KR101365207B1 - A tolerogenic dendritic cell for treating myocarditis prepared by using myosin and a preparation method thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포, 이의 제조방법 및 이의 심근염 치료 용도에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 마이오신 및 TNF-α 가 포함된 배지에서 미성숙 수지상 세포를 배양하는 단계를 포함하는 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포의 제조방법, 상기 방법에 의해서 제조된 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포, 및 이를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to immune tolerance dendritic cells for the treatment of myocarditis, a method for preparing the same and a use thereof for the treatment of myocarditis. More specifically, the present invention is a method for producing dendritic cells for the treatment of myocarditis, including the step of culturing immature dendritic cells in a medium containing myosin and TNF-α, immune tolerance for the treatment of myocarditis prepared by the above method Dendritic cells, and pharmaceutical compositions comprising the same.

Description

마이오신을 이용하여 제조된 면역관용 수지상 세포 및 이의 제조 방법 {A tolerogenic dendritic cell for treating myocarditis prepared by using myosin and a preparation method thereof}A tolerogenic dendritic cell for treating myocarditis prepared by using myosin and a preparation method

본 발명은 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포, 이의 제조방법 및 이의 심근염 치료 용도에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명의 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포는, 마이오신 및 TNF-α 가 포함된 배지에서 미성숙 수지상 세포를 배양하여 제조된 것으로, 성숙 수지상 세포와 미성숙 세포의 중간 정도의 표면 표현형 발현을 나타내며, 심근염 동물 모델에서 치료 효과가 확인되었다.
The present invention relates to immune tolerance dendritic cells for the treatment of myocarditis, a method for preparing the same and a use thereof for the treatment of myocarditis. More specifically, the immune tolerant dendritic cells for treating myocarditis of the present invention were prepared by culturing immature dendritic cells in a medium containing myosin and TNF-α, and expressing intermediate surface phenotype between mature dendritic cells and immature cells. Therapeutic effect was confirmed in myocarditis animal model.

수지상 세포는 주로 T 세포에 항원제시 기능을 수행하는 전문적 항원 제시 세포의 일종으로, 림프절, 비장, 흉선, 피부 밑 또는 여러 조직의 세포 간극에서 나뭇가지 모양으로 존재한다. 수지상 세포는 항원을 세포 내부로 흡수하여 MHC (major histocompatibility complex) 클래스 I 복합체 또는 MHC 클래스 II 복합체와 함께 다양한 항원 샘플을 T 세포에 제시함으로써, T 세포 활성화에 중요한 역할을 한다.Dendritic cells are a type of specialized antigen presenting cells that mainly perform antigen presenting function on T cells, and they are in the form of branches in lymphatic, spleen, thymus, subcutaneous or intercellular spaces of various tissues. Dendritic cells play an important role in T cell activation by absorbing antigen into cells and presenting a variety of antigen samples to T cells along with MHC (major histocompatibility complex) class I complex or MHC class II complex.

수지상 세포는 주위에 존재하는 환경적 신호에 종류에 따라 성숙도가 상이한 상태로 분화되어, 미성숙 (immature), 준성숙 (semi-mature) 또는 성숙 (mature) 수지상 세포로 존재한다. 미성숙 수지상 세포는 초기 성숙 단계에서 발견되는 것으로서 세포 간액으로부터 데브리스 (debris)들을 수집하고 제거하는 1차적인 기능을 수행하나, 미성숙 수지상 세포는 발현되는 염증성 사이토카인의 수준이 낮기 때문에 T 세포와 접촉하여도 T 세포를 활성화 시키지 못한다. 반면, 성숙 수지상 세포는 원시 T 세포 (naive T cell)를 활성화시켜 면역반응을 유도할 수 있는 능력을 가진다. 미성숙 수지상 세포가 성숙 수지상 세포로 분화되기 위해서는 다수의 특정 신호에 노출되어 toll-like 수용체가 활성화되어야 하며, 이에 의하여 다수의 공동 자극분자 (co-stimulatory molecule)들과 IL-12와 같은 친-염증성 사이토카인 (pro-inflammatory cytokine)이 상향조절되고 조직으로부터 림프절로 이동하게 되며, 성숙 수지상 세포의 형태적 특징인 손가락 같은 돌기들이 나타난다.Dendritic cells are differentiated in different states depending on the kind of environmental signals present around them, and exist as immature, semi-mature or mature dendritic cells. Immature dendritic cells are found in the early stages of maturation and serve as the primary function of collecting and removing debris from cell liver fluid, but immature dendritic cells come into contact with T cells because of the low levels of inflammatory cytokines expressed. Does not activate T cells. On the other hand, mature dendritic cells have the ability to activate immune responses by activating native T cells (naive T cells). In order for immature dendritic cells to differentiate into mature dendritic cells, toll-like receptors must be activated by exposure to a number of specific signals, thereby causing a number of co-stimulatory molecules and pro-inflammatory agents such as IL-12. The cytokine (up-inflammatory cytokine) is upregulated and migrates from the tissue to the lymph nodes, resulting in fingerlike processes that are morphological features of mature dendritic cells.

한편, 미성숙 수지상 세포가 다른 환경 조건에 놓일 경우 준성숙 수지상 세포로 분화할 수 있는데, 예를 들어, 아포토시스 (apoptosis) 과정 중 세포에서 방출되는 TNF-α (tumor necrosis factor-α) 가 준성숙 수지상 세포로의 분화에 기여하는 것으로 생각된다 (Manfred B. et al., Trends in Immunology, 23(9):991-1045, 2002). 준성숙 수지상 세포는 미성숙 수지상 세포의 특성의 일부를 상실하고 성숙 수지상 세포의 표현형의 일부 특성을 가지게 된다.On the other hand, when immature dendritic cells are placed under different environmental conditions, they may be differentiated into semi-mature dendritic cells. For example, TNF-α (tumor necrosis factor-α) released from cells during apoptosis process is immature dendritic. It is thought to contribute to differentiation into cells (Manfred B. et al., Trends in Immunology, 23 (9): 991-1045, 2002). Seminiferous dendritic cells lose some of the properties of immature dendritic cells and have some characteristics of the phenotype of mature dendritic cells.

최근 수지상 세포를 이용한 암 또는 면역 관련 질환의 치료 요법에 대한 연구가 이루어지고 있다. 예를 들어, 국내공개특허 10-2010-0109099는 미성숙 수지상 세포를 암 특이 항원 단백질에 감작하여 성숙화시킨 암 치료용 성숙 수지상 세포를 제공하고 있으며, 국내등록특허 10-0542817은 미성숙 임파성 수지상 세포에 인터페론-감마를 처리하여 제조한 수지상 세포를 제1형 당뇨병 및 류마티스성 관절염 치료 용도로 제공하고 있다. 또한, M. B. Lutz 등 (J. Exp. Med, 2002, 195(1): 15-21)은 C57BL/6 마우스에서 TNF-α 로 처리된 수지상 세포가 뇌척수염 (encephalomyelitis)을 억제할 수 있다는 실험적 결과를 제시하고 있다. 그러나, 현재까지 심근염에 치료 효과가 있는 면역관용 수지상 세포의 개발은 전무한 실정이다.Recently, the treatment of cancer or immune related diseases using dendritic cells has been studied. For example, Korean Laid-Open Patent Publication No. 10-2010-0109099 provides mature dendritic cells for cancer treatment by sensitizing immature dendritic cells to cancer-specific antigen proteins, and Korean Patent No. 10-0542817 discloses immature lymphoid dendritic cells. Dendritic cells prepared by treatment with interferon-gamma are provided for the treatment of type 1 diabetes and rheumatoid arthritis. MB Lutz et al. (J. Exp. Med, 2002, 195 (1): 15-21) also reported experimental results that dendritic cells treated with TNF-α in C57BL / 6 mice could inhibit encephalomyelitis. Suggesting. However, there is no development of immune tolerant dendritic cells which have a therapeutic effect on myocarditis.

이에, 본 발명자들은 적절한 치료법이 개발되어 있지 않은 심혈관계 자가면역질환인심근염에 대하여 맞춤형으로 치료 효과를 가지는 면역관용 수지상 세포를 개발하고자 연구하였으며, 마우스 골수 유래 세포로부터 미성숙 수지상 세포로 분화한 후 마이오신 및 TNF-α 를 처리하여 불완전하게 성숙시킨 수지상 세포가 심근염 동물 모델에서 치료 효과를 나타낸다는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
In this regard, the present inventors studied to develop an immune tolerant dendritic cell having a tailored therapeutic effect against myocarditis, a cardiovascular autoimmune disease for which no appropriate treatment has been developed, and differentiated from mouse bone marrow-derived cells into immature dendritic cells. The present invention has been completed by confirming that incompletely mature dendritic cells treated with ozone and TNF-α exhibit therapeutic effects in an animal model of myocarditis.

본 발명은 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포, 이의 제조방법 및 이의 심근염 치료 용도를 제공한다.The present invention provides immune tolerance dendritic cells for the treatment of myocarditis, a method for preparing the same, and a use thereof for treating myocarditis.

이에, 본 발명의 하나의 목적은 마이오신 및 TNF-α (tumor necrosis factor-α) 가 포함된 배지에서 미성숙 수지상 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포의 제조방법을 제공하는 것이다.Accordingly, one object of the present invention is to provide a method for producing dendritic cells for the treatment of myocarditis, comprising culturing immature dendritic cells in a medium containing myosin and tumor necrosis factor-α (TNF-α). It is.

본 발명의 또 하나의 목적은 상기 방법으로 제조되며, 세포 표면의 공동자극분자 CD86 및 CD40 의 발현이 성숙 수지상 세포보다 낮고 미성숙 세포보다 높은 수준을 가지는, 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide an immune tolerance dendritic cell for the treatment of myocarditis, which is prepared by the above method, wherein the expression of the co-stimulatory molecules CD86 and CD40 on the cell surface is lower than that of mature dendritic cells and higher than immature cells.

본 발명의 또 하나의 목적은 상기 방법으로 제조되며, 세포 표면의 공동자극분자 CD86 및 CD40 의 발현이 성숙 수지상 세포보다 낮고 미성숙 세포보다 높은 수준을 가지는 면역관용 수지상 세포를 포함하는 심근염 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
Another object of the present invention is a pharmaceutical composition for treating myocarditis, which is prepared by the above-described method, and comprises the immune-tolerant dendritic cells whose expression of the costimulatory molecules CD86 and CD40 on the cell surface is lower than that of mature dendritic cells and higher than immature cells. To provide.

본 발명은 심근염 맞춤형 면역관용 수지상 세포, 이의 제조방법 및 이의 심근염 치료 용도에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명의 심근염 맞춤형 면역관용 수지상 세포는, 마이오신 및 TNF-α (tumor necrosis factor-α) 가 포함된 배지에서 미성숙 수지상 세포를 배양하여 제조된 것으로, 성숙 수지상 세포와 미성숙 세포의 중간 정도의 표면 표현형 발현을 나타내며, 심근염 동물 모델에서 치료 효과가 확인되었다.The present invention relates to dendritic cells for myocarditis tailored immune ducts, methods for their preparation and their use for the treatment of myocarditis. More specifically, myocarditis tailored immune tolerant dendritic cells of the present invention, was prepared by culturing immature dendritic cells in a medium containing myosin and tumor necrosis factor-α, the maturation of mature dendritic cells and immature cells It exhibits moderate surface phenotypic expression and a therapeutic effect has been confirmed in myocarditis animal models.

따라서, 하나의 양태로서, 본 발명은 마이오신 및 TNF-α 가 포함된 배지에서 미성숙 수지상 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포의 제조방법에 관한 것이다.Accordingly, in one aspect, the present invention relates to a method for producing immune tolerance dendritic cells for treating myocarditis, comprising culturing immature dendritic cells in a medium containing myosin and TNF-α.

바람직하게, 상기 미성숙 수지상 세포는 수지상 세포 전구체를 GM-CSF (Granulocyte macrophage colony stimulating factor) 및 IL (Interleukin)-4 가 포함된 배지에서 배양하여 제조된 것일 수 있다.Preferably, the immature dendritic cells may be prepared by culturing dendritic cell precursors in a medium containing GM-CSF (Granulocyte macrophage colony stimulating factor) and IL (Interleukin) -4.

또한 바람직하게, 상기 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포는 수지상 세포 전구체를 GM-CSF 및 IL-4 가 포함된 배지에서 1일 내지 10일간 배양하여 미성숙 수지상 세포로 분화한 후, 마이오신 및 TNF-α 가 포함된 배지에서 배양하여 제조된 것일 수 있다.Also preferably, the immune tolerant dendritic cells for treating myocarditis are cultured for 1 to 10 days in a medium containing GM-CSF and IL-4 to differentiate into immature dendritic cells, and then myosin and TNF-α. It may be prepared by culturing in a medium containing.

또한 바람직하게, 상기 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포는 세포 표면의 공동자극분자 CD86 및 CD40 의 발현이 성숙 수지상 세포보다 낮고 미성숙 세포보다 높은 수준을 가지는 것을 특징으로 한다.Also preferably, the immune tolerance dendritic cells for the treatment of myocarditis are characterized in that the expression of the co-stimulatory molecules CD86 and CD40 on the cell surface is lower than that of mature dendritic cells and higher than immature cells.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 방법으로 제조되며, 세포 표면의 공동자극분자 CD86 및 CD40 의 발현이 성숙 수지상 세포보다 낮고 미성숙 세포보다 높은 수준을 가지는, 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포에 관한 것이다. As another aspect, the present invention relates to an immune tolerant dendritic cell for the treatment of myocarditis, prepared by the above method, wherein the expression of the co-stimulatory molecules CD86 and CD40 on the cell surface is lower than that of mature dendritic cells and higher than immature cells. .

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 방법으로 제조되며, 세포 표면의 공동자극분자 CD86 및 CD40 의 발현이 성숙 수지상 세포보다 낮고 미성숙 세포보다 높은 수준을 가지는 면역관용 수지상 세포를 포함하는 심근염 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.In another aspect, the present invention is prepared by the above method, the pharmaceutical composition for treating myocarditis comprising immuno-tolerant dendritic cells, the expression of the co-stimulatory molecules CD86 and CD40 on the cell surface is lower than mature dendritic cells and higher than immature cells It relates to a composition.

본 발명에서, 심근염은 자가면역성 심근염인 것이 바람직하다.In the present invention, myocarditis is preferably autoimmune myocarditis.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본원에서 용어, "수지상 세포 (dendritic cell)" 는 항원을 세포 내부로 흡수하여 MHC 클래스 I 복합체 또는 MHC 클래스 II 복합체와 함께 다양한 항원 샘플을 T 세포에 제시하는 전문적 항원 제시 세포를 말한다. 수지상 세포는 성숙도 또는 표면 표현형의 발현 정도에 따라 미성숙 수지상 세포 (immature dendritic cell), 준성숙 수지상 세포 (semi-mature dendritic cells) 및 성숙 수지상 세포 (mature dendritic cell)로 분류할 수 있다. 수지상 세포의 표면 마커의 발현 프로파일링은 당업계에 공지된 유세포 분석을 통하여 용이하게 할 수 있다.As used herein, the term “dendritic cell” refers to a specialized antigen presenting cell that absorbs an antigen into the cell and presents various antigen samples to T cells along with the MHC class I complex or MHC class II complex. Dendritic cells can be classified into immature dendritic cells, semi-mature dendritic cells, and mature dendritic cells according to the degree of maturity or expression of the surface phenotype. Expression profiling of surface markers of dendritic cells can be facilitated through flow cytometry analysis known in the art.

본원에서 용어, "미성숙 수지상 세포" 는 수지상 세포의 초기 성숙 단계에 발견되는것으로, 단핵구 세포의 표면 표현형인 CD14 를 발현하지 않으며, 공동 자극 분자인 CD40, CD80 및 CD86을 낮은 수준으로 발현하는 수지상 세포를 말한다. As used herein, the term “immature dendritic cell” is found in the early stages of maturation of dendritic cells, and does not express CD14, the surface phenotype of monocytes, and has low levels of the costimulatory molecules CD40, CD80 and CD86. Say.

본원에서 용어, "성숙 수지상 세포" 는 미성숙 수지상 세포가 성숙화되어 형성된 세포를 의미한다. 성숙 수지상 세포는 MHC 클래스 II, CD40, CD80 및 CD86의 증가된 발현을 나타내며, 친-염증성 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)을 방출하며, 원시 T 세포 (naive T cell)를 활성화시켜 면역반응을 유도할 수 있는 능력을 가진다.As used herein, the term “mature dendritic cell” refers to a cell formed by maturation of immature dendritic cells. Mature dendritic cells express increased expression of MHC class II, CD40, CD80 and CD86, release pro-inflammatory cytokines, activate naive T cells and induce an immune response It has the ability to do.

본원에서 용어, "준성숙 수지상 세포" 는 미성숙 수지상 세포의 특성의 일부를 상실하고, 성숙 수지상 세포의 표현형의 일부 특성을 갖는 수지상 세포를 말한다. 본 발명에서 제조한 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포는 세포 표면의 공동자극분자 CD86 및 CD40 의 발현이 성숙 수지상 세포보다 낮고 미성숙 세포보다 높은 수준을 가지는 점에서 준성숙 수지상 세포와 유사한 특성을 나타낸다. As used herein, the term "quasi-dendritic dendritic cells" refers to dendritic cells that lose some of the properties of immature dendritic cells and have some characteristics of the phenotype of mature dendritic cells. The immune tolerant dendritic cells for the treatment of myocarditis prepared in the present invention exhibit similar characteristics to semi-mature dendritic cells in that the expression of the costimulatory molecules CD86 and CD40 on the cell surface is lower than that of mature dendritic cells and higher than immature cells.

본원에서 용어, "면역관용" 이란 특정 항원에 대하여 면역 반응을 나타내지 않는 상태를 의미한다. 본원에서 "면역관용 수지상 세포 (tolerogenic dendritic cell)" 는 자가 항원에 대한 관용을 유도하고 T 세포의 증식을 억제하는 수지상 세포를 의미하며, 본 발명의 목적상, 본 발명의 면역관용 수지상 세포는 자가면역성 심근염을 일으키는 자가 항원에 대하여 면역관용을 유도하는 수지상 세포를 의미한다.As used herein, the term "immuno tolerance" refers to a condition that does not show an immune response to a particular antigen. As used herein, "tolerogenic dendritic cells" refers to dendritic cells that induce tolerance to autologous antigens and inhibit the proliferation of T cells, and for the purposes of the present invention, the immune tolerant dendritic cells of the present invention are autologous. Dendritic cells that induce immune tolerance against autologous antigens causing immune myocarditis.

본 발명에서 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포는, 마이오신 및 TNF-α 가 포함된 배지에서 미성숙 수지상 세포를 배양하는 단계를 포함하는 제조 방법에 의하여 제조된다.In the present invention, immune tolerance dendritic cells for the treatment of myocarditis are prepared by a manufacturing method comprising culturing immature dendritic cells in a medium containing myosin and TNF-α.

본원 발명의 구체적인 실시예에서는, 마우스의 복강에 마이오신 및 Mycrobacterium　tuberculosis H37Ra 을 동량으로 섞은 용액을 주사하여 면역성을 유발한 후, 심장을 적출하여 육안 및 H&E 염색을 통하여 심근염 유발 정도를 확인한 결과, 대조군 심장에 비해 전체적으로 염증이 유발되었으며 심근의 염증 정도가 심함을 확인할 수 있었다 (실시예 1 및 도 1 참조). 따라서, 본 발명은 미성숙 수지상 세포를 마이오신에 감작시켜 준성숙화시킴으로써 자가 항원으로 작용하는 마이오신에 대하여 면역관용을 나타내도록 하였다.In a specific embodiment of the present invention, after injecting a solution of the same amount of myosin and Mycrobacterium tuberculosis H37Ra in the abdominal cavity of the mouse to induce immunity, after extracting the heart to determine the degree of myocarditis through visual and H & E staining, the control group Inflammation was induced as a whole compared to the heart, and it was confirmed that the degree of inflammation of the myocardium was severe (see Example 1 and FIG. 1). Therefore, the present invention is to sensitize immature dendritic cells to myosin and sub-maturate to show immune tolerance against myosin acting as an autoantigen.

또한, 본 발명의 면역관용 수지상 세포는 미성숙 수지상 세포를 분화 유도시켜서 얻을 수 있다.The dendritic cells for immune tolerance of the present invention can be obtained by inducing differentiation of immature dendritic cells.

미성숙 수지상 세포는 동물의 골수, 비장, 림프, 흉선 또는 혈액 등으로부터 직접적으로 얻거나, 이들에 존재하는 수지상 세포 전구체, 예를 들어 전분화능 세포, 조혈모세포, 전구체 세포, 말초 혈액 단핵구 세포, CD14+ 단핵구 세포 또는 CD34+ 단핵구 세포로부터 적합한 사이토카인의 존재 하에 배양하여 수득할 수 있다. 미성숙 수지상 세포를 얻기 위하여 사용되는 적합한 사이토카인으로는, GM-CSF 및 IL-4의 혼합물, GM-CSF 및 IL-13 의 혼합물, 또는 GM-CSF 및 IL-7의 혼합물 등을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 GM-CSF 및 IL-4 의 혼합물을 사용할 수 있다. Immature dendritic cells can be obtained directly from or derived from dendritic cells, spleen, lymph, thymus or blood of an animal such as dendritic cell precursors such as pre-differentiating cells, hematopoietic stem cells, precursor cells, peripheral blood mononuclear cells, CD14 + Cells or CD34 < + > mononuclear cells in the presence of a suitable cytokine. Suitable cytokines for use in obtaining immature dendritic cells include mixtures of GM-CSF and IL-4, mixtures of GM-CSF and IL-13, or mixtures of GM-CSF and IL-7, Preferably a mixture of GM-CSF and IL-4 can be used.

상기 골수, 비장, 림프, 흉선 또는 혈액 유래의 수지상 세포 전구체로부터 미성숙 수지상 세포를 분화하는 과정에서 사용될 수 있는 배지로는, 동물세포의 배양에 이용되는 일반적인 어떠한 배지도 사용할 수 있다. 바람직하게는, 혈청 (예컨대, 우태아 혈청, 말 혈청 또는 인간 혈청)이 함유된 배지를 사용할 수 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 배지는, 예를 들어, RPMI 시리즈 (예컨대, RPMI 1640), Eagles's MEM (Eagle's minimum essential medium, Eagle), α-MEM, Iscove's MEM, 199 배지, CMRL 1066, F12, F10, DMEM (Dulbecco's modification of Eagle's medium), DMEM과 F12의 혼합물, Way-mouth's MB752/1, McCoy's 5A 및 MCDB 시리즈를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 배지에는, 다른 성분, 예를 들어, 항산화제 (예컨대, β-머캅토에탄올) 또는 항생제 (예컨대, 페니실린/스트렙토마이신) 등이 포함될 수 있다.As a medium which can be used in the process of differentiating immature dendritic cells from the bone marrow, spleen, lymph, thymus or blood-derived dendritic cell precursor, any medium commonly used for culturing animal cells can be used. Preferably, a medium containing serum (for example, fetal bovine serum, horse serum or human serum) can be used. The culture media that can be used in the present invention include, for example, RPMI series (such as RPMI 1640), Eagles ' s MEM (Eagle ' s minimum essential medium, Eagle), alpha-MEM, Iscove's MEM, 199 medium, CMRL 1066, F12, F10, But are not limited to, DMEM (Dulbecco's modification of Eagle's medium), a mixture of DMEM and F12, Way-mouth's MB752 / 1, McCoy's 5A and MCDB series. The medium may include other components such as an antioxidant (e.g.,? -Mercaptoethanol) or an antibiotic (e.g., penicillin / streptomycin).

바람직하게, 본 발명의 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포는, 수지상 세포 전구체를 GM-CSF 및 IL-4 가 포함된 배지에서 1일 내지 10일간 배양하여 미성숙 수지상 세포로 분화한 후, 마이오신 및 TNF-α 를 첨가한 배지에서 배양하는 과정에 의하여 제조될 수 있다. 상기 마이오신 및 TNF-α 존재 하의 배양 시간은, 마이오신에서 유래한 항원이 수지상 세포에 의해 세포 표면으로부터 제시되기에 충분한 시간으로서, 바람직하게는 1-10 시간일 수 있으며, 이 때 사용하는 배지는 상기 미성숙 수지상 세포의 분리 및 배양 시에 사용하는 배지와 동일할 수 있다.Preferably, the immune tolerant dendritic cells for treating myocarditis of the present invention are cultured in a medium containing GM-CSF and IL-4 for 1 to 10 days to differentiate into immature dendritic cells, and then myosin and TNF. It can be prepared by the process of culturing in the medium to -α. The incubation time in the presence of myosin and TNF-α is a time sufficient for the antigen derived from myosin to be presented from the cell surface by the dendritic cells, preferably 1-10 hours, the medium used at this time May be the same as the medium used for isolation and culture of the immature dendritic cells.

본 발명의 구체적인 실시예에서는, 마우스 골수 유래 세포를 GM-CSF 및 IL-4 가 포함된 배지에서 배양한 후, 배양 10일 째에 마이오신 및 TNF-α 를 처리하여 면역관용 수지상 세포를 수득하였다 (실시예 2 참조).In a specific example of the present invention, the mouse bone marrow-derived cells were cultured in a medium containing GM-CSF and IL-4, and then treated with myosin and TNF-α on the 10th day of culture to obtain dendritic cells for immune tolerance. (See Example 2).

본 발명의 방법에 의하여 제조된 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포는, 세포 표면의 공동자극분자 CD86 및 CD40 의 발현이 성숙 수지상 세포보다 낮고 미성숙 세포보다 높은 수준을 가지는 것을 특징으로 한다. 상기한 표면 마커의 발현 프로파일링은 당업계에 공지된 유세포 분석을 통하여 용이하게 할 수 있다 (도 2 및 도 3 참조).The immune tolerant dendritic cells for the treatment of myocarditis prepared by the method of the present invention are characterized in that the expression of the co-stimulatory molecules CD86 and CD40 on the cell surface is lower than that of mature dendritic cells and higher than immature cells. Expression profiling of the surface markers described above can be facilitated through flow cytometry known in the art (see FIGS. 2 and 3).

또한, 본 발명의 방법에 의하여 제조된 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포는, 심근염, 특히 자가면역성 심근염에 특이적인 치료 효과가 있음을 특징으로 한다. 본원 발명의 구체적인 실시예에서는, 본 발명에서 제조한 면역관용 수지상 세포의 심근염 치료 효과를 확인하기 위하여, 마우스의 복강에 마이오신 및 Mycrobacterium 　 tuberculosis H37Ra 을 동량으로 섞은 용액을 주사하여 면역성을 유발한 마이오신 유도 심근염 동물 모델을 확립한 후, 면역관용 수지상 세포를 마우스 뒷다리 림프절 근처에 2회 백신화한 다음, 마우스를 희생하여 면역화학조직염색 및 육안을 통해 염증 정도를 확인하였다. 그 결과, 양성 대조군에서 염증이 전체적으로 퍼져 있음에 반하여, 본 발명의 수지상 세포를 주사한 경우 염증반응이 줄어들었고, 특히 1 x 106 세포 주입군에서는 음성 대조군과 거의 비슷한 수준으로 염증이 완화되어 있음을 확인하여, 심근염에 우수한 치료 효과가 있음을 알 수 있었다 (실시예 3 및 도 4 참조).In addition, the immune tolerant dendritic cells for the treatment of myocarditis prepared by the method of the present invention are characterized by having a specific therapeutic effect on myocarditis, especially autoimmune myocarditis. In a specific embodiment of the present invention, myosin and Mycrobacterium in the abdominal cavity of the mouse to confirm the effect of myocarditis treatment of the immune tolerance dendritic cells prepared in the present invention 　 After establishing an animal model of myosin-induced myocarditis that induced immunity by injecting a solution of the same amount of tuberculosis H37Ra, immunotolerant dendritic cells were vaccinated twice near the hind limb lymph nodes, and the mice were sacrificed to immunohistostain. And through the naked eye to check the degree of inflammation. As a result, the inflammation spread in the positive control group as a whole, the injection of the dendritic cells of the present invention reduced the inflammatory response, especially in the 1 x 10 6 cell injection group, the inflammation was reduced to almost the same level as the negative control group It was confirmed that the excellent therapeutic effect on myocarditis (see Example 3 and Figure 4).

따라서, 본 발명의 면역관용 수지상 세포는 심근염 치료용 조성물의 유효성분으로 제공될 수 있다.Therefore, the immune tolerant dendritic cells of the present invention can be provided as an active ingredient of the composition for treating myocarditis.

본 발명에서 심근염 치료용 조성물은 면역관용 수지상 세포 외에, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있으며, 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.In the present invention, the composition for treating myocarditis may further include appropriate carriers, excipients and diluents commonly used in the preparation of pharmaceutical compositions, in addition to dendritic cells for immune tolerance, and according to conventional methods, powders, granules, tablets, capsules Oral dosage forms such as suspensions, emulsions, syrups, aerosols, external preparations, suppositories, or sterile injectable solutions.

상기 조성물을 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.　경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 적어도 한 가지 이상의 부형제 및/또는 윤활제 등을 포함할 수 있다.　경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함될 수 있다.When the composition is formulated, it is prepared using a diluent such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, a surfactant, or an excipient usually used. Solid formulations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations may include at least one excipient and / or lubricant. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions, syrups and the like. Various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives and the like may be included in addition to water and liquid paraffin, which are simple diluents commonly used. have. Formulations for parenteral administration may include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, suppositories, and the like.

상기 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 보다 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 조성물의 투여량은 유효성분을 기준으로 1일 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg으로 하는 것이 좋으나 이에 제한되는 것은 아니다.　투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 본 발명의 조성물은 동물, 바람직하게는 인간을 포함하는 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 정맥, 근육, 피하주사 등에 의해 투여될 수 있다.
The preferred dosage of the composition varies depending on the condition and the weight of the patient, the degree of the disease, the drug form, the administration route and the period, but can be appropriately selected by those skilled in the art. For a more preferable effect, the dose of the composition of the present invention is preferably 0.1 mg / kg to 100 mg / kg per day based on the active ingredient, but is not limited thereto. The administration may be carried out once a day or divided into several doses. The compositions of the present invention may be administered to a mammal, including a human, in various ways. All modes of administration may be expected, for example, by oral, intravenous, intramuscular, subcutaneous injection, and the like.

본 발명에 의하여 심근염에 특이적으로 면역관용성을 가지는 수지상 세포를 제조할는 자수 있으며, 상기 면역관용 수지상 세포는 심근염의 염증 반응을 억제하여 심근염을 효과적으로 치료하는데 사용될 수 있다.
According to the present invention, it is possible to prepare dendritic cells having immune tolerance specifically for myocarditis, and the immune tolerance dendritic cells can be used to effectively treat myocarditis by inhibiting the inflammatory response of myocarditis.

도 1은 정상 마우스 (위) 및 마이오신으로 유도한 심근염 마우스 모델 (Myosin-induced autoimmune myocarditis, EAM) (아래) 에서 각각 적출한 심장의 사진 (좌측 그림) 및 H&E 염색한 조직학적 사진 (X 1 중간 그림, X 100 우측 그림)을 나타낸다.
도 2는 실시예 2에서 제조한 미성숙 수지상 세포 (Immature DC), 면역관용 수지상세포 (Tolerogenic DC), 및 성숙 수지상 세포 (Mature DC) 의 표면 표현형을 1차 유세포 분석으로 확인한 결과를 나타낸다.
도 3은 실시예 2에서 제조한 미성숙 수지상 세포 (Immature DC), 면역관용 수지상세포 (Tolerogenic DC), 및 성숙 수지상 세포 (Mature DC) 의 표면 표현형을 2차 유세포 분석으로 확인한 결과를 나타낸다.
도 4는 마이오신으로 유도한 심근염 마우스 모델에서 음성 대조군 (Negative), 양성 대조군 (Positive) 및 면역관용 수지상 세포 주입군 (2 x 106 tDC, 1 x 106 tDC)을 각각 처리한 경우의 H&E 염색 결과, MØ (Macrophage) 에 대한 면역조직화학염색 결과, 및 CD3 T 세포에 대한 면역조직화학염색 결과를 나타낸다. 배율 X 100.
1 is a photograph of the heart extracted from normal mouse (top) and myosin-induced myocardial mouse model (Myosin-induced autoimmune myocarditis (EAM) (bottom), respectively) (left picture) and H & E stained histological image (X 1). Middle figure, X 100 right figure).
Figure 2 shows the results of confirming the surface phenotype of the immature dendritic cells (Immature DC), immunotolerant dendritic cells (Tolerogenic DC), and mature dendritic cells (Mature DC) prepared in Example 2 by primary flow cytometry.
FIG. 3 shows the results of confirming the surface phenotype of immature dendritic cells (Immature DC), immunotolerant dendritic cells (Tolerogenic DC), and mature dendritic cells (Mature DC) prepared in Example 2 by secondary flow cytometry.
FIG. 4 shows H & E treated with negative control, positive control, and immune tolerant dendritic cell injection groups (2 × 10 6 tDC, 1 × 10 6 tDC), respectively, in a myosin-induced myocarditis mouse model. Staining results, immunohistochemical staining for MØ (Macrophage), and immunohistochemical staining for CD3 T cells are shown. Magnification X 100.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.

실시예Example 1.  One. 마이오신을Myosin 이용한 심근염 동물 모델 제작 Modeling Animal Model Using Myocarditis

　5주령 Balb/c 마우스에 돼지 심장 마이오신 (sigma) 0.1mg/100ul 및 Mycrobacterium　tuberculosis H37Ra (Difco) 를 동일 용량을 섞은 용액을 피하로 주사하여 면역성 유발 후 7일째 다시 마이오신 및 H37Ra를 동량으로 섞은 용액을 피하로 주입 하였다. 마이오신 주입 후 21일 동안 관찰 하였으며, 21일째 희생하여 심장에서 심근염 유발 정도를 H&E (hematoxylin & eosin) 염색을 통하여 확인하였다 (도 1). 육안상으로도 대조군 심장에 비해 염증이 전체적으로 유발 되었음을 확인할 수 있었으며, H&E 염색을 통하여서도 심근의 염증 정도가 심함을 확인할 수 있었다.
Five-week-old Balb / c mice were injected subcutaneously with a solution containing the same dose of 0.1 mg / 100 ul of pig heart myosin (sigma) and Mycrobacterium tuberculosis H37Ra (Difco), and the same amount of myosin and H37Ra was added again 7 days after immunization. The solution was injected subcutaneously. After the injection of myosin was observed for 21 days, the degree of myocarditis in the heart was confirmed by H & E (hematoxylin & eosin) staining at 21 days sacrifice (Fig. 1). In addition, it was confirmed that the inflammation was induced as a whole compared to the control heart, and the degree of inflammation of the myocardium was also severe through H & E staining.

실시예Example 2.  2. 마이오신으로With myosin 유도한 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포의 제조 Preparation of Immunovascular Dendritic Cells for Induced Myocarditis

마우스 골수유래 세포를 경골과 대퇴골에서 분리하여 RPMI1640 배지에 10% 우태아혈청 (Fetal Bovine Serum), 1% 페니실린/스트렙토마이신, rmIL-4 및 rmGM-CSF 를 첨가하여 수지상 세포 배양을 시작하였다. 배양 3일, 6일 및 9일 째에 동일 배지로 교체하였으며, 10일째 LPS (lipopolysaccharide) 및 항원 마이오신 (Myosin, From Porcine heart; Sigma)　을 처리하여 성숙 수지상 세포를 얻었다. 면역 관용 수지상 세포는 10 일째 TNF-α 및 마이오신을 처리하여 얻었다. 미성숙 세포는 처리 항원의 과정 없이 동일 시간 동안 배지를 교체하여 얻었다. 각각의 수지상 세포는 유세포 분석기를 통해 표면 표현형을 확인하였다 (도 2).Mouse bone marrow-derived cells were isolated from tibia and femur and dendritic cell culture was started by adding 10% Fetal Bovine Serum, 1% penicillin / streptomycin, rmIL-4 and rmGM-CSF to RPMI1640 medium. On the 3rd, 6th and 9th day of culture, the cells were replaced with the same medium. On the 10th day, LPS (lipopolysaccharide) and antigen myosin (Myosin, From Porcine heart; Sigma) were treated to obtain mature dendritic cells. Immune tolerant dendritic cells were obtained by treatment with TNF-α and myosin on day 10. Immature cells were obtained by changing medium for the same time without treatment of the treated antigen. Each dendritic cell was confirmed surface phenotype by flow cytometry (FIG. 2).

마이오신을 처리한 면역 관용 수지상 세포 및 성숙 수지상 세포, 그리고 미성숙 수지상 세포의 표면 표현형을 유세포 분석을 하였을 때, 도 2에 나타난 바와 같이, 수지상 세포 표면 표현형 중 CD11c의 발현 정도는 미성숙, 면역관용 및 성숙 수지상 세포 간에 차이는 없었으며, 공동 자극 분자인 B7-2 (CD86) 및 CD40의 경우는 면역 관용 수지상 세포가 미성숙 및 성숙 수지상 세포의 중간값을 가지는 것으로 확인되었다. 그러나, B7-1 (CD80)의 경우 발현 차이가 관찰되지 않았다. 또한 단핵구 세포의 표면 표현형인 CD14 발현은 관찰되지 않았으며, 이는 미성숙 수지상 세포 단계에서 사라진 것으로 보이고, 세포 생존율 역시 각각의 세포에서 차이를 보이지 않았고 90 % 이상 높은 생존율을 보였다.When flow cytometry was performed on the surface phenotypes of immunotolerant dendritic cells, mature dendritic cells, and immature dendritic cells treated with myosin, as shown in FIG. 2, the expression level of CD11c in the dendritic cell surface phenotype was immature, immunotolerant There was no difference between mature dendritic cells, and in the case of co-stimulatory molecules B7-2 (CD86) and CD40, immune tolerant dendritic cells were found to have median values of immature and mature dendritic cells. However, no difference in expression was observed for B7-1 (CD80). In addition, CD14 expression, a surface phenotype of monocyte cells, was not observed, which appeared to disappear in the immature dendritic cell stage, and cell viability was not different in each cell and showed a high survival rate of more than 90%.

또한, 마이오신으로 유도한 수지상 세포의 효능을 평가하기 위하여 두 번에 나누어 세포 주입을 실시하였으며, 면역관용 수지상 세포 2차 주사는 1차 주사 후 7일 째에 주사하였으며, 2차로 주사한 수지상 세포의 표면 표현형을 확인하였다 (도 3). In addition, in order to evaluate the efficacy of myosin-induced dendritic cells, the cells were divided into two injections. Secondary injections of dendritic cells for immune tolerance were injected 7 days after the first injection, and dendritic cells injected secondly. The surface phenotype of was confirmed (FIG. 3).

그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 면역 관용 수지상 세포는 항원 제시 분자인 MHC Class II 및 공동자극분자 (B7-1, B7-2, CD40)의 발현이 미성숙, 성숙 수지상 세포의 중간값을 나타내었다. 또한 단핵구가 제거 되었으며, 생존율 또한 높은 것으로 확인되었다.
As a result, as shown in FIG. 3, the expression of MHC Class II and the costimulatory molecules (B7-1, B7-2, CD40), which are antigen-presenting molecules, showed an intermediate value of immature and mature dendritic cells. It was. Monocytes were also removed and survival was high.

실시예Example 3. 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포의 심근염 치료 효과 평가 3. Evaluation of myocarditis treatment effect of dendritic cells for immune tube treatment for myocarditis

실시예 1에 기술한 바와 같이, 5주령 Balb/c 마우스에 돼지 심장 마이오신 (sigma) 0.1mg/100ul　및 mycrobacterium tuberculosis H37Ra를 동일 용량을 섞은 용액을 피하로 주사하여 면역성 유발 후 7일째 다시 마이오신을 주입하여, 마이오신 유도 심근염 동물 모델을 확립하였다. 이후 마우스의 뒷다리 림프절 근처에 마이오신으로 유도시킨 면역관용 수지상 세포를 1 x 106 cell/100ul 및 2 x 106 cell/100ul 세포 주입군으로 나누어 1차 백신화하였다. 14일째 동일한 세포수로 2차 백신화를 실시하였고, 21일째 세포 치료효과를 확인하기 위해 모두 희생하였다. 심장과 비장을 적출 하였으며, 사이토카인 농도를 측정하기 위하여 혈액의 혈청을 -80 ℃보관하였다. 심장은 조직학적 평가를 위하여 파라핀 조직으로 제작하였으며, 5um 두께로 조직절편을 제작하여 H&E 염색과 대식구 (marcrophage) 와 CD3 T 세포에 대해서 면역화학조직염색을 실시하였고, 육안으로도 확인하기 위하여 사진촬영을 하였다 (도 4). 비장은 균질화하여 세포로 분리하여 -80℃　에 동결조건으로 보관하였다. 양성 대조군은 돼지 심장 마이오신과 H37Ra를 동량 섞은 용액을 처리한 군이며, 음성 대조군은 생리식염수군으로 하였다. As described in Example 1, 0.1 mg / 100 ul of pig heart myosin (sigma) and mycrobacterium in 5-week old Balb / c mice tuberculosis Myocin-induced myocarditis animal model was established by injecting H37Ra subcutaneously into a solution of the same dose and injecting myosin again 7 days after immunization. Since the mouse immune tolerance, dendritic cells were induced to Myosin lymph nodes near the rear leg of the first flower was x 10 6 cell / 100ul and 2 x 10 6 cell / 100ul cells treated group divided by the primary vaccination. Second vaccination was carried out with the same cell number on day 14, and all sacrificed to confirm cell therapeutic effect on day 21. Heart and spleen were removed and blood serum was stored at -80 ℃ to measure cytokine concentration. The heart was made of paraffin tissue for histological evaluation. Tissue sections of 5 um thickness were prepared, H & E staining and immunohistochemical staining were performed on macrocrops and CD3 T cells. (Fig. 4). The spleen was homogenized and separated into cells and stored under freezing conditions at -80 ° C. The positive control group was treated with the same amount of pig heart myosin and H37Ra, and the negative control group was the saline group.

도 4에 나타난 바와 같이, 사진 촬영 결과에서 심근염 맞춤 수지상 세포의 1x106 세포 주입군에서 확연히 염증반응이 줄어드는 것을 확인하였으며, 2 x 106 세포 주입군에서도 양성 대조군에 비해 염증이 줄어든 경향을 보였다. HE 염색에서도 1 x 106 세포 주입군 및 2 x 106 세포 주입군에서 염증 부위가 줄어든 것을 관찰할 수 있었다. 대식구와 CD3 T 세포 면역화학조직염색에서도 양성 대조군에서는 두드러지게 염색되는 부위들이 관찰되었으며, 1 x 106 세포 주입군 및 2 x 106 세포 주입군에서는 확연히 발색 부위가 줄어든 것을 확인하였다.As shown in FIG. 4, the results showed that the inflammatory response was significantly reduced in the 1x10 6 cell injection group of the myocarditis tailored dendritic cells, and the inflammation was also reduced in the 2 x 10 6 cell injection group compared to the positive control group. In HE staining, the reduction of the inflammatory site was observed in the 1 x 10 6 cell injection group and the 2 x 10 6 cell injection group. In macrophages and CD3 T-cell immunohistochemical staining, markedly stained sites were observed in the positive control group, and the color development sites were clearly reduced in the 1 x 10 6 cell injection group and the 2 x 10 6 cell injection group.

Claims (10)

마이오신 및 TNF-α (tumor necrosis factor-α) 가 포함된 배지에서 미성숙 수지상 세포를 배양하는 단계를 포함하는, 하기의 특징을 나타내는 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포의 제조방법:
(a) CD86 및 CD40 의 발현이 성숙 수지상 세포보다 낮고 미성숙 세포보다 높은 수준을 가짐;
(b) CD3+T세포를 감소시킴; 및
(c) 심근의 염증을 감소시킴.
A method for preparing immune tubular dendritic cells for treating myocarditis, comprising the steps of culturing immature dendritic cells in a medium containing myosin and TNF-α (tumor necrosis factor-α):
(a) expression of CD86 and CD40 is lower than mature dendritic cells and has higher levels than immature cells;
(b) reduces CD3 + T cells; And
(c) reduces inflammation of the myocardium.
제1항에 있어서, 상기 미성숙 수지상 세포는 수지상 세포 전구체를 GM-CSF (Granulocyte macrophage colony stimulating factor) 및 IL (Interleukin)-4 가 포함된 배지에서 배양하여 제조된 것인, 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포의 제조방법.
According to claim 1, The immature dendritic cells are prepared by culturing the dendritic cell precursor in a medium containing GM-CSF (Granulocyte macrophage colony stimulating factor) and IL (Interleukin) -4, Immune dendritic for the treatment of myocarditis Method for producing a cell.
제2항에 있어서, 상기 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포는, 수지상 세포 전구체를 GM-CSF 및 IL-4 가 포함된 배지에서 1일 내지 10일간 배양하여 미성숙 수지상 세포로 분화한 후, 마이오신 및 TNF-α 가 포함된 배지에서 배양하여 제조된 것인, 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포의 제조방법.
According to claim 2, The immune tolerant dendritic cells for treating myocarditis, the dendritic cell precursor is cultured in a medium containing GM-CSF and IL-4 for 1 to 10 days to differentiate into immature dendritic cells, myosin and Method of producing a dendritic cell for immune tolerance for the treatment of myocarditis, which is prepared by culturing in a medium containing TNF-α.
삭제delete 제1항에 있어서, 상기 심근염은 자가면역성 심근염인, 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포의 제조방법.
The method of claim 1, wherein the myocarditis is autoimmune myocarditis.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 방법으로 제조되며, 하기의 특징을 나타내는 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포:
(a) CD86 및 CD40 의 발현이 성숙 수지상 세포보다 낮고 미성숙 세포보다 높은 수준을 가짐;
(b) CD3+T세포를 감소시킴; 및
(c) 심근의 염증을 감소시킴.
Immune tolerant dendritic cells for the treatment of myocarditis prepared by the method of any one of claims 1 to 3, characterized by:
(a) expression of CD86 and CD40 is lower than mature dendritic cells and has higher levels than immature cells;
(b) reduces CD3 + T cells; And
(c) reduces inflammation of the myocardium.
제6항에 있어서, 상기 심근염은 자가면역성 심근염인, 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포.
7. The immune tolerant dendritic cell of claim 6, wherein the myocarditis is autoimmune myocarditis.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 방법으로 제조되며, 하기의 특징을 나타내는 면역관용 수지상 세포를 포함하는 심근염 치료용 약학 조성물:
(a) CD86 및 CD40 의 발현이 성숙 수지상 세포보다 낮고 미성숙 세포보다 높은 수준을 가짐;
(b) CD3+T세포를 감소시킴; 및
(c) 심근의 염증을 감소시킴.
A pharmaceutical composition for treating myocarditis prepared by the method of any one of claims 1 to 3 and comprising dendritic cells for immune tolerance, characterized in that:
(a) expression of CD86 and CD40 is lower than mature dendritic cells and has higher levels than immature cells;
(b) reduces CD3 + T cells; And
(c) reduces inflammation of the myocardium.
제8항에 있어서, 상기 심근염은 자가면역성 심근염인 약학 조성물.The pharmaceutical composition of claim 8, wherein the myocarditis is autoimmune myocarditis. 마이오신 및 TNF-α (tumor necrosis factor-α)를 포함하는, 하기의 특징을 나타내는 심근염 치료용 면역관용 수지상 세포 제조를 위한 배지 조성물:
(a) CD86 및 CD40 의 발현이 성숙 수지상 세포보다 낮고 미성숙 세포보다 높은 수준을 가짐;
(b) CD3+T세포를 감소시킴; 및
(c) 심근의 염증을 감소시킴.
Media composition for the preparation of immune tolerant dendritic cells for the treatment of myocarditis, comprising myosin and TNF-α (tumor necrosis factor-α):
(a) expression of CD86 and CD40 is lower than mature dendritic cells and has higher levels than immature cells;
(b) reduces CD3 + T cells; And
(c) reduces inflammation of the myocardium.
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