KR101507818B1 - Soluble mannanase composition and its preparing method - Google Patents
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Abstract
본 발명은 수용해도가 높고, 안정성이 뛰어난 수용성 만난아제 동결건조 조성물, 및 이러한 동결건조 조성물과 약학적으로 또는 수의학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 수용해도가 높고, 역가가 저하되지 않으며, 제조가 간단한 만난아제 수용성 건조물의 제조 방법을 제공한다.The present invention provides a water-soluble mannan-freeze-dried composition having high water solubility and excellent stability, and a composition comprising such a lyophilized composition and a pharmaceutically or veterinarily acceptable excipient. The present invention also provides a method for producing a manju-free water-soluble dry matter having a high water solubility, a reduced potency and a simple production.
Description
본 발명은 수용해도가 높고, 효소 안정성이 뛰어난 수용성 만난아제 조성물 및 이의 제조 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a water-soluble mannanase composition having high water solubility and excellent enzyme stability, and a method for producing the same.
헤미셀룰로즈는 식물 세포벽의 구성 성분이며 셀룰로즈와 리그닌이 결합하여 존재한다. 헤미셀룰로즈는 셀룰로즈 다음으로 자연계에 풍부한 다당류이다. 만난아제는 헤미셀룰로즈를 구성하는 주요성분인 만난 함유물질을 분해하는 효소로 그 용도가 증대되고 있다. 자일라나제 및 글루카나제와 함께 헤미셀룰라제에 속하는 만난아제의 이용 가능성 중 가장 중요한 것은 식물자원인 헤미셀룰로즈를 당화하여 생물체가 이용 가능한 탄소원으로 전환시키는 것이다. 현재 헤미셀룰라제가 실용화되고 있는 것들로는 커피, 초코렛, 코코아, 차, 시리얼 등의 식품가공품 이외에 펄프제조 등과 같은 산업적 응용을 들 수 있다. 특히, 이러한 만난아제는 사료첨가제로 사용되어 헤미셀룰로즈를 함유한 사료의 이용률을 높여줌으로써 가축의 사육 비용을 줄일 수 있다는 큰 장점이 있다.Hemicellulose is a constituent of plant cell walls and exists in association with cellulose and lignin. Hemicellulose is the natural polysaccharide next to cellulose. Mannanase is an enzyme that decomposes mannan-containing substances, a major component of hemicellulose, and its use is increasing. The most important of the availability of mannanases belonging to the hemicellulase with xylanases and glucanases is the conversion of the plant resource hemicellulose to the carbon source available to the organism. Currently, hemicellulars are practically used in industrial applications such as pulp manufacturing as well as food processing products such as coffee, chocolate, cocoa, tea and cereal. Particularly, this mannanase is used as a feed additive, thereby increasing the utilization rate of feed containing hemicellulose, thereby reducing the cost of raising livestock.
기존에 만난아제는 만난아제 생산 균주의 배양액을 직접 또는 정제한 형태로 판매되거나, 또는 동결건조한 산제 형태로 시판되었다. 배양액의 경우 취급이 용이하지 않고, 액상이어서 장기간의 보관 안정성이 좋지 않다는 문제점이 있다. 또한, 동결건조하여 제조된 기존 산제의 경우 수용성이 떨어져 가축용 음수에 혼합해서 사용하는 것이 실질적으로 불가능하였고, 이로 인해 취급 또는 이용상 여러 가지 불편이 따랐다.Conventionally, the agase has been sold in the form of a direct or purified culture of the mannanase producing strain, or in the form of a lyophilized powder. The culture solution is not easy to handle and has a problem of poor stability in storage for a long period of time because it is liquid. In addition, the conventional powders prepared by freeze-drying were not soluble in water and practically impossible to be mixed with the water for livestock, resulting in various inconveniences in handling or use.
따라서 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 수용해도가 높은 만난아제 함유 건조 조성물, 특히 산제 제형의 조성물 및 이러한 조성물의 제조 방법을 제공하는 것이다. 이러한 조성물은 수용해도가 높아 가축용 음수에 녹여 사료에 분무하여 이용할 수 있고, 또한 취급이 용이하고, 운반이 편리하며, 건조 상태로 유통되어 효소 안정성이 높아질 수 있다.Accordingly, a problem to be solved by the present invention is to provide a mannan-containing dry composition having a high water solubility, particularly a composition of a powder form, and a process for producing such a composition. Such a composition has a high water solubility and can be dissolved in the water for livestock to be sprayed on the feed. Further, the composition can be easily handled, transported, and can be circulated in a dry state to enhance the stability of the enzyme.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 (1) 만난아제와 (2) KCl, NaCl 또는 이들의 혼합물(바람직하게는 KCl)을 포함하는 액상 혼합물을 동결건조하여 제조되는, 만난아제 및 KCl, NaCl 또는 이들의 혼합물(바람직하게는 KCl)을 포함하는 동결건조 조성물을 제공한다.In order to solve the above problems, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising (1) mannanase and (2) mannanase prepared by lyophilizing a liquid mixture comprising KCl, NaCl or a mixture thereof (preferably KCl) Or a mixture thereof (preferably KCl).
본 발명은 만난아제 액상 조성물(현탁액, 용액, 농축액 등, 바람직하게는 농축액)의 동결건조 전에 KCl (염화칼륨) 또는 NaCl (염화나트륨)을 첨가함으로써 동결건조 과정 동안 만난아제의 역가를 안정적으로 유지할 수 있고, 형성된 동결건조물의 수용해도가 획기적으로 좋아진다는 놀라운 발견에 기초한다. 본 발명자들은 본 발명의 목적인 수용해성 개선, 제조과정 중의 역가 보존, 안정성 개선, 형성된 동결건조물의 취급용이성 개선, 사료첨가제로서의 이점 확보, 제조 공정상의 용이성 확보 등을 위하여 다양한 물질들을 시험해 보았으나 KCl 및 NaCl만이 목적하는 효과를 달성할 수 있었으며, 특히 본 발명의 다양한 목적상 KCl이 더 바람직하였다.The present invention can stably maintain the activity of the azeotrope during the lyophilization process by adding KCl (potassium chloride) or NaCl (sodium chloride) before lyophilization of the mannanase liquid composition (suspension, solution, concentrate etc., preferably concentrated liquid) , Based on the surprising finding that the water solubility of the lyophilizate formed is remarkably improved. The present inventors have tried various materials in order to improve water solubility for the purposes of the present invention, to preserve the potency during the manufacturing process, to improve the stability, to improve the ease of handling of the lyophilizate formed, to gain advantages as feed additive, Only NaCl was able to achieve the desired effect, particularly KCl being more preferred for various purposes of the present invention.
바람직하게, 상기 동결건조 조성물에 있어 KCl, NaCl 또는 이들의 혼합물의 함량은 동결건조 후의 만난아제 총 중량 대비 0.2 내지 0.5 중량부이며, 동결건조 후의 만난아제 총 중량 대비 0.2 내지 0.4 중량부인 것이 더욱 바람직하고, 만난아제 총 중량 대비 0.2 내지 0.3 중량부인 것이 더욱더 바람직하다.Preferably, the content of KCl, NaCl or a mixture thereof in the freeze-dried composition is 0.2 to 0.5 part by weight based on the total weight of the lyophilized mannanase, more preferably 0.2 to 0.4 part by weight with respect to the total lyophilized manna weight after lyophilization And 0.2 to 0.3 parts by weight based on the total weight of mannanase.
따라서, 본 발명은 만난아제 현탁액, 용액 또는 농축액, 바람직하게는 농축액에 KCl, NaCl 또는 이들의 혼합물을 용해시켜 동결건조하는 것을 특징으로 하는 수용성 만난아제 조성물의 제조 방법을 제공한다.Accordingly, the present invention provides a method for preparing a water-soluble mannanase composition, characterized by dissolving KCI, NaCl or a mixture thereof in a mannan suspension, solution or concentrate, preferably a concentrate, followed by lyophilization.
바람직하게, 상기 제조 방법에 있어 KCl, NaCl 또는 이들의 혼합물은 만난아제 농축액 총 중량 대비 0.01 내지 0.2 중량부 포함되며, 만난아제 농축액 총 중량 대비 0.03 내지 0.15 중량부 포함되는 것이 더욱 바람직하며, 0.04 내지 0.1 중량부 포함되는 것이 더욱더 바람직하다. Preferably, KCl, NaCl or a mixture thereof is 0.01 to 0.2 part by weight based on the total weight of the mannan concentrate, more preferably 0.03 to 0.15 part by weight based on the total weight of the mannan concentrate, More preferably 0.1 part by weight.
KCl, NaCl 또는 이들의 혼합물의 첨가량이 상기 범위 미만일 경우에는 목적하는 역가 보존 및 수용해성 향상을 달성하기 어려우며, 상기 범위를 초과하는 경우에는 역가 보존 및 수용해성 향상 측면에서 상기 범위 내와 그 개선 정도가 다르지 않아 제조 비용만 상승하게 되며 사료 첨가제의 다른 측면에서 부정적 역할을 할 우려가 있다.When the addition amount of KCl, NaCl or a mixture thereof is less than the above range, it is difficult to achieve the desired activity preservation and water solubility enhancement. When the addition amount exceeds the above range, Is not different, so that only the manufacturing cost is increased, and there is a fear that the feed additive may play a negative role in other aspects.
상기 만난아제 농축액은 미국 등록특허 제6,984,406호에 개시된 방법으로 만난아제를 생산하는 바실러스 균주를 약 24~30시간 동안 만난아제가 최대한 생산될 때까지 배양한 배양액에서 0.45μm 막으로 균체를 제거하고, 한외여과기를 거쳐 약 20배 농축한 농축액을 의미할 수 있으나, 본 발명은 이러한 농축액에 한정되는 것은 아니다.The concentrated mannose concentrate was prepared by the method disclosed in U.S. Patent No. 6,984,406. The Bacillus strain producing mannanase was cultivated for about 24 to 30 hours until the maximal production of agase, It may mean a concentrated liquid which is concentrated about 20 times through an ultrafilter, but the present invention is not limited to such concentrated liquid.
예를 들어, 이러한 만난아제 농축액은 기탁번호 KCTC 0800BP로 기탁된 바실러스 속 WL-1(Bacillus sp. WL-1) 균주에 대한 미국 등록특허 제6,984,406호에 개시된 만난아제 생산 균주 및 배양 방법을 이용하여 제조될 수 있다. 보다 구체적으로, 트립톤 10 g/L, 효모 추출물 5 g/L, NaCl 5 g/L을 함유하는 LB 배지에 밀기울 1-3 중량% 또는 유당 0.5-3 중량%을 가한 후 상기 바실러스 속 WL-1 균주를 접종하고 일정 시간 동안 배양한 후, 이 배양액에서 진동막여과장치를 사용하여 균체를 제거하고 여액을 다시 한외여과를 통해 분자량크기에 따라 정제하여 만난아제 농축액을 제조할 수 있으나, 본 발명은 이러한 만난아제 농축액의 제조 방법에 한정되는 것은 아니다. 상기 미국 등록특허 제6,984,406호는 본 인용에 의하여 그 전체가 본 명세서에 포함된다.For example, such mannanase concentrate can be produced using a mannanase producing strain and a culture method disclosed in U.S. Patent No. 6,984,406 for the Bacillus sp. WL-1 strain deposited with the deposit number KCTC 0800BP . More specifically, 1-3% by weight of wheat bran or 0.5-3% by weight of lactose was added to LB medium containing 10 g / L of tryptone, 5 g / L of yeast extract and 5 g / L of NaCl, 1 strain is inoculated and cultured for a predetermined period of time. Cells are then removed from the culture solution using a diaphragm filtration apparatus, and the filtrate is further purified through ultrafiltration according to the molecular weight to prepare a mannan concentrate. Is not limited to the method for producing such mannanase concentrate. U.S. Patent No. 6,984,406 is hereby incorporated by reference in its entirety.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 제조 방법으로 제조된 수용성 만난아제 건조 조성물을 제공한다.The present invention also provides a water-soluble mannan dry composition prepared by the process according to the present invention.
본 발명에 따른 수용성 만난아제 조성물 및 이러한 조성물의 제조 방법에 있어, 만난아제는 엔도만난아제(endo-β-mannanase)인 것이 바람직하며, 특히 상기 만난아제는 한국과학기술원 생명공학연구소 내 유전자 은행(현재 대전광역시 유성구 과학로 125에 소재하는 한국생명공학연구원 생명자원센터로 명칭 변경됨)에 2000년 6월 12일자 기탁번호 KCTC 0800BP로 기탁된 바실러스 속 WL-1 (Bacillus sp. WL-1) 균주로부터 생산된 만난아제인 것이 더욱 바람직하다.In the water-soluble mannanase composition according to the present invention and the method for preparing such a composition, the mannanase is preferably endo-β-mannanase, and the mannanase is preferably a gene bank in the Institute of Biotechnology ( Bacillus sp. WL-1) deposited with the deposit number KCTC 0800BP on June 12, 2000, which is now referred to as the Life Resource Center of the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology, Science Route 125, Yuseong-Gu, Daejeon It is more preferable that the produced mannanase is produced.
본 발명은 또한 본 발명에 따른 만난아제와 KCl, NaCl 또는 이들의 혼합물을 함유하는 동결건조 조성물 및 약학적으로 또는 수의학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 만난아제 함유 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 산제(powder), 과립(granule) 등의 제형일 수 있으나, 본 발명은 이러한 제형에 한정되는 것은 아니다.The present invention also provides a mannan-containing composition comprising a lyophilized composition comprising a mannanase according to the present invention and a mixture of KCl, NaCl or a mixture thereof and a pharmaceutically or veterinarily acceptable excipient. Such compositions may be formulations such as powders, granules and the like, but the present invention is not limited to these formulations.
상기 약학적으로 또는 수의학적으로 허용 가능한 부형제로는 포도당, 솔비톨, 프락토올리고당, 트레할로스, 만니톨, 말토스, 설탕, 말토텍스트린 또는 유당이 단독으로 또는 혼합하여 사용될 수 있으며, 만난아제 함유 최종 조성물의 효소 안정성, 수용해도 등을 고려할 때 포도당, 말토덱스트린, 솔비톨, 프락토올리고당, 트레할로스 등이 보다 바람직하며, 포도당이 더욱 바람직하다.The pharmaceutically or veterinarily acceptable excipient may be glucose, sorbitol, fructooligosaccharide, trehalose, mannitol, maltose, sugar, maltodextrin or lactose, either alone or in admixture, Glucose, maltodextrin, sorbitol, fructooligosaccharide, trehalose and the like are more preferable, and glucose is more preferable in view of enzyme stability, water solubility and the like.
보다 바람직하게, 본 발명은 본 발명에 따른 만난아제 및 KCl, NaCl 또는 이들의 혼합물 함유 동결건조물 3-4 중량% 및 무수결정포도당 96-97 중량%를 함유하는 만난아제 조성물을 제공한다.More preferably, the present invention provides a mannanase composition comprising mannanase according to the invention and 3-4% by weight of lyophilizate containing KCl, NaCl or mixtures thereof and 96-97% by weight of anhydrous crystalline glucose.
본 발명에 따른 만난아제 및 KCl, NaCl 또는 이들의 혼합물(바람직하게는 KCl)을 포함하는 동결건조 조성물 및 이러한 동결건조 조성물과 약학적으로 또는 수의학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 만난아제 함유 산제(powder) 또는 과립(granule) 조성물은 가축을 위한 음수에 혼합(바람직하게는, 용해)되어 사료에 분무되는 방식으로 이용되거나, 본 발명 조성물이 첨가된 음수 자체를 가축들이 섭취하도록 할 수 있으며, 또 펠렛 사료 제조 후에 펠렛에 분무하는 방식, 산제 또는 과립 조성물 자체를 사료에 배합하는 방식으로 이용될 수 있다. 그러나 본 발명은 본 발명 조성물의 이러한 이용 방법에 한정되는 것은 아니다.A lyophilized composition comprising a mannanase according to the invention and a mixture of KCl, NaCl or a mixture thereof (preferably KCl), and a mannanase containing acid agent comprising such a lyophilized composition and a pharmaceutically or veterinarily acceptable excipient powder or granule composition may be used in such a manner that the composition is mixed (preferably dissolved) in negative water for livestock and sprayed on the feed, or the livestock may consume the negative water to which the composition of the present invention is added, A method of spraying pellets after preparation of the pellet feed, and a method of blending the powder or granular composition itself into the feed can be used. However, the present invention is not limited to this use of the composition of the present invention.
본 발명은 수용성 만난아제 조성물 및 이의 제조 방법을 제공한다. 본 발명에 따른 조성물 및 제조 방법에서는 만난아제의 역가가 높게 유지될 수 있으며, 또한 수용해도가 매우 높아 여러 가지 유용성을 지닌다.The present invention provides a water-soluble mannanase composition and a process for its preparation. In the composition and the preparation method according to the present invention, the potency of mannanase can be kept high and the water solubility is very high, so that it has various usefulness.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail to facilitate understanding of the present invention. However, the embodiments according to the present invention can be modified into various other forms, and the scope of the present invention should not be construed as being limited to the following embodiments. Embodiments of the invention are provided to more fully describe the present invention to those skilled in the art.
[만난아제 농축액의 준비][Preparation of mannanase concentrate]
다음과 같은 방법으로 만난아제 농축액을 미리 제조하였다. 만난아제를 분비하는 바실러스균주(KCTC 0800BP) 배양액에서 0.45μm 막이 장착된 진동막여과장치를 통해 균체를 제거하였다. 그 후 여과액을 한외여과기를 거쳐 20배 농축하여 만난아제 농축액을 제조하였다. 그 후 만난아제의 역가 손실을 최소화하기 위해 4℃ 보관하였다.
Agar concentrate was prepared in advance by the following method. Cells were removed from the culture medium of Bacillus sp. (KCTC 0800BP) that secreted mannanase through a diaphragm filtration apparatus equipped with a 0.45 μm membrane. Thereafter, the filtrate was concentrated 20 times through an ultrafilter to prepare a mannan concentrate. After that, it was kept at 4 ° C in order to minimize the loss of activity of the agase.
[만난아제 동결건조물의 제조][Production of lyophilized mannanase]
하기 표 1과 같이 혼합한 후 동결건조하여 만난아제 원말이 다량 함유된 동결건조물을 제조하였다. 동결건조용 기기로는 FD 80(CUDDON 사, 뉴질랜드)을 이용하였으며, 동결건조 조건은 영하 25℃에서 약 9시간 동결 후 온도를 순차적으로 영상 30℃까지 올리면서 약 32시간 동안 건조하였다.As shown in Table 1, followed by lyophilization to prepare a lyophilized product containing a large amount of free azole. FD 80 (CUDDON Co., New Zealand) was used as a freeze-drying device. The freeze-drying conditions were as follows: freezing at 25 ° C for about 9 hours and then drying for about 32 hours while increasing the temperature to 30 ° C.
참고로 상기 분리대두단백 및 말토덱스트린 이외에 무수결정포도당 10 중량%, 유당 10 중량%, 트레할로스 10 중량% 등 다양한 수용성 첨가제를 시험해 보았으나, 동결 전후에 역가 회수율이 좋지 않았을 뿐만 아니라 동결건조하는 과정에서 끊어 넘치는 등의 문제점이 나타나 동결건조 자체가 용이하지 않다는 문제점이 발생하였다.
For the reference, various water-soluble additives such as 10% by weight of anhydrous crystalline glucose, 10% by weight of lactose and 10% by weight of trehalose were tested in addition to the separated soybean protein and maltodextrin. However, not only the recovery of potency was not good before and after freezing, There is a problem that the freeze drying itself is not easy.
[잔존 역가 및 용해도의 평가][Evaluation of residual activity and solubility]
상기 실시예 1-3 및 비교예 1의 동결건조 전후의 잔존 역가 회수율 및 용해도를 다음과 같은 방법으로 평가하였다. The residual activity recovery before and after freeze-drying and solubility of the above-described Example 1-3 and Comparative Example 1 were evaluated by the following methods.
역가는 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) 방법을 이용하였다. 구체적으로, LBG (locust bean gum)를 기질로 하여 효소반응 후에 유리된 환원당을 다음과 같이 정량함으로써 측정하였다. 증류수에 현탁시킨 1%(w/v) LBG 용액과 200mM sodium phosphate(pH 6.0)을 효소용액과 혼합하여 50℃에서 15분 동안 반응시켰다. DNS 시약을 첨가하여 반응을 정지시키고, 끊는 물에서 5분 동안 방치하여 발색시킨 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 만노스(Mannose)를 표준시료로 사용하여 동일조건에서 발색시켜 조사한 흡광도를 비교함으로써 유리된 환원당의 양을 결정하였다. 효소 역가 1 Unit는 위의 조건에서 1분 동안 LBG로부터 1μmol의 상응하는 환원당을 생성하는 효소의 양으로 정의하였다.The titers used were 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) method. Specifically, reducing sugar liberated after enzyme reaction using LBG (locust bean gum) as a substrate was determined by quantifying as follows. 1% (w / v) LBG solution suspended in distilled water and 200 mM sodium phosphate (pH 6.0) were mixed with the enzyme solution and reacted at 50 ° C for 15 minutes. The reaction was stopped by addition of a DNS reagent, and the solution was allowed to stand in water for 5 minutes to develop color, and the absorbance was measured at 540 nm. Mannose was used as a standard sample, and the amount of reducing sugars liberated was determined by comparing the absorbance obtained by irradiating the same under the same conditions. Enzyme Titer 1 Unit was defined as the amount of enzyme that produced 1 μmol of the corresponding reducing sugar from LBG for 1 minute under the above conditions.
구체적으로, 용해도는 증류수 100ml에 시료 5g을 놓고 잘 흔들어 다 녹은 시간을 체크하고 침전 유무를 육안으로 확인하여 평가하였다.Specifically, the solubility was evaluated by placing 5 g of a sample in 100 ml of distilled water, shaking it well, checking the time of dissolving, confirming the presence or absence of precipitation visually.
그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.The results are shown in Table 2 below.
잔존역가 회수율(%)Before and after freeze drying
Residual potency recovery (%)
[용해도 평가 기준][Evaluation Criteria for Solubility]
탁월: 용해된 시간이 10초 이내 Excellent: Melting time within 10 seconds
우수: 용해된 시간이 11~15초 사이Excellent: Melting time between 11 and 15 seconds
보통: 용해된 시간이 16~20초 사이Normal: Melted time is between 16 and 20 seconds
불량: 용해된 시간이 21초 이상이며 침전물이 발생
Poor: The dissolved time is more than 21 seconds and the precipitate is generated.
상기 표 2에 나타나는 바와 같이, 만난아제 농축액만을 이용하여 동결건조한 경우에는 역가의 손실이 클 뿐만 아니라 수용해도가 좋지 않았다. 또한, 분리대두단백과 혼합하여 동결건조한 경우 역가는 잘 유지되었으나 물에 대한 용해도가 매우 불량하였으며, 말토덱스트린과 혼합하여 동결건조한 경우에는 수용해도는 우수하였으나 동결건조 과정에서 효소의 역가가 매우 많이 저하되었다. 반면 본 발명에 따른 KCl과 혼합하여 동결건조할 경우 역가가 매우 잘 유지되었을 뿐만 아니라 수용해도가 굉장히 높아졌다.
As shown in Table 2, when freeze-dried using only mannanase concentrate, the loss of activity was large and the water solubility was not good. In the case of freeze-drying with mixed soybean protein, the retention was well maintained, but the solubility in water was very poor. In case of lyophilization with maltodextrin, the water solubility was excellent, . On the other hand, when mixed with KCl according to the present invention and lyophilized, the activity was maintained very well and the water solubility was greatly increased.
[보관 안정성 평가][Storage stability evaluation]
상기 실시예 2 및 비교예 1을 상온 및 저온(4℃)에서 보관하면서 역가 변화를 실험예 1의 방법과 동일하게 평가하였다. Example 2 and Comparative Example 1 were stored at room temperature and low temperature (4 ° C), and the change in titer was evaluated in the same manner as in Experimental Example 1.
저온 보관 결과 KCl이 첨가되지 않은 비교예 1에서는 6개월 후의 역가가 초기 역가 대비 29%이었던 반면, KCl첨가 군의 역가는 6개월 후에 초기 역가 대비 약 86%로 매우 높게 유지되었다. 또한 상온에서 6개월 보관한 결과 무첨가 군의 경우 역가가 약 22%이었던 반면, KCl첨가 군은 약 84%로 매우 높게 유지함을 확인할 수 있었다.
As a result of the low temperature storage, in Comparative Example 1 in which KCl was not added, the potency after 6 months was 29% compared with the initial potency, whereas the potency of KCl added group remained very high at 86% compared with the initial potency after 6 months. As a result of storage for 6 months at room temperature, the activity of the non-addition group was about 22%, whereas that of the KCl-added group was very high, about 84%.
[KCl과 NaCl의 비교평가][Comparative evaluation of KCl and NaCl]
앞선 방법들과 동일한 방법으로 KCl 대신에 NaCl을 이용한 효과를 평가하였다. 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.The effect of using NaCl instead of KCl was evaluated in the same manner as the previous methods. The results are shown in Table 3 below.
상기 표 3에 나타나는 바와 같이, KCl 대신에 NaCl을 사용하여서도 유사한 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.As shown in Table 3, it was confirmed that similar effects were also obtained by using NaCl instead of KCl.
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