which reacts with another tyrosine residue in the vicinity to form a dityrosine bond. At this time, hydrogen atom removal is essential to form a stable dytyrloosin bond, and this role is known to be caused by sulfate radicals.

상기 방법에서, 가시광선을 강하게 흡수하는 분자를 제공하기 위한 광반응성 금속 리간드는 루테니움(Ru(II)), 팔라디움(Pd(II)), 구리(Cu(II)), 니켈(Ni(II)), 망간(Mn(II)), 및 철(Fe(III))로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 예를 들어 [Ru(II)bpy3]Cl2를 이용하는 것이 바람직하나 이에 제한되지는 않는다.In this method, photoreactive metal ligands for providing molecules that strongly absorb visible light include Ru (II), Pd (II), Cu (II), Ni (Ni (II)), manganese (Mn (II)) and iron (Fe (III)). For example, it is preferable to use [Ru (II) bpy 3 ] Cl 2 , but it is not limited thereto.

또한 전자 수용체를 제공하기 위해 과황산염(sodium persulfate), 과아이오딘산염(periodate), 과브롬산염(perbromate), 과염소산염(perchlorate), 비타민(B12), 펜타아민클로로코발트(Pentaamminechlorocobalt(III)), 암모늄 세륨 질산염(ammonium cerium(IV) nitrate), 옥살산(oxalic acid), 및 이디티에이(EDTA)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다. 예를 들어 과황산나트륨을 이용하는 것이 바람직하나 이에 제한되지는 않는다. In order to provide an electron acceptor, it is also possible to use sodium persulfate, periodate, perbromate, perchlorate, vitamin B12, pentaamminechlorocobalt (III) It may be at least one selected from ammonium cerium (IV) nitrate, oxalic acid, and EDTA. For example, sodium persulfate is preferably used, but not limited thereto.

보다 바람직하게 상기 홍합접착 단백질이 10 내지 50wt%로 용해되어 있는 용액에 Ru(II)bpy3 2+과 과산화황산염 용액을 첨가시키고, 420 내지 480 nm 파장 대의 빛을 쬐어주면 수 초에서 수 분내에 하이드로젤을 형성시킬 수 있다.More preferably, the solution containing the mussel adhesive protein dissolved in an amount of 10 to 50 wt% is mixed with Ru (II) bpy 3 2+ and a peroxydisulfate solution, and irradiated with light of 420 to 480 nm in a few seconds to several minutes Hydrogels can be formed.

본 발명의 구체적인 실시예에서는 광조사 전의 수용액 상태를 도 1에, 광반응을 통해 형성된 하이드로젤의 사진을 도 2에 나타내었다.In the concrete example of the present invention, the state of the aqueous solution before the light irradiation is shown in Fig. 1, and the photograph of the hydrogel formed through the photoreaction is shown in Fig.

또한 상기 방법에 의해서 제조된 하이드로젤의 유변학적 성질로서, 시간(time), 진동수(frequency), 변형율(strain)에 따른 저장탄성율(storage modulus), 손실 탄성율(loss modulus) 값을 알 수 있으며, 구성성분들의 농도에 따라 이값을 조절할 수 있다 (도 3 내지 도 4). 구체적으로, 구성성분은 타이로신 잔기간의 결합에 영향을 주는 홍합 접착 단백질과 전자수용체를 말한다. In addition, the rheological properties of the hydrogel prepared by the above method can be determined as storage modulus and loss modulus values according to time, frequency, and strain, This value can be adjusted depending on the concentrations of the constituents (Figs. 3 to 4). Specifically, the components refer to mussel adhesive proteins and electron acceptors that affect the binding of tyrosine residues.

유변학적 분석 방법의 예로서, 25mm 지름의 페러렐 플레이트 (parallel plate)가 회전하는 형태의 유변학 분석기기를 사용하였다. 상기 방법에 의해서 제조된 하이드로젤의 유변학적 성질을 분석한 결과, 젤화가 되었을 때 가지는 성질을 가지고 있음을 알 수 있었다 (도 3 내지 도 4).As an example of a rheological analysis method, a rheological analyzer having a 25 mm diameter parallel plate rotated was used. Analysis of the rheological properties of the hydrogel prepared by the above method revealed that it has the property of being gelated (FIGS. 3 to 4).

하이드로젤은 생체 내에서도 결합이 빠른 시간 내에 끊어지지 않고 그 형태를 유지하며 실제 조직과 비슷한 기계적 유연함을 지니므로 내수성 및 우수한 접착력을 필요로 하는 의료용 접착제 등으로의 응용이 활발하게 이루어지고 있다. 따라서, 본 발명에 따른 광반응성 및 조직 접착성을 갖는 하이드로젤은 원하는 부위에 즉각적으로 젤화가 가능하여 조직 접착제뿐만 아니라 지혈제, 조직 충진재 및 상처치료 등의 다양한 생의학적 응용이 가능하다.The hydrogel is not broken in a short time in vivo, but retains its shape. Since the hydrogel has mechanical flexibility similar to that of the actual tissue, the hydrogel is actively applied to medical adhesives requiring water resistance and excellent adhesion. Therefore, the hydrogel having photoreactive and tissue adhesiveness according to the present invention can be gelled immediately at a desired site, and thus various biomedical applications such as a hemostatic agent, a tissue filler and a wound treatment as well as a tissue adhesive can be applied.

따라서, 또 하나의 양태로서, 본 발명은 홍합 접착 단백질 기반의 광반응성 및 생체 접착성 하이드로젤을 포함하는 생체 접착제용 조성물에 관한 것이다. Accordingly, in another aspect, the present invention relates to a composition for a bioadhesive comprising a photoactive and bioadhesive hydrogel based on a mussel adhesive protein.

본 발명의 생체 접착제용 조성물은 생체 내에 국소적으로 적용되어 외과 수술용 봉합사를 대체해 손쉽고, 즉각적으로 상처를 봉합할 수 있고, 피부, 혈관, 신경 등의 연조직과 뼈, 치아 등의 경조직을 포함하는 생체 조직의 접합에 이용될 수 있다. 본 명세서에서 용어 "생체 조직"은 특별하게 제한되지 않으며, 예를 들어 피부, 신경, 뇌, 폐, 간, 신장, 위, 소장, 직장 및 뼈 등을 포함한다. The composition for a bioadhesive composition of the present invention can be applied locally in a living body to replace a surgical suture easily and immediately, and the wound can be sewn immediately, and includes hard tissues such as skin, blood vessels and nerves, and hard tissues such as bones and teeth And the like. As used herein, the term "living tissue" is not particularly limited and includes, for example, skin, nerve, brain, lung, liver, kidney, stomach, small intestine, rectum and bone.

본 발명의 생체 적합성 생체접착제의 다양한 응용 분야를 정리하면 다음과 같다. 상기 생체접착제는 봉합사를 대체하여 즉각적으로 상처를 봉합할 수 있고, 조직의 손상된 부분을 접착시키거나, 조직에서 공기 및 혈액의 누출을 즉각적으로 봉하거나, 의료기구를 생체 조직에 접착시키거나, 조직의 결함부분을 채우는 구조물로서 이용될 수 있다. Various application fields of the biocompatible bioadhesive of the present invention are summarized as follows. The biodegradable adhesive can replace the suture to immediately seal the wound and can be used to adhere the damaged portion of the tissue, to immediately seal air and blood leaking from the tissue, to adhere the medical instrument to the living tissue, As shown in FIG.

다른 구현 예로, 본 발명의 생체 접착제는 상처 치유에 이용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 생체 접착제는 상처에 적용되는 드레싱 및 혈관의 지혈 및 봉합 등에 사용될 수 있다.In another embodiment, the bioadhesive of the present invention can be used for wound healing. For example, the bioadhesive of the present invention can be used for wound dressing and hemostasis and suturing of blood vessels and the like.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 홍합접착 단백질 기반의 광반응성 하이드로젤을 포함하는 조직공학용 지지체에 관한 것이다. In another aspect, the present invention relates to a tissue engineering support comprising a photoreactive hydrogel based on a mussel adhesive protein.

조직 공학 기술이란 환자의 조직으로부터 분리된 세포를 지지체 위에 배양하여 또는 지지체가 되는 구성물과 함께 지지체를 형성하여 세포를 포함한 지지 복합체를 제조한 후 다시 이를 인체 내에 이식하는 것을 말한다. 조직 공학 기술은 인공피부, 인공연골, 인공뼈, 인공혈관, 인공근육 등 인체의 거의 모든 장기의 재생에 적용될 수 있으며, 세포에 무해하고 실제 생체조직과 비슷한 물성을 갖는 지지체를 형성하는 것이 중요하다. 본 발명의 광반응성 및 생체 접착성 하이드로젤은 조직공학 기술에서 조직의 결함을 채우는 역할뿐만 아니라 생체 조직 및 장기의 재생을 촉진시키는 생체조직과 유사한 지지체를 제공할 수 있다. Tissue engineering technology refers to the cultivation of cells isolated from a patient's tissue on a support or formation of a support together with a constituent to be a support to prepare a support complex containing the cells, and then transplanting the cells into the human body. Tissue engineering techniques can be applied to the regeneration of almost all organs of human body such as artificial skin, artificial cartilage, artificial bone, artificial blood vessel, artificial muscle, etc. It is important to form a support which is harmless to cells and has physical properties similar to those of actual tissues . The photoreactive and bioadhesive hydrogels of the present invention can provide a support similar to a biotissue that promotes the regeneration of biological tissues and organs, as well as the role of filling tissue defects in tissue engineering techniques.

또한, 상기 하이드로젤에 세포의 성장 및 분화를 촉진시키고, 주변 조직과의 상호작용을 통해 조직의 재생을 도와주는 역할을 하는 각종 생리활성물질들을 쉽게 부착시킬 수 있다. 상기 생리활성 물질은 세포, 단백질, 효소, 당 등을 포함하며, 바람직하게는 세포를 들 수 있다. 상기 세포는 원핵세포 및 진핵 세포를 포함하는 모든 세포일 수 있고, 일 예로 섬유세포(fibroblast), 조골세포(osteoblast), 신경세포(neurons), B cell 등을 포함한 면역세포 및 배아세포 등일 수도 있다. 본 발명의 지지체가세포를 포함하여 배양이 가능하므로 다양한 장기로의 이식 및 재생에 이용될 수 있다. In addition, various physiologically active substances that facilitate cell growth and differentiation and facilitate regeneration of tissues through interaction with surrounding tissues can be easily attached to the hydrogel. The physiologically active substance includes cells, proteins, enzymes, sugars and the like, preferably cells. The cells may be all cells including prokaryotic cells and eukaryotic cells and may be, for example, fibroblasts, osteoblasts, neurons, immune cells including B cells, and embryonic cells . Since the supporter of the present invention can be cultured including cells, it can be used for transplantation and regeneration in various organs.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 홍합접착 단백질 기반의 광반응성 하이드로젤을 포함하는 약물 전달용 담체에 관한 것이다. In another aspect, the present invention relates to a carrier for drug delivery comprising a photoreactive hydrogel based on a mussel adhesive protein.

본 발명에 따른 조직 접착성 하이드로젤은 약물 전달용 유효 골격(scaffold)으로서 원하는 생체조직에 부착되어 사용될 수 있다. 상기 약물은 특별하게 제한되지 않으며, 단백질 의약품, 펩타이드, 항암제 및 항염증제 등을 포함한다.The tissue adhesive hydrogel according to the present invention can be used as a scaffold for drug delivery attached to a desired biotissue. The drug is not particularly limited, and includes protein drugs, peptides, anticancer drugs, anti-inflammatory drugs and the like.

본 발명은 광반응성 및 생체 접착성 홍합접착 단백질 기반의 하이드로젤 제조용 조성물, 하이드로젤 및 이의 제조방법, 그리고 하이드로젤을 이용한 다양한 용도에 관한 것으로, 본 발명에 하이드로젤 제조용 조성물은 즉각적인 젤화 반응으로 형성될 수 있으며, 우수한 생체 접착력을 가지므로 원하는 생체 내에 생체 접착제, 조직 충진제, 조직공학용 지지체, 또는 약물 전달용 담체 등의 조성물로 이용될 수 있다.The present invention relates to a composition for preparing a hydrogel based on photoreactive and bioadhesive mussel adhesive proteins, a hydrogel, a preparation method thereof, and a variety of uses using a hydrogel, wherein the composition for preparing a hydrogel is formed by an immediate gelation reaction And has excellent biocompatibility, it can be used as a desired composition in vivo such as a bioadhesive, a tissue filler, a support for tissue engineering, or a carrier for drug delivery.

도 1은 실시예 1-2의 젤화 전, 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10)이 30wt%로 녹아있는 용액 모습을 나타낸 것이다.
도 2는 실시예 1-2의 Ru(II)bpy3 2+과 과산화황산염을 포함하고 있는 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10) 용액을 450 nm 파장 대의 치과용 램프로 조사하여 형성된 하이드로젤 모습을 나타낸 것이다.
도 3은 실시예 1-2의 2 mM의 Ru(II)bpy3 2+과 5 mM의 과산화황산염과 10wt%의 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10)을 기반으로 형성된 하이드로젤의, 시간에 따른 저장탄성률 및 손실탄성률을 유동계(rheometer)로 측정한 결과이다.
도 4는 실시예 1-2의 2 mM의 Ru(II)bpy3 2+과 40 mM의 과산화황산염과 20wt%의 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10)을 기반으로 형성된 하이드로젤의, 시간에 따른 저장탄성률 및 손실탄성률을 유동계로 측정한 결과이다.
도 5는 실시예 1-2의 2 mM의 Ru(II)bpy3 2+과 5 mM의 과산화황산염과 10wt%의 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10)을 기반으로 형성된 하이드로젤의, 진동수에 따른 저장탄성률 및 손실탄성률을 유동계로 측정한 결과이다.
도 6은 실시예 1-2의 2 mM의 Ru(II)bpy3 2+과 40 mM의 과산화황산염과 20wt%의 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10)을 기반으로 형성된 하이드로젤의, 진동수에 따른 저장탄성률 및 손실탄성률을 유동계로 측정한 결과이다.
도 7은 실시예 2의 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10)의 광가교 반응으로 형성된 하이드로젤의 쥐 피부에서의 조직 접착력을 알아보기 위해 인장강도기를 통해 측정한 접착력을 광가교가 일어나지 않은 홍합접착 단백질 fp-151용액의 접착력과 비교하여 나타낸 것이다.
도 8은 실시예 3의 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10)의 광가교 반응으로 형성된 하이드로젤을 이용하여, 실제 쥐 피부의 창상 실험에서 창상을 만든 직후, 상기 하이드로젤을 통한 상처 지혈(왼쪽 아래) 및 봉합(오른쪽 아래)를 나타낸 것이다. 비교군으로써, 자연치유(왼쪽 위)와 봉합사를 이용한 치료군(오른쪽 위)를 나타내었다.
도 9는 실시예 3의 하이드로젤을 실제 쥐 피부의 창상 실험에서 상처 부위에 도포한지 7일째에 비교군(왼쪽 위 및 오른쪽 위)과 비교하여 하이드로젤의 상처 봉합 및 재생 효과의 결과(왼쪽 아래 및 오른쪽 아래)를 나타낸 사진이다.
도 10은 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10)기반의 광반응성 하이드로젤 안에 NIH/3T3 세포가 내포되어 있는 형상을 광학 현미경을 통해 나타낸 모습이다.
도 11은 NIH/3T3 세포를 포함하고 있는 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10) 기반의 광반응성 하이드로젤을 7일간 배양한 뒤, 형광 염색 기법으로 살아있는 세포를 초록색 형광으로 염색하여 세포의 생존을 확인한 사진이다.Fig. 1 shows a solution in which the mussel adhesive protein fp-151 (SEQ ID NO: 10) was dissolved in 30 wt% before gelation in Example 1-2.
Figure 2 is an embodiment 1-2 of the Ru (II) bpy 3 2+ and peroxide sulfate and mussel adhesive protein fp-151, which comprises a (SEQ ID NO: 10) was added to the hydrogel formed by irradiation with 450 nm wavelength band for dental lamp .
FIG. 3 is a graph showing the time (sec) of a hydrogel formed on the basis of 2 mM of Ru (II) bpy 3 2+ of Example 1-2 and 5 mM of peroxide sulfate and 10 wt% of mussel adhesion protein fp-151 The storage elastic modulus and the loss elastic modulus were measured with a rheometer.
Figure 4 shows the time course of hydrogel formed on the basis of 2 mM of Ru (II) bpy 3 2+ of Example 1-2, 40 mM of peroxide sulfate and 20 wt% of mussel adhesion protein fp-151 (SEQ ID NO: 10) And the storage elastic modulus and the loss elastic modulus were measured with a flow meter.
Figure 5 shows the frequency of hydrogels formed on the basis of 2 mM of Ru (II) bpy 3 2+ of Example 1-2 and 5 mM of peroxidic sulfate and 10 wt% of mussel adhesion protein fp-151 (SEQ ID NO: 10) And the storage elastic modulus and the loss elastic modulus were measured with a flow meter.
Fig. 6 is a graph showing the changes in the frequency of a hydrogel formed on the basis of 2 mM of Ru (II) bpy 3 2+ of Example 1-2, 40 mM of peroxide sulfate and 20 wt% of mussel adhesion protein fp-151 And the storage elastic modulus and the loss elastic modulus were measured with a flow meter.
FIG. 7 is a graph showing the adhesion of a hydrogel formed by photo-crosslinking reaction of the mussel adhesive protein fp-151 (SEQ ID NO: 10) of Example 2 to the rat skin, And the adhesive strength of the mussel adhesive protein fp-151 solution.
Fig. 8 is a graph showing the results of the photographs of the wound-healing-induced hemostasis (Fig. 8) immediately after the wounds were formed in the actual mouse skin wound test using a hydrogel formed by the photo-crosslinking reaction of the mussel adhesive protein fp-151 Lower left) and sutures (lower right). As a comparison group, natural healing (upper left) and treatment group using suture (upper right) were shown.
Figure 9 shows the results of wound closure and regeneration effects of the hydrogel compared to the comparative group (upper left and upper right) on the 7th day after application of the hydrogel of Example 3 to wound areas in the mouse skin test And lower right).
10 is an optical microscope image showing a form in which NIH / 3T3 cells are contained in a photoreactive hydrogel based on mussel adhesive protein fp-151 (SEQ ID NO: 10).
FIG. 11 shows the results of a fluorescence staining method in which a living cell was stained with green fluorescence after 7 days of incubation of a photoreactive hydrogel based on a mussel adhesive protein fp-151 (SEQ ID NO: 10) containing NIH / 3T3 cells, .

이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to the following examples. However, these examples are only for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited by these examples.

실시예Example 1. 홍합접착 단백질 기반의  1. Based on mussel adhesive protein 광가교Light bridging 하이드로젤Hydrogel 제조 Produce

1-1. 재조합 홍합접착 단백질 1-1. Recombinant mussel adhesive protein fpfp -151의 생산-151 production

본 발명에서 사용한 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10)은 fp-1의 10 개 반복 아미노산(서열번호 2)이 6번 반복된 구조를 fp-5(서열번호 8)의 N-말단과 C-말단에 유전자 수준에서 연결시킨 새로운 형태의 홍합접착 단백질로 대장균에서 성공적으로 발현하여 아세트산을 이용한 단순한 정제 분리과정을 통해 생산한 것이다. 상기 홍합접착 단백질의 구체적 제조는 국제특허공개 제WO2006/107183호 또는 제WO2005/092920호에 나타낸 바와 동일하며, 상기 특허 문헌은 전체로서 참고문헌으로 본 발명에 포함된다.
The mussel adhesive protein fp-151 (SEQ ID NO: 10) used in the present invention has a structure in which 10 repeating amino acids of fp-1 (SEQ ID NO: 2) are repeated 6 times and the N-terminus of fp-5 - A new type of mussel adhesive protein that is linked at the terminal to the gene level. It is successfully expressed in E. coli and produced by simple purification using acetic acid. The specific preparation of the mussel adhesive protein is the same as described in WO2006 / 107183 or WO2005 / 092920, which is incorporated herein by reference in its entirety.

1-2. 1-2. 하이드로젤의Hydrogel 제조 Produce

상기 실시예 1-1을 통해 생산된 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10)을 이용하여 하이드로젤을 제조하기 위해 광가교를 유도하였다. Photo-crosslinking was induced to produce a hydrogel using the mussel adhesive protein fp-151 (SEQ ID NO: 10) produced in Example 1-1.

구체적으로, 광반응성 하이드로젤을 제조하기 위해서, 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10)이 용해되어 있는 용액에 Ru(II)bpy3 2+와 과황산나트륨(sodium persulfate) 용액을 첨가시킨 후, 450 nm 파장대의 치과용 램프를 30초간 쬐어주어 하이드로젤을 형성시켰다.Specifically, in order to prepare a photoreactive hydrogel, Ru (II) bpy 3 2+ and sodium persulfate solution were added to a solution in which mussel adhesive protein fp-151 (SEQ ID NO: 10) was dissolved, Dental lamps with a wavelength of 450 nm were irradiated for 30 seconds to form a hydrogel.

구체적으로, 하기와 같은 구성요소 농도의 하이드로젤을 제조하였다:Specifically, hydrogels having the following component concentrations were prepared:

a) 10wt% 홍합접착 단백질, 2 mM Ru(II)bpy3 2+ 및 5 mM 과산화황산염a) 10 wt% mussel adhesive protein, 2 mM Ru (II) bpy 3 2+ and 5 mM peroxide sulfate

b) 20wt% 홍합접착 단백질, 2 mM Ru(II)bpy3 2+ 및 40 mM 과산화황산염b) 20 wt% mussel adhesive protein, 2 mM Ru (II) bpy 3 2+ and 40 mM peroxide sulfate

젤화가 되기 전의 홍합접착 단백질 용액과 젤화가 된 후 하이드로젤의 사진을 각각 도 1과 도 2에 나타내었으며, 도 2의 하이드로젤은 Ruthenium 이온으로 인해 노란색을 띠며, 가교 정도에 따라 투명도에도 차이를 보임을 알 수 있다.
1 and 2 show photographs of the mucoadhesive protein solution before gelation and the hydrogel after gelation, respectively. The hydrogel of FIG. 2 is yellow due to the Ruthenium ion and has a difference in transparency depending on the degree of crosslinking Can be seen.

1-3. 1-3. 하이드로젤의Hydrogel 유변학적Rheological 분석 analysis

상기 실시예 1-2에서 제조된 물질이 젤이 맞음을 확인하기 위해 유동계(rheometer)를 이용한 유변학적 분석을 실시하였다. 즉, 시료의 저장탄성률(storage modulus)과 손실탄성률(loss modulus) 값을 비교하여 저장탄성률(G')값이 손실탄성률(G'')보다 클 때 젤이라고 알려져 있으므로, 상기 실시예 1-2에서 얻어진 시료를 유변학적 분석을 위해 시간(time), 진동수(frequency), 및 변형율(strain)을 각각 달리한 세 가지 모드에서 저장탄성률 값과 손실탄성률을 측정하였다.The rheological analysis was performed using a rheometer to confirm that the gel prepared in Example 1-2 was fit. That is, since the gel is known when the storage modulus (G ') is larger than the loss elastic modulus (G' ') by comparing the storage modulus and the loss modulus of the sample, The storage elastic modulus and loss modulus were measured in three modes with different time, frequency and strain for rheological analysis.

구체적으로, 시간에 따른 저장탄성률은 20%의 변형률, 80 Hz의 진동수로 일정하게 유지시켜주면서 측정하였고 그 결과를 도 3 및 도 4에 나타내었다. 다음으로는 변형률을 일정하게 유지시켜주면서 진동수의 변화에 따라 저장탄성률과 손실탄성률을 분석하기 위해, 20%의 변형률을 유지시켜주고 0.1 내지 100 Hz까지 진동수를 변화시켜주면서 저장탄성률 및 손실탄성률을 측정하였고 그 결과를 도 5에 나타내었다.Specifically, the storage elastic modulus with respect to time was measured while keeping the strain constant at 20 Hz and the frequency of 80 Hz, and the results are shown in FIGS. 3 and 4. Next, in order to analyze the storage elastic modulus and the loss elastic modulus according to the change of the frequency while keeping the strain constant, the elastic modulus and the loss elastic modulus are measured while maintaining the strain of 20% and varying the frequency from 0.1 to 100 Hz And the results are shown in Fig.

도 3 및 도 4에서 볼 수 있듯이 모든 측정 지점에서의 저장탄성률 값이 손실탄성률 값보다 크게 측정되어, 상기 실시예 1-2의 시료 a 및 시료 b가 광가교를 통해 형성된 물질이 젤임을 알 수 있으며, 값들이 일정하게 유지되는 것을 통해 하이드로젤 내의 결합이 국소적으로 이루어진 것이 아니라, 일정하고 견고하게 형성됨을 확인할 수 있었다. As shown in FIGS. 3 and 4, the storage elastic modulus values at all the measurement points were measured to be larger than the loss elastic modulus values, and it was found that the samples a and b of Example 1-2 were gel- And it was confirmed that the bonding in the hydrogel was not made locally but constant and firmly formed by keeping the values constant.

또한, 도 5 및 도 6에서 볼 수 있듯이 전체 진동수 영역에서 일정한 저장탄성률 값을 보여줌으로써, 시료 a 및 b의 하이드로젤 내의 견고한 결합을 확인할 수 있었다.Also, as shown in FIGS. 5 and 6, by showing a constant storage elastic modulus value in the whole frequency region, it was confirmed that the samples a and b were firmly bonded in the hydrogel.

또한 하이드로젤을 구성하는 구성요소들의 농도의 변화를 통해 하이드로젤의 기계적 물성을 조절할 수 있음을 유변학적 분석을 통해 알아보았다. 구체적으로, 상기 실시예 1-2의 시료 a 및 b를 변형률을 일정하게 유지시켜주면서 진동수의 변화에 따라 저장탄성률과 손실탄성률을 분석하기 위해, 20%의 변형률을 유지시켜주고 0.1 내지 100 Hz까지 진동수를 변화시켜주면서 저장탄성률 및 손실탄성률을 측정하였다.The rheological properties of the hydrogel were also investigated by controlling the mechanical properties of the hydrogel. Specifically, in order to analyze the storage elastic modulus and the loss elastic modulus according to the change of the frequency while keeping the strain of the samples a and b of Example 1-2 at a constant level, a strain of 20% was maintained, The storage elastic modulus and the loss elastic modulus were measured while changing the frequency.

각 시료의 저장탄성률과 손실탄성률을 도 5(시료 a)와 도 6(시료 b)에 나타내었으며, 시료 b(도 6)의 저장탄성률(9.54kPa)이, 시료 a(도 5)의 저장탄성률(0.688kPa)에 비해 약 14배 더 높음을 알 수 있었다.
The storage elastic modulus and the loss elastic modulus of each sample are shown in Fig. 5 (samples a) and 6 (sample b), and the storage elastic modulus (9.54 kPa) of sample b (Fig. 6) (0.688 kPa), which is about 14 times higher.

실시예Example 2.  2. 하이드로젤의Hydrogel 생체접착력 측정 Bioadhesive force measurement

본 발명의 하이드로젤이 실제 조직과 유사한 표면에서 접착력을 얼마나 갖는지 알아보기 위하여 접착 실험을 수행하였다. 젤화 조건은 홍합접착 단백질 50wt% 용액을 시편 면적 1cm²에 약 8.8ul를 도포하여 면적단위당 도포 된 단백질 양이 4.4 mg/cm2, Ru(II)bpy3 2+ 2 mM, 과산화황산염 40 mM이 되도록 처리하였다.Adhesion experiments were conducted to see how much hydrogels of the present invention had adhesive strength on surfaces similar to actual tissues. The gelation conditions were such that the amount of protein applied per area unit was 4.4 mg / cm 2 , Ru (II) bpy 3 2+ 2 mM, and peroxide sulphate 40 mM by applying a solution of 50 wt% Respectively.

구체적으로 지방 등이 제거된 쥐 피부를 PBS에 담궈서 아크릴 시편에 시아노아크릴레이트 본드로 고정시킨 후, 피부 샘플 사이에 젤화가 일어나기 전의 Ru(II)bpy3 2+과 과산화황산염을 포함하고 있는 홍합 접착 단백질 용액을 도포한 후, 피부 샘플을 접합시킨 후 450 nm 파장 대의 치과용 램프를 50초간 투사하여 하이드로젤을 형성했다. 곧바로 PBS에 2시간 동안 담근 후, 인장강도 측정기(Instron)을 이용하여 접착력을 측정하였고, 비교군으로 홍합접착 단백질 fp-151(서열번호 10) 용액을 같은 농도로 도포하여 비교하였다. Specifically, mouse skin from which fat was removed was immersed in PBS and fixed to the acrylic specimen with a cyanoacrylate bond. Thereafter, the skin samples were immersed in a mixture of Ru (II) bpy 3 2+ before gelation and mussel After applying the adhesive protein solution, the skin sample was bonded and then a dental lamp of 450 nm wavelength was projected for 50 seconds to form a hydrogel. Immediately after immersing in PBS for 2 hours, the adhesive strength was measured using a tensile strength tester (Instron), and the mussel adhesive protein fp-151 (SEQ.

그 결과, 홍합접착 단백질 용액이 약 37 kPa, 홍합접착 단백질 기반의 하이드로젤이 72 kPa 정도의 힘을 보임을 확인하였고, 이를 도 7에 나타내었다.
As a result, it was confirmed that the mussel adhesive protein solution had a strength of about 37 kPa, and the hydrogel based on the mussel adhesive protein had a force of about 72 kPa, which is shown in FIG.

실시예Example 3.  3. 하이드로젤의Hydrogel 랫트의Rat 피부 창상 접착 및 재생 실험 Skin wound adhesion and regeneration experiment

본 발명의 하이드로젤이 실제 조직의 접착 및 재생에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위하여, 실험용 랫트(rat)를 이용한 창상 실험을 수행하였다. 젤화 조건은 최종 농도 홍합접착 단백질 30wt%, Ru(II)bpy3 2+ 2 mM, 및 과산화황산염 40 mM이 되도록 처리하였다.To examine the effect of the hydrogel of the present invention on the adhesion and regeneration of actual tissues, a wound experiment using a laboratory rat was conducted. The gelation conditions were 30 wt% of the final concentration of mussel adhesive protein, 2 mM of Ru (II) bpy 3 2+ , and 40 mM of peroxide sulfate.

구체적으로 약 200 g의 랫트(rat)의 등에 약 2 cm의 창상을 만들고, 곧바로 이러한 상처에 Ru(II)bpy3 2+과 과산화황산염을 포함하고 있는 홍합접착 단백질 용액을 도포한 후, 450 nm 파장 대의 치과용 램프를 약 100초간 투사하여 하이드로젤을 형성하여 상처 봉합을 유도하였다. 비교군으로, 자연 치유와 봉합사를 이용한 상처봉합을 이용하였다. Specifically, a wound of about 2 cm was made on the rats of a rat of about 200 g, and the mucous adhesive protein solution containing Ru (II) bpy 3 2+ and peroxidic sulfate was immediately applied to these wounds, and 450 nm A dental lamp of a wavelength band was projected for about 100 seconds to form a hydrogel to induce wound closure. As a comparison group, wound healing with natural healing and suture was used.

그 결과 광반응성 및 생체 접착성의 하이드로젤을 이용하여 즉각적인 상처 봉합이 가능함을 확인하였고, 이를 도 8에 나타내었다. 또한, 약 7일 후, 상처 치유 및 재생을 육안으로 확인해본 결과, 하이드로젤을 이용한 창상 치료에서 더 빠른 재생이 확인되었고, 이를 도 9에 나타내었다.
As a result, it was confirmed that immediate wound closure was possible using photoreactive and bioadhesive hydrogel, which is shown in FIG. In addition, about 7 days later, visual inspection of wound healing and regeneration showed faster regeneration in wound treatment using hydrogel, which is shown in FIG.

실시예Example 4. 세포를 포함하는  4. Cell-containing 하이드로젤Hydrogel 제조  Produce

미리 배양된 섬유아세포(fibroblast cell) 계열인 NIH/3T3 세포를 함께 첨가한 후, 하이드로젤을 제조하고, 하이드로젤 속의 세포의 생존 여부를 확인하였다 .젤화 조건은 최종 농도 홍합접착 단백질 10wt%, Ru(II)bpy3 2+ 1 mM, 과산화황산염 10 mM이고, 세포의 수는 총 용액 부피 1 ml당 5 X 105 개가 되도록 처리하였다.After the addition of pre-cultured fibroblast cell line NIH / 3T3 cells, a hydrogel was prepared and the viability of the cells in the hydrogel was confirmed. The gelation conditions were 10wt% of final concentration mussel adhesive protein, Ru (II) bpy 3 2+ 1 mM, peroxidic sulfate 10 mM, and the number of cells was adjusted to 5 × 10 5 per 1 ml of the total solution volume.

구체적으로, NIH/3T3 세포, Ru(II)bpy3 2+과 과산화황산염을 포함하고 있는 홍합접착 단백질 용액에 450 nm 파장 대의 치과용 램프를 약 30초간 쬐어준 후 세포-하이드로젤 복합체를 형성하였다. 형성 직후, 세포를 포함하고 있는 하이드로젤의 모습을 광학 현미경으로 확인하였고 이를 도 10에 나타내었다.
Specifically, a mushroom adhesive protein solution containing NIH / 3T3 cells, Ru (II) bpy 3 2+ and peroxidic sulfate was irradiated for about 30 seconds with a 450 nm wavelength dental lamp to form a cell-hydrogel complex . Immediately after the formation, the appearance of the hydrogel containing cells was confirmed by an optical microscope and is shown in Fig.

실시예Example 5. 세포를 포함하는  5. Cell-containing 하이드로젤Hydrogel 내 세포 생존 확인 Check my cell viability

상기 실시예 4의 하이드로젤을 7일간 배양하여 하이드로젤 속 세포 생존을 calcein AM 염색시약을 사용한 형광 염색기법으로 확인하였다. 살아있는 세포와 죽은 세포의 구분은 세포생존의 지표에 의해 결정되는 데, 바로 이 지표는 세포 내에서 일어나는 에스테라아제 활성(esterase activity)과 원형질막 온정성(plasma membrane integrity)이다. 이 염색기법에서 살아있는 세포의 경우 calcein AM은 살아있는 세포 내로 투과가 가능하고 살아있는 세포 안에서 에스테라아제 활성에 의해 강렬하고 일정한 초록색 형광을 나타낸다. 그 결과 상기 실시예 4의 하이드로젤 속 대부분의 세포가 살아있음이 초록색의 형광을 통해 확인하였고, 이를 도 11에 나타내었다.The hydrogel of Example 4 was cultured for 7 days and viable cell viability was confirmed by fluorescence staining using calcein AM staining reagent. The distinction between living cells and dead cells is determined by the indicators of cell survival, which is the esterase activity and plasma membrane integrity that occur within the cell. In this staining technique, calcein AM is able to permeate into living cells and exhibit intense and constant green fluorescence due to esterase activity in living cells. As a result, most cells in the hydrogel of Example 4 were alive through green fluorescence, which is shown in FIG.

<110> POSTECH ACADEMY-INDUSTRY FOUNDATION <120> Mussel adhesive protein-based adhesive hydrogel <130> DPP20144693KR <160> 25 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 565 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-1 <400> 1 Met Glu Gly Ile Lys Leu Asn Leu Cys Leu Leu Cys Ile Phe Thr Phe 1 5 10 15 Asp Val Leu Gly Phe Ser Asn Gly Asn Ile Tyr Asn Ala His Val Ser 20 25 30 Ser Tyr Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala Tyr Lys Lys Leu Pro Asn Ala 35 40 45 Tyr Pro Tyr Gly Thr Lys Pro Glu Pro Val Tyr Lys Pro Val Lys Thr 50 55 60 Ser Tyr Ser Ala Pro Tyr Lys Pro Pro Thr Tyr Gln Gln Leu Lys Lys 65 70 75 80 Lys Val Asp Tyr Arg Pro Thr Lys Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Gly Ser 85 90 95 Lys Thr Asn Tyr Leu Pro Leu Ala Lys Lys Leu Ser Ser Tyr Lys Pro 100 105 110 Ile Lys Thr Thr Tyr Asn Ala Lys Thr Asn Tyr Pro Pro Val Tyr Lys 115 120 125 Pro Lys Met Thr Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Pro Ser Tyr Pro 130 135 140 Pro Thr Tyr Lys Ser Lys Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Ile Thr Cys Pro 145 150 155 160 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Lys 165 170 175 Lys Thr Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Val Thr Tyr Pro Pro Thr 180 185 190 Tyr Lys Pro Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Ile Tyr Lys Ser Lys Pro Thr 195 200 205 Tyr Lys Pro Lys Ile Thr Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser 210 215 220 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 225 230 235 240 Ala Lys Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Pro Ser Thr Tyr Lys 245 250 255 Ala Lys Pro Thr Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 260 265 270 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys 275 280 285 Pro Thr Tyr Ile Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys 290 295 300 Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 305 310 315 320 Tyr Lys Ala Lys Ser Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr 325 330 335 Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Pro Ser Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser 340 345 350 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr 355 360 365 Tyr Pro Ser Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Pro Ser Thr Tyr Lys 370 375 380 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Ile Ser Tyr Pro 385 390 395 400 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Ser Thr Tyr Lys Ala Lys 405 410 415 Ser Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 420 425 430 Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Pro Ser Thr 435 440 445 Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Pro Pro Thr 450 455 460 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Pro Ser 465 470 475 480 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Lys Ser Ser Tyr Pro Ser Ser Tyr Lys 485 490 495 Pro Lys Lys Thr Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Leu Thr Tyr Pro 500 505 510 Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Ser Tyr Lys Pro Lys 515 520 525 Ile Thr Tyr Pro Ser Thr Tyr Lys Leu Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 530 535 540 Tyr Lys Ser Lys Thr Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Asn Lys Lys Ile Ser 545 550 555 560 Tyr Pro Ser Gln Tyr 565 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fragment sequence derived from fp-1 <400> 2 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 1 5 10 <210> 3 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-1 variant <400> 3 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 1 5 10 15 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys 20 25 30 Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 35 40 45 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser 50 55 60 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 65 70 75 80 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys 100 105 110 Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 115 120 <210> 4 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-1 variant-RGD <400> 4 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 1 5 10 15 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys 20 25 30 Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 35 40 45 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser 50 55 60 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 65 70 75 80 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 85 90 95 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys 100 105 110 Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Gly Arg Gly Asp Ser Pro 115 120 125 <210> 5 <211> 456 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-2 <400> 5 Thr Asn Arg Pro Asp Tyr Asn Asp Asp Glu Glu Asp Asp Tyr Lys Pro 1 5 10 15 Pro Val Tyr Lys Pro Ser Pro Ser Lys Tyr Arg Pro Val Asn Pro Cys 20 25 30 Leu Lys Lys Pro Cys Lys Tyr Asn Gly Val Cys Lys Pro Arg Gly Gly 35 40 45 Ser Tyr Lys Cys Phe Cys Lys Gly Gly Tyr Tyr Gly Tyr Asn Cys Asn 50 55 60 Leu Lys Asn Ala Cys Lys Pro Asn Gln Cys Lys Asn Lys Ser Arg Cys 65 70 75 80 Val Pro Val Gly Lys Thr Phe Lys Cys Val Cys Arg Asn Gly Asn Phe 85 90 95 Gly Arg Leu Cys Glu Lys Asn Val Cys Ser Pro Asn Pro Cys Lys Asn 100 105 110 Asn Gly Lys Cys Ser Pro Leu Gly Lys Thr Gly Tyr Lys Cys Thr Cys 115 120 125 Ser Gly Gly Tyr Thr Gly Pro Arg Cys Glu Val His Ala Cys Lys Pro 130 135 140 Asn Pro Cys Lys Asn Lys Gly Arg Cys Phe Pro Asp Gly Lys Thr Gly 145 150 155 160 Tyr Lys Cys Arg Cys Val Asp Gly Tyr Ser Gly Pro Thr Cys Gln Glu 165 170 175 Asn Ala Cys Lys Pro Asn Pro Cys Ser Asn Gly Gly Thr Cys Ser Ala 180 185 190 Asp Lys Phe Gly Asp Tyr Ser Cys Glu Cys Arg Pro Gly Tyr Phe Gly 195 200 205 Pro Glu Cys Glu Arg Tyr Val Cys Ala Pro Asn Pro Cys Lys Asn Gly 210 215 220 Gly Ile Cys Ser Ser Asp Gly Ser Gly Gly Tyr Arg Cys Arg Cys Lys 225 230 235 240 Gly Gly Tyr Ser Gly Pro Thr Cys Lys Val Asn Val Cys Lys Pro Thr 245 250 255 Pro Cys Lys Asn Ser Gly Arg Cys Val Asn Lys Gly Ser Ser Tyr Asn 260 265 270 Cys Ile Cys Lys Gly Gly Tyr Ser Gly Pro Thr Cys Gly Glu Asn Val 275 280 285 Cys Lys Pro Asn Pro Cys Gln Asn Arg Gly Arg Cys Tyr Pro Asp Asn 290 295 300 Ser Asp Asp Gly Phe Lys Cys Arg Cys Val Gly Gly Tyr Lys Gly Pro 305 310 315 320 Thr Cys Glu Asp Lys Pro Asn Pro Cys Asn Thr Lys Pro Cys Lys Asn 325 330 335 Gly Gly Lys Cys Asn Tyr Asn Gly Lys Ile Tyr Thr Cys Lys Cys Ala 340 345 350 Tyr Gly Trp Arg Gly Arg His Cys Thr Asp Lys Ala Tyr Lys Pro Asn 355 360 365 Pro Cys Val Val Ser Lys Pro Cys Lys Asn Arg Gly Lys Cys Ile Trp 370 375 380 Asn Gly Lys Ala Tyr Arg Cys Lys Cys Ala Tyr Gly Tyr Gly Gly Arg 385 390 395 400 His Cys Thr Lys Lys Ser Tyr Lys Lys Asn Pro Cys Ala Ser Arg Pro 405 410 415 Cys Lys Asn Arg Gly Lys Cys Thr Asp Lys Gly Asn Gly Tyr Val Cys 420 425 430 Lys Cys Ala Arg Gly Tyr Ser Gly Arg Tyr Cys Ser Leu Lys Ser Pro 435 440 445 Pro Ser Tyr Asp Asp Asp Glu Tyr 450 455 <210> 6 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-3 <400> 6 Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly 1 5 10 15 Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp 20 25 30 Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr 35 40 45 <210> 7 <211> 787 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-4 <400> 7 Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Glu Pro Ser Gly Tyr Ala Asn Ile Gly His 1 5 10 15 Arg Arg Tyr Tyr Glu Arg Ala Ile Ser Phe His Arg His Ser His Val 20 25 30 His Gly His His Leu Leu His Arg His Val His Arg His Ser Val Leu 35 40 45 His Gly His Val His Met His Arg Val Ser His Arg Ile Met His Arg 50 55 60 His Arg Val Leu His Gly His Val His Arg His Arg Val Leu His Arg 65 70 75 80 His Val His Arg His Arg Val Leu His Gly His Val His Arg His Arg 85 90 95 Val Leu His Arg His Leu His Arg His Arg Val Leu His Gly His Val 100 105 110 His Arg His Arg Val Leu His Asn His Val His Arg His Ser Val Leu 115 120 125 His Gly His Val His Arg His Arg Val Leu His Arg His Val His Arg 130 135 140 His Asn Val Leu His Gly His Val His Arg His Arg Val Leu His Lys 145 150 155 160 His Val His Asp His Arg Val Leu His Lys His Leu His Lys His Gln 165 170 175 Val Leu His Gly His Val His Arg His Gln Val Leu His Lys His Val 180 185 190 His Asn His Arg Val Leu His Lys His Leu His Lys His Gln Val Leu 195 200 205 His Gly His Val His Thr His Arg Val Leu His Lys His Val His Lys 210 215 220 His Arg Val Leu His Lys His Leu His Lys His Gln Val Leu His Gly 225 230 235 240 His Ile His Thr His Arg Val Leu His Lys His Leu His Lys His Gln 245 250 255 Val Leu His Gly His Val His Thr His Arg Val Leu His Lys His Val 260 265 270 His Lys His Arg Val Leu His Lys His Leu His Lys His Gln Val Leu 275 280 285 His Gly His Val His Met His Arg Val Leu His Lys His Val His Lys 290 295 300 His Arg Val Leu His Lys His Val His Lys His His Val Val His Lys 305 310 315 320 His Val His Ser His Arg Val Leu His Lys His Val His Lys His Arg 325 330 335 Val Glu His Gln His Val His Lys His His Val Leu His Arg His Val 340 345 350 His Ser His His Val Val His Ser His Val His Lys His Arg Val Val 355 360 365 His Ser His Val His Lys His Asn Val Val His Ser His Val His Arg 370 375 380 His Gln Ile Leu His Arg His Val His Arg His Gln Val Val His Arg 385 390 395 400 His Val His Arg His Leu Ile Ala His Arg His Ile His Ser His Gln 405 410 415 Ala Ala Val His Arg His Val His Thr His Val Phe Glu Gly Asn Phe 420 425 430 Asn Asp Asp Gly Thr Asp Val Asn Leu Arg Ile Arg His Gly Ile Ile 435 440 445 Tyr Gly Gly Asn Thr Tyr Arg Leu Ser Gly Gly Arg Arg Arg Phe Met 450 455 460 Thr Leu Trp Gln Glu Cys Leu Glu Ser Tyr Gly Asp Ser Asp Glu Cys 465 470 475 480 Phe Val Gln Leu Gly Asn Gln His Leu Phe Thr Val Val Gln Gly His 485 490 495 His Ser Thr Ser Phe Arg Ser Asp Leu Ser Asn Asp Leu His Pro Asp 500 505 510 Asn Asn Ile Glu Gln Ile Ala Asn Asp His Val Asn Asp Ile Ala Gln 515 520 525 Ser Thr Asp Gly Asp Ile Asn Asp Phe Ala Asp Thr His Tyr Asn Asp 530 535 540 Val Ala Pro Ile Ala Asp Val His Val Asp Asn Ile Ala Gln Thr Ala 545 550 555 560 Asp Asn His Val Lys Asn Ile Ala Gln Thr Ala His His His Val Asn 565 570 575 Asp Val Ala Gln Ile Ala Asp Asp His Val Asn Asp Ile Gly Gln Thr 580 585 590 Ala Tyr Asp His Val Asn Asn Ile Gly Gln Thr Ala Asp Asp His Val 595 600 605 Asn Asp Ile Ala Gln Thr Ala Asp Asp His Val Asn Ala Ile Ala Gln 610 615 620 Thr Ala Asp Asp His Val Asn Ala Ile Ala Gln Thr Ala Asp His Val 625 630 635 640 Asn Asp Ile Gly Asp Thr Ala Asn Ser His Ile Val Arg Val Gln Gly 645 650 655 Val Ala Lys Asn His Leu Tyr Gly Ile Asn Lys Ala Ile Gly Lys His 660 665 670 Ile Gln His Leu Lys Asp Val Ser Asn Arg His Ile Glu Lys Leu Asn 675 680 685 Asn His Ala Thr Lys Asn Leu Leu Gln Ser Ala Leu Gln His Lys Gln 690 695 700 Gln Thr Ile Glu Arg Glu Ile Gln His Lys Arg His Leu Ser Glu Lys 705 710 715 720 Glu Asp Ile Asn Leu Gln His Glu Asn Ala Met Lys Ser Lys Val Ser 725 730 735 Tyr Asp Gly Pro Val Phe Asn Glu Lys Val Ser Val Val Ser Asn Gln 740 745 750 Gly Ser Tyr Asn Glu Lys Val Pro Val Leu Ser Asn Gly Gly Gly Tyr 755 760 765 Asn Gly Lys Val Ser Ala Leu Ser Asp Gln Gly Ser Tyr Asn Glu Gly 770 775 780 Tyr Ala Tyr 785 <210> 8 <211> 76 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-5 <400> 8 Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His 1 5 10 15 Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr 20 25 30 Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys 35 40 45 Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg 50 55 60 Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser 65 70 75 <210> 9 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-6 <400> 9 Gly Gly Gly Asn Tyr Arg Gly Tyr Cys Ser Asn Lys Gly Cys Arg Ser 1 5 10 15 Gly Tyr Ile Phe Tyr Asp Asn Arg Gly Phe Cys Lys Tyr Gly Ser Ser 20 25 30 Ser Tyr Lys Tyr Asp Cys Gly Asn Tyr Ala Gly Cys Cys Leu Pro Arg 35 40 45 Asn Pro Tyr Gly Arg Val Lys Tyr Tyr Cys Thr Lys Lys Tyr Ser Cys 50 55 60 Pro Asp Asp Phe Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Asn 65 70 75 80 Asp Lys Asp Tyr Phe Asn Cys Gly Ser Tyr Asn Gly Cys Cys Leu Arg 85 90 95 Ser Gly Tyr <210> 10 <211> 196 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-151 <400> 10 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr 1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala 20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu 50 55 60 Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser 65 70 75 80 Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys 85 90 95 Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly 100 105 110 Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr 115 120 125 Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 130 135 140 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser 145 150 155 160 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 165 170 175 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 180 185 190 Pro Thr Tyr Lys 195 <210> 11 <211> 202 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-151-RGD <400> 11 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr 1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala 20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu 50 55 60 Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser 65 70 75 80 Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys 85 90 95 Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly 100 105 110 Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr 115 120 125 Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 130 135 140 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser 145 150 155 160 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 165 170 175 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 180 185 190 Pro Thr Tyr Lys Gly Arg Gly Asp Ser Pro 195 200 <210> 12 <211> 172 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-131 <400> 12 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr 1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala 20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Trp Ala 50 55 60 Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly 65 70 75 80 Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp Asn 85 90 95 Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Gly Ser Ala 100 105 110 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 115 120 125 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro 130 135 140 Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr 145 150 155 160 Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Leu 165 170 <210> 13 <211> 175 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-353 <400> 13 Met Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly 1 5 10 15 Gly Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly 20 25 30 Trp Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Glu 35 40 45 Phe Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Ser Asn 50 55 60 His Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly 65 70 75 80 Tyr Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr 85 90 95 Lys Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His 100 105 110 Arg Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser Lys Leu Ala 115 120 125 Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly 130 135 140 Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp Asn 145 150 155 160 Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Leu Glu 165 170 175 <210> 14 <211> 189 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-153 <400> 14 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr 1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala 20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Glu Phe Ser 50 55 60 Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Ser Asn His Tyr 65 70 75 80 His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys 85 90 95 Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn 100 105 110 Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys 115 120 125 Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser Lys Leu Ala Asp Tyr 130 135 140 Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly Asn Tyr 145 150 155 160 Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp Asn Asn Gly 165 170 175 Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Leu Glu 180 185 <210> 15 <211> 189 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-351 <400> 15 Met Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly 1 5 10 15 Gly Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly 20 25 30 Trp Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Glu 35 40 45 Phe Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Ser Asn 50 55 60 His Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly 65 70 75 80 Tyr Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr 85 90 95 Lys Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His 100 105 110 Arg Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser Lys Leu Ala 115 120 125 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 130 135 140 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro 145 150 155 160 Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr 165 170 175 Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Leu Glu 180 185 <210> 16 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 1 <400> 16 Arg Gly Asp 1 <210> 17 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 2 <400> 17 Arg Gly Asp Ser 1 <210> 18 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 3 <400> 18 Arg Gly Asp Cys 1 <210> 19 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 4 <400> 19 Arg Gly Asp Val 1 <210> 20 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 5 <400> 20 Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro 1 5 10 <210> 21 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 6 <400> 21 Gly Arg Gly Asp Ser 1 5 <210> 22 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 7 <400> 22 Gly Arg Gly Asp Thr Pro 1 5 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 8 <400> 23 Gly Arg Gly Asp Ser Pro 1 5 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 9 <400> 24 Gly Arg Gly Asp Ser Pro Cys 1 5 <210> 25 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 10 <400> 25 Tyr Arg Gly Asp Ser 1 5 <110> POSTECH ACADEMY-INDUSTRY FOUNDATION <120> Mussel adhesive protein-based adhesive hydrogel <130> DPP20144693 <160> 25 <170> Kopatentin 1.71 <210> 1 <211> 565 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-1 <400> 1 Met Glu Gly Ile Lys Leu Asn Leu Cys Leu Leu Cys Ile Phe Thr Phe   1 5 10 15 Asp Val Leu Gly Phe Ser Asn Gly Asn Ile Tyr Asn Ala His Val Ser              20 25 30 Ser Tyr Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala Tyr Lys Lys Leu Pro Asn Ala          35 40 45 Tyr Pro Tyr Gly Thr Lys Pro Glu Pro Val Tyr Lys Pro Val Lys Thr      50 55 60 Ser Tyr Ser Ala Pro Tyr Lys Pro Pro Thr Tyr Gln Gln Leu Lys Lys  65 70 75 80 Lys Val Asp Tyr Arg Pro Thr Lys Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Gly Ser                  85 90 95 Lys Thr Asn Tyr Leu Pro Leu Ala Lys Lys Leu Ser Ser Tyr Lys Pro             100 105 110 Ile Lys Thr Thr Tyr Asn Ala Lys Thr Asn Tyr Pro Pro Val Tyr Lys         115 120 125 Pro Lys Met Thr Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Pro Ser Tyr Pro     130 135 140 Pro Thr Tyr Lys Ser Lys Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Ile Thr Cys Pro 145 150 155 160 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Lys                 165 170 175 Lys Thr Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Val Thr Tyr Pro Pro Thr             180 185 190 Tyr Lys Pro Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Ile Tyr Lys Ser Lys Pro Thr         195 200 205 Tyr Lys Pro Lys Ile Thr Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser     210 215 220 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 225 230 235 240 Ala Lys Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Pro Ser Thr Tyr Lys                 245 250 255 Ala Lys Pro Thr Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro             260 265 270 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys         275 280 285 Pro Thr Tyr Ile Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys     290 295 300 Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 305 310 315 320 Tyr Lys Ala Lys Ser Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr                 325 330 335 Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Pro Ser Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser             340 345 350 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr         355 360 365 Tyr Pro Ser Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Pro Ser Thr Tyr Lys     370 375 380 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Ile Ser Tyr Pro 385 390 395 400 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Ser Thr Tyr Lys Ala Lys                 405 410 415 Ser Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Ser Ser Tyr Pro Pro Thr             420 425 430 Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Pro Ser Thr         435 440 445 Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Thr Tyr Pro Pro Thr     450 455 460 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Pro Ser 465 470 475 480 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Lys Ser Ser Tyr Pro Ser Ser Tyr Lys                 485 490 495 Pro Lys Lys Thr Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Leu Thr Tyr Pro             500 505 510 Pro Thr Tyr Lys Pro Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Ser Tyr Lys Pro Lys         515 520 525 Ile Thr Tyr Pro Ser Thr Tyr Lys Leu Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr     530 535 540 Tyr Lys Ser Lys Thr Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Asn Lys Lys Ile Ser 545 550 555 560 Tyr Pro Ser Gln Tyr                 565 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> Fragment sequence derived from fp-1 <400> 2 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys   1 5 10 <210> 3 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-1 variant <400> 3 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro   1 5 10 15 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys              20 25 30 Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr          35 40 45 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser      50 55 60 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys  65 70 75 80 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro                  85 90 95 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys             100 105 110 Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys         115 120 <210> 4 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-1 variant-RGD <400> 4 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro   1 5 10 15 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys              20 25 30 Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr          35 40 45 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser      50 55 60 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys  65 70 75 80 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro                  85 90 95 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys             100 105 110 Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Gly Arg Gly Asp Ser Pro         115 120 125 <210> 5 <211> 456 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-2 <400> 5 Thr Asn Arg Pro Asp Tyr Asn Asp Asp Glu Glu Asp Asp Tyr Lys Pro   1 5 10 15 Pro Val Tyr Lys Pro Ser Ser Ser Ser Tyr Arg Pro Val Asn Pro Cys              20 25 30 Leu Lys Lys Pro Cys Lys Tyr Asn Gly Val Cys Lys Pro Arg Gly Gly          35 40 45 Ser Tyr Lys Cys Phe Cys Lys Gly Gly Tyr Tyr Gly Tyr Asn Cys Asn      50 55 60 Leu Lys Asn Ala Cys Lys Pro Asn Gln Cys Lys Asn Lys Ser Arg Cys  65 70 75 80 Val Pro Val Gly Lys Thr Phe Lys Cys Val Cys Arg Asn Gly Asn Phe                  85 90 95 Gly Arg Leu Cys Glu Lys Asn Val Cys Ser Pro Asn Pro Cys Lys Asn             100 105 110 Asn Gly Lys Cys Ser Pro Leu Gly Lys Thr Gly Tyr Lys Cys Thr Cys         115 120 125 Ser Gly Gly Tyr Thr Gly Pro Arg Cys Glu Val His Ala Cys Lys Pro     130 135 140 Asn Pro Cys Lys Asn Lys Gly Arg Cys Phe Pro Asp Gly Lys Thr Gly 145 150 155 160 Tyr Lys Cys Arg Cys Val Asp Gly Tyr Ser Gly Pro Thr Cys Gln Glu                 165 170 175 Asn Ala Cys Lys Pro Asn Pro Cys Ser Asn Gly Gly Thr Cys Ser Ala             180 185 190 Asp Lys Phe Gly Asp Tyr Ser Cys Glu Cys Arg Pro Gly Tyr Phe Gly         195 200 205 Pro Glu Cys Glu Arg Tyr Val Cys Ala Pro Asn Pro Cys Lys Asn Gly     210 215 220 Gly Ile Cys Ser Ser Asp Gly Ser Gly Gly Tyr Arg Cys Arg Cys Lys 225 230 235 240 Gly Gly Tyr Ser Gly Pro Thr Cys Lys Val Asn Val Cys Lys Pro Thr                 245 250 255 Pro Cys Lys Asn Ser Gly Arg Cys Val Asn Lys Gly Ser Ser Tyr Asn             260 265 270 Cys Ile Cys Lys Gly Gly Tyr Ser Gly Pro Thr Cys Gly Glu Asn Val         275 280 285 Cys Lys Pro Asn Pro Cys Gln Asn Arg Gly Arg Cys Tyr Pro Asp Asn     290 295 300 Ser Asp Asp Gly Phe Lys Cys Arg Cys Val Gly Gly Tyr Lys Gly Pro 305 310 315 320 Thr Cys Glu Asp Lys Pro Asn Pro Cys Asn Thr Lys Pro Cys Lys Asn                 325 330 335 Gly Gly Lys Cys Asn Tyr Asn Gly Lys Ile Tyr Thr Cys Lys Cys Ala             340 345 350 Tyr Gly Trp Arg Gly Arg His Cys Thr Asp Lys Ala Tyr Lys Pro Asn         355 360 365 Pro Cys Val Val Ser Lys Pro Cys Lys Asn Arg Gly Lys Cys Ile Trp     370 375 380 Asn Gly Lys Ala Tyr Arg Cys Lys Cys Ala Tyr Gly Tyr Gly Gly Arg 385 390 395 400 His Cys Thr Lys Lys Ser Tyr Lys Lys Asn Pro Cys Ala Ser Arg Pro                 405 410 415 Cys Lys Asn Arg Gly Lys Cys Thr Asp Lys Gly Asn Gly Tyr Val Cys             420 425 430 Lys Cys Ala Arg Gly Tyr Ser Gly Arg Tyr Cys Ser Leu Lys Ser Pro         435 440 445 Pro Ser Tyr Asp Asp Asp Glu Tyr     450 455 <210> 6 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-3 <400> 6 Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly   1 5 10 15 Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp              20 25 30 Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr          35 40 45 <210> 7 <211> 787 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-4 <400> 7 Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Glu Pro Ser Gly Tyr Ala Asn Ile Gly His   1 5 10 15 Arg Arg Tyr Tyr Glu Arg Ala Ser Ser Phe His Arg His His Val              20 25 30 His Gly His His Leu Leu His Arg His Val His Arg His Ser Val Leu          35 40 45 His Gly His Val His Met His Arg Val Ser His Arg Ile Met His Arg      50 55 60 His Arg Val Leu His Gly His Val His Arg His Arg Val Leu His Arg  65 70 75 80 His Val His Arg Arg His Val Leu His Gly His Val His Arg Arg His Arg                  85 90 95 Val Leu His Arg His Leu His Arg His Arg Val Leu His Gly His Val             100 105 110 His Arg His Arg Val Leu His Asn His Val His Arg His Ser Val Leu         115 120 125 His Gly His Val His Arg His Arg Val Leu His Arg His Val Val His Arg     130 135 140 His Asn Val Leu His Gly His Val His Arg Arg His Val Leu His Lys 145 150 155 160 His Val His Asp His Arg Val Leu His Lys His Leu His Lys His Gln                 165 170 175 Val Leu His Gly His Val His Arg His Gln Val Leu His Lys His Val             180 185 190 His Asn His Arg Val Leu His Lys His Leu His Lys His Gln Val Leu         195 200 205 His Gly His Val His Thr His Arg Val Leu His Lys His Val His Lys     210 215 220 His Arg Val Leu His Lys His Leu His Lys His Gln Val Leu His Gly 225 230 235 240 His Ile His Thr His Arg Val Leu His Lys His Leu His Lys His Gln                 245 250 255 Val Leu His Gly His Val His Thr His Arg Val Leu His Lys His Val             260 265 270 His Lys His Arg Val Leu His Lys His Leu His Lys His Gln Val Leu         275 280 285 His Gly His Val His Met His Arg Val Leu His Lys His Val His Lys     290 295 300 His Arg Val Leu His Lys His Val His Lys His His Val Val His Lys 305 310 315 320 His Val His Ser His Arg Val Leu His Lys His Val His Lys His Arg                 325 330 335 Val Glu His Gln His Val His Lys His His Val Leu His Arg His Val             340 345 350 His Ser His His Val Val His Ser Val Val His Lys His Arg Val Val         355 360 365 His Ser His Val His Lys His Asn Val Val His Ser His Val His Arg     370 375 380 His Gln Ile Leu His Arg His Val His Arg His Gln Val Val His Arg 385 390 395 400 His Val His Arg His Leu Ile Ala His Arg His Ile His Ser His Gln                 405 410 415 Ala Ala Val His Arg His Val His Thr His Val Phe Glu Gly Asn Phe             420 425 430 Asn Asp Asp Gly Thr Asp Val Asn Leu Arg Ile Arg His Gly Ile Ile         435 440 445 Tyr Gly Gly Asn Thr Tyr Arg Leu Ser Gly Gly Arg Arg Arg Phe Met     450 455 460 Thr Leu Trp Gln Glu Cys Leu Glu Ser Tyr Gly Asp Ser Asp Glu Cys 465 470 475 480 Phe Val Gln Leu Gly Asn Gln His Leu Phe Thr Val Val Gln Gly His                 485 490 495 His Ser Thr Ser Phe Arg Ser Asp Leu Ser Asn Asp Leu His Pro Asp             500 505 510 Asn Asn Ile Glu Gln Ile Ala Asn Asp His Val Asn Asp Ile Ala Gln         515 520 525 Ser Thr Asp Gly Asp Ile Asn Asp Phe Ala Asp Thr His Tyr Asn Asp     530 535 540 Val Ala Pro Ile Ala Asp Val His Val Asp Asn Ile Ala Gln Thr Ala 545 550 555 560 Asp Asn His Val Lys Asn Ile Ala Gln Thr Ala His His His Val Asn                 565 570 575 Asp Val Ala Gln Ile Ala Asp Asp His Val Asn Asp Ile Gly Gln Thr             580 585 590 Ala Tyr Asp His Val Asn Asn Ile Gly Gln Thr Ala Asp Asp His Val         595 600 605 Asn Asp Ile Ala Gln Thr Ala Asp Asp His Val Asn Ale Ile Ala Gln     610 615 620 Thr Ala Asp Asp His Val Asn Ala Ile Ala Gln Thr Ala Asp His Val 625 630 635 640 Asn Asp Ile Gly Asp Thr Ala Asn Ser Ile Val Val Arg Gl Gln Gly                 645 650 655 Val Ala Lys Asn His Leu Tyr Gly Ile Asn Lys Ala Ile Gly Lys His             660 665 670 Ile Gln His Leu Lys Asp Val Ser Asn Arg His Ile Glu Lys Leu Asn         675 680 685 Asn His Ala Thr Lys Asn Leu Leu Gln Ser Ala Leu Gln His Lys Gln     690 695 700 Gln Thr Ile Glu Arg Glu Ile Gln His Lys Arg His Leu Ser Glu Lys 705 710 715 720 Glu Asp Ile Asn Leu Gln His Glu Asn Ala Met Lys Ser Lys Val Ser                 725 730 735 Tyr Asp Gly Pro Val Phe Asn Glu Lys Val Ser Val Val Ser Asn Gln             740 745 750 Gly Ser Tyr Asn Gly Lys Val Pro Val Leu Ser Asn Gly Gly Gly Tyr         755 760 765 Asn Gly Lys Val Ser Ala Leu Ser Asp Gln Gly Ser Tyr Asn Glu Gly     770 775 780 Tyr Ala Tyr 785 <210> 8 <211> 76 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-5 <400> 8 Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His   1 5 10 15 Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr              20 25 30 Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys          35 40 45 Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg      50 55 60 Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser  65 70 75 <210> 9 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-6 <400> 9 Gly Gly Asn Tyr Arg Gly Tyr Cys Ser Asn Lys Gly Cys Arg Ser   1 5 10 15 Gly Tyr Ile Phe Tyr Asp Asn Arg Gly Phe Cys Lys Tyr Gly Ser Ser              20 25 30 Ser Tyr Lys Tyr Asp Cys Gly Asn Tyr Ala Gly Cys Cys Leu Pro Arg          35 40 45 Asn Pro Tyr Gly Arg Val Lys Tyr Tyr Cys Thr Lys Lys Tyr Ser Cys      50 55 60 Pro Asp Phe Tyr Tyr Tyr Asn Asn Lys Gly Tyr Tyr Tyr Tyr Asn  65 70 75 80 Asp Lys Asp Tyr Phe Asn Cys Gly Ser Tyr Asn Gly Cys Cys Leu Arg                  85 90 95 Ser Gly Tyr             <210> 10 <211> 196 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-151 <400> 10 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr   1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala              20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro          35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu      50 55 60 Gly Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser  65 70 75 80 Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys                  85 90 95 Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly             100 105 110 Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr         115 120 125 Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr     130 135 140 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser 145 150 155 160 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys                 165 170 175 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro             180 185 190 Pro Thr Tyr Lys         195 <210> 11 <211> 202 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-151-RGD <400> 11 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr   1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala              20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro          35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu      50 55 60 Gly Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser  65 70 75 80 Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys                  85 90 95 Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly             100 105 110 Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr         115 120 125 Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr     130 135 140 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser 145 150 155 160 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys                 165 170 175 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro             180 185 190 Pro Thr Tyr Lys Gly Arg Gly Asp Ser Pro         195 200 <210> 12 <211> 172 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-131 <400> 12 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr   1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala              20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro          35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Trp Ala      50 55 60 Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly  65 70 75 80 Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp Asn                  85 90 95 Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Gly Ser Ala             100 105 110 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro         115 120 125 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro     130 135 140 Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr 145 150 155 160 Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Leu                 165 170 <210> 13 <211> 175 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-353 <400> 13 Met Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly   1 5 10 15 Gly Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly              20 25 30 Trp Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Glu          35 40 45 Phe Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Ser Asn      50 55 60 His Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly  65 70 75 80 Tyr Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr                  85 90 95 Lys Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His             100 105 110 Arg Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser Lys Leu Ala         115 120 125 Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly     130 135 140 Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp Asn 145 150 155 160 Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Leu Glu                 165 170 175 <210> 14 <211> 189 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-153 <400> 14 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr   1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala              20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro          35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Glu Phe Ser      50 55 60 Ser Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Ser Asn His Tyr  65 70 75 80 His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys                  85 90 95 Gly Lys Tyr Tyr Gys Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn             100 105 110 Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys         115 120 125 Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser Lys Leu Ala Asp Tyr     130 135 140 Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly Asn Tyr 145 150 155 160 Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp Asn Asn Gly                 165 170 175 Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Leu Glu             180 185 <210> 15 <211> 189 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fp-351 <400> 15 Met Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly   1 5 10 15 Gly Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly              20 25 30 Trp Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Glu          35 40 45 Phe Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Ser Asn      50 55 60 His Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly  65 70 75 80 Tyr Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr                  85 90 95 Lys Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His             100 105 110 Arg Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser Lys Leu Ala         115 120 125 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro     130 135 140 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro 145 150 155 160 Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr                 165 170 175 Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Leu Glu             180 185 <210> 16 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 1 <400> 16 Arg Gly Asp   One <210> 17 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 2 <400> 17 Arg Gly Asp Ser   One <210> 18 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 3 <400> 18 Arg Gly Asp Cys   One <210> 19 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 4 <400> 19 Arg Gly Asp Val   One <210> 20 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 5 <400> 20 Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro   1 5 10 <210> 21 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 6 <400> 21 Gly Arg Gly Asp Ser   1 5 <210> 22 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 7 <400> 22 Gly Arg Gly Asp Thr Pro   1 5 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 8 <400> 23 Gly Arg Gly Asp Ser Pro   1 5 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 9 <400> 24 Gly Arg Gly Asp Ser Pro Cys   1 5 <210> 25 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> RGD Group 10 <400> 25 Tyr Arg Gly Asp Ser   1 5

Claims (21)

홍합접착 단백질, 전자수용체 10 내지 40 mM, 및 광반응성 금속 리간드 1 내지 10 mM을 포함하는 하이드로젤(gel) 제조용 광가교성 조성물에 가시광선을 조사하여 다이-타이로신(di-tyrosine) 잔기를 형성하여 가교화된 가교화물을 포함하는 생체 접착용 하이드로젤.A photo-crosslinking composition for the preparation of a hydrogel comprising mussel adhesive protein, 10 to 40 mM of electron acceptor and 1 to 10 mM of photoreactive metal ligand is irradiated with visible light to form a di-tyrosine residue A hydrogel for bioadhesive comprising a crosslinked crosslinked product. 제1항에 있어서, 상기 홍합접착 단백질은 전체 조성물 기준으로 10 내지 30wt% 포함된 것인, 생체 접착용 하이드로젤.The bioadhesive hydrogel according to claim 1, wherein the mussel adhesive protein is contained in an amount of 10 to 30 wt% based on the total composition. 삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서, 상기 홍합접착 단백질은 서열번호 1, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 및 서열번호 9의 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열로 이루어진 단백질 또는 상기 군에서 선택된 1종 이상의 아미노산 서열이 연결된 융합 단백질인 것인, 생체 접착용 하이드로젤.The mussel adhesive protein according to claim 1, wherein the mussel adhesive protein is a protein consisting of an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: Wherein the fusion protein is a fusion protein comprising at least one amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs. 제5항에 있어서, 상기 융합 단백질은 서열번호 10, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 및 서열번호 15의 아미노산 서열로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열로 이루어진 융합 단백질인 것인, 생체 접착용 하이드로젤.6. The method of claim 5, wherein the fusion protein is a fusion protein comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: Hydrogel for use. 제1항에 있어서, 상기 홍합 접착 단백질은 서열번호 2의 아미노산 서열이 1회 내지 12회 연속하여 연결된 단백질인 것인, 생체 접착용 하이드로젤.The hydrogel for bioadhesive bonding according to claim 1, wherein the mussel adhesive protein is a protein having an amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 connected continuously one to 12 times. 제7항에 있어서, 상기 홍합 접착 단백질은 서열번호 3의 아미노산 서열로 이루어진 단백질인 것인, 생체 접착용 하이드로젤.8. The hydrogel for bioadhesive according to claim 7, wherein the mussel adhesive protein is a protein consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3. 제1항에 있어서, 상기 홍합 접착 단백질은 카르복실 말단 또는 아미노 말단에 RGD(Arg Gly Asp)를 포함하는 3 내지 25개의 아미노산으로 이루어진 폴리펩타이드가 연결된 것인, 생체 접착용 하이드로젤.2. The hydrogel for bioadhesive bonding according to claim 1, wherein the mussel adhesive protein is a polypeptide having 3 to 25 amino acids including RGD (Arg Gly Asp) linked at the carboxyl terminal or amino terminal thereof. 제9항에 있어서, 상기 RGD를 포함하는 폴리펩타이드는 서열번호 16 내지 서열번호 25로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열로 이루어진 것인, 생체 접착용 하이드로젤.10. The hydrogel for bioadhesive bonding according to claim 9, wherein the polypeptide comprising RGD is an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 16 to SEQ ID NO: 제1항에 있어서, 상기 전자수용체는 과황산염(persulfate), 과아이오딘산염(periodate), 과브롬산염(perbromate), 과염소산염(perchlorate), 비타민(B12), 펜타아민클로로코발트(Pentaamminechlorocobalt(III)), 암모늄 세륨 질산염(ammonium cerium(IV) nitrate), 옥살산(oxalic acid), 및 이디티에이(EDTA)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것인, 생체 접착용 하이드로젤.The method of claim 1, wherein the electron acceptor is selected from the group consisting of persulfate, periodate, perbromate, perchlorate, vitamin B12, pentaamminechlorocobalt (III) ), Ammonium cerium (IV) nitrate, oxalic acid, and edetic acid (EDTA). 제1항에 있어서, 상기 광반응성 금속 리간드는 루테니움(Ru(II)), 팔라디움(Pd(II)), 구리(Cu(II)), 니켈(Ni(II)), 망간(Mn(II)), 및 철(Fe(III))로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것인, 생체 접착용 하이드로젤.The method of claim 1, wherein the photoreactive metal ligand is selected from the group consisting of ruthenium (Ru), palladium (Pd), copper (II), nickel (Ni) II)), and iron (Fe (III)). 제1항에 있어서, 상기 조성물은 생리활성물질을 추가로 포함하는 것인, 생체 접착용 하이드로젤.The hydrogel for bioadhesive according to claim 1, wherein the composition further comprises a physiologically active substance. 제13항에 있어서, 상기 생리활성 물질은 세포, 단백질, 효소, 및 당으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것인, 생체 접착용 하이드로젤.14. The bio-adhesive hydrogel according to claim 13, wherein the physiologically active substance is at least one selected from the group consisting of cells, proteins, enzymes, and sugars. 홍합접착 단백질, 전자수용체 10 내지 40 mM, 및 광반응성 금속 리간드 1 내지 10 mM를 포함하는 하이드로젤(gel) 제조용 광가교성 조성물에 가시광선을 조사하여 다이-타이로신(di-tyrosine) 잔기를 형성하여 가교화하는 단계를 포함하는 하이드로젤의 생산방법.A photo-crosslinking composition for the preparation of a hydrogel comprising mussel adhesive protein, 10 to 40 mM of electron acceptor and 1 to 10 mM of photoreactive metal ligand is irradiated with visible light to form a di-tyrosine residue And crosslinking the hydrogel. 제15항에 있어서, 상기 가시광선은 파장범위 449 내지 455nm의 가시광선인 것인, 생산방법.The production method according to claim 15, wherein the visible light is a visible light ray in a wavelength range of 449 to 455 nm. 삭제delete 제1항 내지 제2항 및 제5항 내지 제14항 중 어느 한 항의 하이드로젤을 포함하는 생체접착제.14. A bioadhesive comprising the hydrogel according to any one of claims 1 to 12. 제1항 내지 제2항 및 제5항 내지 제14항 중 어느 한 항의 하이드로젤을 포함하는 조직공학용 지지체.17. A tissue engineering support comprising the hydrogel of any one of claims 1 to 12 and 15 to 14. 제1항 내지 제2항 및 제5항 내지 제14항 중 어느 한 항의 하이드로젤을 포함하는 약물 전달용 담체.14. A drug delivery carrier comprising the hydrogel according to any one of claims 1 to 2 and 5 to 14. 제20항에 있어서, 상기 약물은 단백질 의약품, 펩타이드, 항암제, 및 항염증제로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것인, 담체.
21. The carrier according to claim 20, wherein the drug is at least one selected from the group consisting of a protein drug, a peptide, an anti-cancer drug, and an anti-inflammatory drug.
KR1020140115359A 2014-09-01 2014-09-01 Composition for preparing hydrogel comprising mussel adhesive protein and method for preparing hydrogel using the same KR101631704B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020140115359A KR101631704B1 (en) 2014-09-01 2014-09-01 Composition for preparing hydrogel comprising mussel adhesive protein and method for preparing hydrogel using the same

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020140115359A KR101631704B1 (en) 2014-09-01 2014-09-01 Composition for preparing hydrogel comprising mussel adhesive protein and method for preparing hydrogel using the same

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20160026441A KR20160026441A (en) 2016-03-09
KR101631704B1 true KR101631704B1 (en) 2016-06-17

Family

ID=55536832

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020140115359A KR101631704B1 (en) 2014-09-01 2014-09-01 Composition for preparing hydrogel comprising mussel adhesive protein and method for preparing hydrogel using the same

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101631704B1 (en)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220043985A (en) 2020-09-28 2022-04-06 주식회사 바이오빛 Recombinant Polypeptide from Mussel Adhesive Protein and Use Thereof
KR20220075535A (en) 2020-11-30 2022-06-08 주식회사 바이오빛 Composition for Inhibiting Inflammatory Disease Comprising Biocompatible Polypeptide Connected to Functional Peptide
KR20230163124A (en) 2022-05-23 2023-11-30 주식회사 바이오빛 Composition for Prevention or Treatment of Coronavirus Disease

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018080221A1 (en) 2016-10-27 2018-05-03 서울대학교산학협력단 Biocompatible hydrogel and method for producing same
WO2018093161A1 (en) * 2016-11-16 2018-05-24 포항공과대학교 산학협력단 Novel hemostatic agent comprising mussel adhesive protein and method for preparing same
KR102450999B1 (en) 2017-07-18 2022-10-11 주식회사 포스코 Antibacterial adhesive protein, antibacterial nanoparticles, antibacterial composition comprising same, and method for preparing same
KR102194155B1 (en) 2017-08-29 2020-12-22 포항공과대학교 산학협력단 Thermo-responsive biomaterial comprising thermo-responsive protein conjugated-mussel adhesive protein
KR102222704B1 (en) * 2018-05-18 2021-03-04 포항공과대학교 산학협력단 Hydrogel formulation based microneedle adhesive patch
KR102273628B1 (en) 2018-10-08 2021-07-06 포항공과대학교 산학협력단 Development of Adhesive Mussel Protein Hydrogel Formulation by Introducing Histidine-based Protein Domain from Mussel Byssus
US20220071918A1 (en) * 2018-12-21 2022-03-10 POSTECH Research and Business Development Foundation Mussel adhesive protein-based photothermal agent and photothermal- responsive adhesive nanoparticles

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101578522B1 (en) 2012-08-23 2015-12-17 포항공과대학교 산학협력단 Mussel adhesive protein-based bioadhesive hydrogel

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ding, Y. et al., Langmuir(2013) Vol.29, No.43, pp.13299-13306
FANCY, D. A. & KODADEK, T., Proce. Natl. Acad. Sci. USA (1999) Vol.96, pp.6020-6024

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220043985A (en) 2020-09-28 2022-04-06 주식회사 바이오빛 Recombinant Polypeptide from Mussel Adhesive Protein and Use Thereof
KR20230110455A (en) 2020-09-28 2023-07-24 주식회사 바이오빛 Recombinant Polypeptide from Mussel Adhesive Protein and Use Thereof
KR20220075535A (en) 2020-11-30 2022-06-08 주식회사 바이오빛 Composition for Inhibiting Inflammatory Disease Comprising Biocompatible Polypeptide Connected to Functional Peptide
KR20230163124A (en) 2022-05-23 2023-11-30 주식회사 바이오빛 Composition for Prevention or Treatment of Coronavirus Disease

Also Published As

Publication number Publication date
KR20160026441A (en) 2016-03-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101631704B1 (en) Composition for preparing hydrogel comprising mussel adhesive protein and method for preparing hydrogel using the same
KR101578522B1 (en) Mussel adhesive protein-based bioadhesive hydrogel
KR102222704B1 (en) Hydrogel formulation based microneedle adhesive patch
KR102005737B1 (en) Novel Bioink for 3D Bioprinting and Uses Thereof
WO2017122216A1 (en) A process for extraction of collagen from fish scale and polyelectrolyte based bioactive super-absorbent materials
KR101677097B1 (en) Adhesive sealant for treating of fistula, perforation or anastomosis leak and for connecting of internal organ
EP2885015B1 (en) Use of self-assembling polypeptides as tissue adhesives
NO175006B (en) Synthetic amino acid and / or peptide grafted copolymers
US20100022755A1 (en) Platelet aggregation inducing substance
EP0244688B1 (en) Adhesives derived from bioadhesive polyphenolic proteins
CN111465417B (en) Hemostatic composition and container comprising same
WO2009084507A1 (en) Method of preparing layered collagen gel and layered collagen gel
Basak Co-evolving with nature: the recent trends on the mussel-inspired polymers in medical adhesion
Nie et al. Plant Protein‐Peptide Supramolecular Polymers with Reliable Tissue Adhesion for Surgical Sealing
EP3013377B1 (en) Compositions comprising a polymer-protein conjugate and an environmentally-responsive polymer and uses thereof
KR20190024721A (en) Thermo-responsive biomaterial comprising thermo-responsive protein conjugated-mussel adhesive protein
EP3248622B1 (en) Surgical sealant
KR20230108085A (en) Bioadhesive composition comprising mussel adhesive protein and preparaiton method thereof
KR20170079261A (en) Recombinant polypeptide for use in promoting scarless wound healing and adhesive biomaterial comprising thereof
KR100444944B1 (en) Polyethylene glycol hydrogel for bioadhesive
KR102556206B1 (en) Bioadhesive tape comprising mussel adhesive protein and preparation method thereof
JP3862361B2 (en) Medical dressings and novel peptides used therefor
KR102640102B1 (en) Composition for forming hydrogel, hydrogel formed by photo-crosslinking the same, and method for preparing the hydrogel
WO2023127888A1 (en) Novel peptides
Gwon et al. Eggshell membrane-incorporated cell friendly tough hydrogels with ultra-adhesive property

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E90F Notification of reason for final refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190319

Year of fee payment: 4