KR101405391B1

KR101405391B1 - Method for Plant Formation of Blueberry cv．Weymouth，Duke，Blueray，Nelson，Northland or Spartan through apical meristem culture

Info

Publication number: KR101405391B1
Application number: KR1020120040405A
Authority: KR
Inventors: 허윤선; 이희두; 김태중
Original assignee: 충청북도 (관리부서:충청북도 농업기술원)
Priority date: 2012-04-18
Filing date: 2012-04-18
Publication date: 2014-06-11
Also published as: KR20130117296A

Abstract

본 발명은 블루베리 6품종의 생장점 배양 방법을 이용한 기내 유식물체 형성하는 배지조성 및 배양 조건에 관한 것으로 블루베리의 기내 배양시 식물 성장 호르몬 지아틴(Zeatin), 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 또는 IAA(Indole Acetic Acid)를 첨가한 배지에서 배양하여 캘러스 형성 없이 신초를 형성하여 변이가 없는 블루베리 식물체를 단기간에 배양할 수 있는 생장점 배양 방법을 이용한 블루베리 북부하이부시 계통 6품종인 웨이마우스, 듀크, 블루레이, 넬슨, 노스랜드 또는 스파르탄의 식물체 형성 방법에 관한 것으로, 캘러스 형성 없이 신초를 형성함으로써, 10 ~ 11 개월 걸리는 식물체 형성 과정을 5 ~ 7 개월로 단축 할 수 있으며, 변이율이 많은 캘러스를 형성하지 않아 건전한 블루베리 국산 조직 배양 묘목의 확대 보급을 위한 생산 기술로 유용하다. The present invention relates to a medium composition and a culturing condition for forming an in-cabbage plant using a growth point culture method of six blueberry varieties. The plant growth hormone zeatin, zeatin riboside, IAA (Indole Acetic Acid) to form shoots without callus formation and to cultivate blueberry plants without mutation in a short time. 6 varieties of blueberry northern highbush system, Duke, Bluray, Nelson, Northland or Spartan. By forming shoots without callus formation, it is possible to shorten the plant formation process from 10 to 11 months to 5 to 7 months, It is useful as a production technique for spreading healthy blueberry domestic tissue culture seedlings without forming callus.

Description

FIELD OF THE INVENTION [0001] The present invention relates to a method of plant formation using a method for growing a blueberry variety, such as a mouse, a Duke, a Bluray, a Nelson, a Northland or a Spartan culture}

본 발명은 블루베리 품종인 웨어마우스, 듀크, 블루레이, 넬슨, 노스랜드 또는 스파르탄의 식물체 형성 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a method of planting a blueberry variety, such as a mouse, Duke, Bluray, Nelson, Northland or Spartan.

블루베리(Vaccinium spp.)는 진달래과(family Ericaceae) 산앵도나무속(genus Vaccinium) 시아노코커스절(sections Cyanoccous)에 속하는 관목성 작물로 타임지 선정 세계 10대 슈퍼푸드 중 하나로써 안토시아닌, 래스베리톨 등의 유효성분에 의해 그 효용 가치를 인정받아 21세기형 과수로도 불리고 있다. 뛰어난 생체조절 기능으로는 시력 회복 및 증진, 망막의 변성과 백내장 방지, 발암 억제, 항산화 작용 등을 들 수 있다.
Blueberries ( Vaccinium spp. ) Is one of the world's top 10 superfoods with a shrubbed crop belonging to the genus Vaccinium ( Cyanoccous ) sections Cyanoccous of the family Ericaceae , anthocyanins, raspberries, etc. It is also known as the 21st Century Fruit Tree because its efficacy has been recognized by its active ingredients. Excellent biocontrol functions include vision recovery and enhancement, retinal degeneration and cataract prevention, carcinogenesis inhibition, and antioxidant effects.

산앵도나무속은 위와 같이 4개의 절로 나뉘며 그 중 하나의 아속(subgenus)인 실제 블루베리(True blueberries = Cyanococcus)는 미국 동부에 많은 하이부시블루베리(highbush blueberry, V. corymbosum, 미국 북동부와 캐나다에 많은 로우부시블루베리(lowbush blueberry, V. angustifolium, Georgia 주 등 온난한 지역에서 자라는 래빗아이블루베리(rabbiteye blueberry, V. ashie.)로 나뉜다. 북아메리카 및 핀란드 등 유럽 각 지역이 원산지로 알려진 블루베리는 과실의 맛과 효능이 널리 알려지기 시작해서 1950 년대 이후에 품종 개발이 진행되어 현재 약 200 여 종이 알려져 있다. 한국에서 상업적 재배가 가능한 블루베리의 종은 하이부시종으로 하이부시계 블루베리는 주로 다음과 같이 나뉜다. 한냉한 지역에서 잘 자라는 북부하이부시계 블루베리, 추위가 약한 지역에서 잘 자라는 남부하이부시계 블루베리, 반수고 하이부시계 블루베리, 레빗아이계 블루베리로 나뉜다.
True blueberries (Cyanococcus), a subgenus of these, are found in the eastern United States with many highbush blueberries ( V. corymbosum , in the northeastern United States and Canada Many are divided into lowbush blueberries (rabbiteye blueberry, V. ashie .) That grow in warm areas such as lowbush blueberry, V. angustifolium and Georgia state. Blueberries, known locally as North America and Finland, Has been widely known since the 1950s, and about 200 species have been known since the 1950s. The species of blueberry that can be grown commercially in Korea are high bush species, It is mainly divided into the following areas: Northern Haibu, which grows well in cold regions, Bluebird, Southern Haibu, which grows well in cold regions Clock blueberry, half-high high-watch blueberry, and red eye blueberry.

고기능성 신소득 작목으로 국내에는 2000년 이후 본격적으로 도입되어 재배가 시작되었으며, 2010년 전체 재배면적은 534 ha(충북 56 ha)으로 3년 만에 5배 정도 급증하여 묘목 품귀현상이 있을 정도로 관심이 집중되고 있다. 국내 수입량 또한 매년 증가하고 있으며, 생과뿐 만 아니라 와인, 잼 등의 가공식품에 대한 수요도 급증하고 있다.
As a high-functioning new income, it has been introduced in Korea since 2000 and cultivation started. In 2010, the total cultivation area was 534 ha (56 ha in Chungbuk) . Domestic imports are also increasing every year, and the demand for processed foods such as wine and jam as well as raw materials is surging.

블루베리 묘목은 2년생이 주당 1 ~ 2만원 정도로 초기 재배 비용 중 묘목비가 차지하는 비율이 높아 농가 경영에 큰 부담을 차지하고 있다. 또한 수요에 비해 묘목 공급이 부족하고, 국산 삽목묘의 품질이 떨어져 중국, 미국, 일본으로부터 묘목과 삽수가 수입되는 등 재배 농가가 큰 어려움을 겪고 있는 실정이다.
The blueberry seedlings are about 2 ~ 20,000 won per week, which is a high burden on the farm management. In addition, supply of saplings is inadequate compared to demand, and the quality of domestic saplings is lowered, which makes it difficult for cultivated farmers to import saplings and cuttings from China, the US and Japan.

특히 중국산 블루베리 묘목에서 BlSV(Blueberry scorch virus)가 검역과정에서 검출되면서 2008년 이후 식물검역 관리병해충에 추가 지정되어 수입산 묘목의 소독폐기반송 조치 사례가 증가하고 있다.
In particular, since 2008, when BlSV (Blueberry scorch virus) has been detected in Chinese blueberry seedlings, it has been designated as a plant insect pest control pest since 2008, and cases of disinfection and disposal of imported seedlings are increasing.

따라서 virus-free한 무병주로써 삽목묘보다 뿌리 생육 등이 강건하고 초기 생장속도가 훨씬 빠르며 조기 수확이 가능할 뿐만 아니라 과실품질이나 내병성 등이 우수하다는 평가를 받는 블루베리 조직배양묘의 국내 생산 기술 확보가 매우 중요하다.
Therefore, as a virus-free disease-free seedlings, it is important to secure the domestic production technology of blueberry tissue culture seedlings, which have strong roots growth, early growth rate, early harvest, fruit quality and tolerance It is important.

블루베리 조직배양묘 기내 생산을 위한 국내 연구는 본 개발자가 2010년 발명하여 특허출원을 완료한 정단배양 방법을 이용한 블루베리의 식물체 형성방법(출원번호 10-2010-0033255)이 최초인데, 생장점 배양시 필요한 배지 조성 등 품종별 배양조건을 포함하여 토로, 레가시, 브리지타, 오레곤블루 4품종에 대한 조직배양묘를 생산할 수 있는 기술이다. 또한 본 개발자가 2011년 발명하여 특허출원을 완료한 생장점배양 방법을 이용한 블루베리 품종인 블루골드, 엘리자베스, 다로우, 오따드 또는 티프블루의 식물체 형성방법(출원번호 10-2011-0020374)은 생장점배양 방법으로 블루골드 등 5품종의 조직 배양묘를 생산할 수 있는 기술이다.
Blueberry Tissue Cultivation The domestic research for the production of blueberry seedlings is the first of the blueberry plant formation method (Application No. 10-2010-0033255), which was developed by the developer in 2010 and completed the patent application, It is a technology that can produce tissue culture seeds for four varieties of Toro, Legacy, Bridgesta, and Oregon blue including cultivation conditions such as required medium composition. In addition, the method of plant formation (application No. 10-2011-0020374) of the blueberry variety Bluegold, Elizabeth, Darrow, Otad or Tif Blue using the growth point cultivation method that the inventor invented and patented in 2011, It is a technology that can produce five kinds of tissue culture seedlings such as blue gold by cultivation method.

블루베리의 조직배양 시, 배지에 포함되는 생장조정제 및 첨가물의 종류와 농도에 따라 블루베리의 신초 형성 및 생육이 현저히 다르다는 연구들이 보고되었다(Alexandru F., D. Clapa, and C. Badescu. 2008. Horticulture. 65(1):104~109, Jiang Y.Q., Yu H., Zhang D.Q, He S.A. and Wang C.Y. ISHS Acta Horticulturae 810: IX International Vaccinium Symposium., Sedlak J. and Paprstein F. ISHS Acta Horticulturae 810: IX International Vaccinium Symposium., Clapa D., Fira A., and Rusu T. 2008. Food, Agriculture and Environment. 6(1):145~147). 더욱이 같은 배양 조건이라도 블루베리 품종에 따라 신초 분화 및 식물체 생육이 서로 다르다는 연구 결과가 보고되었다(Gajdosova A., Ostrolucka M. G., Libiakova G., Ondruskova E., and Simala D. 2006. Journal of Fruit and Ornamental Plant Research. 14(Suppl. 1):103~119, Ostrolucka M. G., Libiakova G., Ondruskova E. and Gajdosova A. 2004. Acta Universitatis Latviensis, Biology. 676:207~212). 따라서 이러한 결과들은 블루베리의 신초 형성율 및 분화율이 생장조정제를 포함한 첨가물의 종류 및 농도에 따른 배지의 조성과 식물체 재분화 과정에 있는 각각의 블루베리 품종간 상호 작용 또는 반응(reaction of specific cultivar to the cytokinin type)에 의해 좌우된다는 것을 보여준다. 따라서 조직배양 방법을 이용하는 경우, 블루베리의 식물체 형성율을 높이고 아울러 성공적인 조직배양묘의 대량생산을 위해서는 블루베리 품종별로, 생장조정제를 포함한 배지 첨가물의 종류 및 농도 등 배지의 조성 최적화가 반드시 필요하다.
It has been reported that blueberries have a significantly different shoot formation and growth depending on the type and concentration of the growth regulators and additives contained in the culture medium of blueberries (Alexandru F., D. Clapa, and C. Badescu. 2008 ISH Acta Horticulturae 810: IX International Vaccinium Symposium., Sedlak J. and Paprstein F. ISHS Acta Horticulturae 810: IX International Vaccinium Symposium., Pp. 104-109, Jiang YQ, Yu H., Zhang DQ, He SA and Wang CY. IX International Vaccinium Symposium., Clapa D., Fira A., and Rusu T. 2008. Food, Agriculture and Environment 6 (1): 145-147). In addition, even in the same culture conditions, research has been reported that shoot differentiation and plant growth are different depending on the blueberry variety (Gajdosova A., Ostrolucka MG, Libiakova G., Ondruskova E., and Simala D. 2006. Journal of Fruit and Ornamental Plant Research 14 (Suppl 1): 103-119, Ostrolucka MG, Libiakova G., Ondruskova E. and Gajdosova A. 2004. Acta Universitatis Latviensis, Biology 676: 207-212). Therefore, these results suggest that the shoot formation and differentiation rate of blueberry are affected by the type and concentration of additives including growth regulators and the composition of medium and the reaction of specific cultivar to each blueberry variety in plant regeneration the cytokinin type). Therefore, when using the tissue culture method, it is necessary to optimize the composition of the medium such as the type and concentration of the medium supplement including the growth regulator for each blueberry variety in order to increase the planting rate of blueberry and mass production of successful tissue culture seedlings.

이에 본 발명자는 국내 적응성이 뛰어나고 비교적 많은 재배면적을 차지하는 북부하이부시 계통 6품종인 웨어마우스, 듀크, 블루레이, 넬슨, 노스랜드 또는 스파르탄을 생장점 배양하여 캘러스 형성을 생략하고 신초를 바로 유기하여 5~7개월 내에 유식물체를 형성하는 배지조성 및 배양조건을 개발함으로써 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the present inventor has succeeded in cultivating 6 mouse cultivars of the Northern High Bush system, which are excellent in adaptability in the country and occupying a relatively large area of cultivation, such as Wear Mouse, Duke, Bluray, Nelson, Northland or Spartan, The present inventors completed the present invention by developing a medium composition and a culture condition for forming a seedling plant within 7 months.

본 발명의 목적은 생장점 배양을 통하여 캘러스 형성을 생략하고 바로 신초 형성을 유기하여 변이율을 최소화하며 단기간에 블루베리 조직배양묘를 제공할 수 있는 블루베리 북부하이부시 계통 6품종인 웨어마우스, 듀크, 블루레이, 넬슨, 노스랜드 또는 스파르탄의 식물체 형성 방법을 제공하는 것이다.
It is an object of the present invention to provide a blueberry northern high-bush variety, a weedy mouse, a Duke-type blueberry, and the like, capable of providing a blueberry tissue culture seedlings in a short period of time by omitting callus formation through growth- , Bluray, Nelson, Northland or Spartan.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 다음 단계를 포함하는 생장점 배양을 이용한 블루베리 웨어마우스 품종의 식물체 형성 방법을 제공한다:In order to accomplish the above object, the present invention provides a method of planting a blueberry worm mouse variety using a growth point culture comprising the following steps:

(a) 블루베리 웨이마우스(Weymouth) 품종의 생장점을, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, IAA(Indole Acetic Acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 98 ~ 102 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 캘러스를 배양하여 형성 과정을 거치지 않고 신초를 형성시키는 단계; 및(a) The growth of the Weymouth cultivars was investigated by adding 1 to 3 mg / L Zeatin riboside, 0.5-1.5 mg / L IAA (Indole Acetic Acid), and ferric sodium salt (FeNa-EDTA ), 35 to 37 mg / L, Myo-Inositol 98 to 102 mg / L, Thiamine HCl 1 to 3 mg / L, Nicotinic acid 0.5 to 1.5 mg / L, pyridoxine HCl Culturing the callus in a medium containing 0.5 to 1.5 mg / L of Pyridoxine HCl, 20 to 40 g / L of sucrose and 5 to 7 g / L of Agar to form shoots ; And

(b) 상기 신초를, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, IAA(Indole Acetic Acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 54 ~ 56 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 140 ~ 160 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 다신초를 유도하는 단계.
(b) the shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, 0.5 to 1.5 mg / L of IAA (Indole Acetic Acid), 54 to 56 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA) L-carnitine is used as an active ingredient for the treatment of myo-inositol (140-160 mg / L), thiamine HCl 1-3-3 mg / L, nicotinic acid 0.5-1.5 mg / L, pyridoxine HCl 0.5-1.5 mg / L, sucrose 20 to 40 g / L and agar 5 to 7 g / L to induce hyperosinosis.

또한, 본 발명은 다음 단계를 포함하는 생장점 배양을 이용한 블루베리 듀크 품종의 식물체 형성 방법을 제공한다:The present invention also provides a method of planting a blueberry duck variety using a growth point culture comprising the steps of:

(a) 블루베리 듀크(Duke) 품종의 생장점을, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 98 ~ 102 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 캘러스 형성 과정을 거치지 않고 신초를 형성시키는 단계; 및(a) The growth point of the blueberry Duke varieties was determined by adding 1 to 3 mg / L of Zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA), Myo-Inositol L of pyrodine hydrochloride, 0.5 to 1.5 mg / L of pyridoxine HCl, 1 to 3 mg / L of thiamine HCl, 1 to 3 mg / L of nicotinic acid, 98 to 102 mg / 20 to 40 g / L and Agar 5 to 7 g / L to form shoots without undergoing callus formation; And

(b) 상기 신초를, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 54 ~ 56 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 140 ~ 160 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 다신초를 유도하는 단계.
(b) The shoots were treated with 1 to 3 mg / L of Zeatin riboside, 54 to 56 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA), 140 to 160 mg / L of Myo-Inositol L of thiamine HCl, 0.5 to 1.5 mg / L of nicotinic acid, 0.5 to 1.5 mg / L of pyridoxine HCl, 20 to 40 g / L of sucrose, And culturing in a medium containing 5 to 7 g / L of agar to induce hyperosinosis.

또한, 본 발명은 다음 단계를 포함하는 생장점 배양을 이용한 블루베리 넬슨 품종의 식물체 형성 방법을 제공한다:The present invention also provides a method of planting a blueberry Nelson variety using a growth point culture comprising the steps of:

(a) 블루베리 넬슨(Nelson) 품종의 생장점을, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, IAA(Indole Acetic Acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 98 ~ 102 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl), 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 캘러스 형성 과정을 거치지 않고 신초를 형성시키는 단계; 및(a) Growth point of blueberry Nelson varieties was determined by adding 1 to 3 mg / L Zeatin riboside, 0.5-1.5 mg / L IAA (Indole Acetic Acid), ferric sodium salt (FeNa-EDTA) 35 to 37 mg / L, Myo-Inositol 98 to 102 mg / L, Thiamine HCl, Pyridoxine HCl 0.5 to 1.5 mg / L, Sucrose 20 to 40 g / L and agar 5 to 7 g / L to form shoots without a callus formation process; And

(b) 상기 신초를, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, IAA(Indole Acetic Acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 140 ~ 160 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 다신초를 유도하는 단계.
(b) The shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, 0.5 to 1.5 mg / L of IAA (Indole Acetic Acid), 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA) L-carnitine is used as an active ingredient for the treatment of myo-inositol (140-160 mg / L), thiamine HCl 1-3-3 mg / L, nicotinic acid 0.5-1.5 mg / L, pyridoxine HCl 0.5-1.5 mg / L, sucrose 20 to 40 g / L and agar 5 to 7 g / L to induce hyperosinosis.

또한, 본 발명은 다음 단계를 포함하는 생장점 배양을 이용한 블루베리 블루레이 품종의 식물체 형성 방법을 제공한다:The present invention also provides a method of planting a Blueberry Bluray variety using a growth point culture comprising the steps of:

(a) 블루베리 블루레이(blueray) 품종의 생장점을, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 98 ~ 102 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 캘러스 형성 과정을 거치지 않고 신초를 형성시키는 단계; 및(a) The growth point of the blueberry blueray cultivar was determined by adding 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA), Myo- Inositol 98 to 102 mg / L, Thiamine HCl 1-3 to 2 mg / L, Nicotinic acid 0.5 to 1.5 mg / L, Pyridoxine HCl 0.5 to 1.5 mg / L, Sucrose ) 20 to 40 g / L and agar 5 to 7 g / L to form shoots without a callus formation process; And

(b) 상기 신초를, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 140 ~ 160 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 다신초를 유도하는 단계.
(b) The shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA), 140 to 160 mg / L of Myo-Inositol L of thiamine HCl, 0.5 to 1.5 mg / L of nicotinic acid, 0.5 to 1.5 mg / L of pyridoxine HCl, 20 to 40 g / L of sucrose, And culturing in a medium containing 5 to 7 g / L of agar to induce hyperosinosis.

또한, 본 발명은 다음 단계를 포함하는 생장점 배양을 이용한 블루베리 노스랜드 품종의 식물체 형성 방법을 제공한다:The present invention also provides a method of planting a blueberry Northland variety using a growth point culture comprising the steps of:

(a) 블루베리 노스랜드(Northland) 품종의 생장점을, 지아틴(Zeatin) 1 ~ 3 ㎎/L 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 98 ~ 102 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 캘러스 형성 과정을 거치지 않고 신초를 형성하는 단계; 및(a) Growth point of blueberry Northland varieties was determined by adding 1 to 3 mg / L of Zeatin, 1-3 mg / L of Zeatin riboside, ferric sodium salt (FeNa-EDTA) (Pyridoxine HCl) was added to the culture medium, followed by incubation at 37 ° C. for 30 minutes, followed by incubation at 37 ° C. for 30 min. In a medium containing 0.5 to 1.5 mg / L of sucrose, 20 to 40 g / L of sucrose and 5 to 7 g / L of agar to form shoots without undergoing callus formation; And

(b) 상기 신초를, 지아틴(Zeatin) 1 ~ 3 ㎎/L 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 140 ~ 160 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 다신초를 유도하는 단계.
(b) the shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin or 1-3 mg / L of Zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA) Inositol (140-160 mg / L), Thiamine HCl (1-3 mg / L), Nicotinic acid (0.5-1.5 mg / L), Pyridoxine HCl (0.5-0.5 mg / L) , 20 to 40 g / L of sucrose and 5 to 7 g / L of agar to induce hyperosinosis.

아울러, 본 발명은 다음 단계를 포함하는 생장점 배양을 이용한 블루베리 스파르탄 품종의 식물체 형성 방법을 제공한다:In addition, the present invention provides a method of planting a blueberry spartan variety using a growth point culture comprising the steps of:

(a) 블루베리 스파르탄(Spartan) 품종의 생장점을, 지아틴(Zeatin) 1 ~ 3 ㎎/L 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 98 ~ 102 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 캘러스 형성 과정을 거치지 않고 신초를 형성하는 단계; 및(a) Growth point of blueberry Spartan varieties was determined by adding 1 to 3 mg / L of zeatin or 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, ferric sodium salt (FeNa-EDTA) 35 L of Pyridoxine HCl (1 mg / L), 1 mg / L of Myo-Inositol, 1 to 3 mg / L of Thiamine HCl, 0.5 to 1.5 mg / L of Nicotinic acid, Culturing in a medium containing 0.5 to 1.5 mg / L of sucrose, 20 to 40 g / L of sucrose and 5 to 7 g / L of agar to form shoots without a callus formation process; And

(b) 상기 신초를, 지아틴(Zeatin) 1 ~ 3 ㎎/L 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 140 ~ 160 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신(Pyridoxine HCl) HCl 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 다신초를 유도하는 단계.
(b) the shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin or 1-3 mg / L of Zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA) Inositol (140-160 mg / L), Thiamine HCl (1-3 mg / L), Nicotinic acid (0.5-1.5 mg / L), Pyridoxine HCl (0.5-0.5 mg / L) , 20 to 40 g / L of sucrose and 5 to 7 g / L of agar to induce hyperosinosis.

본 발명에 따른 블루베리 북부하이부시 계통 6품종 웨어마우스, 듀크, 블루레이, 넬슨, 노스랜드 또는 스파르탄의 식물체 형성 방법은 신초의 정단부 액아로부터 생장점으로부터 배양하기 때문에 캘러스의 형성 없이 신초를 형성함으로써, 10 ~ 11 개월 걸리는 식물체 형성과정을 5 ~7개월로 단축할 수 있다. 변이율이 많은 캘러스를 형성하지 않아 우수한 품질의 블루베리 식물체를 다량으로 생산하기에 유용하다.
The method for forming a plant of a blueberry northern high-bush variety of six varieties according to the present invention, Duke, Bluray, Nelson, Northland or Spartan forms a shoot without the formation of callus because it is cultivated from the apical end of shoot, The plant formation process, which takes 10 to 11 months, can be shortened to 5 to 7 months. It does not form a callus having a high rate of transformation and is useful for producing a large quantity of high quality blueberry plants.

도 1은 블루베리 6품종인 웨어마우스, 듀크, 블루레이, 넬슨, 노스랜드 또는 스파르탄을 본 발명에 따른 생장점 배양 방법을 이용한 식물체 형성 과정을 나타낸 사진이다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a photograph showing a plant formation process using a blueberry 6 variety, a Wear Mouse, a Duke, a Bluray, a Nelson, a Northland or a Spartan using the growth point culture method according to the present invention.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 및 이하에 기술하는 실험 방법은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.Unless defined otherwise, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which this invention belongs. In general, the nomenclature used herein and the experimental methods described below are well known and commonly used in the art.

본 발명은 블루베리 북부하이부시 계통 6품종 중 웨어마우스, 듀크, 블루레이, 넬슨, 노스랜드 또는 스파르탄으로부터 그 해에 새로 자란 잎이 붙어있는 당년생 가지의 정단부 액아(곁눈)에 있는 생장점(식물의 줄기와 뿌리의 끝에서 세포의 증식, 기관 형성과 같이 두드러진 형성 활동을 하는 부분)을 채취하여 고체 배지에 치상한 후 배양하는 초기 생장점 배양 단계, 신초(microshoot) 발생을 활발히 유도하여 식물체 형성 및 생장속도를 빠르게 하는 증식 배양 단계, 뿌리 형성을 유도하는 발근 배양 단계, 그리고 기내(배양실)에서 기외(온실 또는 포장)로 식물체를 순화하는 단계로 구성되었다.
The present invention relates to a method for controlling the growth of a plant in a branch of a perennial plant which is newly grown in the year from a blueberry northern high-bush line variety, such as a Wear Mouse, Duke, Bluray, Nelson, Northland or Spartan And the growth of the cells at the ends of the roots and the formation of the organ at the ends of the roots), and then cultured in a solid medium and cultured. A growth culture step for accelerating the growth rate, a rooting culture step for inducing root formation, and a step for purifying the plant in the outdoors (greenhouse or package) in the cabin (culture room).

본 발명에 있어서, 생장점 배양은 몇 개의 엽원기를 가진 정아(혹은 액아)의 절편을 배양하는 방법으로써, 식물체의 길이생장을 위해 세포분열이 왕성히 일어나는 정아(혹은 액아)를 배양하는 방법이었다. 본 발명에서는 블루베리 가지의 정단부위의 액아(당년에 잎으로 분화하는 곁눈)로부터 엽원기가 1 ~ 2 매가 붙어있는 생장점을 채취한 후 배양하여 블루베리의 식물체를 형성하였다.
In the present invention, the growth point culturing is a method of cultivating a section of an oropharynx (or an athlete) having several lobes, and cultivating an oropharynx (or an embryo) in which cell division is vigorous for the length growth of the plant. In the present invention, a blueberry plant was formed by collecting a growth point where one or two leaves were attached to the root of the blueberry branch from the stem of the root of the blueberry branch.

본 발명은 다음 단계를 포함하는 생장점 배양을 이용한 블루베리 웨어마우스 품종의 식물체 형성 방법을 제공한다:The present invention provides a method of planting a blueberry worm mouse variety using a growth point culture comprising the steps of:

(b) 상기 신초를, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, IAA(Indole Acetic Acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 54 ~ 56 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 140 ~ 160 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 다신초를 유도하는 단계.(b) the shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, 0.5 to 1.5 mg / L of IAA (Indole Acetic Acid), 54 to 56 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA) L-carnitine is used as an active ingredient for the treatment of myo-inositol (140-160 mg / L), thiamine HCl 1-3-3 mg / L, nicotinic acid 0.5-1.5 mg / L, pyridoxine HCl 0.5-1.5 mg / L, sucrose 20 to 40 g / L and agar 5 to 7 g / L to induce hyperosinosis.

상기 방법에 있어서, (c) 상기 다신초를, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 0.1 ~ 0.3 ㎎/L, IAA(Indole Acetic Acid) 0.05 ~ 0.15 ㎎ 및 인돌-3-부티르산(Indole-3-butyric acid, IBA) 1 ~ 2 ㎎/L을 포함하는 배지에서 배양하여 뿌리를 유도하는 단계를 추가로 포함 할 수 있다. (C) the hyperhidrosis is treated with 0.1 to 0.3 mg / L Zeatin riboside, 0.05-0.15 mg IAA (Indole Acetic Acid), and Indole-3-butyric acid acid, IBA) 1 to 2 mg / L to induce roots.

상기 방법에 있어서, 상기 배지는 WPM 배지(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium)한 배지를 기본 배지로 사용하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
In the above method, the medium is preferably a WPM medium (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium) as a basic medium, but is not limited thereto.

본 발명은 다음 단계를 포함하는 생장점 배양을 이용한 블루베리 듀크 품종의 식물체 형성 방법을 제공한다: The present invention provides a method of planting a blueberry Duke variety using a growth point culture comprising the steps of:

(b) 상기 신초를, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 54 ~ 56 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 140 ~ 160 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 다신초를 유도하는 단계.(b) The shoots were treated with 1 to 3 mg / L of Zeatin riboside, 54 to 56 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA), 140 to 160 mg / L of Myo-Inositol L of thiamine HCl, 0.5 to 1.5 mg / L of nicotinic acid, 0.5 to 1.5 mg / L of pyridoxine HCl, 20 to 40 g / L of sucrose, And culturing in a medium containing 5 to 7 g / L of agar to induce hyperosinosis.

상기 방법에 있어서 (c) 상기 다신초를, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 0.1 ~ 0.3 ㎎/L 또는 인돌-3-부티르산(Indole-3-butyric acid, IBA) 1 ~ 2 ㎎/L을 포함하는 배지에서 배양하여 뿌리를 유도하는 단계를 추가로 포함 할 수 있다. (C) the hyperhidrosis comprises 0.1 to 0.3 mg / L of zeatin riboside or 1 to 2 mg / L of indole-3-butyric acid (IBA) Lt; RTI ID = 0.0 > roots < / RTI >

본 발명은 다음 단계를 포함하는 생장점 배양을 이용한 블루베리 넬슨 품종의 식물체 형성 방법을 제공한다:The present invention provides a method of planting a blueberry Nelson variety using a growth point culture comprising the steps of:

(b) 상기 신초를, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, IAA(Indole Acetic Acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 140 ~ 160 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 다신초를 유도하는 단계.(b) The shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, 0.5 to 1.5 mg / L of IAA (Indole Acetic Acid), 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA) L-carnitine is used as an active ingredient for the treatment of myo-inositol (140-160 mg / L), thiamine HCl 1-3-3 mg / L, nicotinic acid 0.5-1.5 mg / L, pyridoxine HCl 0.5-1.5 mg / L, sucrose 20 to 40 g / L and agar 5 to 7 g / L to induce hyperosinosis.

상기 방법에 있어서, (c) 상기 다신초를, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 0.1 ~ 0.3 ㎎/L, IAA(Indole Acetic Acid) 0.05 ~ 0.15 ㎎ 및 인돌-3-부티르산(Indole-3-butyric acid, IBA) 1 ~ 2 ㎎/L을 포함하는 배지에서 배양하여 뿌리를 유도하는 단계를 추가로 포함 할 수 있다.(C) the hyperhidrosis is treated with 0.1 to 0.3 mg / L Zeatin riboside, 0.05-0.15 mg IAA (Indole Acetic Acid), and Indole-3-butyric acid acid, IBA) 1 to 2 mg / L to induce roots.

상기 방법에 있어서, 상기 배지는 WPM 배지(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium)와 MS 배지(Murashige & Skoog Medium, Basal Salt Mixture, NH₄NO₃ Free)를 3:1 비율로 혼합하여 한 배지를 기본 배지로 사용하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
In the above method, the medium was mixed with a WPM medium (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium) and MS medium (Murashige & Skoog Medium, Basal Salt Mixture, NH ₄ NO ₃ Free) at a ratio of 3: But it is not limited thereto.

본 발명은 다음 단계를 포함하는 생장점 배양을 이용한 블루베리 블루레이 품종의 식물체 형성 방법을 제공한다: The present invention provides a method of planting a Blueberry Bluray variety using a growth point culture comprising the steps of:

(b) 상기 신초를, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 140 ~ 160 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 다신초를 유도하는 단계.(b) The shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA), 140 to 160 mg / L of Myo-Inositol L of thiamine HCl, 0.5 to 1.5 mg / L of nicotinic acid, 0.5 to 1.5 mg / L of pyridoxine HCl, 20 to 40 g / L of sucrose, And culturing in a medium containing 5 to 7 g / L of agar to induce hyperosinosis.

상기 발명에 있어서, (c) 상기 다신초를, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 0.1 ~ 0.3 ㎎/L 또는 인돌-3-부티르산(Indole-3-butyric acid, IBA) 1 ~ 2 ㎎/L을 포함하는 배지에서 배양하여 뿌리를 유도하는 단계. In the above invention, (c) the hyperhidrosis is treated with 0.1 to 0.3 mg / L of zeatin riboside or 1 to 2 mg / L of indole-3-butyric acid (IBA) And culturing in an incubation medium to induce roots.

상기 발명에 있어서, 본 발명의 상기 배지는 WPM 배지(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium)와 MS 배지(Murashige & Skoog Medium, Basal Salt Mixture, NH₄NO₃ Free)를 1:1 비율로 혼합하여 한 배지를 기본 배지로 사용하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
In the present invention, the medium of the present invention is prepared by mixing 1: 1 ratio of WPM medium (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium) and MS medium (Murashige & Skoog Medium, Basal Salt Mixture, NH ₄ NO ₃ Free) It is preferable, but not limited, to use one medium as a basic medium.

본 발명은 다음 단계를 포함하는 생장점 배양을 이용한 블루베리 노스랜드 품종의 식물체 형성 방법을 제공한다: The present invention provides a method of planting a blueberry Northland variety using a growth point culture comprising the steps of:

(b) 상기 신초를, 지아틴(Zeatin) 1 ~ 3 ㎎/L 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 140 ~ 160 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 다신초를 유도하는 단계.(b) the shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin or 1-3 mg / L of Zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA) Inositol (140-160 mg / L), Thiamine HCl (1-3 mg / L), Nicotinic acid (0.5-1.5 mg / L), Pyridoxine HCl (0.5-0.5 mg / L) , 20 to 40 g / L of sucrose and 5 to 7 g / L of agar to induce hyperosinosis.

상기방법에 있어서,(c) 상기 다신초를, 지아틴(Zeatin) 0.1 ~ 0.3 ㎎/L, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 0.1 ~ 0.3 ㎎/L 및 인돌-3-부티르산(Indole-3-butyric acid, IBA) 1 ~ 2 ㎎/L을 포함하는 배지에서 배양하여 뿌리를 유도하는 단계. (C) the hyperhidrosis is treated with 0.1 to 0.3 mg / L of Zeatin, 0.1 to 0.3 mg / L of Zeatin riboside and 0.1 to 0.3 mg / L of Indole-3- butyric acid, IBA) in a medium containing 1 to 2 mg / L to induce roots.

상기 발명에 있어서, 상기 배지는 WPM 배지(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium)와 MS 배지(Murashige & Skoog Medium, Basal Salt Mixture, NH₄NO₃ Free)를 3:1 비율로 혼합하여 한 배지를 기본 배지로 사용하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
In the present invention, the medium is prepared by mixing a 3: 1 ratio of a WPM medium (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium) and MS medium (Murashige & Skoog Medium, Basal Salt Mixture, NH ₄ NO ₃ Free) But it is not limited thereto.

(b) 상기 신초를, 지아틴(Zeatin) 1 ~ 3 ㎎/L 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 1 ~ 3 ㎎/L, 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA) 35 ~ 37 ㎎/L, 미오이노시톨(Myo-Inositol) 140 ~ 160 ㎎/L, 티아민 HCl(Thiamine HCl) 1 ~ 3 ㎎/L, 니코틴산(Nicotinic acid) 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 피리독신(Pyridoxine HCl) HCl 0.5 ~ 1.5 ㎎/L, 수크로오스(Sucrose) 20 ~ 40 g/L 및 아가(Agar) 5 ~ 7 g/L를 포함하는 배지에서 배양하여 다신초를 유도하는 단계.(b) the shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin or 1-3 mg / L of Zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA) Inositol (140-160 mg / L), Thiamine HCl (1-3 mg / L), Nicotinic acid (0.5-1.5 mg / L), Pyridoxine HCl (0.5-0.5 mg / L) , 20 to 40 g / L of sucrose and 5 to 7 g / L of agar to induce hyperosinosis.

사기 발명에 있어서, (c) 상기 다신초를, 지아틴(Zeatin) 0.1 ~ 0.3 ㎎/L, IAA(Indole Acetic Acid) 0.05 ~ 0.15 ㎎, 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 0.1 ~ 0.3 ㎎/L 및 인돌-3-부티르산(Indole-3-butyric acid, IBA) 1 ~ 2 ㎎/L을 포함하는 배지에서 배양하여 뿌리를 유도하는 단계. (C) said hyperhidrosis is administered in an amount of 0.1 to 0.3 mg / L of zeatin, 0.05 to 0.15 mg of IAA (Indole Acetic Acid), 0.1 to 0.3 mg / L of Zeatin riboside And indole-3-butyric acid (IBA) in an amount of 1 to 2 mg / L to induce roots.

조직 배양 배지는 크게 무기염류, 탄소 및 에너지원, 기타 유기물, 비타민류, 생장조절제, 기타 첨가물(아가)로 구성되었다.Tissue culture media consisted mainly of inorganic salts, carbon and energy sources, other organic substances, vitamins, growth regulators, and other additives (agar).

산소, 탄소, 수소를 제외한 조직 배양 배지의 무기염류로써, 식물세포 및 조직배양에 필요한 원소로는 질소, 인산, 칼리, 황 등의 다량요소와 칼슘, 나트륨, 마그네슘, 망간, 몰리브덴, 구리, 아연, 붕소, 코발트, 철 등 비교적 소량으로 필요한 미량요소가 있다.As an inorganic salt of a tissue culture medium other than oxygen, carbon and hydrogen, elements required for plant cell and tissue culture include large amounts of elements such as nitrogen, phosphoric acid, carly, and sulfur and calcium, sodium, magnesium, manganese, molybdenum, , Trace elements such as boron, cobalt and iron are required in a relatively small amount.

상기의 원소들은 식물체뿐만 아니라 세포나 조직의 발달에 중요한 역할을 한다. 특히 미량요소 중 철(Fe)의 기능이 중요한데, 식물체 내에 일어나는 여러 대사과정을 조절하는 효소(enzyme)의 기능을 보완하고 보조하는 보조인자(cofactor)의 역할을 한다. 특히 식물의 광합성 작용이 일어나는 세포 내 엽록체에는 라멜라(lamellae)라는 층이 존재하는데, 이 층은 싸이토크롬(cytochrome)이라는 단백질로 구성되어 있고 이 싸이토크롬(cytochrome) 내에 철(Fe)을 포함하는 색소가 있어 산화·환원 작용을 통한 전자의 전달 기능 등 광합성 작용을 촉매하는 중요한 역활을 하였다. 그 외에도 식물의 생장이나 형태 형성에 필수적인 것으로 알려져 있다. These elements play an important role in the development of not only plants but also cells and tissues. Especially, iron (Fe) function is important in trace elements, and plays a role of a cofactor for supplementing and assisting the function of enzymes controlling various metabolic processes occurring in the plant. In particular, there is a layer called lamellae in the chloroplasts in the cells where photosynthetic action of plants occurs. This layer is composed of a protein called cytochrome and contains iron (Fe) in the cytochrome And it plays an important role in catalyzing photosynthesis action such as electron transfer function through oxidation / reduction action. It is also known to be essential for plant growth and morphogenesis.

배지 내 철(Fe)의 흡수는 pH의 영향을 많이 받는데 pH가 5.2 이상이 되면 흡수율이 떨어질 뿐만 아니라, 철(Fe) 자체가 물에 잘 녹지 않아 배지를 만들 때 침전이 생기는 문제가 발생하기도 한다. 과거 상업적으로 개발된 배지의 경우, Fe(SO₄)₃의 형태로 Fe를 공급하였으나, 이후에 개발된 배지에서는 위에서 언급한 문제점들을 극복하기 위하여 FeSO₄2H₂O를 첨가하여 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA)의 착염(chelate)을 형성시켰으며, 이 착염상태의 철(Fe)은 배지의 pH가 8까지 올라가도 흡수가 가능하여 식물체가 계속 이용할 수 있다.
The absorption of iron (Fe) in the culture medium is influenced by the pH. When the pH is higher than 5.2, the water absorption rate is lowered, and iron (Fe) itself does not dissolve in water, . In the case of commercially developed media, Fe was supplied in the form of Fe (SO ₄ ) _3. To overcome the above-mentioned problems, FeSO ₄ 2H ₂ O was added to the medium to prepare ferric sodium salt (FeNa - EDTA chelate, and this complex iron (Fe) can be absorbed even when the pH of the medium rises to 8, so that the plant can continue to be used.

생장조절제인 지아틴(Zeatin) 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside)는 벤질아미노푸린(Benzylaminopurine), 티디아주론(Thidiazuron), 카이네틴(Kinetin) 및 디메틸알릴아미노퓨린(2iP)과 같은 시토시닌(cytokinis)류의 식물성장호르몬으로써, 식물의 세포분열을 촉진한다. 특히 지하부의 발육을 억제하고 지상부의 생육을 촉진한다고 알려져 있어 식물체의 대량번식에서 신초를 유기, 증식시키는데 많이 사용되고 있다.
Zeatin or Zeatin riboside, which is a growth regulator, can be used in combination with other cytotoxic agents such as benzylaminopurine, Thidiazuron, kinetin, and dimethylallyl aminopurine (2iP) It is a plant growth hormone of the cytokinis type and promotes the cell division of the plant. Especially, it is known that it suppresses the growth of the underground part and promotes the growth of the overgrown part. Therefore, it is widely used to propagate and grow shoots in the mass propagation of the plant.

상기 신초 유도시 지아틴(Zeatin) 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside)를 3 ㎎/L 이상으로 첨가할 경우, 오히려 식물체 생육을 저해하여 신초 발생이 지연되거나 억제되고 식물체 고사율이 높아지는 문제점이 있으며, 1 ㎎/L 이하로 첨가할 경우, 캘러스 형성율이 높아지고 신초 형성율이 낮아지는 문제점이 발생한다. When zitin or zeatin riboside is added at a concentration of 3 mg / L or more at the time of shoot induction, the plant growth is inhibited and the shoot generation is delayed or suppressed and the plant mortality rate is increased And 1 mg / L or less, the callus formation rate is increased and the shoot formation rate is lowered.

또한 페릭소디움솔트(FeNa-EDTA)를 73.4 ㎎/L 이상으로 첨가할 경우, 신초의 잎이 붉게 변하고 고사율 또는 갈변율이 높아지는 문제점이 있으며, 27.6 ㎎/L 이하로 첨가할 경우, 신초 생육이 저하되는 문제점이 있다. 그리고 미오이노시톨(Myo-Inositol)을 150 ㎎/L 이상으로 첨가할 경우, 식물체 형성과정에서 변이율이 높아지는 문제점이 있으며, 50 ㎎/L 이하로 첨가할 경우, 신초 생육이 저하되는 문제점이 있다. 티아민 HCl(Thiamine HCl)을 3 ㎎/L 이상으로 첨가할 경우, 식물체 고사율 및 갈변율이 높아지는 문제점이 있으며, 1 ㎎/L 이하로 첨가할 경우, 신초 생육이 저하되는 문제점이 있다. 또한 니코틴산(Nicotinic acid)을 1.5 ㎎/L 이상으로 첨가할 경우, 식물체 고사율 및 갈변율이 높아지는 문제점이 있으며, 0.5 ㎎/L 이하로 첨가할 경우, 신초 생육이 저하되는 문제점이 있다. 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl) 1.5 ㎎/L 이상으로 첨가할 경우, 식물체 고사율 및 갈변율이 높아지는 문제점이 있으며, 0.5 ㎎/L 이하로 첨가할 경우, 신초 생육이 저하되는 문제점이 있다. 또한, 수크로오스(Sucrose)를 50 g/L 이상으로 첨가할 경우, 배지내 당 농도가 과도하게 높아지고 역삼투 현상이 일어나 식물체 조직 내부의 수분이 배지로 빠져나갈 가능성이 높아지며, 따라서 신초가 정상적으로 신장하지 못하고 생육 중간에 식물체의 줄기와 잎이 마르는 등 식물체가 고사하는 문제점이 있다. 수크로오스(Sucrose)를 10 g/L 이하로 첨가할 경우, 식물체의 탄소 및 에너지원인 당의 농도가 급격히 낮아져 신초의 성장이 느려지고 배양단계 후반부에 생육의 억제되는 문제점이 있다. 그리고 액체상태의 배지를 고형화(젤라틴화)시켜 고체상태로 만드는 역활을 하는 아가(Agar)를 7 g/L 이상으로 첨가할 경우, 배지의 강도(딱딱한 정도)가 과도하게 높아져 식물체에서 뿌리가 잘 뻗어 내리지 못하는 문제점이 있으며, 5 g/L 이하로 첨가할 경우, 식물체가 배지에 제대로 지지되지 못하는 문제점이 있다.
When FeNa-EDTA is added at a concentration of 73.4 ㎎ / L or higher, there is a problem that the leaf of the shoot is reddish and the rate of browning or breaking is increased. When added at 27.6 ㎎ / L or less, There is a problem of deterioration. In addition, when Myo-Inositol is added at a concentration of 150 mg / L or more, there is a problem that the rate of transformation is increased during the plant formation process. When the amount is less than 50 mg / L, shoot growth is deteriorated. When thiamine HCl is added at a concentration of 3 mg / L or more, there is a problem that the plant mortality and browning rate are increased. When the concentration is less than 1 mg / L, shoot growth is deteriorated. When nicotinic acid is added at a concentration of more than 1.5 ㎎ / L, there is a problem that the plant mortality and browning rate are increased. When the amount is less than 0.5 mg / L, shoot growth is deteriorated. When Pyridoxine HCl (Pyridoxine HCl) is added at a concentration of 1.5 mg / L or more, there is a problem that the plant mortality and browning rate are increased. When the concentration is less than 0.5 mg / L, shoot growth is deteriorated. In addition, when sucrose is added at a concentration of 50 g / L or more, the sugar concentration in the medium becomes excessively high and the reverse osmosis phenomenon occurs, so that the water inside the plant tissue is likely to escape to the medium, And there is a problem that the plant is damaged such as stem and leaf of the plant are dried in the middle of the growth. When sucrose is added at a concentration of 10 g / L or less, the concentration of carbon and energy-causing sugars in the plant is drastically lowered, which slows growth of shoots and inhibits growth at the later stage of the cultivation step. When agar, which acts to solidify a liquid medium into a solid state, is added at a concentration of 7 g / L or more, the strength (hardness) of the medium becomes excessively high, There is a problem in that it can not be spread out, and when it is added at 5 g / L or less, there is a problem that the plant can not be properly supported on the medium.

상기 다신초 유도시 지아틴(Zeatin) 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside)를 3 ㎎/L 이상으로 첨가할 경우, 식물체 고사율 및 변이율이 높아지는 문제점이 있으며, 1 ㎎/L 이하로 첨가할 경우, 다신초 형성율이 낮아지고 식물체 생육이 억제되는 문제점이 있다.
The addition of zeatin or zeatin riboside at a concentration of 3 mg / L or more during the hyperhidrosis induces an increase in plant mortality and variability, and the addition of 1 mg / L or less , There is a problem in that the planting rate is lowered and plant growth is inhibited.

상기 뿌리 유도시 인돌-3-부티르산(Indole-3-butyric acid, IBA)을 4.0 ㎎/L 이상으로 첨가할 경우, 뿌리형성이 오히려 억제되고 식물체의 줄기와 잎이 갈변하는 등 고사율이 높아지는 문제점이 있으며, 0.5 ㎎/L 이하로 첨가할 경우, 뿌리 형성이 잘 이루어지지 않는 문제점이 있다.
The addition of indole-3-butyric acid (IBA) above 4.0 ㎎ / L during roots induction suppresses root formation and causes a higher rate of death such as stem and leaf browning of plant , And when it is added at a concentration of 0.5 mg / L or less, there is a problem that roots are not formed well.

본 발명에 있어서, “기본 배지”는 식물의 배양에 필요한 가장 기본적인 물질들만 포함되어 있는 배양액을 의미하며, 본 발명에서는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium)과 MS(Murashige & Skoog Medium, Basal Salt Mixture, NH₄NO₃ Free)의 혼합 배지를 기본 배지로 사용하였으며, 기본 배지에 지아틴(Zeatin) 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside), 페릭소디움솔트-EDTA(FeNa-EDTA), 미오이노시톨(Myo-Inositol), 티아민 HCl(Thiamine HCl), 니코틴산(Nicotinic acid), 피리독신 HCl(Pyridoxine HCl), 수크로오스(Sucrose) 및 아가(Agar)를 추가로 첨가하여 블루베리의 생장점 배양을 위한 배지로 사용하였다.
In the present invention, the term " basic medium " means a culture medium containing only the most basic substances necessary for plant cultivation. In the present invention, WPM (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium) and MS (Murashige & Skoog Medium, Basal Salt mixture, NH ₄ NO ₃ Free) was used as a basic medium. Zeatin or Zeatin riboside, ferric sodium salt-EDTA (FeNa-EDTA), myoinositol The medium is used as a medium for the growth of blueberries by addition of Myo-Inositol, Thiamine HCl, Nicotinic acid, Pyridoxine HCl, Sucrose and Agar. Respectively.

본 발명에 있어서, 상기 기본 배지의 pH는 3 ~ 7로 사용하는 것을 특징으로 한다. 배지의 pH를 7 이상으로 사용하였을 경우에는 산성상태에서 잘 자라는 블루베리의 특성과 맞지 않아 식물체의 생장이 늦어질 수 있으며, pH를 3 이하로 사용하였을 경우에는 식물체의 칼슘(Ca) 이온 흡수를 저해하여 칼슘이 결핍되게 되며 이로써 생장점이 괴사될 수 있다. 따라서 배지의 pH를 3 ~ 7로 조정하여 사용하는 것이 바람직하며, pH 4.5 ~ 5.5로 사용하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.In the present invention, the pH of the basic medium is 3 to 7. When the pH of the medium is higher than 7, the growth of the plant may be delayed because it does not match the characteristic of blueberry which grows well in the acidic state. When the pH is lower than 3, the calcium absorption And calcium deficiency, which can result in necrosis of the growth point. Therefore, it is preferable to adjust the pH of the medium to 3 to 7, more preferably to use the pH of 4.5 to 5.5, but it is not limited thereto.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

'웨이마우스 ' 품종의 생장점 배양방법 Saengjangjeom culture method of the 'Way Mouse varieties

<1-1> ‘<1-1> 웨이마우스Wei Mouse ' 품종의 생장점 채취'Harvesting point of varieties

블루베리 '웨이마우스' 품종의 생장점은 신초(그 해에 새로 자란 잎이 붙어있는 당년생 가지) 생장이 주로 이루어지는 4 ~ 5월(1차생장) 또는 7 ~ 8월(2차생장)에 신초의 정단 부위에 있는 액아(당년에 잎으로 분화하는 곁눈)로부터 채취하여 배양재료로 사용하였다. 정단 부위의 액아를 절취하여 70% 에탄올에 30초간 침지하여 표면 소독하고 3% 차아염소산나트륨(NaOCl) 용액에 15 ~ 20분간 침지하여 1회 소독한 후 멸균수로 10분간 3회 세척하였다. 클린벤치(무균작업대)에서 현미경을 이용하여 액아 내 0.3 ~ 0.5 ㎜ 정도의 크기의 생장점을 엽원기(leaf primordium, 잎의 근원이 되거나 잎을 생성하는 세포의 일군)가 1 ~ 2매가 붙어 있는 상태로 채취하여 배양하였다.
The growth point of blueberry 'Weiwoemusa' varieties is shoots in April to May (1st growth) or 7th to 8th August (2nd growth) in which shoots are grown mainly with shoots Were collected from the forehead at the apical region of the root (the lateral branch differentiated from the leaf this year) and used as a culture material. The stomachs were excised and immersed in 70% ethanol for 30 seconds, disinfected, immersed in 3% sodium hypochlorite (NaOCl) solution for 15-20 minutes, disinfected once, and washed three times with sterile water for 10 minutes. Using a microscope in a clean bench (sterile workbench), a leaf spot (leaf primordium, a group of cells that produce leaves or leaves) is attached to a growth point of about 0.3-0.5 mm in diameter And cultured.

<1-2> ‘<1-2> 웨이마우스Wei Mouse ' 품종의 'Varieties of 신초Shinshu (( microshootmicroshoot ) 생성 유도를 위한 초기 생장점 배양) Early growth point cultivation induction

초기 생장점 배양배지는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w/o vitamins, MBcell社)배지에 생장조정제 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 및 IAA(Indole-3-acetic acid) 외 7가지 첨가물을 추가하여 배지를 제조하였다. 초기 생장점 배양 배지의 조성 성분은 하기 [표 1]과 같았다. The initial growth point culture medium was prepared by adding 7 kinds of additives such as growth regulator Zeatin riboside and IAA (indole-3-acetic acid) to WPM (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w / o vitamins, MBcell) In addition, a medium was prepared. The composition components of the initial growth point culture medium were as shown in Table 1 below.

각각의 배지 성분을 혼합 조제한 후 배양용 유리 시험관(지름 25 mm, 높이 150 mm)에 10 mL씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균하여 사용하였다. 배지가 든 유리 시험관에 생장점을 하나씩 치상하였으며, 25±1 ℃로 유지되는 배양실에서 명 조건(2,000~3,000 lux, 16시간 일장)으로 1 ~ 2개월 정도 배양하였다. 배양 8주차 신초형성 특성은 하기 [표 2]와 같았다.
Each of the media components was mixed and prepared, and 10 mL of each was dispensed into a glass test tube for culture (25 mm in diameter, 150 mm in height) and sterilized at 121 ° C for 15 minutes. Growth points were gauged one by one on a glass test tube with a medium and cultured for 1-2 months in a culture room maintained at 25 ± 1 ° C under light conditions (2,000 ~ 3,000 lux, 16 hours per day). The shoot formation characteristics at 8th week of culture were as shown in Table 2 below.

<1-3> ‘<1-3> 웨이마우스Wei Mouse ' 품종의 'Varieties of 다신초Rechincho (( multimulti -- shootshoot ) 생성 유도를 위한 증식 배양) Growth culture for induction of production

초기 배양과정에서 각각의 배지에 치상된 생장점은 1 ~2개월 정도 배양기간이 지나면 신초가 형성되는데 이때 신초의 생장촉진을 위하여 [표 1]의 초기 생장점배양 배지로 1회 더 계대(새로 제조한 배지로 배양 식물체를 옮겨주는 작업) 하였다. 3 ~ 4주 후 신초가 성장하여 신초장(shoot length)이 1 ~ 2 ㎝ 정도이면 [표 1]의 증식 배양 배지에 계대하였으며, 신초(shoot)가 어느 정도 자라 신초장(shoot length)가 2 ㎝ 이상이 되면 배양 용기를 유리 시험관(지름 25 mm, 높이 150 mm)에서 배양병(외경 81 mm, 높이 132 mm)으로 바꾸어 1 ~ 2회 더 계대하여 유식물체(plantlet, 조직배양 기술로 재생한 어린 식물체) 형성을 유도하였다. 이때 다신초(multi-shoot)가 유도되면 유식물체의 기부(유식물체 맨 아랫부분)를 분할하여 유식물체의 개수를 늘리는 증식 작업을 함께 수행하였다. 배양 14주차 유식물체 특성은 하기 [표 3]과 같았다.
In the initial culturing, shoots are formed after 1 to 2 months of incubation period in each medium. In order to accelerate the growth of shoots, the seedlings are transferred once more to the initial growth point medium of Table 1 And transferring the cultured plants to the medium). 3 ~ 4 weeks after shoot growth, the shoot length was 1 ~ 2 ㎝, and it was transferred to the growth culture medium of Table 1. The shoot length was increased to 2 ㎝, the culture container was changed to a culture bottle (outer diameter 81 mm, height 132 mm) in a glass test tube (diameter 25 mm, height 150 mm) Young plants). At this time, when multi-shoot was induced, the proliferation work was carried out by dividing the base of the seedling plant (the lower part of the seedling plant) to increase the number of seedling plants. The characteristics of the 14th planting of the cultivated plants were as shown in Table 3 below.

증식 배양 배지는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w/o vitamins, MBcell社)배지에 생장조정제 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 및 IAA(Indole-3-acetic acid) 외 7가지 첨가물을 추가하여 배지를 제조하였으며, 그 증식배지 조성 성분은 하기 [표 1]과 같았다.
The growth medium was prepared by adding seven additives such as growth regulator Zeatin riboside and IAA (Indole-3-acetic acid) to WPM (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium / , And the growth medium composition components thereof were as shown in Table 1 below.

<1-4> ‘<1-4> 웨이마우스Wei Mouse ' 품종의 뿌리 형성 유도를 위한 'For inducing root formation in varieties 발근Rooting 배양 culture

증식 배양을 거친 웨이마우스 유식물체의 뿌리를 형성시키기 위하여 [표 1]의 증식 배양 배지 조성에서 생장조정제인 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 및 IAA(Indole-3-acetic acid)의 농도를 1/10로 줄이거나 아예 첨가하지 않은 배지에 IBA(Indole-3-butyric acid) 1 ㎎/L 또는 2 ㎎/L을 첨가하여 발근 배지로 이용하며, 1개월 정도 배양하였다. 이때 배양병 마개에 솜으로 막는 구멍이 있어 외부공기가 순환되는 배양병을 사용하는 경우 기외 순화시 생존율을 높일 수 있었다.
In order to form roots of the weedy mouse seedlings which had undergone the proliferation culture, the concentration of the growth regulators Zeatin riboside and IAA (Indole-3-acetic acid) in the growth culture medium of Table 1 was 1 / 10 or IBA (Indole-3-butyric acid) 1 mg / L or 2 mg / L was added to the medium, which was used as a rooting medium for about 1 month. At this time, the survival rate was improved when the culturing bottle was used for culture of the external air circulation.

웨이마우스 유식물체의 전체 길이가 5 ㎝ 이상으로 충분히 성장한 경우, 뿌리를 형성시키는 발근 배양을 거치지 않고 바로 기외(온실)로 순화하는 것이 가능하였다.
When the total length of the Weiemeseo plant was sufficiently grown to 5 cm or more, it was possible to purify it directly into the outdoors (greenhouse) without roots culturing to form roots.

<1-5> ‘<1-5> 웨이마우스Wei Mouse ' 품종의 조직배양 묘목 형성을 위한 순화 과정'Cultivation of cultivated cultivated seedlings for purification process

발근배양을 통하여 뿌리가 형성된 유식물체 또는 뿌리가 형성되지는 않았으나 5 ㎝이상 충분히 성장한 웨이마우스 유식물체는 기내(배양실)에서 기외(온실)로 순화하는 과정을 거쳐야만 완전한 조직배양 묘목의 형태를 갖추게 된다. 피트모스와 펄라이트를 1:1(v:v)로 혼합한 상토를 준비한 후 블루베리 유식물체를 화분(내부 직경 110 mm, 높이 113 mm)에 심고, 햇빛의 30% ~ 40%가 차광되며 최고 25℃, 최저 18℃로 유지되는 온실에서 투명 비닐을 덮어주어 습도가 잘 유지되는 상태에서 경화처리를 하였다. 유식물체의 상태를 확인하면서 비닐을 서서히 걷어내고 외기의 환경에 노출시켜 완전히 경화시켰다.
The roots of roots were not formed by roots cultivation, but the roots of roots were not fully formed. However, the roots of roots of 5 ㎝ or more were fully cultured from the cabin to the outside (greenhouse) . A blueberry plant was planted in a pollen (110 mm in inside diameter, 113 mm in height) after 30 minutes to 40% of sunlight was shaded and a maximum of 25 Lt; 0 > C and a minimum temperature of 18 < [deg.] &Gt; C in a greenhouse. While checking the condition of the seedlings, the plastic was gradually removed and exposed to the atmosphere to completely cure it.

블루베리 '웨이마우스' 품종의 배양 배지 조성Culture medium composition of 'Blueberry' Wei mouse 'cultivar 성 분 명Name 함 량content 초기 생장점 배양 배지Initial growth point culture medium 증식 배양 배지Proliferation culture medium NH₄NO₃ NH ₄ NO ₃ 400.00 mg/L400.00 mg / L 400.00 mg/L400.00 mg / L MgSO₄ MgSO ₄ 180.7 mg/L180.7 mg / L 180.7 mg/L180.7 mg / L KNO₃ KNO ₃ 0.00 mg/L0.00 mg / L 0.00 mg/L0.00 mg / L K₂SO₄ K ₂ SO ₄ 990.00 mg/L990.00 mg / L 990.00 mg/L990.00 mg / L KH₂PO₄ KH ₂ PO ₄ 170.00 mg/L170.00 mg / L 170.00 mg/L170.00 mg / L Ca(NO₃)₂4H₂O _{_{_{Ca (NO 3) 2 4H 2}}} O 386.00 mg/L386.00 mg / L 386.00 mg/L386.00 mg / L CaCl₂ CaCl ₂ 72.50 mg/L72.50 mg / L 72.50 mg/L72.50 mg / L CoCl₂6H₂OCoCl ₂ 6H ₂ O 0.00 mg/L0.00 mg / L 0.00 mg/L0.00 mg / L ZnSO₄7H₂OZnSO ₄ 7H ₂ O 8.60 mg/L8.60 mg / L 8.60 mg/L8.60 mg / L Na₂MoO₄2H₂ONa ₂ MoO ₄ 2H ₂ O 0.25 mg/L0.25 mg / L 0.25 mg/L0.25 mg / L MnSO₄H₂OMnSO ₄ H ₂ O 22.30 mg/L22.30 mg / L 22.30 mg/L22.30 mg / L H₃BO₃ H ₃ BO ₃ 6.20 mg/L6.20 mg / L 6.20 mg/L6.20 mg / L KIKI 0.00 mg/L0.00 mg / L 0.00 mg/L0.00 mg / L FeNaEDTAFeNaEDTA 36.70 mg/L36.70 mg / L 55.05 mg/L55.05 mg / L Na₂EDTANa ₂ EDTA 37.30 mg/L37.30 mg / L 37.30 mg/L37.30 mg / L FeSO₄7H₂OFeSO ₄ 7H ₂ O 27.85 mg/L27.85 mg / L 27.85 mg/L27.85 mg / L CuSO₄5H₂OCuSO ₄ 5H ₂ O 0.25 mg/L0.25 mg / L 0.25 mg/L0.25 mg / L myo-Inositolmyo-Inositol 100.00 mg/L 100.00 mg / L 100 mg/L 100 mg / L Nicotinic acidNicotinic acid 1.00 mg/L1.00 mg / L 1.00 mg/L1.00 mg / L Pyridoxine HClPyridoxine HCl 1.00 mg/L1.00 mg / L 1.00 mg/L1.00 mg / L Thiamine HClThiamine HCl 2.00 mg/L2.00 mg / L 2.00 mg/L2.00 mg / L SucroseSucrose 30 g/L30 g / L 30 g/L30 g / L Zeatin ribosideZeatin riboside 2.00 mg/L2.00 mg / L 2.00 mg/L2.00 mg / L IAAIAA 1.00mg/L1.00 mg / L 1.00mg/L1.00 mg / L AgarAgar 6.00 g/L6.00 g / L 6 g/L6 g / L 배지의 pHThe pH of the medium 5.05.0 5.05.0

블루베리 '웨이마우스' 품종의 배양 8주차 신초분화 특성Cultivation of Blueberry 'Weiwoemus' Varieties 신초분화율(%)Differentiation rate of shoots (%) 신초수(개/plantlet)Number of plantlets 신초장(㎜)New plant length (mm) 88.9±1.788.9 ± 1.7 1.0±0.01.0 ± 0.0 13.8±1.113.8 ± 1.1

블루베리 '웨이마우스' 품종의 배양 14주차 유식물체 특성Cultivation of Blueberry 'Waymouse' Varieties 고사율(%)Mortality rate (%) 신초수(개/plantlet)Number of plantlets 신초장(㎜)New plant length (mm) 7.7±1.27.7 ± 1.2 1.0±0.01.0 ± 0.0 37.1±3.837.1 ± 3.8

‘' 듀크Duke ' 품종의 생장점 배양방법'How to cultivate the growth point of varieties

<2-1> ‘<2-1> 듀크Duke ' 품종의 생장점 채취'Harvesting point of varieties

블루베리 '듀크' 품종의 생장점의 채취방법은 상기의 '웨이마우스' 품종의 방법과 동일하다.
The method of collecting the growth point of the blueberry 'Duke' variety is the same as that of the 'Weissmouse' variety described above.

<2-2> ‘<2-2> 듀크Duke ' 품종의 'Varieties of 신초Shinshu (( microshootmicroshoot ) 생성 유도를 위한 초기 생장점 배양) Early growth point cultivation induction

초기 생장점배양 배지는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w/o vitamins, MBcell社)배지에 생장조정제 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 외 7가지 첨가물을 추가하여 배지를 제조하였다. 초기 생장점배양 배지의 조성 성분은 하기 [표 4]와 같았다. The medium was prepared by adding 7 kinds of additives such as growth regulator Zeatin riboside and other additives to WPM (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium, w / o vitamins, MBcell). The composition components of the initial growth-point culture medium were as shown in Table 4 below.

각각의 배지 성분을 혼합 조제한 후 배양용 유리 시험관(지름 25 mm, 높이 150 mm)에 10 mL씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균하여 사용하였다. 배지가 든 유리 시험관에 생장점을 하나씩 치상하였으며, 25±1℃로 유지되는 배양실에서 명 조건(2,000~3,000 lux, 16시간 일장)으로 1 ~ 2개월 정도 배양하였다. 배양 8주차 신초형성 특성은 하기[표 5]와 같았다.
Each of the media components was mixed and prepared, and 10 mL of each was dispensed into a glass test tube for culture (25 mm in diameter, 150 mm in height) and sterilized at 121 ° C for 15 minutes. Growth points were gauged one by one on a glass test tube with a medium and cultured for 1-2 months in a culture room maintained at 25 ± 1 ° C under light conditions (2,000 ~ 3,000 lux, 16 hours per day). The shoot formation characteristics at 8th week of culture were as shown in Table 5 below.

<2-3> ‘<2-3> 듀크Duke ' 품종의 'Varieties of 다신초Rechincho (( multimulti -- shootshoot ) 생성 유도를 위한 증식 배양) Growth culture for induction of production

초기 배양과정에서 각각의 배지에 치상된 생장점은 1 ~ 2개월 정도 배양기간이 지나면 신초가 형성되는데, 이때 신초의 생장촉진을 위하여 하기[표 4]의 초기 생장점배양 배지로 1회 더 계대(새로 제조한 배지로 배양 식물체를 옮겨주는 작업) 하였다. 3 ~ 4주 후 신초가 성장하여 신초장(shoot length)이 1 ~ 2 ㎝ 정도이면 [표 4]의 증식 배양 배지에 계대하였으며, 신초(shoot)가 어느 정도 자라 신초장(shoot length)가 2 ㎝ 이상이 되면 배양 용기를 유리 시험관(지름 25 mm, 높이 150 mm)에서 배양병(외경 81 mm, 높이 132 mm)으로 바꾸어 1 ~ 2회 더 계대하여 유식물체(plantlet, 조직배양 기술로 재생한 어린 식물체) 형성을 유도하였다. 이때 다신초(multi-shoot)가 유도되면 유식물체의 기부(유식물체 맨 아랫부분)를 분할하여 유식물체의 개수를 늘리는 증식 작업을 함께 수행하였다. 배양 14주차 유식물체 특성은 하기 [표 6]과 같았다. In the initial culturing process, shoots are formed after 1 to 2 months incubation period at the growth point of each medium. In order to accelerate the growth of shoots, the seedlings are transferred once more to the initial growth point culture medium of Table 4 below And transferring the cultured plants to the prepared medium). After 3 ~ 4 weeks, the shoot length was 1 ~ 2 ㎝, and the shoot length was transferred to the growth medium of [Table 4]. The shoot length was increased to 2 ㎝, the culture container was changed to a culture bottle (outer diameter 81 mm, height 132 mm) in a glass test tube (diameter 25 mm, height 150 mm) Young plants). At this time, when multi-shoot was induced, the proliferation work was carried out by dividing the base of the seedling plant (the lower part of the seedling plant) to increase the number of seedling plants. The characteristics of the 14-well cultivated plants were as shown in Table 6 below.

증식 배양 배지는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w/o vitamins, MBcell社)배지에 생장조정제 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 외 7가지 첨가물을 추가하여 배지를 제조하였으며, 그 증식 배지 조성 성분은 하기[표 4]와 같았다.
The growth medium was prepared by adding seven additives such as growth regulator Zeatin riboside and other additives to the medium of WPM (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium, w / o vitamins, MBcell) The components were as shown in Table 4 below.

<2-4> ‘듀크' 품종의 뿌리 형성 유도를 위한 <2-4> To induce root formation of 'Duke' varieties 발근Rooting 배양 culture

증식 배양을 거친 듀크 유식물체의 뿌리를 형성시키기 위하여 [표 4]의 증식 배양 배지 조성에서 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside)의 농도를 1/10로 줄이거나 아예 첨가하지 않은 배지에 IBA 1 ㎎/L 또는 2 ㎎/L을 첨가하여 발근 배지로 이용하며, 1개월 정도 배양하였다. 이때 배양병 마개에 솜으로 막는 구멍이 있어 외부공기가 순환되는 배양병을 사용하는 경우 기외 순화시 생존율을 높일 수 있다.In order to form roots of the Duke seedlings which had undergone the proliferation cultivation, the concentration of zeatin riboside in the proliferation culture medium of Table 4 was reduced to 1/10 or not added to the medium, and 1 mg / L or 2 ㎎ / L was added and cultured for 1 month. At this time, when the culture bottle having a hole in the culture bottle cap is used to circulate the outside air, the survival rate can be increased when the culture is excellently performed.

듀크 유식물체의 전체 길이가 5 ㎝ 이상으로 충분히 성장한 경우, 뿌리를 형성시키는 발근배양을 거치지 않고 바로 기외(온실) 순화하는 것이 가능하였다.
When the total length of the Duke seedlings was more than 5 ㎝, it was possible to purify directly outdoors (greenhouse) without roots culturing to form roots.

<2-5> ‘듀크' 품종의 조직배양 묘목 형성을 위한 순화 과정<2-5> Tissue Culture of 'Duke' Varieties Purification Process for Seedling Formation

발근 배양을 통하여 뿌리가 형성된 유식물체 또는 뿌리가 형성되지는 않았으나 5 ㎝ 이상 충분히 성장한 듀크 유식물체는 기내(배양실)에서 기외(온실)로 순화하는 과정을 거쳐야만 완전한 조직배양 묘목의 형태를 갖추게 된다. 기외에서 순화하는 방법은 상기의 웨이마우스 품종의 방법과 동일하다.
The roots of roots were not formed through roots cultivation, but the Duke seedlings which had not yet formed roots but fully grown more than 5 ㎝ had to undergo a purification process from the cabin to the outdoors (greenhouse) to form a complete tissue culture seedling. The method of purifying in air is the same as that of the Weisserl variety described above.

블루베리 '듀크' 품종의 배양 배지 조성Culture medium of blueberry 'Duke' varieties 성 분 명Name 함 량content 초기 생장점 배양 배지Initial growth point culture medium 증식 배양 배지Proliferation culture medium NH₄NO₃ NH ₄ NO ₃ 400.00 mg/L400.00 mg / L 400.00 mg/L400.00 mg / L MgSO₄ MgSO ₄ 180.70 mg/L180.70 mg / L 180.70 mg/L180.70 mg / L KNO₃ KNO ₃ 0.00 mg/L0.00 mg / L 0.00 mg/L0.00 mg / L K₂SO₄ K ₂ SO ₄ 990.00 mg/L990.00 mg / L 990.00 mg/L990.00 mg / L KH₂PO₄ KH ₂ PO ₄ 170.00 mg/L170.00 mg / L 170.00 mg/L170.00 mg / L Ca(NO₃)₂4H₂O _{_{_{Ca (NO 3) 2 4H 2}}} O 386.00 mg/L386.00 mg / L 386.00 mg/L386.00 mg / L CaCl₂ CaCl ₂ 72.50 mg/L72.50 mg / L 72.50 mg/L72.50 mg / L CoCl₂6H₂OCoCl ₂ 6H ₂ O 0.00 mg/L0.00 mg / L 0.00 mg/L0.00 mg / L ZnSO₄7H₂OZnSO ₄ 7H ₂ O 8.60 mg/L8.60 mg / L 8.60 mg/L8.60 mg / L Na₂MoO₄2H₂ONa ₂ MoO ₄ 2H ₂ O 0.25 mg/L0.25 mg / L 0.25 mg/L0.25 mg / L MnSO₄H₂OMnSO ₄ H ₂ O 22.30 mg/L22.30 mg / L 22.30 mg/L22.30 mg / L H₃BO₃ H ₃ BO ₃ 6.20 mg/L6.20 mg / L 6.20 mg/L6.20 mg / L KIKI 0.00 mg/L0.00 mg / L 0.00 g/L0.00 g / L FeNaEDTAFeNaEDTA 36.70 mg/L36.70 mg / L 55.05 mg/L55.05 mg / L Na₂EDTANa ₂ EDTA 37.30 mg/L37.30 mg / L 37.30mg/L37.30 mg / L FeSO₄7H₂OFeSO ₄ 7H ₂ O 27.85 mg/L27.85 mg / L 27.85 mg/L27.85 mg / L CuSO₄5H₂OCuSO ₄ 5H ₂ O 0.25 mg/L0.25 mg / L 0.25mg/L0.25 mg / L myo-Inositolmyo-Inositol 100 mg/L 100 mg / L 150.00 mg/L 150.00 mg / L Nicotinic acidNicotinic acid 1.00 mg/L1.00 mg / L 1.00 mg/L1.00 mg / L Pyridoxine HClPyridoxine HCl 1.00 mg/L1.00 mg / L 1.00 mg/L1.00 mg / L Thiamine HClThiamine HCl 2.00 mg/L2.00 mg / L 2.00 mg/L2.00 mg / L SucroseSucrose 30.00 g/L30.00 g / L 30.00 g/L30.00 g / L Zeatin ribosideZeatin riboside 2.00 mg/L2.00 mg / L 2.00 mg/L2.00 mg / L AgarAgar 6.00 g/L6.00 g / L 6.00 g/L6.00 g / L 배지의 pHThe pH of the medium 5.05.0 5.05.0

블루베리‘듀크' 품종의 배양 8주차 신초분화 특성Cultivation of blueberry 'Duke' varieties 신초분화율(%)Differentiation rate of shoots (%) 신초수(개/plantlet)Number of plantlets 신초장(㎜)New plant length (mm) 89.4±4.089.4 ± 4.0 1.0±0.01.0 ± 0.0 15.9±1.315.9 ± 1.3

블루베리‘듀크' 품종의 배양 14주차 유식물체 특성Cultivation of blueberry 'Duke' varieties 고사율(%)Mortality rate (%) 신초수(개/plantlet)Number of plantlets 신초장(㎜)New plant length (mm) 8.3±1.58.3 ± 1.5 1.1±0.11.1 ± 0.1 41.4±5.941.4 ± 5.9

‘넬슨' 품종의 생장점 배양방법How to grow the 'Nelson' variety

<3-1> ‘넬슨' 품종의 생장점 채취<3-1> Harvesting point of 'Nelson' variety

블루베리 '넬슨' 품종의 생장점의 채취방법은 상기의 '웨이마우스' 품종의 방법과 동일하다.
The method of collecting the growth point of the blueberry 'Nelson' variety is the same as that of the 'Weissmouse' variety described above.

<3-2> ‘넬슨' 품종의 <3-2> Varieties of 'Nelson' 신초Shinshu (( microshootmicroshoot ) 생성 유도를 위한 초기 생장점 배양) Early growth point cultivation induction

초기 생장점 배양 배지는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w/o vitamins, MBcell社) 배지와 일반 MS(Murashige & Skoog Medium, Mod. No. 4 Basal Salt Mixture, NH₄NO₃ Free, Duchefa社) 배지 또는 변형 비타민 포함 MS(Murashige & Skoog Medium including Modified Vitamins, Duchefa社) 배지를 3:1 비율로 혼합한 배지에 생장조정제 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 및 IAA(Indole-3-acetic acid) 외 7가지 첨가물을 추가하여 배지를 제조하였다. 초기 생장점 배양 배지의 조성 성분은 하기 [표 7]과 같았다.
The initial growth point culture medium was a medium (MS) (Murashige & Skoog Medium, Mod. No. 4 Basal Salt Mixture, NH ₄ NO ₃ Free, Duchefa ) And a growth regulator Zeatin riboside and IAA (Indole-3-acetic acid) were added to a medium prepared by mixing MS (Murashige & Skoog Medium including Modified Vitamins, Duchefa) And seven other additives were added to prepare a medium. The composition components of the initial growth point culture medium were as shown in Table 7 below.

각각의 배지 성분을 혼합 조제한 후 배양용 유리 시험관(지름 25 mm, 높이 150 mm)에 10 mL씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균하여 사용하였다. 배지가 든 유리 시험관에 생장점을 하나씩 치상하였으며, 25±1℃로 유지되는 배양실에서 명 조건(2,000~3,000 lux, 16시간 일장)으로 1 ~ 2개월 정도 배양하였다. 배양 8주차 신초형성 특성은 하기 [표 8]와 같았다.
Each of the media components was mixed and prepared, and 10 mL of each was dispensed into a glass test tube for culture (25 mm in diameter, 150 mm in height) and sterilized at 121 ° C for 15 minutes. Growth points were gauged one by one on a glass test tube with a medium and cultured for 1-2 months in a culture room maintained at 25 ± 1 ° C under light conditions (2,000 ~ 3,000 lux, 16 hours per day). The shoot formation characteristics at 8th week of culture were as shown in Table 8 below.

<3-3> ‘넬슨' 품종의 <3-3> Varieties of 'Nelson' 다신초Rechincho (( multimulti -- shootshoot ) 생성 유도를 위한 증식 배양) Growth culture for induction of production

초기 배양과정에서 각각의 배지에 치상된 생장점은 1 ~ 2개월 정도 배양기간이 지나면 신초가 형성되는데, 이때 신초의 생장촉진을 위하여 하기 [표 7]의 초기 생장점배양 배지로 1회 더 계대(새로 제조한 배지로 배양 식물체를 옮겨주는 작업)하였다. 3 ~ 4주 후 신초가 성장하여 신초장(shoot length)이 1 ~ 2 ㎝ 정도이면 하기 [표 9]의 증식 배양 배지에 계대하였으며, 신초(shoot)가 어느 정도 자라 신초장(shoot length)이 2 ㎝ 이상이 되면 배양 용기를 유리 시험관(지름 25 mm, 높이 150 mm)에서 배양병(외경 81 mm, 높이 132 mm)으로 바꾸어 1 ~ 2회 더 계대하여 유식물체(plantlet, 조직배양 기술로 재생한 어린 식물체) 형성을 유도하였다. 이때 다신초(multi-shoot)가 유도되면 유식물체의 기부(유식물체 맨 아랫부분)를 분할하여 유식물체의 개수를 늘리는 증식 작업을 함께 수행하였다. 배양 14주차 유식물체 특성은 하기 [표 10]과 같았다. In the initial culturing, shoots are formed after 1 to 2 months of incubation period at the growth point of each medium. In order to accelerate the growth of shoots, the seedlings are transferred once more to the initial growth point culture medium of Table 7 below And transferring the cultured plants to the prepared medium). After 3 to 4 weeks, growth of shoots was carried out in the growth medium of Table 9 below when the shoot length was 1 to 2 ㎝, and shoot length was increased to some extent When the culture vessel is 2 cm or more, the culture vessel is changed into a culture bottle (outer diameter 81 mm, height 132 mm) in a glass test tube (diameter 25 mm, height 150 mm) One young plant). At this time, when multi-shoot was induced, the proliferation work was carried out by dividing the base of the seedling plant (the lower part of the seedling plant) to increase the number of seedling plants. The characteristics of the 14-well cultivated plants were as shown in Table 10 below.

증식 배양 배지는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w/o vitamins, MBcell社) 배지와 일반 MS(Murashige & Skoog Medium, Mod. No. 4 Basal Salt Mixture, NH₄NO₃ Free, Duchefa社) 배지 또는 변형 비타민 포함 MS(Murashige & Skoog Medium including Modified Vitamins, Duchefa社) 배지를 3:1 비율로 혼합한 배지에 생장조정제 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 및 IAA(Indole-3-acetic acid) 외 7가지 첨가물을 추가하여 배지를 제조하였으며 그 성분은 하기 [표 9]와 같았다.
The proliferation culture medium was a medium (MS) (Murashige & Skoog Medium, Mod. No. 4 Basal Salt Mixture, NH ₄ NO ₃ Free, Duchefa) supplemented with WPM (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium / (Zeolite riboside) and IAA (Indole-3-acetic acid) were added to a medium containing a 3: 1 ratio of MS medium containing Murashige & Skoog Medium including Modified Vitamins, Duchefa Seven additives were added to prepare a medium. The ingredients were as shown in Table 9 below.

<3-4> ‘넬슨' 품종의 뿌리 형성 유도를 위한 <3-4> To induce roots formation of 'Nelson' varieties 발근Rooting 배양 culture

증식 배양을 거친 넬슨 유식물체의 뿌리를 형성시키기 위하여 하기[표 9]의 증식 배양 배지 조성에서 생장조정제 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 및 IAA(Indole-3-acetic acid)의 농도를 1/10로 줄이거나 아예 첨가하지 않은 배지에 IBA 1 ㎎/L 또는 2 ㎎/L을 첨가하여 발근 배지로 이용하며, 1개월 정도 배양하였다. 이때 배양병 마개에 솜으로 막는 구멍이 있어 외부공기가 순환되는 배양병을 사용하는 경우 기외 순화시 생존율을 높일 수 있다.
The growth regulators Zeatin riboside and IAA (Indole-3-acetic acid) were added at a concentration of 1/10 in the growth medium of the following Table 9 to form roots of the Nelson seedlings after proliferation. Or 1 mg / L of IBA or 2 mg / L of IBA was used as a rooting medium and cultured for about 1 month. At this time, when the culture bottle having a hole in the culture bottle cap is used to circulate the outside air, the survival rate can be increased when the culture is excellently performed.

넬슨 유식물체의 전체 길이가 5 ㎝ 이상으로 충분히 성장한 경우, 뿌리를 형성시키는 발근 배양을 거치지 않고 바로 기외(온실) 순화하는 것이 가능하였다.
When the total length of the Nelson 's plant was more than 5 centimeters, it was possible to purify it directly outdoors (greenhouse) without roots culturing to form roots.

<3-5> ‘넬슨' 품종의 조직배양 묘목 형성을 위한 순화 과정<3-5> Tissue cultivation of 'Nelson' varieties Purification process for seedling formation

발근 배양을 통하여 뿌리가 형성된 유식물체 또는 뿌리가 형성되지는 않았으나 5 ㎝ 이상 충분히 성장한 넬슨 유식물체는 기내(배양실)에서 기외(온실)로 순화Nelson 's plant, which has not been formed with roots through roots cultivation, or which has not yet formed roots but has grown sufficiently for more than 5 ㎝, is cultivated in the air (culture room)

하는 과정을 거쳐야만 완전한 조직배양 묘목의 형태를 갖추게 되었다. 기외에서 순화하는 방법은 상기의 블루골드 품종의 방법과 동일하다.
It is necessary to go through a process to form a complete tissue culture seedlings. The method of purifying out of the air is the same as that of the blue gold variety described above.

블루베리 '넬슨' 품종의 초기 생장점배양 배지 조성Early growth point of blueberry 'Nelson' cultivation Medium composition 성 분 명Name 함 량content WPM+일반MSWPM + Generic MS WPM+변형MSWPM + Modified MS NH₄NO₃ NH ₄ NO ₃ 300.00 mg/L300.00 mg / L 712.50 mg/L712.50 mg / L MgSO₄ MgSO ₄ 180.60 mg/L180.60 mg / L 180.60 mg/L180.60 mg / L KNO₃ KNO ₃ 475.00 mg/L475.00 mg / L 475.00 mg/L475.00 mg / L K₂SO₄ K ₂ SO ₄ 742.50 mg/L742.50 mg / L 742.50 mg/L742.50 mg / L KH₂PO₄ KH ₂ PO ₄ 170.00 mg/L170.00 mg / L 170.00 mg/L170.00 mg / L Ca(NO₃)₂4H₂O _{_{_{Ca (NO 3) 2 4H 2}}} O 289.50 mg/L289.50 mg / L 289.50 mg/L289.50 mg / L CaCl₂ CaCl ₂ 137.38 mg/L137.38 mg / L 137.38 mg/L137.38 mg / L CoCl₂6H₂OCoCl ₂ 6H ₂ O 0.00625 mg/L0.00625 mg / L 0.00625 mg/L0.00625 mg / L ZnSO₄7H₂OZnSO ₄ 7H ₂ O 8.60 mg/L8.60 mg / L 8.60 mg/L8.60 mg / L Na₂MoO₄2H₂ONa ₂ MoO ₄ 2H ₂ O 0.25 mg/L0.25 mg / L 0.25 mg/L0.25 mg / L MnSO₄H₂OMnSO ₄ H ₂ O 20.95 mg/L20.95 mg / L 20.95 mg/L20.95 mg / L H₃BO₃ H ₃ BO ₃ 6.20 mg/L6.20 mg / L 6.20 mg/L6.20 mg / L KIKI 0.2075 mg/L0.2075 mg / L 0.2075 mg/L0.2075 mg / L FeNaEDTAFeNaEDTA 45.875 mg/L45.875 mg / L 45.875 mg/L45.875 mg / L Na₂EDTANa ₂ EDTA 27.97 mg/L27.97 mg / L 27.97 mg/L27.97 mg / L FeSO₄7H₂OFeSO ₄ 7H ₂ O 20.88 mg/L20.88 mg / L 20.88 mg/L20.88 mg / L CuSO₄5H₂OCuSO ₄ 5H ₂ O 0.19 mg/L0.19 mg / L 0.19 mg/L0.19 mg / L Glycine Glycine 0.00 mg/L0.00 mg / L 0.50 mg/L0.50 mg / L myo-Inositolmyo-Inositol 100.00 mg/L 100.00 mg / L 125.00 mg/L 125.00 mg / L Nicotinic acidNicotinic acid 1.00 mg/L1.00 mg / L 1.125 mg/L1.125 mg / L Pyridoxine HClPyridoxine HCl 1.00 mg/L1.00 mg / L 1.125 mg/L1.125 mg / L Thiamine HClThiamine HCl 2.00 mg/L2.00 mg / L 2.25 mg/L2.25 mg / L SucroseSucrose 30.00 g/L30.00 g / L 30.00 g/L30.00 g / L Zeatin ribosideZeatin riboside 2.00 mg/L2.00 mg / L 2.00 mg/L2.00 mg / L IAAIAA 1.00 mg/L1.00 mg / L 1.00 mg/L1.00 mg / L AgarAgar 6.00 g/L6.00 g / L 6.00 g/L6.00 g / L 배지의 pHThe pH of the medium 5.05.0 5.05.0

블루베리‘넬슨' 품종의 배양 8주차 신초분화 특성Cultivation of Blueberry 'Nelson' Varieties 신초분화율(%)Differentiation rate of shoots (%) 신초수(개/plantlet)Number of plantlets 신초장(㎜)New plant length (mm) 76.1±3.976.1 ± 3.9 1.0±0.01.0 ± 0.0 12.9±1.812.9 ± 1.8

블루베리 '넬슨' 품종의 증식 배양 배지 조성Growth culture medium composition of blueberry 'Nelson' varieties 성 분 명Name 함 량content WPM+일반MSWPM + Generic MS WPM+변형MSWPM + Modified MS NH₄NO₃ NH ₄ NO ₃ 300.00 mg/L300.00 mg / L 1950.00 mg/L1950.00 mg / L MgSO₄ MgSO ₄ 180.60 mg/L180.60 mg / L 180.60 mg/L180.60 mg / L KNO₃ KNO ₃ 475.00 mg/L475.00 mg / L 475.00 mg/L475.00 mg / L K₂SO₄ K ₂ SO ₄ 742.50 mg/L742.50 mg / L 742.50 mg/L742.50 mg / L KH₂PO₄ KH ₂ PO ₄ 170.00 mg/L170.00 mg / L 170.00 mg/L170.00 mg / L Ca(NO₃)₂4H₂O _{_{_{Ca (NO 3) 2 4H 2}}} O 289.50 mg/L289.50 mg / L 289.50 mg/L289.50 mg / L CaCl₂ CaCl ₂ 137.38 mg/L137.38 mg / L 137.38 mg/L137.38 mg / L CoCl₂6H₂OCoCl ₂ 6H ₂ O 0.00625 mg/L0.00625 mg / L 0.00625 mg/L0.00625 mg / L ZnSO₄7H₂OZnSO ₄ 7H ₂ O 8.60 mg/L8.60 mg / L 8.60 mg/L8.60 mg / L Na₂MoO₄2H₂ONa ₂ MoO ₄ 2H ₂ O 0.25 mg/L0.25 mg / L 0.25 mg/L0.25 mg / L MnSO₄H₂OMnSO ₄ H ₂ O 20.95 mg/L20.95 mg / L 20.95 mg/L20.95 mg / L H₃BO₃ H ₃ BO ₃ 6.20 mg/L6.20 mg / L 6.20 mg/L6.20 mg / L KIKI 0.2075 mg/L0.2075 mg / L 0.2075 mg/L0.2075 mg / L FeNaEDTAFeNaEDTA 45.875 mg/L45.875 mg / L 45.875 mg/L45.875 mg / L Na₂EDTANa ₂ EDTA 27.97 mg/L27.97 mg / L 27.97 mg/L27.97 mg / L FeSO₄7H₂OFeSO ₄ 7H ₂ O 20.88 mg/L20.88 mg / L 20.88 mg/L20.88 mg / L CuSO₄5H₂OCuSO ₄ 5H ₂ O 0.19 mg/L0.19 mg / L 0.19 mg/L0.19 mg / L Glycine Glycine 0.00 mg/L0.00 mg / L 0.50 mg/L0.50 mg / L myo-Inositolmyo-Inositol 150.00 mg/L 150.00 mg / L 250.00 mg/L 250.00 mg / L Nicotinic acidNicotinic acid 1.00 mg/L1.00 mg / L 1.50 mg/L1.50 mg / L Pyridoxine HClPyridoxine HCl 1.00 mg/L1.00 mg / L 1.50 mg/L1.50 mg / L Thiamine HClThiamine HCl 2.00 mg/L2.00 mg / L 3.00 mg/L3.00 mg / L SucroseSucrose 30.00 g/L30.00 g / L 30.00 g/L30.00 g / L Zeatin ribosideZeatin riboside 2.00 mg/L2.00 mg / L 2.00 mg/L2.00 mg / L IAAIAA 1.00 mg/L1.00 mg / L 1.00 mg/L1.00 mg / L AgarAgar 6.00 g/L6.00 g / L 6.00 g/L6.00 g / L 배지의 pHThe pH of the medium 5.05.0 5.05.0

블루베리‘넬슨' 품종의 배양 14주차 유식물체 특성Cultivation of blueberry 'Nelson' varieties 고사율(%)Mortality rate (%) 신초수(개/plantlet)Number of plantlets 신초장(㎜)New plant length (mm) 21.5±2.521.5 ± 2.5 1.0±0.01.0 ± 0.0 36.3±4.036.3 ± 4.0

‘' 블루레이Blu-ray ' 품종의 생장점 배양방법'How to cultivate the growth point of varieties

<4-1> ‘<4-1> 블루레이Blu-ray ' 품종의 생장점 채취'Harvesting point of varieties

블루베리 '블루레이' 품종의 생장점의 채취방법은 상기의 '웨이마우스' 품종의 방법과 동일하다.The method of harvesting the blueberry 'Bluray' variety is the same as that of the 'Weissmouse' variety described above.

초기 생장점 배양 배지는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w/o vitamins, MBcell社) 배지와 일반 MS(Murashige & Skoog Medium, Mod. No. 4 Basal Salt Mixture, NH₄NO₃ Free, Duchefa社) 배지를 1:1 비율로 혼합한 배지에 생장조정제 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 외 7가지 첨가물을 추가하여 배지를 제조하였다. 초기 생장점배양 배지의 조성 성분은 하기 [표 11]와 같았다.
The initial growth point culture medium was a medium (MS) (Murashige & Skoog Medium, Mod. No. 4 Basal Salt Mixture, NH ₄ NO ₃ Free, Duchefa ) Medium at a ratio of 1: 1 was added to the medium with the addition of growth regulator Zeatin riboside and seven additives. The composition components of the initial growth-point culture medium were as shown in Table 11 below.

<4-2> ‘<4-2> 블루레이Blu-ray ' 품종의 'Varieties of 신초Shinshu (( microshootmicroshoot ) 생성 유도를 위한 초기 생장점 배양) Early growth point cultivation induction

각각의 배지 성분을 혼합 조제한 후 배양용 유리 시험관(지름 25 mm, 높이 150 mm)에 10 mL씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균하여 사용하였다. 배지가 든 유리 시험관에 생장점을 하나씩 치상하였으며, 25±1℃로 유지되는 배양실에서 명조건(2,000~3,000 lux, 16시간 일장)으로 1 ~ 2개월 정도 배양하였다. 배양 8주차 신초형성 특성은 하기 [표 12]와 같았다.
Each of the media components was mixed and prepared, and 10 mL of each was dispensed into a glass test tube for culture (25 mm in diameter, 150 mm in height) and sterilized at 121 ° C for 15 minutes. Growth points were gauged one by one on a glass test tube with a medium and cultured for 1-2 months in a culture room maintained at 25 ± 1 ° C under light conditions (2,000 ~ 3,000 lux, 16 hours per day). The shoot formation characteristics at 8th week of culture were as shown in Table 12 below.

<4-3> ‘블루레이' 품종의 <4-3> 'Blu-ray' varieties 다신초Rechincho (( multimulti -- shootshoot ) 생성 유도를 위한 증식 배양) Growth culture for induction of production

초기 배양과정에서 각각의 배지에 치상된 생장점은 1 ~ 2개월 정도 배양기간이 지나면 신초가 형성되는데, 이때 신초의 생장촉진을 위하여 하기 [표 11]의 초기 생장점배양 배지로 1회 더 계대(새로 제조한 배지로 배양 식물체를 옮겨주는 작업) 하였다. 3 ~ 4주 후 신초가 성장하여 신초장(shoot length)이 1 ~2 ㎝ 정도이면 하기 [표 11]의 증식 배양 배지에 계대하였으며, 신초(shoot)가 어느 정도 자라 신초(shoot length)가 2 ㎝ 이상이 되면 배양 용기를 유리 시험관(지름 25 mm, 높이 150 mm)에서 배양병(외경 81 mm, 높이 132 mm)으로 바꾸어 1 ~ 2회 더 계대하여 유식물체(plantlet, 조직배양 기술로 재생한 어린 식물체) 형성을 유도하였다. 이때 다신초(multi-shoot)가 유도되면 유식물체의 기부(유식물체 맨 아랫부분)를 분할하여 유식물체의 개수를 늘리는 증식 작업을 함께 수행하였다. 배양 14주차 유식물체 특성은 하기 [표 13]과 같았다.
In the initial culturing, shoots are formed after 1 to 2 months of incubation period. In order to accelerate the growth of the shoots, the shoots are transferred to the initial growth point culture medium of the following [Table 11] And transferring the cultured plants to the prepared medium). After 3 to 4 weeks, growth of shoots was carried out in the growth culture medium of Table 11 below when the shoot length was about 1 to 2 cm, and the shoot length was increased to about 2 ㎝, the culture container was changed to a culture bottle (outer diameter 81 mm, height 132 mm) in a glass test tube (diameter 25 mm, height 150 mm) Young plants). At this time, when multi-shoot was induced, the proliferation work was carried out by dividing the base of the seedling plant (the lower part of the seedling plant) to increase the number of seedling plants. The characteristics of the 14th planting of the cultivated plants were as shown in Table 13 below.

증식 배양 배지는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w/o vitamins, MBcell社) 배지와 일반 MS(Murashige & Skoog Medium, Mod. No. 4 Basal Salt Mixture, NH₄NO₃ Free, Duchefa社) 배지를 1:1 비율로 혼합한 배지에 생장조정제 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 외 7가지 첨가물을 추가하여 배지를 제조하였으며, 그 성분은 하기 [표 11]와 같았다.
The proliferation culture medium was a medium (MS) (Murashige & Skoog Medium, Mod. No. 4 Basal Salt Mixture, NH ₄ NO ₃ Free, Duchefa) supplemented with WPM (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium / The medium was prepared by adding the growth regulator zeatin riboside and seven additives to the medium in which the medium was mixed at a ratio of 1: 1, and the medium was prepared as shown in Table 11 below.

<4-4> ‘<4-4> 블루레이Blu-ray ' 품종의 뿌리 형성 유도를 위한 'For inducing root formation in varieties 발근Rooting 배양 culture

증식 배양을 거친 블루레이 유식물체의 뿌리를 형성시키기 위하여 하기 [표 11]의 증식 배양 배지 조성에서 생장조정제 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside)의 농도를 1/10로 줄이거나 아예 첨가하지 않은 배지에 IBA 1 ㎎/L 또는 2 ㎎/L을 첨가하여 발근 배지로 이용하며, 1개월 정도 배양하였다. 이때 배양병 마개에 솜으로 막는 구멍이 있어 외부공기가 순환되는 배양병을 사용하는 경우 기외 순화시 생존율을 높일 수 있다.
In order to form the roots of the blasted rice blasted plants, the concentration of the growth regulator Zeatin riboside was reduced to 1/10 in the growth culture medium of Table 11, IBA 1 ㎎ / L or 2 ㎎ / L was added to the rooting medium and cultured for about 1 month. At this time, when the culture bottle having a hole in the culture bottle cap is used to circulate the outside air, the survival rate can be increased when the culture is excellently performed.

블루레이 유식물체의 전체 길이가 5 ㎝ 이상으로 충분히 성장한 경우, 뿌리를 형성시키는 발근 배양을 거치지 않고 바로 기외(온실) 순화하는 것이 가능하였다..
When the total length of the Blueray seedlings was grown to 5 cm or more, it was possible to purify the seedlings directly (greenhouse) without roots culturing to form roots.

<4-5> ‘<4-5> 웨이마우스Wei Mouse ' 품종의 조직배양 묘목 형성을 위한 순화 과정'Cultivation of cultivated cultivated seedlings for purification process

발근 배양을 통하여 뿌리가 형성된 유식물체 또는 뿌리가 형성되지는 않았으나 5 ㎝ 이상 충분히 성장한 블루레이 유식물체는 기내(배양실)에서 기외(온실)로 순화하는 과정을 거쳐야만 완전한 조직배양 묘목의 형태를 갖추게 된다. 기외에서 순화하는 방법은 상기의 웨이마우스 품종의 방법과 동일하였다.
The roots of roots were not formed by roots cultivation, but the plants that had not yet formed roots but were fully grown more than 5 ㎝ had to be purified from the inflorescence (culture room) to the outdoors (greenhouse) . The method of purifying in air was the same as that of the above-mentioned Wei-Mousse variety.

블루베리 '블루레이' 품종의 배양 배지 조성Cultivation medium composition of blueberry 'Bluray' varieties 성 분 명Name 함 량content 초기 생장점 배양 배지Initial growth point culture medium 증식 배양 배지Proliferation culture medium NH₄NO₃ NH ₄ NO ₃ 200.00 mg/L200.00 mg / L 200.00 mg/L200.00 mg / L MgSO₄ MgSO ₄ 180.60 mg/L180.60 mg / L 180.60 mg/L180.60 mg / L KNO₃ KNO ₃ 950.00 mg/L950.00 mg / L 950.00 mg/L950.00 mg / L K₂SO₄ K ₂ SO ₄ 495.00 mg/L495.00 mg / L 495.00 mg/L495.00 mg / L KH₂PO₄ KH ₂ PO ₄ 170.00 mg/L170.00 mg / L 170.00 mg/L170.00 mg / L Ca(NO₃)₂4H₂O _{_{_{Ca (NO 3) 2 4H 2}}} O 193.00 mg/L193.00 mg / L 193.00 mg/L193.00 mg / L CaCl₂ CaCl ₂ 202.26 mg/L202.26 mg / L 202.26 mg/L202.26 mg / L CoCl₂6H₂OCoCl ₂ 6H ₂ O 0.0125 mg/L0.0125 mg / L 0.0125 mg/L0.0125 mg / L ZnSO₄7H₂OZnSO ₄ 7H ₂ O 8.60 mg/L8.60 mg / L 8.60 mg/L8.60 mg / L Na₂MoO₄2H₂ONa ₂ MoO ₄ 2H ₂ O 0.25 mg/L0.25 mg / L 0.25 mg/L0.25 mg / L MnSO₄H₂OMnSO ₄ H ₂ O 19.60 mg/L19.60 mg / L 19.60 mg/L19.60 mg / L H₃BO₃ H ₃ BO ₃ 6.20 mg/L6.20 mg / L 6.20 mg/L6.20 mg / L KIKI 0.415 mg/L0.415 mg / L 0.415 mg/L0.415 mg / L FeNaEDTAFeNaEDTA 55.05 mg/L55.05 mg / L 55.05 mg/L55.05 mg / L Na₂EDTANa ₂ EDTA 18.65 mg/L18.65 mg / L 18.65 mg/L18.65 mg / L FeSO₄7H₂OFeSO ₄ 7H ₂ O 13.92 mg/L13.92 mg / L 13.92 mg/L13.92 mg / L CuSO₄5H₂OCuSO ₄ 5H ₂ O 0.13 mg/L0.13 mg / L 0.13 mg/L0.13 mg / L myo-Inositolmyo-Inositol 100.00 mg/L 100.00 mg / L 100.00 mg/L 100.00 mg / L Nicotinic acidNicotinic acid 1.00 mg/L1.00 mg / L 1.00 mg/L1.00 mg / L Pyridoxine HClPyridoxine HCl 1.00 mg/L1.00 mg / L 1.00 mg/L1.00 mg / L Thiamine HClThiamine HCl 2.00 mg/L2.00 mg / L 2.00 mg/L2.00 mg / L SucroseSucrose 30.00 g/L30.00 g / L 30.00 g/L30.00 g / L Zeatin ribosideZeatin riboside 2.00 mg/L2.00 mg / L 2.00 mg/L2.00 mg / L AgarAgar 6.00 g/L6.00 g / L 6.00 g/L6.00 g / L 배지의 pHThe pH of the medium 5.05.0 5.05.0

블루베리‘블루레이' 품종의 배양 8주차 신초분화 특성Cultivation of blueberry 'Bluray' varieties 신초분화율(%)Differentiation rate of shoots (%) 신초수(개/plantlet)Number of plantlets 신초장(㎜)New plant length (mm) 78.1±5.678.1 ± 5.6 1.1±0.11.1 ± 0.1 12.3±0.512.3 ± 0.5

블루베리‘블루레이' 품종의 배양 14주차 유식물체 특성Cultivation of blueberry 'Blu-ray' varieties 고사율(%)Mortality rate (%) 신초수(개/plantlet)Number of plantlets 신초장(㎜)New plant length (mm) 16.8±1.116.8 ± 1.1 1.1±0.11.1 ± 0.1 32.6±2.332.6 ± 2.3

‘' 노스랜드Northland ' 품종의 생장점 배양방법'How to cultivate the growth point of varieties

<5-1> ‘<5-1> 노스랜드Northland ' 품종의 생장점 채취'Harvesting point of varieties

블루베리 '노스랜드' 품종의 생장점의 채취방법은 상기의 '웨이마우스' 품종의 방법과 동일하였다.
The method of harvesting the blueberry 'Northland' variety was the same as that of the 'Weissmouse' variety described above.

<5-2> ‘<5-2> 노스랜드Northland ' 품종의 'Varieties of 신초Shinshu (( microshootmicroshoot ) 생성 유도를 위한 초기 생장점 배양) Early growth point cultivation induction

초기 생장점 배양배지는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w/o vitamins, MBcell社) 배지와 변형 비타민 포함 MS(Murashige & Skoog Medium including Modified Vitamins, Duchefa社) 배지를 3:1 비율로 혼합한 배지에 생장조정제 지아틴(Zeatin) 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 외 7가지 첨가물을 추가하여 배지를 제조하였다. 초기 생장점배양 배지의 조성 성분은 하기 [표 14]와 같았다.
The initial growth point culture medium was prepared by mixing the medium of WPM (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium, MBcell) and the MS containing modified vitamin (Murashige & Skoog Medium including Modified Vitamins, Duchefa) at a ratio of 3: 1 The culture medium was prepared by adding seven additives such as growth regulator Zeatin or Zeatin riboside to the medium. The composition components of the initial growth point culture medium were as shown in Table 14 below.

각각의 배지 성분을 혼합 조제한 후 배양용 유리 시험관(지름 25 mm, 높이 150 mm)에 10 mL씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균하여 사용하였다. 배지가 든 유리 시험관에 생장점을 하나씩 치상하였으며, 25±1℃로 유지되는 배양실에서 명 조건(2,000~3,000 lux, 16시간 일장)으로 1 ~ 2개월 정도 배양하였다. 배양 8주차 신초형성 특성은 하기 [표 15]와 같았다.
Each of the media components was mixed and prepared, and 10 mL of each was dispensed into a glass test tube for culture (25 mm in diameter, 150 mm in height) and sterilized at 121 ° C for 15 minutes. Growth points were gauged one by one on a glass test tube with a medium and cultured for 1-2 months in a culture room maintained at 25 ± 1 ° C under light conditions (2,000 ~ 3,000 lux, 16 hours per day). The shoot formation characteristics at 8th week of culture were as shown in Table 15 below.

<5-3> ‘<5-3> 노스랜드Northland ' 품종의 'Varieties of 다신초Rechincho (( multimulti -- shootshoot ) 생성 유도를 위한 증식 배양) Growth culture for induction of production

초기 배양과정에서 각각의 배지에 치상된 생장점은 1 ~ 2개월 정도 배양기간이 지나면 신초가 형성되는데, 이때 신초의 생장촉진을 위하여 하기 [표 14]의 초기 생장점배양 배지로 1회 더 계대(새로 제조한 배지로 배양 식물체를 옮겨주는 작업) 하였다. 3 ~ 4주 후 신초가 성장하여 신초장(shoot length)이 1 ~ 2 ㎝ 정도이면 하기 [표 16]의 증식 배양 배지에 계대하였으며, 신초(shoot)가 어느 정도 자라 신초장(shoot length)가 2 ㎝ 이상이 되면 배양 용기를 유리 시험관(지름 25 mm, 높이 150 mm)에서 배양병(외경 81 mm, 높이 132 mm)으로 바꾸어 1 ~ 2회 더 계대하여 유식물체(plantlet, 조직배양 기술로 재생한 어린 식물체) 형성을 유도하였다. 이때 다신초(multi-shoot)가 유도되면 유식물체의 기부(유식물체 맨 아랫부분)를 분할하여 유식물체의 개수를 늘리는 증식 작업을 함께 수행하였다. 배양 14주차 유식물체 특성은 하기 [표 17]과 같았다.
In the initial culture stage, shoots are formed after 1 to 2 months of incubation period at the growth point of each medium. In order to accelerate the growth of shoots, the seedlings are transferred once more to the initial growth point culture medium of Table 14 And transferring the cultured plants to the prepared medium). After 3 ~ 4 weeks, the growth of shoots was 1 ~ 2 ㎝, and the shoot length was transferred to the growth culture medium of Table 16 below. The shoot length was increased to some extent When the culture vessel is 2 cm or more, the culture vessel is changed into a culture bottle (outer diameter 81 mm, height 132 mm) in a glass test tube (diameter 25 mm, height 150 mm) One young plant). At this time, when multi-shoot was induced, the proliferation work was carried out by dividing the base of the seedling plant (the lower part of the seedling plant) to increase the number of seedling plants. The characteristics of the 14-well cultivated plants were as shown in Table 17 below.

증식 배양 배지는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w/o vitamins, MBcell社) 배지와 변형 비타민 포함 MS(Murashige & Skoog Medium including Modified Vitamins, Duchefa社) 배지를 3:1 비율로 혼합한 배지에 생장조정제 지아틴(Zeatin) 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 외 7가지 첨가물을 추가하여 배지를 제조하였으며, 그 성분은 하기 [표 16]과 같았다.
The proliferation culture medium was a medium prepared by mixing WPM (Lloyd & McCown Woody Plant Medium with w / o vitamins, MBcell) medium and MS containing modified vitamin (Murashige & Skoog Medium including Modified Vitamins, Duchefa) The medium was prepared by adding seven additives such as growth regulator Zeatin or Zeatin riboside to the medium, and the ingredients were as shown in Table 16 below.

<5-4> ‘<5-4> 노스랜드Northland ' 품종의 뿌리 형성 유도를 위한 'For inducing root formation in varieties 발근Rooting 배양 culture

증식 배양을 거친 노스랜드 유식물체의 뿌리를 형성시키기 위하여 [표 16]의 증식 배양 배지 조성에서 지아틴(Zeatin) 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside)의 농도를 1/10로 줄이거나 아예 첨가하지 않은 배지에 IBA 1 ㎎/L 또는 2 ㎎/L을 첨가하여 발근 배지로 이용하며, 1개월 정도 배양하였다. 이때 배양병 마개에 솜으로 막는 구멍이 있어 외부공기가 순환되는 배양병을 사용하는 경우 기외 순화시 생존율을 높일 수 있었다.
In order to form the roots of the Northland seedlings which had undergone the proliferation culture, the concentration of zeatin or zeatin riboside was reduced to 1/10 or not added at all in the growth culture medium of Table 16 IBA 1 ㎎ / L or 2 ㎎ / L was added to the medium, which was used as a rooting medium and cultured for about 1 month. At this time, the survival rate was improved when the culturing bottle was used for culture of the external air circulation.

노스랜드 유식물체의 전체 길이가 5 ㎝ 이상으로 충분히 성장한 경우, 뿌리를 형성시키는 발근 배양을 거치지 않고 바로 기외(온실) 순화하는 것이 가능하였다.
When the total length of the Northland seedlings was sufficiently grown to 5 cm or more, it was possible to purify the plants outdoors (greenhouse) without roots culturing to form roots.

<5-5> ‘<5-5> 노스랜드Northland ' 품종의 조직배양 묘목 형성을 위한 순화 과정'Cultivation of cultivated cultivated seedlings for purification process

발근 배양을 통하여 뿌리가 형성된 유식물체 또는 뿌리가 형성되지는 않았으나 5 ㎝ 이상 충분히 성장한 노스랜드 유식물체는 기내(배양실)에서 기외(온실)로 순화하는 과정을 거쳐야만 완전한 조직배양 묘목의 형태를 갖추게 되었다. 기외에서 순화하는 방법은 상기의 웨이마우스 품종의 방법과 동일하였다.
Nursery plants that did not form roots through roots cultivation or roots, but which had grown well over 5 ㎝, had to be purified from the inflorescence (culture room) to the outdoors (greenhouse) to form a complete tissue culture seedling . The method of purifying in air was the same as that of the above-mentioned Wei-Mousse variety.

블루베리 '노스랜드' 품종의 초기 생장점 배양 배지 조성Early growth point of blueberry 'Northland' varieties Culture medium composition 성 분 명
Name
함 량content NH₄NO₃ NH ₄ NO ₃ 712.50 mg/L712.50 mg / L MgSO₄ MgSO ₄ 180.60 mg/L180.60 mg / L KNO₃ KNO ₃ 950.00 mg/L950.00 mg / L K₂SO₄ K ₂ SO ₄ 475.00 mg/L475.00 mg / L KH₂PO₄ KH ₂ PO ₄ 170.00 mg/L170.00 mg / L Ca(NO₃)₂4H₂O _{_{_{Ca (NO 3) 2 4H 2}}} O 289.50 mg/L289.50 mg / L CaCl₂ CaCl ₂ 137.38 mg/L137.38 mg / L CoCl₂6H₂OCoCl ₂ 6H ₂ O 0.00625 mg/L0.00625 mg / L ZnSO₄7H₂OZnSO ₄ 7H ₂ O 8.60 mg/L8.60 mg / L Na₂MoO₄2H₂ONa ₂ MoO ₄ 2H ₂ O 0.25 mg/L0.25 mg / L MnSO₄H₂OMnSO ₄ H ₂ O 20.95 mg/L20.95 mg / L H₃BO₃ H ₃ BO ₃ 6.20 mg/L6.20 mg / L KIKI 0.2075 mg/L0.2075 mg / L FeNaEDTAFeNaEDTA 45.875 mg/L45.875 mg / L Na₂EDTANa ₂ EDTA 27.97 mg/L27.97 mg / L FeSO₄7H₂OFeSO ₄ 7H ₂ O 20.88 mg/L20.88 mg / L CuSO₄5H₂OCuSO ₄ 5H ₂ O 0.19 mg/L0.19 mg / L myo-Inositolmyo-Inositol 0.50 mg/L 0.50 mg / L Nicotinic acidNicotinic acid 1.125 mg/L1.125 mg / L Pyridoxine HClPyridoxine HCl 1.125 mg/L1.125 mg / L Thiamine HClThiamine HCl 2.25 mg/L2.25 mg / L SucroseSucrose 30.00 g/L30.00 g / L Zeatin ribosideZeatin riboside 2.00 mg/L2.00 mg / L AgarAgar 6.00 g/L6.00 g / L 배지의 pHThe pH of the medium 5.05.0

블루베리‘노스랜드' 품종의 배양 8주차 신초분화 특성Cultivation of blueberry 'Northland' varieties 신초분화율(%)Differentiation rate of shoots (%) 신초수(개/plantlet)Number of plantlets 신초장(㎜)New plant length (mm) 78.7±3.478.7 ± 3.4 1.2±0.11.2 ± 0.1 15.2±1.015.2 ± 1.0

블루베리 '노스랜드' 품종의 증식 배양 배지 조성Growth culture medium composition of blueberry 'Northland' variety 성 분 명
Name
함 량content NH₄NO₃ NH ₄ NO ₃ 712.50 mg/L712.50 mg / L MgSO₄ MgSO ₄ 180.60 mg/L180.60 mg / L KNO₃ KNO ₃ 950.00 mg/L950.00 mg / L K₂SO₄ K ₂ SO ₄ 475.00 mg/L475.00 mg / L KH₂PO₄ KH ₂ PO ₄ 170.00 mg/L170.00 mg / L Ca(NO₃)₂4H₂O _{_{_{Ca (NO 3) 2 4H 2}}} O 289.50 mg/L289.50 mg / L CaCl₂ CaCl ₂ 137.38 mg/L137.38 mg / L CoCl₂6H₂OCoCl ₂ 6H ₂ O 0.00625 mg/L0.00625 mg / L ZnSO₄7H₂OZnSO ₄ 7H ₂ O 8.60 mg/L8.60 mg / L Na₂MoO₄2H₂ONa ₂ MoO ₄ 2H ₂ O 0.25 mg/L0.25 mg / L MnSO₄H₂OMnSO ₄ H ₂ O 20.95 mg/L20.95 mg / L H₃BO₃ H ₃ BO ₃ 6.20 mg/L6.20 mg / L KIKI 0.2075 mg/L0.2075 mg / L FeNaEDTAFeNaEDTA 45.875 mg/L45.875 mg / L Na₂EDTANa ₂ EDTA 27.97 mg/L27.97 mg / L FeSO₄7H₂OFeSO ₄ 7H ₂ O 20.88 mg/L20.88 mg / L CuSO₄5H₂OCuSO ₄ 5H ₂ O 0.19 mg/L0.19 mg / L myo-Inositolmyo-Inositol 0.50 mg/L 0.50 mg / L Nicotinic acidNicotinic acid 1.125 mg/L1.125 mg / L Pyridoxine HClPyridoxine HCl 1.125 mg/L1.125 mg / L Thiamine HClThiamine HCl 2.25 mg/L2.25 mg / L SucroseSucrose 30.00 g/L30.00 g / L Zeatin ribosideZeatin riboside 2.00 mg/L2.00 mg / L AgarAgar 6.00 g/L6.00 g / L 배지의 pHThe pH of the medium 5.05.0

블루베리‘노스랜드' 품종의 배양 14주차 유식물체 특성Cultivation of Blueberry 'Northland' Varieties 고사율(%)Mortality rate (%) 신초수(개/plantlet)Number of plantlets 신초장(㎜)New plant length (mm) 13.8±1.313.8 ± 1.3 1.4±0.21.4 ± 0.2 36.9±2.836.9 ± 2.8

‘스파르탄' 품종의 생장점 배양방법How to grow spartan varieties

<6-1> ‘<6-1> 스파르탄Spartan ' 품종의 생장점 채취'Harvesting point of varieties

블루베리 '스파르탄' 품종의 생장점의 채취방법은 상기의 웨이마우스 품종의 방법과 동일하다.
The method of harvesting the growth point of the blueberry 'Spartan' variety is the same as that of the Weisserl variety described above.

<6-2> ‘<6-2> 스파르탄Spartan ' 품종의 'Varieties of 신초Shinshu (( microshootmicroshoot ) 생성 유도를 위한 초기 생장점 배양) Early growth point cultivation induction

초기 생장점 배양배지는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w/o vitamins, MBcell社) 배지와 변형 비타민 포함 MS(Murashige & Skoog Medium including Modified Vitamins, Duchefa社) 배지를 3:1 비율로 혼합한 배지에 생장조정제 지아틴(Zeatin) 및 IAA(Indole-3-acetic acid) 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 외 7가지 첨가물을 추가하여 배지를 제조하였다. 초기 생장점배양 배지의 조성 성분은 하기 [표 18]과 같았다.
The initial growth point culture medium was prepared by mixing the medium of WPM (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium, MBcell) and the MS containing modified vitamin (Murashige & Skoog Medium including Modified Vitamins, Duchefa) at a ratio of 3: 1 The culture medium was prepared by adding seven additives such as growth regulator Zeatin and IAA (Indole-3-acetic acid) or Zeatin riboside to the medium. The composition components of the initial growth point culture medium were as shown in Table 18 below.

각각의 배지 성분을 혼합 조제한 후 배양용 유리 시험관(지름 25 mm, 높이 150 mm)에 10 mL씩 분주하여 121℃에서 15분간 멸균하여 사용하였다. 배지가 든 유리 시험관에 생장점을 하나씩 치상하였으며, 25±1℃로 유지되는 배양실에서 명조건(2,000~3,000 lux, 16시간 일장)으로 1 ~ 2개월 정도 배양하였다. 배양 8주차 신초형성 특성은 하기 [표 19]와 같았다.
Each of the media components was mixed and prepared, and 10 mL of each was dispensed into a glass test tube for culture (25 mm in diameter, 150 mm in height) and sterilized at 121 ° C for 15 minutes. Growth points were gauged one by one on a glass test tube with a medium and cultured for 1-2 months in a culture room maintained at 25 ± 1 ° C under light conditions (2,000 ~ 3,000 lux, 16 hours per day). The shoot formation characteristics at 8th week of culture were as shown in Table 19 below.

<6-3> ‘<6-3> 스파르탄Spartan ' 품종의 'Varieties of 다신초Rechincho (( multimulti -- shootshoot ) 생성 유도를 위한 증식 배양) Growth culture for induction of production

초기 배양과정에서 각각의 배지에 치상된 생장점은 1 ~ 2개월 정도 배양기간이 지나면 신초가 형성되는데, 이때 신초의 생장촉진을 위하여 하기 [표 18]의 초기 생장점배양 배지로 1회 더 계대(새로 제조한 배지로 배양 식물체를 옮겨주는 작업) 하였다. 3 ~ 4 주 후 신초가 성장하여 신초장(shoot length)이 1 ~ 2℃ 정도이면 하기[표 20]의 증식 배양 배지에 계대하였으며, 신초(shoot)가 어느 정도 자라 신초장(shoot length)이 2㎝ 이상이 되면 배양 용기를 유리 시험관(지름 25 mm, 높이 150 mm)에서 배양병(외경 81 mm, 높이 132 mm)으로 바꾸어 1 ~ 2회 더 계대하여 유식물체(plantlet, 조직배양 기술로 재생한 어린 식물체) 형성을 유도하였다. 이때 다신초(multi-shoot)가 유도되면 유식물체의 기부(유식물체 맨 아랫부분)를 분할하여 유식물체의 개수를 늘리는 증식 작업을 함께 수행하였다. 배양 14주차 유식물체 특성은 하기 [표 21]와 같았다.
In the initial culturing process, shoots are formed after 1 to 2 months incubation period in each of the mediums. In order to accelerate the growth of shoots, the seedlings are transferred to the initial growth point culture medium of Table 18 And transferring the cultured plants to the prepared medium). After 3 to 4 weeks, shoot shoots were grown and propagated in the growth medium of Table 20 below if the shoot length was about 1 to 2 ° C. The shoot length of shoot shoots When the culture container is 2 cm or more, the culture container is changed from a glass test tube (diameter 25 mm, height 150 mm) to a culture bottle (outer diameter 81 mm, height 132 mm) One young plant). At this time, when multi-shoot was induced, the proliferation work was carried out by dividing the base of the seedling plant (the lower part of the seedling plant) to increase the number of seedling plants. The characteristics of the 14th planting of the cultivated plants were as shown in Table 21 below.

증식 배양 배지는 WPM(Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium w/o vitamins, MBcell社) 배지와 변형 비타민 포함 MS(Murashige & Skoog Medium including Modified Vitamins, Duchefa社) 배지를 3:1 비율로 혼합한 배지에 생장조정제 지아틴(Zeatin) 및 IAA(Indole-3-acetic acid) 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside) 외 7가지 첨가물을 추가하여 배지를 제조하였으며, 그 성분은 하기 [표 20]과 같았다.
The proliferation culture medium was a medium prepared by mixing WPM (Lloyd & McCown Woody Plant Medium with w / o vitamins, MBcell) medium and MS containing modified vitamin (Murashige & Skoog Medium including Modified Vitamins, Duchefa) The culture medium was prepared by adding 7 kinds of additives such as growth regulator Zeatin and IAA (Indole-3-acetic acid) or Zeatin riboside, and the ingredients were as shown in Table 20 below.

<6-4> ‘<6-4> 스파르탄Spartan ' 품종의 뿌리 형성 유도를 위한 'For inducing root formation in varieties 발근Rooting 배양 culture

증식 배양을 거친 스파르탄 유식물체의 뿌리를 형성시키기 위하여 [표 20]의 증식 배양 배지 조성에서 지아틴(Zeatin) 및 IAA(Indole-3-acetic acid) 또는 지아틴 리보사이드(Zeatin riboside)의 농도를 1/10로 줄이거나 아예 첨가하지 않은 배지에 IBA 1 ㎎/L 또는 2 ㎎/L을 첨가하여 발근 배지로 이용하며, 1개월 정도 배양하였다. 이때 배양병 마개에 솜으로 막는 구멍이 있어 외부공기가 순환되는 배양병을 사용하는 경우 기외 순화시 생존율을 높일 수 있었다.
In order to form roots of Spartan-like plants that had undergone proliferation culture, the concentration of Zeatin and IAA (Indole-3-acetic acid) or Zeatin riboside in the growth culture medium of Table 20 IBA 1 ㎎ / L or 2 ㎎ / L was added to the medium, which had been reduced to 1/10 or not added at all, and used as rooting medium for about 1 month. At this time, the survival rate was improved when the culturing bottle was used for culture of the external air circulation.

스파르탄 유식물체의 전체 길이가 5 ㎝ 이상으로 충분히 성장한 경우, 뿌리를 형성시키는 발근 배양을 거치지 않고 바로 기외(온실) 순화하는 것이 가능하였다.
When the total length of the Spartanaceae plant was sufficiently grown to 5 cm or more, it was possible to purify the plant outdoors (greenhouse) without roots culturing to form roots.

<6-5> ‘<6-5> 스파르탄Spartan ' 품종의 조직배양 묘목 형성을 위한 순화 과정'Cultivation of cultivated cultivated seedlings for purification process

발근 배양을 통하여 뿌리가 형성된 유식물체 또는 뿌리가 형성되지는 않았으나 5 ㎝ 이상 충분히 성장한 스파르탄 유식물체는 기내(배양실)에서 기외(온실)로 순화하는 과정을 거쳐야만 완전한 조직배양 묘목의 형태를 갖추게 되었다. 기외에서 순화하는 방법은 상기의 웨이마우스 품종의 방법과 동일하였다.
The roots of roots were not formed by roots cultivation, but Spartanicum plants which had not yet formed roots but fully grown more than 5 ㎝ had to be purified from the inflorescence (culture room) to the outdoors (greenhouse) to form a complete tissue culture seedling. The method of purifying in air was the same as that of the above-mentioned Wei-Mousse variety.

블루베리 '스파르탄' 품종의 초기 생장점 배양 배지 조성Early growth point of blueberry 'Spartan' cultivar Culture medium composition 성 분 명Name 함 량content WPM+변형MS 1WPM + variant MS 1 WPM+변형MS 2WPM + Transformation MS 2 NH₄NO₃ NH ₄ NO ₃ 712.50 mg/L712.50 mg / L 712.50 mg/L712.50 mg / L MgSO₄ MgSO ₄ 180.60 mg/L180.60 mg / L 180.60 mg/L180.60 mg / L KNO₃ KNO ₃ 495.00 mg/L495.00 mg / L 475.00 mg/L475.00 mg / L K₂SO₄ K ₂ SO ₄ 742.50 mg/L742.50 mg / L 742.00 mg/L742.00 mg / L KH₂PO₄ KH ₂ PO ₄ 170.00 mg/L170.00 mg / L 170.00 mg/L170.00 mg / L Ca(NO₃)₂4H₂O _{_{_{Ca (NO 3) 2 4H 2}}} O 289.50 mg/L289.50 mg / L 289.50 mg/L289.50 mg / L CaCl₂ CaCl ₂ 137.38 mg/L137.38 mg / L 137.38 mg/L137.38 mg / L CoCl₂6H₂OCoCl ₂ 6H ₂ O 0.00625 mg/L0.00625 mg / L 0.00625 mg/L0.00625 mg / L ZnSO₄7H₂OZnSO ₄ 7H ₂ O 8.60 mg/L8.60 mg / L 8.60 mg/L8.60 mg / L Na₂MoO₄2H₂ONa ₂ MoO ₄ 2H ₂ O 0.25 mg/L0.25 mg / L 0.25 mg/L0.25 mg / L MnSO₄H₂OMnSO ₄ H ₂ O 20.95 mg/L20.95 mg / L 20.95 mg/L20.95 mg / L H₃BO₃ H ₃ BO ₃ 6.20 mg/L6.20 mg / L 6.20 mg/L6.20 mg / L KIKI 0.2075 mg/L0.2075 mg / L 0.2075 mg/L0.2075 mg / L FeNaEDTAFeNaEDTA 45.875 mg/L45.875 mg / L 45.875 mg/L45.875 mg / L Na₂EDTANa ₂ EDTA 27.97 mg/L27.97 mg / L 27.97 mg/L27.97 mg / L FeSO₄7H₂OFeSO ₄ 7H ₂ O 20.88 mg/L20.88 mg / L 20.88 mg/L20.88 mg / L CuSO₄5H₂OCuSO ₄ 5H ₂ O 0.19 mg/L0.19 mg / L 0.19 mg/L0.19 mg / L GlycineGlycine 0.50 mg/L0.50 mg / L 0.50 mg/L0.50 mg / L myo-Inositolmyo-Inositol 125.00 mg/L 125.00 mg / L 125.00 mg/L 125.00 mg / L Nicotinic acidNicotinic acid 1.125 mg/L1.125 mg / L 1.125 mg/L1.125 mg / L Pyridoxine HClPyridoxine HCl 1.125 mg/L1.125 mg / L 1.125 mg/L1.125 mg / L Thiamine HClThiamine HCl 2.25 mg/L2.25 mg / L 2.25 mg/L2.25 mg / L SucroseSucrose 30.00 g/L30.00 g / L 30.00 g/L30.00 g / L ZeatinZeatin 2.00 mg/L2.00 mg / L 0.00 mg/L0.00 mg / L Zeatin ribosideZeatin riboside 0.00 mg/L0.00 mg / L 2.00 mg/L2.00 mg / L IAAIAA 1.00 mg/L1.00 mg / L 0.00 mg/L0.00 mg / L AgarAgar 6.00 g/L6.00 g / L 6.00 g/L6.00 g / L 배지의 pHThe pH of the medium 5.05.0 5.05.0

블루베리‘스파르탄' 품종의 배양 8주차 신초분화 특성Cultivation of Blueberry 'Spartan' Varieties 신초분화율(%)Differentiation rate of shoots (%) 신초수(개/plantlet)Number of plantlets 신초장(㎜)New plant length (mm) 76.8±2.576.8 ± 2.5 1.1±0.01.1 ± 0.0 14.6±0.414.6 ± 0.4

블루베리 '스파르탄' 품종의 증식 배양 배지 조성Growth culture medium composition of blueberry 'Spartan' varieties 성 분 명Name 함 량content WPM+변형MS 1WPM + variant MS 1 WPM+변형MS 2WPM + Transformation MS 2 NH₄NO₃ NH ₄ NO ₃ 712.50 mg/L712.50 mg / L 712.50 mg/L712.50 mg / L MgSO₄ MgSO ₄ 180.60 mg/L180.60 mg / L 180.60 mg/L180.60 mg / L KNO₃ KNO ₃ 495.00 mg/L495.00 mg / L 475.00 mg/L475.00 mg / L K₂SO₄ K ₂ SO ₄ 742.50 mg/L742.50 mg / L 742.00 mg/L742.00 mg / L KH₂PO₄ KH ₂ PO ₄ 170.00 mg/L170.00 mg / L 170.00 mg/L170.00 mg / L Ca(NO₃)₂4H₂O _{_{_{Ca (NO 3) 2 4H 2}}} O 289.50 mg/L289.50 mg / L 289.50 mg/L289.50 mg / L CaCl₂ CaCl ₂ 137.38 mg/L137.38 mg / L 137.38 mg/L137.38 mg / L CoCl₂6H₂OCoCl ₂ 6H ₂ O 0.00625 mg/L0.00625 mg / L 0.00625 mg/L0.00625 mg / L ZnSO₄7H₂OZnSO ₄ 7H ₂ O 8.60 mg/L8.60 mg / L 8.60 mg/L8.60 mg / L Na₂MoO₄2H₂ONa ₂ MoO ₄ 2H ₂ O 0.25 mg/L0.25 mg / L 0.25 mg/L0.25 mg / L MnSO₄H₂OMnSO ₄ H ₂ O 20.95 mg/L20.95 mg / L 20.95 mg/L20.95 mg / L H₃BO₃ H ₃ BO ₃ 6.20 mg/L6.20 mg / L 6.20 mg/L6.20 mg / L KIKI 0.2075 mg/L0.2075 mg / L 0.2075 mg/L0.2075 mg / L FeNaEDTAFeNaEDTA 45.875 mg/L45.875 mg / L 45.875 mg/L45.875 mg / L Na₂EDTANa ₂ EDTA 27.97 mg/L27.97 mg / L 27.97 mg/L27.97 mg / L FeSO₄7H₂OFeSO ₄ 7H ₂ O 20.88 mg/L20.88 mg / L 20.88 mg/L20.88 mg / L CuSO₄5H₂OCuSO ₄ 5H ₂ O 0.19 mg/L0.19 mg / L 0.19 mg/L0.19 mg / L GlycineGlycine 0.50 mg/L0.50 mg / L 0.50 mg/L0.50 mg / L myo-Inositolmyo-Inositol 175.00 mg/L 175.00 mg / L 175.00 mg/L 175.00 mg / L Nicotinic acidNicotinic acid 1.125 mg/L1.125 mg / L 1.125 mg/L1.125 mg / L Pyridoxine HClPyridoxine HCl 1.125 mg/L1.125 mg / L 1.125 mg/L1.125 mg / L Thiamine HClThiamine HCl 2.25 mg/L2.25 mg / L 2.25 mg/L2.25 mg / L SucroseSucrose 30.00 g/L30.00 g / L 30.00 g/L30.00 g / L ZeatinZeatin 2.00 mg/L2.00 mg / L 0.00 mg/L0.00 mg / L Zeatin ribosideZeatin riboside 0.00 mg/L0.00 mg / L 2.00 mg/L2.00 mg / L IAAIAA 1.00 mg/L1.00 mg / L 0.00 mg/L0.00 mg / L AgarAgar 6.00 g/L6.00 g / L 6.00 g/L6.00 g / L 배지의 pHThe pH of the medium 5.05.0 5.05.0

블루베리‘스파르탄' 품종의 배양 14주차 유식물체 특성Cultivation of blueberry 'Spartan' varieties 고사율(%)Mortality rate (%) 신초수(개/plantlet)Number of plantlets 신초장(㎜)New plant length (mm) 14.5±1.814.5 ± 1.8 1.2±0.11.2 ± 0.1 33.4±3.533.4 ± 3.5

Claims

Plant Formation of a Blueberry Way Mouse (weymouth) Varieties Using a Growth Point Culture Including the Following Steps:
(a) The growth of the Weymouth cultivars was investigated by adding 1 to 3 mg / L Zeatin riboside, 0.5-1.5 mg / L IAA (Indole Acetic Acid), and ferric sodium salt (FeNa-EDTA ), 35 to 37 mg / L, Myo-Inositol 98 to 102 mg / L, Thiamine HCl 1 to 3 mg / L, Nicotinic acid 0.5 to 1.5 mg / L, pyridoxine HCl Forming shoots in a medium containing 0.5 to 1.5 mg / L of Pyridoxine HCl, 20 to 40 g / L of Sucrose and 5 to 7 g / L of Agar without a callus formation process; And
(b) the shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, 0.5 to 1.5 mg / L of IAA (Indole Acetic Acid), 54 to 56 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA) L-carnitine is used as an active ingredient for the treatment of myo-inositol (140-160 mg / L), thiamine HCl 1-3-3 mg / L, nicotinic acid 0.5-1.5 mg / L, pyridoxine HCl 0.5-1.5 mg / L, sucrose 20 to 40 g / L and agar 5 to 7 g / L to induce hyperosinosis.

Plant Formation of Blueberry Duke Varieties Using Growth Point Culture Including the Following Steps:
(a) The growth point of the blueberry Duke varieties was determined by adding 1 to 3 mg / L of Zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA), Myo-Inositol L of pyrodine hydrochloride, 0.5 to 1.5 mg / L of pyridoxine HCl, 1 to 3 mg / L of thiamine HCl, 1 to 3 mg / L of nicotinic acid, 98 to 102 mg / 20 to 40 g / L and Agar 5 to 7 g / L to form shoots without undergoing callus formation; And
(b) the shoots are treated with 1 to 3 mg / L zeatin riboside,
(FeNa-EDTA) 54 to 56 mg / L, Myo-Inositol 140 to 160 mg / L, Thiamine HCl 1 to 3 mg / L, Nicotinic acid 0.5 to 1.5 mg / L, 0.5 to 1.5 mg / L of pyridoxine HCl, 20 to 40 g / L of sucrose and 5 to 7 g / L of agar to induce hyperosinosis .

Plant Formation of Blueberry Nelson Varieties Using a Growth Point Culture Including the Following Steps:
(a) Growth point of blueberry Nelson varieties was determined by adding 1 to 3 mg / L Zeatin riboside, 0.5-1.5 mg / L IAA (Indole Acetic Acid), ferric sodium salt (FeNa-EDTA) 35 to 37 mg / L, Myo-Inositol 98 to 102 mg / L, Thiamine HCl, Pyridoxine HCl 0.5 to 1.5 mg / L, Sucrose 20 to 40 g / L and agar 5 to 7 g / L to form shoots without a callus formation process; And
(b) The shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, 0.5 to 1.5 mg / L of IAA (Indole Acetic Acid), 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA) L-carnitine is used as an active ingredient for the treatment of myo-inositol (140-160 mg / L), thiamine HCl 1-3-3 mg / L, nicotinic acid 0.5-1.5 mg / L, pyridoxine HCl 0.5-1.5 mg / L, sucrose 20 to 40 g / L and agar 5 to 7 g / L to induce hyperosinosis.

Plant Formation of Blueberry Blueray Varieties Using Growth Point Culture Including the Following Steps:
(a) The growth point of the blueberry blueray cultivar was determined by adding 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA), Myo- Inositol 98 to 102 mg / L, Thiamine HCl 1-3 to 2 mg / L, Nicotinic acid 0.5 to 1.5 mg / L, Pyridoxine HCl 0.5 to 1.5 mg / L, Sucrose ) 20 to 40 g / L and agar 5 to 7 g / L to form shoots without a callus formation process; And
(b) The shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA), 140 to 160 mg / L of Myo-Inositol L of thiamine HCl, 0.5 to 1.5 mg / L of nicotinic acid, 0.5 to 1.5 mg / L of pyridoxine HCl, 20 to 40 g / L of sucrose, And culturing in a medium containing 5 to 7 g / L of agar to induce hyperosinosis.

Plant Formation of Blueberry Northland Varieties Using a Growth Point Culture Including the Following Steps:
(a) Growth point of blueberry Northland varieties was determined by adding 1 to 3 mg / L of Zeatin, 1-3 mg / L of Zeatin riboside, ferric sodium salt (FeNa-EDTA) (Pyridoxine HCl) was added to the culture medium, followed by incubation at 37 ° C. for 30 minutes, followed by incubation at 37 ° C. for 30 min. In a medium containing 0.5 to 1.5 mg / L of sucrose, 20 to 40 g / L of sucrose and 5 to 7 g / L of agar to form shoots without undergoing callus formation; And
(b) the shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin or 1-3 mg / L of Zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA) Inositol (140-160 mg / L), Thiamine HCl (1-3 mg / L), Nicotinic acid (0.5-1.5 mg / L), Pyridoxine HCl (0.5-0.5 mg / L) , 20 to 40 g / L of sucrose and 5 to 7 g / L of agar to induce hyperosinosis.

Plant Formation of Blueberry Spartan Varieties Using the Growth Stage Culture Including the Following Steps:
(a) Growth point of blueberry Spartan varieties was determined by adding 1 to 3 mg / L of zeatin or 1 to 3 mg / L of zeatin riboside, ferric sodium salt (FeNa-EDTA) 35 L of Pyridoxine HCl (1 mg / L), 1 mg / L of Myo-Inositol, 1 to 3 mg / L of Thiamine HCl, 0.5 to 1.5 mg / L of Nicotinic acid, Culturing in a medium containing 0.5 to 1.5 mg / L of sucrose, 20 to 40 g / L of sucrose and 5 to 7 g / L of agar to form shoots without a callus formation process; And
(b) the shoots were treated with 1 to 3 mg / L of zeatin or 1-3 mg / L of Zeatin riboside, 35 to 37 mg / L of ferric sodium salt (FeNa-EDTA) Inositol (140-160 mg / L), Thiamine HCl (1-3 mg / L), Nicotinic acid (0.5-1.5 mg / L), Pyridoxine HCl (0.5-0.5 mg / L) , 20 to 40 g / L of sucrose and 5 to 7 g / L of agar to induce hyperosinosis.

The method according to claim 1 or 3, further comprising the step of (c):
(c) the hyperhidrosis is treated with 0.1 to 0.3 mg / L of zeatin riboside, 0.05 to 0.15 mg of IAA (Indole Acetic Acid) and 10 mg of indole-3-butyric acid (IBA) 1 To 2 mg / L, to induce roots.

The method according to any one of claims 2 to 4, further comprising the step of (c):
(c) culturing the hyperhidrosis in a medium containing 0.1 to 0.3 mg / L of zeatin riboside or 1 to 2 mg / L of indole-3-butyric acid (IBA) To induce roots.

6. The plant-forming method according to claim 5, further comprising the step (c):
(c) the hyperhidrosis is treated with 0.1 to 0.3 mg / L of Zeatin, 0.1 to 0.3 mg / L of Zeatin riboside and 0.1 to 0.3 mg / L of Indole-3-butyric acid (IBA) 1 to 2 mg / L to induce roots.

7. The plant-forming method according to claim 6, further comprising the step (c):
(c) the hyperhidrosis is treated with 0.1 to 0.3 mg / L of Zeatin, 0.05 to 0.15 mg of IAA (Indole Acetic Acid), 0.1 to 0.3 mg / L of Zeatin riboside, Indole-3-butyric acid (IBA) in a medium containing 1 to 2 mg / L to induce roots.

The method according to claim 1 or 2, wherein the medium of steps (a) and (b) is a WPM medium (Lloyd & McCown Woody Plant Basal Salt Medium).

The method according to any one of claims 3, 5 and 6, wherein the medium of steps (a) and (b) is prepared by mixing WPM medium and MS medium (Murashige & Skoog Medium) And the mixture is used as a mixture.

[5] The method according to claim 4, wherein the medium of steps (a) and (b) is a mixture of WPM medium and MS medium at a ratio of 1: 1.