KR101596747B1 - Method for manufacturing fermented alcoholic drink with reduced nuruk - Google Patents

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Abstract

본 발명은 누룩취가 저감된 발효주의 제조방법에 관한 것으로, 전분질 원료와 RH(Rhizopus japonicus 속)와 AS(Aspergillus oryzae 속)로 구성되는 누룩을 사용하여 발효주를 제조하는 전통 발효주의 제조방법에 있어서, RH(Rhizopus japonicus 속) 대체효소로 수미자임(Sumyzyme)을 사용하는 것을 특징으로 한다.
본 발명을 통하여 선정한 당화효소가 전통 곡자나 개량한 누룩에 비해 누룩취가 저감된 것을 확인 할 수 있었으며, 관능평가 결과상에서 타 시험군에 비해 10% 이상 누룩취를 저감 시킬 수 있다. 선정한 당화효소는 안전한 쌀증류주(Blending Base) 제조 기술 개발에 사용하면 누룩취에 거부감을 느끼는 내·외국인의 기호에 맞는 최종 제품을 생산할 수 있다.
색인어
증류주, 누룩, 누룩취, 수미자임
The present invention relates to a method for producing a fermented bean with reduced nurukage, which comprises mixing a starch raw material, RH ( Rhizopus japonicus genus) and AS ( Aspergillus oryzae Wherein the RH ( Rhizopus ( Rhizopus ) strain) japonicus ) is characterized by the use of Sumyzyme as an alternative enzyme.
The saccharogenic enzyme selected according to the present invention was found to be reduced in nuruk extract compared with the conventional nuruk or modified nuruk, and the sensory evaluation result showed that the nuruk can be reduced by 10% or more as compared with the other test groups. The selected saccharification enzymes can be used to develop safe rice distillation (Blending Base) manufacturing technology to produce final products that meet the preferences of domestic and foreigners who feel resistance to the nutrients.
Index
Distilled liquor, yeast, Nuruko, Sumizome

Description

누룩취가 저감된 발효주의 제조방법 {Method for manufacturing fermented alcoholic drink with reduced nuruk} FIELD OF THE INVENTION [0001] The present invention relates to a method for producing fermented beverages,

본 발명은 누룩취가 저감된 발효주의 제조방법에 관한 것으로, 상세하기로는 전통곡주에 비하여 10% 이상 누룩취가 저감된 발효주의 제조방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a method for producing a fermented bean with reduced nurukage, and more particularly, to a method for producing a fermented bean having reduced nurukurin content by 10% or more as compared to a traditional nutritional beer.

우리나라의 발효주는 기본적으로 당화효소로 누룩을 이용하고 있다. 누룩은 천연발효제로서 술의 원료에 들어 있는 전분을 당화시키거나 단백질이나 지방을 분해하는 누룩곰팡이효소를 함유하고 있어 술에 다양한 맛을 제공해 주기도 하지만 누룩으로 빚은 발효주에서 가장 문제시되는 누룩취가 발생하는 단점이 있다. 누룩취는 탁주 본연의 맛으로 인식하는 경향도 있으나, 다양한 연령층이 선호할 수 있는 대중적인 제품으로 호응받고 전통주의 세계화를 위해서는 발효주에서 가급적 누룩취를 최소화하는 것이 필요하다. In Korea, fermented liquor basically uses yeast as a saccharifying enzyme. Nuruk is a natural fermentation agent, which contains various enzymes such as starch contained in raw materials of sake, or nuruk fungus enzyme that decomposes proteins and fats, and gives various flavors to alcohol. However, yeast is the most problematic in fermented soybeans There are disadvantages. Although there is a tendency to perceive Nuruko as the original flavor of Takju, it is necessary to minimize the Nuruku as much as possible in the fermented beverage for the globalization of the traditional wastewater in response to the popular products preferred by various age groups.

누룩취를 감소시키기 위한 종래 기술로는 한국 특허 10-0899536호를 들 수 있다. 이 기술은 활성탄과 녹차잎을 이용하여 누룩취를 저감시키고자 하였다. 그러나 제조방법의 복잡성에 비하여 누룩취 저감효과는 미미하였다.
Korean Patent No. 10-0899536 is known as a conventional technique for reducing nurture. This technique was to reduce the yeast odor using activated carbon and green tea leaves. However, compared to the complexity of the manufacturing method, the effect of reducing the nuruk was insignificant.

본 발명은 전통곡주에 비하여 누룩취가 10% 이상 저감된 발효주의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
It is an object of the present invention to provide a method for producing a fermented beverage having a reduced nurukwha of 10% or more as compared to a traditional curd.

본 발명은 전분질 원료와 RH(Rhizopus japonicus 속)와 AS(Aspergillus oryzae 속)로 구성되는 누룩을 사용하여 발효주를 제조하는 전통 발효주의 제조방법에 있어서, RH(Rhizopus japonicus 속) 대체효소로 수미자임(Sumyzyme)을 사용하는 것을 특징으로 한다.
The present invention relates to a process for the preparation of starch feedstocks and RH ( Rhizopus japonicus ) and AS ( Aspergillus oryzae Wherein the RH ( Rhizopus ( Rhizopus ) strain) japonicus ) is characterized by the use of Sumyzyme as an alternative enzyme.

본 발명을 통하여 선정한 당화효소가 전통 곡자나 개량한 누룩에 비해 누룩취가 저감된 것을 확인 할 수 있었으며, 관능평가 결과상에서 타 시험군에 비해 10% 이상 누룩취를 저감 시킬 수 있다. 선정한 당화효소는 안전한 쌀증류주(Blending Base) 제조 기술 개발에 사용하면 누룩취에 거부감을 느끼는 내·외국인의 기호에 맞는 최종 제품을 생산할 수 있다.
The saccharogenic enzyme selected according to the present invention was found to be reduced in nuruk extract compared with the conventional nuruk or modified nuruk, and the sensory evaluation result showed that the nuruk can be reduced by 10% or more as compared with the other test groups. The selected saccharification enzymes can be used to develop safe rice distillation (Blending Base) manufacturing technology to produce final products that meet the preferences of domestic and foreigners who feel resistance to the nutrients.

도1은 각 효소별 당화산물 (24hr 경과) 그래프이고,
도2는 누룩취 저감을 위한 효소 선발의 진행도이고,
도3은 RH 대체효소 Sumyzyme 첨가량별 발효경과(pH) 그래프이고,
도4는 RH 대체효소 Sumyzyme 첨가량별 발효경과(산도) 그래프이고,
도5는 RH 대체효소 Sumyzyme 첨가량별 발효경과(알콜(단위: v/v%)) 그래프이고,
도6은 RH 대체효소 Sumyzyme 첨가량별 발효경과(당도) 그래프이고,
도7은 RH 대체효소 Sumyzyme 첨가량별 발효경과(비중) 그래프이고,
도8은 AS 대체효소 Mycolase LV 첨가량별 발효경과(pH) 그래프이고,
도9는 AS 대체효소 Mycolase LV 첨가량별 발효경과(산도) 그래프이고,
도10은 AS 대체효소 Mycolase LV 첨가량별 발효경과(알콜(단위: v/v%)) 그래프이고,
도11은 AS 대체효소 Mycolase LV 첨가량별 발효경과(당도) 그래프이고,
도12는 AS 대체효소 Mycolase LV 첨가량별 발효경과(비중) 그래프이고,
도13은 RH 대체효소별 발효경과(pH) 그래프이고,
도14는 RH 대체효소별 발효경과(산도) 그래프이고,
도15는 RH 대체효소별 발효경과(알콜(단위: v/v%)) 그래프이고,
도16은 RH 대체효소별 발효경과(당도) 그래프이고,
도17은 RH 대체효소별 발효경과(비중) 그래프이고,
도18은 시료의 누룩취 강도를 나타낸 그래프이다.
FIG. 1 is a graph showing a glycation product (elapsed time of 24 hours) for each enzyme,
Fig. 2 is a graph showing the progress of enzyme selection for reducing nuruk,
FIG. 3 is a graph showing the fermentation progress (pH) by the addition amount of RH substitute enzyme sumyzyme,
FIG. 4 is a graph showing the fermentation progress (pH) of the RH substitute enzyme sumyzyme added,
FIG. 5 is a graph showing the elapsed fermentation time (alcohol (unit: v / v%)) according to the amount of RH substitute enzyme sumyzyme added,
6 is a graph showing the fermentation progress (sugar content) according to the addition amount of RH substitute enzyme sumyzyme,
FIG. 7 is a graph showing the elapsed time (specific gravity) of fermentation by the addition amount of RH substitute enzyme sumyzyme,
8 is a graph showing the fermentation progress (pH) by the addition amount of the AS substitute enzyme Mycolase LV,
FIG. 9 is a graph showing the fermentation progress (acidity) by the addition amount of the AS substitute enzyme Mycolase LV,
FIG. 10 is a graph showing the fermentation progress (alcohol (unit: v / v%)) graph by the amount of AS substitute enzyme Mycolase LV,
11 is a graph showing the fermentation progress (sugar content) by the addition amount of the AS substitute enzyme Mycolase LV,
12 is a graph showing the fermentation progress (specific gravity) of the AS substitute enzyme Mycolase LV added amount,
FIG. 13 is a graph showing the pH of the fermentation process (pH)
FIG. 14 is a graph showing the fermentation progress (acidity) per RH substitute enzyme,
FIG. 15 is a graph showing the fermentation progress (alcohol (unit: v / v%))
FIG. 16 is a graph showing the fermentation progress (sugar content) per RH substitute enzyme,
FIG. 17 is a graph showing the elapsed time (specific gravity) of fermentation by RH replacement enzyme,
18 is a graph showing the bursting strength of the sample.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.

1) 누룩취 저감 당화효소 선발 1) Selection of saccharification enzyme saccharification

현재 발효를 위해 사용하고 있는 누룩은 주로 2가지로 구성된다. 전통누룩에서 균주를 분리하여, 발효 시 산을 생성시키면서 고산도 내성균의 적응력 향상을 위한 순양법을 적용시키고 당화력이 높은 우량 균주만을 분리시켜 배양한 RH(Rhizopus japonicus 속)와 AS(Aspergillus oryzae 속)가 현재 주로 사용하고 있는 당화효소이다. 본 실험에 사용할 당화효소는 주로 사용하고 있는 당화효소 외에 식품에 사용가능하며 발효에 사용되고 분말 혹은 액상의 정제효소 형태로 제품최적 활성온도가 저온(70℃)인 것을 선발하였다(표1).Currently, the yeast that is used for fermentation consists of two kinds. The strains were isolated from the traditional yeast, and the cultivation method was applied to improve the adaptability of high acid tolerant bacteria while producing acid during fermentation. RH ( Rhizopus japonicus ) and AS ( Aspergillus oryzae Is a saccharide enzyme that is currently used mainly. The saccharification enzymes used in this experiment were selected for fermentation in addition to the commonly used saccharogenic enzymes, and the optimum activity temperature of the product was 70 [deg.] C in the form of powdered or liquid purified enzyme (Table 1).

Figure 112014017034464-pat00001
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2) 당화효소의 당화력 측정 2) Measurement of glycation capacity of glycosylation enzyme

RH나 AS 등의 전통누룩균주가 아닌 누룩취가 나지 않는 정제효소로 대체 시험하기 위해서는 사용할 당화효소의 당화력을 측정하고 그에 따른 효소 반응 산물 분석을 통하여 최적의 효소제를 선발하고자 한다. 효소의 반응에 영향을 줄 수 있는 온도 및 pH 등의 조건과 효소 활성을 동일하게 맞추어 효소반응실험을 수행하였다. 각 효소들의 활성은 환원당 측정 방법인 dinitrosalicylic acid (DNS) method를 통하여 8가지 효소들의 활성을 같게 하였다.
In order to perform an alternative test using a non-nuruk-free refinement enzyme, such as RH or AS, which is not a traditional yeast strain, it is necessary to determine the glycosylation activity of the glycosylase to be used and to select the optimal enzyme enzyme through analysis of the enzyme reaction product. Enzyme reaction experiments were carried out by adjusting the enzyme activity and the conditions such as temperature and pH that can affect the enzyme reaction. The activity of each enzyme was determined by dinitrosalicylic acid (DNS) method, which is a method of reducing sugar.

<실험방법>  <Experimental Method>

쌀 분말 1 g 과 증류수 8 ㎖ 를 혼합한 후 효소 1 ㎖ 를 각각 첨가하여 기질-효소반응을 23℃, 10분간 incubator에서 실시한 후 1 M NaOH 1 ㎖ 를 첨가하여 반응을 중지하였다. 3600 rpm, 4℃, 5분간 원심분리를 실시하여 상등액 100 ㎕ 를 DNS시약 300 ㎕ 에 가하여 끊는 물에 5분간 반응시킨 후 냉각시켰다. 흡광도를 측정하기 위하여 13000 rpm, 3분간 원심분리를 실시하고 상등액 300 ㎕ 를 96 well plate 에 분주 후, infinite 200 pro (TECAN, Mannedorf, Switzerland) 를 이용하여 550 nm에서 흡광도를 측정하였다. Reducing sugar의 함량을 glucose 을 기준으로 standard curve 를 이용하여 식에 대입하여 구한 후 이 값을 토대로 1 unit은 1분 동안 가용성전분을 분해하여 1 μmole 의 glucose 를 생성하는 효소의 양이라 설정하였다. 정확한 결과를 위하여 반응을 3회 실시한 후, 측정값의 평균값을 추산하였고 오차범위는 ± 10%로 설정하였다.
1 g of rice powder and 8 ml of distilled water were mixed and 1 ml of enzyme was added. Substrate-enzyme reaction was carried out in an incubator at 23 ° C for 10 minutes and 1 ml of 1 M NaOH was added to stop the reaction. After centrifugation at 3600 rpm and 4 ° C for 5 minutes, 100 μl of the supernatant was added to 300 μl of the DNS reagent, which was reacted for 5 minutes with water, which was then chilled. The absorbance was measured by centrifugation at 13000 rpm for 3 min. The supernatant (300 μl) was dispensed into a 96-well plate and absorbance was measured at 550 nm using an infinite 200 pro (TECAN, Mannedorf, Switzerland). The amount of reducing sugar was determined by substituting the standard curve for glucose and the amount of enzyme producing 1 μmole of glucose by dissolving the soluble starch for 1 minute based on this value. For accurate results, the reaction was performed three times, and the average value of the measured values was estimated. The error range was set to ± 10%.

<결과 및 고찰><Results and Discussion>

각 효소들이 가지고 있는 고유의 당화력과 α-amylase 활성이 다르기 때문에 (표 2) 동일한 활성 조건을 맞추기 위해 효소들이 생성하는 환원당의 농도는 0.05%로, 이때의 효소 unit 은 2.8로 맞추었다.  Since the intrinsic glycation capacity and α-amylase activity of each enzyme are different (Table 2), the concentration of reducing sugar produced by the enzymes is 0.05%, and the enzyme unit is 2.8.

Figure 112014017034464-pat00002
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Figure 112014017034464-pat00003

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3) 효소별 당화산물 측정 3) Measurement of glycation products by enzyme

효소에 따라 원료별 동일한 당화력을 적용하여 각각의 효소가 생성하는 당화 산물을 분석하여 효소에 따른 당화산물을 비교하였다.
The glycation products produced by each enzyme were analyzed by applying the same saccharifying power of each raw material according to the enzyme, and the glycated products according to the enzyme were compared.

<실험방법> <Experimental Method>

쌀 분말 1 g 과 증류수 8 ㎖ 를 혼합한 후 효소 1 ㎖ 를 각각 첨가하여 기질-효소반응을 23℃, 24시간 동안 incubator에서 실시하였다. 그 후 13000 rpm, 1분간 원심분리를 실시하여 상등액을 EP tube에 분주한 후 10분간 끓여주어 반응을 중지시켰다. 이를 생쌀전분 분해산물 분석에 사용하였다. 분해산물 분석을 확인하기 위해 HPAEC (High Performance Anion Exchange Chromatography) 을 이용하였다. Pulsed amperometric detector (PAD) 가 연결된 HPAEC Bio-LC (ICS-5000, Dionex, USA) 기기를 사용하였으며 guard column (4×50 mm), CarboPac PA1 column (4×250 mm, Dionex, USA) 100 mM NaOH 를 A 용매로, 500 mM Sodium acetate 를 B 용매로 하여 농도구배를 주어 1 ㎖/min 의 유속으로 55분 동안 분석하였다.
1 g of rice powder and 8 ml of distilled water were mixed and 1 ml of enzyme was added. Substrate-enzyme reaction was carried out at 23 ° C for 24 hours in an incubator. After centrifugation at 13000 rpm for 1 minute, the supernatant was dispensed into the EP tube and boiled for 10 minutes to stop the reaction. This was used to analyze uncooked starch decomposition products. High Performance Anion Exchange Chromatography (HPAEC) was used to identify degradation products. A guard column (4 × 50 mm), a CarboPac PA1 column (4 × 250 mm, Dionex, USA) and a 100 mM NaOH solution were connected to each other using a HPAEC Bio-LC (ICS-5000, Dionex, USA) equipped with a pulsed amperometric detector Was analyzed with a concentration gradient of 500 mM sodium acetate as the B solvent at a flow rate of 1 ml / min for 55 minutes.

<결과 및 고찰> <Results and Discussion>

8개의 효소는 α-amylase , glucoamylase , CGtase, 그리고 transglucosisise 4가지 형태로 이루어져 있다. Sumyzyme은 glucose와 maltose, Spenzyme LT300은 maltoheptaose 까지 생성되며, mycolise LV 는 maltotriose 까지 생성된 것을 HPAEC 를 통해 확인하였고, AS는 glucose가 주산물인 것을 볼 수 있었다. RH와 Biowin AG의 전분 분해산물 결과 두가지 효소 모두 glucose를 생성하는 것을 확인할 수 있었으며 미량의 maltose를 생성하는 것을 볼 수 있었다. Transglucosisise 형태의 효소인 Transglucosisise L “Amano” 의 전분 분해산물 결과 주생성물인 glucose와 미량의 maltose가 생성된 것을 확인할 수 있었다.  Eight enzymes are composed of α-amylase, glucoamylase, CGtase, and transglucosisise. Glucose and maltose were found in the sumyzyme, maltoheptaose in the Spenzyme LT300, and maltotriose in the mycolise LV. HPAEC showed that AS was glucose. Both starch decomposition products of RH and Biowin AG showed that both enzymes produced glucose and produced a trace amount of maltose. Transglucosisise L "Amano", an enzyme of Transglucosisise type, showed that glucose and some maltose were produced.

Transglucosisise의 경우 생성된 glucose를 이용하여 isomaltose , panose , isomaltotriose 등을 생성해야 하지만, 본 효소의 반응 조건인 막걸리발효 조건이 이성화당을 생성할 수 있는, 최적의 조건이 아니므로 이성화당은 생성되지 않았다. 또한 CGtase 인 Toruzyme 의 경우 효소특성인 cyclodextrin 형성을 하지 못하는 것으로 분석 결과 확인되었다(도1 참조).
In the case of transglucosisis, isomaltose, panose and isomaltotriose should be produced by using the generated glucose. However, isomerization sugar is not produced because fermentation conditions of this enzyme, which is the reaction condition, are not optimal conditions for producing isomerized sugar . Also, it was confirmed that Toruzyme, which is a CGtase, can not form an enzyme characteristic cyclodextrin (see FIG. 1).

지금까지 실험에서 각 효소별 당화력과 특성 그리고 당화산물에 대해 측정하였다. 현재 사용하고 있는 당화효소의 대체 선발 대상 조건은 첫째 분류 , 둘째 종, 셋째 당화산물로 선정하였으며 RH와 동일한 분류로는 Sumyzyme과 Biowin AG를 들 수 있으며, 동일한 종은 Sumyzyme, 동일한 당화산물로는 Sumyzyme, Biowin AG, Transglucosidase를 들 수 있으나 조건 선정의 우선 순위 기준으로 Sumyzyme과 Biowin AG를 1차 선발 하였다. AS와 동일한 분류는 Mycolase LV, Spenzyme LT300이며, 동일한 종은 Mycolase LV, 동일한 당화산물은 없다. 따라서 우선 순위에 의해 AS 대체 당화효소로는 Mycolase LV와 Spenzyme LT300을 1차 선발하였다. 이후 진행할 당화효소 선발의 진행도는 도2와 같으며 RH 대체효소 첨가량 시험은 RH와 분류, 종, 당화산물이 동일한 Sumyzyme으로 진행할 것이며, AS의 대체효소 첨가량 시험은 분류와 종이 같은 Mycolse LV로 진행하도록 한다.
So far, the glycation capacity and the glycation end product and glycation end product of each enzyme were measured. The alternative classification of glycated enzymes currently used is selected as first, second and third saccharification products. The same classification as RH is Sumyzyme and Biowin AG. The same species is Sumyzyme, the same saccharification product is Sumyzyme , Biowin AG, and Transglucosidase. However, Sumyzyme and Biowin AG were firstly selected as priority criteria for the selection of conditions. The same classifications as AS are Mycolase LV, Spenzyme LT300, the same species is Mycolase LV, and no glycation products. Therefore, Mycolase LV and Spenzyme LT300 were firstly selected as AS - alternative saccharifying enzymes by priority. The progress of the glycosidase selection proceeding is shown in FIG. 2. The RH substitution enzyme addition test will proceed to the Sumyzyme which is the same as RH, the classification, species and glycation products, and the substitute enzyme addition test of AS is carried out by Mycolse LV .

4) 대체 효소 첨가량 시험 4) Replacement enzyme test

- RH 대체효소 첨가량 시험 - RH replacement enzyme addition test

RH의 대체효소로 1차 선발된 Sumyzyme과 Biowin AG 중 분류, 종, 당화산물이 일치하는 Sumyzyme을 우선으로 RH의 당화력을 대체하여 10% 단위로 첨가하여 발효경과를 확인하고 누룩취를 저감할 수 있는 정제효소의 대체 가능한 최대 첨가량을 확인하고자 한다.
RH, Sumyzyme and Biowin AG were firstly selected as alternative enzymes. Sumyzyme, which corresponds to the classification, species, and glycation products, was added first in 10% increments instead of the glycation ability of RH. To determine the maximum possible substitution of the purified enzyme.

<실험방법> <Experimental Method>

쌀을 정량한 후 깨끗이 수세하여 2시간동안 침지 후 고운체에 받쳐 30분간 물빼기를 해준다. 사용할 효소제 중 침출하여 사용하는 경우에는 그 효소제를 정량하여 효소제의 10배에 해당하는 20~25℃의 물에 교반하여 2시간가량 추출한 후 액을 분리하여 사용한다. 이때 사용된 물은 발효 시 사용할 물에서 덜어 사용한다. 쌀증류주용 발효법은 곡물이 가지고 있는 향미를 증대시키고자 증자발효법을 사용하는 데, 증자발효법에서 물빼기가 완료된 쌀은 121℃, 15분간 증자 후 가열을 종료하고 10분간 뜸을 들인다. 효모(S.I.Lesaffre社, La Parisienne)는 활성을 갖게 하여 30℃까지 냉각시킨 쌀과 효소, 남은 물과 함께 넣어 1단 담금을 완료 한다. 초기 발효온도는 20~25℃로 설정하며 이때 젖산을 사용하여 pH를 3.2~3.5로 맞추어 산패균으로부터 원천적인 차단을 진행한다. 48시간 후 쌀과 물을 1단 담금 첨가량의 2배 양을 넣어주어 2단 담금을 완료 한다. 1단 발효는 효모의 활성과 번식, 그리고 안정화를 위한 공정이며 안정화된 상태에서 2단 담금이 진행되도록 한다. 1일 2회 교반작업을 진행하며 온도가 일정하게 유지되도록 한다. 본 시험에서는 쌀 품종으로 추청을 사용하고 당화효소로 RH와 AS만을 사용한 것을 control로 RH의 당화력을 Sumyzyme의 당화력으로 대체한 것을 10% 단위로 Sum10%, Sum20%, Sum30%, Sum40%, Sum50%, Sum60%, Sum60%, Sum70%, Sum80%, Sum90%, Sum100%로 하여 시험군을 구성한다. 발효경과에 따른 이화학적 분석은 국세청 기술연구소 주류 분석 규정에 근거하여 일반적으로 분석하는 pH, 산도, 알코올, Brix당도, 비중 등을 측정하여 분석하였으며, 각 시험군에 따라 3반복하여 실험하였으며 평균 값 및 표준편차를 확인하였다.
After rice is quantified, it is thoroughly washed, soaked for 2 hours, then supported on a fine sieve and drained for 30 minutes. If the enzyme is leached out of the enzyme to be used, quantitatively measure the enzyme, stir in 20 to 25 ° C water equivalent to 10 times that of the enzyme, and extract it for about 2 hours. At this time, the used water is used to be used in the fermentation water. The fermentation method for rice spirits uses the fermentation method to increase the flavor of the grain. In the case of the fermentation method, the rice which has been drained is heated at 121 ℃ for 15 minutes and then heated for 10 minutes. Yeast (SILESaffre, La Parisienne) is made active and cooled to 30 ℃ with rice, enzymes, and remaining water to complete the first stage of immersion. The initial fermentation temperature is set at 20 ~ 25 ℃, and the pH is adjusted to 3.2 ~ 3.5 using lactic acid, so that the original blocking is carried out from acid bacteria. After 48 hours, add 2 times the amount of rice and water added to the first step to complete the second step. One-stage fermentation is a process for the activation, propagation and stabilization of yeast, and allows the two-stage process to proceed in a stabilized state. The stirring operation is carried out twice a day to keep the temperature constant. In the present study, we used Sumizyme as a saccharification medium, which was obtained by replacing the saccharifying power of Sumyzyme with the saccharification power of RH, , Sum 60%, Sum 60%, Sum 70%, Sum 80%, Sum 90%, Sum 100%. The physicochemical analysis according to the fermentation process was analyzed by analyzing pH, acidity, alcohol, Brix sugar content, specific gravity, etc. which were generally analyzed based on the main analysis regulations of the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology. And standard deviation.

온도와 비중 : 온도계와 비중계(대광 기계제작소, 한국)를 측정 Temperature and specific gravity: Measure the thermometer and the hydrometer (Daekwang Machinery Co., Korea)

산도 : 알칼리 적정법 Acidity: alkali titration method

Brix 당도 : 당도계(ATACO, 일본)로 측정 Brix sugar content: Measured by sugar meter (ATACO, Japan)

알코올 : 증류법으로 주정계와 온도계(이하 대광 기계제작소,한국)를 이용해 측정 Alcohol: Measured by distillation method using an umbrella and thermometer (Daekwang Machinery Co., Korea)

pH : pH미터기(OHAUS pH meter ST3000, 일본)로 측정
pH: Measured with a pH meter (OHAUS pH meter ST3000, Japan)

Figure 112014017034464-pat00004
Figure 112014017034464-pat00004

Figure 112014017034464-pat00005
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<결과 및 고찰> <Results and Discussion>

pH의 경우 1일차, 2일차에서의 상승 후 3일차 감소 4일차부터 증가추세로 이어지는 곡선이 발생한다. Sumyzyme의 대체 첨가량이 높을수록 전체적인 pH가 상승하는 사유는 RH가 발효 시 산을 생성시키면서 고산도 내성균의 적응력 향상을 위한 순양법을 적용시켰기 때문에 pH 감소를 유도했지만 Sumyzyme은 분류와 종이 동일하지만 산 생성 능력이나 고산도 적응력이 RH에 비해 적기 때문으로 사료된다. 각 시험군 별 표준편차가 낮은 것은 초기 산패균의 원천적인 차단에 의해 오염으로 이어지지는 않기 때문으로 여겨지며 각 시험군은 크게 두가지 형태로 분류되는데 control부터 Sumyzyme 30%까지 시험군과 Sumyzyme40%~100%까지의 시험군으로 나뉘어 진다.  In the case of pH, a curve is formed that leads to an increase trend from the 4th day to the 3rd day decrease after the rise at the 1st and 2nd day. The reason why the total pH value increases with the higher amount of substitution of sumyzyme is that the pH is decreased because RH is applied to the cultivation method to improve the adaptability of the high acid tolerant bacteria while producing acid during fermentation. It is considered that the ability and adaptability to high altitude are less than RH. It is considered that the low standard deviation of each test group does not lead to pollution by the original blocking of the early acid bacteria. Each test group is divided into two types: from control to sumyzyme up to 30% test group and sumyzyme from 40% to 100% The test group.

산도의 경우 RH의 첨가량이 높고 Sumyzyme의 첨가량이 낮을수록 산도가 높은 것으로 나타나지며, 표준편차의 경우 전 시험군에서 큰 편차가 발생되지 않으며 이는 산패균의 원천적인 차단에 의한 것으로 사료된다. 또한, 발효경과일이 적을수록 높고 발효경과일이 많을수록 낮아지는 것으로 보아 발효 후반으로 갈수록 안정성을 찾는 것으로 보여 진다. 산도는 1일차와 2일차에서 상승1일후 3일차 2일차에서 상에 의해 급격히 낮아져 완만한 곡선을 형성하며, 최종 산도의 경우 RH의 첨가량이 높을수록 다소 높게 형성이 되는 것을 알 수 있다. 알코올의 경우 전체적인 곡선의 형태는 전 시험군에서 유사하게 형성되나 Sumyzyme의 첨가량이 높을수록 증가 곡선이 다소 느리게 진행되는 것을 볼 수 있다. 최종 알코올 함량에 있어서 Sumyzyme 첨가량이 높을수록 알코올 함량이 낮게 형성되며 이는 산도가 내에서 당화효소의 최적의 온도 차이에 의한 것으로 사료된다. Control의 표준편차는 일자별로 다르지만 전체적으로 0.06~0.2도 (v/v%)가량으로 나타나며, 각 일자별 control의 표준 편차 내에서 알코올이 생성되는 시험군은 Sumyzyme 첨가량이 10%,20%,30%인 시험군으로 관찰된다. 이 세가지 시험군의 최종 알코올 함량은 17.0 v/v% ±0.13 내에 속하며 최종 알코올 수득량이 가장 적은 것은 Sumyzyme 100% 시험군이다. 당도의 경우 첨가량과의 규칙을 형성하지는 못하며 전체적으로 발효경과에 따라 감소하는 추세로 진행이 된다. 직접적인 당의 알코올 전환과는 무관하며 이는 빛의 굴절에 의한 당도 측정이라는 한계로 여겨진다. 전체적인 표준오차는 최대 0.25°Brix까지로 안정적으로 진행되는 것을 볼 수 있다.비중의 경우 알코올 생성곡선과 반비례 형태로 생성되며, 이는 알코올 생성과 당화에 기인하여 반영된 것으로 사료된다. 1일차와 2일차에서 감소 이후 3일차 2단 담금에서의 상승 이후 지속적인 감소추세로 이어지며 간혹 증가, 감소, 평형을 유지하게 되나 그 폭이 낮다. 알코올 함량이 높을수록 비중은 감소하며 Sumyzyme 첨가량이 높을수록 다소 높게 형성됨을 알 수 있다. 9일차 발효 종료 시점에서의 비중의 경우 control과 동일한 수치는 Sumyzyme 10%, 20%, 30% 시험군이며 표준편차 범위 내에 존재한다.전체적으로 발효경과 상에서 산패되거나 산패균이 증식한 형태의 것은 발견되지 않으며 알코올 함량 및 비중 등의 결과로 비추어 RH의 대체 한계 첨가량은 Sumyzyme 30%까지 인 것으로 판단된다. 이후 RH 대체시험은 Sumyzyme 30%와 Biowin AG 30%가 진행하여 발효 적성 및 평가가 진행될 것이다(도3 내지 7 참조).
In the case of acidity, the higher the amount of RH added and the lower the amount of sumyzyme added, the higher the acidity. In the case of standard deviation, no large variation was observed in the whole test group. In addition, the lower the days of fermentation, the higher the fermentation period and the lower the fermentation period, the more stable the fermentation is. The acidity was drastically lowered on day 1 and 2 on day 3 after day 1 and day 3 on day 2, and a gentle curve was formed. In the case of the final acidity, the higher the amount of RH added, the higher the acidity is formed. In the case of alcohol, the shape of the whole curve is similar in all test groups, but the increase curve is slightly slower as the amount of sumyzyme is increased. The higher the amount of sumyzyme added, the lower the alcohol content in the final alcohol content, which is probably due to the optimal temperature difference of glycosylation enzyme in acidity. The standard deviations of the control vary from day to day, but from 0.06 to 0.2 degrees (v / v%) as a whole. In the test group in which alcohol is produced within the standard deviation of each day control, the addition of sumyzyme is 10%, 20% It is observed as a test group. The final alcohol content of these three test groups is within 17.0 v / v% ± 0.13 and the lowest alcohol yield is the sumyzyme 100% test group. In the case of sugar content, it is not possible to form rules for the addition amount, and it is progressed to decrease with the progress of fermentation as a whole. This is independent of direct alcohol conversion of sugar, which is considered to be the limit of sugar determination by light refraction. It can be seen that the overall standard error is stable up to 0.25 ° Brix, which is inversely proportional to the alcohol production curve, which is thought to be due to alcohol production and glycation. After the decline on day 1 and day 2, it continued to decline after the rise on the third day of 2-stage soaking, and it sometimes keeps increasing, decreasing, and equilibrium. The higher the alcohol content, the lower the specific gravity and the higher the amount of sumyzyme added, the higher the level is formed. At the end of the 9th fermentation, the same values as in control are in the standard deviation range of 10%, 20% and 30% of the sumyzyme, and it is not within the standard deviation range. It is considered that the addition limit of RH is up to 30% of Sumyzyme in light of alcohol content and specific gravity. Subsequently, 30% of Sumyzyme and 30% of Biowin AG will proceed in the RH substitution test, and fermentation suitability and evaluation will proceed (refer to FIGS. 3 to 7).

-AS 대체 첨가량 시험 -AS substitute addition test

AS의 대체효소로 1차 선발된 Mycolase LV와 Spenzyme LT300 중 분류와 종이 일치하는 Mycolase LV을 우선으로 AS의 당화력을 대체하여 10% 단위로 첨가하여 발효경과를 확인하고 누룩취를 저감할 수 있는 정제효소의 대체 가능한 최대 첨가량을 확인하고자 한다.
AS Mycolase LV and Spenzyme LT300 were firstly selected as alternative enzymes, and mycolase LV, which matches with the paper, was added first in 10% increments in place of the glycation ability of AS to confirm the fermentation process and to reduce the yeast We want to confirm the maximum possible substitution of the enzyme.

<실험방법> <Experimental Method>

쌀을 정량한 후 깨끗이 수세하여 2시간동안 침지 후 고운체에 받쳐 30분간 물빼기를 해준다. 사용할 효소제 중 침출하여 사용하는 경우에는 그 효소제를 정량하여 효소제의 10배에 해당하는 20~25℃의 물에 교반하여 2시간가량 추출한 후 액을 분리하여 사용한다. 이때 사용된 물은 발효 시 사용할 물에서 덜어 사용한다. 쌀증류주용 발효법은 곡물이 가지고 있는 향미를 증대시키고자 증자발효법을 사용하는 데, 증자발효법에서 물빼기가 완료된 쌀은 121℃, 15분간 증자 후 가열을 죵료하고 10분간 뜸을 들인다. 효모(S.I.Lesaffre社, La Pa>senne)는 활성을 갖게하여 30℃까지 냉각시킨 쌀과 효소, 남은 물과 함께 넣어 1단 담금을 완료한다. 초기 발효온도는 20~25℃로 설정하며 이때 젖산을 사용하여 pH를 3.2로 맞추어 산패균으로부터 원천적인 차단을 진행한다. 48시간 후 쌀과 물을 1단 발효의 2배 양을 넣어주어 물에 2단 담금을 완료한다. 1단 발효는 효모의 활성과 번식, 그리고 안정화를 위한 공정이며 안정화된 상태에서 2단 담금이 진행되도록 한다. 1일 2회 교반작업을 진행하며 온도가 일정하게 유지되도록 한다. 본 시험에서는 쌀품종인 추청을 사용한 발효방법을 사용한 것에 RH와 AS만을 사용한 것을 control로 AS의 당화력을 Mycolase LV의 당화력으로 대체한 것을 10% 단위로 Myc10%, Myc20%, Myc30%, Myc40%, Myc50%, Myc60%, Myc70%, Myc80%, Myc90%, Myc100%로하여 시험군을 구성한다. 발효경과에 따른 이화학적 분석은 국세청 기술연구소 주류 분석 규정에 근거하여 일반적으로 분석하는 pH, 산도, 알코올, Brix당도, 비중 등을 측정하여 분석하였으며, 각 시험군에 따라 3반복하여 실험하였으며 평균 값 및 표준편차를 확인하였다. After rice is quantified, it is thoroughly washed, soaked for 2 hours, then supported on a fine sieve and drained for 30 minutes. If the enzyme is leached out of the enzyme to be used, quantitatively measure the enzyme, stir in 20 to 25 ° C water equivalent to 10 times that of the enzyme, and extract it for about 2 hours. At this time, the used water is used to be used in the fermentation water. The fermentation method for rice spirits uses the steamed fermentation method to increase the flavor of the grain. The steamed rice is heated at 121 ° C for 15 minutes and heated for 10 minutes. The yeast (S.I.Lesaffre, La Pa> senne) is activated, and the rice, the enzyme, and the remaining water cooled to 30 ° C are added together to complete the first stage of immersion. The initial fermentation temperature is set at 20 ~ 25 ℃, and the pH is adjusted to 3.2 using lactic acid. After 48 hours, rice and water are added twice the amount of the first stage fermentation to complete the second stage of immersion in water. One-stage fermentation is a process for the activation, propagation and stabilization of yeast, and allows the two-stage process to proceed in a stabilized state. The stirring operation is carried out twice a day to keep the temperature constant. In this test, the fermentation method using the rice varieties, RH and AS, was used. In the control, the saccharifying power of AS was replaced with the saccharifying power of Mycolase LV. The results were as follows: Myc 10%, Myc 20%, Myc 30%, Myc 40% Myc 50%, Myc 60%, Myc 70%, Myc 80%, Myc 90%, Myc 100%. The physicochemical analysis according to the fermentation process was analyzed by analyzing pH, acidity, alcohol, Brix sugar content, specific gravity, etc. which were generally analyzed based on the main analysis regulations of the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology. And standard deviation.

온도와 비중계 : 온도와 비중계(대광 기계제작소, 한국)를 측정 Temperature and specific gravity: Temperature and specific gravity (Daekwang Machinery Co., Korea)

산도 : 알칼리 적정법 Acidity: alkali titration method

Brix 당도 : 당도계(ATACO, 일본)로 측정 Brix sugar content: Measured by sugar meter (ATACO, Japan)

알코올 : 증류법으로 주정계와 온도계(이하 대광 기계제작소,한국)를 이용해 측정 Alcohol: Measured by distillation method using an umbrella and thermometer (Daekwang Machinery Co., Korea)

pH : pH미터기(OHAUS pH meter ST3000, 일본)로 측정 pH: Measured with a pH meter (OHAUS pH meter ST3000, Japan)

Figure 112014017034464-pat00006
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Figure 112014017034464-pat00007
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<결과 및 고찰> <Results and Discussion>

pH의 경우 Mycolase 첨가량과의 정확한 상관관계가 나타나지 않으나 표준편차 상 0.20이상 발생되는 것이 없이 균일한 패턴을 가지고 있다. 표준편차의 경우 발효 경과 후반 일에서 전반 일에 비해 안정적이며 pH의 패턴은 1일차부터 4일차까지 확연하게 나누어진다. 1일차에서 2일차로 진행 시 pH가 상승하는 시험군은 control과 Mycolase 10~70%까지 첨가한 시험군이며 Mycolase 80%~100%까지는 감소하는 추세이다. 2일차에서 3일차로 진행 시 pH가 감소하는 시험군은 control과 Mycolase 10~20%까지 첨가한 시험군이며 나머지 시험군은 증가하게 되며, Mycolase 80% 이상 첨가한 시험군의 경우 가파르게 상승하게 된다.  In the case of pH, there is no exact correlation with the amount of Mycolase, but it has a uniform pattern without occurrence of more than 0.20 in standard deviation. In the case of the standard deviation, the pH is stable from the second half of the fermentation to the first half, and the pH pattern is clearly divided from the first day to the fourth day. The test group in which the pH increases from the 1st day to the 2nd day is the control group added to the control and Mycolase 10 ~ 70%, and the Mycolase is decreasing from 80% to 100%. The test group in which the pH decreases from the 2nd day to the 3rd day is the test group added with 10 ~ 20% of control and Mycolase, the other test group will increase, and the test group with Mycolase more than 80% .

하지만 각 시험군 별 발효 경과 시 현미경 검경 상에는 별다른 산패균의 형태는 관찰되지 않았으며 이는 원천적인 차단에 기인한 것으로 사료된다. 산도의 경우 전체적인 시험군의 패턴이 유사한 형태로 나타나며 1일차에서 2일차로 발효 경과 시 상승된 후 3일차 감소, 4일차부터 점진적인 증가로 이어진다. Mycolase의 첨가량이 많을수록 발효 후반에 높은 산도를 나타내는 형태를 보이나 정확히 일치하지는 않는다.  However, during the fermentation of each test group, no morphological features were observed on the microscopic specimen. In the case of acidity, the pattern of the whole test group appears in a similar pattern. From the 1st day to the 2nd day, the fermentation time is increased, then the 3rd day is decreased, and the fourth is the gradual increase. The higher the amount of Mycolase added, the higher the acidity in the latter half of fermentation.

하지만 Mycolase의 첨가량이 최종 산도에 영향을 미치는 것은 분명하며 이는 Mycolase LV가 산 생성능력이 AS에 비해 높은 것에 기인하는 것으로 사료된다. 알코올의 경우 전체적인 알코올 곡선이 유사한 형태로 나타나나 Mycolase 첨가량이 높을수록 최종 알코올 함량은 낮은 것으로 나타난다. 각 시험군 별 표준편차는 1도(v/v%)미만으로 안정적으로 나타나며 1일차와 2일차의 각 시험군 별 편차는 4~6일차 편차에 비해 적게 나타난다. 이는 1단 담금 시 효소 투입량이 집중되어 있음에 기인한다. 알코올 생성은 Mycolase 첨가량이 높을수록 control에 비해 더디게 생성되고, control의 표준 편차 범위는 발효 일자별로 0.06~0.20도(v/v%)로 나타나며 이 범위 내에 포함되는 시험군은 없다. 당도의 경우 전체적으로 감소의 형태로 나타나며 초기 발효 경과 일에서만 Mycolase 함량별 차이가 발생한다. 1일차에서 2일차로 진행 시 Mycolase LV 함량이 높을수록 낮은 당도를 유지하나 3일차 이후부터는 함량별 차이 없이 유사한 형태로 나타난다. 표준편차의 경우 각 data별 0.5 °Brix 이상 나타나지 않고 안정적으로 진행되었다. 비중의 경우 알코올과 반비례 형태로 나타나며, Mycolase 함량이 높을수록 비중의 감소가 더디게 진행되는 편이다. 표준편차는 각 Data별 0.01 이상 발생되지 않게 안정적으로 나타났다. 1일차에서 2일차로 진행 시 감소가 되며, 2일차에서 3일차로 진행시 증가, 이후 감소하는 형태로 진행되며, Control과 표준편차 범위 내에 존재하는 구간은 1일차에서 3일차 구간 중 Mycolase 10% 첨가한 시험군 만이 범위 내에 존재하지만 이후 일자에서 범위 내에 존재하지 못하고 차이를 두게 된다(도8 내지 12 참조).  However, it is clear that the amount of Mycolase added affects the final acidity. This is probably due to the fact that Mycolase LV has higher acid - producing ability than AS. The overall alcohol curve is similar for alcohol, but the higher the amount of Mycolase, the lower the final alcohol content. The standard deviation of each test group is stable at less than 1 degree (v / v%). Deviations of each test group on day 1 and day 2 are less than those of day 4 and 6. This is due to the concentration of enzyme input during the first stage of immersion. The higher the amount of Mycolase added, the slower the production of alcohol, and the standard deviation of control is 0.06 ~ 0.20% (v / v%) per fermentation day. In the case of sugar content, it appears as a decrease in the whole, and the difference in Mycolase content occurs only on the day of fermentation. The higher the content of Mycolase LV, the lower sugar content is maintained from day 1 to day 2, but the content is similar from day 3 onwards. In the case of standard deviation, no more than 0.5 ° Brix was observed for each data and it was stable. In the case of specific gravity, it appears in inverse proportion to alcohol. The higher the content of Mycolase, the slower the decrease of gravity progresses. The standard deviation was stable enough not to occur more than 0.01 for each data. In the range of control and standard deviation, the interval between the 1st and 3rd day intervals is 10%, and the interval between 1st and 2nd day is decreased. Only the added test group is within the range but there is no difference within the range on the date (see Figs. 8 to 12).

AS 대체 효소 첨가량 시험 결과 1차 선발한 Mycolase LV의 경우 분류와 종이 같으나 당화산물의 차이로 보아 비발효성 당의 생성이 높아 알코올 생성을 저해시킨 것으로 사료된다. AS의 대체 시험은 분류와 종이 같은 Mycolase LV에서도 나타났듯이 종과 당화산물이 다른 Spenzyme LT300에서도 대체가 기대되지 않는바 대체 시험은 진행하지 않으며 AS 효소는 대체 없이 유지하는 것으로 진행한다.   As a result of the addition test of AS substitution enzyme, the first selection of Mycolase LV was similar to the classification and pseudo - glycosylation products, but the production of non - Substitution tests of AS are not expected to replace Spenzyme LT300, which is different from species and glycation products, as shown in the Mycolase LV of the classification and paper, and the substitution test does not proceed and the AS enzyme proceeds without substitution.

5) 대체 효소 시험 5) Alternative enzyme test

- RH 대체 효소 시험 - RH replacement enzyme test

RH의 대체효소로 1차 선발된 Sumyzyme과 Biowin AG를 RH첨가량 시험의 결과인 한계점 Sumyzyme 30%에 맞추어 Biowin AG 30%로 시험군을 형성하고 control과 비교하여 발효경과를 확인하고 누룩취를 저감시킬 수 있는 RH 대체효소를 최종 선발하고자 한다.
RH, Sumyzyme and Biowin AG, which were firstly selected as alternative enzymes, were set to 30% of the limit value Sumyzyme as a result of the RH addition test, and the test group was formed with 30% of Biowin AG, and the fermentation progress was confirmed by comparison with the control, We will finally select the RH replacement enzyme that can be used.

<실험방법> <Experimental Method>

쌀을 정량한 후 깨끗이 수세하여 2시간동안 침지 후 고운체에 받쳐 30분간 물빼기를 해준다. 사용할 효소제 중 침출하여 사용하는 경우에는 그 효소제를 정량하여 효소제의 10배에 해당하는 20~25℃의 물에 교반하여 2시간가량 추출한 후 액을 분리하여 사용한다. 이때 사용된 물은 발효 시 사용할 물에서 덜어 사용한다. 쌀증류주용 발효법은 곡물이 가지고 있는 향미를 증대시키고자 증자발효법을 사용하는 데, 증자발효법에서 물빼기가 완료된 쌀은 121℃, 15분간 증자 후 가열을 종료하고 10분간 뜸을 들인다. 효모(S.I.Lesaffre社, La Parisienne)는 활성을 갖게 하여 30℃까지 냉각시킨 쌀과 효소, 남은 물과 함께 넣어 1단 담금을 완료 한다. 초기 발효온도는 20~25℃로 설정하며 이때 젖산을 사용하여 pH를 3.2~3.5로 맞추어 산패균으로부터 원천적인 차단을 진행한다. 48시간 후 쌀과 물을 1단 발효의 2배 양을 넣어주어 2단 담금을 완료 한다. 1단 발효는 효모의 활성과 번식, 그리고 안정화를 위한 공정이며 안정화된 상태에서 2단 담금이 진행되도록 한다. 1일 2회 교반작업을 진행하며 온도가 일정하게 유지되도록 한다.  After rice is quantified, it is thoroughly washed, soaked for 2 hours, then supported on a fine sieve and drained for 30 minutes. If the enzyme is leached out of the enzyme to be used, quantitatively measure the enzyme, stir in 20 to 25 ° C water equivalent to 10 times that of the enzyme, and extract it for about 2 hours. At this time, the used water is used to be used in the fermentation water. The fermentation method for rice spirits uses the fermentation method to increase the flavor of the grain. In the case of the fermentation method, the rice which has been drained is heated at 121 ℃ for 15 minutes and then heated for 10 minutes. The yeast (S.I.Lesaffre, La Parisienne) is made active, and the rice, the enzyme and the remaining water cooled to 30 ° C are added together to complete the first stage of immersion. The initial fermentation temperature is set at 20 ~ 25 ℃, and the pH is adjusted to 3.2 ~ 3.5 using lactic acid, so that the original blocking is carried out from acid bacteria. After 48 hours, rice and water are added twice the amount of the first stage fermentation to complete the second stage immersion. One-stage fermentation is a process for the activation, propagation and stabilization of yeast, and allows the two-stage process to proceed in a stabilized state. The stirring operation is carried out twice a day to keep the temperature constant.

본 시험에서는 쌀 품종으로 추청을 사용하고 당화효소로 RH와 AS만을 사용한 것을 control로 RH의 당화력을 30%만 Sumyzyme으로 대체한 것을 Sum 30%, RH의 당화력을 30%만 Biowin AG로 대체한 것을 Bio 30% 시험군 구성한다. 발효경과에 따른 이화학적 분석은 국세청 기술연구소 주류 분석 규정에 근거하여 일반적으로 분석하는 pH, 산도, 알코올, Brix당도, 비중 등을 측정하여 분석하였으며, 각 시험군에 따라 3반복하여 실험하였으며 평균 값 및 표준편차를 확인하였다. In this test, 30% of the saccharification power of RH was replaced with 30% of Sumyzyme, and only 30% of the saccharification power of RH was replaced by Biowin AG. Bio 30% test group. The physicochemical analysis according to the fermentation process was analyzed by analyzing pH, acidity, alcohol, Brix sugar content, specific gravity, etc. which were generally analyzed based on the main analysis regulations of the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology. And standard deviation.

온도와 비중계 : 온도와 비중계(대광 기계제작소, 한국)를 측정 Temperature and specific gravity: Temperature and specific gravity (Daekwang Machinery Co., Korea)

산도 : 알칼리 적정법 Acidity: alkali titration method

Brix 당도 : 당도계(ATACO, 일본)로 측정 Brix sugar content: Measured by sugar meter (ATACO, Japan)

알코올 : 증류법으로 주정계와 온도계(이하 대광 기계제작소,한국)를 이용해 측정 Alcohol: Measured by distillation method using an umbrella and thermometer (Daekwang Machinery Co., Korea)

pH : pH미터기(OHAUS pH meter ST3000, 일본)로 측정
pH: Measured with a pH meter (OHAUS pH meter ST3000, Japan)

Figure 112014017034464-pat00008
Figure 112014017034464-pat00008

Figure 112014017034464-pat00009
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<결과 및 고찰> <Results and Discussion>

pH의 경우 전체적인 형태는 유사하게 나타나며, 표준편차의 경우 Biowin AG도 0.15 이하에서 유지되어 안정적으로 진행되는 것을 볼 수 있다. 발효 초기인 1일차에서 4일차까지 Sum30%와 Bio30%는 편차범위 내에서 유지되나 5일차부터 차이가 발생되기 시작한다. 각 시험군 모두 현미경 검경 상 정상 발효가 진행되었으며 control에 비해서는 두 시험군이 다소 높은 pH를 유지했다. 산도의 경우 전체적인 형태는 유사하나 Biowin AG를 사용한 시험군의 경우 산도 생성능력이 나머지 시험군에 비해 부족한 것으로 사료된다. 표준편차는 전체적으로 발효초기 Bio30%에서 가장 높은 편차를 나타내었으나 이후 안정세로 진행되었으며, 초기의 높은 편차는 Biowin AG가 pH 3.2~3.5로의 보산 시 내산성이 다른 시험군에 비해 부족한 것으로 여겨진다. 알코올의 경우 발효 경과일에 따른 알코올생성곡선은 유사하나 Bio30%가 다른 시험군에 비해 낮은 알코올 생성 능력을 보이고 있다. 이는 당화산물은 동일하나 24hr 경과 후 당화산물의 생성량으로 봤을 때 가장 작은 G1과 G2를 생성한 것처럼 발효성 당의 생성 능력이 적기 때문으로 사료된다.  In the case of pH, the overall morphology is similar, and Biowin AG is stable at 0.15 or less for standard deviation. From the 1st day to the 4th day of fermentation, Sum30% and Bio30% are maintained within the deviation range, but the difference starts from the fifth day. In each test group, normal fermentation proceeded by microscopic examination and the pH of the two test groups was maintained higher than that of control. The overall morphology of acidity is similar, but it is considered that the acidity producing ability of Biowin AG test group is insufficient compared to the other test group. The standard deviations showed the highest deviation at 30% of the initial fermentation period, but then stabilized and the high initial deviation was considered to be insufficient in comparison with the other test groups when Biowin AG was pH 3.2-3.5. Alcohol production curves of alcohol were similar to those of fermentation days, but Bio30% showed lower alcohol production ability than other test groups. This is because the glycation products are the same, but it is considered that the production ability of fermentable sugars is small as it produces the smallest G1 and G2 in terms of the amount of glycation products produced after 24 hours.

또한 Bio30%는 최종 알코올 함량은 다른 시험군에 비해 약 0.4~0.5도(v/v%)가량 낮게 나타나며 발효 경과일에 따른 control의 표준편차 범위 내에 들어오지 못한다.당도의 경우 발효 경과일에 따른 당도 곡선은 control과 sum30%는 유사하나 Biowin은 감소하지만 다른 형태의 감소 곡선을 형성하고 있다. 초기 감소의 폭이 다른 시험군에 비해 Bio30% 시험군이 적게 나타나며 이후 완만한 감소를 보이고 있다. 표준편차는 Bio30%에서 다른 시험군에 비해 다소 높게 나타났으며 Biowin AG의 당화력과 발효성 당의 생성능력이 다른 시험군의 효소에 비해 낮기 때문으로 사료된다. 비중의 경우 발효 경과일에 따라 알코올 곡선과 반비례로 진행되었으며, 당화력과 발효성 당의 생성능력이 다른 시험군의 효소에 비해 적은 것으로 사료되는 Bio30%가 발효 경과일 전체에서 가장 높은 비중을 형성하였다. 전체 시험군의 표준편차는 0.01 이하로 안정적으로 진행되었으며 1일차에서 2일차는 감소, 2일차에서 3일차는 2단 담금에 의한 증가, 3일차 이후부터는 감소하는 control 형태의 곡선을 형성하였다(도 13 내지 17 참조).누룩취를 저감화 할 수 있는 RH 대체 효소 시험군은 Sum30%로 선정하였으며 AS의 대체는 없이 이후 전통곡자, 개량누룩을 사용한 시험군에 비해 누룩취 저감 여부를 확인하고자 한다.
In addition, the final alcohol content of Bio30% is about 0.4 ~ 0.5 degree (v / v%) lower than that of the other test groups and does not fall within the standard deviation of control according to the elapsed time of fermentation. The curves are similar to the control and sum30%, but Biowin decreases but forms other types of decay curves. The initial decrease was less in the Bio30% test group than in the other test groups, and thereafter showed a gradual decrease. The standard deviation was somewhat higher in Bio30% than in other test groups. It is considered that Biowin AG 's glycation ability and fermentable sugar production ability are lower than those of other test groups. The specific gravity was inversely proportional to the alcohol curve according to the fermentation days. The fermentation ability and the fermentable sugar production capacity of 30% of Bio 30%, which were considered to be lower than those of the other test groups, were the highest in the whole fermentation days. The standard deviation of the total test group was stable at less than 0.01, with a decrease in day 1 from day 2, a decrease in day 2 from day 2 to day 3, and a decrease from control day 3 13 to 17.) The RH replacement enzyme test group which can reduce the nuruk extract was selected as Sum 30%, and it is confirmed whether or not the nuruk can be reduced compared with the test group using the conventional nuruk after the replacement of AS.

6) 누룩취 저감 확인  6) Confirmation of neutrophil reduction

시험 누룩취 저감을 위해 선정한 당화효소와 전통곡자, 개량누룩을 시험군으로 다른 조건을 동일 시 한 상태에서 발효를 진행하고 발효가 종료된 술덧과 그 술덧을 증류하여 얻어진 증류주 중 선정한 당화효소를 사용한 제품이 실제적으로 누룩취 저감효과가 있는지 확인하기 위하여 주류 관능평가 패널들을 대상으로 누룩취에 대해서 훈련을 진행 한 후 각 시험군의 발효 술덧과 증류주에서 누룩취에 대한 관능 평가를 실시하였다.
The saccharification enzymes selected for the test nuruk reduction and the traditional nuruk and the modified nuruk were subjected to fermentation under the same conditions as those of the test group, and the fermentation was terminated after the fermentation and the saccharification enzyme selected from distilleries obtained by distilling the fermentation was used In order to test whether the product actually has the effect of reducing the nuruk, the sensory evaluation of the nutrients in the fermentation syrup and the distilled liquor of each test group was carried out after the training of the nuruko for the main sensory evaluation panels.

-누룩취 훈련 : 평가 전 15명의 패널들에게 3종류(송학곡자(전통곡자), 개량누룩, 선정된 당화효소)의 누룩을 5%, 10%, 15%로 희석하여 제공하여 누룩취가 어떤 특성인지 알고 그 강도를 평가하는 훈련을 실시하였다. 각 농도별로 희석한 개량누룩의 강도 평가결과는 표9와 같다.
- Nuruk training: Before the evaluation, 15 panelists were provided with 5%, 10%, and 15% diluted koji of three kinds (Songjae (traditional curry), modified Nuruk, and selected saccharogenic enzyme) And it was trained to evaluate its strength. Table 9 shows the results of the strength evaluation of the modified yeast by dilution with each concentration.

Figure 112014017034464-pat00010
Figure 112014017034464-pat00010

1패널들의 합의를 통해 도출 된 값 1 The value derived from the agreement of the panels

누룩을 희석한 시료의 강도평가 결과 누룩취는 선정된 당화효소>개량누룩>송학곡자 순으로 강한 것으로 나타났다.
As a result of evaluating the strength of the sample diluted with the koji, it was found that the koji was strong in order of the saccharifying enzyme> modified koji>

Figure 112014017034464-pat00011
Figure 112014017034464-pat00011

1. Standard deviation  1. Standard deviation

2. Different superscripts in the same row are significant different (p<0.05)2. Different superscripts in the same row are significant different ( p <0.05)

실제 누룩을 5%, 10%, 15% 희석하여 강도 평가한 것과 다르게, 발효 술덧과 증류주에서 모두 송학곡자를 사용한 시료의 누룩취 강도가 가장 강하게 나타났으며 발효 술덧의 경우 선정한 당화효소를 사용한 시료가 유의적으로 가장 낮은 누룩취를 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 전반적으로 발효 술덧 시료의 누룩취 강도가 증류주의 누룩취 강도보다 낮게 측정된 것은 발효 술덧에서의 효모와 원료의 향 등 다른 특성과 혼합되어 상대적으로 낮게 나타난 것으로 사료된다. 본 관능검사를 통하여 선정한 당화효소가 전통 곡자나 개량한 누룩에 비해 누룩취가 저감된 것을 확인 할 수 있었으며, 관능평가 결과상에서 타 시험군에 비해 10% 이상 누룩취를 저감 시킨 것으로 보여 진다(도 18 참조).
Unlike the case of dilution with 5%, 10%, and 15% dilution of actual koji, the koji content of the samples with the Song Jaejoeng was the strongest in both the fermentation fermentation and distilled liquor. In case of fermentation fermentation, Was significantly lower than that of the control group. In general, it was concluded that the fermentation of fermentation broth samples was lower than the fermentation fermentation broth by mixing with other characteristics such as flavor of yeast and raw materials. The sensory evaluation showed that the saccharification enzyme decreased the nuruk extract compared with the traditional nuruk and the modified nuruk, and the sensory evaluation result showed that the nuruk was reduced by more than 10% 18).

Claims (1)

전분질 원료와 RH(Rhizopus japonicus 속)와 AS(Aspergillus oryzae 속)로 구성되는 누룩을 사용하여 발효주를 제조하는 전통 발효주의 제조방법에 있어서,
당화효소로 RH(Rhizopus japonicus 속) 및 수미자임(Sumyzyme); 및 AS(Aspergillus oryzae 속);를 사용하고,
상기 RH(Rhizopus japonicus 속) 및 수미자임(Sumyzyme)에 의한 당화력 중 수미자임(Sumyzyme)에 의한 당화력이 10% 내지 30%인 것을 특징으로 하는 누룩취가 저감된 발효주의 제조방법.
A method for preparing a fermented juice using a yeast composed of a starch raw material, RH ( Rhizopus japonicus genus) and AS ( Aspergillus oryzae genus)
RH ( Rhizopus japonicus genus) and Sumyzyme as saccharification enzymes; And AS (genus Aspergillus oryzae ) were used,
Wherein the saccharifying power by Sumyzyme in the saccharification power by RH ( Rhizopus japonicus genus) and Sumyzyme is 10% to 30%.
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