KR101556773B1 - Anti-inflammatory composition containing diterpenes from the roots of oriza sativa l. - Google Patents
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Abstract
본 발명은 다이터펜 화합물을 포함하는 염증의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 대한 것이다.The present invention relates to a composition for preventing, ameliorating or treating inflammation comprising a diterpene compound.
Description
본 발명은 항염증 조성물에 대한 것이다.The present invention is directed to anti-inflammatory compositions.
벼(Oryzasativa L.)는 벼과(Gramineae)에 속하는 1년생 초본식물로 아시아 전역에 널리 분포하고 있다. 높이는 50 내지100 cm이며 뿌리에 가까운 곳에서 가지를 쳐서 포기를 형성하여 자란다. 꽃이 필 때는 곧추 서지만 익을 때는 밑으로 처지며 많은 소수가 달리고 소수는 가지에 호생하며 짧은 대가 있고 1개의 꽃으로 된다. 꽃은 7~8월경에 피며 자가수분에 의하여 결실한다.
Rice ( Oryzasativa L. ) is a perennial herbaceous plant belonging to the Gramineae family, and is widely distributed throughout Asia. Height is 50 to 100 cm. It grows by forming branches in the branches near the roots. When flowers bloom, they stand upright, but when they are ripe, they fall downward. Many minorities run. Flowers bloom around July to August, and they are eliminated by their own moisture.
벼의 열매인 쌀은 우리나라의 주된 식량 자원으로서, 그 동안 쌀 또는 벼의 가공 방법, 개량 방법(예컨대, 한국공개특허 제 10-2013-0141261호 등), 쌀 또는 벼의 부산물을 이용한 식품(예컨대 한국공개특허 제 10-2013-0065061호 등)과 같은 전통적인 이용에 대하여 많은 연구가 이루어져 왔다. 그러나 벼 자체에도 많은 유용한 성분들이 있다는 것이 최근 밝혀지고 있다.
Rice, which is the fruit of rice, is the main food resource of Korea. During that time, methods of processing rice, rice, improvement methods (for example, Korean Patent Publication No. 10-2013-0141261), foods using rice or rice by- Korean Patent Laid-Open No. 10-2013-0065061, etc.). However, it has recently been shown that rice has many useful ingredients.
이에 본 발명자들은 벼 유래의 화합물들을 분리, 연구하던 중 벼로부터 신규 화합물들을 분리하였을 뿐 아니라, 이를 포함하는 특정 다이터펜 화합물들이 항염 효능을 갖는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the present inventors isolated new compounds from rice while isolating and studying the compounds derived from rice, and confirmed that the specific diterpene compounds containing them have anti-inflammatory activity, thus completing the present invention.
본 발명의 목적은 항염증 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide an anti-inflammatory composition.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 벼 뿌리 유래의 다이터펜 화합물 및 그 허용가능한 염을 포함하는 항염증 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides an anti-inflammatory composition comprising a diterpene compound derived from a root of rice and an acceptable salt thereof.
본 발명의 항염증 조성물은 산화질소 생성 억제능을 갖는다.The anti-inflammatory composition of the present invention has the ability to inhibit nitric oxide production.
도 1은 실시예 1 내지 5의 벼 뿌리 추출물 및 분획물들의 산화질소 생성 저해능을 나타낸다.
도 2는 실시예 1 내지 5의 벼 뿌리 추출물 및 분획물들의 세포 생존률을 나타낸다.
도 3은 벼 뿌리로부터 분리한 다이터펜계 화합물들인 화합물 1 내지 5의 산화질소 생성 저해능을 나타낸다.
도 4는 벼 뿌리로부터 분리한 다이터펜계 화합물들인 화합물 1 내지 5의 세포 생존률을 나타낸다.
도 5는 벼 뿌리로부터 분리한 다이터펜계 화합물들인 화합물 1 내지 5의 iNOS의 mRNA 및 단백질의 발현 억제능을 나타낸다(A: 역전사효소-중합효소 연쇄반응 분석 결과, B: 웨스턴 블랏 분석 결과).Figure 1 shows the inhibitory effect of the rice root extract and fractions of Examples 1 to 5 on nitric oxide production.
Figure 2 shows the cell viability of the rice root extract and fractions of Examples 1-5.
Fig. 3 shows the ability of the
Figure 4 shows the cell viability of
FIG. 5 shows the ability of
본 발명은 The present invention
하기 화학식 1 내지 4 중 어느 하나의 화학식으로 표시되는 화합물 또는 그 허용 가능한 염을 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 대한 것이다.
The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating an inflammatory disease comprising a compound represented by the following formula (1) or an acceptable salt thereof.
<화학식 1>≪ Formula 1 >
이 때, R1은 H 또는 OR2이며, 상기 R2는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
Wherein
<화학식 2>(2)
<화학식 3>(3)
<화학식 4>≪ Formula 4 >
이 때, R3는 H 또는 OR4이며, 상기 R4는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
In this case, R3 is H or OR4, wherein R4 is is one which is selected from the group consisting of H, CH 3, CH 2 CH 3 and CH 2 CH 2 CH 3.
또한 본 발명은,Further, according to the present invention,
하기 화학식 1 내지 4 중 어느 하나의 화학식으로 표시되는 화합물 또는 그 허용 가능한 염을 포함하는 염증의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 대한 것이다.
The present invention relates to a food composition for preventing or ameliorating inflammation, which comprises a compound represented by the following formula (1) or an acceptable salt thereof.
<화학식 1>≪ Formula 1 >
이 때, R1은 H 또는 OR2이며, 상기 R2는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
Wherein
<화학식 2>(2)
<화학식 3>(3)
<화학식 4>≪
이 때, R3는 H 또는 OR4이며, 상기 R4는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
In this case, R3 is H or OR4, wherein R4 is is one which is selected from the group consisting of H, CH 3, CH 2 CH 3 and CH 2 CH 2 CH 3.
또한 본 발명은,Further, according to the present invention,
하기 화학식 1 내지 4 중 어느 하나의 화학식으로 표시되는 화합물 또는 그 허용 가능한 염을 포함하는 염증의 예방 또는 개선용 화장료 조성물에 대한 것이다.
The present invention relates to a cosmetic composition for preventing or improving inflammation, which comprises a compound represented by the following formula (1) or an acceptable salt thereof.
<화학식 1>≪
이 때, R1은 H 또는 OR2이며, 상기 R2는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
Wherein
<화학식 2>(2)
<화학식 3>(3)
<화학식 4>≪
이 때, R3는 H 또는 OR4이며, 상기 R4는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
In this case, R3 is H or OR4, wherein R4 is is one which is selected from the group consisting of H, CH 3, CH 2 CH 3 and CH 2 CH 2 CH 3.
또한 본 발명은 Also,
하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 그 허용가능한 염에 대한 것이다.
The present invention relates to a compound represented by the following formula (1) or an acceptable salt thereof.
<화학식 1>≪
이 때, R1은 OR2이며, 상기 R2는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
Wherein
또한 본 발명은Also,
하기 화학식 4로 표시되는 화합물 또는 그 허용가능한 염에 대한 것이다.
The present invention relates to a compound represented by the following formula (4) or an acceptable salt thereof.
<화학식 4>≪
이 때, R3는 H 또는 OR4이며, 상기 R4는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
In this case, R3 is H or OR4, wherein R4 is is one which is selected from the group consisting of H, CH 3, CH 2 CH 3 and CH 2 CH 2 CH 3.
또한 본 발명은 벼를 유기 용매로 추출하는 단계를 포함하는 상기 화합물 또는 그 염의 제조 방법에 대한 것이다.
The present invention also relates to a process for producing the compound or a salt thereof, which comprises extracting rice with an organic solvent.
이하, 본 발명을 자세히 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
약학적 조성물Pharmaceutical composition
본 발명은 본 발명의 화합물 또는 그 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 대한 것이다. 상기 약학적 조성물은 산화질소(NO)의 발현을 억제하는 특성이 있다.
The present invention relates to a pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of inflammatory diseases comprising a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof. The pharmaceutical composition has a property of inhibiting the expression of nitric oxide (NO).
본 발명의 약학적 조성물은 본 발명의 화합물 또는 그 약학적으로 허용가능한 염을 0.01 내지 80 중량% 포함할 수 있으며, 바람직하게는 0.02 내지 65 중량% 포함할 수 있다. 그러나 이는 투약자의 필요에 따라 증감할 수 있으며, 식생활, 영양 상태, 병의 진행 정도, 염증의 정도 등 상황에 따라 적절히 증감할 수 있다.
The pharmaceutical composition of the present invention may contain 0.01 to 80% by weight, preferably 0.02 to 65% by weight, of the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof. However, this can be increased or decreased according to the need of the medicinal person, and it can be appropriately increased or decreased according to the situation such as the diet, nutritional status, disease progression, degree of inflammation.
본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 바람직한 약제학적 제제는 정제, 경질 또는 연질 캅셀제, 액제, 현탁제 등과 같은 경구투여용 제제가 있으며 이들 약제학적 제제는 약제학적으로 허용 가능한 통상의 담체, 예를 들어 경구투여용 제제의 경우에는 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 가용화제, 현탁화제, 보존제 또는 증량제 등을 사용하여 조제할 수 있다.
The pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally or parenterally and can be used in the form of a general pharmaceutical preparation. The preferred pharmaceutical preparations are those for oral administration such as tablets, hard or soft capsules, liquids, suspensions, etc. These pharmaceutical preparations can be prepared in conventional pharmaceutically acceptable carriers, for example, as excipients for oral preparations, Binders, disintegrators, lubricants, solubilizers, suspending agents, preservatives or extenders.
본 발명의 본 발명의 화합물 또는 그 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물의 투여 용량은, 환자의 상태, 연령, 성별 및 합병증 등의 다양한 요인에 따라 전문가에 의해 결정될 수 있지만 일반적으로는 성인 1kg 당 0.1㎎ 내지 10g, 바람직하게는 10 mg 내지 5g의 용량으로 투여될 수 있다. 또, 단위 제형당 상기 약학적 조성물의 1일 용량 또는 이의 1/2, 1/3 또는 1/4의 용량이 함유되도록 하며, 하루 1 내지 6 회 투여될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
The dosage of the pharmaceutical composition comprising the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof of the present invention can be determined by an expert according to various factors such as the condition of the patient, age, sex, and complications, May be administered at a dose of 0.1 mg to 10 g, preferably 10 mg to 5 g, per kg of the adult. Also, the daily dosage of the pharmaceutical composition per unit dosage form, or a half, 1/3 or 1/4 dose thereof, may be contained, and may be administered 1 to 6 times per day. However, in the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or for the purpose of controlling health, the amount may be less than the above range, and the active ingredient may be used in an amount of more than the above range since there is no problem in terms of safety.
염증성 질환Inflammatory disease
상기 염증성 질환은 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 치질, 통풍, 간직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 및 다발성 경화증으로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있다.
The inflammatory disease is selected from the group consisting of edema, dermatitis, allergy, atopy, asthma, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, colitis, hemorrhoids, May be any one selected from the group consisting of fibromyalgia, psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, shoulder periarthritis, tendonitis, nephritis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis and multiple sclerosis.
본 발명의 The 다이터펜계Diterpen 화합물들 Compounds
본 발명의 화학식 1 내지 4의 화합물들, 특히 화합물 1 내지 5의 화합물은 염증의 예방, 개선 또는 치료능을 갖는다. 본 발명의 다이터펜계 화합물들은 식물로부터 분리하거나 합성을 통하여 수득할 수 있다. 상기 식물은 벼과 식물인 것이 바람직하며 더욱 바람직하게는 벼이다.
The compounds of the
본 발명의 The 다이터펜계Diterpen 화합물들의 제조 방법 Methods for the preparation of compounds
본 발명은 벼를 유기용매로 추출하는 단계를 포함하는 본 발명의 다이터펜계 화합물들의 제조 방법을 제공한다. 상기 유기용매로 추출한 후에는 상기 유기용매와 동일하거나 상이한 유기용매로 분획하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 유기용매는 탄소 수 5 이하의 저가 알코올, 에틸아세테이트, 물, 클로로포름 등이 될 수 있으며, 상기 저가 알코올은 특히 메탄올, 에탄올, 프로판올 또는 부탄올인 것이 바람직하다.
The present invention provides a process for producing the dietherpenic compounds of the present invention comprising extracting rice with an organic solvent. After the extraction with the organic solvent, the organic solvent may be further fractionated with an organic solvent which is the same as or different from the organic solvent. The organic solvent of the present invention may be a low-cost alcohol having 5 or less carbon atoms, ethyl acetate, water, chloroform, etc., and the lower alcohol is preferably methanol, ethanol, propanol or butanol.
식품 조성물Food composition
본 발명은 본 발명의 화합물 또는 그 허용가능한 염을 포함하는 염증성 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 대한 것이다.
The present invention is directed to a food composition for preventing or ameliorating an inflammatory disease comprising a compound of the present invention or an acceptable salt thereof.
본 발명의 식품은 건강보조식품, 건강기능식품, 기능성 식품 등이 될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니며, 천연식품, 가공식품, 일반적인 식자재 등에 본 발명의 화합물 또는 그 허용가능한 염을 첨가하는 것도 포함된다.
The food of the present invention may be, but is not limited to, a health supplement food, a health functional food, a functional food, etc., and includes the addition of a compound of the present invention or an acceptable salt thereof to natural foods, processed foods, .
본 발명의 식품 조성물은, 본 발명의 화합물 또는 그 허용가능한 염을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 조성물과 함께 사용될 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 개선 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 화합물 또는 그 허용가능한 염은, 식품 또는 음료의 제조 시에 식품 또는 음료의 원료 100 중량%에 대하여 0.1 내지 70 중량%, 바람직하게는 2 내지 50 중량%로 첨가될 수 있다. 본 발명의 화합물 또는 그 허용가능한 염의 유효용량은 상기 약학적 조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
The food composition of the present invention can be used appropriately as it is, or can be used in combination with other food or food compositions, or can be used appropriately according to conventional methods. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to its intended use (prevention, improvement, or therapeutic treatment). In general, the compound of the present invention or an acceptable salt thereof may be added in an amount of 0.1 to 70% by weight, preferably 2 to 50% by weight, based on 100% by weight of the raw material of the food or beverage in the production of food or beverage . The effective dose of the compound of the present invention or an acceptable salt thereof may be used in accordance with the effective dose of the pharmaceutical composition but may be less than the above range for the purpose of health and hygiene or for long- , And the active ingredient can be used in an amount in the above range because there is no problem in terms of safety.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 식품 조성물은 정제, 경질 또는 연질 캅셀제, 액제, 현탁제 등과 같은 경구투여용 제제의 형태로 이용될 수 있으며, 이들 제제는 허용 가능한 통상의 담체, 예를 들어 경구투여용 제제의 경우에는 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 가용화제, 현탁화제, 보존제 또는 증량제 등을 사용하여 조제할 수 있다.
There is no particular limitation on the kind of the food. The food composition may be used in the form of tablets, hard or soft capsules, liquids, suspensions, and the like, which may contain conventional excipients, such as excipients in the case of oral preparations, Binders, disintegrators, lubricants, solubilizers, suspending agents, preservatives or extenders.
본 발명의 화합물 또는 그 허용가능한 염을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제, 기타 영양제 등을 들 수 있으나 이들 종류의 식품으로 제한되는 것은 아니다.
Examples of foods to which the compounds of the present invention or acceptable salts thereof can be added include dairy products including meats, sausages, breads, chocolates, candies, snacks, confectionery, pizza, ramen noodles, other noodles, gums, ice cream, , Beverages, tea, drinks, alcoholic beverages and vitamin complexes, and other nutrients, but are not limited to these kinds of foods.
화장료Cosmetics 조성물 Composition
본 발명은 본 발명의 화합물 또는 그 허용가능한 염을 포함하는 화장료 조성물에 대한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 항염 효능이 있는바, 특히 트러블 피부, 여드름 피부, 아토피 피부 등에 사용될 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물은, 당업계의 통상적으로 제조되는 어떠한 제형에도 제조될 수 있으며 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한 본 발명의 화장료 조성물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 마사지크림, 에센스, 아이크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 팩, 스프레이 또는 파우더 제형으로 제조될 수도 있다.
The present invention is directed to a cosmetic composition comprising a compound of the invention or an acceptable salt thereof. The cosmetic composition of the present invention is effective for anti-inflammation, and can be used especially for troublesome skin, acne skin, atopic skin and the like. The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulations conventionally produced in the art and may be formulated into a solution, suspension, emulsion, paste, gel, cream, lotion, powder, soap, surfactant- containing cleansing oil, powder foundation , An emulsion foundation, a wax foundation and a spray, but is not limited thereto. The cosmetic composition of the present invention may also be formulated as a softening agent, a nutritional lotion, a nutritional cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray or a powder.
본 발명의 화장료 조성물은 효과적인 경피 흡수를 위하여 피부 침투 촉진제를 포함할 수 있다. 상기 피부 침투 촉진제는 당 업계에서 화장료 조성물에 사용하는 일반적인 피부 침투 촉진제면 되고, 특별히 제한되는 것은 아니다. 예컨대 본 발명의 피부 침투 촉진제는 디메틸 설폭사이드, oleic acid 등 지방산/에스테르 화합물, 리모넨(limonene) 등이 될 수 있다.
The cosmetic composition of the present invention may contain a skin penetration promoter for effective transdermal absorption. The skin penetration promoting agent is not particularly limited so long as it is a general skin penetration promoting agent used in the cosmetic composition in the art. For example, the skin penetration promoter of the present invention may be a fatty acid / ester compound such as dimethylsulfoxide, oleic acid, limonene, and the like.
또한 본 발명의 화장료 조성물을 이용 시에는 충격파, 이온삼투요법, 전기침공법, 미세침요법 등 물리적 방법을 병용하여 경피 흡수를 촉진할 수도 있다.
When the cosmetic composition of the present invention is used, transdermal absorption may be promoted by using physical methods such as shock waves, iontophoresis, electrical invasion, and microinfiltration.
사료 조성물Feed composition
본 발명은 본 발명의 화합물 또는 그 허용가능한 염을 포함하는 사료 조성물에 대한 것이다. 본 발명의 사료 조성물은 통상적인 사료와 함께 배식할 수 있으며, 본 발명의 사료 조성물을 통상적인 사료 조성물에 첨가하여 기능성 사료 조성물을 제조하여 이용할 수도 있다. 또한 본 발명의 사료 조성물은 본 발명의 화합물 또는 그 허용가능한 염 외 기능성 성분을 추가로 포함할 수도 있다. 상기 통상적인 사료 조성물과 본 발명의 화합물 또는 그 허용가능한 염이 혼합된 기능성 사료 조성물의 제조 시, 본 발명의 화합물 또는 그 허용가능한 염은 총 사료 조성물에 대하여 0.01 내지 30.00 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 20.00 중량%의 양으로 첨가될 수 있다. 사료 조성물의 본 발명의 화합물 또는 그 허용가능한 염의 유효용량은 상기 식품 조성물의 유효 용량에 준해서 사용할 수 있으나, 지속적인 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 필요에 따라 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
The present invention is directed to a feed composition comprising a compound of the invention or an acceptable salt thereof. The feed composition of the present invention can be seeded with conventional feeds, and the feed composition of the present invention can be added to a conventional feed composition to prepare a functional feed composition. In addition, the feed composition of the present invention may further comprise a functional ingredient in addition to the compound of the present invention or an acceptable salt thereof. In the preparation of a functional feed composition in which the conventional feed composition and the compound of the present invention or an acceptable salt thereof are mixed, the compound of the present invention or an acceptable salt thereof is added in an amount of 0.01 to 30.00% by weight, preferably 0.01 By weight to 20.00% by weight. The effective dose of the compound of the present invention or the acceptable salt thereof in the feed composition can be used in accordance with the effective dose of the food composition but may be less than the above range in the case of long-term intake for continuous health control, There is no problem in terms of safety, so that it can be used in an amount exceeding the above range as necessary.
본 발명의 사료 조성물은 가축 또는 가금을 대상으로 한다. 상기 가축 또는 가금은 소, 돼지, 닭, 말, 양, 당나귀, 노새, 멧돼지, 토끼, 메추라기, 집오리, 장닭, 투계용 닭, 비둘기, 칠면조, 개, 고양이, 원숭이, 햄스터, 생쥐, 래트, 구관조, 앵무새, 잉꼬, 카나리아 등이나 이들에 제한되는 것은 아니며 가정 내에서 사육 가능한 인간 이외의 포유 동물 또는 조류이면 본 발명의 사료 조성물의 대상이라 할 것이다.
The feed composition of the present invention is intended for livestock or poultry. The livestock or poultry may be any kind of animal such as cattle, pigs, chickens, horses, sheep, donkeys, mules, boars, rabbits, quail, ducks, fowls, poultry chickens, pigeons, turkeys, dogs, cats, monkeys, hamsters, , Parrots, parakeets, canaries, and the like, but are not limited to mammals or birds other than humans capable of breeding in the home.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나, 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.
BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The advantages and features of the present invention and the manner of achieving them will become apparent with reference to the embodiments described in detail below with reference to the accompanying drawings. It should be understood, however, that the invention is not limited to the disclosed embodiments, but is capable of many different forms and should not be construed as limited to the embodiments set forth herein. Rather, these embodiments are provided so that this disclosure will be thorough and complete, To fully disclose the scope of the invention to those skilled in the art, and the invention is only defined by the scope of the claims.
재료 및 방법Materials and methods
벼 뿌리Roots of rice
벼(Chucheongbyeo) 뿌리는 인천시 강화군에서 2011년 11월에 채집하였고, 농촌진흥청 조준현 박사가 동정하였다.
Rice (Chucheongbyeo) roots were collected in November 2011 in Ganghwa-gun, Incheon city, and Dr. Cho Jun-hyun of Rural Development Administration identified them.
도구 및 시약Tools & Reagents
Column chromatography용 silica gel(SiO2) 은 Kieselgel 60 (Merck, Darmstadt, Germany), octadecyl SiO2 (ODS)은LiChroprep RP-18 (40-60 μm, Merck), Sephadex LH-20 (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden)을사용하였다. TLC는 Kieselgel 60 F254와 RP-18 F254S를 사용하였고, TLC 상의물질검출에는 UV 램프 (Spectroline, Model ENF-240 C/F, Spectronics Corporation, New York, USA)로 보거나, 10% aq. H2SO4를 분무한 후 가열하여 발색 양상을 조사하였다. NMR 스펙트럼은 Varian Inova AS 400 (400 MHz, Varian, Palo Alto, CA, USA)으로 측정하였고, Circular dichroism (CD)는 Chirascan Plus (Applied Photophysics Ltd., Leatherhead, UK)를 사용하였다. IR 스펙트럼은 Perkin model 599B (Perkin-Elmer, Waltham, MA, USA)로 측정하였고, EI-MS는 JMS-700 (JEOL, Tokyo, Japan)을 사용하여 측정하였으며, 매트릭스(matrix)는 글리세롤(glycerol)을 사용하였다. 녹는점은 Stanford Research System 융점측정기 (SRS, Sunnyvale, CA, USA)를 사용하여 측정하였고, 비선광도는 Polarimeter P-1020 (JASCO, Tokyo, Japan)을 사용하였다.
The silica gel (SiO2) for the column chromatography was Kieselgel 60 (Merck, Darmstadt, Germany), octadecyl SiO2 (ODS) was used for LiChroprep RP-18 (40-60 μm, Merck), Sephadex LH-20 (Amersham Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden) ) Were used. TLC was performed with
세포 배양Cell culture
실험에 사용한 뮤린 대식세포 RAW264.7은 한국세포주은행 (Korean Cell Line Bank; KCLB)에서 구입하였으며 10% fetal bovine serum (FBS, WelGENE Inc., Seoul, Korea), 글루타메이트(2 mM), 페니실린 (100 U/mL) 및 스트렙토마이신 (100 μg/mL)이 포함된 Dulbecco’s modified Eagle’s medium 배지 (DMEM, WelGENE)를 사용하여37 ℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 배양하였다. 다양한 농도의 벼뿌리 추출물, 분획물 및 다이터펜 화합물들이 포함된 시료를 lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Co.) (1 μg/mL)와 함께 또는 LPS 단독으로 RAW264.7 세포에 처리하고 18 내지 24 시간 동안 배양하였다.
The murine macrophage RAW264.7 was purchased from the Korean Cell Line Bank (KCLB), and 10% fetal bovine serum (FBS, WelGENE Inc., Seoul, Korea), glutamate (2 mM), penicillin The cells were cultured in a Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM, WelGENE) medium containing 5% CO 2 at 37 ° C with streptomycin (100 μg / mL). Samples containing various concentrations of rice root extract, fractions and diterpene compounds were treated with lipopolysaccharide (LPS, Sigma-Aldrich Co.) (1 μg / mL) or with LPS alone and RAW 264.7 cells were treated with 18-24 Lt; / RTI >
산화질소 측정Nitrogen oxide measurement
RAW264.7 세포를 96-웰 세포 배양 플레이트에 웰당 1 × 104 세포가 되도록 분주한 후 12 내지 18시간 동안 부착시키면서 배양하였다. 다양한 농도의 벼 뿌리 추출물, 분획물 및 다이터펜 화합물들을 LPS (1 ㎍/㎖)와 동시에 처리하거나 또는 LPS를 단독으로 24시간 동안 처리하였다. 24시간 후 세포 배양액을 획득한 다음 배양액 중에 함유된 NO의 양을 Griess Reagent System (Sigma-Aldrich Co.)을 이용하여 측정하였다. 새로운 96-웰 플레이트에 배양된 세포 배지 100 ㎕와 Griess 시약 100 ㎕를 혼합하여 상온에서 10분간 방치하였다. 다음으로 microplate reader (Bio-Tek Instruments, Inc., Wilnooski, VT, USA)를 이용하여 550 nm에서 흡광도를 측정하였다. 생성된 산화질소의 양은 sodium nitrite 표준 곡선을 이용하여 계산하였다.
A frequency divider so that the RAW264.7 cells per well of 96-well cell culture plate in 1 × 10 4 cells were then incubated for 12 to 18 hours while attached. Various concentrations of rice root extract, fractions and diterpene compounds were treated simultaneously with LPS (1 [mu] g / ml) or LPS alone for 24 hours. After 24 hours, the cell culture was obtained and the amount of NO contained in the culture was measured using a Griess Reagent System (Sigma-Aldrich Co.). 100 占 퐇 of the cell culture medium and 100 占 퐇 of the Griess reagent in a new 96-well plate were mixed and allowed to stand at room temperature for 10 minutes. The absorbance was measured at 550 nm using a microplate reader (Bio-Tek Instruments, Inc., Wilnooski, VT, USA). The amount of nitric oxide produced was calculated using sodium nitrite standard curve.
세포독성 시험Cytotoxicity test
RAW264.7 세포를 96-웰 세포 배양 플레이트에 웰당 1×104세포가 되도록 분주한 후 12 내지 18 시간 동안 부착시키면서 배양하였다. 다양한 농도의 벼 뿌리 추출물, 분획물 및 다이터펜 화합물들을 혈청이 없는 배지에 녹여 24 시간 동안 처리하였다. 24시간 후 10 ug/mL 농도의 3-(4,5-dimetnythiazolyl-2)-2,5-diphenyl-thetazoliumbromide(MTT, Sigma-Aldrich Co.)용액을 웰당 10 ㎕씩 처리한 후 추가 배양하였다. 30 내지 60 분 후 세포배양액을 완전히 제거하고 보라색으로 형성된 포마잔 결정을 100㎕의 dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma-Aldrich Co.)를 각 웰마다 처리하여 완전히 녹여준 뒤 microplate reader를 이용하여 550 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포의 생존률은 하기 식 1에 따라 시료를 처리한 그룹과 아무것도 처리하지 않은 대조군 그룹 내에 있는 생존 세포의 비율로써 측정하였다.
A frequency divider so that the RAW264.7 cells per well of 96-well cell culture plate in 1 × 10 4 cells were then incubated for 12 to 18 hours while attached. Various concentrations of rice root extract, fractions and diterpene compounds were dissolved in serum-free medium and treated for 24 hours. After 24 hours, 10 [mu] l of a solution of 10 [mu] g / mL of 3- (4,5-dimetnythiazolyl-2) -2,5-diphenyl-thetazoliumbromide (MTT, Sigma-Aldrich Co.) was further added thereto. After 30-60 minutes, the cell culture solution was completely removed and the purple-colored formazan crystals were completely dissolved in 100 μl of dimethyl sulfoxide (DMSO, Sigma-Aldrich Co.) for each well. Absorbance was measured. The survival rate of the cells was determined by the ratio of survival cells in the control group treated with the sample according to the following
<식 1><
세포 생존률 (%) = [OD (시료처리군 흡광도) - OD (백지군 흡광도) / OD (대조군 흡광도) - OD (백지군 흡광도)] × 100
Cell viability (%) = [OD (absorbance of sample group) - OD (absorbance of blank group) / OD (control absorbance) - OD (absorbance of blank group)
역전사효소Reverse transcriptase -- 중합효소연쇄반응Polymerase chain reaction 분석 analysis
RAW264.7 세포를 6-웰 세포 배양 플레이트에 웰당 1×105 세포가 되도록 분주한 후 12 내지 18 시간 동안 부착시키면서 배양하였다. 다이터펜 화합물들을 LPS (1 ㎍/㎖)와 동시에 처리하거나 또는 LPS를 단독으로 18시간 동안 RAW264.7 세포에 처리하였다. 18시간 후 세포의 전체 RNA를 Trizol 시약 키트 (Invitrogen, Carsbad, CA, USA)를 이용하여 추출하였고, 5 ㎍의 RNA를 M-MuLV 역전사중합효소 (Fermentas Life Science)를 이용하여 역전사시켜 cDNA를 생성하였다. iNOS, GAPDH를 암호화한 cDNA를 각각 상보적인 포워드 프라이머(forward primer)와 리버스 프라이머(reverse primer)를 이용하여 Taq 중합효소를 이용하여 중합효소연쇄반응법으로 증폭시켰다. 증폭에 사용한 primer의 서열은 하기 표 1과 같으며, GAPDH는 세포 내부 대조군으로 사용하였다.
RAW264.7 cells were seeded on a 6-well cell culture plate at a density of 1 × 10 5 cells / well and cultured for 12 to 18 hours while adhering. Diterpen compounds were treated simultaneously with LPS (1 [mu] g / ml) or LPS alone for 18 hours in RAW264.7 cells. After 18 hours, total RNA of the cells was extracted using a Trizol reagent kit (Invitrogen, Carsbad, CA, USA) and 5 μg of RNA was reverse-transcribed using M-MuLV reverse transcription polymerase (Fermentas Life Science) Respectively. cDNA encoding iNOS and GAPDH was amplified by polymerase chain reaction (PCR) using Taq polymerase using a forward primer and a reverse primer, respectively. The primers used for amplification are shown in Table 1 below, and GAPDH was used as an internal control.
웨스턴블랏Western blot 분석 analysis
RAW264.7 세포를 6-웰 세포 배양 플레이트에 웰당 1×105 세포가 되도록 분주한 후 12 내지 18시간 동안 부착시키면서 배양하였다. 다이터펜 화합물들을 LPS (1 ㎍/㎖)와 동시에 처리하거나 또는 LPS를 단독으로 18시간 동안 RAW264.7 세포에 처리하였다. 18시간 후 단백질분해효소 저해제를 포함한 RIPA 완충용액 (Biosesang Inc., Seoul, Korea)을 사용하여 세포를 용해시키고 세포내 단백질을 회수하였다. 회수된 단백질은 Bradford (Biosesang Inc.) 단백질 분석 키트를 사용하여 정량하였으며 정량된 단백질 40 ug을 사용하여 8% 젤 상에서 SDS-polyacrylamide 젤 전기영동을 수행하였다. 전기영동 후, nitrocellulose membrane으로 분리된 단백질을 이동하였으며 항체의 비 특이적 결합을 억제시키기 위해 membrane을 5% 탈지분유액이 포함된 Tris-buffered saline-Tween (TBS-T)로 1시간 실온에서 배양하였다. 그 후 항원 특이적인 1차 항체와 12시간 동안 반응시킨 후, horseradish peroxidase를 붙인 2차 항체와 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. TBS-T로 6회 이상 세척한 후 ECL detection system (Amersham Bioscience, Piscataway, NJ, USA)을 이용하여 확인하였다. 실험에 사용한 전체 단백질 양이 동일함을 알 수 있도록 내부 대조군으로 GAPDH를 사용하였다.
RAW264.7 cells were seeded on a 6-well cell culture plate at a density of 1 × 10 5 cells / well and cultured for 12 to 18 hours while adhering. Diterpen compounds were treated simultaneously with LPS (1 [mu] g / ml) or LPS alone for 18 hours in RAW264.7 cells. After 18 hours, the cells were lysed using a RIPA buffer solution (Biosesang Inc., Seoul, Korea) containing a protease inhibitor and the intracellular proteins were recovered. The recovered protein was quantified using a Bradford (Biosesang Inc.) protein assay kit and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis was performed on 8% gel using 40 μg of the quantified protein. After electrophoresis, the proteins separated by nitrocellulose membrane were transferred and membrane was incubated with Tris-buffered saline-Tween (TBS-T) containing 5% skim milk for 1 hour at room temperature to inhibit non-specific binding of antibody Respectively. After incubation for 12 hours with an antigen specific primary antibody, secondary antibody with horseradish peroxidase was reacted at room temperature for 2 hours. After washing with TBS-
벼 뿌리 추출물 및 Rice root extract and 분획물의Fraction 제조 Produce
건조한 벼 뿌리 8.35kg을 80% 메탄올(94L)로 12시간 동안 3회 반복추출하였고, 얻어진 여액을 감압농축하여 284g(ORM, 벼 뿌리 메탄올 추출물, 실시예 1)을 얻었다.8.35 kg of dried rice roots was extracted three times for 12 hours with 80% methanol (94 L), and the obtained filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain 284 g (ORM, rice root methanol extract, Example 1).
상기 실시예 1의 벼 뿌리 메탄올 추출물을 에틸 아세테이트(ethyl acetate)(EtOAc, 4 L × 3)/H2O (4 L)로 분배추출하였으며, 에틸 아세테이트층을 제하고 남은 물층을 n-부탄올(butanol) (n- BuOH, 2.8 L × 3)로 다시 추출하였다. 각 층을 감압농축하여 에틸 아세테이트 분획물(ORE, 실시예 2, 38 g), n-부탄올 분획물(ORB, 실시예 3, 26 g) 및 물 분획물(ORH, 실시예 4)을 얻었다.
The rice seed methanol extract of Example 1 was separated and extracted with ethyl acetate (EtOAc, 4 L × 3) / H 2 O (4 L). The ethyl acetate layer was removed and the remaining water layer was washed with n-butanol butanol (n-BuOH, 2.8 L x 3). Each layer was concentrated under reduced pressure to obtain ethyl acetate fraction (ORE, Example 2, 38 g), n-butanol fraction (ORB, Example 3, 26 g) and water fraction (ORH, Example 4).
벼 뿌리 분획물로부터 다이터펜 화합물들의 분리Isolation of Diterpenic Compounds from Rice Root Fractions
상기 에틸 아세테이트분획물(즉, 실시예 2) 38 g에 대하여 silica gel column chromatography (c.c.) (φ 11.5×13.0cm, n-hexane-에틸 아세테이트=7:1, 8 L → 5:1, 7 L → 3:1, 17 L → 1:1, 10 L→ CHCl3-MeOH=17:1, 4 L → 15:1, 7 L → 12:1, 3 L → 9:1, 7 L → 6:1, 2 L → 3:1, 4 L → 1:1, 6 L)를 실시하여, 32개의 분획물 (ORE-1 내지 ORE-32)을 얻었다. ORE3 분획을 (2 g, Ve/Vt=0.01 - 0.02 ; Ve 해당 분획 용출용매의 부피; Vt 용출에 사용한 전체 용출용매의 부피) silica gel c.c. (φ5.0× 14.0 cm, n-hexane-에틸 아세테이트=27:1, 2 L)를 실시하여 15개의 분획물(ORE-3-1 내지 ORE-3-15)를 얻었다. 그 중, ORE-3-7분획 (130 mg, Ve/Vt 0.06 내지 0.11)에 대하여 ODS c.c. (φ3.0 × 7.0cm, acetone-acetonitrile-H2O=5:5:2, 1.2 L)를 실시하여 17개의 분획물 (ORE-3-7-1 내지 ORE-3-7-17)을 얻었으며, 화합물 2 [ORE-3-7-8, 10.7 mg, Ve/Vt 0.16 내지 0.37, TLC (RP-18 F254s) Rf 0.20, acetone-acetonitrile-H2O = 3:3:1]를 분리하였다. ORE-12분획 (692mg, Ve/Vt 0.19 to 0.21) 에 대하여 ODS c.c. (φ 4 X 8 cm, acetone-acetonitrile-H2O=1:1:4, 2.0 L → 1:1:2, 1.0 L)를 실시하여 25개의 분획물 (ORE-12-1 내지 ORE-12-25)을 얻었다. ORE-12-8분획 (100 mg, Ve/Vt 0.30 내지 0.34)에 대하여 Sephadex LH-20 c.c. (φ1.5 X 56.0 cm, MeOH-H2O=9:1, 0.8 L)를 실시하여 8개의 분획물 (ORE-12-8-1 내지 ORE-12-8-8)을 얻었고, ORE-12-8-3분획을 (2 g, Ve/Vt=0.43 내지 0.48) silica gel c.c. (φ3.0 X 12.0 cm, CHCl3-MeOH=40:1, 0.7 L)를 실시하여 13개의 분획물(ORE-12-8-3-1 내지 ORE-12-8-3-13)를 얻었다. ORE-12-8-3-4분획(32mg, Ve/Vt=0.15 내지 0.25)에 대하여 silica gel c.c. (φ2.5 X 10.5 cm, n-hexane-에틸 아세테이트=8:1, 0.8 L)를 실시하여 12개의 분획물(ORE-12-8-3-4-1 내지 ORE-12-8-3-4-12)를 얻었고, 화합물 5 [ORE-12-8-3-4-2, 2.7 mg, Ve/Vt 0.06 to 0.20, TLC (SiO2 F254) Rf 0.67, n-hexane-에틸 아세테이트 = 3:1] 와 화합물 4 [ORE-12-8-3-4-10, 4.9 mg, Ve/Vt 0.63 to 0.89, TLC (SiO2 F254) Rf 0.23, n-hexane-에틸 아세테이트 = 3:1]를 분리하였다. 또한 ORE-14 분획 (1.9 g, Ve/Vt 0.22 내지 0.27)에 대하여 ODS c.c. (φ 4.5 X 12.0 cm, acetone-acetonitrile-H2O=1:1:4, 2.0 L → 3:3:2, 1.2 L)를 실시하여 20개의 분획물 (ORE-14-1 내지 ORE-14-20)을 얻었고, 그 중 ORE-14-6 분획(93mg, Ve/Vt 0.49 내지 0.58)을 silica gel c.c. (φ3.0 X 17.0 cm, CHCl3-MeOH=45:1, 1.0 L)를 실시하여 12개의 분획물(ORE-14-6-1 내지 ORE-14-6-12)를 얻었으며, 화합물 1 [ORE-14-6-3, 35 mg, Ve/Vt 0.13 내지 0.15, TLC (SiO2 F254) Rf 0.60, CHCl3-MeOH = 20:1]을 분리하였다. ORE-20분획 (596 mg, Ve/Vt 0.34~0.41)에 대하여 ODS c.c. (φ3.0 X 5.0 cm, acetone-acetonitrile-H2O=2:2:7, 1.8 L)를 실시하여 17개의 분획물 (ORE-20-1 내지 ORE-20-17)을 얻었고, 그 중 ORE-20-2 분획(127 mg, Ve/Vt 0.05~0.07)을 silica gel c.c. (φ3.5 X 12.0 cm, CHCl3-MeOH=35:1, 1.5 L)를 실시하여 17개의 분획물(ORE-20-2-1 내지 ORE-20-2-17)를 얻었으며, 화합물 3 [ORE-20-2-8, 4.5 mg, Ve/Vt 0.24 내지 0.33, TLC (SiO2 F254) Rf 0.29, CHCl3-MeOH = 19:1]을 분리하였다.
To 38 g of the ethyl acetate fraction (ie, Example 2) was added silica gel column chromatography (cc) (φ 11.5 × 13.0 cm, n-hexane-ethyl acetate = 7: 1, 8 L → 5: 3: 1, 17 L → 1: 1, 10 L → CHCl 3 -MeOH = 17: 1, 4 L → 15: 1, 7 L → 12: 2 L? 3: 1, 4 L? 1: 1, 6 L) to obtain 32 fractions (ORE-1 to ORE-32). Ore3 fraction (2 g, Ve / Vt = 0.01 - 0.02; volume of the fraction eluting solvent; volume of the total eluting solvent used for elution of Vt) silica gel cc (φ 5.0 × 14.0 cm, n-hexane-ethyl acetate = 27: 1, 2 L) to obtain 15 fractions (ORE-3-1 to ORE-3-15). ODS cc (φ3.0 × 7.0 cm, acetone-acetonitrile-H2O = 5: 5: 2, 1.2 L) was applied to the ORE-3-7 fraction (130 mg, Ve / Vt 0.06 to 0.11) 17 fractions (ORE-3-7-1 to ORE-3-7-17) were obtained. Compound 2 [ORE-3-7-8, 10.7 mg, Ve / Vt 0.16-0.37, TLC F254s) Rf 0.20, acetone-acetonitrile-H2O = 3: 3: 1]. ODS cc (
분리된 Isolated 다이터펜Dieter Pen 화합물들의 확인 Identification of compounds
상기 분리한 화합물들에 대하여 NMR, MS, 및 IR 을 측정하여 구조를 동정하였다. 그 결과, 화합물 1, 2, 및4는 각각 이미 알려진 화합물인 모밀락톤(momilactone) A, 산다라코피마라디엔-3-온(sandaracopimaradien-3-one), 및 오리잘렉신(oryzalexin) A로 확인되었고, 화합물 3 및 5는 신규 화합물로 확인되었다.NMR, MS, and IR were measured on the separated compounds to identify the structure. As a result, compounds 1, 2, and 4 were identified as previously known compounds, momilactone A, sandaracopimaradien-3-one, and oryzalexin A, respectively , Compounds 3 and 5 were identified as novel compounds.
화합물 1은 IR스펙트럼에서 락톤(1770 cm-1), 케톤(1700 cm-1), 및 이중결합(1640 cm-1)의 흡수를 확인하였다. EI/MS 스펙트럼에서 314의 이온 피크가 확인되어 분자량을 314로 결정하였다. 1H-NMR에서 한 개의 vinyl signal[δH5.79 (1H, dd, J = 17.6, 10.8 Hz, H-15), 4.92 (1H, dd, J = 17.6, 1.2 Hz, H-16a), 및 4.87 (1H, dd, J = 10.8, 1.2 Hz, H-16b)], 한 개의 olefin methine signal[δH5.64 (1H, d, J = 5.2 Hz, H-7)], 한 개의 oxygenated methine signal[δH 4.79 (1H, dd, J = 5.8, 5.2 Hz, H-6)]을 확인하였다. 고자장 영역에서는 세 개의 methyl signal[δH1.49 (3H, s, H-18), 1.25 (3H, s, H-20), 및 0.83 (3H, s, H-17)]이 관측되었고, δH 2.54 내지 1.27 부근에서 다수의 methine과 methylene signal이 관측되었다. 13C-NMR에서 20개의 signal이 관측되어 다이터페노이드(diterpenoid)임을 예상하였다. 저자장 영역에서 케톤[δC 205.1 (C-3)], 락톤[δC 174.2 (C-19)], olefin quaternary[δC 147.9 (C-8)], olefin methyelene[δC 110.0 (C-16)], oxygenated methine[δC 73.0 (C-6)] signal이 하나씩 관측되었고, 두 개의olefin methine [δC 148.8 (C-15) 및 113.8 (C-7)]이 관측되었다. 고자장 영역에서는 세 개의quaternary[δC 53.4 (C-4), 39.9 (C-13), 및 32.3 (C-10)], 두 개의 methine[δC 50.0 (C-9) 및 46.2 (C-5)], 다섯 개의 methylene[47.4 (C-14), 37.1 (C-12), 34.7 (C-2), 31.0 (C-1), 및 23.8 (C-11)], 세 개의 methyl[δC 21.8 (C-17), 21.6 (C-20), 및 21.3 (C-18)] signal이 관측되었다. 이상의 결과로부터 화합물 1은 ketone 하나와 lactone 하나, 그리고 이중결합 두 쌍을 포함하는 pimarane 타입의 diterpenoid로 결정되었다.
gCOSY에서 δH 4.79 (H-6) 의 oxygenated methine proton signal이 δH5.64 (H-7)의 olegin methine proton signal 및 δH2.29 (H-5)의 methine proton signal과 cross peak를 보였다. gHMBC에서는 ketone carbon signal C-3 (δC 205.1)이 methyl proton signal H-18 (δH 1.49) 및 methylene proton signal H-1 (δH 1.85)과 cross peak를 보였고, lactone C-19 (δC 174.2)이 H-18, methine proton signal H-5 (δH 2.29)과 cross peak를 보였다. H-18이 quaternary carbon signal인 C-4 (δC 53.4) 및 C-5 (δC 46.2)와 cross peak를 보였고, methyl proton signal인 H-20 (δH 1.25)이 C-5 및 methine carbon signal인 C-9 (δC 50.0)과 cross peak를 보였다. 또한 methyl proton signal인 H-17 (δH 0.83)이 methylene carbon signal인 C-12 (δC 37.1), olefin methine carbon signal인 C-15 (δC 148.8), 그리고 methylene carbon signal인 C-14(δC 47.4)과 cross peak를 보여 methyl 기들의 결합 위치를 확인하였다[C-17 (δC 21.8), C-18 (δC 21.3), 및 C-20 (δC 21.6)]. H-7 (δH 5.64)이 C-6 (δC 73.0) 및 C-9와 cross peak를 보였으며, H-17이 C-15과 olefin methylene proton signal인 H-16 (δH 4.92 and 4.87)은 quaternary carbon signal C-13 (δC 39.9)과 cross peak를 보여 두 쌍의 이중결합이 C-7과 C-8, 그리고 C-15과 C-16에 위치하는 것을 확인하였다. 상기 결과들로부터 화합물 1은 모밀락톤(momilactone) A로 구조동정하였다.
The oxygenated methine proton signal of δ H 4.79 (H-6) in gCOSY showed the proline signal of δ H 5.64 (H-7) and the proline signal and cross peak of δH2.29 (H-5). In the gHMBC, the ketone carbon signal C-3 (δC 205.1) showed a cross peak with the methyl proton signal H-18 (δH 1.49) and methylene proton signal H-1 (δH 1.85), while the lactone C-19 (δC 174.2) -18, and methine proton signal H-5 (δH 2.29). H-18 showed cross peaks with the quaternary carbon signals C-4 (δC 53.4) and C-5 (δC 46.2) and the methyl proton signal H-20 (δH 1.25) with C-5 and methine carbon signal C -9 (δC 50.0) and cross peak. The methyl proton signal H-17 (δH 0.83) was the methylene carbon signal C-12 (δC 37.1), the olefin methine carbon signal C-15 (δC 148.8), and the methylene carbon signal C-14 (δC 47.4) C-18 (δC 21.3), and C-20 (δC 21.6)] of the methyl groups. H-16 (δH 4.92 and 4.87) H-17 (δH 5.64) showed a cross peak with C-6 (δC 73.0) and C-9, while H-17 and olefin methylene proton signals of H- carbon signal C-13 (δC 39.9) and a cross peak, indicating that two pairs of double bonds are located at C-7 and C-8, and at C-15 and C-16. From the above results,
한편, 화합물 3은 IR 스펙트럼에서 수산기 (3374 cm-1), lactone (1767 cm-1), ketone (1699 cm-1), 및 이중결합 (1647 cm-1)의 흡수를 보였고, EI/MS 스펙트럼에서 330의 ion peak가 관측되어 분자량을 330으로 결정하였다. 분자식은 high resolution EI/MS (calcd. 330.1832, for C20H26O4)에서 330.1833의 ion peak가 관측되어 C20H26O4로 결정하였다. 화합물 3의 NMR data 양상이 화합물 1과 매우 유사하였고, δC 74.4에서 oxygenated quaternary carbon signal이 하나 더 관측되었다. gHMBC에서 methyl proton signal인 H-18 (δH 1.64)이 ketone carbon signal인 C-3 (δC 204.9), quaternary carbon signal인 C-4 (δC 54.7), methine carbon signal인 C-5 (δC 48.4), 및 lactone carbon signal인 C-19 (δC 174.8)과 cross peak를 보였으며, methyl proton signal인 H-20 (δH 1.32)이 methylene carbon signal인 C-1 (δC 27.8), C-5, oxygenated quaternary carbon signal인 C-9 (δC 74.4), 및 quaternary carbon signal인 C-10 (δC 38.0)과 cross peak를 보여 수산기가 C-9에 결합한 것을 확인하였다. 따라서 화합물 3은 신규 화합물인 3-옥소-9베타=하이드록시피마라-7,15-디엔-19,6베타-올라이드(3-oxo-9β-hydroxypimara-7,15-dien-19,6β-olide)로 구조동정하였고, 모밀락톤(momilactone) D로 명명하였다.
한편 화합물 5의 IR 스펙트럼에서 hydroxyl (3620 cm-1), ketone (1705 cm-1), 및 이중결합 (1614 cm-1)의 흡수를 확인하였다. 분자식은 high resolution EI/MS (calcd. 288.2089 for C19H28O2)에서 관측된 288.2085의 ion peak로부터 C19H28O2로 결정하였다. 화합물 5의 NMR data 양상이 화합물 1과 매우 유사하여 pimarane 타입임을 예상하였다. gCOSY에서 oxygenated methine proton signal인 δH 5.48 (H-6)이 olefin methine proton signal인 at δH 5.70 (H-7) 및 methine proton signal인 δH 1.75 (H-5)과 cross peak를 보였고, H-5는 methine proton signal인 δH 2.63 (H-4)과 cross peak를 보여 부분 구조를 확인하였다. gHMBC에서 methyl proton signal인 H-18 (δH 1.10)이 ketone carbon signal인 C-3 (δC 211.2)과, H-6 (δH 5.48)이 olefin quaternary carbon signal인 C-8 (δC 144.8)과 cross peak를 보여 ketone (C-3)과 수산기(C-6)의 결합 위치를 확인하였다. 또한, H-18이 C-5 (δC 46.1)와, methyl proton signal인 H-20 (δH 1.28)이 methylene carbon signal인 C-1 (δC 36.8), C-5, 및 methine carbon signal인 C-9 (δC 50.5)과 cross peak를 보였고, methyl proton signal인 H-17 (δH 0.82)이 methylene carbon signal인 C-12 (δC 37.4), olefin methine carbon signal인 C-15 (δC 149.7), 및 methylene carbon signal인 C-14 (δC 47.7)과 cross peak를 보여 methyl기의 결합 위치를 확인하였다[C-17 (δC 21.8), C-18 (δC 11.5), 및 C-20 (δC 22.3)]. H-7 (δH 5.70)이 C-5 및 C-9과, methylene proton signal인 H-14 (δH 2.05 및 1.89)이 C-7 (δC 117.2), C-9, C-12 (δC 37.4), 및 C-17과, H-17이 C-12, C-14, 및 C-15과 cross peak를 보여 이중결합의 위치를 C-7과 C-8 및 C-15과 C-16으로 결정하였다. 이 화합물의 입체 구조는 6번을 제외한 모든 chiral carbon의 chemical shift와 coupling pattern으로부터 모밀락톤(momilactone) A (화합물 1)과 3,6-dioxo-19-nor-9β-pimara-7,15-diene임을 확인하였다. NOESY에서 H-18인 δH1.10이 H-5인δH 1.75, H-6인 δH 5.48과 cross peak를 보여 C-6 수산기가 β결합을 한 것을 확인하였다. 따라서 화합물 5는 신규 노르다이터펜(norditerpene) 화합물인 3-옥소-6베타-하이드록시-19-노르-9베타-피마라-7,15-디엔(3-oxo-6β-hydroxy-19-nor-9β-pimara-7,15-diene)으로 구조동정하였으며, 모밀락톤(momilactone) E로 명명하였다.
On the other hand, the absorption of hydroxyl (3620 cm -1 ), ketone (1705 cm -1 ), and double bonds (1614 cm -1 ) in the IR spectrum of
한편, 화합물 2는 IR 스펙트럼에서 ketone (1706 cm-1)과 이중결합 (1633 cm-1)의 흡수를 확인하였다. EI/MS에서 286의 ion peak가 관측되어 분자량을 286으로 결정하였다. 1H-NMR에서 한 개의 vinyl proton signal [δH5.84 (1H, dd, J = 17.6, 10.8 Hz, H-15), 4.99 (1H, dd, J = 17.6, 1.2 Hz, H-16a), 및 4.97 (1H, dd, J = 10.8, 1.2 Hz, H-16b)], 한 개의 olefin methine proton signal [δH5.35 (1H, br s, H-14)], 그리고 네 개의 methyl proton signal[δH1.13 (3H, s, H-19), 1.09 (3H, s, H-17), 0.99 (3H, s, H-18), 및 0.89 (3H, s, H-20)]이 관측되었다. δH 2.60 내지 0.80의 범위에서 다수의 methine과 methylene proton signal이 관측되었다. 13C-NMR에서 20개의 carbon signal이 관측되어 화합물 2는 디터페노이드(diterpenoid)로 예상하였다. 저자장 영역에서 한 개의 ketone[δC 215.2 (C-3)], 한 개의 olefin quaternary[δC 136.44 (C-8)], 두 개의 olefin methane[δC 148.9 (C-15), 129.7 (C-14)], 그리고 한 개의 olefin methylene[δC 110.7 (C-16)] carbon signal이 관측되었다. 고자장 영역에서는 세 개의 quaternary[δC 47.8 (C-4), 38.2 (C-13), 및 37.8 (C-10)], 두 개의methane[δC 55.4 (C-5) 및 49.5 (C-9)], 여섯 개의 methylene[δC 37.6 (C-1), 35.8 (C-7), 34.8 (C-2), 34.4 (C-12), 23.5 (C-6), 및 19.2 (C-11)], 그리고 네 개의 methyl[δC 26.4 (C-17), 26.1 (C-19), 22.2 (C-18), 및 14.6 (C-20)] carbon signal이 관측되었다. 이상의 결과로부터 화합물 2는 한 개의 ketone과 두쌍의 double bond를 포함하는 diterpenoid임을 확인하였다. gHMBC에서 ketone carbon signal인 C-3 (δC 215.2)이 두 개의 methyl proton signal인 H-18 (δH 0.99), H-19 (δH 1.13)과 cross peak를 보여 ketone의 결합 위치를 결정하였다. H-18과 H-19가 quaternary carbon signal인 C-4 (δC 47.8) 및 methine carbon signal인 C-5 (δC 55.4)과 cross peak를 보였고, methyl proton signal인 H-20 (δH 0.89)이 C-5, methine carbon signal인 C-9 (δC 49.5), 그리고 quaternary carbon signal인 C-10 (δC 37.8)과 cross peak을 보였으며, olefin methine proton signal인 H-14 (δH5.35)가 methyl carbon signal인 C-17 (δC 26.4)과 cross peak를 보였고, olefin methine proton signal인 H-15 (δH5.84)가 C-17과 cross peak를 보여 methyl기의 결합 위치를 결정하였다[C-17(δC 26.4), C-18 (δC 22.2), C-19 (δC 26.1), 및 C-20 (δC 14.6)]. 또한 H-14가 C-9, C-15 (δC 148.9), 및 C-17과 cross peak를 보였고, H-15가 C-14 (δC 129.7) 그리고 C-17과 cross peak를 보여 이중결합이 C-8과 C-14, 그리고 C-15와 C-16에 위치하는 것을 결정하였다. 화합물 2의 정확한 구조결정을 위하여 oryzalexin A와의 CD 스펙트럼을 비교하였다. 화합물 2는 positive (203 nm)와 negative (247 nm) Cotton effect를 보이는 반면에 oryzalexin A는 negative (207 nm)와 positive (255 nm) Cotton effects를 보여 화합물 2와 oryzalexin A는 정반대의 구조를 가지는 것으로 확인되었다. 상기 결과들을 종합한 결과, 화합물 2는 피마란(pimarane) 타입의 다이터페노이드(diterpenoid)인 산다라코피마라디엔-3-온(sandaracopimaradien-3-one)으로 구조동정하였다.
한편, 화합물 4는 IR 스펙트럼에서 수산기(3353 cm-1), conjugated ketone (1685 cm-1), 그리고 이중결합 (1611 cm-1)의흡수를 확인하였다. EI/MS에서 302의 ion peak가 관측되어 분자량을 302로 결정하였다. 화합물 4의 NMR 데이터 양상이 화합물 2와 매우 유사하였고, ketone(δC 207.2)과 수산기(δH 3.28, δC80.5)의 결합 위치가 다른 것을 확인하였다. gHMBC에서 methyl proton signal인 H-18 (δH 0.85) 및 H-19 (δH 0.96)이 hydroxyl carbon signal인 C-3 (δC 80.5)과 cross peak를 보여 hydroxyl group 이C-3에 결합하는 것을 결정하였다. 또한 methylene proton signal인 H-6 (δH 2.54 and 2.34)이 ketone carbon signal인 C-7 (δC 207.2)과 cross peak를 보여 ketone이 C-7에 결합한 것을 확인하였다. 그리고, olefin methine proton signal인 H-14 (δH 6.71)이 methine carbon signal인 C-9, methylene carbon signal인 C-12, 그리고 olefin methine carbon signal인 C-15과cross peak를 보였고, methyl proton signal인 H-17이 C-14 그리고 C-15와 cross peak를 보였으며 olefin methylene carbon signal인 H-16 (δH 4.98 및 4.96)이 quaternary carbon signal인 C-13 (δC 38.7)과 cross peak를 보여 두 쌍의 이중결합이 C-8과 C-14, 그리고 C-15와 C-16에 위치하는 것을 결정하였다. 따라서 화합물 4는 오리잘렉신(oryzalexin) A로 구조동정하였다.
On the other hand,
<화합물 1>≪
<화합물 2><
<화합물 3><
<화합물 4><
<화합물 5><
상기 화합물 1 내지 5의 분광학적 특징The spectroscopic characteristics of the
모밀락톤Marmalade lactone (( momilactonemomilactone A) (화합물 1) A) (Compound 1)
무색 결정(Colorless crystals)(CHCl3); [α]20D -275° (c 1.0, CHCl3); EI/MS m/z 314 [M]+; IR (KBr, ν, cm-1) 1770, 1700, 1665, 1640;1H NMR (400 MHz, CDCl3, δH) 5.79 (1H, dd, J = 17.6, 10.8 Hz, H-15), 5.64 (1H, d, J = 5.8 Hz, H-7), 4.92 (1H, dd, J = 17.6, 1.2 Hz, H-16a), 4.87 (1H, dd, J = 10.8, 1.2 Hz, H-16b), 4.79 (1H, dd, J = 5.8, 5.2 Hz, H-6), 2.54 (2H, m, H-2), 2.29 (1H, d, J = 5.2 Hz, H-5), 2.15 (1H, br d, J = 12.0 Hz, H-14a), 1.99 (1H, br d, J = 12.0 Hz, H-14b), 1.85 (1H, m, H-1a), 1.72 (1H, m, H-9), 1.69 (1H, m, H-11a), 1.56 (1H, m, H-1b), 1.53 (2H, m, H-12), 1.49 (3H, s, H-18), 1.27 (1H, m, H-11b), 1.25 (3H, s, H-20), 0.83 (3H, s, H-17). 13C NMR (100 MHz, CDCl3, δC) 205.1 (C-3),174.2 (C-19), 148.8 (C-15), 147.9 (C-8), 113.8 (C-7), 110.0 (C-16), 73.0 (C-6), 53.4 (C-4), 50.0 (C-9), 47.4 (C-14), 46.2 (C-5), 39.9 (C-13), 37.1 (C-12), 34.7 (C-2), 32.3 (C-10), 31.0 (C-1), 23.8 (C-11), 21.8 (C-17), 21.6 (C-20), 21.3 (C-18).
Colorless crystals (CHCl3); [[alpha]] D < 20 > -275 [deg.] (c 1.0, CHCl3); EI / MS m / z 314 [M] < + >; IR (KBr, ν, cm -1 ) 1770, 1700, 1665, 1640; 1H NMR (400 MHz, CDCl3, δH) 5.79 (1H, dd, J = 17.6, 10.8 Hz, H-15), 5.64 (1H, d, J = 5.8 Hz, H-7), 4.92 (1H, dd, J = 17.6,1.2 Hz, H-16a), 4.87 (2H, m, H-2), 2.29 (1H, d, J = 5.2 Hz, H-5), 2.15 (1H, br d, (1H, m, H-9), 1.69 (1H, m, H-12) (1H, m, H-11), 1.56 (1H, m, H-1b), 1.53 -11b), 1.25 (3H, s, H-20), 0.83 (3H, s, H-17). C-15, C-14, C-14, C-13, C-17, C- ), 73.0 (C-6), 53.4 (C-4), 50.0 (C-9), 47.4 (C-14), 46.2 , 34.7 (C-2), 32.3 (C-10), 31.0 (C-1), 23.8 (C-11), 21.8 (C-17), 21.6 (C-20), 21.3 (C-18).
산다라코피마라디엔Sandarakopi Mara Dien -3-온(3-one ( sandaracopimaradiensandaracopimaradien -3--3- oneone ) (화합물 2)) (Compound 2)
흰색 분말(White powder)(CHCl3); [α]32D +2.4° (c 0.2, MeOH); EI/MS m/z 286 [M]+;IR (KBr, ν, cm-1) 1706, 1633;1H NMR (400 MHz, C5D5N, δH) 5.84 (1H, dd, J = 17.6, 10.8 Hz, H-15), 5.35 (1H, br s, H-14), 4.99 (1H, dd, J = 17.6, 1.2 Hz, H-16a), 4.97 (1H, dd, J = 10.8, 1.2 Hz, H-16b), 2.60 (1H, ddd, J = 15.2, 14.0, 6.0 Hz, H-2a), 2.31 (1H, ddd, J = 15.2, 4.4, 4.4 Hz, H-2b), 1.13 (3H, s, H-19), 1.09 (3H, s, H-17), 0.99 (3H, s, H-18), 0.89 (3H, s, H-20). 13C NMR (100 MHz, C5D5N, δC) 215.2 (C-3), 148.9 (C-15),136.44 (C-8), 129.7 (C-14), 110.7 (C-16), 55.4 (C-5), 49.5 (C-9), 47.8 (C-4), 38.2 (C-13), 37.8 (C-10), 37.6 (C-1), 35.8 (C-7), 34.8 (C-2), 34.4 (C-12), 26.4 (C-17), 26.1 (C-19), 23.5 (C-6), 22.2 (C-18), 19.2 (C-11), 14.6 (C-20).
White powder (CHCl3); [α] 32 D + 2.4 ° (c 0.2, MeOH); EI / MS m / z 286 [M] +; IR (KBr,?, Cm -1 ) 1706, 1633; 1 H NMR (400 MHz, C5D5N, H-16b), 4.97 (1H, d, J = 10.8, 1.2 Hz, H-16b) ), 2.60 (1H, ddd, J = 15.2,14.0,6.0 Hz, H-2a), 2.31 (1H, ddd, J = 15.2, 4.4, 4.4 Hz, H- 19), 1.09 (3H, s, H-17), 0.99 (3H, s, H-18), 0.89 (3H, s, H-20). (C-15), 136.44 (C-8), 129.7 (C-14), 110.7 (C-16), 55.4 (C-5) ), 49.8 (C-9), 47.8 (C-4), 38.2 (C-13), 37.8 , 34.4 (C-12), 26.4 (C-17), 26.1 (C-19), 23.5 (C-6), 22.2 (C-18), 19.2 (C-11), 14.6 (C-20).
모밀락톤Marmalade lactone D( D ( momilactonemomilactone D)(화합물 3) D) (Compound 3)
흰색 분말 (CHCl3-MeOH); [α]27 D -57.1° (c 0.46, pyridine); HREI/MS m/z 330.1833 [M]+ (calcd. for C20H26O4, 330.1831); IR (KBr, ν, cm-1) 3374, 2918, 2345, 1767, 1699, 1647, 1187;1H NMR (400 MHz, C5D5N, δH) 5.94 (1H, dd, J = 17.2, 10.4 Hz, H-15), 5.81 (1H, d, J = 5.2 Hz, H-7), 5.04 (1H, dd, J = 17.2, 1.2 Hz, H-16a), 5.00 (1H, dd, J = 5.2, 5.2 Hz, H-6), 4.93 (1H, dd, J = 10.4, 1.2 Hz, H-16b), 3.18 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-14a), 2.73 (1H, d, J = 5.2 Hz, H-5), 2.63 (1H, ddd, J = 10.4, 8.4, 4.0 Hz, H-2a), 2.62 (1H, br d, J = 10.4 Hz, H-2b), 2.40 (1H, ddd, J = 13.2, 5.2, 4.8 Hz, H-12a), 1.99 (1H, m, H-1a), 1.89 (1H, m, H-1b), 1.83 (1H, m, H-11a), 1.78 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-14b), 1.72 (1H, br dd, J = 13.2, 4.8 Hz, H-11b), 1.64 (3H, s, H-18), 1.37 (1H, m, H-12b), 1.32 (3H, s, H-20), 0.94 (3H, s, H-17). 13C NMR (100 MHz, C5D5N, δC) 204.9 (C-3),174.8 (C-19), 149.7 (C-15), 149.6 (C-8), 116.9 (C-7), 110.0 (C-16), 74.4 (C-9), 72.5 (C-6), 54.7 (C-4), 48.4 (C-5), 43.1 (C-14), 40.3 (C-13), 38.0 (C-10), 35.3 (C-2), 32.8 (C-12), 30.0 (C-11), 27.8 (C-1), 21.9 (C-17), 21.2 (C-18), 17.3 (C-20).
White powder (CHCl3-MeOH); [α] 27 D -57.1 ° ( c 0.46, pyridine); HREI / MS m / z 330.1833 [M] + (calcd. For C20H26O4, 330.1831); (KB, v, cm -1 ) 3374, 2918, 2345, 1767, 1699, 1647, ), 5.81 (1H, d, J = 5.2 Hz, H-7), 5.04 (1H, dd, J = 17.2,1.2 Hz, H- D, J = 10.2 Hz, H-16b), 3.18 (1H, d, J = 11.2 Hz, H-14a), 2.73 (1H, ddd, J = 13.2, 1H), 2.63 (1H, ddd, J = (1H, m, H-1b), 1.83 (1H, m, H-11a), 1.78 H-12b), 1.37 (1H, m, H-12b), 1.72 (1H, br dd, J = 11.2 Hz, H- , 1.32 (3H, s, H-20), 0.94 (3H, s, H-17). C-15), 149.6 (C-8), 116.9 (C-7), 110.0 (C-16) ), 74.4 (C-9), 72.5 (C-6), 54.7 (C-4), 48.4 , 35.3 (C-2), 32.8 (C-12), 30.0 (C-11), 27.8 (C-1), 21.9 (C-17), 21.2 (C-18), 17.3 (C-20).
오리잘렉신Dorydalin A( A ( oryzalexinoryzalexin A)(화합물 4) A) (Compound 4)
흰색 분말 (CHCl3); [α]25 D +20° (c 0.13, MeOH); EI/MS m/z 302 [M]+, 164; IR (KBr, ν, cm-1) 3353, 1685, 1611;1H NMR (400 MHz, CDCl3, δH) 6.71 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-14), 5.78 (1H, dd, J = 17.6, 10.8 Hz, H-15), 4.98 (1H, dd, J = 17.6, 1.2 Hz, H-16a), 4.96 (1H, dd, J = 10.8, 1.2 Hz, H-16b), 3.28 (1H, dd, J = 11.6, 4.0 Hz, H-3), 2.54 (1H, dd, J = 18.8, 5.2 Hz, H-6a), 2.34 (1H, dd, J = 18.8, 13.2 Hz, H-6b), 1.99 (1H, m, H-9), 1.80 (1H, ddd, J = 13.2, 3.6, 3.2 Hz, H-1a), 1.72 (1H, m, H-11a), 1.68 (1H, m, H-2a), 1.63 (1H, m, H-2b), 1.59 (1H, m, H-12a), 1.49 (1H, m, H-5), 1.46 (1H, m, H-12b), 1.41 (1H, m, H-11b), 1.28 (1H, m, H-1b), 1.08 (3H, s, H-17), 0.96 (3H, s, H-19), 0.85 (3H, s, H-18), 0.82 (3H, s, H-20). 13C NMR (100 MHz, CDCl3, δC) 207.2 (C-7),146.3 (C-15), 144.5 (C-14), 134.7 (C-8), 111.8 (C-16), 80.5 (C-3), 50.6 (C-9), 49.5 (C-5), 38.9 (C-4), 38.7 (C-13), 36.8 (C-1, 6), 35.8 (C-10), 33.9 (C-12), 27.4 (C-19), 27.3 (C-2), 25.8 (C-17), 19.1 (C-11), 14.6 (C-18), 13.8 (C-20).
White powder (CHCl 3); [?] 25 D +20 (c 0.13, MeOH); EI / MS m / z 302 [M] < + >,164; IR (KBr, ν, cm -1 ) 3353, 1685, 1611; 1H NMR (400 MHz, CDCl3, δH) 6.71 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-14), 5.78 (1H, dd, J = (1H, dd, J = 10.8, 1.2 Hz, H-16b), 3.28 (1H, dd, J = 11.6, 4.0 Hz, H-3), 2.54 (1H, dd, J = 18.8, 5.2 Hz, H- M, H-11a), 1.68 (1H, m, H-9), 1.80 (1H, ddd, J = 13.2, 3.6, 3.2 Hz, H- M, H-2b), 1.59 (1H, m, H-12a), 1.49 H-11b), 1.28 (1H, m, H-1b), 1.08 (3H, s, H-17), 0.96 ), 0.82 (3H, s, H-20). (C-15), 144.5 (C-14), 134.7 (C-8), 111.8 (C-16), 80.5 ), 50.6 (C-9), 49.5 (C-5), 38.9 (C-4), 38.7 12), 27.4 (C-19), 27.3 (C-2), 25.8 (C-17), 19.1 (C-11), 14.6 (C-18), 13.8 (C-20).
모밀락톤Marmalade lactone E( E ( momilactonemomilactone E)(화합물 5) E) (Compound 5)
노란색 무정형 분말(Yellow amorphous powder)(CHCl3); [α]27 D-101°(c 0.18, MeOH); HREI/MS m/z 288.2085 [M]+ (calcd. for C19H28O2, 288.2089); IR (KBr, ν, cm-1) 3620, 1705, 1614;1H NMR (400 MHz, C5D5N, δH) 5.84 (1H, dd, J = 17.6, 10.8 Hz, H-15), 5.70 (1H, d, J = 5.2 Hz, H-7), 5.48 (1H, dd, J = 5.2, 5.2 Hz, H-6), 4.99 (1H, dd, J = 17.6, 1.2 Hz, H-16a), 4.95 (1H, dd, J = 10.8, 1.2 Hz, H-16b), 2.63 (1H, dq, J = 11.6, 6.8 Hz, H-4), 2.58 (1H, ddd, J = 15.2, 13.6, 5.2 Hz, H-2a), 2.38 (1H, ddd, J = 15.2, 3.6, 3.2 Hz, H-2b), 2.05 (1H, d, J = 12.0 Hz, H-14a), 1.89 (1H, d, J = 12.0 Hz, H-14b), 1.75 (1H, dd, J = 11.6, 5.2 Hz, H-5), 1.67 (1H, m, H-9), 1.28 (3H, s, H-20), 1.10 (3H, d, J = 6.8Hz, H-18), 0.82 (3H, s, H-17). 13C NMR (100 MHz, C5D5N, δC) 211.2 (C-3),149.7 (C-15), 144.8 (C-8), 117.2 (C-7), 110.3 (C-16), 67.7 (C-6), 50.5 (C-9), 47.7 (C-14), 46.1 (C-5), 41.9 (C-4), 39.8 (C-13), 37.9 (C-2), 37.4 (C-12), 36.8 (C-1), 34.0 (C-10), 24.3 (C-11), 22.3 (C-20), 21.8 (C-17), 11.5 (C-18).
Yellow amorphous powder (CHCl3); [α] 27 D -101 ° ( c 0.18, MeOH); HREI / MS m / z 288.2085 [M] + (calcd for C19H28O2, 288.2089); IR (KBr, ν, cm -1 ) 3620, 1705, 1614; 1H NMR (400 MHz, C5D5N, δH) 5.84 (1H, dd, J = 17.6, 10.8 Hz, H-15), 5.70 (1H, d, J = 5.2 Hz, H-7), 5.48 (1H, dd, J = 5.2, 5.2 Hz, H-6), 4.99 (1H, dd, J = dd, J = 10.8,1.2 Hz, H-16b), 2.63 (1H, dq, J = 11.6, 6.8 Hz, H-4), 2.58 (1H, d, J = 12.0 Hz, H), 2.38 (1H, ddd, J = 15.2,3.6,3.2 Hz, H- (1H, d, J = 11.6, 5.2 Hz, H-5), 1.67 J = 6.8 Hz, H-18), 0.82 (3H, s, H-17). (C-15), 144.8 (C-8), 117.2 (C-7), 110.3 (C-16), 67.7 (C-6) ), 37.9 (C-2), 37.4 (C-12), 50.9 (C-9) , 36.8 (C-1), 34.0 (C-10), 24.3 (C-11), 22.3 (C-20), 21.8 (C-17), 11.5 (C-18).
<실험예 1> 벼 뿌리 추출물/분획물의 산화질소 생성 및 세포 독성 평가<Experimental Example 1> Nitric oxide production and cytotoxicity evaluation of rice root extract / fraction
상기 실시예 1 내지 5의 벼 뿌리 메탄올 추출물 및 분획물들이 LPS로자극된 RAW264.7 세포의 산화질소 생성에 미치는 영향을 분석하였다. 이를 위하여 다양한 농도의 시료들을 준비하여 실험을 진행하였다.
The effects of methanol extracts and fractions of rice seeds of Examples 1 to 5 on the production of nitric oxide in LPS-stimulated RAW264.7 cells were analyzed. For this purpose, various concentrations of samples were prepared and tested.
그 결과, 벼 뿌리 메탄올추출물 (실시예 1)과 에틸 아세테이트 분획물 (실시예 2)에서 가장 강한 산화질소 생성 저해 효과가 나타났다(도 1). 또한 실시예 1 및 실시예 2는 산화질소 생성을 강하게 저해하는 농도에서도 80% 이상의 세포 생존률을 나타내었다(도 2). 이로써, 상기 산화질소 생성 저해활성이 세포 사멸로 인한 결과가 아니라는 것을 알 수 있었다.
As a result, the most potent inhibitory effect on nitric oxide formation was found in the rice seed methanol extract (Example 1) and the ethyl acetate fraction (Example 2) (FIG. 1). In addition, Example 1 and Example 2 showed cell viability of 80% or more even at a concentration strongly inhibiting nitric oxide production (FIG. 2). As a result, it was found that the inhibitory activity against nitric oxide formation was not the result of cell death.
<실험예 2> 벼 뿌리 유래 화합물들의 산화질소 생성 및 세포 독성 평가<Experimental Example 2> Evaluation of nitric oxide production and cytotoxicity of rice root-derived compounds
벼 뿌리로부터 분리한 다이터펜 화합물들을 다양한 농도로 처리하여 이들이 산화질소 생성에 미치는 영향을 분석하였다.
Dipterpen compounds isolated from rice roots were treated at various concentrations and their effects on nitric oxide production were analyzed.
그 결과, 다이터펜 화합물들은 농도의존적으로 산화질소 생성을 저해하였으며(도 3), IC50값은 하기 표 1과 같았다. 또한 다이터펜 화합물들이 세포의 생존과 사멸에 미치는 영향을 분석한 결과, 화합물 2의 경우 약한 세포 독성을 나타내었다(LD50, 83.2 ± 3.0 μM). 반면, 화합물 1은 강한 세포독성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다(LD50, 9.6 ± 0.6 μM) (표 2, 도 4).
As a result, the diterpene compounds inhibited nitric oxide production in a concentration-dependent manner (Fig. 3), and IC50 values were as shown in Table 1 below. In addition, the effects of the diterpene compounds on the survival and death of the cells were analyzed. As a result,
aIC50은 inhibition concentration을 의미하며, 50% 저해율을 나타내는 농도를 의미함. a IC 50 means the inhibition concentration, which means a concentration indicating a 50% inhibition rate.
bLD50은 lethal dose를 의미하며, 50%의 생존율을 나타내는 농도를 의미함.
b LD 50 means the lethal dose, which represents the 50% survival rate.
<실험예 3> 벼 뿌리 유래 화합물들의 iNOS 발현 억제능<Experimental Example 3> Inhibition of iNOS expression in rice root-derived compounds
화합물 1 내지 5를 다양한 농도로 LPS 1 μg/mL과 함께 RAW264.7 세포에 처리하거나 또는 화합물 없이 LPS만 단독으로 처리하여 18시간동안 배양하였다. 그리고 그 결과를 역전사효소-중합효소연쇄반응 분석법과 웨스턴 블랏 분석법을 이용하여 분석하였다.
그 결과, 역전사효소-중합효소연쇄반응 분석 결과 및 웨스턴 블랏 분석 결과 모두에서 화합물 1과 4가 iNOS의 mRNA 및 단백질의 발현을 강하게 저해하는 것으로 확인되었다(각각 도 5 A 및 B). 상기 결과를 통하여 벼 뿌리로부터 분리한 화합물 1 내지 5의 다이터펜 화합물들이 염증 반응을 약화시키는 것을 확인하였다.
As a result, it was confirmed that the
Claims (11)
<화학식 1>
이 때, R1은 H 또는 OR2이며, 상기 R2는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
<화학식 2>
<화학식 3>
<화학식 4>
이 때, R3는 H 또는 OR4이며, 상기 R4는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
A pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of inflammatory diseases, which comprises a compound represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
≪ Formula 1 >
Wherein R 1 is H or OR 2, and R 2 is selected from the group consisting of H, CH 3 , CH 2 CH 3 and CH 2 CH 2 CH 3 .
(2)
(3)
≪ Formula 4 >
In this case, R3 is H or OR4, wherein R4 is is one which is selected from the group consisting of H, CH 3, CH 2 CH 3 and CH 2 CH 2 CH 3.
상기 약학적 조성물은 산화질소(NO)의 발현을 억제하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein said pharmaceutical composition inhibits the expression of nitric oxide (NO).
상기 염증성 질환은 부종, 피부염, 알레르기, 아토피, 천식, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 치질, 통풍, 간직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 및 다발성 경화증으로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the inflammatory disease is selected from the group consisting of edema, dermatitis, allergy, atopy, asthma, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, colitis, hemorrhoids, Wherein the composition is any one selected from the group consisting of fibromyalgia, psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, shoulder joint inflammation, tendonitis, nephritis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis and multiple sclerosis.
<화학식 1>
이 때, R1은 H 또는 OR2이며, 상기 R2는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
<화학식 2>
<화학식 3>
<화학식 4>
이 때, R3는 H 또는 OR4이며, 상기 R4는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
A food composition for preventing or ameliorating inflammation comprising a compound represented by the following formula (1) or an acceptable salt thereof:
≪ Formula 1 >
Wherein R 1 is H or OR 2, and R 2 is selected from the group consisting of H, CH 3 , CH 2 CH 3 and CH 2 CH 2 CH 3 .
(2)
(3)
≪ Formula 4 >
In this case, R3 is H or OR4, wherein R4 is is one which is selected from the group consisting of H, CH 3, CH 2 CH 3 and CH 2 CH 2 CH 3.
<화학식 1>
이 때, R1은 H 또는 OR2이며, 상기 R2는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
<화학식 2>
<화학식 3>
<화학식 4>
이 때, R3는 H 또는 OR4이며, 상기 R4는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
A cosmetic composition for preventing or ameliorating inflammation comprising a compound represented by the following formula (1) or an acceptable salt thereof:
≪ Formula 1 >
Wherein R 1 is H or OR 2, and R 2 is selected from the group consisting of H, CH 3 , CH 2 CH 3 and CH 2 CH 2 CH 3 .
(2)
(3)
≪ Formula 4 >
In this case, R3 is H or OR4, wherein R4 is is one which is selected from the group consisting of H, CH 3, CH 2 CH 3 and CH 2 CH 2 CH 3.
<화학식 1>
이 때, R1은 OR2이며, 상기 R2는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
A compound represented by the following formula (1) or an acceptable salt thereof:
≪ Formula 1 >
Wherein R 1 is OR 2 and R 2 is selected from the group consisting of H, CH 3 , CH 2 CH 3 and CH 2 CH 2 CH 3 .
상기 화합물은 염증의 예방, 개선 또는 치료능을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물 또는 그 허용가능한 염.
The method according to claim 6,
Wherein said compound has the ability to prevent, improve or treat inflammation, or an acceptable salt thereof.
A method for producing the compound of claim 6, comprising the step of extracting the rice with an organic solvent.
<화학식 4>
이 때, R3는 H 또는 OR4이며, 상기 R4는 H, CH3, CH2CH3 및 CH2CH2CH3로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나임.
A compound represented by the following formula (4) or an acceptable salt thereof:
≪ Formula 4 >
In this case, R3 is H or OR4, wherein R4 is is one which is selected from the group consisting of H, CH 3, CH 2 CH 3 and CH 2 CH 2 CH 3.
상기 화합물은 염증의 예방, 개선 또는 치료능을 갖는 것을 특징으로 하는 화합물 또는 그 허용가능한 염.
10. The method of claim 9,
Wherein said compound has the ability to prevent, improve or treat inflammation, or an acceptable salt thereof.
9. A method for producing a compound according to claim 9, comprising the step of extracting the rice with an organic solvent.
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