KR101424183B1 - Method for determining abnormality of di-2-ethylhexyl phthalate metabolites in biological material - Google Patents
Method for determining abnormality of di-2-ethylhexyl phthalate metabolites in biological material Download PDFInfo
- Publication number
- KR101424183B1 KR101424183B1 KR1020130094003A KR20130094003A KR101424183B1 KR 101424183 B1 KR101424183 B1 KR 101424183B1 KR 1020130094003 A KR1020130094003 A KR 1020130094003A KR 20130094003 A KR20130094003 A KR 20130094003A KR 101424183 B1 KR101424183 B1 KR 101424183B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- urine
- age
- years
- derived subject
- phthalate
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
- G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
- G01N33/493—Physical analysis of biological material of liquid biological material urine
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/025—Gas chromatography
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
Description
본 발명은 생체 시료를 이용하여 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단하는 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a method for judging whether an excretion amount of di-2-ethylhexyl phthalate metabolite is abnormal using a biological sample.
프탈레이트(phthalate)는 플라스틱에 유연성 및 탄력성을 주기 위한 가소제로, 생활용품, 공업용품, 의료용품 또는 유아용품 등 다양한 제품에 널리 사용되고 있다. 인체가 프탈레이트에 다량 노출되면 내분비계 장애 및 암을 유발하며, 생식기 독성 및 간 독성을 나타낸다고 알려져 있다. 그중에서도 특히, 생산량 및 소비량이 가장 많은 디-2-에틸헥실 프탈레이트의 대사체에 대한 생체 시료내 배설 농도를 조사한 결과 프탈레이트 중 가장 높은 농도를 나타내었으며 연령이 낮을수록 농도가 높게 조사되고 있어 지속적인 모니터링과 예방책이 필요할 것으로 판단된다. Phthalates are plasticizers that give flexibility and elasticity to plastics and are widely used in a variety of products, such as household goods, industrial products, medical supplies, and baby products. Excessive exposure to phthalates in the human body is known to cause endocrine disruption and cancer, and reproductive toxicity and liver toxicity. Especially, the excretion concentration of di-2-ethylhexyl phthalate metabolite in the bio sample was found to be the highest among the phthalates and the concentration was higher as the age was lower. Precautionary measures are necessary.
그러나 프탈레이트 배설량을 정량적으로 확인하는 생체 지표는 보고된 바가 없어 이를 체계화하여 인체의 프탈레이트에 대한 노출 및 위해성을 평가할 수 있는 기준이 요구되고 있는 실정이다.
However, biomarkers for quantitatively confirming the excretion of phthalates have not been reported. Therefore, there is a need for a system for assessing exposure and risk of human phthalates.
본 발명의 목적은 프탈레이트 대사체의 몰농도를 이용하여 생체 시료 내 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단할 수 있는 새롭고 단순한 방법을 제공하는 데 있다.
It is an object of the present invention to provide a novel and simple method for determining the diaryl 2-ethylhexyl phthalate metabolite excretion amount in a biological sample using the molar concentration of a phthalate metabolite have.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명의 일 관점은 다음 수학식 1 내지 3으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 수학식을 이용하여 값을 산출하는 단계;및According to an aspect of the present invention, there is provided a method of calculating a value using one or more mathematical expressions selected from the group consisting of the following equations (1) to (3)
상기 값에 기초하여 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단하는 단계를 포함하는, 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단하는 방법을 제공한다.
Determining the amount of di-2-ethylhexyl phthalate metabolite excreted in the biological sample based on the value of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite excretion amount, phthalate) metabolite excretion amount of the subject.
[수학식 1] [Equation 1]
RMR1 = 생체 시료 내 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트 몰농도 / 생체 시료 내 모노에틸헥실 프탈레이트 몰농도
RMR1 = molar concentration of monoethylhydroxyhexyl phthalate in biological sample / molar concentration of monoethylhexyl phthalate in biological sample
[수학식 2]&Quot; (2) "
RMR2 = 생체 시료 내 모노에틸옥소헥실 프탈레이트 몰농도 / 생체 시료 내 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트 몰농도 RMR2 = molar concentration of monoethyloxohexyl phthalate in biological sample / molar concentration of monoethylhydroxyhexyl phthalate in biological sample
[수학식 3] &Quot; (3) "
RMRt = RMR1 / RMR2
RMRt = RMR1 / RMR2
본 발명은 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체의 배설량의 이상 여부를 평가할 수 있는 새로운 수식을 제공할 수 있어서, 생체 시료 내 포함된 프탈레이트 대사체의 몰농도를 이용하여 배설량의 이상여부를 쉽고 간편하게 판단할 수 있다는 장점이 있다. 본 발명은 또한 정상적인 생체의 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체의 생체 시료 내 함량을 측정하였고 이를 본 발명의 수학식에 대입하여 생체 시료 내 프탈레이트 대사체의 배설량 이상 여부를 평가할 수 있는 가이드드라인을 제시할 수 있어서 유용하다. The present invention can provide a new formula for evaluating the abnormality of di-2-ethylhexyl phthalate metabolite in a biological sample, and thus can provide a new formula for evaluating the moles of phthalate metabolites contained in a biological sample The concentration can be used to easily and easily judge whether or not the excretion amount is abnormal. The present invention also provides a guideline for evaluating the amount of di-2-ethylhexyl phthalate metabolite in a normal living body and measuring the amount of phthalate metabolite in the biological sample by substituting it into the formula of the present invention It is useful.
본 발명으로 생체 시료 내 프탈레이트 대사체의 배설량 이상 여부를 평가하여 이를 이용하면, 인체 내 디-2-에틸헥실 프탈레이트의 대사 이상 여부를 판단할 수 있을 것이어서 관련 질병의 치료 또는 예방에 도움을 줄 수 있을 것인 바 유용하다.
The present invention can evaluate the metabolism of di-2-ethylhexyl phthalate in the human body by evaluating whether or not the excretion amount of the phthalate metabolite in the biological sample is abnormal, and thus it can help the treatment or prevention of the related disease It is useful to have.
도 1은 디-2-에틸헥실 프탈레이트의 생체 내 대사경로를 나타낸 것이다.
도 2는 실시예 1에서 얻어진 시료를 GC-MS 처리한 결과이다.
(1 : MEP, 1':MEP-d4, 2 : MiBP, 2' : MiBP-d4, 3 : MnBP, 3' : MnBP-d4, 4 : MEHP, 4' : MEHP-d4, 5 : MiNP, 5' : MiNP-13C4, 6 : MBzP, 6' : MBzP-d4, 7 : MEOHP, 7' : MEOHP-13C4, 8 : MEHHP, 8' : MEHHP-13C4 ) Figure 1 shows the metabolic pathway of di-2-ethylhexyl phthalate in vivo.
Fig. 2 shows the result of GC-MS treatment of the sample obtained in Example 1. Fig.
(1: MEP, 1 ': MEP-d 4, 2: MiBP, 2': MiBP-d 4, 3: MnBP, 3 ': MnBP-d 4, 4: MEHP, 4': MEHP-d 4, 5 : MiNP, 5 ': MiNP- 13 C 4, 6: MBzP, 6': MBzP-d 4, 7: MEOHP, 7 ': MEOHP- 13 C 4, 8: MEHHP, 8': MEHHP- 13 C 4)
본 발명은 일 관점에서 다음 수학식 1 내지 3으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상의 수학식을 이용하여 값을 산출하는 단계;및 상기 값에 기초하여 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단하는 단계를 포함하는, 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates in one aspect to a method of determining a value of a di-2-ethylhexyl phthalate in a biological sample based on the value, using one or more mathematical formulas selected from the group consisting of the following formulas (1) 2-ethylhexyl phthalate) metabolite excretion amount of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite in the urine.
[수학식 1] [Equation 1]
RMR1 = 생체 시료 내 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트 몰농도 / 생체 시료 내 모노에틸헥실 프탈레이트 몰농도
RMR1 = molar concentration of monoethylhydroxyhexyl phthalate in biological sample / molar concentration of monoethylhexyl phthalate in biological sample
[수학식 2]&Quot; (2) "
RMR2 = 생체 시료 내 모노에틸옥소헥실 프탈레이트 몰농도 / 생체 시료 내 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트 몰농도 RMR2 = molar concentration of monoethyloxohexyl phthalate in biological sample / molar concentration of monoethylhydroxyhexyl phthalate in biological sample
[수학식 3] &Quot; (3) "
RMRt = RMR1 / RMR2
RMRt = RMR1 / RMR2
본 명세서에서, "생체 시료"는 생물에서 유래한 시료를 모두 포괄하는 개념이며, 구체적으로 뇨, 혈액 또는 피부 조직을 포함한다. 생체가 디-2-에틸헥실 프탈레이트에 노출되어 이를 흡수하면 대사 과정을 거쳐 대사체 형태로 생체 외부로 배출되는데, 주로 뇨 (urine)에 포함되어 배출되므로, 상기 생체시료는 구체적으로 뇨일 수 있다. As used herein, the term "biological sample" is intended to encompass all samples derived from an organism, and specifically includes urine, blood or skin tissue. When a living body is exposed to di-2-ethylhexyl phthalate and absorbs it, it is metabolized and excreted to the outside of the body through the metabolic process. Since it is mainly contained in urine and discharged, the biological sample can be specifically urine.
본 명세서에서 상기 “디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체”는 디-2-에틸헥실 프탈레이트가 생체 내에 흡수되어 변환되는 대사체를 모두 포함하는 것이며, 일반적으로 생체 내 대사과정을 거치면서 점차적으로 독성이 낮은 물질로 변환되는데 이러한 물질을 제한없이 포함한다. 구체적으로 상기 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체는 모노에틸헥실 프탈레이트, 모노에틸헥실 프탈레이트 글루쿠로니드, 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트, 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트 글루쿠로니드, 모노에틸옥소헥실 프탈레이트 및 모노에틸옥소헥실 프탈레이트 글루쿠로니드일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. The term "di-2-ethylhexyl phthalate metabolite" as used herein includes all metabolites in which di-2-ethylhexyl phthalate is absorbed and converted in vivo, It gradually transforms into a less toxic substance through metabolic processes, including but not limited to these substances. Specifically, the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite is selected from monoethylhexyl phthalate, monoethylhexyl phthalate glucuronide, monoethylhydroxyhexyl phthalate, monoethylhydroxyhexyl phthalate glucuronide, monoethyloxohexyl phthalate And monoethyloxohexyl phthalate glucuronide, but are not limited thereto.
본 명세서에서 상기 “모노에틸헥실 프탈레이트(mono-ethylhexyl phthalate, MEHP)”은 디-2-에틸헥실 프탈레이트의 대사체로 아래 화학식 1의 화합물 또는 화학식 1의 화합물이 체내에서 컨쥬게이션된 글루쿠로니드 형태일 수 있다. As used herein, the term " mono-ethylhexyl phthalate (MEHP) " refers to a di-2-ethylhexyl phthalate metabolite, which is a compound of formula 1 below or a glucuronide form conjugated in vivo Lt; / RTI >
본 명세서에서 상기 “모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트(mono-ethyl-hydroxyhexyl phthalate, MEHHP)”는 디-2-에틸헥실 프탈레이트의 대사체로 아래 화학식 2의 화합물 또는 화학식 2의 화합물이 체내에서 컨쥬게이션된 글루쿠로니드 형태일 수 있다. As used herein, the term " mono-ethyl-hydroxyhexyl phthalate (MEHHP) " refers to a di-2-ethylhexyl phthalate metabolite, wherein the compound of Formula 2 or the compound of Formula 2 is conjugated in vivo And may be in the form of a croonide.
본 명세서에서 상기 “모노에틸옥소헥실 프탈레이트(mono-ethyl-oxohexyl phthalate, MEOHP)” 역시 디-2-에틸헥실 프탈레이트의 대사체로 아래 화학식 3의 화합물 또는 화학식 3의 화합물이 체내에서 컨쥬게이션된 글루쿠로니드 형태일 수 있다. The term " mono-ethyl-oxohexyl phthalate (MEOHP) " as used herein also refers to a di-2-ethylhexyl phthalate metabolite, which may be a compound of formula 3 below or a compound of formula 3 conjugated in vivo It may be in the form of a Ronid.
상기 화학식 1 내지 3의 화합물 및 이들의 글루쿠로니드 형태는 디-2-에틸헥실 프탈레이트가 생체 내에서 대사되는 과정에서 생성되는 대사체일 수 있으며, 이러한 생체 내 대사 과정에 대하여는 도 1에서 개시하였다. 도 1을 보면 각각의 프탈레이트 대사체는 체내에서 컨쥬게이션된 글루쿠로니드 형태로 전환됨을 알 수 있다. 그러므로 본 명세서에서 각각의 “디-2-에틸헥실 프탈레이트 프탈레이트”는 순수한 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체 및 체내에서 컨쥬게이션된 글루쿠로니드 형태의 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체를 모두 포함할 수 있다. The compounds of formulas 1 to 3 and their glucuronide forms may be metabols produced in the course of metabolism of di-2-ethylhexyl phthalate in vivo, and such metabolism in vivo is disclosed in FIG. 1 . 1, it can be seen that each phthalate metabolite is converted into a conjugated glucuronide form in the body. Thus, each " di-2-ethylhexyl phthalate phthalate " as used herein refers to both pure di-2-ethylhexyl phthalate metabolites and di-2-ethylhexyl phthalate metabolites conjugated in vivo in glucuronide form .
상기 본원발명 수학식은 각각의 대사체의 몰농도를 이용할 수 있으나, 몰분율을 이용하여 계산할 수도 있다. 상기 “몰분율”은 디-2-에틸헥실 프탈레이트의 몰량을 100이라고 했을 때, 각각의 화합물이 이를 구성하는 백분율을 의미할 수 있다. 아울러 본 명세서에서 상기 “디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체의 몰농도”는 소변 시료 내 존재하는 “디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체의 효소분해물의 몰농도”를 또한 포함할 수 있다. The above formula of the present invention may use the molar concentration of each metabolite, but may be calculated using the mole fraction. The " mole fraction " may mean the percentage by which each compound constitutes when the molar amount of di-2-ethylhexyl phthalate is 100. The molar concentration of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite in the present specification may also include the molar concentration of the enzyme degradate of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite present in the urine sample.
본 명세서에서 상기 “이상 여부를 판단”는 인체로부터 배출된 생체 시료를 이용하여 생체 시료 내 프탈레이트 대사체의 몰농도를 측정하고 이를 이용하여 본원발명 수학식으로 생체 시료 내 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 배설량이 이상이 있는지 여부를 판단하는 것을 포함한다. In the present specification, the " determination of abnormality " is made by measuring the molar concentration of a metabolite of phthalate in a biological sample using a biological sample discharged from a human body, and measuring the molar concentration of the di-2-ethylhexyl phthalate (di-2-ethylhexyl phthalate) excretion amount is abnormal.
본 명세서에서 상기 모노에틸헥실 프탈레이트(mono-ethylhexyl phthalate, MEHP), 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트(mono-ethyl-hydroxyhexyl phthtlate, MEHHP) 및 모노에틸옥소헥실 프탈레이트(mono-ethyl-oxohexyl phthalate, MEOHP)의 몰농도를 구하기 위해, 소변 시료 내에 해당 화합물이 포함된 양을 정량할 필요가 있다. 당업계에 알려진 정량법이라면 제한 없이 이용가능하나, 구체적으로 본원 발명 발명자들의 출원 특허 제 10-2012-0060835 호에 기재한 방법을 이용할 수 있다. 즉, 소변 시료에 β-글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 등의 효소를 처리하여 프탈레이트 대사체를 효소분해하고 이를 pH 3 내지 5의 조건에서 C5 내지 C6의 포화 탄화수소계 용매 및 에테르계 용매 중 선택된 하나 이상의 용매로 프탈레이트 대사체 추출한 후, N,O-비스 트리메틸실릴 트리플루오로 아세타마이드(N,O-bis-(trimethylsilyl)-trifluoro acetamide, BSTFA) 및 트리메틸 클로로실란(trimethyl chloro silane, TMCS) 중 선택된 하나 이상으로 프탈레이트 대사체를 트리메틸실릴화한 후, 최종적으로 동위원소 희석법을 이용하여 프탈레이트 대사체를 정량 분석할 수 있다. In this specification, mono-ethylhexyl phthalate (MEHP), mono-ethyl-hydroxyhexyl phthalate (MEHHP) and mono-ethyl-oxohexyl phthalate (MEOHP) In order to obtain the molar concentration, it is necessary to quantify the amount of the compound contained in the urine sample. Any method known in the art can be used without limitation, but the method described in Applicant's patent application No. 10-2012-0060835 can be used. That is, enzymes such as? -Glucuronidase are treated with a urine sample to decompose the metabolites of the phthalates, and the resulting fractions are treated with a C5 to C6 saturated hydrocarbon solvent and an ether solvent (N, O-bis- (trimethylsilyl) -trifluoroacetamide (BSTFA)) and trimethyl chloro silane (hereinafter referred to as " TMCS), and then the phthalate metabolite can be quantitatively analyzed by isotope dilution method.
본 명세서에서 상기 “RMR”은 상대적 대사체비 (relative metabolite ratio)를 의미할 수 있다. 즉, RMR1은 생체 시료 내 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트의 몰농도를 동일한 생체 시료 내의 모노에틸헥실 프탈레이트 몰농도로 나누어준 것일 수 있다. 아울러, RMR2는 모노에틸옥소헥실 프탈레이트 의 몰농도를 동일한 생체 시료 내의 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트 몰농도로 나누어준 것일 수 있다. 더불어, RMRt는 상기 RMR1을 RMR2로 나누어 준 것일 수 있다. In the present specification, the term " RMR " may mean a relative metabolite ratio. That is, RMR1 may be obtained by dividing the molar concentration of monoethylhydroxyhexyl phthalate in the biological sample by the molar concentration of monoethylhexyl phthalate in the same biological sample. In addition, RMR2 may be obtained by dividing the molar concentration of monoethyloxohexyl phthalate by the molar concentration of monoethylhydroxyhexyl phthalate in the same biological sample. In addition, RMRt may be obtained by dividing RMR1 by RMR2.
도 1을 참고하여보면, 디-2-에틸헥실 프탈레이트는 생체 내에 흡수되면 모노에틸헥실 프탈레이트 형태로 변환된다. 이러한 모노에틸헥실 프탈레이트는 글루쿠로니드 형태로 변환될 수 있고 또는 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트로 변환될 수 있다. 한편 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트 역시 글루쿠로니드 형태로 변환될 수 있다. 그러므로 본원발명 수학식 1에서 제시하는 바와 같이 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트 대사체 (글루쿠로니드 형태도 포함)의 몰농도와 모노에틸헥실 프탈레이트 대사체 (글루쿠로니드 형태도 포함)의 몰농도 간의 비율을 이용하여 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체의 배설량이 정상인지 여부를 판단할 수 있다. 즉, 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트가 모노에틸옥소헥실 프탈레이트로 정상적으로 변환되지 못하면 상기 대사체의 비율이 높아질 것이고, 이에 따라 소변으로 배출되는 양이 많아질 것인 바, 이를 이용하여 배설량의 정상 여부를 판단해 볼 수 있다. Referring to FIG. 1, di-2-ethylhexyl phthalate is converted into monoethylhexyl phthalate form when it is absorbed in vivo. Such monoethylhexyl phthalate can be converted to the glucuronide form or can be converted to monoethylhydroxyhexyl phthalate. While monoethylhydroxyhexyl phthalate can also be converted to the glucuronide form. Therefore, as shown in Equation 1 of the present invention, the molar concentration of the monoethylhydroxyhexyl phthalate metabolite (including the glucuronide form) and the molarity of the monoethylhexyl phthalate metabolite (including the glucuronide form) Can be used to determine whether the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite excretion is normal. That is, if the monoethylhydroxyhexyl phthalate can not be normally converted into monoethyloxohexyl phthalate, the proportion of the metabolite will be increased, and accordingly, the amount discharged into the urine will be increased. As a result, I can judge it.
아울러, 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트는 생체 내에 흡수되면 모노에틸옥소헥실 프탈레이트 형태로 변환된다. 그러므로 본원발명 수학식 2에서 제시하는 바와 같이 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트 대사체 (글루쿠로니드 형태도 포함)의 몰농도와 모노에틸옥소헥실 프탈레이트 대사체 (글루쿠로니드 형태도 포함)의 몰농도 간의 비율을 이용하여 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체의 배설량이 정상인지 여부를 판단할 수 있다. 즉, 모노에틸옥소헥실 프탈레이트가 다음 단계의 대사체로 정상적으로 변환되지 못하면 상기 대사체의 비율이 높아질 것이고, 이에 따라 소변으로 배출되는 양이 많아질 것인 바, 이를 이용하여 배설량의 정상 여부를 판단해 볼 수 있다. In addition, when monoethylhydroxyhexyl phthalate is absorbed in vivo, it is converted into monoethyloxohexyl phthalate form. Therefore, as shown in Formula 2 of the present invention, the molar ratio of the molar concentration of the monoethylhydroxyhexyl phthalate metabolite (including the glucuronide form) to the monoethyloxohexyl phthalate metabolite (including the glucuronide form) The concentration of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite can be judged as normal or not. That is, if the monoethyloxohexyl phthalate can not be normally converted into the metabolite of the next step, the proportion of the metabolite will be increased, and accordingly, the amount discharged into the urine will be increased. can see.
본 발명은 상기와 같이 프탈레이트 대사체의 몰농도를 이용한 수식을 새롭게 정의하고, 이를 이용하여 인체로부터 배출된 생체시료에 포함된 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체의 배설량이 정상인지 여부를 쉽게 평가할 수 있다는 장점을 가진다. The present invention newly defines a formula using the molar concentration of a phthalate metabolite as described above, and easily evaluates whether the excretion amount of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite contained in the biological sample discharged from the human body is normal .
본 발명의 일 관점인 방법에 있어서, 상기 판단하는 단계는 소변 유래 대상의 연령이 2세 미만인 경우 상기 RMR1이 20이상; 소변 유래 대상의 연령이 3-4세인 경우 상기 RMR1이 10이상; 소변 유래 대상의 연령이 5-6세인 경우 상기 RMR1이 9이상; 소변 유래 대상의 연령이 7-13세인 경우 상기 RMR1이 9이상; 소변 유래 대상의 연령이 14-19세인 경우 상기 RMR1이 5.5이상; 소변 유래 대상의 연령이 20-29세인 경우 상기 RMR1이 5.1이상; 소변 유래 대상의 연령이 30-39세인 경우 상기 RMR1이 5.4이상; 소변 유래 대상의 연령이 40-49세인 경우 상기 RMR1이 5.8이상; 소변 유래 대상의 연령이 50-59세인 경우 상기 RMR1이 7이상;또는 소변 유래 대상의 연령이 60세 이상인 경우 상기 RMR1이 6.5이상인지 여부에 의해, 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단할 수 있다. In one aspect of the present invention, the step of judging comprises: when the age of the urine-derived subject is less than 2 years old, the RMR1 is 20 or more; When the age of the urine-derived subject is 3-4 years, the RMR1 is 10 or more; When the age of the urine-derived subject is 5-6 years, the RMR1 is 9 or higher; When the age of the urine-derived subject is 7-13 years, the RMR1 is 9 or more; When the age of the urine-derived subject is 14-19 years, the RMR1 is 5.5 or higher; When the age of the urine-derived subject is 20-29 years, the RMR1 is 5.1 or higher; When the age of the urine-derived subject is 30-39 years, the RMR1 is 5.4 or higher; When the age of the urine-derived subject is 40-49 years old, the RMR1 is 5.8 or higher; When the age of the urine-derived subject is 50-59 years, the RMR1 is 7 or more; or when the age of the urine-derived subject is 60 years or more. -2-ethylhexyl phthalate) can be determined.
상기 범위 내에서 생체 내 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체의 배설량이 정상적인 것으로 본원발명에 의해 밝혀졌으므로, 상기 범위를 벗어나면 생체 시료 내 대사체 배설량이 이상이 있는 것으로 판단할 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 소변 유래 대상의 연령이 2세 미만인 경우 상기 RMR1이 21이상 또는 22이상; 소변 유래 대상의 연령이 3-4세인 경우 상기 RMR1이 11이상 또는 12이상; 소변 유래 대상의 연령이 5-6세인 경우 상기 RMR1이 10이상 또는 11이상; 소변 유래 대상의 연령이 7-13세인 경우 상기 RMR1이 10이상 또는 11이상; 소변 유래 대상의 연령이 14-19세인 경우 상기 RMR1이 6.5이상 또는 7.5이상; 소변 유래 대상의 연령이 20-29세인 경우 상기 RMR1이 6.1이상 또는 7.1이상; 소변 유래 대상의 연령이 30-39세인 경우 상기 RMR1이 6.4이상 또는 7.4이상; 소변 유래 대상의 연령이 40-49세인 경우 상기 RMR1이 6.8이상 또는 7.8이상; 소변 유래 대상의 연령이 50-59세인 경우 상기 RMR1이 8이상 또는 9이상;또는 소변 유래 대상의 연령이 60세 이상인 경우 상기 RMR1이 7.5이상 또는 8.5이상인지 여부에 의해 생체 시료 내 대사체 배설량이 이상이 있는 것으로 판단할 수 있다.Since the excretion amount of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite in vivo is within the above range, it has been found by the present invention that it can be judged that the excretion amount of the metabolite in the biological sample is abnormal. In view of the above, when the age of the urine-derived subject is less than 2 years old, the RMR1 is 21 or more or 22 or more; When the age of the urine-derived subject is 3-4 years, the RMR1 is 11 or more or 12 or more; When the age of the urine-derived subject is 5-6 years, the RMR1 is 10 or more or 11 or more; The RMR1 is 10 or more or 11 or more when the age of the urine-derived subject is 7-13 years; When the age of the urine-derived subject is 14 to 19 years old, the RMR1 is at least 6.5 or at least 7.5; When the age of the urine derived subject is 20-29 years, the RMR1 is 6.1 or more or 7.1 or more; When the age of the urine-derived subject is 30-39 years, the RMR1 is 6.4 or higher or 7.4 or higher; When the age of the urine-derived subject is 40-49 years, the RMR1 is 6.8 or more or 7.8 or more; The RMR1 is more than 8 or 9 or more when the age of the urine derived subject is 50-59 years or the RMR1 is 7.5 or more or 8.5 or more when the age of the urine derived subject is 60 or more age. It can be judged that there is abnormality.
본 발명의 일 관점인 방법에 있어서, 상기 판단하는 단계는 소변 유래 대상의 연령이 2세 미만인 경우 상기 RMR2가 1.3이상; 소변 유래 대상의 연령이 3-4세인 경우 상기 RMR2가 1.4이상; 소변 유래 대상의 연령이 5-6세인 경우 상기 RMR2가 1.3이상; 소변 유래 대상의 연령이 7-13세인 경우 상기 RMR2가 1.3이상; 소변 유래 대상의 연령이 14-19세인 경우 상기 RMR2가 1.1이상; 소변 유래 대상의 연령이 20-29세인 경우 상기 RMR2가 1.2이상; 소변 유래 대상의 연령이 30-39세인 경우 상기 RMR2가 1.1이상; 소변 유래 대상의 연령이 40-49세인 경우 상기 RMR2가 1.2이상; 소변 유래 대상의 연령이 50-59세인 경우 상기 RMR2가 1.2이상;또는 소변 유래 대상의 연령이 60세 이상인 경우 상기 RMR2가 1.3 이상인지 여부에 의해, 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 배설량의 이상 여부를 판단할 수 있다. In one aspect of the present invention, the step of judging comprises: when the age of the urine-derived subject is less than 2 years old, the RMR2 is 1.3 or more; When the age of the urine-derived subject is 3-4 years, the RMR2 is 1.4 or higher; When the age of the urine-derived subject is 5-6 years, RMR2 is 1.3 or higher; When the age of the urine-derived subject is 7-13 years, the RMR2 is 1.3 or higher; When the age of the urine-derived subject is 14-19 years old, the RMR2 is 1.1 or more; When the age of the urine-derived subject is 20-29 years, the RMR2 is 1.2 or higher; When the age of the urine-derived subject is 30-39 years, the RMR2 is 1.1 or higher; When the age of the urine-derived subject is 40-49 years, the RMR2 is 1.2 or higher; 2-ethylhexyl phthalate (di (2-ethylhexyl) phthalate (di (2-ethylhexyl) phthalate) in the biological sample is determined depending on whether RMR2 is 1.2 or more when the age of the urine-derived subject is 50-59 years or RMR2 is 1.3 or more when the age of the urine- -2-ethylhexyl phthalate).
상기 범위 내에서 생체 내 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체의 배설량이 정상적인 것으로 본원발명에 의해 밝혀졌으므로, 상기 범위를 벗어나면 생체 시료 내 대사체 배설량이 이상이 있는 것으로 판단할 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 소변 유래 대상의 연령이 2세 미만인 경우 상기 RMR2가 2.3이상 또는 3.3이상; 소변 유래 대상의 연령이 3-4세인 경우 상기 RMR2가 2.4이상 또는 3.4이상; 소변 유래 대상의 연령이 5-6세인 경우 상기 RMR2가 2.3이상 또는 3.3이상; 소변 유래 대상의 연령이 7-13세인 경우 상기 RMR2가 2.3이상 또는 3.3이상; 소변 유래 대상의 연령이 14-19세인 경우 상기 RMR2가 2.1이상 또는 3.1이상; 소변 유래 대상의 연령이 20-29세인 경우 상기 RMR2가 2.2이상 또는 3.2이상; 소변 유래 대상의 연령이 30-39세인 경우 상기 RMR2가 2.1이상 또는 3.1이상; 소변 유래 대상의 연령이 40-49세인 경우 상기 RMR2가 2.2이상 또는 3.2이상; 소변 유래 대상의 연령이 50-59세인 경우 상기 RMR2가 2.2이상 또는 3.2이상;또는 소변 유래 대상의 연령이 60세 이상인 경우 상기 RMR2가 2.3이상 또는 3.3이상인지 여부에 의해, 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 배설량의 이상 여부를 판단할 수 있다. Since the excretion amount of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite in vivo is within the above range, it has been found by the present invention that it can be judged that the excretion amount of the metabolite in the biological sample is abnormal. In view of the above, when the age of the urine-derived subject is less than 2 years old, the RMR2 is 2.3 or more or 3.3 or more; The RMR2 is 2.4 or more or 3.4 or more when the age of the urine-derived subject is 3-4 years; The RMR2 is 2.3 or more or 3.3 or more when the age of the urine-derived subject is 5-6 years; The RMR2 is 2.3 or more or 3.3 or more when the age of the urine-derived subject is 7-13 years; The RMR2 is 2.1 or more or 3.1 or more when the age of the urine-derived subject is 14-19 years; When the age of the urine derived subject is 20-29 years, the RMR2 is 2.2 or more or 3.2 or more; The RMR2 is 2.1 or more or 3.1 or more when the age of the urine-derived subject is 30-39 years; When the age of the urine-derived subject is 40-49 years, the RMR2 is 2.2 or more or 3.2 or more; The RMR2 is 2.2 or more or 3.2 or more when the age of the urine derived subject is 50-59 years or the RMR2 is 2.3 or more or 3.3 or more when the age of the urine derived subject is 60 years or more. - It is possible to judge the abnormality of di-2-ethylhexyl phthalate excretion amount.
상기 범위 내에서 생체 내 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체의 배설량이 정상적인 것으로 본원발명에 의해 밝혀졌으므로, 상기 범위를 벗어나면 생체 시료 내 대사체 배설량이 이상이 있는 것으로 판단할 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 소변 유래 대상의 연령이 2세 미만인 경우 상기 RMR2가 2.3이상 또는 3.3이상; 소변 유래 대상의 연령이 3-4세인 경우 상기 RMR2가 2.4이상 또는 3.4이상; 소변 유래 대상의 연령이 5-6세인 경우 상기 RMR2가 2.3이상 또는 3.3이상; 소변 유래 대상의 연령이 7-13세인 경우 상기 RMR2가 2.3이상 또는 3.3이상; 소변 유래 대상의 연령이 14-19세인 경우 상기 RMR2가 2.1이상 또는 3.1이상; 소변 유래 대상의 연령이 20-29세인 경우 상기 RMR2가 2.2이상 또는 3.2이상; 소변 유래 대상의 연령이 30-39세인 경우 상기 RMR2가 2.1이상 또는 3.1이상; 소변 유래 대상의 연령이 40-49세인 경우 상기 RMR2가 2.2이상 또는 3.2이상; 소변 유래 대상의 연령이 50-59세인 경우 상기 RMR2가 2.2이상 또는 3.2이상;또는 소변 유래 대상의 연령이 60세 이상인 경우 상기 RMR2가 2.3이상 또는 3.3이상인지 여부에 의해, 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 배설량의 본 발명의 일 관점인 방법에 있어서, 상기 판단하는 단계는 소변 유래 대상의 연령이 2세 미만인 경우 상기 RMRt가 22이상; 소변 유래 대상의 연령이 3-4세인 경우 상기 RMRt가 11이상; 소변 유래 대상의 연령이 5-6세인 경우 상기 RMRt가 11이상; 소변 유래 대상의 연령이 7-13세인 경우 상기 RMRt가 10이상; 소변 유래 대상의 연령이 14-19세인 경우 상기 RMRt가 9이상; 소변 유래 대상의 연령이 20-29세인 경우 상기 RMRt가 12이상; 소변 유래 대상의 연령이 30-39세인 경우 상기 RMRt가 10이상; 소변 유래 대상의 연령이 40-49세인 경우 상기 RMRt가 10이상; 소변 유래 대상의 연령이 50-59세인 경우 상기 RMRt가 13이상;또는 소변 유래 대상의 연령이 60세 이상인 경우 지 여부에 의해, 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단할 수 있다. 상 여부를 판단할 수 있다. Since the excretion amount of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite in vivo is within the above range, it has been found by the present invention that it can be judged that the excretion amount of the metabolite in the biological sample is abnormal. In view of the above, when the age of the urine-derived subject is less than 2 years old, the RMR2 is 2.3 or more or 3.3 or more; The RMR2 is 2.4 or more or 3.4 or more when the age of the urine-derived subject is 3-4 years; The RMR2 is 2.3 or more or 3.3 or more when the age of the urine-derived subject is 5-6 years; The RMR2 is 2.3 or more or 3.3 or more when the age of the urine-derived subject is 7-13 years; The RMR2 is 2.1 or more or 3.1 or more when the age of the urine-derived subject is 14-19 years; When the age of the urine derived subject is 20-29 years, the RMR2 is 2.2 or more or 3.2 or more; The RMR2 is 2.1 or more or 3.1 or more when the age of the urine-derived subject is 30-39 years; When the age of the urine-derived subject is 40-49 years, the RMR2 is 2.2 or more or 3.2 or more; The RMR2 is 2.2 or more or 3.2 or more when the age of the urine derived subject is 50-59 years or the RMR2 is 2.3 or more or 3.3 or more when the age of the urine derived subject is 60 years or more. - ethylhexyl phthalate excretion amount, wherein the determining step comprises the step of: if the age of the urine derived subject is less than 2 years old, the RMRt is not less than 22; When the age of the urine-derived subject is 3-4 years, the RMRt is 11 or higher; When the age of the urine-derived subject is 5-6 years, the RMRt is 11 or higher; When the age of the urine-derived subject is 7-13 years, the RMRt is 10 or more; When the age of the urine-derived subject is 14 to 19 years old, the RMRt is 9 or more; When the age of the urine-derived subject is 20-29 years, the RMRt is 12 or more; When the age of the urine-derived subject is 30-39 years, the RMRt is 10 or more; When the age of the urine-derived subject is 40-49 years, the RMRt is 10 or more; 2-ethylhexyl phthalate (DBP) in biological samples, depending on whether the RMRt is 13 or more when the age of the urine-derived subject is 50-59 years or the age of the urine-derived subject is 60 years or older ) It is possible to judge the abnormality of metabolite excretion amount. It is possible to judge whether or not it is an image.
상기 범위 내에서 생체 내 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체의 배설량이 정상적인 것으로 본원발명에 의해 밝혀졌으므로, 상기 범위를 벗어나면 생체 시료 내 대사체 배설량이 이상이 있는 것으로 판단할 수 있다. 상기와 같은 관점에서, 소변 유래 대상의 연령이 2세 미만인 경우 상기 RMRt가 23이상 또는 24이상; 소변 유래 대상의 연령이 3-4세인 경우 상기 RMRt가 12이상 또는 13이상; 소변 유래 대상의 연령이 5-6세인 경우 상기 RMRt가 12이상 또는 13이상; 소변 유래 대상의 연령이 7-13세인 경우 상기 RMRt가 11이상 또는 12이상; 소변 유래 대상의 연령이 14-19세인 경우 상기 RMRt가 10이상 또는 11이상; 소변 유래 대상의 연령이 20-29세인 경우 상기 RMRt가 13이상 또는 14이상; 소변 유래 대상의 연령이 30-39세인 경우 상기 RMRt가 11이상 또는 12이상; 소변 유래 대상의 연령이 40-49세인 경우 상기 RMRt가 11이상 또는 12이상; 소변 유래 대상의 연령이 50-59세인 경우 상기 RMRt가 14이상 또는 15이상;또는 소변 유래 대상의 연령이 60세 이상인 경우 12이상 또는 13이상인지 여부에 의해, 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단할 수 있다. Since the excretion amount of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite in vivo is within the above range, it has been found by the present invention that it can be judged that the excretion amount of the metabolite in the biological sample is abnormal. In view of the above, when the age of the urine-derived subject is less than 2 years old, the RMRt is 23 or more or 24 or more; The RMRt is 12 or more or 13 or more when the age of the urine-derived subject is 3-4 years; When the age of the urine-derived subject is 5-6 years, the RMRt is 12 or more or 13 or more; The RMRt is 11 or more or 12 or more when the age of the urine derived subject is 7-13 years; The RMRt is 10 or more or 11 or more when the age of the urine-derived subject is 14-19 years; When the age of the urine-derived subject is 20-29 years, the RMRt is 13 or more or 14 or more; When the age of the urine-derived subject is 30-39 years, the RMRt is 11 or more or 12 or more; When the age of the urine-derived subject is 40-49 years, the RMRt is 11 or more or 12 or more; It is preferable that the RMRt is 14 or more or 15 or more when the age of the urine-derived subject is 50-59 years or 12 or more or 13 or more when the age of the urine-derived subject is 60 or more years. (Di-2-ethylhexyl phthalate) metabolite excretion amount.
본 발명의 일 관점인 방법에 있어서, 상기 시료는 뇨 (urine)를 포함할 수 있다. In one aspect of the present invention, the sample may comprise urine.
본 명세서에서 “뇨” 또는“소변”은 인체로부터 배출된 소변 시료이며, 구체적으로 대상이 12시간 이상의 시간 동안 배출한 소변을 포집한 총 양을 이용할 수 있다.
As used herein, "urine" or "urine" refers to a urine sample discharged from a human body, specifically, the total amount of urine collected by a subject for a period of 12 hours or more.
이하, 하기의 실시예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐, 본 발명의 범주 및 범위가 이에 한정되지 않는다.
Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to the following examples. However, the following examples are provided for illustrative purposes only in order to facilitate understanding of the present invention, and the scope and scope of the present invention are not limited thereto.
디-2-Di-2-
에틸헥실Ethylhexyl
프탈레이트Phthalate
대사체의Metabolite
정량 dose
1. 소변 시료의 처리 1. Treatment of urine samples
대상이 12시간 동안 배출하는 소변을 채취하여 사용하였으며, 제주도를 제외한 전국의 각 연령을 대상으로 총1621명의 생체시료를 채취하였다.Urine collected from the subjects for 12 hours was collected and used. A total of 1621 samples were collected from all ages of the country excluding Jeju Island.
각각의 소변 시료 2mL에 모노에틸 프탈레이트-d4, 모노에틸헥실 프탈레이트-d4, 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트-13C4, 모노에틸옥소헥실 프탈레이트-13C4, 모노이소부틸 프탈레이트-d4, 모노부틸 프탈레이트-d4, 모노벤질 프탈레이트-d4 및 모노이소노닐 프탈레이트-13C4의 8종 내부 표준 물질 혼합 용액(1 ㎍/mL) 20 ㎕를 가한 후, 1M 암모늄아세트산 완충 용액(pH 7.0) 700 ㎕를 pH 6.0 내지 6.5가 되도록 가하였다. 교반기(vortexer)를 이용하여 혼합물을 고르게 하고, β-글루쿠로니다제 50 ㎕를 가한 후, 37℃에서 2시간 동안 분해시켰다.To 2 mL of each of the urine samples were added monoethyl phthalate-d4, monoethylhexyl phthalate-d4, monoethylhydroxyhexyl phthalate-13C4, monoethyloxohexyl phthalate-13C4, monoisobutyl phthalate-d4, monobutyl phthalate- 20 μl of an 8-type internal standard substance mixture solution of benzyl phthalate-d4 and monoisononylphthalate-13C4 was added thereto, and then 700 μl of 1M ammonium acetate buffer solution (pH 7.0) was added to pH 6.0 to 6.5 Respectively. The mixture was homogenized using a vortexer, and 50 μl of β-glucuronide was added thereto, followed by decomposition at 37 ° C. for 2 hours.
분해시킨 시료에, 모노프탈레이트 에스터의 pKa(3.4-3.6)를 고려하여 pH가 4.0이 되도록 2M 아세트산 1 mL를 첨가하고, 염석제로 무수황산나트륨 0.5g을 첨가한 후, 헥산과 에틸 에테르가 8:2의 비율로 혼합된 추출 용매 3mL로 20분간 흔들어 추출하였다. 추출 후 원심 분리기에서 2800 rpm으로 회전시켜 소변 층과 용매 층을 분리하고, -21℃의 냉동고에서 소변 층을 냉동시켜 용매 층과 분리하여 수득하였다. 냉동시킨 소변 시료는 상온에서 녹이고, 새로운 헥산과 에틸에테르의 혼합 용매를 3mL 첨가하여 위와 실질적으로 동일한 추출 과정을 반복하였다. 1 mL of 2M acetic acid was added to the decomposed sample so that the pKa (3.4-3.6) of the monophthalate ester was taken into consideration, and 0.5 g of anhydrous sodium sulfate was added thereto as a salting agent. Then, hexane and ethyl ether were added at a ratio of 8: And extracted by shaking for 20 minutes with 3 mL of the extracted solvent. After the extraction, the urine layer and the solvent layer were separated by rotating at 2800 rpm in a centrifuge, and the urine layer was frozen in a freezer at -21 캜 to separate it from the solvent layer. The frozen urine sample was dissolved at room temperature, and 3 mL of a mixed solvent of fresh hexane and ethyl ether was added, and the extraction procedure substantially the same as above was repeated.
이후 추출 용매를 질소 농축기로 모두 증발시킨 다음, P2O5/KOH/실리카겔을 이용하여 진공 건조기에서 30분 동안 건조시켰다. 건조 후 N,O-비스 트리메틸실릴 트리플루오로 아세타마이드(N,O-bis-(trimethylsilyl)-trifluoro acetamide, BSTFA) 및 트리메틸 클로로실란(trimethyl chloro silane, TMCS)의 99:1(v/v) 혼합 용액(Sigma-Aldrich사, Steinheim, Germany) 50㎕를 가하고 65℃에서 30분간 반응시켜 트리메틸실릴화하였다.
Then, the extraction solvent was evaporated with a nitrogen concentrator, and then dried in a vacuum dryer using P2O5 / KOH / silica gel for 30 minutes. After drying, 99: 1 (v / v) of N, O-bistrimethylsilyl-trifluoroacetamide (BSTFA) and trimethylchlorosilane (TMCS) ) Mixed solution (Sigma-Aldrich, Steinheim, Germany) was added, and the mixture was allowed to react at 65 ° C for 30 minutes to effect trimethylsilylation.
2. 2.
GCGC
--
MSMS
분석 analysis
GC-MS 기기(애질런트 테크놀로지사(산타 클라라, 캘리포니아, 미국)의 애질런트 7890 A 가스크로마토그래프에 직접 연결된 애질런트 5975 C 질량 선택적 탐지기)에 애질런트 7693 A 시리즈 주입기를 사용하여 위의 1.에서 준비한 시료 2㎕를 주입하였다.Agilent 7693 A Series injector was used in a GC-MS instrument (Agilent 5975 C mass selective detector directly connected to Agilent 7890 A gas chromatograph from Agilent Technologies, Santa Clara, Calif., USA) Lt; / RTI >
분리관은 울트라-2(크로스-연결된 5% 페닐 메틸 실리콘, 길이 25m, 내경 0.2 ㎜, 필름 두께 0.33 ㎛)를 사용 하였으며, 운반 기체로는 1 mL/분 유속의 초고순도(99.9999%) 헬륨을 사용하였다. 주입부(Inlet)의 온도는 280℃이었고, 1:5의 분할 주입 방식(split injection mode)을 사용하였다. 오븐 조건은 100℃에서 310℃까지 가온하는 것으로 설정되었다. 이온화에 사용한 전자 에너지는 70 eV이었고, 분석 대상 물질 중 몇 개의 특정 이온만을 선택하여 검출하는 방법(selected ion monitoring, SIM 모드)을 이용하였다. GC-MS 작동 조건은 다음 표 1과 같다. The separation tube used was ultra-2 (cross-linked 5% phenylmethyl silicone, length 25 m, internal diameter 0.2 mm, film thickness 0.33 μm) and carrier gas was ultrapure (99.9999%) helium at a flow rate of 1 mL / Respectively. The temperature of the inlet was 280 ° C and a 1: 5 split injection mode was used. The oven conditions were set to warm from 100 占 폚 to 310 占 폚. The electron energy used for ionization was 70 eV, and selected ion monitoring (SIM mode) was used. GC-MS operating conditions are shown in Table 1 below.
(크로스 연결된 5% 페닐메틸실리콘, 25m x 0.2mm I.D., 0.33 ㎛ 필름 두께)Ultra-2
(Cross-linked 5% phenylmethyl silicone, 25 m x 0.2 mm ID, 0.33 um film thickness)
연령대별 디-2-Di-2-
에틸헥실Ethylhexyl
프탈레이트Phthalate
대사체의Metabolite
몰 백분율 Mole percentage
실시예 1에 의해 얻어진 자료를 이용하여 소변 내의 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체 중 각각의 대사체들이 차지하는 몰 백분율을 구하여 아래 표 2에 나타내었다. 아래 ΣDEHP는 각각의 시료에서 DEHP대사체 3종인 MEHP, MEOHP, MEHHP 의 몰농도를 구한 후, 그 값을 합하여 평균을 낸 것이다.
Using the data obtained in Example 1, the molar percentage of each metabolite in the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite in the urine was determined and shown in Table 2 below. The ΣDEHP values are obtained by calculating the molar concentrations of the three DEHP metabolites, MEHP, MEOHP, and MEHHP, in each sample, and then averaging the values.
(%)MEHP
(%)
(%)MEHHP
(%)
(%)MEOHP
(%)
(pmol/mg cr)ΣDEHP
(pmol / mg cr)
편차Standard
Deviation
편차Standard
Deviation
편차Standard
Deviation
편차Standard
Deviation
그 결과, 일반적이고 정상적인 대상의 소변 시료 내 디-2-에틸헥실 프탈레이트 대사체의 비율은 표 2의 수치임을 알 수 있었다. 상기와 같이 본 발명은 정상적인 인체의 생체 시료 내 프탈레이트 대사체 함량 및 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단할 수 있는 가이드라인을 제시할 수 있어서 유용하다.
As a result, the ratio of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite in the urine sample of a normal and normal subject was found to be the values shown in Table 2. As described above, the present invention provides a guideline for judging whether the content of phthalate metabolites in a normal human body sample and the amount of di-2-ethylhexyl phthalate metabolite excreted in a biological sample are abnormal It is useful to do.
연령대별 상대적 Relative to age
대사체비Metabolism ratio
( (
RMRRMR
)의 계산 ) Calculation
표 2에 의해 얻어진 자료를 이용하여 수학식 1 내지 3에 의해 각각의 RMR을 계산하여 표 3에 나타내었다. 구체적으로 표 2의 자료를 이용하면 각각의 ΣDEHP 값에 각각의 대사체의 몰분율값을 곱하면 특정 대사체의 몰농도를 알아낼 수 있다.
The RMRs are calculated by Equations 1 to 3 using the data obtained in Table 2, and are shown in Table 3. Specifically, using the data in Table 2, the molar concentration of a specific metabolite can be determined by multiplying the ΣDEHP value by the mole fraction of each metabolite.
그 결과, 일반적이고 정상적인 대상의 소변 시료 내 RMR의 값은 표 3의 수치임을 알 수 있었다. 상기와 같이 본 발명은 정상적인 인체의 생체 시료 내 프탈레이트 대사체 함량 및 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단할 수 있는 가이드라인을 제시할 수 있어서 유용하다.As a result, the values of RMR in the urine samples of the normal and normal subjects were found to be the values shown in Table 3. As described above, the present invention provides a guideline for judging whether the content of phthalate metabolites in a normal human body sample and the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite excretion amount in a biological sample are abnormal It is useful to do.
Claims (5)
상기 값에 기초하여 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단하는 단계를 포함하는, 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단하는 방법.
[수학식 1]
RMR1 = 생체 시료 내 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트 몰농도 / 생체 시료 내 모노에틸헥실 프탈레이트 몰농도
[수학식 2]
RMR2 = 생체 시료 내 모노에틸옥소헥실 프탈레이트 몰농도 / 생체 시료 내 모노에틸하이드록시헥실 프탈레이트 몰농도
[수학식 3]
RMRt = RMR1 / RMR2
Calculating a value using one or more mathematical expressions selected from the group consisting of the following equations (1) to (3); and
Determining the amount of di-2-ethylhexyl phthalate metabolite excreted in the biological sample based on the value of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite excretion amount, A method for determining abnormalities in metabolite excretion.
[Equation 1]
RMR1 = molar concentration of monoethylhydroxyhexyl phthalate in biological sample / molar concentration of monoethylhexyl phthalate in biological sample
&Quot; (2) "
RMR2 = molar concentration of monoethyloxohexyl phthalate in biological sample / molar concentration of monoethylhydroxyhexyl phthalate in biological sample
&Quot; (3) "
RMRt = RMR1 / RMR2
상기 판단하는 단계는
소변 유래 대상의 연령이 2세 미만인 경우 상기 RMR1이 20이상;
소변 유래 대상의 연령이 3-4세인 경우 상기 RMR1이 10이상;
소변 유래 대상의 연령이 5-6세인 경우 상기 RMR1이 9이상;
소변 유래 대상의 연령이 7-13세인 경우 상기 RMR1이 9이상;
소변 유래 대상의 연령이 14-19세인 경우 상기 RMR1이 5.5이상;
소변 유래 대상의 연령이 20-29세인 경우 상기 RMR1이 5.1이상;
소변 유래 대상의 연령이 30-39세인 경우 상기 RMR1이 5.4이상;
소변 유래 대상의 연령이 40-49세인 경우 상기 RMR1이 5.8이상;
소변 유래 대상의 연령이 50-59세인 경우 상기 RMR1이 7이상;또는
소변 유래 대상의 연령이 60세 이상인 경우 상기 RMR1이 6.5이상인지 여부에 의해, 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단하는 것인, 방법.
The method according to claim 1,
The determining step
When the age of the urine-derived subject is less than 2 years old, the RMR1 is 20 or more;
When the age of the urine-derived subject is 3-4 years, the RMR1 is 10 or more;
When the age of the urine-derived subject is 5-6 years, the RMR1 is 9 or higher;
When the age of the urine-derived subject is 7-13 years, the RMR1 is 9 or more;
When the age of the urine-derived subject is 14-19 years, the RMR1 is 5.5 or higher;
When the age of the urine-derived subject is 20-29 years, the RMR1 is 5.1 or higher;
When the age of the urine-derived subject is 30-39 years, the RMR1 is 5.4 or higher;
When the age of the urine-derived subject is 40-49 years old, the RMR1 is 5.8 or higher;
The RMR1 is 7 or more when the age of the urine-derived subject is 50-59 years; or
Wherein the abnormality of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite excretion amount in the biological sample is judged by whether the age of the urine-derived subject is 60 years or more and whether RMR1 is 6.5 or more. Way.
상기 판단하는 단계는
소변 유래 대상의 연령이 2세 미만인 경우 상기 RMR2가 1.3이상;
소변 유래 대상의 연령이 3-4세인 경우 상기 RMR2가 1.4이상;
소변 유래 대상의 연령이 5-6세인 경우 상기 RMR2가 1.3이상;
소변 유래 대상의 연령이 7-13세인 경우 상기 RMR2가 1.3이상;
소변 유래 대상의 연령이 14-19세인 경우 상기 RMR2가 1.1이상;
소변 유래 대상의 연령이 20-29세인 경우 상기 RMR2가 1.2이상;
소변 유래 대상의 연령이 30-39세인 경우 상기 RMR2가 1.1이상;
소변 유래 대상의 연령이 40-49세인 경우 상기 RMR2가 1.2이상;
소변 유래 대상의 연령이 50-59세인 경우 상기 RMR2가 1.2이상;또는
소변 유래 대상의 연령이 60세 이상인 경우 상기 RMR2가 1.3 이상인지 여부에 의해, 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단하는 것인, 방법.
The method according to claim 1,
The determining step
When the age of the urine-derived subject is less than 2 years old, the RMR2 is 1.3 or more;
When the age of the urine-derived subject is 3-4 years, the RMR2 is 1.4 or higher;
When the age of the urine-derived subject is 5-6 years, RMR2 is 1.3 or higher;
When the age of the urine-derived subject is 7-13 years, the RMR2 is 1.3 or higher;
When the age of the urine-derived subject is 14-19 years old, the RMR2 is 1.1 or more;
When the age of the urine-derived subject is 20-29 years, the RMR2 is 1.2 or higher;
When the age of the urine-derived subject is 30-39 years, the RMR2 is 1.1 or higher;
When the age of the urine-derived subject is 40-49 years, the RMR2 is 1.2 or higher;
RMR2 is 1.2 or more when the age of the urine-derived subject is 50-59 years; or
Wherein the abnormality of the di-2-ethylhexyl phthalate metabolite excretion amount in the biological sample is judged by whether or not the age of the urine-derived subject is 60 years or more and whether RMR2 is 1.3 or more. Way.
상기 판단하는 단계는
소변 유래 대상의 연령이 2세 미만인 경우 상기 RMRt가 22이상;
소변 유래 대상의 연령이 3-4세인 경우 상기 RMRt가 11이상;
소변 유래 대상의 연령이 5-6세인 경우 상기 RMRt가 11이상;
소변 유래 대상의 연령이 7-13세인 경우 상기 RMRt가 10이상;
소변 유래 대상의 연령이 14-19세인 경우 상기 RMRt가 9이상;
소변 유래 대상의 연령이 20-29세인 경우 상기 RMRt가 12이상;
소변 유래 대상의 연령이 30-39세인 경우 상기 RMRt가 10이상;
소변 유래 대상의 연령이 40-49세인 경우 상기 RMRt가 10이상;
소변 유래 대상의 연령이 50-59세인 경우 상기 RMRt가 13이상;또는
소변 유래 대상의 연령이 60세 이상인 경우 RMRt가 11이상인지 여부에 의해, 생체 시료 중 디-2-에틸헥실 프탈레이트 (di-2-ethylhexyl phthalate) 대사체 배설량의 이상 여부를 판단하는 것인, 방법.
The method according to claim 1,
The determining step
When the age of the urine derived subject is less than 2 years old, the RMRt is 22 or more;
When the age of the urine-derived subject is 3-4 years, the RMRt is 11 or higher;
When the age of the urine-derived subject is 5-6 years, the RMRt is 11 or higher;
When the age of the urine-derived subject is 7-13 years, the RMRt is 10 or more;
When the age of the urine-derived subject is 14 to 19 years old, the RMRt is 9 or more;
When the age of the urine-derived subject is 20-29 years, the RMRt is 12 or more;
When the age of the urine-derived subject is 30-39 years, the RMRt is 10 or more;
When the age of the urine-derived subject is 40-49 years, the RMRt is 10 or more;
The RMRt is 13 or more when the age of the urine-derived subject is 50-59 years; or
Wherein the abnormality of di-2-ethylhexyl phthalate metabolite excretion amount in the biological sample is judged by whether RMRt is 11 or more when the age of urine-derived subject is 60 years or more .
상기 생체 시료는 뇨 (urine)인, 방법.The method according to claim 1,
Wherein the biological sample is urine.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020130094003A KR101424183B1 (en) | 2013-08-08 | 2013-08-08 | Method for determining abnormality of di-2-ethylhexyl phthalate metabolites in biological material |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020130094003A KR101424183B1 (en) | 2013-08-08 | 2013-08-08 | Method for determining abnormality of di-2-ethylhexyl phthalate metabolites in biological material |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR101424183B1 true KR101424183B1 (en) | 2014-07-28 |
Family
ID=51743153
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020130094003A KR101424183B1 (en) | 2013-08-08 | 2013-08-08 | Method for determining abnormality of di-2-ethylhexyl phthalate metabolites in biological material |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101424183B1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112710745A (en) * | 2020-12-08 | 2021-04-27 | 上海微谱化工技术服务有限公司 | Method for measuring di (2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) and application thereof |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100789726B1 (en) | 2006-10-18 | 2008-01-02 | 전남대학교산학협력단 | Methods for detection and toxicity evaluation of environmental toxic substances using amphibian ovarian follicles |
| KR20110064994A (en) * | 2009-12-09 | 2011-06-15 | 고려대학교 산학협력단 | Proteomics biomarker for identification of exposure to phthalate compounds as environmental toxic materials |
-
2013
- 2013-08-08 KR KR1020130094003A patent/KR101424183B1/en active IP Right Grant
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100789726B1 (en) | 2006-10-18 | 2008-01-02 | 전남대학교산학협력단 | Methods for detection and toxicity evaluation of environmental toxic substances using amphibian ovarian follicles |
| KR20110064994A (en) * | 2009-12-09 | 2011-06-15 | 고려대학교 산학협력단 | Proteomics biomarker for identification of exposure to phthalate compounds as environmental toxic materials |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 비특허문헌 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112710745A (en) * | 2020-12-08 | 2021-04-27 | 上海微谱化工技术服务有限公司 | Method for measuring di (2-ethylhexyl) phthalate (DEHP) and application thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bajtarevic et al. | Noninvasive detection of lung cancer by analysis of exhaled breath | |
| Filipiak et al. | Dependence of exhaled breath composition on exogenous factors, smoking habits and exposure to air pollutants | |
| Zheng et al. | The footprints of gut microbial–mammalian co-metabolism | |
| Fischer et al. | Physiological variability in volatile organic compounds (VOCs) in exhaled breath and released from faeces due to nutrition and somatic growth in a standardized caprine animal model4 | |
| Song et al. | Pollution levels and characteristics of phthalate esters in indoor air of offices | |
| Hu et al. | In situ solid phase microextraction sampling of analytes from living human objects for mass spectrometry analysis | |
| Mochalski et al. | Quantification of selected volatile organic compounds in human urine by gas chromatography selective reagent ionization time of flight mass spectrometry (GC-SRI-TOF-MS) coupled with head-space solid-phase microextraction (HS-SPME) | |
| Kataoka et al. | Noninvasive analysis of volatile biomarkers in human emanations for health and early disease diagnosis | |
| Chien et al. | Bio-sniffer (gas-phase biosensor) with secondary alcohol dehydrogenase (S-ADH) for determination of isopropanol in exhaled air as a potential volatile biomarker | |
| Qiao et al. | Analysis of human hair to assess exposure to organophosphate flame retardants: Influence of hair segments and gender differences | |
| Reade et al. | Optimisation of sample preparation for direct SPME-GC-MS analysis of murine and human faecal volatile organic compounds for metabolomic studies | |
| Kondo et al. | Determination of five phthalate monoesters in human urine using gas chromatography-mass spectrometry | |
| Kischkel et al. | Breath analysis during one-lung ventilation in cancer patients | |
| Hu et al. | 8-Oxo-7, 8-dihydroguanine and 8-oxo-7, 8-dihydro-2′-deoxyguanosine concentrations in various human body fluids: implications for their measurement and interpretation | |
| Aranha et al. | Determination of ptaquiloside and pterosin B derived from bracken (Pteridium aquilinum) in cattle plasma, urine and milk | |
| Sulé-Suso et al. | Quantification of acetaldehyde and carbon dioxide in the headspace of malignant and non-malignant lung cells in vitro by SIFT-MS | |
| Monfort et al. | Determination of five di-(2-ethylhexyl) phthalate metabolites in urine by UPLC–MS/MS, markers of blood transfusion misuse in sports | |
| Gruber et al. | Breath gas monitoring during a glucose challenge by a combined PTR-QMS/GC× GC-TOFMS approach for the verification of potential volatile biomarkers | |
| Medic Stojanoska et al. | Do diethyl phthalate (DEP) and di-2-ethylhexyl phthalate (DEHP) influence the metabolic syndrome parameters? Pilot study | |
| Pugliese et al. | Extending PTR based breath analysis to real-time monitoring of reactive volatile organic compounds | |
| Oertel et al. | Continuous real-time breath analysis in ruminants: effect of eructation on exhaled VOC profiles | |
| Savva et al. | Obese mother offspring have hepatic lipidic modulation that contributes to sex-dependent metabolic adaptation later in life | |
| Ruzsányi et al. | Breath profiles of children on ketogenic therapy | |
| Zhang et al. | Intergenerational transfer of Dechlorane Plus and the associated long-term effects on the structure and function of gut microbiota in offspring | |
| KR101424183B1 (en) | Method for determining abnormality of di-2-ethylhexyl phthalate metabolites in biological material |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20170703 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20180703 Year of fee payment: 5 |