KR101510434B1

KR101510434B1 - 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스 s134와 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약

Info

Publication number: KR101510434B1
Application number: KR1020120131194A
Authority: KR
Inventors: 이상엽; 홍성기; 최인후; 김완규; 김정준; 한지희; 유재홍
Original assignee: 대한민국
Priority date: 2012-11-19
Filing date: 2012-11-19
Publication date: 2015-04-10
Also published as: KR20140064174A

Abstract

본 발명은 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스 S134와 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약에 관한 것이다.
본 발명의 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134(KACC 93156P) 균주는 서열번호 1로 표현되며, 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생 병원균의 생육을 억제하는 것이 특징이다.
본 발명에 의해, 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생 원인균에 대하여 우수한 방제효과를 갖는 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스 S134와, 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약이 제공됨으로써, 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생을 억제하여 작물의 수량을 증대시킬 수 있게 된다.

Description

신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스 S134와 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약{NEW MICROORGANISM PARACONIOTHYRIUM MINITANS S134, AND MICROBIAL AGENT AND BIOPESTICIDE CONTAINING THE SAME}

본 발명은 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스 S134와 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 균핵병균 또는 흑색썩음균핵병균의 생육을 억제하는 균주를 토양으로부터 분리동정하고 이 균주를 유효성분으로 함유하는 미생물제제 및 미생물농약에 관한 것이다.

오늘날 농업은 품종 개량, 토양 비옥도 증진, 병해충 방제 및 잡초 제거 등의 방법으로 식량 증산에 몰두해 왔지만 지속적인 농약의 사용과 남용은 토양과 하천의 심각한 오염을 유발하고 있다.

또한, 농작물에 이들 농약이 잔류함으로써 독성, 환경오염 및 사람과 가축에 대한 독성 등의 문제를 일으키기 때문에 농약 사용은 현재 세계적으로 그에 대한 제제 조치가 강화되고 있는 실정이다.

이와 같은 농약에 대한 우려와 삶의 질에 대한 관심이 커지면서 최근에는 새로운 대안으로서 농작물 병해충 방제에 미생물이나 식물추출물을 이용하는 생물학적 방제가 관심의 대상이 되고 있다.

특히, 미생물을 이용한 생물방제로는 토양미생물로부터 생산된 항생물질 또는 독소를 이용하여 병원균이나 해충을 방제하는 미생물농약 또는 미생물 자체의 길항작용을 이용하여 병원균의 감염으로부터 식물을 보호하고 간접적으로 식물생육을 촉진하는 미생물비료 등이 있다.

이러한 생물학적 방제는 환경에 유해한 화학적 농약을 대신하여 사용이 가능하므로, 소비자에게 안전한 농산물을 제공할 수 있게 된다.

스크로티니아 스크로티오륨(Sclerotinia sclerotiorum) 등에 의해 발병하는 균핵병은 400종 이상의 식물을 감염하며 전세계적으로 발생하는 병원균이다. 특히 겨울철 상추 재배시에 수확량의 15% 가량 손실을 가져오는 주요 병해로써 토양 속에 균핵이 수년간 존재하며 감염원의 역할을 한다.

따라서, 식물에는 해가 없으면서 상기와 같은 균핵병 또는 흑색썩음균핵병을 일으키는 병원균에 대하여 효율적으로 작용할 수 있는 균주의 개발 및 이를 대량 배양하는 방법의 개발이 절실히 요구된다.

관련 선행기술로는 대한민국공개특허 제10-2009-0011139호(공개일: 2009년 02월 02일, 명칭: 신규한 코니오스림 미니탄스 씨엠2 및 이를 이용한 식물병원균 방제방법)과 대한민국등록특허 제10-1148789호(등록일: 2012년 05월 16일, 명칭: 균핵병 방제용 미생물 및 이의 용도)가 있다.

본 발명의 목적은 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생 병원균에 대하여 항균활성을 나타내는 신규의 균주인 파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주를 분리 동정하고, 이 균주를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약을 제공하기 위한 것이다.

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제들은 이상에서 언급한 기술적 과제들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 다른 기술적 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134(KACC 93156P) 균주는 서열번호 1로 표현되며, 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생 병원균의 생육을 억제하는 것이 특징이다.

상기 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134(KACC 93156P) 균주는 토양으로부터 분리되는 것으로서, 미생물 농약, 종자코팅제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제 또는 관주살포제 중 어느 하나의 유효성분으로 이용되는 것이 특징이다.

상기 균핵병 발생 병원균은 스크로티니아 스크로티오륨(Sclerotinia sclerotiorum), 스크로티니아 미노르(Sclerotinia minor) 중 어느 하나 이상이며, 흑색썩음균핵병 발생 병원균인 스크로티륨 세피보륨(Sclerotium cepivorum)인 것이 특징이다.

또한, 본 발명의 미생물제제는 상기 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134(KACC 93156P) 균주의 균체 또는 그 배양액을 유효성분으로 함유하는 것이 특징이다.

또한, 본 발명의 미생물농약은 상기 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134(KACC 93156P) 균주의 균체 또는 그 배양액을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로, 상기 미생물농약은 토양에 살포 또는 토양내에 관주하여 균핵병 또는 흑색썩음균핵병을 방제하는 것이 특징이다.

본 발명에 의해, 균핵병 또는 흑색썩음균핵병에 대하여 우수한 방제효과를 갖는 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스 S134와, 이를 함유하는 미생물제제 및 미생물농약이 제공됨으로써, 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생을 억제하여 작물의 수량을 증대시킬 수 있게 된다.

도 1은 본 발명의 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주의 16S rDNA 염기서열이다.
도 2는 본 발명의 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주의 16S rDNA 염기서열을 이용한 계통분류학적 위치를 나타낸 것이다.

본 명세서에 기재된 용어, 기술 등은 특별한 한정이 없는 한, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 일반적으로 사용되는 의미로 사용된다.

본 발명의 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134 균주는 서열번호 1로 표현되며, 토양에서 분리한 것으로서 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생 병원균에 대해 항균활성을 나타내는 것으로 하기 실시예를 통해 규명되었다.

즉, 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생 병원균에 대하여 높은 항균활성을 나타내는 신규균주를 선발하기 위하여, 토양으로부터 분리한 미생물을 오레오마이신(aureomycine)이 포함된 PDA배지에 접종하여 배양하였을 때 나타나는 고체배지의 투명환 크기를 분석하여 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생 병원균의 생육억제능이 높은 균주를 선발하였다.

선발된 균주에서 수득한 16S rDNA 분석결과, 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans)의 신규한 균주로 밝혀져, 이를 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134 균주로 명명하고, 이 균주를 국립농업과학원 농업유전지원센터에 기탁하여 2012년 09월 04일 수탁번호 KACC93156P를 부여받았다.

상기 본 발명의 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134 균주의 형태학적 특성은 병자각이 흑갈색의 구형 또는 아구형으로 직경 200~600㎛이며, 병포자는 흑갈색의 구형 또는 타원형의 3.5~7.5 × 3.0~5.0 ㎛ 이다.

상기 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134 균주는 서열번호 1로 기재되는 염기서열 전체 또는 그것의 일부로 이루어지며, 596bp의 오픈 리딩 프레임(ORF)으로 구성된다.

상기 본 발명의 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134 균주는 하기 배양조건을 통해 배양될 시 상기 신규균주를 단시간내에 대량생산도 가능하여 산업적으로 사용할 수 있다.

설명하면, 상기 신규미생물은 배양배지로서 PDA배지 상에서 잘 자라며, 특히 배양액에는 탄소원으로 가용성 전분, 질소원으로 효모추출분말, 무기염류로는 소금이 함유되는 것이 좋다. 바람직하게는 상기 가용성 전분은 상기 배양액의 중량대비 1~5중량%, 상기 효모추출분말은 상기 배양액의 중량대비 3~7중량% 및 상기 소금은 상기 배양액의 중량대비 0.001~0.1중량%로 포함하는 것이 상기 균주의 대량생산을 가능하게 하는 조건이며, 상기 균주 성장에 가장 적합한 최적조건은 상기 가용성 전분은 상기 배양액의 중량대비 2중량%, 상기 효모추출분말은 상기 배양액의 중량대비 5중량% 및 상기 소금은 상기 배양액의 중량대비 0.01중량%로 포함되는 것이다.

이때, 상기 가용성 전분은 1 중량% 미만으로 함유될 경우 에너지를 만들어주는 요소가 너무 적어 상기 균주의 증식속도를 더디게 하며, 5중량%초과로 함유될 경우 다른성분과의 적절한 혼합이 이루어지지 않아 오히려 상기 균주의 증식속도를 더디게 한다.

또한, 상기 효모추출분말은 3 중량% 미만으로 함유될 경우 균주의 생장과 생식을 더디게 하여 선택적으로 촉매하는 기질의 특이성이 떨어지게 되며, 7 중량%를 초과할 경우 과도한 촉매제가 첨가됨으로서 다른성분과의 적절한 혼합이 이루어지지 않음과 동시에 균주의 변형을 일으킬 우려가 있다.

또한, 상기 소금은 0.001 중량% 미만으로 함유될 경우 물질대사에서 중추적인 역할의 효력이 떨어지므로 상기 균주의 증식속도가 떨어지게 되며, 0.1 중량%초과로 함유될 경우에는 다른성분과의 적절한 혼합이 이루어지지 않아 오히려 상기 균주의 증식속도를 더디게 한다.

또한, 배양조건으로 상기 균주는 5~32℃범위에서 생육이 가능하며, 특히 15℃에서 가장 잘 배양된다.

상기 신규균주의 생육 pH 범위는 4.0~9.0으로, 최적 pH는 7.5이며, 광종류별 처리에서는 상기 신규균주의 균사가 암처리, 형광등 근자외선(NUV)처리 순으로 배양된다.

이러한 본 발명의 상기 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스 S134의 균체 또는 그 배양액은 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생억제용 미생물제제 또는 미생물농약의 유효성분으로 사용하게 된다.

이와 같은 미생물제제와 미생물농약은 활성세균의 생존 유지기간, 생존발아율, 항균 활성유지, 항균물질 생성 능력이 우수하므로, 항균 미생물농약, 종자코팅제, 미생물영양제, 토양개량제, 퇴비부숙제, 엽면살포제 또는 관주살포제 등에 이용될 수 있다.

하기 실시예 및 실험예에 의해서 보다 구체적으로 설명하지만 보호범위가 하기 실시예 및 실험예에 국한되는 것은 아니다.

<실시예 1> 본 발명의 신규 길항 미생물의 분리

경기도 양평군 양평읍 원덕1리 상추 재배포장의 상추 근권으로부터 미생물을 분리하기 위하여 토양을 채취한 후, 상기 토양을 토양희석법을 통해 정치시킨 다음, 이 정치한 시료들을 오레오마이신(aureomycine, 20mg/ℓ)을 첨가한 PDA배지에서 배양하여 분리하였다.

<실시예 2> 본 발명의 신규 길항 미생물의 동정

(1) 형태적 특성에 따른 동정

분리균의 병자각과 병포자의 크기와 모양을 조사하여 동정하였다.

그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

조사내용	본 발명의 신규균주	Punithalingam(1982)
병자각	흑갈색, 구형 또는 아구형 직경 200~600㎛	흑갈색, 구형 또는 아구형 직경 150~600㎛
병포자	흑갈색, 구형 또는 타원형 3.5~7.5 ×3.0~5.0㎛	흑갈색, 구형 또는 타원형, 4.0~7.0 ×2.5~3.5㎛

(2) 분자생물학적 동정

상기 실시예 1에서 분리된 균의 분자생물학적 특성을 조사하기 위하여, 본 발명 균주와 분류학적으로 유사한 종들을 사용하였고, rDNA의 ITS 염기서열 분석을 통하여 비교, 분석하였다.

본 발명 균주가 신규 균주임을 뒷받침하기 위해 rDNA의 ITS(internal transcribed spacer) 영역에 대한 염기서열 분석을 실시하였고, 그 결과는 도 1과 같이 나타났다.

rDNA의 ITS영역의 염기서열분석을 위해 본 발명 균주의 DNA를 추출한 후 ITS1과 ITS4 프라이머를 이용하여 증폭하였다. 증폭 산물은 벡터에 결찰(ligation)하고, 대장균에 형질전환한 후 배양하여 형질전환체로부터 플라스미드 DNA를 추출하고, 염기서열을 분석하였다.

본 발명 균주의 염기서열은 먼저 CLUSTAL W 소프트웨어를 이용하여 Gene Bank에 등록되어 있는 다른 유사 균들의 염기서열과 함께 정렬하였다. 정렬된 데이터 세트는 균주 간의 유연관계 분석을 위해 MEGA 3.1 프로그램을 이용하여 계통수를 작성하였다. branch의 안정성(bootstrap value)은 1,000회의 샘플링(resampling)을 통하여 조사하였다.

계통분류학적 분석결과, 도 2에서와 같이, 다른 유사 종들과는 다른 종(strain)이라는 것이 입증되었다.

이에, 첨부된 기탁증명서에 기재되어 있듯이, 토양 신규미생물인 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium m initans) S134로 명명하였으며, 이 균주를 국립농업과학원 농업유전지원센터에 기탁하여 2012년 09월 04일 수탁번호 KACC93156P를 부여받았다.

<실시예 3> 본 발명의 신규 길항 미생물의 균주배양

파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium m initans) S134 균주의 배양조건을 확립하기 위하여, 온도, pH, 광, 배지에 따른 파라코니오씨리움 미니탄스 S134의 균사생육 정도를 측정하였다.

(1) 온도별 파라코니오씨리움 미니탄스 S134균주의 생장

온도에 따른 균사생육 온도범위를 조사하기 위하여 감자덱스트러스한천배지(PDA)에서 배양한 균총을 직경 5 mm 코르크보러로 떼어내어 PDA 배지가 분주 된 직경 88 mm 페트리디쉬에 옮긴 다음, 온도가 5, 10, 15, 20, 22, 25, 28, 30, 32℃로 조절된 항온기에서 3회 반복으로 처리하여 10일간 배양한 후 균총의 직경을 측정하였다.

온도 (℃)	5	10	15	20	22	25	28	30	32
균사생장 (mm)	15.2	46.0	72.8	64.8	70.5	23.4	6.8	5.1	5.0

상기 표 2와 같이, 파라코니오씨리움 미니탄스 S134는 5~32℃ 범위에서 생육이 가능하며, 15℃에서 가장 잘 자랐음을 확인되었다.

(2) pH별 파라코니오씨리움 미니탄스 S134균주의 생장

파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주의 균사생육이 가능한 pH범위를 조사하기 위하여, pH 4.0부터 0.5간격으로 9.0까지 조절한 PDA배지를 사용하여 상기 (1)의 온도실험에서와 같은 방법으로 균총을 옮긴 다음, 20℃ 항온기에서 10일간 배양 후 균총의 직경을 측정하였다.

pH	4.0	4.5	5.0	5.5	6.0	6.5	7.0	7.5	8.0	8.5	9.0
균사생장 (mm)	63.7	63.7	60.3	70.0	72.0	74.3	75.0	77.0	73.0	71.3	71.3

상기 표 3과 같이, 파라코니오씨리움 미니탄스 S134는 pH 4.0~9.0 범위에서 생육이 가능하였고, 최적 pH는 7.5임을 알 수 있었다.

(3) 광 종류별 파라코니오씨리움 미니탄스 S134균주의 생장

파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주의 균사생장에 미치는 광 종류별 배양조건을 찾기 위하여, PDA 배지를 직경 88 mm 페트리디쉬에 분주하여 암조건, 20W 형광등이 12시간 주기로 조사되는 조건과 20W 근자외선(NUV)이 12시간 주기로 조사되는 조건으로 구분하여 3회 반복으로 20℃ 항온기에서 10일간 배양한 후 균사생장의 길이를 조사하였다

처리 종류	암처리	형광등	근자외선(NUV)
균사생장 (mm)	70.3	67.8	51.5

상기 표 4와 같이, 파라코니오씨리움 미니탄스 S134는 암처리, 형광등, 근자외선(NUV) 순서대로 균사생장을 나타내었으며 특히, 암처리 조건에서 균사 생장이 가장 뛰어남을 알 수 있었다.

(4) 배지별 파라코니오씨리움 미니탄스 S134균주의 생장

파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주의 배지 종류별 균사생장을 찾기 위하여 하기 표 5에 기재된 바와 같이 6가지 종류의 배지가 각각 담겨져 있는 직경 88 mm 페트리디쉬에 각각 분주한 후 3회 반복으로 처리하여 20℃항온기에서 암조건으로 10일간 배양한 후 균사생장의 길이를 조사하였다.

배지종류	배지조성	균사생장 (mm)
PDA	Difco PDA powder 39g, Dextrose 20g, 한천 15g	62.1
V8A (v8juice agar)	v8juice 200, CaCO₃ 3g, 한천 20g	51.8
Czapeck Dox agar	NaNo₃ 2g, K₂HPO₄ 1g, MgSO₄ 7H₂O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO₄ 0.01g, Sucrose 30g, 한천 20g	36.1
MEA (malt extract agar)	malt extract 20g, Sucrose 20g 한천 20g	55.0
CMA (corn meal agar)	corn meal 17g, 한천 20g	40.2
OMA (oat meal agar)	oat meal 60g, 한천 20g	40.9

상기 표 5와 같이, 파라코니오씨리움 미니탄스 S134은 PDA배지에서 가장 잘 생장한다는 것을 알 수 있었다.

<실시예 4> 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생균의 균핵에 기생하여 균핵 부패정도 확인

파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주를 이용하여 방제할 수 있는 식물 병원균 균핵병균인 스크로티니아 스크로티오륨(Sclerotinia sclerotiorum), 스크로티니아 미노르(Sclerotinia minor)와 흑색썩음균핵병균인 스크로티륨 세피보륨(Sclerotium cepivorum)의 균핵에 파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주의 기생성을 조사하였다.

균핵 기생성	병원균
+	Sclerotinia sclerotiorum, Sclerotinia minor Sclerotium cepivorum)

상기 표 6과 같이, 파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주는 상기 식물 병원균의 균핵에 기생하여 균핵을 부패함으로써 전염원의 밀도를 감소시켜서 균핵병 또는 흑색썩음균핵병을 방제할 수 있음을 확인되었다.

<실시예 5> 포장에서 마늘 흑색썩음균핵병균에 대한 방제효과

태안의 마늘재배포장에서 상추를 파라코니오씨리움 미니탄스 S134의 흑색썩음균핵병에 대한 발병 억제효과를 조사하기 위해서 마늘(남도품종)을 2011년 10월경에 파종하였다.

파라코니오씨리움 미니탄스 S134은 오트밀배지에서 22℃에서 15일간 배양하여 포자현탁액을 5×10^-6㎖^-1로 희석하여 주당 100 ㎖씩 파종직후와 2월 중순에 각각 1회 관주처리하였다.

대조약제는 카스텔란수화제를 습분의 처리하였으며, 모든 처리는 각각 3회 반복으로 실시하였다.

상기 파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주의 마늘재배포장의 토양 내에서의 정착 및 밀도변화는 조사하기 위하여는 CZA배지와 Rose bengal agar(KH₂PO₄ 1, MgSO₄7H₂O 0.5, peptone 5, glucose 10, rose bengal 0.033, streptomycin sulfate 0.033, agar 20 g /L)배지를 사용하고, 희석평판배양법을 이용하였다.

처리내용	이병주율(%)	방제가(%)	수량증가율(%)
파라코니오씨리움 미니탄스 S134 (2회처리)	6.8	65.1	26.7
카스텔란수화제	0.4	97.9	46.9
무처리	19.5	-	-

상기 표 7과 같이, 흑색썩음균핵병균(Sclerotium cepivorum)에 대하여 방제효과를 확인한 결과 본 발명의 신규균주인 파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주은 마늘 수확기에 65.1%의 우수한 방제효과를 나타냈으며, 수량을 26.7% 증가시켰다.

따라서 파라코니오씨리움 미니탄스 S134균주는 이 흑색썩음균핵병에 대한 방제제로서 효과적임을 나타내고 있다.

처리내용	처리후 경과일수별 균밀도(CFU×10⁵/g soil)
처리내용	10.4	11.10	12.6	1.16	2.23	3.20	4.18	5.22
S134	2.6	1.2	1.7	29.4	17.5	3.5	4.7	1.5
카스텔란수화제	0	0	0	0	0	0	0	0
무처리	0	0	0	0	0	0	0	0

상기 표 8과 같이, 마늘흑색썩음균핵병 방제 우수한 파라코니오씨리움 미니탄스 S134는 마늘재배포장의 토양에서 정착력이 뛰어나고, 처음 관주처리한 후부터 균밀도가 증가하다가 수확전에 초기와 비슷한 균밀도를 나타내었다.

이에, 상기 본 발명의 파라코니오씨리움 미니탄스 S134는 토양 내에서의 정착력이 매우 좋으므로 토양처리시 단 2회 처리만으로도 흑색썩음균핵병 방제효과를 볼 수 있을 것으로 사료된다.

<실시예 6> 온실에서 상추 균핵병균에 대한 방제효과

상추를 50공 트레이포트에 4.5엽기 상태로 재배하여 오트밀배지에 12일간 배양한 파라코니오씨리움 미니탄스 S134균주의 포자현탁액 농도별로 포기당 5㎖씩 관주처리한 다음 7일, 11일, 18일과 22일후에 균핵병균(Sclerotinia sclerotiorum)을 보리배지에 접종하여 20℃에서 8일간 배양한 보리 2알씩 상추포기당 토양속에 접종하였다.

포자현탁액 농도(/㎖)	파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주 처리후 경과일수별 균핵병 발생주율(%)
포자현탁액 농도(/㎖)	7일	11일	18일	22일
1×10⁶	0.0	0.0	0.0	1.1
5×10⁶	0.0	0.0	0	0
1×10⁷	0.0	1.1	1.1	1.1
무처리	4.4	28.9	52.2	55.5

상기 표 9와 같이, 파라코니오씨리움 미니탄스 S134균주의 포자현탁액(5×10⁶㎖^-1)처리구는 관주처리한 22일후에도 상추 균핵병이 전혀 발병하지 않을 정도로 우수한 방제효과를 나타내었다.

<실시예 7> 파라코니오씨리움 미니탄스 S134균주의 균핵병균의 균핵에서 균사 직접 발아와 자낭반 형성 억제 효과 확인

파라코니오씨리움 미니탄스 S134균주의 균핵병균에 대한 균생육 억제의 특성을 조사하기 위하여 파라코니오씨리움 미니탄스 S134의 오트밀배지를 이용하여 22℃항온기에서 12일간 배양하여 포자현탁액(5×10⁶㎖^-1)을 제조하여, 균핵병균(S. sclerotiorum)의 균핵을 20분 침지한 다음, PDA배지가 분주된 직경 88mm 페트리디쉬에 일정한 간격으로 10개씩 치상하여 20℃ 항온기에서 8일간 배양한 다음, 균핵병균의 균핵에서 직접 균사 발아 여부와 처리 15일후에 파라코니오씨리움 미니탄스 S134균주의 균핵병균의 균핵에 기생여부를 조사하였다.

또한, 파라코니오씨리움 미니탄스 S134균주를 상기와 같은 방법으로 포자현탁액(5×10⁶㎖^-1)에 균핵병균(S. sclerotiorum)의 균핵을 20분간 침지하였다.

처리한 균핵을 일정한 간격으로 멸균한 모래배지가 담긴 삼각플라스크당 10개씩 치상하여, 15℃ 항온기에서 형광등을 12시간/일 조사한 다음 60일후에 자낭반형성 억제여부를 조사하였다.

균핵병균	처리농도	균사발아율(%)	자낭반형성율(%)	균핵감염율(%)
S. sclerotiorum	1×10⁶㎖^-1	0	0	100
S. sclerotiorum	무처리	100	100	0

상기 표 10과 같이, 파라코니오씨리움 미니탄스 S134 균주는 균핵병균(S. sclerotiorum)의 균핵을 모두 감염시켰으며, 균사 직접발아와 자낭반 형성을 완전히 억제하여 균핵병균의 전염원인 균핵의 활성을 억제시켰음이 확인되었다.

상기와 같이, 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생 원인균에 대하여 우수한 방제효과를 갖는 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스 S134이 제공됨으로써, 균핵병 또는 흑색썩음균핵병 발생을 억제시킬 수 있는 천연 미생물제제 및 미생물농약의 제공이 가능해져 작물의 수량을 증대시킬 수 있게 된다.

상기의 본 발명은 바람직한 실시예 및 시험예를 중심으로 살펴보았으며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 본질적 기술 범위 내에서 상기 본 발명의 상세한 설명과 다른 형태의 실시예들을 구현할 수 있을 것이다. 여기서 본 발명의 본질적 기술범위는 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

국립농업과학원 농업유전자원센터

KACC93156P

20120904

<110> REPUBLIC OF KOREA(MANAGEMENT : RURAL DEVELOPMENT ADMINISTRATION) <120> NEW MICROORGANISM PARACONIOTHYRIUM MINITANS S134, AND MICROBIAL AGENT AND BIOPESTICIDE CONTAINING THE SAME <130> P2012-0166 <160> 1 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 596 <212> DNA <213> Paraconiothyrium Minitans S134 <400> 1 tccgtaggtg aacctgcgga aggatcatta tccatcctta acaggtgcgg tcgcggcccc 60 tgggggctcc cccaggtggt aaggtgaaat accctatcgc gccgcatacc tgcatccttt 120 ttttacgagc acctttcgtt ctccttcggc ggggcaacct gccgctggaa cctgataaac 180 cttttttgca tctagtatta cctgttctga tacaaacaat cgttacaact ttcaacaatg 240 gatctcttgg ctctggcatc gatgaagaac gcagcgaaat gcgataagta gtgtgaattg 300 cagaattcag tgaatcatcg aatctttgaa cgcacattgc gccccttggt attccatggg 360 gcatgcctgt tcgagcgtca tctacaccct caagctctgc ttggtgttgg gcgtctgtcc 420 cgcctttgcg cgcggactcg ccccaaactc attggcagcg gtttttgcct cctctcgcgc 480 agcacaattg cgtctgcgag ggggcgtggc ccgcgtccac gaagcaacat taccgtcttt 540 gacctcggat caggtaggga tacccgctga acttaagcat atcaataagc ggagga 596

Claims

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서열번호 1의 염기서열로 구성된 16S rDNA를 가지며, 토양으로부터 분리되어, 스크로티륨 세피보륨(Sclerotium cepivorum)인 마늘의 흑색썩음균핵병 발생 병원균의 생육을 억제하는 것이 특징인 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134(KACC 93156P)균주가 포함된 배양액을 유효성분으로 함유하되,
상기 배양액에는 탄소원으로 배양액의 중량대비 1~5중량%의 가용성 전분, 질소원으로 배양액의 중량대비 3~7중량%의 효모추출분말, 무기염류로는 배양액의 중량대비 0.01~ 0.1중량%의 소금이 함유되는 것이 특징인,
마늘의 흑색썩음균핵병 발생억제용 미생물제제
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제7항에 있어서,
상기 배양액은 상기 배양액의 중량대비 2중량%의 상기 가용성 전분, 5중량%의 상기 효모추출분말, 0.01중량%의 상기 소금을 포함하는,
마늘의 흑색썩음균핵병 발생억제용 미생물제제.
서열번호 1의 염기서열로 구성된 16S rDNA를 가지며, 토양으로부터 분리되어, 스크로티륨 세피보륨(Sclerotium cepivorum)인 마늘의 흑색썩음균핵병 발생 병원균의 생육을 억제하는 것이 특징인 신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134(KACC 93156P)균주의 균체가 포함된 배양액을 준비하는 단계;
상기 배양액에 탄소원으로 상기 배양액의 중량대비 1~5중량%의 가용성 전분, 질소원으로 상기 배양액의 중량대비 3~7중량%의 효모추출분말, 무기염류로는 상기 배양액의 중량대비 0.01~ 0.1중량%의 소금을 넣고 혼합하여 대량생산용 배양액을 제조하는 단계 및,
상기 대량생산용 배양액을 15℃의 온도, 7.5의 pH 및 암처리 조건하에 배양하여, 스크로티륨 세피보륨(Sclerotium cepivorum)인 마늘 흑색썩음균핵병 발생 병원균의 생육을 억제하는 신규미생물을 대량생산하는 단계;를 포함하는
신규미생물 파라코니오씨리움 미니탄스(Paraconiothyrium minitans) S134(KACC 93156P)균주의 대량생산 방법.
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