KR101354826B1 - Screening method of the materials for prevention or treatment of osteoporosis using leptin production in mesenchymal stem cell - Google Patents
Screening method of the materials for prevention or treatment of osteoporosis using leptin production in mesenchymal stem cell Download PDFInfo
- Publication number
- KR101354826B1 KR101354826B1 KR1020110131255A KR20110131255A KR101354826B1 KR 101354826 B1 KR101354826 B1 KR 101354826B1 KR 1020110131255 A KR1020110131255 A KR 1020110131255A KR 20110131255 A KR20110131255 A KR 20110131255A KR 101354826 B1 KR101354826 B1 KR 101354826B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- mesenchymal stem
- stem cells
- leptin
- osteoporosis
- test substance
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/15—Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
Abstract
본 발명은 중간엽 줄기세포(Mesenchymal stem cell)를 이용한 골다공증 예방 또는 치료용 물질 스크리닝 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 중간엽 줄기세포에서 분비되는 렙틴(leptin)의 양을 측정하여 단시간 내에 골다공증 예방 또는 치료용 물질을 스크리닝하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 중간엽 줄기세포를 이용한 골다공증 예방제 또는 치료제의 스크리닝 방법, 및 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물의 스크리닝 방법은 약 3일 내에 골다공증 예방 또는 치료제의 후보 물질을 선별 가능하도록 함으로써, 최소 10일 이상 소요되던 기존의 선별 방법과 비교하여 그 효율성을 현저히 높일 수 있으며, 실험방법이 간단하기 때문에 단시간에 대량의 물질을 스크리닝하는데 이용될 수 있을 것으로 기대된다.The present invention relates to a method for screening a substance for preventing or treating osteoporosis using mesenchymal stem cells, and more specifically, to prevent osteoporosis in a short time by measuring the amount of leptin secreted from mesenchymal stem cells. Or to a method for screening a therapeutic substance. Screening method for preventing or treating osteoporosis using mesenchymal stem cells according to the present invention, and for screening a health functional food composition for preventing or improving osteoporosis, by selecting a candidate substance for preventing or treating osteoporosis within about 3 days, Compared to the conventional screening method that took more than 10 days, the efficiency can be significantly increased, and because the test method is simple, it can be used to screen a large amount of material in a short time.
Description
본 발명은 중간엽 줄기세포(Mesenchymal stem cell)를 이용한 골다공증 예방 또는 치료용 물질 스크리닝 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 중간엽 줄기세포에서 분비되는 렙틴(leptin)의 양을 측정하여 단시간 내에 골다공증 예방 또는 치료용 물질을 스크리닝하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for screening a substance for preventing or treating osteoporosis using mesenchymal stem cells, and more specifically, to prevent osteoporosis in a short time by measuring the amount of leptin secreted from mesenchymal stem cells. Or to a method for screening a therapeutic substance.
렙틴(Leptin)은 지방조직에서 분비되어 식욕을 억제함으로써 비만증을 치료할 수 있는 호르몬으로 알려져 있다. 렙틴은 지방세포에서 분비되며, 중추신경계에서 식욕을 억제하고, 일부 말초신경계에서는 지방축적을 억제한다. 렙틴 유전자에 이상이 있는 생쥐나, 렙틴 수용체에 유전적 결함이 있는 생쥐는 비만증이 나타난다. 따라서 최근에는 혈액 내의 렙틴양을 증가시킬 수 있는 항비만 치료 물질에 대한 연구가 많이 진행되고 있다. 또한 렙틴은 국소적으로 조골세포(osteoblasts)의 생성에 관여하여 뼈의 생성 및 대사를 돕는 것으로도 알려져 있다. 따라서 렙틴의 분비를 촉진시킬 수 있는 천연물, 합성화합물, 또는 생물학적 물질 등을 선별하는 세포 기반 측정 방법은 항비만, 골다공증 치료 및 예방과 관련된 신약 및 건강식품 개발에 활용도가 클 것으로 기대된다.Leptin is known to be a hormone that can be used to treat obesity by suppressing appetite by secreting from adipose tissue. Leptin is secreted by adipocytes, suppresses appetite in the central nervous system, and inhibits fat accumulation in some peripheral nervous systems. Mice with abnormalities in the leptin gene or mice with genetic defects in the leptin receptor show obesity. Recently, many studies have been conducted on anti-obesity agents that can increase the amount of leptin in the blood. Leptin is also known to be involved in the production of osteoblasts locally to help bone formation and metabolism. Therefore, the cell-based measurement method for selecting natural products, synthetic compounds, or biological substances that can promote the secretion of leptin is expected to be useful for the development of new drugs and health foods related to the treatment and prevention of anti-obesity, osteoporosis.
최근에는 렙틴이 주로 분비된다고 알려진 지방세포를 이용하여 렙틴양을 측정하고자 하는 시도들이 있었으나, 일차배양 지방세포를 이용하여 렙틴 분비를 촉진하는 방법은 분리 및 배양이 용이하지 않고, 오랜 시간의 소요로 인해 신약개발의 전임상후보물질 검색 단계에서 이용되기에는 어려움이 있다. 또한 비만 정도 및 부위별 지방조직에 따라서 렙틴 분비능이나 렙틴 수용체의 감수성에 큰 차이가 있어 일차배양 지방세포를 이용하여 렙틴 분비를 평가하는 방법은 큰 편차로 인해 신약 및 건강식품 평가에 있어서도 한계가 있다.Recently, there have been attempts to measure leptin levels using adipocytes, which are known to be mainly secreted by leptin.However, methods for promoting leptin secretion using primary cultured adipocytes are not easy to isolate and culture, and require a long time. Therefore, it is difficult to be used in the preclinical candidate search phase of new drug development. In addition, there is a big difference in the leptin secretion ability or the sensitivity of leptin receptors according to the degree of obesity and the adipose tissue by site. Therefore, the method of evaluating leptin secretion using primary cultured fat cells has limitations in evaluating new drugs and health foods. .
세계 7대 의약시장의 50세 이상 연령층을 기준으로 볼 때, 약 1억 6천만명 정도가 노화성 골다공증으로 고통을 받고 있는 것으로 추정되고 있으며, 의료기술의 발달로 인하여 평균 수명이 연장되고 있기 때문에, 효과적인 골다공증 치료제의 개발은 산업경제적으로 막대한 부가가치를 창출할 수 있을 것으로 기대된다.It is estimated that about 160 million people suffer from aging osteoporosis based on the age group of 50 or older in the world's seven major pharmaceutical markets, and the life expectancy is prolonged due to the development of medical technology. The development of effective osteoporosis treatments is expected to create enormous added value in the industrial economy.
골다공증은 전신성의 퇴행성 뼈질환으로서 뼈의 미네랄이 감소하고, 뼈의 미세구조의 변화에 의해 뼈의 강도가 감소하여 골절(bone fracture)이 증가하는 증상이다. 현재 골다공증의 치료제로는 alendronate(상품명 포사맥스, Fosamax)와 같은 biophosphonates류의 약물, raloxifene과 같은 선택적 에스토로겐 수용체 조절제(selective estrogen receptor modulator), 또는 뼈의 형성을 조절하는 부갑상선 호르몬류(parathyroid hormones) 및 이들의 유도체가 이용되고 있다. 그리고 최근에는 뼈를 파괴하는 사이토카인을 억제하는 Denosumab와 같은 항체 신약들도 시판되기 시작하였다.Osteoporosis is a systemic degenerative bone disease in which bone minerals decrease and bone strength decreases due to changes in the microstructure of the bones to increase bone fracture. Current treatments for osteoporosis include drugs of biophosphonates such as alendronate (brand name Fosamax), selective estrogen receptor modulators such as raloxifene, or parathyroid hormones that regulate bone formation and these Derivatives are used. And recently, antibody drugs such as Denosumab, which inhibits the cytokine that destroys bone, have also started to be available.
경구용 biophophonate류의 약물은 현재 다양한 골다공증(osteopenia, osteoporosis and severe osteoporosis) 치료에 광범위하게 사용되고 있지만, 이들 약물은 위장관 부작용 및 복잡한 복약 방법 등으로 인해 환자가 고통받고 있다. 특히 포사맥스로 대표되는 경구용 biophophonate류의 약물은 그 분자적 작용기전이 아직 명확하지 않기 때문에 잠재적인 위험성을 가지고 있다. 따라서 최근에는 경구 biophosphate류 약물의 부작용을 개선할 뿐만 아니라 치료 효능이 뛰어난 화합물을 선별하거나, 고비용의 단일클론항체 및 부갑상선 호르몬 제제의 비용을 감소시킬 수 있는 방법들에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.Oral biophophonate drugs are currently widely used in the treatment of various osteoporosis (osteopenia, osteoporosis and severe osteoporosis), but these drugs suffer from gastrointestinal side effects and complicated medications. In particular, oral biophophonate drugs represented by Posamax have a potential risk because their molecular mechanism of action is not yet clear. Therefore, researches are being actively conducted on methods that can improve the side effects of oral biophosphate drugs, select compounds with high therapeutic efficacy, and reduce the cost of expensive monoclonal and parathyroid hormone preparations.
Alendronate, risedronate, ibandronic acid, zoledronic acid, 및 minodronic acid 등과 같이 골다공증 치료에 일반적으로 처방되고 있는 경구용 bisphosphonate류의 약물들은, 파골세포 경로(osteoclast pathway)에 관여함으로써 파골세포(osteoclast)의 활성을 줄이고, 이를 통해 골흡수(bone resorption)를 줄인다고 알려져 있다. 그러나 골대사에 있어서 골흡수(bone resorption) 및 골형성(bone formation)의 균형은 매우 중요하며 이것을 고려할 때, 경구용 bisphosphonate류 약물의 작용기전을 파골세포 경로만으로 해석하기에는 골량 손실 감소에 대한 효과를 모두 설명하기는 어렵다.Oral bisphosphonate drugs commonly prescribed for the treatment of osteoporosis, such as alendronate, risedronate, ibandronic acid, zoledronic acid, and minodronic acid, reduce the activity of osteoclasts by participating in the osteoclast pathway. This is known to reduce bone resorption. However, in bone metabolism, the balance of bone resorption and bone formation is very important. Considering this, the effect of oral bisphosphonate-like drugs on the osteoclast pathway alone has all effects on reducing bone loss. It is difficult to explain.
Raloxifene과 같은 선택적 에스토로겐 수용체 조절제는 폐경 후에 발생하는 골다공증의 예방 및 치료에 주로 처방되고 있고, 유방암 예방 및 골결손(osteopenia)에 대해서는 효과가 우수한 편이다. 그러나 경구 bisphosphonate류의 약물에 비해 낮은 효과(efficacy) 및 높은 부작용의 문제점을 가지고 있다. 또한 선택적 에스토로겐 수용체 조절제라는 것 외에는 골다공증 치료 효과와 관련된 구체적인 작용기전은 아직 불명확하다.Selective estrogen receptor modulators such as Raloxifene are mainly prescribed for the prevention and treatment of osteoporosis that occurs after menopause, and are effective against breast cancer prevention and osteopenia. However, compared to oral bisphosphonate drugs, there are problems of low efficacy and high side effects. In addition, except for the selective estrogen receptor modulators, the specific mechanism of action related to the effect of treating osteoporosis is still unclear.
최근에는 차세대 골다공증 치료 신약으로 부갑상선 호르몬 유도체들과 같이 골생성을 촉진하는 작용 기전을 가진 신약이나, 조골세포(osteoblast)의 분화형성에 영향을 주는 신약들이 각광받고 있다. 이러한 신약을 선별하기 위한 방법으로는 조골세포 계열의 세포주나 중간엽 줄기세포에 시험물질들을 처리하고 osteoprotegerin(OPG), alkaline phosphatase(ALP) 등을 측정하는 방법들이 사용되고 있다. 중간엽 줄기세포를 이용하는 경우에는 골분화를 유도하는 배양액(보통 덱사메타손, 비타민C, 베타글리세롤포스페이트(beta-glycerol phosphate) 등을 첨가한 배양액)에 골다공증 치료 및/또는 예방 물질을 처리하고 최소 1주일에서 최대 3주까지 배양한 후 골형성 마커를 측정해야 하기 때문에 장시간을 필요로 한다. 따라서 신약 후보 물질이나 건강식품 개발을 위한 원료 개발을 위해서는 효율성이 떨어지기 때문에 대량의 물질을 스크리닝하기에 적합하지 않다.Recently, new drugs for treating osteoporosis, such as parathyroid hormone derivatives, having new mechanisms for promoting bone formation or new drugs that affect the differentiation of osteoblasts have been in the spotlight. As a method for screening such new drugs, methods for treating test substances in osteoblast-like cell lines or mesenchymal stem cells and measuring osteoprotegerin (OPG) and alkaline phosphatase (ALP) are used. When using mesenchymal stem cells, osteoporosis treatment and / or prophylactic agents are treated for at least one week in a culture medium that induces bone differentiation (typically, a medium containing dexamethasone, vitamin C, and beta-glycerol phosphate). Long time is required because bone formation markers should be measured after incubation for up to 3 weeks. Therefore, it is not suitable for the screening of a large amount of substances because of the low efficiency for developing new drug candidates or raw materials for health food development.
이와 같이 부작용이 적고 치료 효과가 뛰어난 골다공증 예방 및/또는 치료제를 개발하기 위해서는 단시간 내에 손쉬운 방법으로 골다공증 치료 효과가 있는 물질들을 선별할 수 있는 방법의 개발이 요구되고 있는 실정이다.As described above, in order to develop an osteoporosis prevention and / or treatment agent having fewer side effects and excellent therapeutic effects, it is required to develop a method for selecting substances having an osteoporosis treatment effect in an easy manner within a short time.
본 발명은 상기와 같은 종래 기술상의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 단시간 내에 손쉬운 방법으로 골다공증 예방 및/또는 치료 효과가 있는 물질들을 선별할 수 있는 스크리닝 방법을 제공하기 위하여, 중간엽 줄기세포(Mesenchymal stem cell)에 시험물질을 처리하고 배양하는 단계; 상기 세포 배양액의 렙틴(leptin)양을 효소결합항체부착반응으로 측정하는 단계; 및 시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 유의성 있게 렙틴양을 증가시키는 후보 물질을 선별하는 단계를 포함하는 골다공증 예방제 또는 치료제의 스크리닝 방법 및 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물의 스크리닝 방법을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.The present invention has been made to solve the above-mentioned problems in the prior art, in order to provide a screening method capable of selecting a substance having a prophylactic and / or therapeutic effect of osteoporosis within a short time, mesenchymal stem cells ( Treating and culturing the test substance in mesenchymal stem cells; Measuring the amount of leptin in the cell culture by enzyme-linked antibody attachment reaction; And a screening method for preventing or improving osteoporosis, and a screening method for a health functional food composition for preventing or improving osteoporosis, comprising selecting a candidate substance which significantly increases the amount of leptin as compared to a control which has not been treated with the test substance. For that purpose.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be achieved by the present invention is not limited to the above-mentioned problem, another task that is not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the following description.
본 발명은 중간엽 줄기세포(Mesenchymal stem cell)에 시험물질을 처리하고 배양하는 단계; 상기 세포 배양액의 렙틴(leptin)양을 효소결합항체부착반응으로 측정하는 단계; 및 시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 유의성 있게 렙틴양을 증가시키는 후보 물질을 선별하는 단계를 포함하는 골다공증 예방제 또는 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다.The present invention comprises the steps of treating and culturing a test substance in mesenchymal stem cells; Measuring the amount of leptin in the cell culture by enzyme-linked antibody attachment reaction; And it provides a screening method of preventing or treating osteoporosis prevention agent comprising the step of selecting a candidate substance to significantly increase the leptin amount compared to the control group was not treated.
또한 본 발명은 중간엽 줄기세포(Mesenchymal stem cell)에 시험물질을 처리하고 배양하는 단계; 상기 세포 배양액의 렙틴(leptin)양을 효소결합항체부착반응으로 측정하는 단계; 및 시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 유의성 있게 렙틴양을 증가시키는 후보 물질을 선별하는 단계를 포함하는 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물의 스크리닝 방법을 제공한다.In another aspect, the present invention comprises the steps of treating and culturing the test substance in mesenchymal stem cells; Measuring the amount of leptin in the cell culture by enzyme-linked antibody attachment reaction; And it provides a method for screening a health functional food composition for osteoporosis prevention or improvement comprising the step of selecting a candidate substance to significantly increase the amount of leptin compared to the control group was not treated.
본 발명의 일 구현예로, 상기 스크리닝 방법은 일주일 이내로 배양하는 것을 특징으로 한다.In one embodiment of the present invention, the screening method is characterized in that culture within one week.
본 발명의 다른 구현예로, 상기 시험물질은 합성 화합물, 미생물 배양액 또는 추출물, 합성 펩타이드, 핵산, 단백질, 항체, 압타머 및 천연 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 한다.In another embodiment, the test substance is characterized in that selected from the group consisting of synthetic compounds, microbial cultures or extracts, synthetic peptides, nucleic acids, proteins, antibodies, aptamers and natural extracts.
본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 중간엽 줄기세포는 골수 또는 지방 조직에서 유래된 줄기세포인 것을 특징으로 한다.In another embodiment of the present invention, the mesenchymal stem cells are characterized in that the stem cells derived from bone marrow or adipose tissue.
본 발명에 따른 중간엽 줄기세포를 이용한 골다공증 예방제 또는 치료제의 스크리닝 방법, 및 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물의 스크리닝 방법은 일주일 이내에 골다공증 예방 또는 치료제의 후보 물질을 선별 가능하도록 함으로써, 최소 10일 이상 소요되던 기존의 선별 방법과 비교하여 그 효율성을 현저히 높일 수 있다. 또한 본 발명자들은 다양한 생리활성을 조절할 수 있는 렙틴이 중간엽 줄기세포에서 생산된다는 것을 처음 밝힘으로써, 본 발명의 스크리닝 방법은 골다공증 예방 및/또는 치료용 물질을 스크리닝하는데 사용가능할 뿐만 아니라, 항비만증과 같은 다양한 렙틴 관련 질병에 대한 예방 및/또는 치료용 물질의 선별에도 응용될 수 있을 것으로 기대된다.Screening method for preventing or treating osteoporosis using mesenchymal stem cells according to the present invention, and for screening a health functional food composition for preventing or improving osteoporosis, by selecting a candidate substance for preventing or treating osteoporosis within a week, at least 10 days Compared with the conventional screening method, which is necessary, the efficiency can be significantly increased. In addition, the inventors first revealed that leptin, which can control various physiological activities, is produced in mesenchymal stem cells, and thus, the screening method of the present invention can be used for screening substances for preventing and / or treating osteoporosis, It is expected that the present invention may be applied to screening of prophylactic and / or therapeutic substances for various leptin related diseases.
도 1 은 본 발명의 특징을 간략히 나타낸 모식도이다.
도 2 는 중간엽 줄기세포, 지방세포 분화 또는 조골세포 분화가 유도된 중간엽 줄기세포에서의 렙틴 분비능을 측정한 결과를 보여주는 도면이다.
도 3 은 골다공증 치료제가 중간엽 줄기세포 또는 지방분화 중간엽 줄기세포의 렙틴 분비능에 미치는 영향을 보여주는 도면이다.1 is a schematic diagram showing briefly the features of the present invention.
Figure 2 shows the results of measuring leptin secretion in mesenchymal stem cells, adipocyte differentiation or osteoblast differentiation induced mesenchymal stem cells.
3 is a view showing the effect of osteoporosis therapeutic agent on leptin secretion capacity of mesenchymal stem cells or adipose differentiation mesenchymal stem cells.
본 발명자들은 부작용이 적고 치료 효과가 뛰어난 골다공증 예방제 및/또는 치료제를 개발하기 위하여 단시간 내에 손쉬운 방법으로 골다공증 치료 효과가 있는 물질들을 선별할 수 있는 방법에 대하여 연구한 결과 본 발명을 완성하게 되었다.The inventors of the present invention have completed the present invention as a result of research on a method for selecting osteoporosis therapeutic substances in an easy manner in a short time in order to develop an osteoporosis prevention agent and / or a therapeutic agent having low side effects and excellent therapeutic effects.
렙틴은 다양한 생리활성을 조절할 수 있는 것으로 알려져 있기 때문에, 렙틴을 주로 분비하는 것으로 알려진 지방세포를 이용하여 신약을 스크리닝하고자 하는 시도들이 있으나, 지방세포는 세포를 분리하는 방법이 용이하지 않으며 렙틴 분비능이나 렙틴 수용체의 감수성이 개체간의 차이가 있어 일차배양 지방세포를 이용하여 렙틴 분비를 측정하는 평가하는 방법은 큰 편차로 인해 신약 및 건강식품 스크리닝에 있어 한계가 있다.Since leptin is known to control various physiological activities, there have been attempts to screen new drugs using adipocytes, which are known to secrete leptin, but adipocytes are not easy to separate cells. Since the sensitivity of leptin receptors is different among individuals, the method of measuring leptin secretion using primary cultured adipocytes has limitations in screening new drugs and health foods due to large deviations.
본 발명자들은 지방세포에 비하여 골수 또는 지방조직에서 쉽게 분리할 수 있는 중간엽 줄기세포에서도 렙틴이 분비된다는 것을 확인하고, 중간엽 줄기세포의 렙틴 분비능을 이용한 스크리닝 방법을 개발하였다. 중간엽 줄기세포는 골수 또는 지방조직에서 쉽게 분리할 수 있으며 배양이 용이하다. 또한 개체간의 편차가 적어 스크리닝 방법의 신뢰성을 높일 수 있을 것으로 기대하였다.The present inventors confirmed that leptin is also secreted from mesenchymal stem cells that can be easily separated from bone marrow or adipose tissue, compared to adipocytes, and developed a screening method using leptin secretion ability of mesenchymal stem cells. Mesenchymal stem cells can be easily separated from bone marrow or adipose tissue and are easy to culture. In addition, it was expected that the reliability of the screening method could be improved due to the small variation among individuals.
본 발명의 일실시예에서는 중간엽 줄기세포도 렙틴을 분비하는 것을 확인하였으며(실시예 1 참조), 다른 실시예에서는 골다공증 치료제를 처리할 경우 중간엽 줄기세포에서 분비되는 렙틴의 양이 급격히 증가되는 것을 확인하였다(실시예 2 참조).In one embodiment of the present invention, it was confirmed that mesenchymal stem cells also secrete leptin (see Example 1), and in other embodiments, the amount of leptin secreted from mesenchymal stem cells increases rapidly when the osteoporosis treatment agent is treated. It was confirmed (see Example 2).
상기 결과로부터, 본 발명의 스크리닝 방법은 단시간에 효율적으로 골다공증 치료제 또는 예방제로 사용가능한 후보 물질들을 선별하는데 사용될 수 있다는 것을 확인하였다.From the above results, it was confirmed that the screening method of the present invention can be used to select candidate substances that can be used as a therapeutic or prophylactic agent for osteoporosis in a short time and efficiently.
이에 본 발명은 중간엽 줄기세포(Mesenchymal stem cell)에 시험물질을 처리하고 배양하는 단계; 상기 세포 배양액의 렙틴(leptin)양을 효소결합항체부착반응으로 측정하는 단계; 및 시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 유의성 있게 렙틴양을 증가시키는 후보 물질을 선별하는 단계를 포함하는 골다공증 예방제 또는 치료제의 스크리닝 방법을 제공한다.Accordingly, the present invention comprises the steps of treating and culturing the test substance in mesenchymal stem cells; Measuring the amount of leptin in the cell culture by enzyme-linked antibody attachment reaction; And it provides a screening method of preventing or treating osteoporosis prevention agent comprising the step of selecting a candidate substance to significantly increase the leptin amount compared to the control group was not treated.
또한 본 발명은 중간엽 줄기세포(Mesenchymal stem cell)에 시험물질을 처리하고 배양하는 단계; 상기 세포 배양액의 렙틴(leptin)양을 효소결합항체부착반응으로 측정하는 단계; 및 시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 유의성 있게 렙틴양을 증가시키는 후보 물질을 선별하는 단계를 포함하는 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물의 스크리닝 방법을 제공한다.In another aspect, the present invention comprises the steps of treating and culturing the test substance in mesenchymal stem cells; Measuring the amount of leptin in the cell culture by enzyme-linked antibody attachment reaction; And it provides a method for screening a health functional food composition for osteoporosis prevention or improvement comprising the step of selecting a candidate substance to significantly increase the amount of leptin compared to the control group was not treated.
상기 중간엽 줄기세포에 시험물질을 처리하고 배양하는 기간에는 제한이 없으나, 바람직하게는 1일 내지 10일이고, 더욱 바람직하게는 일주일 이내이다.There is no restriction on the period of treatment and incubation of the test substance to the mesenchymal stem cells, preferably 1 day to 10 days, more preferably within a week.
또한 상기 시험물질의 종류에는 제한이 없다. 바람직하게는 합성 화합물, 미생물 배양액 또는 추출물, 합성 펩타이드, 핵산, 단백질, 항체, 압타머 및 천연 추출물로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
In addition, there is no limitation on the type of the test substance. Preferably it may be selected from the group consisting of synthetic compounds, microbial cultures or extracts, synthetic peptides, nucleic acids, proteins, antibodies, aptamers and natural extracts.
[[ 실시예Example ]]
실시예Example 1. 인간 골수 1. Human Bone Marrow 중간엽Intermediate lobe 줄기세포의 Stem cell 렙틴Leptin 분비능Secretory function 측정 Measure
인간 골수 중간엽 줄기세포(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBM-MSCs)에서 렙틴(leptin)이 분비되는지 확인하기 위하여, 중간엽 줄기세포를 태아우혈청(fetal bovine serum, FBS) 10%를 첨가한 DMEM(Dulbecco Modified Eagle’s Medium) 배지에서 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 또한 지방세포(fat cell)와 조골세포(osteoblast)로 분화될 경우 렙틴 분비에 변화가 생기는지 확인하기 위하여, 지방세포 분화 유도를 위해서는 인슐린(insulin) 1ug/mL, 덱사메타손(dexamethasone, DEXA) 100nM, 및 이소부틸메틸잔틴(isobutylmethylxanthine, IBMX) 0.5mM을 각각 또는 혼합하여 첨가하였고, 대조군으로는 트로글리타존(troglitazone)을 첨가하여 배양하였다. 조골세포(osteoblast) 분화를 위해서는 덱사메타손 100nM, 비타민C(ascorbic acid, Vit. C) 50uM, 및 베타글리세롤포스페이트(beta-glycerol phosphate) 10mM을 각각 또는 혼합하여 첨가하였다. 대조군으로는 지방세포 분화를 유도하는 조건에서 배양한 세포(Adipo)를 사용하였다. 그리고 각각의 배양된 세포는 세포 분화 여부 및 렙틴 분비량을 측정하여 도 2에 나타내었다.To determine whether leptin is secreted from human bone marrow mesenchymal stem cells (hBM-MSCs), 10% of fetal bovine serum (FBS) was added to mesenchymal stem cells. Incubated in DMEM (Dulbecco Modified Eagle's Medium) medium at 37 ℃, 5% CO 2 conditions. In addition, in order to determine whether changes in leptin secretion when differentiated into fat cells and osteoblasts, 1ug / mL of insulin, dexamethasone (DEXA) 100nM, and 0.5 mM of isobutylmethylxanthine (IBMX) was added or mixed, and troglitazone was added as a control to incubate. For osteoblast differentiation,
지방세포로의 분화를 유도하기 위하여 인슐린, 덱사메타손, 및 이소부틸메틸잔틴을 처리하고 배양한 세포내의 지방체를 오일레드오(Oil Red O, ORO) 염색법을 이용하여 측정하였다.In order to induce differentiation into adipocytes, fat bodies in cells treated with insulin, dexamethasone, and isobutylmethylxanthine were cultured using Oil Red O (ORO) staining.
도 2(가)에 나타난 바와 같이, 각각을 처리한 세포는 처리하지 않은 세포와 비교하여 지방체의 양이 거의 증가되지 않았으나, 덱사메타손과 이소부틸메틸잔틴을 혼합하여 처리한 세포와 세 가지 모두 혼합하여 처리한 세포는 지방체의 양이 처리하지 않은 세포에 비하여 5배 이상 증가된 것을 확인할 수 있었다. 한편 도 2(다)에 나타난 바와 같이, 지방세포로의 분화가 유도된 덱사메타손과 이소부틸메틸잔틴을 혼합하여 처리한 세포와 세 가지 모두 혼합하여 처리한 세포에서의 렙틴의 양은 많이 증가하지 않은 반면, 덱사메타손만 처리한 세포에서 처리하지 않은 세포와 비교하여 30배 이상 증가된 것을 확인할 수 있었다.As shown in Fig. 2 (a), the cells treated with each other had almost no increase in the amount of fat body compared with the cells not treated, but all three were mixed with the cells treated with dexamethasone and isobutylmethylxanthine. Cells treated by was confirmed that the amount of fat body increased by more than five times compared to the cells not treated. On the other hand, as shown in Fig. 2 (c), the amount of leptin in the cells treated with a mixture of dexamethasone and isobutylmethylxanthine induced in differentiation into adipocytes and all three treated cells did not increase much, It was confirmed that the cells treated with dexamethasone alone increased more than 30 times compared with the cells not treated.
조골세포로의 분화를 유도하기 위하여 덱사메타손, 비타민C, 베타글리세롤포스페이트를 처리하고 배양한 세포를 이용하여 조골세포 분화의 지표로 사용되고 있는 알칼리성 인산가수분해효소(alkaline phosphatase, ALP) 활성을 측정하였다.To induce differentiation into osteoblasts, alkaline phosphatase (ALP) activity, which is used as an indicator of osteoblast differentiation, was measured using cells cultured with dexamethasone, vitamin C and betaglycerol phosphate.
도 2(나)에 나타난 바와 같이, 덱사메타손만 처리한 세포와 덱사메타손 및 비타민C를 혼합하여 처리한 세포는 처리하지 않은 세포에 비하여 약 2배의 ALP 활성을 나타내었고, 덱사메타손과 베타글리세롤포스페이트를 혼합하여 처리한 세포는 약 3배 높은 활성을 나타내었다. 그리고 세 가지 모두 혼합하여 처리한 세포는 4배 이상의 활성을 나타내어, 조골세포 분화가 촉진되었다는 것을 확인하였다. 또한 덱사메타손만 처리한 세포, 덱사메타손과 비타민C를 혼합하여 처리한 세포, 덱사메타손과 베타글리세롤포스페이트를 혼합하여 처리한 세포와 세 가지 모두 혼합하여 처리한 세포에서 렙틴 분비량이 증가된 것을 확인할 수 있었다(도 2(라) 참조).As shown in Fig. 2 (b), cells treated with only dexamethasone-treated cells and dexamethasone and vitamin C showed approximately twice the ALP activity as compared to untreated cells, and mixed dexamethasone and betaglycerol phosphate. Treated cells showed about three times higher activity. And the cells treated with all three mixtures showed four times more activity, confirming that osteoblast differentiation was promoted. In addition, leptin secretion was increased in cells treated with dexamethasone alone, cells treated with dexamethasone mixed with vitamin C, cells treated with mixed dexamethasone and betaglycerol phosphate, and cells treated with all three (FIG. 2 (d)).
상기 결과들을 통하여 중간엽 줄기세포가 렙틴을 분비하며, 지방세포 분화가 렙틴 분비능에 영향을 미치지 않는다는 것과 조골세포 분화가 유도된 중간엽 줄기세포에서 렙틴 분비능이 증가된다는 것을 확인하였다.
These results confirm that mesenchymal stem cells secrete leptin, adipocyte differentiation does not affect leptin secretion ability, and leptin secretion is increased in osteoblast differentiation-induced mesenchymal stem cells.
실시예Example 2. 인간 골수 2. Human Bone Marrow 중간엽Intermediate lobe 줄기세포의 Stem cell 렙틴Leptin 분비능을Secretion 이용한 골다공증 약물 및 Used osteoporosis drugs and 염증매개인자의Inflammatory mediator 렙틴 분비에 대한 영향 Effect on leptin secretion
골다공증 치료제가 중간엽 줄기세포의 렙틴 분비능에 미치는 영향을 확인하기 위하여, 중간엽 줄기세포에 덱사메타손(dexamethasone), 알렌드로네이트(alendronate), 라록시펜(raloxifene), 스트론튬라넬레이트(strontium ranelate), 인터루킨-17(interleukin-17, IL-17), 인터루킨-11(IL-11)을 각각 처리한 후 3일 동안 배양하였다. 3일 동안 배양한 후에 세포 배양 상층액에 축적된 렙팁의 양을 효소결합항체부착반응(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)을 이용하여 정량하였다. 지방분화 중간엽 줄기세포는 15일 동안 지방세포 분화를 유도한 후에 골다공증 치료제를 처리하고 3일 동안 배양하여 렙틴의 양을 측정하였다. 그 결과는 도 3에 나타내었다.To determine the effect of osteoporosis treatment on leptin secretion in mesenchymal stem cells, dexamethasone, alendronate, raloxifene, strontium ranelate, interleukin- 17 (interleukin-17, IL-17) and interleukin-11 (IL-11) were treated for 3 days and then incubated. After incubation for 3 days, the amount of leptip accumulated in the cell culture supernatant was quantified using an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Adipocyte differentiation mesenchymal stem cells were induced for adipocyte differentiation for 15 days and then treated with osteoporosis treatment and cultured for 3 days to measure the amount of leptin. The results are shown in Fig.
도 3에 나타난 바와 같이, 지방분화 중간엽 줄기세포에 골다공증 치료제를 처리하였을 경우, 대조군과 비교하여 렙틴 분비능이 약 5배 정도 증가된 것을 확인할 수 있었으나, 중간엽 줄기세포에서는 최대 100배까지 급격하게 증가된 것을 확인할 수 있었다. 상기 결과는 지방분화 중간엽 줄기세포보다 중간엽 줄기세포가 골다공증 치료제에 높은 민감성을 가지고 있다는 것을 의미하며, 따라서 중간엽 줄기세포의 렙틴 분비량을 측정하는 방법은, 기존에 사용되던 방법들에 비하여 단시간 내에 골다공증 치료제를 선별하는데 용이하게 이용될 수 있다는 것을 확인할 수 있었다.
As shown in Figure 3, when treated with osteoporosis treatment on adipose-derived mesenchymal stem cells, it was confirmed that the leptin secretion capacity was increased by about five times compared to the control group, but in mesenchymal stem cells rapidly up to 100 times It was confirmed that the increase. The results indicate that mesenchymal stem cells are more sensitive to osteoporosis therapeutic agents than adipose differentiation mesenchymal stem cells, and thus, the method of measuring leptin secretion of mesenchymal stem cells is shorter than conventional methods. It was confirmed that it can be easily used to select a therapeutic agent for osteoporosis within.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예는 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야 한다.It will be understood by those skilled in the art that the foregoing description of the present invention is for illustrative purposes only and that those of ordinary skill in the art can readily understand that various changes and modifications may be made without departing from the spirit or essential characteristics of the present invention. will be. It is therefore to be understood that the above-described embodiments are illustrative and non-restrictive in every respect.
Claims (8)
상기 세포 배양액의 렙틴(leptin)양을 효소결합항체부착반응으로 측정하는 단계; 및
시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 유의성 있게 렙틴양을 증가시키는 후보 물질을 선별하는 단계를 포함하는 골다공증 예방제 또는 치료제의 스크리닝 방법.
Treating and culturing the test substance in mesenchymal stem cells;
Measuring the amount of leptin in the cell culture by enzyme-linked antibody attachment reaction; And
A method for screening a prophylactic or therapeutic agent for osteoporosis, comprising selecting a candidate substance which significantly increases the amount of leptin as compared to a control which is not treated with a test substance.
상기 중간엽 줄기세포에 시험물질을 처리하고 배양하는 단계는 3일 내지 5일 동안 배양하는 것을 특징으로 하는, 방법.
The method of claim 1,
Treatment and culturing the test substance to the mesenchymal stem cells, characterized in that the culture for 3 to 5 days.
상기 시험물질은 합성 화합물, 미생물 배양액 또는 추출물, 합성 펩타이드, 핵산, 단백질, 항체, 압타머 및 천연 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 방법.
The method of claim 1,
The test substance is characterized in that selected from the group consisting of synthetic compounds, microbial cultures or extracts, synthetic peptides, nucleic acids, proteins, antibodies, aptamers and natural extracts.
상기 중간엽 줄기세포는 골수 또는 지방 조직에서 유래된 줄기세포인 것을 특징으로 하는, 방법.
The method of claim 1,
The mesenchymal stem cells, characterized in that the stem cells derived from bone marrow or adipose tissue.
상기 세포 배양액의 렙틴(leptin)양을 효소결합항체부착반응으로 측정하는 단계; 및
시험물질을 처리하지 않은 대조군과 비교하여 유의성 있게 렙틴양을 증가시키는 후보 물질을 선별하는 단계를 포함하는 골다공증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물의 스크리닝 방법.
Treating and culturing the test substance in mesenchymal stem cells;
Measuring the amount of leptin in the cell culture by enzyme-linked antibody attachment reaction; And
A method for screening a nutraceutical composition for preventing or improving osteoporosis, comprising selecting a candidate substance that significantly increases the amount of leptin as compared to a control which has not been treated with a test substance.
상기 중간엽 줄기세포에 시험물질을 처리하고 배양하는 단계는 3일 내지 5일 동안 배양하는 것을 특징으로 하는, 방법.
The method of claim 5, wherein
Treatment and culturing the test substance to the mesenchymal stem cells, characterized in that the culture for 3 to 5 days.
상기 시험물질은 합성 화합물, 미생물 배양액 또는 추출물, 합성 펩타이드, 핵산, 단백질, 항체, 압타머 및 천연 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 방법.
The method of claim 5, wherein
The test substance is characterized in that selected from the group consisting of synthetic compounds, microbial cultures or extracts, synthetic peptides, nucleic acids, proteins, antibodies, aptamers and natural extracts.
상기 중간엽 줄기세포는 골수 또는 지방 조직에서 유래된 줄기세포인 것을 특징으로 하는, 방법.The method of claim 5, wherein
The mesenchymal stem cells, characterized in that the stem cells derived from bone marrow or adipose tissue.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020110131255A KR101354826B1 (en) | 2011-12-08 | 2011-12-08 | Screening method of the materials for prevention or treatment of osteoporosis using leptin production in mesenchymal stem cell |
| PCT/KR2012/010640 WO2013085344A1 (en) | 2011-12-08 | 2012-12-07 | Method for screening material for prevention or treatment of osteoporosis using leptin secretion of mesenchymal stem cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020110131255A KR101354826B1 (en) | 2011-12-08 | 2011-12-08 | Screening method of the materials for prevention or treatment of osteoporosis using leptin production in mesenchymal stem cell |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20130064574A KR20130064574A (en) | 2013-06-18 |
| KR101354826B1 true KR101354826B1 (en) | 2014-01-27 |
Family
ID=48574622
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020110131255A KR101354826B1 (en) | 2011-12-08 | 2011-12-08 | Screening method of the materials for prevention or treatment of osteoporosis using leptin production in mesenchymal stem cell |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101354826B1 (en) |
| WO (1) | WO2013085344A1 (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104606230B (en) * | 2015-01-23 | 2019-05-10 | 北京吉源生物科技有限公司 | Application of the fat mesenchymal stem cell in terms of lipid-loweringing |
| CN109917030A (en) * | 2019-01-28 | 2019-06-21 | 南京海纳医药科技股份有限公司 | The pre-treating method and detection method of a kind of minodronic acid based on derivatization on solid-phase extraction column in plasma sample |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20100105165A (en) * | 2009-03-20 | 2010-09-29 | 주식회사 스템메디언스 | Large scale production of growth promoting factors using fetus-derived mesenchymal stem cells from amniotic fluids |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AUPQ147799A0 (en) * | 1999-07-07 | 1999-07-29 | Medvet Science Pty. Ltd. | Mesenchymal precursor cell |
| PE20071309A1 (en) * | 2006-02-17 | 2008-02-13 | Wyeth Corp | ANTIBODIES FOR BONE FORMATION MODULATION |
| US10098333B2 (en) * | 2008-12-09 | 2018-10-16 | University Of Southern California | Method for treating an SLE-like autoimmune disease in a human subject consisting of administering stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED) and erythropoietin (EPO) to said human subject |
-
2011
- 2011-12-08 KR KR1020110131255A patent/KR101354826B1/en active IP Right Grant
-
2012
- 2012-12-07 WO PCT/KR2012/010640 patent/WO2013085344A1/en active Application Filing
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20100105165A (en) * | 2009-03-20 | 2010-09-29 | 주식회사 스템메디언스 | Large scale production of growth promoting factors using fetus-derived mesenchymal stem cells from amniotic fluids |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 학술논문(2005) * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2013085344A1 (en) | 2013-06-13 |
| KR20130064574A (en) | 2013-06-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Al‐Bari et al. | Current advances in regulation of bone homeostasis | |
| Hardaway et al. | Marrow adipocyte-derived CXCL1 and CXCL2 contribute to osteolysis in metastatic prostate cancer | |
| Tao et al. | Berberine promotes bone marrow-derived mesenchymal stem cells osteogenic differentiation via canonical Wnt/β-catenin signaling pathway | |
| Maruotti et al. | Bisphosphonates: effects on osteoblast | |
| Iñiguez-Ariza et al. | Bone biology, signaling pathways, and therapeutic targets for osteoporosis | |
| Tang et al. | Apelin stimulates proliferation and suppresses apoptosis of mouse osteoblastic cell line MC3T3-E1 via JNK and PI3-K/Akt signaling pathways | |
| Catalano et al. | Pulsed electromagnetic fields modulate bone metabolism via RANKL/OPG and Wnt/β-catenin pathways in women with postmenopausal osteoporosis: a pilot study | |
| Atkins et al. | Vitamin K promotes mineralization, osteoblast-to-osteocyte transition, and an anticatabolic phenotype by γ-carboxylation-dependent and-independent mechanisms | |
| Datta et al. | Distinct roles for mitogen-activated protein kinase phosphatase-1 (MKP-1) and ERK-MAPK in PTH1R signaling during osteoblast proliferation and differentiation | |
| Li et al. | The sclerostin‐independent bone anabolic activity of intermittent PTH treatment is mediated by T‐cell–produced Wnt10b | |
| Xu et al. | Effects of irisin on osteoblast apoptosis and osteoporosis in postmenopausal osteoporosis rats through upregulating Nrf2 and inhibiting NLRP3 inflammasome | |
| Abdallah et al. | DLK1 is a novel regulator of bone mass that mediates estrogen deficiency–induced bone loss in mice | |
| Almeida et al. | Strontium ranelate increases osteoblast activity | |
| Huh et al. | Biphasic positive effect of formononetin on metabolic activity of human normal and osteoarthritic subchondral osteoblasts | |
| Park et al. | Selective osteogenesis by a synthetic mineral inducing peptide for the treatment of osteoporosis | |
| Bonjour et al. | Nutritional approach for inhibiting bone resorption in institutionalized elderly women with vitamin D insufficiency and high prevalence of fracture | |
| Sun et al. | Aluminum trichloride inhibits osteoblast mineralization via TGF-β1/Smad signaling pathway | |
| Yu et al. | Soybean isoflavone treatment induces osteoblast differentiation and proliferation by regulating analysis of Wnt/β-catenin pathway | |
| Giner et al. | Alendronate and raloxifene affect the osteoprotegerin/RANKL system in human osteoblast primary cultures from patients with osteoporosis and osteoarthritis | |
| Yang et al. | 1, 25-Dihydroxyvitamin D3 and extracellular calcium promote mineral deposition via NPP1 activity in a mature osteoblast cell line MLO-A5 | |
| Lu et al. | Exendin-4 and eldecalcitol synergistically promote osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells through M2 macrophages polarization via PI3K/AKT pathway | |
| Oh et al. | Synthetic low-calcaemic vitamin D3 analogues inhibit secretion of insulin-like growth factor II and stimulate production of insulin-like growth factor-binding protein-6 in conjunction with growth suppression of HT-29 colon cancer cells | |
| Pulik et al. | The survey of cells responsible for heterotopic ossification development in skeletal muscles—human and mouse models | |
| Tudpor et al. | Thrombin receptor deficiency leads to a high bone mass phenotype by decreasing the RANKL/OPG ratio | |
| Hansen et al. | Co-expression of 1α-hydroxylase and vitamin D receptor in human articular chondrocytes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20170102 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20190107 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20200102 Year of fee payment: 7 |