KR101615598B1 - 백반증 마우스 모델 및 그 제작방법 - Google Patents
백반증 마우스 모델 및 그 제작방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR101615598B1 KR101615598B1 KR1020130038193A KR20130038193A KR101615598B1 KR 101615598 B1 KR101615598 B1 KR 101615598B1 KR 1020130038193 A KR1020130038193 A KR 1020130038193A KR 20130038193 A KR20130038193 A KR 20130038193A KR 101615598 B1 KR101615598 B1 KR 101615598B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- vitiligo
- skin
- discolored
- lesion
- mouse
- Prior art date
Links
- 206010047642 Vitiligo Diseases 0.000 title claims abstract description 39
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 9
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 claims abstract description 9
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 32
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 28
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 claims description 24
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 24
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 14
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 claims description 13
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 10
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 claims description 9
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 9
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims description 9
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000037308 hair color Effects 0.000 claims description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 5
- 210000002721 hair follicle melanocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 claims 1
- 210000004511 skin melanocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 18
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 abstract description 17
- 108010051081 dopachrome isomerase Proteins 0.000 abstract description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 8
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-4-amino-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s,3s)-2-[[(2s)-2-azaniumyl-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-carboxylatobutanoyl]amino]-6-azaniumy Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JVJGCCBAOOWGEO-RUTPOYCXSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000006472 autoimmune response Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- VQWNELVFHZRFIB-UHFFFAOYSA-N odn 1826 Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C(O1)CC(O)C1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(N=C(N)C=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC1CC(N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)OC1COP(O)(=O)OC(C(O1)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=C(C(NC(N)=N3)=O)N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(N=C(N)C=C2)=O)COP(O)(=O)OC2C(OC(C2)N2C(NC(=O)C(C)=C2)=O)COP(O)(O)=O)CC1N1C=C(C)C(=O)NC1=O VQWNELVFHZRFIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 4
- 101001023379 Homo sapiens Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 3
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- 206010001557 Albinism Diseases 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 2
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- KASDHRXLYQOAKZ-XDSKOBMDSA-N pimecrolimus Chemical compound C/C([C@H]1OC(=O)[C@@H]2CCCCN2C(=O)C(=O)[C@]2(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)[C@@H](OC)C[C@@H](C)C/C(C)=C/[C@H](C(C[C@H](O)[C@H]1C)=O)CC)=C\[C@@H]1CC[C@H](Cl)[C@H](OC)C1 KASDHRXLYQOAKZ-XDSKOBMDSA-N 0.000 description 2
- ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N psoralen Chemical compound C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OC=C2 ZCCUUQDIBDJBTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 2
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 4',5'-Dihydropsoralen Natural products C1=C2OC(=O)C=CC2=CC2=C1OCC2 VXGRJERITKFWPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 210000001239 CD8-positive, alpha-beta cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000519995 Stachys sylvatica Species 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000011340 continuous therapy Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000011443 conventional therapy Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 229940020485 elidel Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008378 epithelial damage Effects 0.000 description 1
- 210000000039 epithelial melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004013 groin Anatomy 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229960002037 methylprednisolone aceponate Drugs 0.000 description 1
- DALKLAYLIPSCQL-YPYQNWSCSA-N methylprednisolone aceponate Chemical compound C1([C@@H](C)C2)=CC(=O)C=C[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@@](C(=O)COC(C)=O)(OC(=O)CC)[C@@]2(C)C[C@@H]1O DALKLAYLIPSCQL-YPYQNWSCSA-N 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 108010042234 peptide SVYDFFVWL Proteins 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229960005330 pimecrolimus Drugs 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- FNPXMHRZILFCKX-KAJVQRHHSA-N prednicarbate Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)COC(=O)CC)(OC(=O)OCC)[C@@]1(C)C[C@@H]2O FNPXMHRZILFCKX-KAJVQRHHSA-N 0.000 description 1
- 229960002794 prednicarbate Drugs 0.000 description 1
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 1
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001967 tacrolimus Drugs 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
본 발명은 백반증 마우스 모델 및 그 제작방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 멜라닌 세포의 특정 단백질 중 하나인 TRP-2(tyrosinase related protein-2)유래 펩타이드(SVYDFFVWL)를 자가항원으로 사용하고 면역반응을 자극하기 위한 보조제(adjuvant)를 혼합 투여하여 병변을 유발시킨 백반증 마우스 모델 및 그 제작방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 백반증 마우스 모델은 자가반응 CD8 T-림프구의 활성 억제 효능 및 피부 병변의 면적 감소 평가 등을 통해 백반증 치료제를 스크리닝 하는데 유용하다.
본 발명에 따른 백반증 마우스 모델은 자가반응 CD8 T-림프구의 활성 억제 효능 및 피부 병변의 면적 감소 평가 등을 통해 백반증 치료제를 스크리닝 하는데 유용하다.
Description
본 발명은 백반증 마우스 모델 및 그 제작방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 멜라닌 세포의 특정 단백질 중 하나인 TRP-2(tyrosinase related protein-2)유래 펩타이드(SVYDFFVWL)를 자가항원으로 사용하고 면역반응을 자극하기 위한 보조제(adjuvant)를 혼합 투여하여 병변을 유발시킨 백반증 마우스 모델 및 그 제작방법에 관한 것이다.
우리의 인체는 항상 외부 환경과 접해 있다. 우리가 살고 있는 이 대기에는 무수히 많은 종류의 물질이 생물이건 무생물이건 포함되어 있다. 인체는 살아 있는 동안 주위 환경과 끊임없이 물질을 주고받는다. 여기에는 인체에 필요한 가스나 양분 뿐만 아니라 인체에 해를 줄 수 있는 병원균이나 독성물질도 포함되어 있다.
인체는 이런 병원균이나 독성물질을 인식하여 제거하거나 피해를 주지 않도록 조절할 수 있는 시스템을 가지고 있는데, 이것이 바로 면역이다. 인체의 면역체계는 외부로부터 침입한 병원성 바이러스나 세균에 대항해 방어하도록 되어 있다. 그러나 일부 환자들에서는 이런 기능을 수행해야 할 면역체계가 거꾸로 자기 자신의 생체구성 성분(자기항원)을 적으로 간주하고 공격하는 경우가 드물게 발생 한다. 이것을 자가면역반응(Autoimmune Responses)이라고 한다.
건강한 사람은 자기항원에 대하여 면역반응을 일으키지 않도록 하는 방어 장치가 있는데 이를 면역내성(Immune Tolerence) 또는 면역관용이라고 한다. 면역세포에 의한 면역반응은 외부에서 침입한 이물질로부터 자신의 몸을 보호하는 군대와 같은 역할을 한다. 그러므로 공격 대상은 외부의 침입자이지 자기 자신이 아니다.
생체 내에는 자기 몸에 대해서는 면역반응을 일으키지 않도록 하는 규율 즉, 자가관용(Self Tolerance)이 있는데 이 규율에 위배되는 경우가 바로 자가면역질환이다. 이 방어 장치의 고장으로 인해 자가 항원에 대한 면역체계의 관용 관계가 깨어지게 되면 신체의 일부 또는 전체를 파괴하게 된다.
우리 몸속에는 선천성 면역을 담당하는 대식세포 (Macrophage), 수지상 세포(Denritic Cell), 다형 핵세포(Polymorphonuclear Leukocyte), 자연 세포살해 세포(Natural Killer Cell) 등이 있고, 적응 면역 세포에는 T cell과 B cell이 있다. T cell은 다시 CD4+T 세포와 CD8+T 세포로 나뉘는데, CD4+T 세포는 CD8+T 세포와 대식세포를 돕는 Th 세포와 B 세포를 도와 항체를 생산하는 Th 세포가 있다. CD8+T 세포는 활성화되면 세포살해 T 세포가 되어 암세포나 바이러스에 감염된 세포를 죽이므로 외부로부터 침입한 이물질에 의한 피해를 막을 수 있다.
대표적인 자가면역질환으로는 크게 전신성과 장기 특이성으로 나눌 수 있으며 여러 장기를 동시에 침범하는 전신성에는 전신성홍반성낭창으로 알려진 SLE (Systemic Lupus Erythematosus)이나 류마티스 관절염 (Rheumatoid Arthritis) 등이 있으며, 한 가지 장기만 침범하는 장기 특이성에는 인슐린의존형 (제1형) 당뇨병(Diabetes Mellitus) 등이 있다.
백반증(Vitiligo) 또한 멜라닌 세포에 대한 자가면역반응에 의한 자가면역질환이며, 피부에 흰색으로 보이는 탈색반이 나타나는 피부 질환으로 전 세계 인구의 약 0.1~2%에서 발생한다 (Yaghoobi R. et al ., J Dermatol., 38(5):419-31 2011). 병리학적으로는 멜라닌을 생성하는 멜라닌 세포(melanocytes)가 자가면역반응에 의해 파괴되면서 피부색을 이루는 멜라닌 색소의 결핍을 초래한다. 백반증 환자의 혈액에서 멜라닌 세포의 특정 단백질에 반응하는 T-림프구의 존재와 이러한 T-림프구가 많이 존재할수록 병변의 면적도 증가한다는 사실이 확인되었다. 주로 얼굴과 사지 말단, 겨드랑이나 사타구니에 흰 반점으로 나타나며 주변으로 번질 수 있다. 또한 질환이 심해지면 모낭의 멜라닌 세포 (hair follicle melanocytes)까지 파괴되면서 흰색으로 탈색된 털이 병변 부위에 나타나기도 한다. 치료를 받지 않을 경우 대부분의 환자에서 병변이 악화되기 때문에 스테로이드나 자외선을 이용한 지속적인 치료를 필요로 한다. 하지만 기존의 치료 방법으로는 치료되지 않는 다수의 환자들이 있기 때문에 보다 더 효과적인 치료 방법이 개발되어야 한다.
한편, 기존의 백반증 동물 모델은 형질전환 생쥐(transgenic mouse)로부터 멜라닌 세포의 특정 단백질에 반응하는 T-림프구를 분리한 후 야생형 생쥐(wild type mouse)에 정맥 주사하거나 멜라닌 세포의 특정 단백질을 코딩하는 플라스미드(palsmid)를 진건(gene gun)을 이용하며 접종하는 방법으로 만들어졌다. 하지만 위의 방법은 상피의 멜라닌 세포(epidermal melanocytes)뿐만 아니라 모낭의 멜라닌 세포(hair follicle melanocytes)까지 파괴한다. 따라서 이 모델의 주 표현형은 피부의 탈색이 아닌 털의 탈색화이다. 하지만 실제 백반증 환자에서 보이는 주 표현형은 피부의 탈색화이며 증상이 심한 경우 소수에서 털의 탈색화를 볼 수 있다. 이와 같이, 털의 탈색화가 진행된 환자는 상피 멜라닌 세포로 분화될 수 있는 모낭의 멜라닌 세포까지 파괴되었기 때문에 기존의 치료 방법으로는 치료되지 않는다. 따라서 백반증에 대한 효과적인 치료 방법을 개발하기 위해서는 털의 탈색화 없이 피부의 탈색화만을 보이는 새로운 동물 모델이 필요한 실정이다.
이에, 본 발명자들은 상기 문제점을 해결하기 위하여 예의 노력한 결과, 멜라닌 세포의 특정 단백질인 TRP-2(tyrosinase related protein-2) 유래 특정 펩타이드와 면역반응을 자극시킬 보조제를 혼합 투여하여 제작한 백반증 마우스 모델에서 실제 사람의 백반증 병변과 같이 털의 탈색화 없이 피부의 탈색화만 일어나는 현상이 재현되는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 털의 탈색화 없이 접종 부위의 피부에만 탈색화가 일어나는 백반증 마우스 모델 및 그 제작 방법을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 멜라닌 세포의 특정 단백질 중 하나인 TRP-2(tyrosinase related protein-2) 유래 펩타이드와 보조제(adjuvant)의 혼합용액을 마우스에 1차 접종하는 단계; 및 (b) 상기 혼합용액을 2차 접종하는 단계를 포함하는 백반증 마우스 모델의 제작방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 상기 방법으로 제작되고, 2차 접종 부위에 탈색된 피부 병변이 유발되고, 2차 접종 부위가 아닌 부위에선 탈색화가 보이지 않으며, 탈색된 피부 병변부의 털에서도 탈색화가 일어나지 않은 특성을 가지는 백반증 마우스 모델을 제공한다.
본 발명에 따른 백반증 마우스 모델은 자가반응 CD8 T-림프구의 활성 억제 효능 및 피부 병변의 면적 감소 평가 등을 통해 백반증 치료제를 스크리닝 하는데 유용하다.
도 1은 펩타이드 접종 스케줄 및 백반증 마우스 모델의 병변 유발을 나타낸 것이다 (a: 펩타이드 접종 스케줄, b: 꼬리 표면의 육안 검사, c: 마우스의 꼬리 피부를 벗겨낸 후 평면으로 펴서 촬영한 사진 꼬리 표면의 육안 검사, d: 꼬리의 동결절편(cryosection)의 육안 검사(no-staining), e: 꼬리의 파라핀(paraffin) 절편을 TRP-2 항체를 이용한 IHC (immunohistochemistry)).
도 2는 손상된 꼬리 피부표면의 털색과 모낭의 멜라닌 세포(hair follicle melanocytes)를 확인한 결과를 나타낸 것이다 (a: 펩타이드 접종한 마우스의 꼬리 피부의 털색 확인, b: TRP-2 항체를 이용한 IHC (immunohistochemistry)).
도 3은 백반증의 경도와 TRP2-180-specific CD8+ T cell 반응과의 상관관계를 나타낸 것이다 (a: IFN-γ, b: TNF-α, c: CD107a(cytotoxic degranulation marker)).
도 2는 손상된 꼬리 피부표면의 털색과 모낭의 멜라닌 세포(hair follicle melanocytes)를 확인한 결과를 나타낸 것이다 (a: 펩타이드 접종한 마우스의 꼬리 피부의 털색 확인, b: TRP-2 항체를 이용한 IHC (immunohistochemistry)).
도 3은 백반증의 경도와 TRP2-180-specific CD8+ T cell 반응과의 상관관계를 나타낸 것이다 (a: IFN-γ, b: TNF-α, c: CD107a(cytotoxic degranulation marker)).
본 발명에서는 멜라닌 세포의 특정 단백질인 TRP-2 유래 특정 펩타이드와 면역반응을 자극시킬 보조제를 마우스에 혼합 투여할 경우, 멜라닌 세포의 특정 단백질에 대한 자가관용(self tolerance)을 파괴시켜 자가면역반응에 의해 유발된 백반증 마우스 마우스 모델 및 그 제조방법을 확인하고자 하였다.
본 발명의 일 실시예에서는 TRP2-180 펩타이드(서열번호 1)와 보조제(LPS 및 CpG ODN 1826) 혼합용액을 마우스의 발바닥에 7일 간격으로 2회 피하(subcutaneous) 접종한 다음, 마우스의 꼬리에 상기 혼합용액을 7일 간격으로 2회 피내(intradermal) 접종하여 백반증 마우스 모델을 제작하였다.
본 발명에서, 제작된 백반증 마우스 모델은 (a) 마지막 접종 후 5주 이내에 꼬리에 탈색된 피부 병변이 확인되었고, (b) 추후, 꼬리가 아닌 전신의 털이나 귀 부위의 피부에서는 탈색화가 보이지 않았으며, (c) 꼬리의 탈색된 피부 병변부에 있는 털도 탈색되지 않았다.
따라서, 본 발명은 일 관점에서, (a) 멜라닌 세포의 특정 단백질 중 하나인 TRP-2(tyrosinase related protein-2) 유래 펩타이드와 보조제 (adjuvant)의 혼합용액을 마우스에 1차 접종하는 단계; 및 (b) 상기 혼합용액을 2차 접종하는 단계를 포함하는 백반증 마우스 모델의 제작방법에 관한 것이다.
본 발명에서 “접종”이란 면역이 생기도록 살아 있거나 죽은 병원체로 만든 생물학적 제제(백신)를 투여하는 것을 포괄하는 개념으로, 병의 예방, 치료, 진단 또는 생물학상의 실험 등을 위하여 병원균(病原菌)이나 독소 등을 사람이나 동식물의 몸안에 주입하는 모든 것을 포함한다.
본 발명에 있어서, 상기 펩타이드는 TRP-2(tyrosinase related protein-2) 의 180~188 아미노산 서열(SVYDFFVWL : 서열번호 1)을 가지는 펩타이드를 특징으로 할 수 있으나, 이에 국한되는 것은 아니다. 예컨대 상기 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 다른 펩타이드를 이용하여 자가면역반응을 유발할 수 있다면 제한 없이 사용할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 9~20개의 아미노산으로 구성되는 것을 특징으로 할 수 있다.
본 발명에 있어서, 1회 투여 펩타이드 용량은 10~200 μg인 것이 바람직하고, 20~100 μg 이상인 것이 더욱 바람직하며, 상기 펩타이드는 마우스에 접종시 자가항원으로 작용될 수 있다.
상기 보조제(adjuvant)는 면역 반응을 자극하기 위한 것으로서, 면역반응을 증진시키는 것이라면 제한 없이 이용할 수 있으며, LPS(lipopolysacchatide), CpG ODN 1826(CpG oligodeoxynecleotide 1826) 등을 예시할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 1회 투여 보조제(adjuvant) 용량은 2~50 μg인 것이 바람직하며, 5~20 μg인 것이 더욱 바람직하다.
본 발명에 있어서, 상기 혼합용액을 마우스에 1차 접종 및 2차 접종하는 단계는 혼합용액을 5~9일 간격으로 각각 2회에 걸쳐 접종하는 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 1차 접종은 면역반응을 유발하기 위한 것이고, 상기 2차 접종은 실제 병변을 유도시키기 위한 것으로서, 상기 접종 간격이 5-9일을 벗어날 경우 자가항원에 대한 자가면역반응이 미약하고 유발된 병변의 정도도 미약할 수 있으며, 상기 1차 접종 및 2차 접종을 각각 2회씩 하는 이유는 일차에서 유도된 자가면역반응을 증가시키기 위한 것이다.
자가면역반응의 세기를 지속적으로 증가시키기 위해서, 상기 2차 접종은 상기 2회째 1차 접종 후 5~9일 후 수행하는 것이 바람직하다.
본 발명에 있어서, 상기 1차 접종은 혼합 용액을 마우스의 발바닥에 접종하고, 상기 2차 접종은 상기 마우스의 착색되어 있는 피부의 피내에 접종하는 것을 특징으로 하며, 상기 1차 접종을 마우스의 발바닥에 하는 이유는 강한 자가면역반응을 재현성있게 유도하기 위한 것이다.
상기 2차 접종은 착색되어 있는 피부, 예를 들어 귀나 꼬리 등에 하는 것이 바람직하다. 본 발명에 사용된 야생형 마우스(C57BL/6)는 선천적으로 귀와 꼬리 이외의 피부에는 멜라닌 세포가 없어서 착색되어 있지 않다. 또한 피내 주사가 아닌 다른 방법으로 주사된 경우 병변이 미미하거나 유도되지 않았다.
본 발명에 있어서, 상기 마우스는 유전자 변형 마우스가 아닌 야생형 마우스를 이용하는 것이 바람직하며, 상기 마우스로는 마우스(C57BL/6)를 이용하는 것이 바람직하다. 아울러, 유전자 변형 생쥐가 아닌 야생형 생쥐에 펩타이드 접종으로 백반증을 유도한 것을 특징으로 한다.
다른 관점에서, 본 발명은 상기 방법에 의해 제작된 백반증 마우스 모델에 관한 것이다.
상기 백반증 마우스 모델은 마지막 접종 후 5주째 2차 접종 부위에 탈색된 피부 병변이 확인되었고, 상기 2차 접종 부위가 아닌 부위에선 탈색화가 보이지 않았으며, 탈색된 피부 병변부의 털에서도 탈색화가 일어나지 않았다.
따라서, 본 발명에 따른 탈색된 병변부의 피부는 흰색으로 탈색되어 있고, 털은 검정색으로 정상인 것을 특징으로 한다.
아울러, 탈색된 병변 부위의 표피 멜라닌 세포는 파괴된 반면, 모낭에 존재하는 멜라닌 세포(hair follicle melanocytes)는 정상적임을 확인할 수 있었다.
본 발명에서, 상기 접종 부위는 주사된 점 반경 2.5~3.5cm를 의미하며, 본 발명의 상기 백반증 마우스 모델은 기존의 모델보다 실제 사람의 백반증에 보다 더 유사한 현상을 보이고 있다.
본 발명에서, 멜라닌 세포에 대한 자가면역 CD8 T 세포의 빈도(frequency)와 병변의 정도가 양적 상관관계를 보인다는 것은 이미 백반증 환자를 이용한 실험에서는 확인되었지만, 마우스 모델에서 재현된 것은 처음이라고 할 수 있다.
본 발명에 따른 백반증 마우스 모델은 자가반응 억제 또는 재색화(repigmentation)를 유도하기 위한 치료제 개발에 이용될 수 있다.
따라서, 본 발명은 또 다른 관점에서, 상기 백반증 마우스모델을 이용한 백반증 치료제의 스크리닝 방법에 관한 것이다.
평가 대상이 되는 약제는 백반증 마우스 모델에 국소적으로 투여된다. 그러나, 약제의 스크리닝에 투여 경로는 특별히 제한되지 않는다. 비경구적 및 경구적으로 투여되는 약제도 스크리닝할 수 있다. 약제의 투여량은 약제의 성질, 투여 대상의 종류, 연령이나 체중 등의 조건을 기초로 종합적으로 판단하여, 최적의 양을 적절하게 결정해야 하며 특별히 한정되지 않는다.
투여 시기나 투여 회수 등의 투여 조건은 약제의 성질, 시험 및 평가 목적 등에 따라 적절하게 최적이 되도록 설정하면 되며 특별히 제한되지 않는다. 예컨대, 투여 시기에 대해서는 모델 동물 제작 직후부터 30분 마다 수회 투여한 후, 그 다음 1시간 마다 수회 투여하고, 그때마다 증상의 변화를 관찰, 평가하는 방법이 많이 이용된다. 투여 회수에 대해서는 약제의 성질에 따라 다르고, 1회 이상 수회가 될 수도 있다.
본 발명의 모델동물을 이용한 피험 약제의 스크리닝 방법은 원하는 목적을 달성시키는 방법이면 어떠한 방법을 이용할 수도 있다. 예컨대, 통상적인 방법에 따라 현미경을 사용하여 탈색화된 병변 피부 표면의 조직을 관찰하는 방법으로 평가할 수 있다. 예컨대, transmission electron microscope(TEM), Hematoxylin과 Eosin 조직염색, 외과 현미경(surgical microscope) 및 수술 현미경을 사용할 수 있다. 상기 현미경을 사용하면 약제 효과를 수치화하여 정량적으로 파악할 수 있다.
통상 피험 약제 투여 종료 후에 탈색화된 상피 손상 부위의 면적을 측정하고, 그것을 피험 약제 비투여군 또는 피험 약제 투여 전의 탈색화된 손상 부위의 면적과 비교하는 방법을 이용하여 약제 효과를 정량화 할 수 있다. 또한, 본 발명에 의하면 상기와 같이 면적을 계측하는 것 이외에도, ① 약제 투여 회수를 일정하게 하여 치료까지의 시간을 측정하거나, ② 치유될 때까지 피험 약제를 일정 간격으로 투여한 회수를 구하는 등과 같은 방법에 의해서도 피험 약제의 효능을 평가할 수 있다.
따라서, 본 발명에 따른 다음 단계를 포함하는 백반증 치료제의 스크리닝 방법: (a) 백반증 마우스 모델에 후보물질을 처리하여 탈색된 병변부의 피부 및 털색의 변화를 확인하는 단계; (b) 대조군에 비하여 탈색된 병변부의 피부 및 털색의 변화가 정상과 유사하게 향상되었을 경우 해당 후보물질을 백반증 치료제로 선택하는 단계를 특징으로 할 수 있다.
아울러, 백반증 치료에 사용되는 제마시스(Prednicarbate) 및 아반텐(Prednisolone aceponate, Advantan)와 같은 스테로이드제제, 프로토픽(tacrolimus) 및 엘리델(Elidel; pimecrolimus)과 같은 비스테로이드제 및 psoralen계 PUVA 등과 동등 이상의 효과를 보인 경우, 백반증 치료 후보물질으로 선택할 수 있을 것이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예
1: 백반증 마우스 모델 제작
TRP2-180 펩타이드(서열번호 1 : SVYDFFVWL, Peptron, Daejeon, Korea) 50μg, LPS (lipopolysaccharide, Invivogen, San Diego, CA) 5μg, 및 CpG ODN 1826 (CpG ODN oligodeoxynucleotide 1826, Genotech, Daejeon, korea) 5μg을 PBS(phosphate-buffered solution) 50㎕에 녹인 혼합용액을 C57BL/6 마우스(수컷, 4~5주령)의 발바닥에 7일 간격으로 각각 2회 피하주사를 수행하고 7일 후, 동일한 혼합용액을 마우스의 꼬리에 7일 간격으로 각각 2회 피내주사 하여 백반증 마우스 모델을 제작하였다 (도 1a).
비교예
1: 대조군 마우스 모델 제작
대조군으로 사용하기 위하여 TRP2-180 펩타이드 대신 멜라닌 세포와 관련 없는 SIINFEKL 펩타이드(Peptron, Daejeon, Korea) 50μg, LPS (lipopolysaccharide, Invivogen, San Diego, CA) 5μg, 및 CpG ODN 1826 (CpG oligodeoxynucleotide 1826, Genotech, Daejeon, korea) 5μg을 PBS(phosphate-buffered solution) 50㎕에 녹인 혼합용액을 실시예 1과 동일한 방법으로 C57BL/6 마우스(수컷, 4~5주령)에 접종하여 마우스 모델을 제작하였다.
실험예
1: 백반증 마우스 모델의 유발 병변의 확진
A. 육안적 검사
실시예 1에서 제작된 백반증 마우스 모델, 비교예 1에서 제작된 마우스 모델 및 미처리 마우스의 꼬리를 육안으로 검사한 결과, 도 1(b), (c)에 나타난 바와 같이, 마지막 접종 후, 5주째에 꼬리에 탈색된 병변이 유발되었다.
그러나, 비교예 1에서 제작된 마우스 모델(SIINFEKL)은 꼬리에 염증이 발생하였을 뿐, 탈색된 병변은 유발되지 않았고, 미접종 마우스(non-immunized)의 꼬리에는 아무런 변화가 없었다.
B. 조직학적 검사
조직학적 검사를 위하여, 실시예 1에서 제작된 TRP2-180 펩타이드 접종군, 대조군(SIINFEKL) 및 미접종 마우스(non-immunized)의 꼬리를 동결 절편하여 추가적인 염색 없이 현미경적 검사를 수행하였다. 그 결과, 도 1(d)에 나타난 바와 같이, TRP2-180 펩타이드 접종군에서는 병변의 경계 부위를 경계로 멜라닌 분포에 차이가 있는 것으로 확인되었으나, 대조군(SIINFEKL) 및 미접종 마우스(non-immunized)는 전체적으로 균일한 분포를 보였다. 아울러, TRP-2 단백질에 특이적으로 결합하는 항체(rabbit polyclonal; Abcam, Cambrige, UK)를 이용하여 IHC (immunohistochemistry) 염색을 한 후, 현미경으로 관찰하였다. 그 결과 도 1(e)에 나타난 바와 같이, 실시예 1에서 제작된 TRP2-180 펩타이드 접종군은 병변의 경계 부위를 경계로 검은색의 멜라닌 세포 분포에 차이가 있는 것으로 확인되었으나, 대조군(SIINFEKL) 및 미접종 마우스(non-immunized)는 전체적으로 균일한 분포를 보였다.
실험예
2: 꼬리 표면의
털색
및 모낭의 멜라닌 세포 확인
실시예 1에서 제작된 백반증 마우스 모델 꼬리털을 육안으로 검사한 결과, 도 2(a)에 나타난 바와 같이, 실시예 1에서 제작된 백반증 마우스 모델(TRP2-180 펩타이드 접종군)은 마지막 접종 후, 5개월째에도 탈색된 병변의 털이 탈색되지 않을 것을 확인할 수 있었다.
아울러, TRP-2 항체(rabbit polyclonal; Abcam, Cambrige, UK)를 이용하여 IHC(immunohistochemistry)를 한 후, 현미경으로 관찰하였다. 그 결과, 도 2(b)에 나타난 바와 같이, 탈색된 병변 부위의 표피 멜라닌 세포는 파괴된 반면, 모낭에 존재하는 멜라닌 세포(hair follicle melanocytes)는 정상적임을 확인할 수 있었다 (화살표).
실험예
3: 백반증 증상의 경도와
TRP2
-180-
specific
CD8
+
T 세포 반응의 상관관계
백반증 증상의 경도와 TRP2-180-specific CD8+T 세포 반응과의 상관관계를 확인하기 위하여, TRP2-180 펩타이드 접종군의 꼬리의 전체 면적에서 탈색된 병변부의 면적을 ImageJ program (National Institutes of Health, Bethesda, Md)을 이용하여, 퍼센트로 계산하여 백반증 증상의 경도를 측정하였고, 또한, TRP2-180-specific CD8+ T 세포 반응은 비장세포(Splenocytes)를 이용하여, IFN-γ, TNF-α, 및 CD107a(cytotoxic degranulation marker)에 대한 염색한 다음, 유세포분석법(flow cytometric analysis)으로 측정하였다.
그 결과, 도 3(a), (b), (c)에 나타난 바와 같이, IFN-γ, TNF-α, 및 CD107a에 대한 TRP2-180-specific CD8+ T 세포의 빈도(frequency)가 높을수록 질환의 정도가 심해지는 것으로 확인되었으며, 통계적으로 탈색된 손상 부위의 상대적 정도와 양적 상관관계가 유의하게 있음을 확인하였다.
이 결과는 TRP2-180-specific CD8+ T 세포 반응이 직접적으로 병변의 유발과 관련되어 있음을 나타낸다. 따라서 본 발명에 따른 백반증 모델은 TRP2-180-specific CD8+ T 세포를 타겟으로 하는 치료제 스크리닝에 사용할 수 있다.
멜라닌 세포에 대한 자가면역 CD8 T 세포의 빈도(frequency)와 병변의 정도가 양적 상관관계를 보인다는 것은 이미 백반증 환자를 이용한 실험에서는 확인되었지만, 마우스 모델에서 재현된 것은 처음이라고 할 수 있다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
<110> Korea Advanced Institute of Science and Technology(KAIST)
<120> Mouse Model for Vitiligo and Method for Preparing the Same
<130> P12-B159
<160> 1
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 9
<212> PRT
<213> TRP2-180
<400> 1
Ser Val Tyr Asp Phe Phe Val Trp Leu
1 5
Claims (12)
- 다음 단계를 포함하는 백반증 마우스 모델의 제작방법:
(a) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 9~20개의 아미노산으로 구성되는 펩타이드와 보조제 (adjuvant)의 혼합용액을 마우스의 발바닥에 1차 접종하는 단계; 및
(b) 상기 마우스에 상기 혼합용액을 상기 마우스의 착색된 피부에 2차 접종하는 단계.
- 삭제
- 청구항 3은(는) 설정등록료 납부시 포기되었습니다.제1항에 있어서, 상기 보조제(adjuvant)는 LPS(lipopolysaccharide), CpG ODN(CpG oligodeoxynucleotide), 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 (a) 단계는 상기 혼합용액을 5~9일 간격으로 2회에 걸쳐 접종하는 것을 특징으로 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 상기 혼합용액을 5~9일 간격으로 2회에 걸쳐 접종하는 것을 특징으로 방법.
- 삭제
- 제1항에 있어서, 상기 마우스는 야생형의 C57BL/6인 것을 특징으로 하는 방법.
- 제1항, 제3항 내지 제5항, 제7항 중의 어느 한 항의 방법에 의해 제작되고, 2차 접종 부위에 탈색된 피부 병변이 유발되고, 2차 접종 부위가 아닌 부위에선 탈색화가 보이지 않으며, 탈색된 피부 병변부의 털에서도 탈색화가 일어나지 않은 특성을 가지는 백반증 마우스 모델.
- 제8항에 있어서, 탈색된 병변부의 피부는 흰색으로 탈색되어 있고, 털은 검정색으로 정상인 특성을 가지는 백반증 마우스 모델.
- 제8항에 있어서, 탈색된 병변부의 표피 멜라닌 세포는 파괴되어 있고, 탈색된 병변부의 모낭에 존재하는 멜라닌 세포(hair follicle melanocytes)는 정상인 특성을 가지는 백반증 마우스 모델.
- 제8항의 백반증 마우스 모델을 이용하는 것을 특징으로 하는 백반증 치료제 스크리닝 방법.
- 제11항에 있어서, 다음 단계를 포함하는 백반증 치료제의 스크리닝 방법: (a) 백반증 마우스 모델에 후보물질을 처리하여 탈색된 병변부의 피부 및 털색의 변화를 확인하는 단계; (b) 대조군에 비하여 탈색된 병변부의 피부 및 털색의 변화가 살색 및 검정색으로 정상과 유사하게 향상되었을 경우 해당 후보물질을 백반증 치료제로 선택하는 단계.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020130038193A KR101615598B1 (ko) | 2013-04-08 | 2013-04-08 | 백반증 마우스 모델 및 그 제작방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020130038193A KR101615598B1 (ko) | 2013-04-08 | 2013-04-08 | 백반증 마우스 모델 및 그 제작방법 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20140121669A KR20140121669A (ko) | 2014-10-16 |
| KR101615598B1 true KR101615598B1 (ko) | 2016-05-12 |
Family
ID=51993103
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020130038193A KR101615598B1 (ko) | 2013-04-08 | 2013-04-08 | 백반증 마우스 모델 및 그 제작방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101615598B1 (ko) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106868044A (zh) * | 2017-02-15 | 2017-06-20 | 扬州大学 | 一种转基因动物毛色报告基因表达盒、表达载体及应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101144563B1 (ko) * | 2010-04-30 | 2012-05-11 | 가톨릭대학교 산학협력단 | 관절염 마우스 동물모델 및 이의 제조방법 |
-
2013
- 2013-04-08 KR KR1020130038193A patent/KR101615598B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101144563B1 (ko) * | 2010-04-30 | 2012-05-11 | 가톨릭대학교 산학협력단 | 관절염 마우스 동물모델 및 이의 제조방법 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 논문 1 (J Invest Dermatol 124;144-150, 2005)* |
| 논문 2 (J Invest Dermatol 87;299-304, 1986) |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20140121669A (ko) | 2014-10-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Cao et al. | The contributing role of CD14 in toll-like receptor 4 dependent neuropathic pain | |
| Maruyama et al. | Nociceptors boost the resolution of fungal osteoinflammation via the TRP channel-CGRP-Jdp2 axis | |
| Harnett | Secretory products of helminth parasites as immunomodulators | |
| Bachstetter et al. | Fractalkine and CX3CR1 regulate hippocampal neurogenesis in adult and aged rats | |
| Jongwutiwes et al. | First outbreak of human trichinellosis caused by Trichinella pseudospiralis | |
| Giorgi et al. | Analgesic effect evoked by low molecular weight substances extracted from Crotalus durissus terrificus venom | |
| Zhou et al. | Oroxylin A inhibits colitis by inactivating NLRP3 inflammasome | |
| Song et al. | Attenuation effect of spinal manipulation on neuropathic and postoperative pain through activating endogenous anti-inflammatory cytokine interleukin 10 in rat spinal cord | |
| Yin et al. | Intrathecal injection of anti-CX3CR1 neutralizing antibody delayed and attenuated pain facilitation in rat tibial bone cancer pain model | |
| Powell et al. | Endoneurial fluid pressure in Wallerian degeneration | |
| CN109152815A (zh) | 用于癌症免疫治疗的具有胸苷激酶缺失和具有或不具有人flt3l或gm-csf表达的复制型减毒痘苗病毒 | |
| Schultheis et al. | Delineating the cellular mechanisms associated with skin electroporation | |
| He et al. | The promising role of chemokines in vitiligo: from oxidative stress to the autoimmune response | |
| US20210024599A1 (en) | MUTANT HSP70i TO PREVENT AUTOIMMUNE DISEASE | |
| Wang et al. | Inhibition of cytokine response to TLR stimulation and alleviation of collagen‐induced arthritis in mice by Schistosoma japonicum peptide SJMHE 1 | |
| Miller et al. | Severe and prolonged inflammatory response to localized cowpox virus infection in footpads of C5-deficient mice: investigation of the role of host complement in poxvirus pathogenesis | |
| Odoj et al. | In vivo mechanisms of cortical network dysfunction induced by systemic inflammation | |
| KR101615598B1 (ko) | 백반증 마우스 모델 및 그 제작방법 | |
| CN108042791A (zh) | 小分子多肽kp-1在制备治疗慢性肾脏病的药物中的用途 | |
| Li et al. | Morphine tolerance and transcription factor expression in mouse spinal cord tissue | |
| Nones et al. | Descending facilitatory pain pathways mediate ongoing pain and tactile hypersensitivity in a rat model of trigeminal neuropathic pain | |
| US7388124B2 (en) | Non-traumatic model for neurogenic pain | |
| Zhang et al. | Glatiramer acetate ameliorates experimental autoimmune neuritis | |
| KR101906577B1 (ko) | 척수 내 성상세포의 광유전학적 자극을 통한 통증 유발 방법 및 이를 이용한 통증 예방 또는 치료제의 스크리닝 방법 | |
| McDaniel et al. | Initiation of type 2 immunity at barrier surfaces |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190402 Year of fee payment: 4 |