KR101471850B1 - A pharmaceutical composition comprising the hexane fraction of gardenia jasminoides extract as an effective component for anti-platelet aggregation and a health functional food comprising the same - Google Patents

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본 발명은 치자(Gardenia jasminoides Ellis) 추출물의 헥센 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈전성 질환(Diseases related to thrombosis)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는, 치자의 에탄올 추출물로부터 분획된 헥센 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 상기 헥센 분획물을 포함하는 건강 기능 식품에 관한 것이다. 본 발명의 치자 추출물의 헥센 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품은, 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이, 강력한 혈소판 응집 저해능을 나타내어 혈전 생성을 효율적으로 억제할 수 있는 효과가 있으며, 특히, 본 발명의 약학적 조성물 및 건강 기능 식품의 유효성분인 치자 추출물의 헥센 분획물은 급성경구독성이 나타나지 않으며, 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성조건 및 혈장 내에서도 혈소판 응집 저해능의 손실이 나타나지 않아, 추출액, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 가공되어 상시 복용이 가능한 형태로 조제할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 제약 산업 및 식품 산업상 매우 유용한 발명인 것이다. The invention gardenia (Gardenia jasminoides The present invention relates to a pharmaceutical composition and a health functional food for preventing or treating Diseases related to thrombosis which contains the hexane fraction of an extract of Ellis as an active ingredient, The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating a thrombotic disease which contains a fraction as an active ingredient, and a health functional food containing the hexane fraction. The pharmaceutical compositions and health functional foods for the prevention or treatment of thrombotic diseases containing the hexane fraction of the gardenia extract of the present invention as an active ingredient show strong platelet aggregation inhibiting ability as demonstrated by the examples of the present specification, In particular, the hexane fraction of the gardenia extract, which is an effective ingredient of the pharmaceutical composition and the health functional food of the present invention, shows no acute oral toxicity, has excellent thermal stability, and has a pH of 2 It is very useful in the pharmaceutical industry and the food industry because it can be prepared into various forms such as extract, powder, ring, and tablet, and can be prepared at any time, since no loss of platelet aggregation inhibitory ability occurs in acidic conditions and plasma. It is an invention.

Description

치자 추출물의 헥센 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈소판 응집 저해용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품{A PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING THE HEXANE FRACTION OF GARDENIA JASMINOIDES EXTRACT AS AN EFFECTIVE COMPONENT FOR ANTI-PLATELET AGGREGATION AND A HEALTH FUNCTIONAL FOOD COMPRISING THE SAME}FIELD OF THE INVENTION [0001] The present invention relates to a pharmaceutical composition for inhibiting platelet aggregation comprising a hexane fraction of a gardenia extract as an active ingredient and a pharmaceutical composition for preventing platelet aggregation by inhibiting platelet aggregation, SAME}

본 발명은 치자(Gardenia jasminoides Ellis) 추출물의 헥센 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈전성 질환(Diseases related to thrombosis)의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는, 치자의 에탄올 추출물로부터 분획된 헥센 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 상기 헥센 분획물을 포함하는 건강 기능 식품에 관한 것이다.The invention gardenia (Gardenia jasminoides The present invention relates to a pharmaceutical composition and a health functional food for preventing or treating Diseases related to thrombosis which contains the hexane fraction of an extract of Ellis as an active ingredient, The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating a thrombotic disease which contains a fraction as an active ingredient, and a health functional food containing the hexane fraction.

인체 구성성분으로 혈액은 혈관을 통해 이동하면서 산소, 영양분, 노폐물의 운반 기능과, 완충작용, 체온유지, 삼투압 조절 및 이온 평형유지, 수분 일정유지, 액성 조절작용, 혈압의 유지 및 조절, 생체방어 등 다양한 중요 기능들을 수행한다. 혈액은 응고반응과 용해반응이 평형을 이루고 있으며, 정상적인 혈액 순환 동안에는 혈전(핏덩어리)이 생성되지 않는다. 그러나 외부적 혈관손상, 내부적 혈액응고인자, 혈전 용해인자의 불균형으로 인해 혈전이 생성되면 혈관은 막히게 되고 혈액순환은 방해된다. 이 경우 혈액의 중요기능들이 작동하지 않아 인체는 심각한 손상을 입게 된다. 특히 최근에는 고령인구의 증가, 성인병이 증가하면서 혈전 생성 과다가 증대되면서 심혈관, 뇌혈관 질환이 증가되고 있어, 과다한 혈전생성 억제를 위한 예방, 치료제 개발이 절실하다. As a constituent of human body, blood travels through blood vessels and transports oxygen, nutrients, waste products, buffering action, maintaining body temperature, controlling osmotic pressure and ion balance, maintaining water constant, controlling liquid, And so on. Blood is in equilibrium with the coagulation and dissolution reactions, and no blood clots are formed during normal blood circulation. However, when blood clots are formed due to external blood vessel damage, internal blood clotting factors, and imbalance of thrombolytic factors, blood vessels become clogged and blood circulation is disturbed. In this case, important functions of the blood do not work and the human body is seriously damaged. Especially recently, the increase of the elderly population and the increase in the number of adult diseases, thrombosis and hypertension increases, cardiovascular and cerebrovascular diseases are increasing, so it is urgent to develop preventive and therapeutic drugs to inhibit excessive thrombogenesis.

혈액 응고 반응은 혈관손상, 또는 내부적 혈액응고인자/용해인자의 불균형으로 혈관벽에 혈소판이 점착, 응집하여 혈소판 혈전을 형성한 후, 혈액 응고계가 활성화되어 혈소판 응집괴를 중심으로 피브린 혈전이 형성된다. 이때 수많은 혈액 응고인자들의 여러 단계의 반응을 거쳐 트롬빈이 활성화되어, 피브리노겐으로부터 피브린 단량체를 생성하게 하며, 피브린 단량체들은 칼슘에 의해 중합되어, 혈소판과 내피세포에 결합하게 되며 XIII 인자에 의해 교차 결합된 피브린 폴리머를 형성하면서 영구적인 혈전을 생성하게 된다. 혈전생성에 관련되는 효소, 인자 및 혈소판 응집 저해를 나타내는 물질은 과다한 혈액응고 이상으로 발생하는 다양한 혈전성 질환에 매우 유용한 예방 및 치료제로 사용될 수 있다. 현재까지 혈전성 질환의 예방과 치료에 헤파린, 쿠마린, 아스피린, 유로키네이즈 등의 다양한 항응고제, 항혈소판제, 혈전용해제 등이 사용되고 있으나, 이들은 가격이 매우 높을 뿐 아니라 출혈성 부작용과 위장장해 및 과민반응 등으로 그 사용이 한정되고 있는 실정이다. 최근에는 안전하면서도 항혈전 활성이 있는 식용, 약용작물 유래의 천연물로부터 항혈전제 개발이 집중적으로 진행되고 있는데, 특히 마늘의 아조엔(ajoene), 은행나무 잎의 플라보노이드, 로즈마리 정유, 밤나무의 아에스신(aescin) 등이 대표적인 경우이다.The blood clotting reaction is caused by the adhesion of blood platelets to the blood vessel wall due to vascular damage or an imbalance of the internal blood coagulation factor / lysis factors, and the blood coagulation system is activated after the coagulation of the blood platelets to form a fibrin thrombus around the platelet aggregation mass. At this time, thrombin is activated through several steps of blood coagulation factors to produce fibrin monomers from fibrinogen, fibrin monomers are polymerized by calcium to bind to platelets and endothelial cells, cross-linked by factor XIII Forming a fibrin polymer and producing a permanent thrombus. Enzymes, factors and substances exhibiting inhibition of platelet aggregation associated with thrombus formation can be used as preventive and therapeutic agents for various thrombotic diseases caused by excessive blood coagulation. Until now, various anticoagulants such as heparin, coumarin, aspirin, and europine have been used for the prevention and treatment of thrombotic diseases. However, they are very expensive and have hemorrhagic side effects, gastrointestinal disorders and hypersensitivity And the use thereof is limited. Recently, the development of antithrombotics from natural products derived from edible and medicinal crops having safe and antithrombotic activity has been intensively developed. Especially, ajoene of garlic, flavonoid of ginkgo leaf, rosemary essential oil, Aescin, and the like.

한편 치자(Gardenia jasminoides Ellis)는 꼭두서니과의 상록 활엽 관목으로 9~11월에 타원형의 과실이 성숙하여 홍황색을 띄면 이를 채취하여 건조시켜 약용 및 염료용으로 사용하고 있다. 특히 한방에서는 이뇨제, 해열제, 진정제 및 눈병, 황달 등에 치료에 사용되고, 지혈제로 중요하게 사용된다. 치자의 성분으로는 genipin, geniposide, gardenoside 등의 iridoid 배당체, crocin, crocetin 등의 성분, gardanin의 flavoniod 계 성분과 그 외에 choline, ursolic acid 등을 함유하고 있다. Meanwhile, Gardenia jasminoides Ellis) is an evergreen broad-leaved shrub of the macaques and is mature oval-shaped fruit from September to November. When it is reddish yellow, it is picked and dried to be used for medicine and dye. Especially in oriental medicine, it is used for diuretic, antipyretic, sedative and eye diseases, jaundice, etc., and is used as a hemostatic agent. The components of gardenia include genipin, geniposide, gardenoside, iridoid glycosides, crocin, crocetin, gardanin flavonoid, choline and ursolic acid.

치자에 대한 연구로는, 과거에는 주로 치자를 이용한 색소관련 연구(김희구 외, 한국식품영양학회지, 1998, 11: 68-71) 및 치자색소 이용 피클(김애정 외, 2008. 한국식품영양학회지, 21, 524-529), 치자첨가 국수(김미림, 2006. 한국식품조리과학회, 22: 237-243), 치자첨가 돈육패티 전미란 외, 2011. 한국축산식품학회지 31: 741-747) 등의 치자 색소를 이용한 식품제조연구가 주를 이루었으나, 최근에는 치자의 유용 생리활성에 대한 연구가 집중되고 있다. 즉, 치자의 간 보호 효과(Chen YH 등, 2012. World J Gastroenterol. 18: 7158-7165), 신경세포 보호 효과(Choi SJ 등, 2007. Mol Cells. 24: 113-118), 암세포 성장 억제효과(Peng CH 등, 2005. Curr Cancer Drug Targets. 5: 299-305), 혈관신생반응 억제효과(Koo HJ 등, 2004. Planta Med. 70: 467-469), nitric oxide생성억제를 통한 항염증 활성(Peng K 외, 2012. Bioorg Med Chem Lett. S0960-894X(12)01551-X], 피부장벽 손상 완화효과(형순희 외, 2010. 대한미용과학회지 6: 65-72), tyrosinase 효소활성 저해 및 melanogenesis 억제 효과(곽정훈 외, 2004. 한국생물공학회지, 19: 437-440), monoamine oxidase 저해활성(황금희 외, 2007. 한국생약학회지 38: 1-16) 및 항산화 활성(Pham TQ 외, 2000. J Agric Food Chem. 48:1455-1461) 등이 보고되고 있다. 항혈전 활성 관련으로는 치자의 열수 추출물로부터 iridoid계 genipin과 수용성 카로티노이드계 색소 crocin이 항혈전 활성을 나타내는 것이 알려져 있다. 이들 물질은 혈소판 응집을 저해하여 항혈전 활성을 나타내는 것으로 보고되어 있으나, 현재까지 치자로부터 헥센에 용해되는 지용성 물질의 항혈전 활성에 대한 보고는 없으며, 특히 지용성 물질의 혈소판 응집저해 활성을 통한 항혈전 활성에 대해서는 알려진 바 없다. In the past, there have been a lot of researches about the pigmentation using the gardenia (Kim Hee-gu et al., Korea Food Research and Nutrition Society, 1998, 11: 68-71) and the gardenia pigment pickle (Kim Ae Jung et al., 2008. Korean Journal of Food Science and Nutrition, , Pp. 524-529), and the addition of gardenia (Kim Mi-rim, 2006. Korean Society of Food Science and Technology, 22: 237-243) In recent years, studies on useful physiological activities of gardenia have been concentrated. In other words, the protective effect of gardenia (Chen YH et al., 2012. World J Gastroenterol. 18: 7158-7165), neuronal protective effect (Choi SJ et al., 2007. Mol Cells. 24: 113-118) (Peng CH et al., 2005. Curr Cancer Drug Targets. 5: 299-305), inhibitory effect on angiogenesis (Koo HJ et al., 2004. Planta Med. 70: 467-469) (Peng K et al., 2012. Bioorg Med Chem Lett. S0960-894X (12) 01551-X], mitigating effect of skin barrier damage (Sung Hee et al., 2010. Korean Journal of Beauty Medicine 6: 65-72), inhibition of tyrosinase enzyme activity And antioxidant activity (Pham TQ et al., 2000), and inhibition of melanogenesis (Kwak JH et al., 2004. Korean Biotechnology Journal, 19: 437-440), monoamine oxidase inhibitory activity The results showed that the iridoid genipin and the water-soluble carotenoid pigment crocin from the hot water extract of the gardenia showed antithrombotic activity Though these substances have been reported to exhibit anti-thrombogenic activity by inhibiting platelet aggregation, there has been no report on antithrombotic activity of lipid soluble in hexene from the gardenia until now, and in particular, inhibition of platelet aggregation The antithrombotic activity through activity is not known.

한편 치자와 관련된 특허로는, 대한민국 등록특허 제10-0543897호(등록일자: 2006.01.10) "치자 추출물 및 치자로부터 분리된 신규 화합물 및 그 용도"에 치자의 활성산소 소거활성 및 항바이러스 활성이 알려져 있으며, 대한민국 등록특허 제10-0787003호(등록일자, 2007.12.12) "치자 추출물을 포함하는 리파아제 억제제, 이를 포함하는 기능성 식품 및 의약 조성물", 대한민국 등록특허 제 10-1061435호(등록일자, 2011.08.26) "치자나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 췌장염 예방 및 치료용 조성물", 대한민국 등록특허 제 10-1165716호(등록일자, 2012.07.09) "치자 추출물의 분획물을 유효성분으로 함유하는 알러지 질환의 예방 또는 치료용 조성물"이 있다. 또한 최근 대한민국 등록특허 제 10-1089637호(등록일자, 2011.11.29) "효소 처리에 의하여 항염증 활성이 증가된 치자추출물의 제조 방법", 대한민국 등록특허 제 10-0496850호(등록일자, 2005.06.14) "치자 추출물을 함유하고 있는 미백화장료", 대한민국 등록특허 제 10-0787765호(등록일자, 2007.12.13) "팔미트산을 포함하는 알츠하이머병의 예방 또는 치료용 조성물", 대한민국 등록특허 제 10-0692402호(등록일자, 2007.03.02) "치자 추출물을 포함하는 우울증 질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물"이 있다. 그러나 현재까지 치자 추출물, 특히 치자의 지용성 헥센 분획물 성분의 항혈전제 관련 특허는 보고된 바 없다.On the other hand, patents related to gardenia include active oxygen scavenging activity and antiviral activity of the gardenia in Korean patent No. 10-0543897 (registered on January 10, 2006) "New gardenia extracts and novel compounds isolated from gardenia" And a lipase inhibitor including a gardenia extract, a functional food and a pharmaceutical composition containing the same, a Korean Patent Registration No. 10-1078143 (registered date, "Composition for preventing and treating pancreatitis containing an extract of Gardenia japonica as an active ingredient", Korean Registered Patent No. 10-1165716 (registered date, Jul. 07, 2012) "Allergy containing a fraction of gardenia extract as an active ingredient Composition for preventing or treating disease ". Recently, Korean Patent No. 10-1089637 (registered date, November 29, 2011) entitled " Method for producing an extract of gardenia having increased antiinflammatory activity by enzyme treatment ", Korean Patent Registration No. 10-0496850 (registered date, Jun. 14) "Whitening cosmetic composition containing gardenia extract", Korean Patent No. 10-0787765 (registered date, December 13, 2007) "Composition for preventing or treating Alzheimer's disease including palmitic acid" 10-0692402 (filed on Mar. 23, 2007), "Pharmaceutical composition for prevention and treatment of depressive disorder including gardenia extract ". However, no patent has been reported on the antithrombotic agent of the gardenia extract, especially the component of the lipid-soluble hexene fraction of the gardenia.

Zhang H. Y. et al., 2013. Pharmaceutical Biology, 51:221-225Zhang H. Y. et al., 2013. Pharmaceutical Biology, 51: 221-225

본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 약용으로 이용되고 있는 치자로부터 헥센에 추출되는 지용성 유효성분을 함유하는 혈소판 응집저해활성에 따른 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 상기 헥센 분획물을 포함하는 건강 기능 식품을 제공하고자 하는 것이다. Disclosure of Invention Technical Problem [8] Accordingly, the present invention has been made keeping in mind the above problems occurring in the prior art, and an object of the present invention is to provide a platelet aggregation inhibiting activity containing a liposoluble active ingredient extracted from a gardenia, A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of sexual diseases, and a health functional food comprising the hexane fraction.

상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 치자(Gardenia jasminoides Ellis) 추출물의 헥센 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In order to solve the problems as described above, the present invention gardenia (Gardenia jasminoides The present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of a thrombotic disease comprising an effective amount of a hexane fraction of an Ellis extract.

상기 치자 추출물은 물, 주정, 및 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 알코올로 이루어지는 군으로부터 선택된 용매로 추출되는 것이 바람직하다.The gardenia extract is preferably extracted with a solvent selected from the group consisting of water, alcohol, and anhydrous or hydroalcohol having 1 to 4 carbon atoms.

상기 치자 추출물은 에탄올로 추출되는 것이 바람직하다.The gardenia extract is preferably extracted with ethanol.

상기 혈전성 질환은 급성 심근 경색증, 가슴 통증, 호흡 곤란, 의식 소실, 허혈성 뇌졸중, 출혈성 뇌졸중, 두통, 운동 이상, 감각 이상, 성격 변화, 시력 저하, 간질 발작, 폐 혈전증, 심부정맥 혈전증, 하지 부종, 통증, 급성 말초 동맥 폐쇄증, 심부정맥 혈전증, 간문맥 혈전증, 급성 신장정맥 폐쇄증, 뇌 정맥동 혈전증 및 중심 망막정맥 폐쇄로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.The thrombotic disorder may be selected from the group consisting of acute myocardial infarction, chest pain, dyspnea, loss of consciousness, ischemic stroke, hemorrhagic stroke, headache, dysesthesia, sensory abnormality, personality change, visual disturbance, epileptic seizure, pulmonary thrombosis, deep vein thrombosis, , Pain, acute peripheral arterial atresia, deep vein thrombosis, portal vein thrombosis, acute renal vein occlusion, cerebral venous thrombosis and central retinal vein occlusion.

또한, 본 발명은 본 발명의 상기 치자 추출물의 헥센 분획물을 포함하는 건강 기능 식품을 제공한다.The present invention also provides a health functional food comprising the hexane fraction of the gardenia extract of the present invention.

본 발명의 치자 추출물의 헥센 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품은, 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이, 강력한 혈소판 응집 저해능을 나타내어 혈전 생성을 효율적으로 억제할 수 있는 효과가 있으며, 특히, 본 발명의 약학적 조성물 및 건강 기능 식품의 유효성분인 치자 추출물의 헥센 분획물은 급성경구독성이 나타나지 않으며, 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성조건 및 혈장 내에서도 혈소판 응집 저해능의 손실이 나타나지 않아, 추출액, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 가공되어 상시 복용이 가능한 형태로 조제할 수 있는 뛰어난 효과가 있으므로 제약 산업 및 식품 산업상 매우 유용한 발명인 것이다.The pharmaceutical compositions and health functional foods for the prevention or treatment of thrombotic diseases containing the hexane fraction of the gardenia extract of the present invention as an active ingredient show strong platelet aggregation inhibiting ability as demonstrated by the examples of the present specification, In particular, the hexane fraction of the gardenia extract, which is an effective ingredient of the pharmaceutical composition and the health functional food of the present invention, shows no acute oral toxicity, has excellent thermal stability, and has a pH of 2 It is very useful in the pharmaceutical industry and the food industry because it can be prepared into various forms such as extract, powder, ring, and tablet, and can be prepared at any time, since no loss of platelet aggregation inhibitory ability occurs in acidic conditions and plasma. It is an invention.

도 1은 치자의 에탄올 추출물 및 이의 분획물의 인간 혈소판 응집저해 활성을 평가한 결과를 나타낸 그래프이다. 도면의 좌측으로부터 1: 용매 대조구(DMSO), 2: 아스피린(0.50mg/ml), 3: 아스피린(0.25mg/ml), 4: 치자 에탄올 추출물(0.25mg/ml), 5: 치자 헥센 분획물(0.25mg/ml), 6: 치자 에틸아세테이트 분획물(0.25mg/ml), 7: 치자 부탄올 분획물(0.25mg/ml) 및 8: 치자 물 잔류물(0.25mg/ml)을 각각 나타낸다. FIG. 1 is a graph showing the results of evaluating human platelet aggregation inhibitory activity of ethanol extract of the gardenia and fractions thereof. (DMSO), 2: Aspirin (0.50 mg / ml), 3: Aspirin (0.25 mg / ml), 4: Gardenia ethanol extract (0.25 mg / ml), 5: (0.25 mg / ml), 6: ginger ethyl acetate fraction (0.25 mg / ml), 7: ginger butanol fraction (0.25 mg / ml) and 8: ginger water residue (0.25 mg / ml).

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 치자 추출물의 헥센 분획물을 유효성분으로 함유하며, 혈소판 응집저해 활성을 통하여 혈전성 질환의 예방 또는 치료 효과를 나타낼 수 있는 약학적 조성물과 건강 기능 식품에 관한 것이다.The present invention relates to a pharmaceutical composition and a health functional food which contain a hexane fraction of a gardenia extract as an active ingredient and can exhibit a preventive or therapeutic effect of a thrombotic disease through an activity of inhibiting platelet aggregation.

본 발명의 발명자들은 일정 방법으로 수득한 치자 추출물로부터 혈소판 응집 저해능을 가진 헥센 분획을 회수하였고, 이러한 성분은 경구급성독성이 나타나지 않으면서, 열 안정성과 산 안정성이 우수한 특징을 가짐을 확인함으로써 상기 성분을 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품으로 활용하고자 하였다. The inventors of the present invention recovered a hexane fraction having the ability to inhibit platelet aggregation from a gardenia extract obtained by a certain method and confirmed that these components have excellent thermal stability and acid stability without showing oral acute toxicity, As a pharmaceutical composition and health functional food for the prevention or treatment of thrombotic diseases.

구체적으로, 본 발명자들은 치자를 이용하여 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품을 개발하기 위하여 치자의 에탄올 추출물을 조제하고, 이를 헥센으로 추출하여 헥센 분획물을 수득하고, 이를 각각 인간 혈장과 인간 트롬빈에 대한 트롬빈 직접저해(Thrombin Time), 프로트롬빈 저해(Prothrombin Time) 및 활성부분 트롬보플라스틴 타임(activated Partial Thromboplastin Time: aPTT) 및 혈소판 응집저해능을 각각 평가하였다. 그 결과, 치자 에탄올 추출물의 헥센 분획에서 현재 사용되고 있는 의약품인 아스피린(시판 항혈전제)보다 강력한 혈소판 응집저해효과를 확인하였다. 또한, 치자 추출물의 헥센 분획물은 열 및 산 안정성이 우수하였을 뿐만 아니라, 흰쥐에 경구투여시 급성독성이 나타나지 않아, 상기 분획물이 독성이 없음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. Specifically, the present inventors prepared a pharmaceutical composition and a health functional food for preventing or treating thrombotic diseases using a gardenia, preparing an ethanol extract of gardenia and extracting it with hexene to obtain a hexene fraction, Thrombin time, prothrombin time, and activated partial thromboplastin time (aPTT) and platelet aggregation inhibition were evaluated for human plasma and human thrombin, respectively. As a result, it was confirmed that platelet aggregation inhibition effect of aspartic acid (commercial antithrombotic agent), which is currently used in the hexane fraction of ethanol extract of gardenia, is stronger than that of commercially available antithrombotic agent. In addition, the hexane fraction of the gardenia extract was excellent in heat and acid stability, and acute toxicity was not observed when administered orally to rats, and the present inventors completed the present invention by confirming that the fractions were not toxic.

따라서, 본 발명은 치자 추출물의 헥센 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈전성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 건강 기능 식품을 제공한다.Accordingly, the present invention provides a pharmaceutical composition and a health functional food for the prevention or treatment of a thrombotic disease containing the hexane fraction of the gardenia extract as an active ingredient.

이하에서는, 본 발명의 치자 추출물의 헥센 분획물을 제조하는 방법 및 효능 실험 등을 보다 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the method for producing the hexane fraction of the gardenia extract of the present invention and the efficacy experiments will be described in more detail.

본 발명은 치자로부터 추출물을 조제하는 단계; 상기 치자 추출물로부터 헥센 분획물로 조정제하는 단계; 상기 추출물 및 분획물의 효능 및 안정성 조사단계; 및 상기 헥센 분획물의 급성 독성을 검사하는 단계를 포함한다.The present invention provides a method for preparing an extract, comprising: preparing an extract from a gardenia; Adjusting the hexane fraction from the gardenia extract; Checking the efficacy and stability of the extract and fraction; And examining the acute toxicity of the hexene fraction.

본 발명의 조성물에 포함되는 "치자 추출물"은 시판 건조 치자를 물, 유기용매 또는 물과 유기용매의 혼합용매로 추출하는 단계, 상기 추출액을 0.06 mm 이하의 여과망을 사용하여 여과하고, 이를 감압 농축하는 단계에 의해 수득될 수 있다. 본 발명에서 사용되는 용매는 물(냉수 또는 열수); 주정, 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올)과 같은 유기용매; 또는 상기 물과 유기용매의 혼합용매 등을 이용할 수 있으며, 식품원료 제조에 사용 가능한 에탄올이 가장 바람직하다.The "gardenia extract" contained in the composition of the present invention is obtained by extracting commercial dried gardenia with water, an organic solvent or a mixed solvent of water and organic solvent, filtering the extract using a filter net of 0.06 mm or less, ≪ / RTI > The solvent used in the present invention is water (cold water or hot water); An organic solvent such as alcohol, alcohol, or anhydrous or hydrous alcohol having 1 to 4 carbon atoms (methanol, ethanol, propanol, butanol); Or a mixed solvent of water and an organic solvent, and most preferably ethanol that can be used for the production of food ingredients.

본 발명에서는, 먼저, 치자 에탄올 추출물 및 각 분획물을 조제하여 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임 및 에이피티 타임을 측정하였다. 그 결과 치자 에탄올 추출물 5mg/ml의 농도에서의 트롬빈 타임은 무첨가구보다 1.4배, 프로트롬빈 타임 및 에이피티 타임은 무첨가구와 유사한 혈액 응고시간을 나타냄을 확인하였다. 또한, 에탄올 추출물의 헥센 분획물 및 물 잔류물은 각각 5mg/ml 농도에서 혈액응고 활성이 나타나지 않았으나, 부탄올 분획물 및 에틸아세테이트 분획물의 경우 5mg/ml 농도에서 아스피린 1.5mg/ml과 유사한 트롬빈 타임 및 에이피티 타임을 나타내었다. 특히 에틸아세테이트 분획은 5mg/ml 농도에서 무첨가구에 비해 트롬빈 타임은 2.4배, 프로트롬빈 타임은 1.8배, 에이피티 타임은 2.1배 이상 연장됨을 확인하였다.In the present invention, first, the ginger ethanol extract and each fraction were prepared to measure thrombin time, prothrombin time, and apathy time. As a result, it was confirmed that the thrombin time at the concentration of 5 mg / ml of the gardenia ethanol extract was 1.4 times that of the no-added solution, and the prothrombin time and apathy time showed similar blood coagulation time to the no-added solution. In addition, the hexane fraction and the water residue of the ethanol extract showed no blood coagulation activity at the concentration of 5 mg / ml. However, in the case of the butanol fraction and ethyl acetate fraction, the concentration of 5 mg / ml of thrombin time and apathy Time. Especially, at 5 mg / ml concentration of ethyl acetate fraction, prothrombin time was increased to 2.4 times, prothrombin time was 1.8 times, and apathy time was 2.1 times longer than that of no - added.

다음으로, 치자의 에탄올 추출물 및 이의 각 분획물에 대한 혈소판 응집 활성을 평가하였다. 그 결과, 치자 에탄올 추출물 및 이의 분획물 중에서 헥센 및 에틸아세테이트 분획이 강력한 응집저해 활성을 나타내었으며, 에탄올 추출물, 부탄올 분획물 및 물 잔류물의 경우 오히려 응집 촉진효과를 나타남을 확인하였다. 특히 헥센 분획의 경우 동일농도에서 아스피린의 4~8배의 저해활성을 나타내었다. 이러한 결과는 치자 추출물의 헥센 분획물이 인간 혈소판에 작용하는 방식으로 혈전생성을 억제하는 효과를 가짐을 의미하며, 위장장해와 같은 부작용이 보고된 아스피린과 같은 항혈전제를 대치할 수 있음을 제시한다. Next, the platelet aggregation activity of the ethanol extract of the gardenia and the respective fractions thereof was evaluated. As a result, the hexane and ethylacetate fractions showed strong agglutination inhibition activity in the gardenia ethanol extract and the fractions thereof, and the ethanol extract, butanol fraction and water residues showed the effect of promoting flocculation. Especially, the hexane fraction showed 4 ~ 8 times inhibitory activity of aspirin at the same concentration. These results indicate that the hexane fraction of the gardenia extract has the effect of inhibiting thrombogenesis in a way that acts on human platelets and suggests that anti-thrombotic agents such as aspirin, which are reported as side effects such as gastrointestinal disorders, can be substituted .

특히 최근 치자의 에틸아세테이트 분획물에서 분리된 genipin, geniposide 및 crocin 등의 항혈소판 활성이 보고(Zhang H. Y. 등, 2013. Pharmaceutical Biology, 51: 221-225; Thushara R. M. 등, 2013. Mol. Cell Biochem. 373: 73-83)된 바 있어, 헥센 분획물을 대상으로 이러한 성분의 함유 여부를 조사하였으나, 치자의 헥센 분획물 성분에는 genipin, geniposide 및 crocin 등이 검출되지 않음을 확인함으로써 헥센 분획물에는 기존에 알려지지 않은 혈소판 응집저해활성의 지용성 물질을 포함되어 있을 것으로 예상되며, 상기 분획물이 신규의 항혈전 조성물로 이용 가능함을 확인하였다. In particular, antiplatelet activities such as genipin, geniposide and crocin isolated from the ethyl acetate fraction of ginger have recently been reported (Zhang HY et al., 2013. Pharmaceutical Biology, 51: 221-225; Thushara RM et al., 2013. Mol. Cell Biochem. : 73-83). As a result, the presence of these components in the hexane fraction was examined. However, it was confirmed that genipin, geniposide and crocin were not detected in the components of the hexane fraction of the gardenia. As a result, It is anticipated that lipid-soluble substances with anti-aggregation activity will be included and that the fractions are available as novel anti-thrombogenic compositions.

본 발명의 치자 추출물의 헥센 분획물은 감압증류 및 동결건조, 또는 분무건조 등과 같은 통상적인 분말화 과정을 거쳐 분말로 제조될 수 있다. 이들은 100℃의 열처리와 pH 2의 인체 위 내의 pH에서도 활성을 유지한다.The hexane fraction of the gardenia extract of the present invention can be made into powder by a conventional powdering process such as vacuum distillation and freeze-drying, or spray drying. They maintain their activity even at 100 ° C heat treatment and pH 2 in human body.

본 발명의 치자 추출물의 헥센 분획물은 혈전성 질환과 관련된 다양한 질환들의 예방 또는 치료용으로 사용될 수 있다. 상기 질환들은, 예를 들어, 동맥 혈전증으로서, 급성 심근 경색증, 가슴 통증, 호흡 곤란, 의식 소실, 허혈성 뇌졸중, 출혈성 뇌졸중, 두통, 운동 이상, 감각 이상, 성격 변화, 시력 저하, 간질 발작, 폐 혈전증, 심부정맥 혈전증, 하지 부종, 통증 및 급성 말초 동맥 폐쇄증 등을 들 수 있고, 정맥 혈전증으로서, 심부정맥 혈전증, 간문맥 혈전증, 급성 신장정맥 폐쇄증, 뇌 정맥동 혈전증 및 중심 망막정맥 폐쇄 등을 들 수 있다.The hexane fraction of the gardenia extract of the present invention can be used for the prevention or treatment of various diseases associated with thrombotic diseases. Such diseases include, for example, arterial thrombosis such as acute myocardial infarction, chest pain, dyspnea, loss of consciousness, ischemic stroke, hemorrhagic stroke, headache, dyskinesia, sensory abnormality, personality change, visual disturbance, epileptic seizure, , Deep vein thrombosis, lower limb edema, pain and acute peripheral artery occlusion. Vein thrombosis can include deep vein thrombosis, portal vein thrombosis, acute renal vein thrombosis, cerebral sinus thrombosis, and central retinal vein occlusion.

본 발명의 치자 추출물의 헥센 분획물을 포함하는 약학적 조성물은 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥 내, 복강 내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition containing the hexane fraction of the gardenia extract of the present invention may be formulated into oral compositions such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups and aerosols, sterilized injections Solutions, injections, and the like, and they can be administered by various routes including oral administration or intravenous, intraperitoneal, subcutaneous, rectal, topical administration and the like.

이러한 약학적 조성물에는 추가적으로 담체, 부형제 또는 희석제 등이 더 포함될 수 있으며, 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 물, 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리쓰리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 비정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 더 포함할 수도 있다.Such pharmaceutical compositions may further comprise carriers, excipients or diluents, and examples of suitable carriers, excipients or diluents that may be included include water, lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, But are not limited to, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methylcellulose, amorphous cellulose, polyvinylpyrrolidone, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, And the like. In addition, the pharmaceutical composition of the present invention may further include a filler, an anti-coagulant, a lubricant, a wetting agent, a flavoring agent, an emulsifying agent, an antiseptic, and the like.

바람직한 구체예로서, 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 상기 약학적 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 혼합하여 제형화한다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 등과 같은 윤활제가 사용될 수도 있다.In a preferred embodiment, the solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, which may contain at least one excipient, for example starch, calcium carbonate, Sucrose, lactose, gelatin and the like are mixed and formulated. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc, and the like may also be used.

바람직한 구체예로서, 경구용 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 예시될 수 있으며, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.Examples of the oral liquid preparation include suspensions, solutions, emulsions, syrups and the like. In addition to water and liquid paraffin which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, Perfumes, preservatives, and the like.

바람직한 구체예로서, 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제, 좌제 등을 예시할 수 있다. 비수성용제, 현탁제에는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 포함될 수 있다. 주사제에는 용해제, 등장화제, 현탁화제, 유화제, 안정화제, 방부제 등과 같은 종래의 첨가제가 포함될 수 있다.As a preferable specific example, the preparation for parenteral administration includes sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, freeze-drying agents, suppositories, and the like. Examples of the non-aqueous solvent and suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like. Injectables may include conventional additives such as solubilizers, isotonic agents, suspending agents, emulsifiers, stabilizers, preservatives, and the like.

본 발명의 약학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. In the present invention, "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level will depend on the type of disease, severity, The sensitivity to the drug, the time of administration, the route of administration and the rate of release, the duration of the treatment, factors including co-administered drugs, and other factors well known in the medical arts. The pharmaceutical composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents, and may be administered singly or multiply. It is important to take into account all of the above factors and to administer the amount in which the maximum effect can be obtained in a minimal amount without side effects, which can be easily determined by those skilled in the art.

바람직한 구체예로서, 본 발명의 약학적 조성물에서 치자 추출물의 헥센 분획물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 ㎏ 당 1 내지 5,000mg, 바람직하게는 100 내지 3,000mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.As a preferred embodiment, the effective amount of the hexane fraction of the gardenia extract in the pharmaceutical composition of the present invention may vary depending on the age, sex, and body weight of the patient, and is generally from 1 to 5,000 mg, preferably from 100 to 3,000 mg per kg of body weight mg may be administered daily or every other day or one or three times a day. However, the dosage may not be limited in any way because it may be increased or decreased depending on route of administration, severity of disease, sex, weight, age, and the like.

본 발명의 약학적 조성물은 다양한 경로를 통하여 대상에 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered to a subject through various routes. All modes of administration may be expected, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intra-uterine or intracerebroventricular injections.

본 발명에서 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 유효성분을 표적 세포로 전달할 수 있는 임의의 장치를 이용해 투여될 수도 있다.In the present invention, "administration" means providing a predetermined substance to a patient by any suitable method, and the administration route of the pharmaceutical composition of the present invention is either oral or non-oral May be administered orally. The composition of the present invention may also be administered using any device capable of delivering an effective ingredient to a target cell.

본 발명에서 "대상"은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함하고, 바람직하게는 포유류, 보다 바람직하게는 인간을 의미한다.In the present invention, the term "object" includes, but is not limited to, human, monkey, cow, horse, sheep, pig, chicken, turkey, quail, cat, dog, mouse, rat, rabbit or guinea pig , Preferably a mammal, more preferably a human.

또한, 본 발명의 건강 기능 식품은 혈전성 질환의 예방 또는 개선에 효과적인 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 치자 추출물의 헥센 분획물을 포함하는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.In addition, the health functional food of the present invention can be variously used for foods and beverages effective for preventing or improving thrombotic diseases. The food containing the hexane fraction of the gardenia extract of the present invention may be in the form of a powder, a granule, a tablet, a capsule, or a beverage, for example, various foods, beverages, gums, tea, vitamin complex, Can be used.

본 발명의 치자 추출물의 헥센 분획물은 일반적으로 전체 식품 중량의 0.01 내지 15중량%로 가할 수 있으며, 건강음료 조성물은 100ml를 기준으로 0.02 내지 10g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.The hexane fraction of the gardenia extract of the present invention can generally be added in an amount of 0.01 to 15% by weight of the total food, and the health beverage composition can be added in a proportion of 0.02 to 10 g, preferably 0.3 to 1 g, based on 100 ml.

본 발명의 건강 기능 식품은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제, 예컨대, 천연 탄수화물 및 다양한 향미제 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. The health functional food of the present invention may contain, as an additional ingredient, a food-acceptable food-aid additive such as natural carbohydrates and various flavors, in addition to containing the above-mentioned compound as an essential ingredient in the indicated ratio.

상기 천연 탄수화물의 예로는 포도당, 과당 등의 단당류, 말토오스, 수크로오스 등의 이당류 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등의 당알코올이 있다. Examples of the natural carbohydrate include sugar sugars such as glucose, monosaccharides such as fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol.

상기 향미제로는 타우마틴, 레바우디오시드 A, 글리시르히진, 사카린, 아스파르탐 등을 사용할 수 있다. Examples of the flavor agent include tau martin, rebaudioside A, glycyrrhizin, saccharin, and aspartame.

상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강 기능 식품 100ml 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g을 사용한다. 상기 외에 본 발명의 건강 기능 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물, 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강 기능 식품은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료 등의 제조를 위한 과육을 함유할 수도 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 치자 추출물 100중량부 당 0.01 내지 약 20중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.The ratio of the natural carbohydrate is generally about 1 to 20 g, preferably about 5 to 12 g per 100 ml of the health functional food of the present invention. In addition to the above, the health functional food of the present invention may contain various kinds of nutrients, vitamins, minerals, flavors such as synthetic flavors and natural flavors, colorants and heavy stabilizers, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, Thickening agents, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonating agents used in carbonated drinks, and the like. In addition, the health functional food of the present invention may contain flesh for producing natural fruit juice, fruit juice drink, vegetable drink and the like. These components may be used independently or in combination. The ratio of such additives is generally selected in the range of 0.01 to about 20 parts by weight per 100 parts by weight of the gardenia extract of the present invention.

이하, 본 발명의 구체적인 방법을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 바람직한 하나의 구체예일뿐이며, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예의 범위로 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the specific method of the present invention will be described in more detail by way of examples. The following examples are only a preferred embodiment of the present invention, and the scope of the present invention is not limited to the scope of the following examples.

[[ 실시예Example ]]

실시예Example 1: 치자 추출물 및 유기용매  1: Gardenia extract and organic solvent 분획물의Fraction 조제  pharmacy

중국산 건조 치자를 동경종합상사로부터 구입하여 이를 분쇄하여 분말화한 후, 치자 분말에 대해 10배 부피의 에탄올(95%, 덕산, 한국)을 가하고, 상온에서 2일간 3회 추출하였다. 추출물은 감압 농축하여 분말로 제조하고 사용 전까지 저온 밀봉 보관하였다. 분획물 조제를 위해서는, 추출물을 증류수에 현탁한 후, 헥센, 에틸아세테이트, 부탄올로 순차적 분획하였으며, 최종적으로 물 잔류물을 얻었다. Chinese ginseng powder was purchased from Tokyo General Trading Company and pulverized and powdered. Then, 10 times volume of ethanol (95%, Duksan, Korea) was added to the germanium powder and extracted three times at room temperature for 2 days. The extract was concentrated under reduced pressure to prepare a powder, which was stored at low temperature until use. For the preparation of the fractions, the extract was suspended in distilled water and then sequentially fractionated with hexene, ethyl acetate and butanol to finally obtain a water residue.

이때 에탄올 추출물의 수득율은 28±2%였으며, 치자 추출물의 헥센 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 및 물 잔류물의 수득율은 각각 16.7%, 14.5%, 50.2% 및 15.4%였다. 기존의 한약재 추출물과는 달리 부탄올 분획물의 양이 매우 많이 나타났으며, 헥센 분획도 상당량 수득되었다. 특히 헥센 분획물의 경우, 치자 100g에 대해 약 4.65g을 얻게 됨을 의미하며, 이는 기존 항혈전 성분인 crocin, genepin, geniposide를 포함하는 에틸아세테이트 분획물의 수득율보다 높다. The yields of ethanol extracts were 28 ± 2% and the yields of hexane fraction, ethyl acetate fraction, butanol fraction and water residue of the gardenia extract were 16.7%, 14.5%, 50.2% and 15.4%, respectively. Unlike conventional herbal medicine extracts, the amount of butanol fractions was very high, and a large amount of hexane fraction was obtained. Especially in the case of the hexane fraction, it means that about 4.65 g is obtained for 100 g of the gardenia, which is higher than the yield of the ethyl acetate fraction containing the conventional antithrombotic components crocin, genepin and geniposide.

조제된 치자 추출물 및 분획물들의 총 플라보노이드(total flavonoid), 총 폴리페놀(total polyphenol), 총 당 및 환원당 함량을 측정하였다. 총 플라보노이드 함량 측정은 각각의 시료를 18시간 메탄올 교반 추출하고, 여과한 추출 검액 400μl에 90% diethylene glycol 4ml를 첨가하고 다시 1N NaOH 40μl를 넣고 37℃에서 1시간 반응 후 420nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 rutin을 사용하였다. 총 폴리페놀 함량은 추출 검액 400μl에 50μl의 Folin-ciocalteau, 100μl의 Na2CO3 포화용액을 넣고 실온에서 1시간 방치한 후 725nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 tannic acid를 사용하였다. 환원당은 DNS법으로, 총당은 phenol-sulfuric acid법을 이용하여 정량하였다. 그 결과는 다음 [표 1]에 나타내었다. The total flavonoid, total polyphenol, total sugar and reducing sugar content of the prepared gardenia extracts and fractions were measured. To determine total flavonoid content, each sample was stirred for 18 hours in methanol, 400 ml of 90% diethylene glycol was added to 400 μl of the filtered extract, 40 μl of 1 N NaOH was added, and the absorbance at 420 nm was measured at 37 ° C for 1 hour. As a standard reagent, rutin was used. Total polyphenol content was determined by adding 50 μl of Folin-ciocalteau, 100 μl of Na 2 CO 3 The saturated solution was added and allowed to stand at room temperature for 1 hour, and the absorbance was measured at 725 nm. Tannic acid was used as a standard reagent. Reducing sugar was determined by DNS method and total sugar was quantified by phenol-sulfuric acid method. The results are shown in Table 1 below.

치자의 에탄올 추출물 및 분획물의 수율 및 이들의 성분 분석Yield and Components Analysis of Ethanol Extracts and Fractions of Gardenia 추출물/분획물Extract / fraction 추출 및
분획효율(%)
Extraction and
Fraction efficiency (%)
함량 (mg/g)Content (mg / g)
총 폴리페놀Total polyphenol 총 플라보노이드Total flavonoid 총 당Per capita 환원당 Reducing sugar 에탄올 추출물Ethanol extract 28.0±2.028.0 ± 2.0 9.1±0.159.1 ± 0.15 28.5±0.1128.5 ± 0.11 287.2±5.84287.2 ± 5.84 108.2±5.41108.2 ± 5.41 헥센 분획Hexene fraction 16.7±1.116.7 ± 1.1 4.6±0.044.6 ± 0.04 0.2±0.010.2 ± 0.01 9.8±0.579.8 ± 0.57 1.8±0.281.8 ± 0.28 에틸아세테이트 분획Ethyl acetate fraction 14.5±1.414.5 ± 1.4 15.9±0.1315.9 + 0.13 86.8±7.1886.8 ± 7.18 157.0±8.40157.0 + - 8.40 23.6±1.13 23.6 ± 1.13 부탄올 분획Butanol fraction 50.2±1.650.2 ± 1.6 8.7±2.158.7 ± 2.15 22.9±0.1622.9 ± 0.16 418.2±11.13418.2 ± 11.13 109.0±5.06109.0 + - 5.06 물 잔류물Water residue 15.4±0.415.4 ± 0.4 8.2±1.418.2 ± 1.41 5.9±0.075.9 ± 0.07 376.8±8.71376.8 + - 8.71 277.5±1.28277.5 ± 1.28

상기 [표 1]에 나타난 바와 같이, 치자 에탄올 추출물의 유기용매 분획수율은 부탄올 분획이 50% 이상을 차지하였으며, 나머지 분획물과 물 잔류물은 14.5~16.7%를 나타내었으며, 특히 헥센 분획물이 16.7%를 차지하여 치자 추출물이 다량의 오일성분을 함유하고 있음을 확인하였다. 한편 총 폴리페놀 함량 및 총 플라보노이드 함량은 에틸아세테이트>부탄올>물 잔류물>헥센 분획물의 순서, 총당 함량은 부탄올>물>에틸아세테이트>헥센 분획물의 순서, 환원당 함량은 물>부탄올>에틸아세테이트>헥센 분획물의 순서로 나타났다. 따라서 치자 추출물은 고농도의 폴리페놀과 플라보노이드를 함유하고 있음을 알 수 있었으며, 에틸아세테이트 및 부탄올 분획물이 상당량의 폴리페놀 및 플라보노이드를 함유함을 알 수 있다. 그러나 헥센 분획물의 경우 매우 낮은 폴리페놀 성분과 플라보노이드 성분을 나타내어 항혈전 활성은 우수한 반면, 항산화 활성과 같은 기타 유용활성은 미미한 것으로 확인되었다(결과 미제시). 따라서 이러한 결과는 헥센 분획물이 기존에 알려지지 않은 성분에 의해 항혈전 활성을 나타냄을 의미한다. As shown in Table 1, the organic solvent fraction of the gardenia ethanol extracts accounted for more than 50% of the butanol fraction, the remaining fractions and the water residues of 14.5 to 16.7%, and the hexane fraction of 16.7% , And it was confirmed that the gardenia extract contained a large amount of oil components. Total polyphenol content and total flavonoid content were as follows: ethyl acetate> butanol> water residues> order of hexane fractions, total sugar content of butanol> water> ethyl acetate> order of hexane fractions, reducing sugar content water> butanol> ethyl acetate> hexene Fractions. Therefore, it can be seen that the gardenia extract contains high concentrations of polyphenols and flavonoids, and ethyl acetate and butanol fractions contain significant amount of polyphenols and flavonoids. However, the hexane fraction exhibited a very low polyphenol component and flavonoid component and thus exhibited excellent antithrombotic activity, while other useful activities such as antioxidant activity were found to be insignificant. Thus, these results indicate that the hexane fraction exhibits antithrombotic activity by previously unknown components.

실시예Example 2: 치자 추출물 및  2: Gardenia extract and 분획물의Fraction 항혈전Anti-thrombosis 활성 평가  Activity evaluation

실시예 1의 치자 추출물 및 유기용매 분획물에 대한 항혈전 활성을 조사하였다. 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임, 에이피티 타임을 측정하였으며, 분석방법은 다음과 같다.The antithrombotic activity of the gardenia extract and the organic solvent fraction of Example 1 was examined. Thrombin time, prothrombin time, and apathy time were measured.

항혈전 활성은 기존에 보고된 방법에 준해 평가하였으며(Sohn et al., 2004. Kor . J. Pharmacogn 35. 52-61; Kwon et al., 2004. J. Life Science, 14. 509-513; 류 등 2010. J. Life Science, 20. 922-928), 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임과 에이피티 타임을 측정하였다. 혈장은 지원자의 전혈로부터 조제하였으며, 채혈 후 즉시 4℃에서 5,000g로 5분 동안 원심분리하여 혈장을 분리하고 냉동한 상태로 보관하였으며(신선동결혈장), 필요시 상온에서 해동하여 사용하였다. 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임과 에이피티 측정법은 다음과 같은 과정으로 수행되었다.Antithrombotic activity was assessed in accordance with previously reported methods (Sohn et < RTI ID = 0.0 > al ., 2004. Kor . J. Pharmacogn 35, 52-61; Kwon et al ., 2004. J. Life Science , 14: 509-513; Ryu et al. 2010. J. Life Science , 20. 922-928), thrombin time, prothrombin time and apathy time were measured. Plasma was prepared from the whole blood of the applicant, and immediately after collection, the plasma was separated by centrifugation at 5,000g for 5 minutes at 4 ° C and stored frozen (fresh frozen plasma) and thawed at room temperature if necessary. The thrombin time, prothrombin time, and apathy measurements were performed as follows.

트롬빈Thrombin 타임( time( ThrombinThrombin TimeTime ))

37℃에서 0.5U 트롬빈(Sigma Co., USA) 50μl와 20mM CaCl2 50μl, 다양한 농도의 시료 추출액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 혼합하여 2분간 반응시킨 후, 혈장 100μl를 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였다. 대조로는 아스피린(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였다. DMSO의 경우 32.1초의 응고시간을 나타내었다. 열 안정성 측정의 경우에는 다양한 농도의 시료용액을 100℃에서 30분간 열처리하고, 실온에서 1시간 방냉한 후, 잔존활성을 측정하였다. 트롬빈 타임 측정은 3회 이상 반복한 실험의 평균치로 나타내었다. 50 [mu] l 0.5 U thrombin (Sigma Co., USA) and 20 mM CaCl 2 50 μl, and 10 μl of various concentrations of sample extract were mixed in a tube of Amelung coagulometer KC-1A (Japan) and allowed to react for 2 minutes. Then, 100 μl of plasma was added and the time until the plasma coagulated was measured. As a control, aspirin (Sigma Co., USA) was used and DMSO was used as a solvent control instead of the sample. DMSO showed a clotting time of 32.1 sec. In the case of thermal stability measurement, sample solutions at various concentrations were heat-treated at 100 ° C for 30 minutes, allowed to stand at room temperature for 1 hour, and residual activity was measured. The thrombin time measurement was expressed as the average value of the experiments repeated three or more times.

프로트롬빈Prothrombin 타임( time( prothrombinprothrombin timetime ))

표준혈장(MD Pacific Co., China) 70μl와 다양한 농도의 시료액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 첨가하여 37℃에서 3분간 가온 후, 130μl의 PT reagent를 첨가하고 혈장이 응고될 때까지의 시간을 3회 반복한 실험의 평균치로 나타내었다. 대조로는 아스피린(Sigma Co., USA)을 사용하였으며, 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였다. DMSO의 경우 18.1초의 응고시간을 나타내었다. 프로트롬빈 타임 측정은 3회 이상 반복한 실험의 평균치로 나타내었다. Add 70 μl of standard plasma (MD Pacific Co., China) and 10 μl of various concentrations of sample solution to tubes of Amelung coagulometer KC-1A (Japan), incubate at 37 ° C for 3 minutes, add 130 μl of PT reagent, The time from the start of the experiment to the start of the experiment was expressed as the average value of the experiments repeated three times. As a control, aspirin (Sigma Co., USA) was used and DMSO was used as a solvent control instead of the sample. DMSO showed a clotting time of 18.1 sec. The prothrombin time measurement was expressed as the mean value of the experiments repeated three or more times.

aPTTaPTT ( ( activatedactivated PartialPartial ThromboplastinThromboplastin TimeTime ))

혈장 100μl와 다양한 농도의 시료액 10μl를 Amelung coagulometer KC-1A(Japan)의 튜브에 첨가하여 37℃에서 3분간 가온한 후, 50μl의 aPTT reagent(Sigma, ALEXINTM)를 첨가하고 다시 37℃에서 3분간 가온하였다. 이후 50μl CaCl2(35mM)을 첨가한 후 혈장이 응고될 때까지의 시간을 측정하였다. 용매 대조구로는 시료 대신 DMSO를 사용하였으며, 이 경우 55.1초의 응고시간을 나타내었다. aPTT의 결과는 3회 반복한 실험의 평균치로 나타내었다After adding 100 μl of plasma and 10 μl of various concentrations of the sample to a tube of Amelung coagulometer KC-1A (Japan), the mixture was heated at 37 ° C for 3 minutes, then 50 μl of aPTT reagent (Sigma, ALEXIN ) And warmed for a minute. After the addition of 50 μl CaCl 2 (35 mM), the time until the plasma coagulated was measured. As the solvent control, DMSO was used instead of the sample. In this case, the solidification time was 55.1 seconds. The results of aPTT were expressed as the mean value of three repeated experiments

치자의 혈액응고 저해활성 측정 결과는 다음 [표 2]에 나타내었다.The results of measurement of blood coagulation inhibitory activity of gardenia are shown in the following [Table 2].

치자 에탄올 추출물 및 이의 분획물의 항혈전 활성 Antithrombotic Activity of Gardenia Ethanol Extract and Its Fraction 시료sample 농도 (mg/ml)Concentration (mg / ml) 혈전생성 시간 (초)Thrombogenic time (seconds) 트롬빈 타임Thrombin time 프로트롬빈 타임Prothrombin time 에이피티 타임Apathy time DMSO(용매)DMSO (solvent) -- 32.1±0.532.1 ± 0.5 18.1±0.318.1 ± 0.3 55.1±1.455.1 ± 1.4 아스피린aspirin 5.05.0 >480> 480 >280> 280 >800> 800 1.51.5 60.9±1.860.9 ± 1.8 30.7±1.230.7 ± 1.2 77.1±2.877.1 ± 2.8 에탄올 추출물Ethanol extract 5.05.0 44.9±2.244.9 ± 2.2 18.1±0.518.1 ± 0.5 55.1±1.755.1 ± 1.7 헥센 분획Hexene fraction 5.05.0 35.3±1.935.3 ± 1.9 18.0±0.718.0 ± 0.7 55.1±2.455.1 ± 2.4 에틸아세테이트 분획Ethyl acetate fraction 5.05.0 77.1±5.577.1 ± 5.5 32.6±3.832.6 ± 3.8 115.7±10.5115.7 ± 10.5 부탄올 분획Butanol fraction 5.05.0 54.5±2.354.5 ± 2.3 18.1±0.518.1 ± 0.5 82.6±5.182.6 ± 5.1 물 잔류물Water residue 5.05.0 41.7±1.641.7 ± 1.6 18.1±1.118.1 ± 1.1 77.2±3.577.2 ± 3.5

상기 [표 2]에 나타난 바와 같이, 대조구로 사용된 아스피린(상품명: 프로텍트)은 5mg/ml 농도에서 무첨가구에 비해 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임과 에이피티 타임 모두 무첨가구에 비해 15배 이상 연장된 혈액 응고시간을 나타내어 우수한 항혈전 효과를 나타내었으며, 1.5mg/ml의 농도에서는 무첨가구에 비해 각각 1.9배, 1.7배, 및 1.4배 연장된 혈액 응고시간을 나타내었다. 한편 치자의 에탄올 추출물은 5mg/ml 농도에서는 트롬빈 타임만을 선택적으로 1.4배 연장시켜 치자의 미약한 항응고 활성을 확인하였다. 각각의 분획물 중 헥센 분획물은 혈액 응고에는 거의 영향을 미치지 않았으며, 항혈전 활성이 알려진 에틸아세테이트 분획은 트롬빈 타임, 프로트롬빈 타임과 에이피티 타임을 각각 무첨가구에 비해 2.4배, 1.8배 및 2.1배 연장시켰다. 부탄올 분획 및 물 잔류물에서도 미약한 항혈전 활성이 나타났다.As shown in the above Table 2, aspirin (trade name: Protect) used as a control was added at a concentration of 5 mg / ml to the thrombin time, prothrombin time, and apitime time, And 1.5 mg / ml, respectively. The blood coagulation time was 1.9 times, 1.7 times, and 1.4 times longer than that of the non-additive group, respectively. On the other hand, the ethanol extract of the gardenia showed a selective anticoagulant activity of the gardenia by selectively extending the thrombin time by 1.4 times at the concentration of 5 mg / ml. The hexane fraction of each fraction had little effect on blood coagulation. The ethyl acetate fraction of which antithrombotic activity was known was 2.4 times, 1.8 times, and 2.1 times longer than thrombin time, prothrombin time and apathy time, respectively . Butanol fraction and water residues showed weak antithrombotic activity.

실시예Example 3: 치자 추출물, 순차적 유기용매  3: Gardenia extract, sequential organic solvent 분획물의Fraction 인간 혈소판 응집 저해활성  Human platelet aggregation inhibitory activity

치자 추출물 및 분획물의 항혈전 활성 평가의 일환으로 인간 혈소판에 대한 응집저해활성을 다음의 방법에 준해 평가하였으며, 그 결과는 [표 3] 및 도 1에 나타내었다. The anti-aggregation inhibitory activity against human platelets was evaluated in accordance with the following method as an evaluation of antithrombotic activity of the gardenia extract and fractions, and the results are shown in Table 3 and FIG.

혈소판 응집저해 활성(Platelet Aggregation Inhibitory Activity PlateletPlatelet aggregationaggregation inhibitioninhibition activityactivity ))

혈소판은 건강한 인간의 전혈로부터 3.2% sodium citrate 용액과 1:9의 비율로 혼합한 후, 1,100rpm에서 10분간 원심분리하여 상층의 PRP(platelet rich plasma)를 취하고, 이를 washing buffer(138mM NaCl, 2.7mM KCl, 12mM NaHCO3, 0.36mM NaH2PO4, 5.5mM Glucose, 1mM EDTA, pH 6.5)로 1회 세척하였다. 이후, suspending buffer(138mM NaCl, 2.7mM KCl, 12mM NaHCO3, 0.36mM NaH2PO4, 5.5mM Glucose, 0.49mM MgCl2, 025% gelatin, pH 7.4)에 재현탁한 후, 3,000rpm에서 10분간 원심분리한 후 다시 suspending buffer에 재현탁 하였으며, 이때 혈소판 수는 4x109/ml 되도록 조정하였다. 이후 1ml 현탁액에 2.5μl collagen을 가해 5분간 반응시키고, whole-blood aggregometer(Chrono-log, USA)를 사용하여 37℃에서 혈소판 응집을 측정하였다. Platelets were mixed with 3.2% sodium citrate solution in a ratio of 1: 9 from healthy human whole blood, and centrifuged at 1,100 rpm for 10 minutes to obtain upper layer platelet rich plasma (PRP). The platelets were washed with a washing buffer (138 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 12 mM NaHCO 3 , 0.36 mM NaH 2 PO 4 , 5.5 mM Glucose, 1 mM EDTA, pH 6.5). The cells were resuspended in a suspending buffer (138 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 12 mM NaHCO 3 , 0.36 mM NaH 2 PO 4 , 5.5 mM Glucose, 0.49 mM MgCl 2 , 025% gelatin, pH 7.4), centrifuged at 3,000 rpm for 10 minutes After separation, the cells were resuspended in a suspending buffer, and the platelet count was adjusted to 4 × 10 9 / ml. Then platelet aggregation was measured at 37 ° C using a whole-blood agarometer (Chrono-log, USA) after 2.5 μl of collagen was added to 1 ml of suspension and reacted for 5 minutes.

치자 에탄올 추출물 및 이의 분획물의 인간 혈소판 응집저해 활성Human Platelet Aggregation Inhibitory Activity of Gardenia Ethanol Extract and Its Fraction 시료/대조구Sample / Control 강도
(Amplitude:ohm)
burglar
(Amplitude: ohm)
기울기
(Slope)
inclination
(Slope)
연장시간
(Lag time:초)
Extension time
(Lag time: seconds)
하강면적
(Area under)
Fall area
(Area under)
DMSO(용매)DMSO (solvent) 2020 33 2222 135.9135.9 아스피린 (0.50 mg/mL)Aspirin (0.50 mg / mL) 77 1One 4242 42.442.4 아스피린 (0.25 mg/mL)Aspirin (0.25 mg / mL) 1414 22 4040 80.180.1 에탄올 추출물 (0.25 mg/mL)Ethanol extract (0.25 mg / mL) 2727 99 44 267.9267.9 헥센 분획물 (0.25 mg/mL)The hexane fraction (0.25 mg / mL) 44 1One 4747 22.222.2 에틸아세테이트 분획물 (0.25 mg/mL)Ethyl acetate fractions (0.25 mg / mL) 44 1One 4242 28.628.6 부탄올 분획물 (0.25 mg/mL)Butanol fraction (0.25 mg / mL) 2626 44 1414 200.5200.5 물 잔류물 (0.25 mg/mL)The water residue (0.25 mg / mL) 2626 55 88 230.6230.6

*하강면적이 작을수록 혈소판 응집이 나타나지 않음을 의미 * Smaller fall area means less platelet aggregation

[표 3]에 나타난 바와 같이, 먼저 아스피린 첨가구는, 0.25mg/ml 농도에서 무첨가구에 비해58.9%의 혈소판 응집, 0.5mg/ml농도에서는 31.1%의 응집을 나타내어 우수한 인간 혈소판 응집저해 활성을 나타내었으며, 농도의존적인 응집저해 활성을 확인하였다. As shown in Table 3, the platelet aggregation of 58.9% and the aggregation of 31.1% at the concentration of 0.5 mg / ml were higher than those of the non-additive group at the concentration of 0.25 mg / ml, And the concentration dependent coagulation inhibitory activity was confirmed.

한편 치자 에탄올 추출물의 경우 0.25mg/ml 농도에서 무첨가구에 비해 197%의 혈소판 응집을 나타내었으며, 부탄올 분획물 및 물 잔류물에서도 각각 147% 및 169%의 혈소판 응집을 나타내었다. 따라서 차자 에탄올 추출물, 부탄올 분획물 및 물 잔류물은 혈소판 응집 촉진을 통한 지혈제로 작용함을 알 수 있었으며, 이는 한방에서 지혈제로 치자를 사용하여 온 근거를 제시하고 있다. On the other hand, the ethanol extract of the gardenia showed 197% platelet aggregation at the concentration of 0.25 mg / ml and the platelet aggregation of 147% and 169% in the butanol fraction and the water residue, respectively. Therefore, it was found that tea extract, butanol fraction and water residue act as a hemostatic agent through the promotion of platelet aggregation, suggesting the use of gardenia as a hemostatic agent in the oriental medicine.

한편 헥센 분획물 및 에틸아세테이트 분획물은 각각0.25mg/ml 농도에서 무첨가구에 비해 16.3% 및 21.0%의 혈소판 응집을 나타내어, 아스피린 0.5mg/ml농도에서 나타내는 혈소판 응집저해 효과보다 강력한 응집저해 활성을 나타내었다. 기존에 에틸아세테이트 분획물의 genepin및 crocin이 혈소판 응집저해 활성을 나타냄이 보고되어 있으나, 지혈제로 사용되고 있는 치자로부터 조정제된 헥센 분획물이 아스피린보다 4~8배 강력한 혈소판 응집저해 활성을 통해 혈전 생성을 저해하는 것은 매우 이례적인 경우이며, 향후 헥센 분획물의 활성물질 정제와 규명이 필요하다.On the other hand, the hexane fraction and the ethyl acetate fraction exhibited 16.3% and 21.0% platelet aggregation at 0.25 mg / ml concentration, respectively, as compared with the non-platelet fraction, showing stronger aggregation inhibition activity than the platelet aggregation inhibition effect exhibited at aspirin 0.5 mg / ml concentration . Previously, the genepin and crocin of the ethyl acetate fraction have been reported to exhibit platelet aggregation inhibitory activity. However, the adjusted hexene fraction from the groomer used as a hemostatic agent inhibits thrombogenesis through 4 to 8 times more potent inhibition of platelet aggregation than aspirin Is a very unusual case, and purification and identification of the active substance of the hexane fraction is necessary in the future.

따라서 본 실시예를 통해, 치자 추출물의 헥센 분획물은 혈소판 응집저해제로 기존의 아스피린을 대치할 수 있음을 확인하였다.Thus, through this example, it was confirmed that the hexane fraction of the gardenia extract can replace the existing aspirin with the platelet aggregation inhibitor.

실시예Example 4: 치자 추출물의  4: Gardenia extract 헥센Hexen 분획물의Fraction 안정성 stability

상기 실시예 1에서 얻은 치자 추출물의 헥센 분획물을 대상으로 열 안정성, 산 안정성 및 혈장 안정성을 확인하였다. 각각의 시료들은 100℃에서 2시간 처리, pH 2(0.01M HCl)에서의 2시간 처리, 혈장에서 2시간 처리시에도 혈액응고인자 저해 및 혈소판 응집저해 활성의 감소가 나타나지 않아 높은 안정성을 나타내었다. The hexane fraction of the gardenia extract obtained in Example 1 was examined for thermal stability, acid stability and plasma stability. Each sample showed high stability because it did not show inhibition of blood clotting factor inhibition and platelet aggregation inhibition activity even at 2 hours treatment at 100 ° C, 2 hours treatment with pH 2 (0.01M HCl) or 2 hours treatment with plasma .

실시예Example 5: 치자 추출물의  5: Gardenia extract 헥센Hexen 분획물의Fraction 마우스  mouse 단회One time 경구독성Oral toxicity 시험 exam

상기 실시예 1에서 얻은 치자 추출물의 헥센 분획물을 대상으로 마우스 단회 경구독성을 평가하였다. 먼저 4주령의 흰쥐(Slc, ICR Mouse)를 (주)중앙실험동물로부터 공급받아 온도 23±3℃, 상대습도 50±10%, 150~300Lux의 조도로 12시간 간격(오전 8시~오후 8시)으로 조절되는 동물실험실에서 14일간 순화시켰다. 이후 실시예 1로부터 얻은 헥센 분획물을 옥수수유에 녹인 후, 400, 800, 1500, 2000mg/kg 농도로 각각 3마리씩 경구투여 후, 일주일 간 생존 여부와 병적 이상 증후를 관찰하였다. 대조구로는 옥수수유만을 경구투여하였다. 그 결과 생존율은 100%였으며, 병적 이상 징후는 나타나지 않았다. 따라서, 약용으로 사용되어 온 치자로부터 분리한 헥센 분획물은 저독성 또는 무독성으로 구분되며, 이의 낮은 농도의 사용은 부가적인 문제점을 야기하지 않으리라 판단되었다.Mouse single oral toxicity was evaluated in the hexane fraction of the gardenia extract obtained in Example 1 above. First, 4-week-old rats (Slc, ICR Mouse) were supplied from Central laboratory animals and were maintained at a temperature of 23 ± 3 ° C, a relative humidity of 50 ± 10% and a light intensity of 150 ~ Hour) for 14 days. After that, the hexane fraction obtained from Example 1 was dissolved in corn oil and then administered orally at a dose of 400, 800, 1500, or 2000 mg / kg, respectively, for 3 weeks, and the survival and the pathological abnormality were observed for one week. As a control, only corn was administered orally. As a result, the survival rate was 100% and there were no sign of pathological abnormality. Therefore, the hexane fraction isolated from gardenia, which has been used for medicinal purposes, is classified as low toxic or non - toxic, and it is judged that the use of its low concentration will not cause additional problems.

Claims (5)

치자(Gardenia jasminoides Ellis) 추출물의 헥센 분획물을 유효성분으로 함유하는 혈소판 응집 저해용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for inhibiting platelet aggregation comprising an extract of Gardenia jasminoides Ellis as an active ingredient. 제 1항에 있어서,
상기 치자 추출물은 물, 주정, 및 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 알코올로 이루어지는 군으로부터 선택된 용매로 추출되는 것을 특징으로 하는 혈소판 응집 저해용 약학적 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the aqueous germanium extract is extracted with a solvent selected from the group consisting of water, alcohol, and anhydrous or hydroalcohol having 1 to 4 carbon atoms.
제 1항에 있어서,
상기 치자 추출물은 에탄올로 추출되는 것을 특징으로 하는 혈소판 응집 저해용 약학적 조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the germanium extract is extracted with ethanol.
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Pharm. Biol. 2013. Vol. 51, No. 2, pp. 221-225 (온라인 공개일: 2012.11.2.)*
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