KR101423651B1 - Process for enhancing stem cell bioactivity using genistein and the cellular therapeutic supplementary agent comprising the same - Google Patents

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Abstract

본 발명은 제니스틴(Genistein)을 포함하는 줄기세포의 이동 또는 증식 촉진용 조성물 및 이를 포함하는 줄기세포 치료 보조제에 관한 것이다.
또한 본 발명은 줄기세포에 제니스틴을 처리하여 줄기세포의 이동 또는 증식을 촉진하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for promoting migration or proliferation of stem cells comprising genistein and a stem cell treatment adjuvant containing the same.
The present invention also relates to a method for promoting the migration or proliferation of stem cells by treating the stem cells with genistein.

Description

제니스틴을 이용한 줄기세포 생물작용 활성증가 및 이를 함유하는 줄기세포 치료 보조제{Process for enhancing stem cell bioactivity using genistein and the cellular therapeutic supplementary agent comprising the same}Technical Field [0001] The present invention relates to a stem cell biotherapeutic activity enhancer and a stem cell therapeutic adjuvant containing the same,

본 발명은 제니스틴(Genistein)을 포함하는 줄기세포의 생물작용 활성을 증가시키는 조성물 및 이를 포함하는 줄기세포 치료 보조제에 관한 것이다. 보다 상세하게는 본 발명은 제니스틴을 줄기세포에 처리하여 배양함으로써 줄기세포의 이동 또는 증식을 촉진하도록 하는 조성물, 이를 이용한 방법 및 상기 조성물을 포함하는 줄기세포 치료 보조제에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition for increasing the biological activity of stem cells comprising genistein and a stem cell treatment adjuvant comprising the same. More particularly, the present invention relates to a composition for promoting migration or proliferation of stem cells by treating jenithin with stem cells and culturing the same, a method using the same, and a stem cell treatment adjuvant containing the composition.

근경색증과 같은 심혈관계 질환은 최근 국내에서 뇌혈관 질환 다음으로 많은 사망원인이며 허혈성 심질환의 증가로 인해 지속적으로 증가하는 순환기 계통의 주요 질병이다. 또한 심근경색증 이후 진행되는 만성 심부전은 유병률이 높고 생존률도 낮아 평생 약을 복용해야 하는 질환으로 개인의 삶의 질을 떨어뜨릴 뿐만 아니라 사회·경제적으로 심각한 영향을 가져올 수 있다. 최근, 혈관질환 수복 인자로 주목을 끄는 대표적인 세포 치료제인 줄기세포는 심혈관 질환과의 높은 상관도가 있다는 연구결과가 도출되어 손상된 혈관의 수복과정의 중요한 타켓 인자로 많은 연구가 되고 있다.Cardiovascular disease, such as myocardial infarction, is the second leading cause of mortality following cerebrovascular disease in Korea and is a major disease of the circulatory system that continues to increase due to increased ischemic heart disease. In addition, chronic heart failure after myocardial infarction has a high prevalence rate and low survival rate, so it is a disease that should take a lifetime drug, which not only deteriorates the quality of life of individual but can also have serious social and economic impacts. Recently, stem cells, which are a typical cellular therapy for attracting attention as a vascular disease restoration factor, have been found to have a high correlation with cardiovascular diseases, and thus many studies have been conducted as important target factors of damaged vessels.

제니스틴(genistein)은 식물체내 함유된 식물성 화합물인 이소플라본(isoflavone)의 하나로, 대두, 회화나무, 클로버 및 기타 식물종에 존재하는 것으로 알려져 있다. 이러한 이소플라본은 베타-글리코사이드가 연결된 배당체 형태나 당이 떨어져 나간 비당체(aglycone) 형태로 존재한다. 이소플라본 배당체는 소화시 베타-글리코시데이즈에 의해 비당체 형태로 전환된다. 이소플라본 비당체로는 제니스틴(genistein), 다이드제인(Daidzein) 및 글리시테인(glycitein) 등이 있으며, 배당체로는 제니스틴(genistin), 다이드진(daidzin) 및 글리시틴(glycitin) 등이 있다. Genistein is one of the isoflavones, a plant-derived compound found in plants, and is known to exist in soybeans, painting trees, clover and other plant species. These isoflavones are in the form of glycosides linked to beta-glycosides or in the form of aglycons in which sugars are separated. Isoflavone glycosides are converted to the non-sugar body form by digestion with beta-glycosides. Examples of the isoflavone homologues include genistein, daidzein, and glycitein. Examples of glycosides include genistin, daidzin, and glycitin. have.

특히, 콩에는 이소플라본으로, 주로 제니스틴(Genistin)과 6-O-아세틸 제니스틴, 6-O-말로닐 제니스틴 등이 존재하고, 회화나무 열매에는 제니스틴 배당체인 제니스틴 또는 소포리코사이드(sophoricoside)가 주로 존재하며, 이외의 식물 종에도 다양한 제니스틴 및 그 배당체들이 존재한다. 제니스틴은 동물실험과 인체 실험에서 콜레스테롤 저하 효과와 지방 조직의 생성을 억제하는 효과가 있음이 알려졌고, 유방암, 전립선암, 피부암 및 결장암 등의 예방 및 치료에 효과가 있다고 보고 되었으며, 골다공증을 포함하는 폐경기와 관련된 다양한 증상도 감소시키거나 예방할 수 있다고 알려져 있다. In particular, soybean contains isoflavones, mainly genistin, 6-O-acetyl genistein, 6-O-malonyl genistein and the like, and genistein or genistein (sophoricoside) There are also various genistein and its glycosides in other plant species. It has been reported that genistin has an effect of inhibiting cholesterol-lowering effect and the production of adipose tissue in animal experiments and human experiments, and has been reported to be effective in the prevention and treatment of breast cancer, prostate cancer, skin cancer and colon cancer. In menopause ≪ RTI ID = 0.0 > and / or < / RTI >

최근 보고에 의하면 제니스틴은 췌장 β-세포와 유방암 세포의 증식을 증가시키며 (Zhuo et al. Endocrinology, 2010,) 산화성 스트레스에 의한 심근경색(myocardial infarction)을 방어한다고 알려져 있다(Eftihia et al. Cardiovasc Drugs Ther 2006). 그러나 제니스틴이 줄기세포에 있어서, 이동성의 증가나 증식 촉진 등의 기능 향상을 나타내는 지 여부에 대해서는 알려진 바 없으며, 종래 줄기세포 치료에 장애물이 되어왔던 제한적인 줄기세포의 수급, 이식한 줄기세포의 표적장기로의 귀환(homing) 및 허혈 조직 내에서의 낮은 생존율과 혈관으로의 분화능력 저조 등의 문제점과 관련하여 제니스틴을 적용한 예는 없었다.
Recent reports have shown that genistein increases pancreatic β-cell and breast cancer cell proliferation (Zhuo et al. Endocrinology, 2010) and defends myocardial infarction by oxidative stress (Eftihia et al., Cardiovasc Drugs Ther 2006). However, it is not known whether or not genistin exhibits an improvement in functions such as an increase in mobility or promotion of proliferation in stem cells, and it has been known that the supply of limited stem cells, which have been obstacles to conventional stem cell therapy, There have been no cases of applying genistein in connection with problems such as homing in the organs, poor survival in ischemic tissues, poor ability to differentiate into blood vessels, and the like.

본 발명의 목적은 기존 줄기세포 치료의 문제점인 세포의 이동 및 증식 문제를 개선하기 위하여 제니스틴(Genistein)을 포함하는 줄기세포의 이동 또는 증식 촉진용 조성물 및 이를 이용하여 줄기세포의 이동 또는 증식을 촉진하는 방법을 제공하는데 있다.
It is an object of the present invention to provide a composition for promoting migration or proliferation of stem cells, including genistein, and a method for promoting the migration or proliferation of stem cells using the composition for promoting migration or proliferation of stem cells, And to provide a method for performing the method.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 제니스틴(Genistein)을 포함하는 줄기세포의 이동 또는 증식 촉진용 조성물 및 이를 포함하는 줄기세포 치료 보조제를 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for promoting migration or proliferation of stem cells comprising genistein and a stem cell treatment adjuvant comprising the same.

또한 본 발명은 줄기세포에 제니스틴을 처리하는 것을 특징으로 하는 줄기세포의 이동 또는 증식을 촉진하는 방법을 제공한다.
The present invention also provides a method for promoting migration or proliferation of stem cells, which comprises treating the stem cells with genistein.

본 발명에 의하면, 제니스틴을 포함하는 줄기세포의 이동 또는 증식 촉진용 조성물 및 이를 이용한 방법을 통해서 종래 줄기세포 치료의 단점으로 지적되었던 줄기세포의 수급 문제, 표적 장기로의 이동 문제, 조직 내에서의 생존율이 낮은 문제점들을 효과적으로 개선하여 새로운 줄기세포 치료 보조제로써 유용하게 사용될 수 있다.
According to the present invention, there is provided a composition for promoting migration or proliferation of stem cells including genistin, and a method for using the same, which can solve the problem of supply and demand of stem cells, migration to target organs, It can be effectively used as a new stem cell therapy adjuvant by effectively improving problems with low survival rate.

도 1은 제니스틴이 줄기세포의 이동에 미치는 영향을 나타낸 것이다.
도 2는 제니스틴이 줄기세포의 세포주기조절 단백질 발현과 DNA 합성에 미치는 영향을 웨스턴블랏법(A,B)와 형광염색법(C), 유세포 분석기(D)로 분석한 결과를 도시한다.
도 3은 제니스틴을 줄기세포에 처리했을 때 focal adhesion kinase(FAK)의 인산화에 미치는 영향을 형광 염색법을 통해 확인한 결과(A,B) 및 웨스턴 블랏법(C)을 통해 확인한 결과를 도시한다.
도 4는 제니스틴을 처리한 후 줄기세포의 이동에 영향을 미치는 IPP complex 형성과 F-actin 재배열을 웨스턴 블랏과 형광 염색법으로 확인한 결과를 도시한다(A: ILK, α-parvin, β-parvin의 발현, B: IPP complex형성, C, D: F-actin의 발현과 재배열, E: ILK, Parvin, F-actin siRNA 처리시 줄기세포의 이동).
도 5는 제니스틴에 의한 줄기세포의 증식과 사르코마(Src), p44/42MAPK의 연관성을 웨스턴블랏법, 형광염색법, 유세포 분석기를 통해 확인한 결과를 도시한다(A: p44/42MAPK의 인산화 정도, B: p44/42MAPK의 인산화, C: p44/42 MAPK 억제제(U0126) 처리 후 DNA 합성 분석).
도 6은 제니스틴을 줄기세포에 처리한 후, 상기 처리된 줄기세포를 심근경색 부위에 주사하여 줄기세포의 증식을 확인한 결과를 도시한다(A, B: 줄기세포의 증식 정도를 PCNA 형광 염색법으로 측정하고 수치화한 결과, C,D: 줄기세포 증식 정도를 HNA/Ki67 형광 염색법으로 측정하고 수치화한 결과, E: Isolectin B4/HNA형광 염색법으로 측정하였고 수치화한 결과) .
도 7은 제니스틴을 줄기세포에 처리한 후, 상기 처리된 줄기세포를 심근경색 부위에 주사한 후, 줄기세포의 생존율을 caspase-3/HNA 형광 염색법으로 측정하고 수치화한 결과를 나타낸 것이다
도 8은 제니스틴을 줄기세포에 12시간 처리한 후, 상기 처리된 줄기세포를 심근경색 부위에 주사한 경우, 경색 부위의 섬유화 정도를 Masson's trichrome 염색법으로 측정한 결과를 도시한다. Figure 1 shows the effect of genistein on the migration of stem cells.
FIG. 2 shows the results of analysis of the effects of genistin on cell cycle regulatory protein expression and DNA synthesis of stem cells by Western blotting (A, B), fluorescent staining (C) and flow cytometry (D).
FIG. 3 shows the results of confirming the effects of genistin on the phosphorylation of focal adhesion kinase (FAK) when subjected to stem cells by fluorescence staining (A, B) and Western blotting (C).
FIG. 4 shows the results of Western blot and fluorescence staining of IPP complex formation and F-actin rearrangement affecting the migration of stem cells after treatment with genistin (A: ILK,? -Parvin,? -Parvin Expression, B: IPP complex formation, C, D: Expression and rearrangement of F-actin, E: Migration of stem cells during ILK, Parvin and F-actin siRNA treatment).
FIG. 5 shows the results of confirming the relationship between the proliferation of stem cells by genistein and the relationship between sarkomas (Src) and p44 / 42MAPK by Western blotting, fluorescence staining and flow cytometry (A: degree of phosphorylation of p44 / 42MAPK, B : Phosphorylation of p44 / 42MAPK and DNA synthesis analysis after treatment with C: p44 / 42 MAPK inhibitor (U0126).
FIG. 6 shows the results of confirming the proliferation of stem cells by injecting the processed stem cells into the myocardial infarction area after treating the geneticin with the genistinin (A, B: the degree of proliferation of the stem cells was measured by PCNA fluorescence staining As a result, the degree of C and D stem cell proliferation was measured and quantified by HNA / Ki67 fluorescence staining, and the results were quantified by E: Isolectin B4 / HNA fluorescence staining.
FIG. 7 shows the result of measuring the survival rate of stem cells by caspase-3 / HNA fluorescence staining method after injecting the treated stem cells into the myocardial infarction area after treating the geneticin with the genistinin
FIG. 8 shows the results of measurement of the degree of fibrosis at the infarction site by Masson's trichrome staining method when the treated stem cells were injected into the myocardial infarction area after treatment with genistinin for 12 hours.

본 발명은 제니스틴(Genistein)을 포함하는 줄기세포의 이동 또는 증식 촉진용 조성물을 제공한다. The present invention provides a composition for promoting migration or proliferation of stem cells comprising genistein.

본 발명의 “줄기세포”란, 자기복제능력을 가지면서 두 개 이상의 세포로 분화하는 능력을 갖는 세포를 말하며, 만능줄기세포(totipotent stem cell), 전분화능 줄기세포(pluripotent stem cell), 다분화능 줄기세포(multipotent stem cell)로 분류할 수 있다. 본 발명의 줄기세포는 목적에 따라 적절히 제한 없이 선택될 수 있다. The term " stem cell " of the present invention refers to a cell capable of self-replicating and capable of differentiating into two or more cells, and includes totipotent stem cells, pluripotent stem cells, It can be classified as a multipotent stem cell. The stem cells of the present invention can be appropriately selected depending on the purpose.

세포와 관련하여 "증식"은 특징적인 세포 유형, 또는 동일할 수 있거나 동일하지 않을 수 있는 세포의 시원 세포 집단으로부터의 세포 유형들의 개수의 증가를 지칭한다. 증식을 위해 사용되는 시원 세포는 증식으로부터 생성된 세포와 동일하지 않을 수 있다."Proliferation" in relation to a cell refers to a characteristic cell type, or an increase in the number of cell types from a population of primary cells of a cell that may or may not be the same. The progenitor cells used for proliferation may not be identical to the cells generated from proliferation.

본 발명에서 사용되는 줄기 세포는 골수, 지방 조직, 근육 조직, ex vivo 배양된 자기조직 간엽 줄기 세포, 동종 이계 off-the-shelf 간엽 줄기 세포, 제대혈, 배 난황낭, 태반, 제대, 골막, 태아 및 사춘기 피부, 그리고 혈액으로부터 제한없이 얻어지는 줄기세포일 수 있으며, 태아 또는 출생직후 또는 성인으로부터 유래된 줄기세포일 수 있다.The stem cells used in the present invention can be used for the treatment of bone marrow, adipose tissue, muscle tissue, ex vivo cultured autologous mesenchymal stem cells, homologous off-the-shelf mesenchymal stem cells, umbilical cord blood, vitelline, placenta, umbilical cord, periosteum, Adolescents, skin, and blood, and may be embryonic stem cells or stem cells immediately after birth or from an adult.

본 발명에 있어서, 제니스틴은 줄기세포의 이동 또는 증식을 촉진하기 위하여 바람직하게는 10-15 M 이상 10-10 M이하의 농도로 포함될 수 있다. In the present invention, genistin is preferably contained at a concentration of 10 -15 M or more and 10 -10 M or less in order to promote the migration or proliferation of stem cells.

또한 본 발명은 줄기세포에 제니스틴을 처리하는 것을 특징으로 하는 줄기세포의 이동 또는 증식을 촉진하는 방법을 제공한다. 본 발명에 의하면 제니스틴은 바람직한 일 예로써 10-15 M 이상 10-10 M이하의 농도 로 처리될 수 있으며, 줄기세포에 처리하고 10시간 이상 15시간 이하로 공배양할 수 있다. The present invention also provides a method for promoting migration or proliferation of stem cells, which comprises treating the stem cells with genistein. According to the present invention, as a preferred example, genistein can be treated at a concentration of 10 -15 M or more and 10 -10 M or less, and co-cultured in stem cells for 10 hours or more and 15 hours or less.

본 발명에 의하면 제니스틴을 처리하여 함께 배양함으로써 줄기세포에서 세포 주기 조절 단백질인 CDK2/4 및 Cyclin D1/E의 발현이 증가될 수 있으며, focal adhesion kinase(FAK), 사르코마(Src)의 인산화가 촉진됨으로써 줄기세포의 이동 및 증식이 촉진될 수 있다. 특히 줄기세포의 이동에 있어서, 본 발명에 따라 제니스틴을 처리함으로써 ILK(integrin linked kinase), α-parvin, β-parvin의 발현 증가가 이루어짐으로써 세포의 이동이 촉진될 수 있다. According to the present invention, the expression of CDK2 / 4 and Cyclin D1 / E can be increased in the stem cells by treating and culturing together with the genistin, and the expression of the focal adhesion kinase (FAK), phosphorylation of sarkomas (Src) Promoting the migration and proliferation of stem cells. In particular, in the movement of stem cells, the expression of integrin-linked kinase (ILK), α-parvin, and β-parvin is increased by treating with genistin according to the present invention, thereby promoting cell migration.

본 발명의 또 다른 양태로써, 제니스틴을 유효성분으로 함유하는 줄기세포 치료 보조제를 제공할 수 있다. As another embodiment of the present invention, a stem cell treatment adjuvant containing genistein as an active ingredient can be provided.

“줄기세포 치료 보조제”란 당업계에서 일반적으로 사용되는 줄기세포 치료제의 효과를 증진시키기 위하여 보조적으로 사용될 수 있는 제재를 말하며, 본 발명에 의한 보조제를 사용함으로써 줄기세포 치료제의 줄기세포의 이동 및 증식을 촉진하여 치료제의 효과를 증진시킬 수 있다. “세포 치료제”란, 세포와 조직의 기능을 복원하기 위하여 살아 있는 자가(autologous), 동종(allogenic), 이종(xenogenic) 세포를 체외에서 증식, 선별하거나 여타 방법으로 세포의 생물학적 특성을 변화시키는 등 일련의 행위를 통하여 치료, 진단, 예방 목적으로 사용되는 의약품을 말하며, 특히 “줄기세포 치료제” 배아줄기세포치료제와 성체줄기세포치료제로 분류할 수 있다. The term " stem cell therapy adjuvant " refers to a material that can be used as an adjuvant to enhance the effect of a stem cell therapeutic agent commonly used in the art. By using the adjuvant of the present invention, stem cell migration and proliferation Lt; RTI ID = 0.0 > therapeutic agent. ≪ / RTI > A "cell therapeutic agent" refers to an agent capable of multiplying, selecting, or otherwise altering the biological properties of a cell, such as autologous, allogenic, or xenogenic cells in vitro to restore cell and tissue function It refers to drugs used for therapeutic, diagnostic, and preventive purposes through a series of actions. In particular, it can be classified as "stem cell treatment agent" embryonic stem cell treatment agent and adult stem cell treatment agent.

상기 줄기세포 치료 보조제는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 인체에 투여될 수 있다. 비경구 투여, 예를 들어 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 상기 줄기세포 치료 보조제는 또한 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다. 줄기세포 치료에 일반적으로 사용되는 약제학적 담체와 함께 투여될 수 있으며, 이런 담체로 생리학적 식염수를 예로 들 수 있다. The stem cell therapy adjuvant may be administered to the human body through any conventional route as long as it can reach the target tissue. Parenteral administration, such as intraperitoneal administration, intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, but is not limited thereto. The stem cell therapy adjuvant may also be administered by any device capable of migrating the active agent to the target cell. May be administered together with a pharmaceutical carrier commonly used in stem cell therapy, and examples of such carriers include physiological saline.

또한 본 발명의 바람직한 일 예로써, 줄기세포 치료 보조제는 심근경색 치료를 위한 줄기 세포 치료에 사용되는 줄기세포 치료 보조제 일 수 있다.
Also, as a preferred example of the present invention, the stem cell therapy adjuvant may be a stem cell therapy adjuvant used for stem cell treatment for treating myocardial infarction.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the contents of the present invention are not limited by the following examples.

실시예Example 1.  One. 제니스틴Genestine 처리 시 줄기세포의 이동 및 세포 주기의 변화 Stem cell migration and cell cycle change during treatment

제니스틴을 처리하지 않은 줄기세포(control)와 제니스틴을 다양한 농도인 10-10 내지 10 -5M 농도로 줄기세포에 처리한 후 배양하였다. 도 1의 A에서 도시하는 바와 같이 제니스틴은 10 -10M 농도의 제니스틴을 처리한 줄기세포의 이동을 증가시켰으며, 줄기세포에 10 -10M 농도의 제니스틴을 처리하여 배양한지 12시간이 경과하였을 때 줄기세포의 이동이 유의성있게 증가되었음을 확인하였다(도 1의 B 및 C). Geneticin-treated stem cells and genistein were treated at various concentrations of 10 -10 to 10 -5 M to stem cells and cultured. As shown in A of FIG. 1 is genistin obtain specific 10 -10 M was increased movement of the stem cell concentration of a handle of genistin, after stem cell processes the genistin of 10 -10 M concentration of the culture in 12 hours (Fig. 1, B and C).

또한 줄기세포에 제니스틴을 처리하는 경우, 제니스틴이 줄기세포의 세포주기에 영향을 미치는 지 여부에 대하여 조사하여 위하여 처리되는 제니스틴의 농도를 달리하면서, 세포주기 조절 단백질의 발현을 웨스턴 블랏법으로 조사하였다.10 -10M 농도의 제니스틴을 처리한 경우, 세포주기 조절단백질인 CDK2, CDK 4, Cyclin D1, Cyclin E이 발현이 증가되는 것을 확인할 수 있었다(도 2의 A). In addition, when geneticin was treated with stem cells, the expression of cell cycle regulating protein was examined by western blotting while varying the concentration of genistein treated to investigate whether or not genistin affects the cell cycle of stem cells In the case of treatment with 10 -10 M of genistin, the expression of CDK2, CDK4, Cyclin D1, and Cyclin E, which are cell cycle regulating proteins, was increased (FIG.

제니스틴을 처리하는 시간이 줄기세포의 주기에 미치는 영향을 확인하기 위하여 제니스틴 10-10M을 0시간, 6시간, 12시간, 24시간 동안 처리하면서, 세포주기 조절단백질의 발현정도를 웨스턴 블랏법으로 측정하였다. 그 결과 제니스틴을 처리한 줄기세포를 배양하는 경우, 6시간 이후부터 세포주기 조절 단백질, 즉 CDK2, CDK 4, Cyclin D1, Cyclin E의 발현이 증가됨을 확인할 수 있었다(도 2의 B). Genistin 10 -10 M was treated for 0 hours, 6 hours, 12 hours, and 24 hours, and the expression level of cell cycle regulating proteins was determined by western blotting Respectively. As a result, it was confirmed that the expression of cell cycle regulating proteins such as CDK2, CDK4, Cyclin D1, and Cyclin E was increased after 6 hours when the geneticin-treated stem cells were cultured (FIG. 2B).

특히, 제니스틴 10-10M을 12시간 처리한 줄기세포의 Cyclin D1, Cyclin E의 발현 정도를 형광 염색법으로 확인한 결과, 제니스틴을 처리하지 않은 줄기세포에 비해 Cyclin D1, Cyclin E의 발현이 증가되었음을 확인할 수 있었다(도 2의 C). In particular, the expression of Cyclin D1 and Cyclin E in stem cells treated with genistin 10 -10 M for 12 hours was confirmed by fluorescence staining. As a result, it was confirmed that the expression of Cyclin D1 and Cyclin E was increased (Fig. 2C).

또한, 제니스틴 10-10M을 12시간 처리한 줄기세포의 DNA 합성을 유세포 분석기로 확인한 결과, 제니스틴을 처리하지 않은 줄기세포에 비해 제니스틴을 처리한 경우 세포 DNA 합성 주기인 S주기의 세포 분포가 유의성 있게 증가함을 확인하여 제니스틴을 처리하는 경우 DNA 합성이 활발함을 확인할 수 있었다(도 2의 D).
In addition, the DNA synthesis of stem cells treated with genistin 10 -10 M for 12 hours was confirmed by flow cytometry. As a result, in the case of treatment with genistein, the cell distribution of S cycle, And it was confirmed that DNA synthesis was active when treating genistin (FIG. 2 D).

실시예2Example 2 . . focalfocal adhesionadhesion kinasekinase (( FAKFAK )의 인산화) Phosphorylation

제니스틴이 focal adhesion kinase(FAK)에 미치는 영향을 조사하기 위하여 형광염색법을 통하여 인산화의 변화를 측정하였다. 줄기세포에 제니스틴을 처리하지 않은 경우(control)에 비해, 줄기세포에 제니스틴을 10-10M농도로 30분 동안 처리한 경우, 제니스틴이 focal adhesion kinase(FAK)을 인산화 시키는 것을 확인하였다. (도 3의 A). To investigate the effect of genistein on focal adhesion kinase (FAK), changes in phosphorylation were measured by fluorescent staining. It was confirmed that genistein phosphorylated the focal adhesion kinase (FAK) when treated with genistein at a concentration of 10 -10 M for 30 minutes, compared to the case where stem cells were not treated with genistin (control). (Fig. 3A).

나아가 이러한 제니스틴에 의해 유발된 focal adhesion kinase(FAK)의 인산화가 에스트로겐 수용체(ER)와 관련 있는지 확인하였다. 도 3의 B는 제니스틴 10-10M를 30분동안 처리하기 전에 ICI 182,780(에스트로겐 수용체 안타고니스트)를 30분 전 처리하여 focal adhesion kinase(FAK)의 인산화에 미치는 영향을 형광염색법을 통해 확인한 결과를 도시한다. 도 3의 B에 나타난 바와 같이 ICI 182,780(에스트로겐 수용체 안타고니스트)를 처리한 경우 제니스틴에 의해 유발된 focal adhesion kinase(FAK)의 인산화가 억제되었으며, 이는 에스트로겐 수용체가 focal adhesion kinase(FAK) 관련된 신호에 기여함을 시사한다. 실제로 웨스턴 블럿을 통해 확인한 결과 에스트로겐 수용체(ER-α,β)은 줄기세포에서 검출되었다(도 3의 C).
Furthermore, it was confirmed that the phosphorylation of fenocal adhesion kinase (FAK) induced by this genistin was related to the estrogen receptor (ER). FIG. 3B shows the results of fluorescence staining for the effect of ICI 182,780 (estrogen receptor antagonist) pretreatment for 30 minutes on genistin 10 -10 M for 30 minutes before phosphorylation of focal adhesion kinase (FAK) do. As shown in FIG. 3B, treatment with ICI 182,780 (estrogen receptor antagonist) inhibited the fenoxycin kinase (FAK) -induced phosphorylation induced by genistin, suggesting that estrogen receptors contribute to focal adhesion kinase (FAK) . Actually, the estrogen receptor (ER-α, β) was detected in stem cells by Western blot (FIG. 3C).

실시예3Example 3 . . IPPIPP 컴플렉스의Complex 발현 증가 Increased expression

IPP 콤플렉스(integrin linked kinase/parvin/pinch)는 fibrous-actin(F-actin)의 재배열과 세포 이동에 있어 중요한 인자이다. 제니스틴을 줄기세포에 처리시 IPP 콤플렉스와의 연관성에 대하여 웨스턴 블랏법과 형광염색법을 이용하여 측정하였다. The IPP complex (integrin-linked kinase / parvin / pinch) is an important factor in the rearrangement and cell migration of fibrous-actin (F-actin). The relationship between genistein and IPP complex was evaluated by western blotting and fluorescence staining.

제니스틴을 10-10M농도로 0시간, 6시간, 12시간, 24시간 동안 처리하여 ILK(integrin linked kinase), α-parvin, β-parvin의 발현을 웨스턴블랏으로 측정하였다. 그 결과 제니스틴은 ILK(integrin linked kinase), α-parvin, β-parvin의 발현을 증가시켰으며(도4의 A) 형광염색법으로 확인한 결과 IPP 콤플렉스를 형성하는 것을 확인하였다 (도4의 B). The expression of ILK (integrin linked kinase), α-parvin, and β-parvin was measured by western blotting by treating genistein with 10 -10 M concentration for 0 hours, 6 hours, 12 hours and 24 hours. As a result, genistin increased expression of ILK (integrin linked kinase), alpha -parvin, and beta -parvin (FIG. 4A) and confirmed by fluorescent staining to form an IPP complex (FIG.

이후 제니스틴 10-10M을 12시간 처리하여 fibrous-actin(F-actin)의 발현과 재배열에 미치는 영향을 웨스턴 블랏법과 형광 염색법으로 측정하였다. 그 결과 Focal adhesion에 fibrous-actin(F-actin) 연결되어 줄기세포의 이동능력이 증가하는 것을 확인하였다(도4의 C, D). The effect of genistin 10 -10 M on fibrous-actin (F-actin) expression and rearrangement was measured by western blotting and fluorescence staining. As a result, it was confirmed that fibrous-actin (F-actin) was linked to the focal adhesion to increase the migration capacity of stem cells (C, D in FIG. 4).

제니스틴과 ILK(integrin linked kinase), α-parvin, β-parvin 및 세포 이동과의 관계를 확인하기 위하여 ILK(integrin linked kinase), α-parvin, β-parvin siRNA를 처리하고 세포 이동성의 변화를 살폈다. ILK, α-parvin, β-parvin, siRNA를 36시간 동안 트렌스팩션(transfaction)시키고 제니스틴을 12시간 동안 처리한 후 줄기세포의 이동성을 측정하였다. 그 결과 ILK, α-parvin, β-parvin, siRN은 제니스틴에 의해 촉진되는 줄기세포의 이동성을 억제시킨다는 것을 확인할 수 있었다(도4의 E).
To investigate the relationship between genistin and integrin-linked kinase (ILK), α-parvin, β-parvin and cell migration, ILK (integrin linked kinase), α-parvin and β-parvin siRNA were treated and changes in cell mobility were examined. ILK, α-parvin, β-parvin and siRNA were transfected for 36 hours, and the mobility of the stem cells was measured after treatment with genistin for 12 hours. As a result, it was confirmed that ILK,? -Parvin,? -Parvin, and siRN inhibit the mobility of stem cells promoted by genistin (FIG. 4E).

실시예4Example 4 . . P44P44 /42 / 42 MAPKMAPK 에 미치는 영향Effect on

P44/42 MAPK는 줄기세포의 자가 재생산과 증식 조절에 관여하는 중요한 인자이다. 제니스틴에 의한 줄기세포의 증식에 사르코마(Src)와 P44/42 MAPK이 연관이 있는지 여부에 대하여 P44/42 MAPK의 인산화 정도를 웨스턴 블럿법을 통해 측정하였다. P44 / 42 MAPK is an important factor involved in the regulation of autonomous reproduction and proliferation of stem cells. The degree of phosphorylation of P44 / 42 MAPK was determined by western blot method to determine whether Src and P44 / 42 MAPK were associated with the proliferation of stem cells by genistin.

제니스틴 10-10M을 0분, 30분, 60분, 120분 동안 처리하여 P44/42 MAPK의 인산화 정도를 측정하였다. 도 5의 A와 같이 제니스틴은 P44/42 MAPK를 인산화 시키는 것을 확인하였다. Genistin 10 -10 M was treated at 0 min, 30 min, 60 min and 120 min to measure the degree of phosphorylation of P44 / 42 MAPK. As shown in Fig. 5A, it was confirmed that genistin phosphorylates P44 / 42 MAPK.

제니스틴 10-10M을 30분 처리하기 전 PP2(Src 억제제)를 30분 전처리하여 fp44/42MAPK의 인산화 인산화를 형광염색법을 이용하여 확인하였다. 도 5B에 나타난 바와 같이 PP2 (Src 저해제) 10-6M에 의한 사르코마 (Src)저해가 제니스틴에 의해 유발된 p44/42MAPK 인산화를 억제하였으며, 이는 사르코마 (Src)가 줄기세포 내 p44/42MAPK 인산화 유도 인자임을 확인할 수 있었다. 이후 p44/42MAPK가 제니스틴에 의해 유발된 DNA 합성에 관련되었는가를 조사하였다. 제니스틴 10-10M을 12시간 처리하기 전 U0126(p44/42 MAPK 억제제)를 30분 동안 처리하여 DNA 합성을 유세포 분석기로 확인하였다. 그 결과 U0126, 10-5M(p44/42MAPK 억제제)가 DNA 합성을 억제함을 확인하였다(도 5의 C).
Phosphorylation of fp44 / 42MAPK was confirmed by fluorescence staining by pretreating PP2 (Src inhibitor) for 30 min before treatment with genistin 10 -10 M for 30 min. As shown in FIG. 5B, sarkomal (Src) inhibition by PP2 (Src inhibitor) 10 -6 M inhibited genistin-induced p44 / 42 MAPK phosphorylation, suggesting that sarkomas (Src) Phosphorylation inducing factor. We then investigated whether p44 / 42MAPK was involved in the genetic synthesis induced by genistein. Geneticin 10 -10 M was treated with U0126 (p44 / 42 MAPK inhibitor) for 12 hours before 12 hours of treatment, and DNA synthesis was confirmed by flow cytometry. As a result, it was confirmed that U0126, 10 -5 M (p44 / 42 MAPK inhibitor) inhibited DNA synthesis (FIG. 5C).

실시예5Example 5 . 급성 심근경색 동물모델에서의 치료 효과를 검증. Verification of treatment effect in acute myocardial infarction model

이후 제니스틴에 의해 생물작용활성(bioactivity)이 증가된 줄기세포를 이용하여 급성 심근경색 동물모델에서의 치료 효과를 검증하였다. 좌측 관상동맥을 결찰하여 급성 심근경색을 유발한 동물모델을 이용하였다.
After that, the therapeutic effect of the animal model of acute myocardial infarction was verified by using stem cells whose bioactivity was increased by genistin. An animal model that induced acute myocardial infarction by ligating the left coronary artery was used.

5.1 이식 후 줄기세포의 증식 촉진 확인 5.1 Promoting the proliferation of stem cells after transplantation

제니스틴을 줄기세포와 12시간 배양 후 수거하여 심근경색 부위에 주사 후 3일 뒤 심장을 생검 하여 PCNA (proliferating cell nuclear antigen)염색법을 통하여 줄기세포의 증식 정도를 확인한 결과 제니스틴을 처리한 줄기세포 군에서 유의성 있게 증식함을 확인하였다(도 6의 A, B). Genistein was collected after 12 hours of culture with stem cells. After 3 days of injecting myocardial infarction area, cardiac biopsy was performed and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) staining revealed the proliferation of stem cells. As a result, (Fig. 6A, B).

제니스틴을 줄기세포에 12시간 처리하여 수거한 후 심근 경색 부위에 주사하고 3일 후 생검하여 이식한 줄기세포의 증식 정도를 HNA(human nuclear antigen)/Ki67 염색법을 통하여 확인하였다. 이식한 줄기세포의 증식율을 확인 결과 제니스틴을 처리한 줄기세포 군에서 유의성 있게 증식함을 확인하였다(도 6C, D).
Genistin was collected for 12 hours in stem cells, injected into the myocardial infarction area, and after 3 days, the proliferation of transplanted stem cells was confirmed by HNA (human nuclear antigen) / Ki67 staining. As a result of confirming the proliferation rate of the transplanted stem cells, it was confirmed that the proliferation was significantly increased in the genistin-treated stem cell group (FIG. 6C, D).

5.2 줄기세포의 목적 부위로의 귀환 촉진 확인5.2 Confirmation of promoting return of the stem cell to the target site

상기 5.1 섹션에서 주사한 줄기세포가 심근경색부위로의 귀환(homing)하는 능력을 Isolectin B4(endothelial cells maker)/HNA(human nuclear antigen) 염색법을 이용하여 확인하였다. 제니스틴을 줄기세포에 12시간 처리한 후 수거하여 미 정맥을 통하여 주사한 후 5일 후 생검하여 이식한 줄기세포의 경색부위로의 귀환 정도를 Isolectin B4/HNA형광 염색법으로 측정하였고 수치화하였다. 그 결과 제니스틴을 처리한 줄기세포 군에서 혈관내피세포 표시인자인 Isolectin B4에 결합하는 비율이 높은 것을 확인하였다(도 6의 E, F). 이는 제니스틴의 줄기세포 생물작용활성 (bioactivity)증가 효과가 세포 배양접시 내 시험결과와 일치하는 것으로 전임상 실험에서의 이용가능성을 시사한다.
In Section 5.1, the ability of the injected stem cells to homing to the myocardial infarction site was confirmed using Isolectin B4 (endothelial cell maker) / HNA (human nuclear antigen) staining method. Genistin was treated with stem cells for 12 hours, collected, and injected via vein. Five days later, biopsy was performed and the degree of return of the transplanted stem cells to the infarction site was measured and quantified by Isolectin B4 / HNA fluorescence staining. As a result, it was confirmed that the rate of binding to Isolectin B4, a marking factor for vascular endothelial cell, was high in the geneticist-treated stem cell group (FIG. 6E, F). This suggests that the effect of increasing genetic bioactivity of genistin is consistent with the results in cell culture plates, suggesting its availability in preclinical experiments.

5.3 이식 줄기세포의 생존율 확인 5.3 Identification of Survival Rate of Transplanted Stem Cells

이식한 줄기세포의 생존율을 확인 하였다. The survival rate of transplanted stem cells was confirmed.

제니스틴을 줄기세포에 12시간 처리한 후 수거하여 심근경색 부위에 주시한 후 3일 후 생검 하여 이식한 줄기세포의 생존 정도를 아폽토시스 마커인 caspase-3/HNA 형광 염색법으로 측정하였고 수치화 하였다.Genistein was treated with stem cells for 12 hours and then harvested at the site of myocardial infarction. After 3 days, the survival rate of transplanted stem cells was measured by caspase-3 / HNA fluorescent staining.

그 결과 제니스틴을 처리한 줄기세포 군에서 Caspase 3-& HNA-positive cells/HNA-positive cells 의 비율이 감소하였고(도 7의 A, B), HNA-positive cells /DAPI-positive cell 의 비율이 증가 하였다(도 7의 C). 이는 제니스틴을 처리한 줄기세포가 심근경색 부위에서 높은 생존율을 나타남으로써 이식한 줄기세포가 신생미세혈관으로의 분화할 수 있다는 가능성을 시사한다.
As a result, the proportion of Caspase 3 & HNA-positive cells / HNA-positive cells in the genistein-treated stem cell group was decreased (FIG. 7A and B) and the proportion of HNA-positive cells / DAPI- (Fig. 7C). This suggests that the stem cells treated with genistin have a high survival rate at the myocardial infarction site, suggesting that the transplanted stem cells can differentiate into neovasculature.

5.3 이식 줄기세포의 섬유화 측정5.3 Fibrosis measurement of transplanted stem cells

제니스틴을 줄기세포(EPC)와 12시간 배양 후 수거하여 심근경색(MI) 부위에 주사 후 14일 뒤 심장을 생검 하여 Masson's trichrome 염색법을 통하여 심근경색부위의 섬유화 정도를 평가한 결과 제니스틴을 처리한 줄기세포 군에서 섬유화가 억제되는 것을 확인하였다. 이는 제니스틴이 줄기세포 생물작용활성(bioactivity)증가시켜 심근경색 세포치료제 및 이의 보조제로서 사용 가능함을 시사한다(도8).Genistein was collected after 12 hours of culture with stem cells (EPC), and myocardial infarction (MI) site was collected 14 days after injection. The heart was biopsied and masson's trichrome staining was used to assess the degree of fibrosis at the myocardial infarction site. It was confirmed that fibrosis was inhibited in the cell group. This suggests that genistin can be used as a therapeutic agent for myocardial infarction and its adjuvant by increasing stem cell bioactivity (FIG. 8).

Claims (9)

제니스틴(Genistein)을 포함하는 혈관내피전구세포의 이동 또는 증식 촉진용 조성물.
A composition for promoting migration or proliferation of vascular endothelial progenitor cells including genistein.
제1항에 있어서, 상기 제니스틴은 10-15 M 이상 10-10 M이하의 농도로 포함되는 것을 특징으로 하는 혈관내피전구세포의 이동 또는 증식 촉진용 조성물.
The composition for promoting migration or proliferation of vascular endothelial progenitor cells according to claim 1, wherein the genistin is contained at a concentration of 10 -15 M or more and 10 -10 M or less.
인간을 제외한 동물의 혈관내피전구세포에 제니스틴을 처리하는 것을 특징으로 하는 혈관내피전구세포의 이동 또는 증식을 촉진하는 방법.
A method for promoting migration or proliferation of vascular endothelial progenitor cells characterized by treating genistein with vascular endothelial progenitor cells of an animal other than human.
제3항에 있어서, 상기 제니스틴은 10-15 M 이상 10-10 M이하 이하의 농도로 처리되는 것을 특징으로 하는 혈관내피전구세포의 이동 또는 증식을 촉진하는 방법.
4. The method according to claim 3, wherein the genistin is treated at a concentration of 10 -15 M or more and 10 -10 M or less.
제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 혈관내피전구세포의 증식은 세포주기 조절 단백질인 CDK2, CDK 4, Cyclin D1 및 Cyclin E의 발현 증가에 의하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 혈관내피전구세포의 이동 또는 증식을 촉진하는 방법.
The method according to claim 3 or 4, wherein the proliferation of the vascular endothelial progenitor cells is caused by an increase in expression of CDK2, CDK4, cyclin D1 and cyclin E, which are cell cycle regulating proteins. A method of promoting proliferation.
제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 제니스틴은 focal adhesion kinase(FAK) 및 사르코마(Src)의 인산화를 증진시키는 물질임을 특징으로 하는 혈관내피전구세포의 이동 또는 증식을 촉진하는 방법.
5. The method according to claim 3 or 4, wherein the genistin is a substance promoting phosphorylation of focal adhesion kinase (FAK) and sarkomas (Src).
제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 혈관내피전구세포의 이동은 ILK(integrin linked kinase), α-parvin 및 β-parvin의 발현 증가에 의하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 혈관내피전구세포의 이동 또는 증식을 촉진하는 방법.
The method according to claim 3 or 4, wherein the migration of the vascular endothelial progenitor cells is caused by an increase in the expression of integrin linked kinase (ILK),? -Parvin and? -Parvin. Lt; / RTI >
제1항 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 심근경색 치료에 대한 줄기세포 치료 보조제.



A stem cell treatment adjuvant for treating myocardial infarction, which comprises the composition of claim 1.



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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Endocrinology. 2010 July; 151(7): 3026-3037. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107267462A (en) * 2017-08-07 2017-10-20 广州润虹医药科技股份有限公司 The serum free medium that a kind of induced multi-potent stem cell is quickly produced
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