KR101425046B1 - Mass production method of Paecilomyces lilacinus HY―4 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 패실로마이세스(Paecilomyces) 속 곰팡이 및 이의 대량 생산 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) HY-4 균주를 경제적으로 산업적으로 대량 생산하기 위한 최적의 배지 조성, 및 산업적 활용을 위한 패실로마이세스 속 곰팡이의 산업적 포자 생산 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 패실로마이세스 속 곰팡이의 대량 생산 배지 조성, 배양 방법 및 포자 생산 방법은 다양한 해충의 방제를 위한 산업화에 유용하게 이용될 수 있다.The present invention relates to a method for mass production of Paecilomyces fungi and a method for mass production thereof, and more particularly, to a method for mass production of Paecilomyces lilacinus strain HY-4 in an economical industrial scale To a method for producing industrial spores of a filamentomyces fungus for industrial application. The mass production medium, culture method and spore production method of the fungus belonging to the genus Faecalomyces according to the present invention can be useful for industrialization for controlling various pests.

Description

패실로마이세스 속 곰팡이의 대량 생산 방법{Mass production method of Paecilomyces lilacinus HY―4}Mass production method of Paecilomyces lilacinus HY-4}

본 발명은 패실로마이세스(Paecilomyces) 속 균주의 대량 생산 방법에 관한 것으로, 보다 생세하게는 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) HY-4 균주를 해충 방제용 활용을 위한 산업적 대량 생산하기 위한 배지 조성, 상기 배지 조성을 이용한 배양 방법, 및 상기 배양 방법을 이용한 패실로마이세스 속 곰팡이의 산업적 포자 생산 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a mass production method of my process (Paecilomyces) sp indeed L, more particularly L saengse will indeed My process Sinners (Paecilomyces The present invention relates to a culture medium for industrially mass-producing lilacinus HY-4 for use in pest control, a culture method using the culture medium, and a method for producing industrial spores of Fasylomyces fungi using the culture method.

21세기 국내외 농산업은 이상 기후에 따른 식량의 안정적 확보 및 웰빙 요구와 더불어 식품의 안전성이 무엇보다도 강조되고 있으므로 지난 어느 때보다도 양적, 질적인 성장 속도가 빠를 것으로 전망되고 있다. 특히 안전한 식품 문제는 생산되는 작물의 1차적인 안전성과 연계되어 있으므로 정부에서는 친환경농업육성 계획을 수립 추진 중에 있으며, 친환경농산물의 생산 비중을 확대하고 화학농약 및 비료 사용량을 현재 수준에서 계속적으로 절감하고자 추진 중이다.
The domestic and overseas agricultural industry in the 21st century is expected to have faster and more quantitative and qualitative growth than ever before, as the food safety is emphasized along with the stable food supply and well-being demands due to abnormal weather. Especially, the problem of safe food is related to the primary safety of the crops produced. Therefore, the government is planning to establish an environmentally-friendly agricultural development plan. In order to increase the proportion of production of environmentally friendly agricultural products and to reduce the amount of chemical pesticides and fertilizer We are pursuing.

인간·환경 독성문제 해결과 친환경 농업을 위한 방안으로 유기합성 화학농약을 대체할 수 있는 생물농약(Biopesticides)의 개발이 가장 유력한 대안으로 제시되고 있다. 미국의 경우 생물농약연구를 청정화학(Green Chemistry) 분야로 인식하여 폭넓은 연구개발이 진행되고 있다.The development of biopesticides that can replace organic synthetic chemical pesticides as a solution for human and environmental toxicity problems and eco-friendly agriculture is proposed as the most promising alternative. In the United States, extensive research and development is underway in recognition of the pesticide research in the field of green chemistry.

현재 전 세계적으로 등록된 생물농약이 370여 종으로 알려져 있는데, 이 중에서 살충제가 270여 종으로 전체의 약 75%를 차지하고 있으며, 생물농약의 개발은 비교적 소규모 회사들을 중심으로 이루어지고 있다는 점과 대부분 미생물에 근간한 미생물 농약 개발이 주요 특징이라 할 수 있다. 미생물 농약으로 등록되어 이용되는 미생물의 종류를 살펴보면 곰팡이와 세균이 가장 많고 그 다음으로 해충방제용으로 이용되는 바이러스이다.Currently, there are more than 370 registered biologically active pesticides in the world, of which about 270% are pesticides, and the development of bio-pesticides is mainly carried out by small companies. The development of microbial pesticides based on microorganisms is a major feature. Microbial pesticides The most commonly used microbes are fungi and bacteria, followed by pest control.

해충 방제를 위해서 우리나라에서는 골프장 잔디 및 인삼밭을 가해하는 풍뎅이 유충뿐만 아니라, 온실가루이, 배추좀나방, 거세미나방 및 벼멸구 등의 방제에 많은 노력을 하고 있으나, 방제를 위해서는 많은 비용이 들고 화학살충제로 인한 환경오염의 문제 등으로 인해서 어려운 점을 겪고 있다. 이에 종래에 사용되고 있는 화학살충제에 의한 토양 및 수질오염, 인체에 대한 독성 및 환경호르몬 피해, 저항성 해충 출현, 유용천적의 감소 등으로 인한 피해를 최소화하기 위한 환경친화적 해충방제의 필요성이 증가되고 있다.In order to control pests, in Korea, much effort has been made to control green grass powder, cabbage moth, larvae, and brown planthopper, as well as beetle larvae, which are applied to golf course grass and ginseng field. However, And the problems of environmental pollution caused by such problems. Therefore, there is an increasing need for environmentally friendly pest control in order to minimize damage caused by soil and water pollution caused by chemical insecticides used in the past, toxicity to human body, harmful endocrine disruptor, appearance of resistant insect pests, and reduction of useful natural enemies.

이러한 해충의 친환경적인 방제를 위하여 몇 년 전부터 천적을 방사하는 방법이 이용하고 있으나 현재 많은 농가들은 국내에서 판매되고 있는 BT제와 천연물제제를 주로 사용하고 있다. 그러나 이들 제제의 경우 원료를 중국 등에서 수입하여 사용하는 것이 대부분이지만 저항성 발현이 빨리 일어나 개발 제품의 라이프 사이클(Life Cycle)이 짧은 큰 단점을 지니고 있다.In order to control these pests eco-friendly, they have been using natural methods for decades, but now many farmers are using BT and natural products that are sold domestically. However, most of these formulations are imported from China and other countries, but the development of resistance is rapid, resulting in short life cycle of developed products.

따라서 기존의 개발된 BT제, 천연물제로 방제가 불가능한 흡즙 해충 및 토양해충 방제제의 개발을 위하여 우수한 방제효과가 있는 새로운 유효미생물의 발굴이 절실히 요청되고 있다. 그 중에서도 특히 곤충병원성 곰팡이는 방제효과가 좋아 외국에서 이미 제품으로 개발되어 사용되고 있다. 곤충병원성 곰팡이 제품들의 주원료는 백강균(Beauveria bassiana) 또는 녹강균(Metarhizium anisopliae)이 차지하고 있다. 그러나 이 제품들은 곰팡이 포자를 이용한 생균제 제품으로서 제품의 대량 생산적인 측면과 적용상의 문제점 때문에 시장 확대가 부진한 것으로 평가되고 있는 실정이다.Therefore, it is urgently required to find new effective microorganisms having excellent control effect for the development of insecticidal insect pests and soil pest control agents that can not be controlled by the existing BT and natural materials. Among them, especially insect pathogenic fungi are effective in controlling and have been already developed and used as products in foreign countries. The main ingredient of insect pathogenic fungi products is Beauveria bassiana or Metarhizium anisopliae . However, these products are probiotic products using fungus spores, and it is estimated that the market expansion is sluggish due to the problems of mass production and application of products.

곤충병원성 곰팡이를 이용한 해충방제는 환경친화적인 방제수단으로, 표적 해충에만 선택적으로 작용하며, 해충의 저항성 출현을 억제하고, 지속적인 방제가 가능하며, 환경, 인축 및 식물에는 전혀 해가 없으면서 잔류독성이 없는 양질의 농산물 생산을 가능하게 하는 등 여러 가지 장점을 가지고 있으므로 미국을 비롯한 여러 농업 선진국에서는 범국가적인 차원에서 자국 환경에 적합한 곤충병원성 곰팡이를 분리, 대량생산 및 제제화하여 실용화하고 있는 실정이다.Insect Pests Pest control using fungi is an environmentally friendly means of controlling, selectively acting only on target insects, inhibiting the appearance of resistance to pests, allowing continuous control, and no toxicity to the environment, It is possible to produce insect pathogenic fungi suitable for the domestic environment in a wide range of countries. Therefore, it is a practical practice to isolate, mass-produce and formulate fungi suitable for the domestic environment.

국내의 경우에서도 현재까지의 연구개발은 곤충병원성 곰팡이 생균제 자체 개발에만 국한되어 있어 실제로 산업적인 성과를 확보하기가 어려웠다. 그로 인하여 실제 개발 제품의 경제성과 현장에서의 우수한 효과 확보가 어려웠고, 이러한 문제점들이 시장 확대 부진에 중요한 원인으로 작용하고 있다.Even in Korea, the research and development to date have been limited to the development of insect pathogenic fungi probiotics, making it difficult to achieve industrial achievements. As a result, it is difficult to secure the economical efficiency of the actual developed products and the excellent effects in the field, and these problems are important factors in the sluggish market expansion.

전 세계 생물농약 시장은 계속 증가세를 보이고 있으며, 2005년도의 경우 전체 농약시장의 2.5% 시장을 형성하고 있다. 현재 친환경 농산물의 급속한 수요확대를 기반으로 전체 농약시장의 4.3%까지 확대될 것으로 예측되고 있다. 2006년 1월의 생물 농약 시장(The New Biopesticide Market)의 보고에 의하면 생물농약은 연성장 9.9% 성장률을 보이는 것에 비해 화학농약은 1.1%의 감소세를 보일 것으로 예측하고 있다. 화학농약을 대체할 정도의 우수한 생물농약이 개발되면 시장은 더욱 확대될 것으로 예상된다.The global biopharmaceutical market continues to grow, and in 2005, the pesticide market is forming a 2.5% market. Currently, it is expected to expand to 4.3% of the total pesticide market based on the rapid expansion of demand for eco-friendly agricultural products. A report by The New Biopesticide Market in January 2006 predicts that pesticides will grow at a rate of 1.1 per cent compared to annual growth of 9.9 per cent. The market is expected to expand further when bio-pesticides are developed to replace chemical pesticides.

국내의 경우, 생물농약 시장은 화학농약에 비하여 크지 않으나 친환경 농업의 확대로 시장은 확대될 것으로 예측되며, 특히 정부의 화학농약 사용량 40% 감소 정책과 화학농약을 대체할 수 있는 새로운 우수 생물농약이 개발되면 시장은 더욱 확대될 것으로 생각된다.In Korea, the bio-pesticide market is not large compared to chemical pesticides, but it is expected that the market will expand due to the expansion of eco-friendly agriculture. In particular, the government plans to reduce the use of chemical pesticides by 40% The market is expected to expand further when developed.

지난 2000년 이후 정부의 1차 친환경농업 육성정책에 의거한 다양한 지원책을 펼치고 있음에도 불구하고 국내 화학농약의 사용량은 전혀 감소되지 않았으며, 친환경 생물농약 시장 또한 3% 미만의 낮은 시장성을 보이고 있다. 이것의 주된 원인으로는 연구 개발의 부재와 그나마 개발된 기술의 제품화를 위한 방향성 부재(전략)와 시장성 높은 제품 개발 기술의 미흡을 들 수 있다.Since 2000, despite the government's efforts to support the first eco-friendly agriculture, the use of domestic chemical pesticides has not decreased at all, and the market for environmentally friendly pesticides has also been less than 3%. The main reasons for this are lack of directionality (strategy) and lack of marketable product development technology for the lack of R & D and commercialization of developed technologies.

국내의 미생물농약과 생화학농약을 포함한 생물농약에 대한 연구는 1970년대 후반부터 대학교 및 정부 연구기관에서 산발적으로 시작되었으나 1990년대에 들어서부터 연구개발이 어느 정도 활성화되기 시작하였으며 1997년 친환경농업육성법이 제정되고 정부의 화학농약 사용량 감소를 위한 친환경농업에 대한 지원이 추진되면서 생물농약 및 미생물제제 개발이 본격적으로 진행되고 있는 실정이다.Research on bio-pesticides including microbial pesticides and biochemical pesticides in Korea started sporadically in universities and government research institutes from the late 1970s, but since the 1990s, research and development has been activated to a certain extent. In 1997, And the government is supporting the eco-friendly agriculture to reduce the usage of chemical pesticides, so the development of bio-pesticides and microbial agents is proceeding in earnest.

생물농약 및 미생물 제제의 연구개발의 경우 초기 연구개발은 실내 실험 위주로 우수한 미생물 또는 신규 미생물 유래 활성물질의 확보에 중점을 두었으나, 최근 벤처기업을 중심으로 제품화에 필요한 대량생산 및 제형화 기술 등이 축적되고 있다. In the case of research and development of biological pesticides and microbial agents, early research and development focused on securing excellent microorganisms or active substances derived from new microorganisms mainly in laboratory experiments. Recently, venture companies have focused on mass production and formulation technologies It is accumulating.

또한, 국내 미생물 살충제의 연구 개발 역사는 매우 길지만, 가격 및 활성의 문제로 시장 진입이 매우 제한적인 실정이다. 사회적 요구로 안전한 먹거리의 생산 및 환경에 대한 고려가 증대되었고 기술의 진전으로 상당한 생물농약이 살충제로 사용되고 있지만 아직 화학농약에 대한 실질적인 의존률이 높은 실정이다.In addition, the history of research and development of domestic microbial pesticides is very long, but market entry is very limited due to price and activity problems. Due to social demands, production of safe food and consideration of the environment have been increased, and due to technological progress, a considerable number of pesticides have been used as insecticides, but they still have a substantial dependency on chemical pesticides.

그러나 개발전략 및 노하우에 대한 부재로 아직도 초기 단계의 기술계발에만 머무르고 있으며, 이로 인하여 산업화와 밀접하게 관련된 대량생산 및 제형화 기술은 산업적 제품을 만들기에는 여전히 부족한 실정이다.However, due to lack of development strategy and know-how, it still remains in the early stage of technology development, and mass production and formulation technology closely related to industrialization is still not enough to make industrial products.

기존에 본 발명자들은 산업적 미생물 살충제 개발을 위하여 예의노력한 결과, 시장 요구도가 높은 난방제 해충을 효과적으로 방제할 수 있는 신규 패실로마이세스 속 균주를 분리 및 동정하였다(미국 등록특허 7,435,411; 대한민국 등록특허 10-0475131; 균주 수탁번호 KCTC 0395BP). As a result of intense efforts for the development of industrial microbial pesticides, the present inventors have previously isolated and identified a novel strain of the genus Faecalis maize, which can effectively control a heating insect pest having a high market demand (US Pat. No. 7,435,411; -0475131 strain Accession No. KCTC 0395BP).

이에, 본 발명자들은 상기 발명한 패실로마이세스 속 균주를 경제적으로 산업적으로 대량 생산하기 위하여 예의노력한 결과, 균주의 대량 생산을 위한 최적의 배지 조성, 배양 환경, 및 산업적 활용을 위한 패실로마이세스 속 곰팡이의 산업적 포자 생산 방법을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the present inventors have made intensive efforts to economically and industrially mass-produce the strain of the genus Faecalomyces in the above-mentioned inventions. As a result, they have found that the optimal culture medium for the mass production of the strain, the culture environment, And confirming the method of producing industrial spores of the genus Mytilus.

본 발명의 목적은 패실로마이세스(Paecilomyces) 속 균주를 해충 방제용으로 활용하기 위한 산업적 대량 생산하기 위해 확립된 패실로마이세스 속 균주의 최적의 배지 조성, 이런 확립한 배지를 이용한 패실로마이세스 속 균주의 배양 방법, 및 이런 배양 방법을 이용한 패실로마이세스 속 곰팡이의 포자 대량 생산 방법을 제공하는 것이다.
It is an object of the present invention to provide an optimum medium composition of a strain of the genus Faecilomyces established for industrial mass production for utilizing Paecilomyces sp. Strain for pest control, And a method for mass production of spore masses of Fasylomyces fungi using such a culture method.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 상업적으로 중요한 여러 농경 작물에 해를 입히는 해충을 방제할 수 있는 패실로마이세스(Paecilomyces) 속 곰팡이의 대량생산용 배지 조성을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a medium composition for mass production of molds of Paecilomyces that can control pests damaging various commercially important agricultural crops.

또한, 본 발명은 패실로마이세스 속 곰팡이를 산업적, 경제적으로 대량생산할 수 있는 대량생산용 배양 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for mass production for mass production of industrially and economically large quantities of molds of the genus Faecalomyces.

또한, 본 발명은 패실로마이세스 속 곰팡이를 산업적, 경제적으로 대량생산할 수 있는 포자의 대량생산 방법을 제공한다.
The present invention also provides a method for mass production of spores capable of mass-producing industrially and economically large molds of the genus Faecalomyces.

구체적으로, 본 발명은 Specifically, the present invention provides

1) 패실로마이세스 속 곰팡이를 전배양하는 단계;1) pre-culturing the faecal matter of Mycophthaeae;

2) 전배양된 패실로마이세스 속 곰팡이를 1차 배양으로 액상 배양하는 단계; 및2) liquid culture of pre-cultured Fasylomyces fungi in a primary culture; And

3) 액상 배양된 패실로마이세스 속 곰팡이를 2차 배양으로 고체 배양하는 단계를 포함하는, 패실로마이세스 속 곰팡이의 배양 방법을 제공한다.3) a step of solid-culturing the liquid cultured filamentomyces fungi by a secondary culture.

또한, 본 발명은 In addition,

1) 패실로마이세스 속 곰ㅈ팡이를 전배양하는 단계;1) pre-culturing the beetle of the genus Faisilomyces;

2) 전배양된 패실로마이세스 속 곰팡이를 1차 배양으로 액상 배양하는 단계;2) liquid culture of pre-cultured Fasylomyces fungi in a primary culture;

3) 액상 배양된 패실로마이세스 속 곰팡이를 2차 배양으로 고체 배양하는 단계; 및3) solid culturing the liquid culture of the filamentomyces fungus by a secondary culture; And

4) 고체 배양된 배양액으로부터 포자를 분리하는 단계를 포함하는, 패실로마이세스 속 곰팡이의 포자 생산 방법을 제공한다.4) isolating the spores from the solid-cultured medium. The present invention also provides methods for producing spores of the genus Faecalomyces.

아울러, 본 발명은 질소원으로서 배지 전체 조성의 0.5 내지 1.0%(w/v)의 번데기, 및 배지 전체 조성의 0.5 내지 1.0%(w/v)의 쌀 또는 밀기울을 포함하는, 패실로마이세스 속 곰팡이의 배양 배지를 제공한다.
In addition, the present invention relates to a method for producing a microorganism belonging to the genus Lactobacillus, comprising the step of cultivating a microorganism belonging to the genus Lactobacillus, comprising a pupa having 0.5 to 1.0% (w / v) of the total medium composition as a nitrogen source and 0.5 to 1.0% (w / v) Provide a culture medium for the fungus.

본 발명은 패실로마이세스(Paecilomyces) 속 곰팡이의 대량 생산을 위한 최적의 배지 조성을 확립하고, 이를 이용하여 토양 해충을 방제할 수 있는 패실로마이세스 속 곰팡이를 대량 생산할 수 있음을 확인함으로써, 상업적으로 중요한 여러 농경 작물에 해를 입히는 다양한 토양 해충의 방제를 위한 산업화에 유용하게 이용될 수 있다.
The present invention establishes an optimal medium composition for the mass production of Paecilomyces fungi and confirms that it can mass-produce the fungus belonging to the genus Faecilomyces , which can control the soil pest, Can be useful for industrialization for the control of various soil pests harming various important agricultural crops.

도 1은 패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주를 Czapek 배지, Czapek에 번데기를 함유한 배지, 쌀을 이용한 배지, 및 밀기울을 이용한 배지에서 각각 배양하여 성장시킨 결과를 나타내는 그림이다.
도 2는 패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주를 Czapek 배지, Czapek에 번데기를 함유한 배지, 쌀을 이용한 배지, 및 밀기울을 이용한 배지에서 각각 배양하여 성장시킨 후 회수한 포자를 80℃에서 30분간 방치한 후 생균수를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주를 Czapek 배지, Czapek에 번데기를 함유한 배지, 쌀을 이용한 배지, 및 밀기울을 이용한 배지에서 각각 배양하여 성장시킨 후 회수한 포자의 pH에 대한 안정성을 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 다양한 온도(24℃, 28℃, 32℃ 및 36℃)에 대한 시간별(18h 및 36h) 발아율(%)을 나타내는 그래프이다.
도 5는 패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 다양한 온도(24℃, 28℃, 32℃ 및 36℃)에서 116시간까지의 시간당 성장률(μm/h)을 나타내는 그래프이다.
도 6은 패실로마이세스 리라시너스 HY-4 포자 현탁액 처리에 따른 점박응애에 대한 살비율을 나타내는 그래프(A), 및 곰팡이병 증상으로 죽은 점박이응애(B)를 나타내는 그림이다.
FIG. 1 is a diagram showing the results of growing the strains of the Fabilomyces lysinus HY-4 in a culture medium using Czapek medium, Czapek pupa, rice, and wheat bran respectively.
FIG. 2 is a graph showing the results of cultivating and growing recovered spores of Fasilomyces lysinus HY-4 in Czapek medium, Czapek medium containing pupa, rice medium, and wheat bran, And the number of viable cells after the incubation for a minute was measured.
Fig. 3 shows the stability of the recovered spore after culturing in the medium using the Czapek medium, the culture medium containing the pupa, the rice medium, and the wheat bran, respectively, with the strains HY-4 And the results are shown in FIG.
4 is a graph showing the germination percentage (%) over time (18 h and 36 h) for various temperatures (24 ° C, 28 ° C, 32 ° C and 36 ° C) of the Fasylomyces lysinaceus HY-4 strain.
FIG. 5 is a graph showing the growth rate (μm / h) per hour at various temperatures (24 ° C., 28 ° C., 32 ° C. and 36 ° C.) of the Fasylomyces lysinaceus HY-4 strain up to 116 hours.
FIG. 6 is a graph showing the rate of survival to the spotted mite according to the treatment with the spiny mosaic rythianus HY-4 spore suspension and the number of spotted mite (B) dead due to the fungal disease symptom.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 패실로마이세스(Paecilomyces) 속 곰팡이를 대량생산하기 위한 배지를 제공한다.The present invention provides a medium for mass production of Paecilomyces fungi.

상기 패실로마이세스(Paecilomyces) 속 곰팡이는 수탁번호 KCTC 0395BP로 기탁된 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyceslilacinus) HY-4인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.My process (Paecilomyces) in the mold chamber is L will My process chamber to deposit the L accession No. KCTC 0395BP Sinners (Paecilomyceslilacinus) which is one preferred HY-4 is not limited to this.

본 발명에 따른 배지는 기본 배지로서 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지, PDB(Potato Dextrose Broth) 배지, 또는 차벡크(czapek) 배지인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않으며, 당업계에 알려진 곰팡이 배양을 위한 배지는 모두 사용가능하다.The culture medium according to the present invention is preferably a PDA (Potato Dextrose Agar) medium, a PDB (Potato Dextrose Broth) medium, or a czapek medium as a basic medium, but is not limited thereto and may be a medium for culturing fungi Are all usable.

본 발명에 따른 배지는 탄소원, 질소원 또는 무기질을 물에 혼합하여 제조되는 것이 바람직하며, 고압 멸균하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.The medium according to the present invention is preferably prepared by mixing a carbon source, a nitrogen source or an inorganic material with water, and the medium is preferably sterilized by high pressure, but is not limited thereto.

상기 탄소원으로는 포도당, 옥수수녹말, 사카로스, 당밀, 밀기울, 쌀겨 등을 이용하는 것이 바람직하며, 밀기울 또는 쌀겨를 이용하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. As the carbon source, it is preferable to use glucose, corn starch, saccharose, molasses, wheat bran, rice bran or the like, more preferably bran or rice bran, but is not limited thereto.

상기 질소원으로는 번데기, 효모추출물, 콩가루, 옥수수침지, 말트 추출물, 펩톤 등을 이용하는 것이 바람직하며, 번데기를 이용하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. As the nitrogen source, pupa, yeast extract, soybean meal, corn steep liquor, malt extract, peptone and the like are preferably used, and pupae are more preferably used, but not limited thereto.

상기 무기질로는 포타슘 클로라이드(KCl), 마그네슘 설포네이트(MgSO4), 페로익 설페이트(FeSO4), 소듐 니트레이트(NaNO3), 또는 인산 이칼륨(K2HPO4) 등을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. It is preferable to use potassium chloride (KCl), magnesium sulfonate (MgSO 4 ), ferrous sulfate (FeSO 4 ), sodium nitrate (NaNO 3 ), potassium phosphate (K 2 HPO 4 ) But is not limited thereto.

본 발명에 따른 배지는 질소원으로서 배지 전체 조성의 0.5 내지 1.0%(w/v)의 번데기를 포함하는 것이 바람직하고, 배지 전체 조성의 0.5%(w/v)의 번데기를 포함하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The culture medium according to the present invention preferably contains a pupa of 0.5 to 1.0% (w / v) of the total medium composition as a nitrogen source, more preferably a pupa of 0.5% (w / v) But is not limited thereto.

본 발명에 따른 배지는 질소원으로서 배지 전체 조성의 0.5 내지 1.0%(w/v)의 쌀 또는 밀기울을 포함하는 것이 바람직하고, 배지 전체 조성의 0.5%(w/v)의 쌀 또는 밀기울을 포함하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. The culture medium according to the present invention preferably contains 0.5-1.0% (w / v) of rice or wheat bran as a nitrogen source, preferably 0.5% (w / v) But is not limited thereto.

본 발명에 따른 배지는 질소원으로 쌀을 사용하는 경우, 물과 쌀을 1:1로 맞추어 멸균 후 상등액을 사용하는 것이 바람직하며, 밀기울을 사용하는 경우, 밀기울과 물의 비율을 4:1로 맞추어 멸균 후 상등액을 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
When the rice according to the present invention is used as a nitrogen source, it is preferable to use a supernatant after sterilization by mixing water and rice at a ratio of 1: 1. If wheat bran is used, the ratio of bran to water is adjusted to 4: But it is not limited thereto.

본 발명의 한가지 실시예에서는, 대량 생산을 위한 배양 미생물로서 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyceslilacinus) HY-4 균주를 사용하였으며, 상기 미생물은 기존의 본 발명자들이 곤충병원성 미생물에 감염되어 죽은 곤충 및 해충이 서식하는 토양 시료로부터 해충에 대한 살충효과를 가지는 미생물을 분리하한 후 동정하여 패실로마이세스(Paecilomyces)속임을 확인하여, 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyceslilacinus) HY-4 균주로 명명하고 한국생명공학연구원 유전자은행에 기탁한 미생물이다(수탁번호 KCTC 0395BP). In one embodiment of the present invention, Paecilomyces lilacinus strain HY-4 was used as a culturing microorganism for mass production, and the microorganism was used as an insect pest and a pest After isolating microorganisms having insecticidal effect against the insect pests from the soil samples inhabited, Paecilomyces was identified as Paecilomyces , and named as Paecilomyces lilacinus HY-4. It is a microorganism deposited with the Institute of Genetic Engineering (Accession No. KCTC 0395BP).

본 발명의 한가지 실시예에서는 페실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 균체 생성을 최적으로 하기 위해, 기존의 Czapek 배지 조건에서 질소원으로 0.5%(w/v) 농도의 번데기를 갈아 넣은 배지를 이용하여 상기 균주를 배양한 후 생산된 포자 농도를 측정하였다. 그 결과, 동일한 배양 조건에서 0.5%의 번데기를 첨가한 것이 약 1.78배의 포자 생성을 증가시키는 것을 확인하였다(표 1 참조).In one embodiment of the present invention, in order to optimize the production of bacterial cells of the Pseudomaeias lirasinus HY-4 strain, a culture medium in which 0.5% (w / v) pupa was ground with a nitrogen source under the existing Czapek medium was used And the spore concentration was measured after culturing the strain. As a result, it was confirmed that the addition of 0.5% pupa at the same culture condition increased spore production of about 1.78 times (see Table 1).

본 발명의 한가지 실시예에서는 페실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 산업적 대량생산을 위한 배지 조성을 확립하기 위해, 수급 및 경제성이 용이한 최적의 질소원으로 쌀과 밀기울을 선별한 후, Czapek 배지에 0.5%(w/v) 농도의 쌀 또는 밀기울을 함께 함유한 배지에서의 포자 농도 및 생균수를 각각 측정하였다. 그 결과, Czapek에 번데기를 함유한 것에 비해 쌀과 밀기울을 사용하여 배양하는 경우가 포자 농도 및 생균수를 증가시키는 것을 확인하였다(도 1 및 표 2 참조).In one embodiment of the present invention, in order to establish a medium composition for industrial mass production of Pseudomaeias lirasinus strain HY-4, rice and wheat bran are selected as an optimal nitrogen source which is easy to supply and economical, The spore concentration and viable cell count were measured in a medium containing 0.5% (w / v) rice or wheat bran respectively. As a result, it was confirmed that when cultured with rice and bran, the spore concentration and viable cell number were increased in comparison with the case of containing the pupa in Czapek (see FIG. 1 and Table 2).

본 발명의 한가지 실시예에서는 페실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 다양한 온도에 대한 안정성을 확인하기 위해, 본 발명에 따른 배지에서 패실로마이세스 포자 건조분말을 다양한 온도에서 배양한 후 발아률을 측정하였다. 그 결과, 70℃에서는 15분간 방치한 상태에서 98% 안정성이 있음을 확인하였으며, 특히 쌀을 이용한 배지에서 성장시키는 경우 다른 배지보다 80℃ 이상에서의 안정성이 계속 유지되고 있음을 확인하였다(도 2 참조).In one embodiment of the present invention, in order to confirm the stability of the Pseudomaeces lirasinus HY-4 strain at various temperatures, the dried powder of the filamentomyces spores in the medium according to the present invention was cultured at various temperatures, Were measured. As a result, it was confirmed that 98% stability was maintained at 70 ° C. for 15 minutes. In particular, it was confirmed that the stability was maintained at 80 ° C. or higher than that of the other medium when grown in a medium using rice Reference).

본 발명의 한가지 실시예에서는 패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 pH에 대한 안전성을 확인하기 위해, 본 발명에 따른 배지에서 패실로마이세스 포자 건조분말을 다양한 pH 조건에서 배양한 후 발아률을 측정하였다. 그 결과, 배지 조성에 의해 성장되는 포자의 수는 차이가 있으나 pH 5에서 pH 10까지 안정성을 보유함을 확인하였다(도 3 참조).In one embodiment of the present invention, in order to confirm the safety of the strain of the Fylulomycetis lilacinus HY-4 against the pH, the Fylulomycetes spore-dried powder in the medium according to the present invention was cultured under various pH conditions, Were measured. As a result, it was confirmed that although the number of spores grown by the medium composition was different, it had stability from pH 5 to pH 10 (see FIG. 3).

결론적으로, 기본 배지로서 차벡크(czapek) 배지에 0.5%(w/v) 농도의 쌀 또는 밀기울을 첨가한 배지 조성이 페실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 포자 농도 및 생균수를 증가시키고, 온도 및 pH에 대한 안정성을 증가시키는 것을 확인함으로써, 페실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 대량생산을 위한 배지로서 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
In conclusion, the culture medium in which 0.5% (w / v) concentration of rice or bran was added to czapek medium as a basic medium increased the spore concentration and viable cell count of Pesylomycetis lirasinus strain HY-4 , It is confirmed that the stability against temperature and pH is increased, and thus it can be used as a medium for mass production of Pesylomyces lysinus HY-4 strain.

또한, 본 발명은 패실로마이세스(Paecilomyces) 속 곰팡이의 대량 생산을 위한 배양 방법을 제공한다.The present invention also provides a method of culturing for the mass production of Paecilomyces fungi.

구체적으로, 상기 배양 방법은 다음과 같은 단계를 포함하는 방법으로 수행되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:Specifically, the culturing method is preferably, but not limited to, carried out by a method including the following steps:

1) 패실로마이세스 속 곰팡이를 전배양하는 단계;1) pre-culturing the faecal matter of Mycophthaeae;

2) 전배양된 패실로마이세스 속 곰팡이를 1차 배양으로 액상 배양하는 단계; 및2) liquid culture of pre-cultured Fasylomyces fungi in a primary culture; And

3) 액상 배양된 패실로마이세스 속 곰팡이를 2차 배양으로 고체 배양하는 단계. 3) a step of solid-culturing the liquid culture of the filamentomyces fungus by a secondary culture.

상기 배양 방법에 있어서, 단계 1)의 패실로마이세스 속 곰팡이는 수탁번호 KCTC 0395BP로 기탁된 패실로마이세스 리라시너스 (Paecilomyceslilacinus) HY-4인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않으며, 패실로마이세스 속 곰팡이는 모두 사용 가능하다.In the above culture method, it is preferable that the fungus belonging to step 1) is Paecilomyces lilacinus HY-4 deposited with Accession No. KCTC 0395BP, but not limited thereto, All molds are available.

상기 배양 방법에 있어서, 단계 1)의 전배양은 기본배지로서 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지를 사용하는 것이 바람직하고, 단계 2)의 액상 배양은 기본배지로서 PDB(Potato Dextrose Broth) 배지를 사용하는 것이 바람직하며, 단계 3)의 고체 배양은 기본배지로서 차벡크(czapek) 배지를 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the above culture method, the pre-culture of step 1) is preferably a PDA (Potato Dextrose Agar) medium as the basic medium, and the liquid culture of step 2) uses PDB (Potato Dextrose Broth) And it is preferable, but not limited, to use czapek medium as the basic medium for the solid culture of step 3).

상기 배양 방법에 있어서, 단계 1) 내지 단계 3)의 배양은 탄소원 또는 질소원을 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 여기서, 상기 질소원으로는 번데기, 효모추출물, 콩가루, 옥수수침지, 말트 추출물, 펩톤 등을 이용하는 것이 바람직하며, 번데기를 이용하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 여기서, 상기 탄소원으로는 포도당, 옥수수녹말, 사카로스, 당밀, 밀기울, 쌀겨 등을 이용하는 것이 바람직하며, 밀기울 또는 쌀겨를 이용하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 여기서, 상기 번데기는 배지 전체 조성의 0.5 내지 1.0%(w/v) 첨가되는 것이 바람직하고, 0.5%(w/v) 첨가되는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 여기서, 상기 쌀 또는 밀기울은 배지 전체 조성의 0.5 내지 1.0%(w/v) 첨가되는 것이 바람직하고, 0.5%(w/v) 첨가되는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the culturing method, the culturing of step 1) to step 3) preferably includes a carbon source or a nitrogen source, but is not limited thereto. As the nitrogen source, pupa, yeast extract, soybean meal, corn steep liquor, malt extract, peptone and the like are preferably used, but the pupa is more preferably used, but not limited thereto. As the carbon source, it is preferable to use glucose, corn starch, saccharose, molasses, wheat bran, rice bran or the like, more preferably bran or rice bran, but is not limited thereto. Here, the pupa is preferably added in an amount of 0.5 to 1.0% (w / v), more preferably 0.5% (w / v), but not limited thereto. Preferably, the rice or wheat bran is added in an amount of 0.5 to 1.0% (w / v), more preferably 0.5% (w / v), based on the whole composition of the medium.

상기 배양 방법에 있어서, 단계 1) 내지 단계 3)의 배양은 24℃ 내지 32℃에서 배양되는 것이 바람직하고, 28℃ 내지 32℃에서 배양되는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the above culture method, the culturing of step 1) to step 3) is preferably carried out at 24 ° C to 32 ° C, more preferably 28 ° C to 32 ° C, but is not limited thereto.

본 발명의 한가지 실시예에서는 패실로마이세스 리라시너스 HY-4의 최적 생장 온도를 확인하기 위해 온도별 발아율을 측정하였다. 그 결과, 발아율은 24℃ 내지 32℃에서 높은 발아률을 나타냈고, 발아률은 32℃, 28℃, 24℃ 순으로 높게 나타내었다(도 4 참조). In one embodiment of the present invention, the germination rate by temperature was measured in order to confirm the optimal growth temperature of Fasylomyces lysinaceus HY-4. As a result, the germination rate showed a high germination rate at 24 ° C to 32 ° C, and the germination rate was high in the order of 32 ° C, 28 ° C and 24 ° C (see FIG. 4).

본 발명의 한가지 실시예에서는 패실로마이세스 리라시너스 HY-4의 온도에 대한 균사의 시간당 성장률(Growth rate in diameter; μm/h)을 측정하였다. 그 결과, 시간당 성장률은 32℃에서 가장 높게 나타났으며, 28℃에서 역시 높게 나타났다(도 5 참조). In one embodiment of the present invention, the growth rate in diameter (μm / h) of mycelium with respect to the temperature of Fasylomyces lysinaceus HY-4 was measured. As a result, the growth rate per hour was the highest at 32 ° C and was also high at 28 ° C (see FIG. 5).

따라서, 패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 최적의 배양온도는 24℃ ~ 32℃인 것이 바람직하고, 온도별 발아율과 시간당 성장률을 고려해 볼 경우 32℃가 이상적인 배양 온도이며, 배양온도가 36℃ 이상이 되면 포자 형성이 어려워지는 것을 알 수 있다.Therefore, it is preferable that the optimal culturing temperature of the Fabolomyces cerevisiae HY-4 strain is 24 ° C to 32 ° C. When considering the germination rate per hour and the growth rate per hour, the culturing temperature is 32 ° C, Lt; 0 > C or more, it becomes difficult to form spores.

상기 배양 방법에 있어서, 단계 1)의 전배양은 7 내지 10일 동안 배양되는 것이 바람직하고, 7 내지 8일 동안 배양되는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 단계 2)의 액상 배양은 7 내지 10일 동안 배양되는 것이 바람직하고, 7 내지 8일 동안 배양되는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 단계 3)의 배양은 7 내지 25일 동안 배양되는 것이 바람직하고, 20 내지 24일 동안 배양되는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
In the above culture method, the pre-culture of step 1) is preferably cultured for 7 to 10 days, more preferably for 7 to 8 days, but is not limited thereto. The liquid culture of step 2) is preferably cultured for 7 to 10 days, more preferably for 7 to 8 days, but not always limited thereto. The culture of step 3) is preferably cultivated for 7 to 25 days, more preferably for 20 to 24 days, but not always limited thereto.

또한, 본 발명은 패실로마이세스(Paecilomyces) 속 곰팡이의 포자의 대량 생산 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for mass production of spores of Paecilomyces fungi.

구체적으로, 상기 포자 생산 방법은 다음과 같은 단계를 포함하는 방법으로 수행되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:Specifically, the spore production method is preferably, but not limited to, performed by a method including the following steps:

1) 패실로마이세스(Paecilomyces) 속 곰팡이를 전배양하는 단계;1) pre-culturing the fungi of Paecilomyces ;

2) 전배양된 패실로마이세스 속 곰팡이를 1차 배양으로 액상 배양하는 단계;2) liquid culture of pre-cultured Fasylomyces fungi in a primary culture;

3) 액상 배양된 패실로마이세스 속 곰팡이를 2차 배양으로 고체 배양하는 단계; 및3) solid culturing the liquid culture of the filamentomyces fungus by a secondary culture; And

4) 고체 배양된 배양액으로부터 포자를 분리하는 단계. 4) separating spores from the solid cultured medium.

상기 배양 방법에 있어서, 단계 1)의 패실로마이세스 속 곰팡이는 수탁번호 KCTC 0395BP로 기탁된 패실로마이세스 리라시너스 (Paecilomyceslilacinus) HY-4인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않으며, 패실로마이세스 속 곰팡이는 모두 사용 가능하다.In the above culture method, it is preferable that the fungus belonging to step 1) is Paecilomyces lilacinus HY-4 deposited with Accession No. KCTC 0395BP, but not limited thereto, All molds are available.

상기 배양 방법에 있어서, 단계 1)의 전배양은 기본배지로서 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지를 사용하는 것이 바람직하고, 단계 2)의 액상 배양은 기본배지로서 PDB(Potato Dextrose Broth) 배지를 사용하는 것이 바람직하며, 단계 3)의 고체 배양은 기본배지로서 차벡크(czapek) 배지를 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the above culture method, the pre-culture of step 1) is preferably a PDA (Potato Dextrose Agar) medium as the basic medium, and the liquid culture of step 2) uses PDB (Potato Dextrose Broth) And it is preferable, but not limited, to use czapek medium as the basic medium for the solid culture of step 3).

상기 배양 방법에 있어서, 단계 1) 내지 단계 3)의 배양은 탄소원 또는 질소원을 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 여기서, 상기 질소원으로는 번데기, 효모추출물, 콩가루, 옥수수침지, 말트 추출물, 펩톤 등을 이용하는 것이 바람직하며, 번데기를 이용하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 여기서, 상기 탄소원으로는 포도당, 옥수수녹말, 사카로스, 당밀, 밀기울, 쌀겨 등을 이용하는 것이 바람직하며, 밀기울 또는 쌀겨를 이용하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 여기서, 상기 번데기는 배지 전체 조성의 0.5 내지 1.0%(w/v) 첨가되는 것이 바람직하고, 0.5%(w/v) 첨가되는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 여기서, 상기 쌀 또는 밀기울은 배지 전체 조성의 0.5 내지 1.0%(w/v) 첨가되는 것이 바람직하고, 0.5%(w/v) 첨가되는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the culturing method, the culturing of step 1) to step 3) preferably includes a carbon source or a nitrogen source, but is not limited thereto. As the nitrogen sources, pupa, yeast extract, soybean meal, corn steep liquor, malt extract, peptone and the like are preferably used, but the pupa is more preferably used, but not limited thereto. As the carbon source, it is preferable to use glucose, corn starch, saccharose, molasses, wheat bran, rice bran or the like, more preferably bran or rice bran, but is not limited thereto. Here, the pupa is preferably added in an amount of 0.5 to 1.0% (w / v), more preferably 0.5% (w / v), but not limited thereto. Preferably, the rice or wheat bran is added in an amount of 0.5 to 1.0% (w / v), more preferably 0.5% (w / v), based on the whole composition of the medium.

상기 배양 방법에 있어서, 단계 1) 내지 단계 3)의 배양은 24℃ 내지 32℃에서 배양되는 것이 바람직하고, 28℃ 내지 32℃에서 배양되는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the above culture method, the culturing of step 1) to step 3) is preferably carried out at 24 ° C to 32 ° C, more preferably 28 ° C to 32 ° C, but is not limited thereto.

상기 배양 방법에 있어서, 단계 1)의 전배양은 7 내지 10일 동안 배양되는 것이 바람직하고, 7 내지 8일 동안 배양되는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 단계 2)의 액상 배양은 7 내지 10일 동안 배양되는 것이 바람직하고, 7 내지 8일 동안 배양되는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 단계 3)의 배양은 7 내지 25일 동안 배양되는 것이 바람직하고, 20 내지 24일 동안 배양되는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.In the above culture method, the pre-culture of step 1) is preferably cultured for 7 to 10 days, more preferably for 7 to 8 days, but is not limited thereto. The liquid culture of step 2) is preferably cultured for 7 to 10 days, more preferably for 7 to 8 days, but not always limited thereto. The culture of step 3) is preferably cultivated for 7 to 25 days, more preferably for 20 to 24 days, but not always limited thereto.

상기 배양 방법에 있어서, 단계 4)의 포자의 분리는 고체 배양액으로부터의 포자회수 공정을 통하여 분리할 수 있으며, 이런 포자회수는 당업계에 알려져 있는 다양한 방법을 사용하여 수행될 수 있다.
In the above culture method, the spore separation in step 4) can be separated through a spore recovery process from a solid culture medium, and such spore collection can be carried out using various methods known in the art.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

<< 실시예Example 1>  1> 패실로마이세스Facilomyces 리라시너스Lira sinus HYHY -4 균주의 Of -4 strains 전배양Pre-culture

패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주(수탁번호 KCTC 0395BP)의 보관 및 대량배양을 위한 전배양을 위하여 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지를 사용하였다. 전배양은 페트리디쉬(87 X 15 mm)에 PDA 배지에서 28℃ 7일간 암실 조건으로 배양하였다.A PDA (Potato Dextrose Agar) medium was used for storage and mass culture of the Fabilomyces lysinus HY-4 strain (Accession No. KCTC 0395BP). The preculture was cultured in Petri dishes (87 X 15 mm) in a PDA medium at 28 ° C for 7 days in a dark room.

<< 실시예Example 2>  2> 패실로마이세스Facilomyces 속 균주의 산업적 배양 Industrial culture of the genus Escherichia coli

패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 배양을 위해 일차배양으로 액상배양을 통해 배양액에 균사체를 최대로 만들었으며 이후 산업적 보관 및 산업적 미생물 살충제제 조제를 위해 이차 배양인 고체 배양을 수행하였다.For the cultivation of Fasylomyces lysinus HY-4 strain, the mycelium was maximized in the culture medium by liquid culture in the primary culture, and then the secondary culture, which is a secondary culture for industrial storage and industrial microbial insecticide preparation, was performed.

구체적으로, 균사체 배양을 위해 1차 액상배양을 PDB 배지에서 28℃, 180 rpm의 교반 조건으로 7일간 배양을 하였다. 이후 페트리 디쉬(150 X 25 mm)에 25 mL의 Czapek 배지 조건으로 만들어 주고 2 mL의 균사체가 형성된 1차 배양액을 분주하여 스프레더로 고루 도말하여 20일간 고체 배양을 시행하였다.Specifically, for the mycelial cultivation, the first liquid culture was cultured in PDB medium for 7 days under the conditions of 28 ° C and 180 rpm. Then, the cells were cultured in a Petri dish (150 × 25 mm) under the condition of 25 mL of Czapek culture medium, and 2 mL of mycelial cultured primary cultures were plated on a spreader and cultured for 20 days.

<< 실시예Example 3>  3> 패실로마이세스Facilomyces 속 균주의 포자의 산업적 대량 회수 방법 Industrial bulk recovery method of spores of the genus strain

페트리디쉬에서 20여일 고체 배양을 통해 형성된 패실로마이세스 속 곰팡이의 포자의 산업적 대량 회수를 위해 배양 배지에서 스크래퍼(Scraper)를 통해 포자를 회수하였다. The spores were recovered through a scraper in a culture medium for the industrial mass recovery of spores of the Fylulomycetes fungus formed through 20 days solid culture in Petri dishes.

<< 실시예Example 4>  4> 페실로마이세스Pesylomyces 속 균주의 대량 생산을 위한 배지 조성 Medium composition for mass production of genus strains

페실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 균체 생성을 최적으로 하기 위해, 기존의 Czapek 배지 조건에서 질소원으로 번데기를 갈아 넣은 배지를 이용하여 미생물살충제 활용을 위한 대량 생산용 배지 조성을 완성하였다. 상기 번데기는 식용의 제품을 일반 시중에서 구입하였으며 드라이 오븐에 건조 후 분쇄하여 사용하였다. 상기 <실시예 1>, <실시예 2> 및 <실시예 3>와 같은 Czapek 배지와 Czapek 배지에 0.5%(w/v) 농도의 번데기를 함께 함유한 배지에서의 포자 농도를 각각 측정하였다. In order to optimize the production of bacterial cells of the Pesylomyces lysinus HY-4 strain, a culture medium for mass production for the microbial pesticide application was completed using a medium in which the pupa was replaced with a nitrogen source under the existing Czapek medium. An edible product was purchased from the market and dried in a dry oven, followed by pulverization. The spore concentrations in the Czapek medium and the Czapek medium such as those of Example 1, Example 2 and Example 3 were measured in a medium containing 0.5% (w / v) pupa.

그 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이, 같은 배양 조건에서 0.5%의 번데기를 첨가해 줌으로 인해 약 1.78배의 포자 생성이 증가함을 확인할 수 있었다(표 1).
As a result, as shown in Table 1, it was confirmed that spore production of about 1.78 times was increased by adding 0.5% pupa in the same culture condition (Table 1).

기질(Substrate)Substrate 자농도 (conidia/g)Conidia (g) CzapekCzapek 2 X 1010 2 X 10 10 Czapek + 0.5% 번데기Czapek + 0.5% pupa 7 X 1010 7 x 10 10

<< 실시예Example 5>  5> 페실로마이세스Pesylomyces 속 균주의 산업적 대량 생산을 위한 배지 조성 Medium composition for industrial mass production of genus strains

번데기를 사용하여 패실로마이세스 배양에서 1.78배의 포자 생성 수율의 증가는 가져왔으나 번데기를 가공하는 과정과 번데기의 수급 부분에 문제가 있음을 확인하게 되었다. 번데기의 경우 계절적인 영향과 수급의 문제로 인해 경제성에 문제가 있으며 특히 다량의 생산을 목적으로 하는 미생물 살충제와는 경제성에서 무리가 있는 것 같아 수급 및 경제성이 용이한 질소원을 선별하였으며 그 중에서 최적의 질소원으로 쌀과 밀기울을 선별하였다. 배지로서 쌀의 사용은 물과 쌀의 비율이 1:1로 맞추어 멸균 후 상등액을 사용하였으며, 밀기울의 이용은 밀기울과 물의 비율을 4:1로 맞추어 멸균 후 상등액을 사용하였다. 상기 <실시예 1>, <실시예 2> 및 <실시예 3>와 같은 Czapek 배지와 Czapek 배지에 0.5%(w/v) 농도의 쌀 또는 밀기울을 함께 함유한 배지에서의 포자 농도 및 생균수를 각각 측정하였다. 상기 <실시예 1>, <실시예 2> 및 <실시예 3>와 같은 Czapek 배지와 Czapek 배지에 0.5%(w/v) 농도의 번데기, 쌀 및 밀기울을 각각 함유한 배지에서의 패실로마이세스 포자를 회수하여 생산 수율, 포자 농도 및 생균수를 각각 측정하여 비교하였다. Using a pupa, the yield of spore production was increased by 1.78 times in the cultivation of facilomiasis, but it was confirmed that there was a problem in the processing of the pupa and in the supply and pupa of the pupa. In case of pupae, seasonal influences and problems of supply and demand are problematic. Especially, it seems that there is a difficulty in economical efficiency with microbial insecticides for the purpose of producing a large amount of nitrogen source. Rice and bran were selected as nitrogen sources. As a medium, rice was used as a supernatant after sterilization at a ratio of water to rice of 1: 1. Bran was used for sterilization after adjusting the ratio of bran to water to 4: 1. The spore concentration and viable cell counts in the medium containing 0.5% (w / v) rice or bran in the Czapek medium and Czapek medium as described in <Example 1>, <Example 2> and <Example 3> Respectively. In a medium containing 0.5% (w / v) pupa, rice, and wheat bran respectively in Czapek medium and Czapek medium as described in <Example 1>, <Example 2> and < Seth spores were collected and the yield, spore concentration and number of live cells were measured and compared.

그 결과, 도 1 및 표 2에 나타낸 바와 같이, 포자 형성수와 생균수는 Czapek 에 번데기를 함유한 것이 좋았으나 경제성 및 산업성 등을 고려해 볼 경우 쌀과 밀기울을 사용하여 배양하는 경우가 더 효율적인 것임을 확인하였다(도 1 및 표 2).
As a result, as shown in Fig. 1 and Table 2, it was preferable that the spore formation number and the viable cell count contained the pupa in Czapek, but considering economical efficiency and industriality, the culture using rice and bran was more efficient (Fig. 1 and Table 2).

배지조성Medium composition 산출량(Yield)
(g/plate)
Yield
(g / plate)
포자농도
(conidia/g)
Spore concentration
(conidia / g)
생균수
(cfu/g)
Viable cell count
(cfu / g)
CzapekCzapek 0.030.03 3.2 X 1010 3.2 X 10 10 6.6 X 109 6.6 X 10 9 Czapek + 번데기Czapek + Pupa 0.120.12 5.7 X 1010 5.7 X 10 10 1.2 X 1010 1.2 X 10 10 rice 50-6050-60 4.0 X 109 4.0 X 10 9 8.3 X 108 8.3 X 10 8 밀기울bran 25-3025-30 2.5 X 1010 2.5 X 10 10 8.6 X 109 8.6 X 10 9

<< 실시예Example 6> 6> 패실로마이세스Facilomyces 속 균주의 다양한 온도에 대한 안정성 확인 Identification of the stability of the genus Escherichia coli at various temperatures

페실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 다양한 온도에 대한 안정성을 확인하기 위해, 각각 다른 배지 조성에서 키운 패실로마이세스 포자 건조분말을 시험관(0.1 - 0.2 g/tube)에 넣은 후 60℃, 70℃, 및 80℃의 오븐(JEIO TECH, FO-600M)에 5분, 10분, 15분, 20분 및 30분간 방치한 후 헤모싸이토메터를 통해 포자가 104(conidia/mL)이 되도록 조정하여 0.1%(v/v) tween 80에 희석한 다음, 200 μL를 PDA 배지에서 60℃, 70℃ 및 80℃으로 <실시예 2> 및 <실시예 3>와 같이 24시간 배양한 후의 발아률을 측정하였다. To confirm the stability of Peyeromyces lysineus HY-4 strain at various temperatures, the dried powder of Phellinus lysineus sp. Cultured in different media was placed in a test tube (0.1 - 0.2 g / tube) After incubation for 5, 10, 15, 20 and 30 minutes in an oven (JEIO TECH, FO-600M) at 70 ° C. and 80 ° C., spores were distributed in a concentration of 10 4 (conidia / mL) through a hemocytometer , Diluted to 0.1% (v / v) tween 80, and then 200 μL was cultured in PDA medium at 60 ° C., 70 ° C. and 80 ° C. for 24 hours as in Example 2 and Example 3 Germination rate was measured.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이 70℃에서는 15분간 방치한 상태에서 98% 안정성이 있음을 확인하였다. 그러나 80℃에서는 10분 후부터 안정성이 감소되는 것을 확인하였다. 특히 쌀을 이용한 배지에서 성장시킨 패실로마이세스 속 균주는 다른 배지보다 성장률은 떨어졌으나 80℃에서의 기본적인 안정성은 계속 유지되고 있음을 확인하였다(도 2).As a result, as shown in Fig. 2, it was confirmed that the sample was allowed to stand at 70 占 폚 for 15 minutes to have a stability of 98%. However, it was confirmed that the stability was decreased after 10 minutes at 80 ° C. In particular, it was confirmed that the growth rate of the strain of the genus Faecilomyces grown in the medium using rice was lower than that of the other medium but the basic stability at 80 ° C was still maintained (FIG. 2).

<< 실시예Example 7> 7> 패실로마이세스Facilomyces 속 균주의 다양한  Variety of genus strains pHpH 에 대한 안정성 결과Stability results for

패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 다양한 pH에 대한 안전성을 확인하기 위해, 각각 다른 배지조성에서 키운 패실로마이세스 포자 건조분말을 시험관(0.1 - 0.2 g/tube)에 넣은 후 수산화나트륨과 염산을 이용하여 각각 pH를 5.0에서 10.0으로 보정한 후 포자가 104(conidia/mL)이 되도록 조정하여 0.1%(v/v) tween 80에 희석 다음, 200μL를 PDA 배지에서 <실시예 2> 및 <실시예 3>와 같이 24시간 배양 후의 발아률을 측정하였다. In order to confirm the safety of various strains of Phellinus lysinaceus HY-4 against various pHs, dried powder of Phellinus linteus sp. Cultured in different media was placed in a test tube (0.1 - 0.2 g / tube) (V / v) tween 80, and 200 μL was added to the PDA medium in the same manner as in Example 2, except that the concentration of the spores was adjusted to 10 4 (conidia / mL) And < Example 3 > were measured for germination after culturing for 24 hours.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 배지 조성에 의해 성장되는 포자의 수는 차이가 있으나 pH 5에서 pH 10까지 안정성을 보유함을 확인하였다(도 3).As a result, as shown in FIG. 3, it was confirmed that although the number of spores grown by the medium composition was different, it had stability from pH 5 to pH 10 (FIG. 3).

<< 실시예Example 8>  8> 패실로마이세스Facilomyces 속 균주의 최적 배양 온도 조사 Investigation of optimum culture temperature of strains

패실로마이세스 리라시너스 HY-4의 최적 생장 온도를 확인하기 위해 온도별 발아율을 측정하였다. 배양온도는 24℃, 28℃, 32℃ 및 36℃에서 각각 시행하였다. 패실로마이세스 리라시너스 HY-4의 포자(1 X 105 conidial/mL)를 PDA 배지와 0.1%(v/v) Tween-80에 희석 후 100μL를 <실시예 3>의 방법으로 본 발명의 각기 다른 배지 조성에서 <실시예 2>와 같은 방법으로 배양온도를 달리하여 배양하였다. 각 3개의 군을 키웠으며 무작위로 각 10개의 샘풀링을 통해 전자현미경으로 발아를 측정하였다. To determine the optimal growth temperature of Fasilomyces lysinaceus HY-4, the germination rate at each temperature was measured. Culture temperatures were 24 ℃, 28 ℃, 32 ℃ and 36 ℃, respectively. (1 × 10 5 conidial / mL) of Fasylomyces lysinus HY-4 was diluted with the PDA medium and 0.1% (v / v) Tween-80, and 100 μL was added thereto by the method of Example 3 Culturing was carried out at different culture temperatures in the same manner as in < Example 2 &gt;. Three groups were grown and germination was measured electron microscopically through 10 pools of each sample at random.

그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이 18시간과 36시간 측정 결과, 36℃를 제외하고는 모두 36시간에 발아가 되었음을 확인하였다. 18시간을 중점으로 볼 경우 발아율은 32℃, 28℃ 그리고 24℃ 순으로 나타내었다(도 4).As a result, as shown in FIG. 4, it was confirmed that germination was observed at 36 hours except for 36 ° C. as a result of measurement at 18 hours and 36 hours. The germination rate was shown in the order of 32 ° C, 28 ° C and 24 ° C in the order of 18 hours (Fig. 4).

또한, 116시간을 기점으로 온도에 대한 균사의 시간당 성장률(Growth rate in diameter; μm/h)을 측정하였다. The growth rate in μm / h of mycelium was also measured at 116 hours.

그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이 116시간을 기점으로 한 시간당 성장률은 32℃에서 105.2 μm/h로 28℃에서 79.3 μm/h 보다 높게 나타내었다(도 5). As a result, as shown in FIG. 5, the growth rate per hour from 116 hours was 105.2 μm / h at 32 ° C. and was higher than 79.3 μm / h at 28 ° C. (FIG.

따라서, 36℃ 이상이 되면서 포자 형성이 어려워지는 것을 확인하였으며, 이를 통해 최적의 배양온도는 24℃ ~ 32℃이며, 보다 적정하게는 온도별 발아율과 시간당 성장률을 고려해 볼 경우 32℃가 이상적인 배양 온도임을 확인하였다.Therefore, it was confirmed that the spore formation becomes difficult when the temperature is above 36 ° C, and the optimal culture temperature is from 24 ° C to 32 ° C, and more preferably, when the germination rate per hour and the growth rate per hour are considered, Respectively.

<< 실시예Example 9>  9> 패실로마이세스Facilomyces 속 곰팡이 살충제  Genus mold insecticide 수화제Hydrating agent 제조 Produce

패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주 원분의 안정적인 제제화를 목적으로 물에 희석시 수화되는 분상의 수화제를 제조하였다. 구체적으로, 본 발명의 패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주를 접종한 후 <실시예 5>의 배지를 포함시켜 <실시예 3>과 같이 회수한 포자(1.1 X 109conidiavisibleconidia/gram) 10%(w/w)와 90% (w/w)의 부형제를 골고루 섞어 수화제를 제조하였다. A wettable powder of the powder that is hydrated when diluted with water is prepared for the purpose of stably preparing the raw material of the strain Fasilomyces lysinus HY-4. Specifically, a spore (1.1 × 10 9 conidiavirusible conidia / gram) 10 (100 μg / ml) recovered as in Example 3 was inoculated with the medium of Example 5 after inoculation with the strain of the present invention, % (w / w) and 90% (w / w) of an excipient were uniformly mixed to prepare a wettable powder.

<< 실시예Example 10>  10> 패니실로마이세스Fanny Shilomyces 속 곰팡이 살충제  Genus mold insecticide 입제Granulation 제조 Produce

패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주 원분의 안정적인 제제화를 목적으로 입상으로서의 원상태대로 사용이 가능한 입제를 제조하였다. 구체적으로, 본 발명의 패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주를 접종한 후 <실시예 5>의 배지를 포함시켜 <실시예 3>과 같이 회수한 포자(1.6 X 109 visible conidia/gram) 10%(w/w)와 90%(w/w)의 부형제를 골고루 섞어 입제를 제조하였다. A granule which can be used as a granular form was prepared for the purpose of stable formulation of the raw material of the strain Lysineus HY-4. Specifically, a spore (1.6 × 10 9 visible conidia / gram) recovered as in Example 3, including the medium of Example 5, was inoculated with the strain of the present invention, 10% (w / w) and 90% (w / w) of excipient were uniformly mixed to prepare a granule.

<< 실시예Example 11>  11> 패니실로마이세스Fanny Shilomyces 속 곰팡이 살충제 유제 제조 Manufacture of mold insecticide emulsion

패실로마이세스 리라시너스 HY-4균주 원분의 안정적인 제제화를 목적으로 입상으로서의 원상태대로 사용이 가능한 유제를 제조하였다. 구체적으로, 본 발명의 패실로마이세스 리라시너스 HY-4균주를 접종한 후 <실시예 5>의 배지를 포함시켜 <실시예 3>과 같이 회수한 포자(1.6 X 109 visible conidia/gram) 10%(w/w)와 90%(w/w)의 부형제를 사용하였다. 부형제는 포자의 안정성을 증가시키기 위해 다양한 식물성 오일과 미네랄 오일을 사용할 수 있다. 식물성 오일로는 대두유, 옥수수 기름, 해바라기 기름, 올리브 오일 등을 사용할 수 있다. 미네랄 오일로는 등유(kerosene), 파라핀오일(paraffin oil) 등을 사용할 수 있다.An emulsion which can be used as a granule as a granule for the purpose of stable formulation of the raw material of the strain Fasilomyces lysineus HY-4 was prepared. Specifically, a spore (1.6 × 10 9 visible conidia / gram) recovered as in Example 3, including the medium of Example 5, was inoculated with the strain of the present invention, 10% (w / w) and 90% (w / w) excipients were used. A variety of vegetable oils and mineral oils may be used as excipients to increase the stability of spores. As the vegetable oil, soybean oil, corn oil, sunflower oil, olive oil and the like can be used. As the mineral oil, kerosene, paraffin oil and the like can be used.

<< 실시예Example 12> 공시 곤충의 확보 12> Securing insects

난방제 해충이 되는 점박이응애(Tetranychus urticae, two-spotted spider mite)를 공시 곤충으로 사용하였다. 점박이응애는 화학살비제에 대한 빠른 저항성 획득과 연 10~11회 발생되는 빠른 세대수로 모든 절화류 및 관엽류에 큰 피해를 주는 난방제 해충이다. 빠른 세대수와 화학 농약에 대한 빠른 저항성 획득으로 전 세계적으로 문제시되는 해충이다. 점박이응애는 기주 범위가 넓어 기주를 구하기 쉬우며 대표적인 사육기주로 사용되는 강낭콩은 다른 기주들 보다 잎면적이 넓어서 사용하는데 용이하다. 공시충은 25℃, 상대습도 70%, 16L:8D 조건으로 사육하였다. Tetranychus as a heating pest urticae , two-spotted spider mite) were used as insects. The spotted mite is a heating insect pest which has a rapid resistance to chemical acaricide and a rapid generation number of 10 ~ 11 times per year, which causes a great damage to all the cut flowers and caterpillars. It is a problematic pest around the world because of the rapid generation of generations and rapid resistance to chemical pesticides. Spotted mite is easy to find host because it has wide host range. Kidney bean, which is used as a typical nursery, is easier to use because it has a larger leaf area than other hosts. They were kept at 25 ℃, 70% relative humidity and 16L: 8D.

<< 실시예Example 13> 분무법에 의한 생물 검정 13> Bioassay by spraying method

곰팡이 포자현탁액에 곤충자체를 침지시키는 침지법과 곰팡이 포자현탁액을 대상 곤충위에서 분무하는 방법으로 주로 미소 곤충을 시험하는데 이용하는 분무법 중 본 생물검정에서 설정된 해충은 미소해충류이기에 침지 그 자체로 인한 사충이 많이 생겨나 본 검정에는 부적합한 것으로 판단되어, 분무를 이용한 생물검정 방법을 본 발명의 생물검정방법으로 결정하였다.Immersion method in which the insect itself is immersed in a fungus spore suspension, and spray method on a fungus spore suspension on a target insect. Among the spraying methods mainly used for testing the insects, the insect pest set in the bioassay is a pseudomonas, It was judged to be unsuitable for the resultant assay, and the biological assay method using the spray was determined by the biological assay method of the present invention.

<< 실시예Example 14> 산업적 배양된 포자를 이용한 분무법에 의한 생물검정  14> Bioassay by spraying with industrial cultured spores

90 mm 디쉬에 과습된 탈지면을 깔고 그 위에 지름 20 mm 원형의 강낭콩을 놓고 그 후 점박이응애 성충 15마리를 옮긴 후 가기 제제화된 패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주의 포자현탁액 1 mL(1 X 107conidia)을 <실시예 13>의 방법을 이용하여 스프레이하여 생물검정을 하였다. 본 방법을 통해 3회 반복 수행하였다. A 20 mm diameter round bean curd was placed on a 90 mm dish and a 15 ml spotted mite adult was placed on it. Then 1 mL of a spore suspension of the previously prepared Fylulomyces lysineus HY-4 strain (1 X 10 7 conidia) was sprayed using the method of Example 13 to perform bioassay. This procedure was repeated three times.

그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, 패실로마이세스 리라시너스 HY-4 균주에서 70% 넘는 살비율이 나왔으며 사충에서도 곰팡이병 증상이 발견되었다(도 6). As a result, as shown in FIG. 6, a mortality rate exceeding 70% was observed in the strain of the Fabilomyces lysinaceus HY-4, and fungal diseases were also found in the hatchlings (FIG. 6).

또한, 상기 <실시예 13>과 같이, 제제화된 균주의 활성포자의 정보를 토대로 실질적 생물검정에 있어 1 mL(1 X 107conidia)포자 현탁액을 스프레이 했을 시 면적당(cm2 당) 떨어지는 활성 포자량을 계산하였다. In addition, the <Example 13> and the like, based on the information of the active spores formulated strain in substantially the bioassay 1 mL (1 X 10 7 conidia ) falling active spores per area (cm per second) during when spraying the spore suspension .

그 결과, 표 3에 나타낸 바와 같이, 패실로마이세스 리라시너스 HY-4를 처리한 점박이응애 처리구는 실제 처리된 활성포자수가 낮음에도 불구하고 무처리구에 비해 높은 살비율을 나타냈으며, 사멸한 점박이응애 대다수가 곰팡이 증병을 나타내는 것을 확인하였다(표 3). 따라서, 패시로마이세스 리라시너스 HY-4는 점막이응애를 생물학적으로 방제함을 확인할 수 있었다.
As a result, as shown in Table 3, the spiny mite treated with Lactinosyl Lysineus HY-4 showed a higher mortality rate than the untreated control group despite the fact that the number of actually treated active spores was low, And most of them showed mold symptoms (Table 3). Therefore, it was confirmed that Pseudomyshesriaca sinensis HY-4 biologically controls the mucosal irritation.

배지조성Medium composition Cm2 활성포자 (conidia)Cm 2 active conidia rice 25772577 밀기울bran 483483

본 발명은 패실로마이세스(Paecilomyces) 속 곰팡이, 특히 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) HY-4 균주 및 이의 포자를 대량 생산할 수 있으므로, 다양한 해충의 방제를 위한 산업화에 유용하게 이용될 수 있다.
The present invention relates to a method for the treatment of molds of the genus Paecilomyces , in particular Paecilomyces &lt; RTI ID = 0.0 &gt; lilacinus HY-4 strain and spores thereof, and thus can be usefully used for industrialization for controlling various pests.

한국생명공학연구원Korea Biotechnology Research Institute KCTC0395BPKCTC0395BP 1997102719971027

Claims (12)

1) 수탁번호 KCTC0395BP로 기탁된 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) HY-4 곰팡이를 전배양용 기본 배지로서 PDA(Potato Dextrose Agar) 배지에서 전배양하는 단계;
2) 전배양된 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) HY-4 곰팡이를 액상 기본 배지로서 PDB(Potato Dextrose Broth) 배지에 번데기가 배지 전체 조성의 0.5 내지 1.0%(w/v)로 첨가된 배지에서 1차 배양하여 균사체를 대량으로 얻는 단계; 및
3) 단계 2)에서 얻은 균사체를 고체 기본 배지로서 차벡크(czapek) 배지에 번데기, 쌀 또는 밀기울이 배지 전체 조성의 0.5 내지 1.0%(w/v)로 첨가된 배지에서 2차 배양하는 단계를 포함하는, 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) HY-4 곰팡이 포자의 대량 생산 방법.
1) pre-culturing Paecilomyces lilacinus HY-4 fungus deposited with accession number KCTC0395BP in a PDA (Potato Dextrose Agar) medium as a primary culture medium;
2) The Paecilomyces lilacinus HY-4 fungus pre-cultured was used as a liquid basal medium in a PDB (Potato Dextrose Broth) medium to which a pupa was added at 0.5 to 1.0% (w / v) Culturing in a medium to obtain a large amount of mycelium; And
3) The step of culturing the mycelium obtained in step 2) as a solid basic medium in a medium supplemented with 0.5 to 1.0% (w / v) of pupa, rice or wheat bran as a whole in czapek medium A method for mass production of Paecilomyces lilacinus HY-4 mold spores, comprising:
삭제delete 삭제delete 제 1항에 있어서, 상기 단계 1) 내지 단계 3)의 배지는 탄소원 또는 질소원을 포함하는 것을 특징으로 하는 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) HY-4 곰팡이 포자의 대량 생산 방법.
The method of mass production of Paecilomyces lilacinus HY-4 mold spores according to claim 1, wherein the medium of step 1) to step 3) comprises a carbon source or a nitrogen source.
삭제delete 삭제delete 삭제delete 제 1항에 있어서, 상기 단계 1) 내지 단계 3)의 배양은 28℃ 내지 32℃에서 배양되는 것을 특징으로 하는 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) HY-4 곰팡이 포자의 대량 생산 방법.
The method for mass production of Paecilomyces lilacinus HY-4 mold spores according to claim 1, wherein the culture of step 1) to step 3) is cultivated at 28 ° C to 32 ° C.
제 1항에 있어서, 상기 단계 1) 또는 단계 2)의 배양은 7 내지 10일 동안 배양하고, 단계 3)의 배양은 15 내지 25일 동안 배양하는 것을 특징으로 하는 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) HY-4 곰팡이 포자의 대량 생산 방법.
The method according to claim 1, wherein the culture of step 1) or step 2) is cultivated for 7 to 10 days, and the culture of step 3) is cultivated for 15 to 25 days ( Paecilomyces lysinaceus lilacinus ) HY-4 Method for mass production of mold spores.
제 1항에 있어서, 고체 배양된 배양액으로부터 포자를 분리하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는, 패실로마이세스 리라시너스(Paecilomyces lilacinus) HY-4 곰팡이 포자의 대량 생산 방법.
A method for mass production of Paecilomyces lilacinus HY-4 fungal spores according to claim 1, further comprising the step of separating spores from the solid cultured medium.
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