KR101333715B1 - Pharmaceutical composition for prevention and treatment of inflammatory diseases comprising extract or fractions of Mastixia arborea C.B.Clarke as an active ingredient - Google Patents

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Abstract

본 발명은 마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke) 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 마스티시아 알보리아 추출물이 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 나이트릭옥사이드(nitric oxide)와 프로스타글란딘 E2(Prostaglandin E2) 의 생성을 억제하고, IL-6와 IL-1beta 사이토카인의 생성을 억제하며, iNOS 단백질의 발현을 농도의존적으로 저해하며, 염증신호전달 물질의 인산화를 억제하였으며, 카라기난으로 유도된 마우스 족부종 또한 억제하는 효과가 있음을 확인하였다. 특히, 이 식물의 에틸아세테이트 분획물도 NO 생성 저해효과와 족부종 억제효과가 있음을 확인하였다. 따라서, 탁월한 항염효과를 가진 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물이 염증관련 질환의 예방 및, 치료용 또는 개선용 조성물, 피부외용제, 화장료 조성물 및 건강식품의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a composition for the prevention and treatment of inflammatory diseases containing Mastixia arborea CBClarke extract or fractions thereof, more specifically, the age at which the mastia alboria extract rapidly increases due to inflammation. suppressing the formation of trick-oxide (nitric oxide) and prostaglandin E 2 (prostaglandin E 2) and, IL-6 and IL-1beta, and inhibit the production of cytokine, inhibits the expression of iNOS protein in a concentration-dependent manner, inflammatory signaling Phosphorylation of the substance was inhibited, and carrageenan-induced mouse foot edema was also found to have an inhibitory effect. In particular, the ethyl acetate fraction of this plant was also found to have an inhibitory effect on NO production and foot edema. Therefore, the masticia alboria extract or fractions thereof having an excellent anti-inflammatory effect can be usefully used as an active ingredient in the composition for preventing, treating or improving inflammatory diseases, external skin preparations, cosmetic compositions and health foods.

Description

마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition for prevention and treatment of inflammatory diseases comprising extract or fractions of Mastixia arborea C.B.Clarke as an active ingredient}Pharmaceutical composition for preventing and treating inflammatory diseases comprising extract or fractions of Mastixia arborea C.B.Clarke as an active ingredient}

본 발명은 마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke) 추출물 또는 이의 분획물을 이용한 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing and treating inflammatory diseases using an extract of Mastixia arborea CBClarke or a fraction thereof.

염증(inflammation)이란 외부 감염원(박테리아, 곰팡이, 바이러스, 다양한 종류의 알레르기 유발물질)의 침입에 의하여 형성되는 농양의 병리적 상태를 뜻한다. 구체적으로, 외부 세균이 특정 조직에 침입하여 증식을 하게 되면 생체의 백혈구가 이를 인지하여 증식된 외부 세균을 활발히 공격하게 되는데, 이 과정 중 발생되는 백혈구의 사해가 균에 의하여 침입받은 조직에 축적됨과 동시에 백혈구에 의하여 사멸된 침입균의 세포 파괴물이 침입받은 조직 내로 융해되어 농양이 형성된다. 염증에 의한 농양의 치료는 소염작용을 통하여 촉진될 수 있는데, 소염작용이란 항균제를 이용하여 침입균의 증식을 억제하거나 농양 중에 축적된 이물질들을 탐식하는 대식세포(macrophage)를 활성화하여 상기 이물질들을 소화 및 배설하는 대식세포의 기능을 항진시키는 등의 염증치료 촉진작용이다.Inflammation refers to the pathological condition of an abscess formed by the invasion of external infectious agents (bacteria, fungi, viruses, various types of allergens). Specifically, when the external bacteria invade specific tissues and proliferate, the white blood cells of the living body recognize the same and actively attack the multiplying external bacteria. The dead cells of the white blood cells generated during this process accumulate in the tissues invaded by the bacteria. At the same time, cell destruction of invading bacteria killed by leukocytes is fused into the invaded tissue to form an abscess. Inflammation of the abscess can be promoted through anti-inflammatory action, which is used to inhibit the growth of invading bacteria using antibacterial agents or to activate macrophage (macrophage) that feeds on foreign substances accumulated in the abscess to digest the foreign substances. And promotes inflammation, such as promoting the function of the macrophages to excrete.

일반적으로 염증 반응은 생체의 세포나 조직에 어떠한 기질적 변화를 가져오는 침습이 가해질 때 그 손상부위를 수복 재생하려고 하는 생체의 방어 반응과정이다. 따라서 이러한 일련의 반응에는 국소의 혈관, 체액의 각종 조직세포, 면역관여 세포 등이 포함된다고 한다. 최근 분자생물학의 발달과 더불어 염증성 질환이 사이토카인(cytokine)이라는 분자 수준에서의 이해가 시도되고 있으며, 이러한 질환에 영향을 주는 인자들도 하나씩 규명되고 있다.
In general, an inflammatory response is a defense process of a living body that attempts to repair and repair the damaged area when an invasion that causes some organic changes in a living cell or tissue is applied. Therefore, the series of reactions include local blood vessels, various tissue cells of body fluids, immune-involved cells, and the like. Recently, with the development of molecular biology, inflammatory diseases have been tried at the molecular level of cytokines, and factors affecting these diseases have been identified one by one.

염증을 유도하는 사이토카인과 매개체들은 핵의 요소에 의해 조절된다. 그 예로 NF-κB(nuclear factor-kappa B)는 Rel 유전자계(Rel gene family)의 핵단백질로서 7가지가 있고, 세포질에서는 IκB(inhibitory kappa B)와 결합되어 불활성인 형태로 존재하나, 유해산소(reactive oxygen), TNF-α(tumor necrosis factor-alpha)과 같은 케모카인(chemokines) 및 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide;LPS)와 같은 다양한 자극에 의해 IκB 키나제가 활성화된 후 인산화 과정을 통해 IκB가 떨어져 나가게 된다. p50과 p65의 헤테로다이머(heterodimer)로 구성된 NF-κB는 활성화된 후, 핵으로 이동하여 염증반응을 유도하는 유전자(종양괴사인자나 사이클로옥사이드 합성효소) 발현을 촉진시키는 것으로 알려져 있다(Oh GT et al ., Artherosclerosis, 159(1):17-26, 2001; Epstein FH et al ., The New England Journal of Medicine, 336(15):1066-1071, 1997; Zhang WJ et al ., FASEB J, 15(130):2423-2431, 2001; Denk A et al ., J. Biol . Chem ., 276(30):28451-28458, 2001; Sahnoun Z et al ., Phsiology , 53(4):315-339, 1998; Lindner V Pathobiology, 66(6):311-320, 1998; Landry DB et al., Am . J. Pathol., 151(4):1085-1095, 1997; ; Gerritsen ME et al ., Am . J. Pathol.,147(2):p278-292, 1995).Inflammatory cytokines and mediators are regulated by elements of the nucleus. For example, NF-κB (nuclear factor-kappa B) is a nuclear protein of the Rel gene family (Rel gene family) and seven types, and in the cytoplasm, combined with the inhibitory kappa B (IκB) exists in an inactive form, but harmful oxygen (kinase) such as reactive oxygen, chemokines such as TNF-α (tumor necrosis factor-alpha) and lipopolysaccharide (LPS), activates IκB kinase and then phosphorylate the IκB Will go out. NF-κB, composed of p50 and p65 heterodimers, is known to promote the expression of genes (tumor necrosis factor or cyclooxide synthase) that, after being activated, migrate to the nucleus and induce an inflammatory response (Oh GT et. al ., Artherosclerosis , 159 (1): 17-26, 2001; Epstein FH et al . , The New England Journal of Medicine , 336 (15): 1066-1071, 1997; Zhang WJ et al ., FASEB J , 15 (130): 2423-2431, 2001; Denk a et al . , J. Biol . Chem . , 276 (30): 28451-28458, 2001; Sahnoun Z et al . , Phsiology , 53 (4): 315-339, 1998; Lindner V Pathobiology , 66 (6): 311-320, 1998; Landry db meat al ., Am . J. Pathol ., 151 (4): 1085-1095,1997; ; Gerritsen ME et al . , Am . J. Pathol ., 147 (2): p278-292, 1995).

나이트릭 옥사이드(Nitric oxide; NO)는 나이트릭 옥사이드 합성효소(NOS)에 의해 L-아르기닌(L-arginine)이 산화되어 생성되는데, 염증과정의 매개체로서 병원성 DNA를 손상시키는 방어작용을 함으로써 항상성을 유지하는 역할을 한다(Kou and Schroder, Annuals of Surgery 221, 220-235, 1995). 나이트릭 옥사이드 합성효소중에서 유도성 나이트릭옥사이드 합성효소(iNOS; inducible nitric oxide synthase)는 세포내에서 나이트릭 옥사이드의 과생산에 아주 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져 있다. 프로스타글란딘 E2(PGE2)와 류코트리엔(Leukotriene) 또한, 아라키도닉산(arachidonic acid)으로부터 생성되는 염증 매개체로서 특히, PGE2는 사이클로옥사이드 합성효소(COX-2; cyclooxygenase-2 enzyme)에 의해 생성되며 주로 대식세포와 단핵구세포에서 많이 생성되는데, 대식세포는 리보폴리사카라이드와 같은 염증성 제제에 의해 빠르게 유도된다는 것이 밝혀졌다.Nitric oxide (NO) is produced by the oxidation of L-arginine by Nitric oxide synthase (NOS), which acts as a mediator of inflammation, (Kou and Schroder, Annuals of Surgery 221, 220-235, 1995). Among nitric oxide synthase, inducible nitric oxide synthase (iNOS) is known to be closely related to the overproduction of nitric oxide in cells. Prostaglandin E 2 (PGE 2 ) and Leukotriene In addition, PGE 2 is produced by the cyclooxygenase-2 enzyme (COX-2) as an inflammatory mediator produced from arachidonic acid It is mainly produced in macrophages and monocytes, and macrophages are rapidly induced by inflammatory agents such as riboplysaccharide.

염증유발을 위해 동물모델에서 사용되는 물질들은 adjuvant, collagen II, carrageenan 등이 있는데, 해조류의 일종인 Chondrus cripus에서 추출한 carrageenan은 면역반응 억제 외에도 급성 염증 및 만성염증유발, DIC유발, 종양의 성장 촉진, Hageman factor와 kinin의 활성화, 보체의 불활성화 등 다양한 생물학적 작용이 있는 것으로 알려져 있다(Chan WY et al ., J. Pharmacol . Exptl . Therap ., 147: 48, 1965). Materials used in animal models for inflammation induction include adjuvant, collagen II, carrageenan, etc. Chondrus In addition to suppression of immune response, carrageenan extracted from cripus is known to have various biological actions such as acute inflammation and induction of chronic inflammation, DIC induction, tumor growth promotion, activation of Hageman factor and kinin, and complement inactivation (Chan WY et al ., J. Pharmacol . Exptl . Therap . , 147: 48,1965).

지금껏 인류가 개발한 약제 중 가장 강력한 항염작용을 지니고 있는 약제는 스테로이드 제제이다. 그러나 장기적으로 사용할 때 반드시 부작용을 수반하게 된다. 따라서 염증 치료에 있어 스테로이드제는 처음 사용할 때 놀라울 정도의 효과를 발휘하여 증상을 완전 소실시켜버리지만 이는 잠시일 뿐이고, 증상은 스테로이드 사용을 중지함과 함께 다시 나타나며 반복사용하면 증상은 더욱 심해져 간다. 스테로이드제의 부작용으로는 둥근 다혈성의 얼굴, 체액의 저류, 부신억제, 감염에 대한 감수성의 증가와 기타 정신병, 백내장, 녹내장, 소화성 궤양, 창상치유지연, 초기 감염의 재활성화 등의 많은 부작용을 가지고 있다.The most powerful anti-inflammatory drug ever developed by humans is a steroid. However, long-term use is accompanied by side effects. Therefore, in the treatment of inflammation, steroids exert a surprising effect on the first use and completely disappear the symptoms, but this is only for a while, and the symptoms reappear with stopping use of the steroid and the symptoms become worse after repeated use. . Side effects of steroids include side effects such as round polyhedronic face, retention of fluid, adrenal suppression, increased susceptibility to infection, and other psychoses, cataracts, glaucoma, peptic ulcer, delayed wound healing, Have.

따라서 천연식물 추출물을 유효성분으로 포함하는 의약품이나, 별도의 정제 과정 없이 안전하게 섭취할 수 있으며 염증을 억제할 수 있는 효과가 있고, 용이하게 식품에 이용할 수 있는 물질에 대한 연구가 필요한 실정이다. 그 예로 일본 히로사키대 및 오사카대 연구진은 아토피성 피부염이 염증반응을 일으키는 유전자군을 조절하는 단백질의 하나인 NF-κB가 면역세포의 특정 유전자와 결합하여 염증성 물질을 만들어 발현된다는 것에 착안하여 NF-κB가 결합하는 유전자와 유사한 인공 DNA를 투여하여 인공 DNA와 NF-κB를 결합시켜 NF-κB의 작용을 억제하게 한 아토피성 치료제를 개발하여 임상에서 유효성을 확인한 바 있다. 그리고 스위스 노타비스사는 아스코마이신의 유도제 일종으로, 염증을 유발하는 사이토카인의 방출을 선택적으로 억제하는 기전을 가진 아토피성 피부염 치료제인 Pimecrolimus 성분의 "엘리델"을 개발하여 시판하고 있다. 또한, 영남대 약대 장현욱 교수 연구팀은 삼백초와 가죽나무의 추출물이 천식과 알레르기 치료에 효과가 있고, 한국파마에 기술 선급료 1억 5000만원, 경상실시료 매출액의 4%로 기술이전 계약을 체결하였다(약사공론 2006년 1월 22일 기사자료).Therefore, it is necessary to study a substance which can be safely ingested safely without a separate purification process, which has an effect of suppressing inflammation, and which can be easily used for food, as a medicament containing a natural plant extract as an active ingredient. For example, researchers at the University of Hirosaki and the University of Osaka have found that NF-κB, a protein that regulates genes that cause inflammatory reactions in atopic dermatitis, binds to specific genes of immune cells to produce inflammatory substances, κB to inhibit the action of NF-κB by combining artificial DNA with NF-κB by administering artificial DNA similar to the gene to which κB binds. And Notabis, Switzerland, has developed and marketed "Elidel", a Pimecrolimus ingredient, a treatment for atopic dermatitis, which is a kind of inducer of ascorbic acid and selectively inhibits the release of inflammatory cytokines. In addition, Professor Jang Hyun-wook of Yeungnam University College of Medicine has an extract of three hundreds of herb and leather trees, which are effective in treating asthma and allergies, and signed a technology transfer contract with Korea Pharmaceutical Co., Ltd. for 150 million won and 4% of ordinary fee sales. Public information January 22, 2006).

지금까지 알레르기 질환에서 특징적으로 나타나는 다양한 종류의 사이토카인 및 케모카인에 대한 항체를 이용한 알레르기 질환 치료제로써 다래 추출물을 이용한 알레르기 치료제, 천연초 선인장 발효추출물을 이용한 알레르기성 피부염 치료제 및 특정 유산균을 이용한 항염증 질환 치료제 개발 등이 이루어져 왔으나, 현재까지 마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke)를 이용한 항염증 치료제에 대한 개발은 이루어지지 않고 있는 실정이다.
As an allergic disease treatment agent using antibodies against various types of cytokines and chemokines that are characteristic of allergic diseases so far, allergen treatment using thigh extract, allergic dermatitis treatment using natural herb cactus fermentation extract, and anti-inflammatory disease using specific lactic acid bacteria The development of therapeutic agents has been made, but the development of anti-inflammatory drugs using Mastixia arborea CBClarke has not been made until now.

마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke)는 Cornaceae과에 속하며, 이 식물의 나무껍질에서 로가닌(loganin)이라는 성분이 있음이 알려졌으나(Wieffering, J. H., 1966, Phytochemistry), 마스티시아 알보리아의 추출물 및 성분의 활성에 대한 연구는 아직 알려진 바가 없다.
Mastixia arborea CBClarke belongs to the Cornaceae family, although it is known that the bark of this plant contains an ingredient called loganin (Wieffering, JH, 1966, Phytochemistry). The study of the activity of extracts and components of is unknown.

이에, 본 발명자들은 해외식물추출물을 대상으로 염증활성에 대한 스크리닝을 수행한 결과, 마스티시아 알보리아 추출물이 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 NO 및 프로스타글란딘 E2 생성과 IL-6와 IL-1beta 사이토카인의 생성을 억제하며, iNOS 단백질의 발현을 농도의존적으로 저해하며, 염증신호전달 물질의 인산화를 억제하였으며, 카라기난으로 유도된 마우스 족부종을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다. 또한 이 식물의 에틸아세테이트 분획물 또한 NO 생성 저해효과와 족부종 억제효과가 있음을 확인하였다. 따라서, 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물이 알레르기를 포함하는 다양한 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
Thus, the present inventors screened for inflammatory activity in plant extracts abroad, the production of NO and prostaglandin E 2 and IL-6 and IL-1beta cytosine, the mastia alboria extract is rapidly increased by inflammation It was confirmed that the inhibitory effect of the production of the protein, iNOS protein expression-dependently, inhibited the phosphorylation of inflammatory signaling substances, and inhibits carrageenan-induced mouse foot edema. In addition, the ethyl acetate fraction of this plant was also found to have an inhibitory effect on NO production and foot edema. Accordingly, the present invention has been completed by revealing that the masticia alboria extract or a fraction thereof may be used as an active ingredient of a pharmaceutical composition for preventing or treating various inflammatory diseases including allergy.

본 발명의 목적은 마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물, 피부외용제, 화장료 조성물 및 건강식품을 제공하는 것이다.
An object of the present invention is Mastixia arborea To provide a pharmaceutical composition, skin external preparation, cosmetic composition and health food for preventing and treating inflammatory diseases containing CBClarke) extract or a fraction thereof as an active ingredient.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing and treating inflammatory diseases containing Mastixia arborea CBClarke extract or a fraction thereof as an active ingredient.

또한, 본 발명은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 피부 외용제를 제공한다.In addition, the present invention provides a skin external preparation for preventing and improving inflammatory diseases containing a mastia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient.

또한, 본 발명은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a cosmetic composition for preventing and improving inflammatory diseases containing a mastia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient.

아울러, 본 발명은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.
In addition, the present invention provides a health food for preventing and improving inflammatory diseases containing a mastia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient.

본 발명의 마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke) 추출물 또는 이의 분획물이 우수한 항염증활성을 가지고, 세포독성이 거의 없으므로, 염증관련 질환, 알레르기 질환 등의 예방 및 치료를 위한 의약품, 가공식품, 기능성 식품, 식품첨가제, 기능성 음료, 또는 음료첨가제 등의 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
Mastixia arborea CBClarke extract or fractions thereof of the present invention has excellent anti-inflammatory activity and little cytotoxicity, and thus, pharmaceuticals, processed foods, functional foods for the prevention and treatment of inflammatory and allergic diseases. It can be usefully used as an active ingredient of a composition such as food, food additives, functional drinks, or beverage additives.

도 1은 LPS로 유도된 나이트릭옥사이드 합성효소(iNOS)의 발현에 대한 마스티시아 알보리아 추출물의 억제 효과를 나타낸 도이다;
a; 웨스턴블라팅;
b; 면역형광염색법;
대조군; DMSO만 처리한 음성대조군;
LPS; LPS 0.5 ㎍/㎖로 유도된 양성대조군; 및
LPS+MA; 마스티시아 알보리아 추출물을 20 ㎍/㎖ 처리한 후 LPS로 유도.

도 2는 프로스타글란딘 E2(Prostaglandin E2) 생성에 대한 마스티시아 알보리아 추출물의 억제효과를 나타낸 도이다(LPS처리군 대비 *P<0.005 이하, **P<0.05 이하);
-; DMSO만 처리한 음성대조군;
+; LPS 0.5 ㎍/㎖로 유도된 양성대조군;
5; 마스티시아 알보리아 추출물을 5 ㎍/㎖ 처리한 후 LPS로 유도;
10; 마스티시아 알보리아 추출물을 10 ㎍/㎖ 처리한 후 LPS로 유도;
20; 마스티시아 알보리아 추출물을 20 ㎍/㎖ 처리한 후 LPS로 유도; 및
30; 마스티시아 알보리아 추출물을 30 ㎍/㎖ 처리한 후 LPS로 유도
도 3은 사이트카인 생성에 대한 마스티시아 알보리아 추출물의 저해효과를 나타낸 도이다.(LPS처리군 대비 *P<0.005 이하, **P<0.05 이하);
a; IL-6(interleukin-6); 및
b; IL-1beta(interleukin-1beta).
도 4는 LPS로 유도된 신호전달물질의 인산화에 대한 마스티시아 알보리아 추출물의 저해효과를 나타낸 도이다.
도 5는 카라기난으로 유도된 마우스 족부종에 대한 마스티시아 알보리아 추출물 및 에틸아세테이트 분획물의 저해효과를 나타낸 도이다.(카라기난 처리군 대비 *P<0.005 이하);
대조군; PBS만 투여한 군;
카라기난; PBS투여후 카라기난으로 염증유도한 군;
MA-40; 마스티시아 알보리아 추출물을 40mg/kg 투여후 카라기난으로 유도한 군;
MA-80; 마스티시아 알보리아 추출물을 80mg/kg 투여후 카라기난으로 유도한 군;
MAE-40; 마스티시아 알보리아 에틸아세테이트 분획물을 40mg/kg 투여후 카라기난으로 유도한 군;
MAE-80; 마스티시아 알보리아 에틸아세테이트 분획물을 80mg/kg 투여후 카라기난으로 유도한 군; 및
인도메타신; 인도메타신 5mg/kg을 투여후 카라기난으로 유도한 군.
도 6은 마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke) 추출물과 분획물 제조과정을 나타낸 그림이다.
도 7은 마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke) 추출물과 분획물의 TLC(Thin Layer Chromatography)를 나타낸 그림이다;
T: 마스티시아 알보리아 추출물;
H: 마스티시아 알보리아 n-헥산 분획물;
C: 마스티시아 알보리아 클로로포름 분획물;
E: 마스티시아 알보리아 에틸아세테이트 분획물;
B: 마스티시아 알보리아 부탄올 분획물; 및
W: 마스티시아 알보리아 물 분획물.
도 8은 마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke) 추출물과 분획물의 CAD (Charge Aerosol Detector)를 나타낸 그림이다.
1 is a diagram showing the inhibitory effect of the mastisia alboria extract on LPS-induced expression of nitric oxide synthase (iNOS);
a; Western blasting;
b; Immunofluorescence staining;
Control group; Negative control treated with DMSO only;
LPS; Positive controls induced with 0.5 [mu] g / ml of LPS; And
LPS + MA; Induced by LPS after 20 μg / ml treatment of Masticia alboria extract.

Figure 2 is a diagram showing the inhibitory effect of the mastissia alboria extract on the production of prostaglandin E 2 (Prostaglandin E 2 ) (* P <0.005 or less, ** P <0.05 or less compared to the LPS treatment group);
-; Negative control treated with DMSO only;
+; Positive controls induced with 0.5 [mu] g / ml of LPS;
5; Induction with LPS after 5 μg / ml treatment of Masticia alboria extract;
10; Induction with LPS after 10 μg / ml treatment of Masticia alboria extract;
20; LPS induced after treatment with Masticia alboria extract 20 μg / ml; And
30; Induced by LPS after 30 μg / ml treatment of Masticia alboria extract
Figure 3 is a diagram showing the inhibitory effect of the mastissia alboria extract on the production of sightcaine (* P <0.005 or less, ** P <0.05 or less compared to the LPS treatment group);
a; IL-6 (interleukin-6); And
b; IL-1beta (interleukin-1beta).
Figure 4 is a diagram showing the inhibitory effect of the mastia alboria extract on the phosphorylation of LPS-induced signaling material.
Figure 5 is a diagram showing the inhibitory effect of the mastia alboria extract and ethyl acetate fraction on carrageenan-induced mouse foot edema (* P <0.005 or less than carrageenan treated group);
Control group; PBS alone group;
Carrageenan; Group induced by carrageenan after PBS administration;
MA-40; Group induced with carrageenan after 40 mg / kg of mastia alboria extract;
MA-80; Carrageenan-induced group after administration of 80 mg / kg of mastia alboria extract;
MAE-40; Group induced with carrageenan after 40 mg / kg administration of mastia alboria ethyl acetate fraction;
MAE-80; Group induced by carrageenan after administration of 80 mg / kg of mastia alboria ethyl acetate fraction; And
Indomethacin; Carrageenan induced group after indomethacin 5 mg / kg.
FIG. 6 shows Mastixia arborea CBClarke) is an illustration showing the manufacturing process extracts and fractions.
7 shows Mastixia TLC (Thin Layer Chromatography) of arborea CBClarke extracts and fractions;
T: mastisia alboria extract;
H: mastisia alboria n-hexane fraction;
C: mastisia alboria chloroform fraction;
E: fraction of mastisia alboria ethyl acetate;
B: mastisia alboria butanol fraction; And
W: Water fraction of mastisia alboria.
FIG. 8 shows Mastixia This figure shows the CAD (Charge Aerosol Detector) of arborea CBClarke extract and fraction.

이하, 본 발명에서 사용한 용어를 설명한다.
Hereinafter, terms used in the present invention will be described.

본 발명에서 사용되는 용어 "염증"이란 외부 감염원(박테리아, 곰팡이, 바이러스, 다양한 종류의 알레르기 유발물질)의 침입에 의하여 형성되는 농양의 병리적 상태를 의미한다.The term "inflammation" as used herein refers to the pathological condition of an abscess formed by the infiltration of an external infectious agent (bacteria, fungi, viruses, various kinds of allergens).

본 발명에서 사용되는 용어 "알레르기"는 어떤 외래성 물질과 접한 생체가 그 물질에 대하여 정상과는 다른 반응을 나타내는 현상을 의미한다.As used herein, the term "allergy " refers to a phenomenon in which a living body in contact with an exogenous substance exhibits a different reaction to the substance from the normal.

본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 염증성 질환을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.The term "prophylactic," as used herein, refers to any action that inhibits or delays the progression of an inflammatory disease upon administration of a composition of the present invention.

본 발명에서 사용되는 용어 "치료" 및 "개선"은 본 발명의 조성물의 투여로 염증성 질환의 증상이 호전 또는 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.As used herein, the terms " treatment "and" improvement "refer to all actions by which administration of the composition of the invention improves or alleviates the symptoms of an inflammatory disease.

본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.The term "administering" as used herein is meant to provide any desired composition of the invention to an individual by any suitable method.

본 발명에서 사용되는 용어 "개체"는 본 발명의 조성물을 투여하여 염증성 질환의 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간, 원숭이, 개, 염소, 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다.The term "individual" as used herein refers to all animals, including humans, monkeys, dogs, goats, pigs, or rats, having a disease in which the symptoms of an inflammatory disease can be improved by administering the composition of the present invention.

본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜 또는 위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 이는 개체의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시에 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
The term " pharmaceutically effective amount " as used herein means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit or risk rate applicable to medical treatment, including the type of disease, severity, activity of the drug, The time of administration, the route and rate of excretion of the drug, the duration of the treatment, factors including drugs used simultaneously and other factors well known in the medical arts.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing and treating inflammatory diseases containing Mastixia arborea CBClarke extract or a fraction thereof as an active ingredient.

상기 염증성 질환은 알레르기, 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통 (fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.The inflammatory diseases include allergic, dermatitis, atopic dermatitis, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, colitis, gout, ankylosing spondylitis, rheumatic fever, lupus, fibromyalgia, psoriatic arthritis , Osteoarthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis, tendonitis, hay salt, peritonitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, Sjogren's syndrome, multiple sclerosis, and acute and chronic inflammatory diseases Preferred but not limited to this.

상기 마스티시아 알보리아 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:The mastisia alboria extract is preferably but not limited to be produced by a method comprising the steps of:

1) 마스티시아 알보리아에 추출용매를 가하여 추출하는 단계;1) extracting by adding an extraction solvent to the mastia alvoria;

2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및2) filtering the extract of step 1); And

3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압농축한 후 건조하는 단계.3) Concentrating the filtered extract of step 2) under reduced pressure and drying.

상기 방법에 있어서, 단계 1)의 마스티시아 알보리아는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. In the above method, the mastissia alboria of step 1) can be used without limitation, such as grown or commercially available.

상기 마스티시아 알보리아는 잎, 줄기 또는 뿌리가 모두 이용가능하다.The mastis alboria is available in both leaves, stems or roots.

상기 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 C1 내지 C2 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출, Soxhlet 추출 또는 환류추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출용매를 건조된 마스티시아 알보리아 분량에 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하다. 추출온도는 30 내지 100℃인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 10 내지 48시간인 것이 바람직하며, 15 내지 30시간인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 회수는 3 내지 5회인 것이 바람직하며, 3회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. The extraction solvent is preferably water, alcohol or a mixture thereof. As the alcohol, C 1 to C 2 lower alcohol is preferably used, and as the lower alcohol, ethanol or methanol is preferably used. As the extraction method, it is preferable to use shaking extraction, Soxhlet extraction or reflux extraction, but it is not limited thereto. The extraction solvent is preferably extracted by adding 1 to 10 times the amount of dried mastisia alboria. The extraction temperature is preferably 30 to 100 DEG C, but is not limited thereto. In addition, the extraction time is preferably 10 to 48 hours, more preferably 15 to 30 hours, but is not limited thereto. In addition, the extraction number is preferably 3 to 5 times, more preferably 3 times, but not limited thereto.

상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.In the above method, it is preferable to use a vacuum decompression concentrator or a vacuum rotary evaporator for the decompression concentration in step 3), but it is not limited thereto. In addition, the drying is preferably reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying or freeze drying, but is not limited thereto.

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물의 분획물은 상기 마스티시아 알보리아 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. The fraction of the mastisia alboria extract of the present invention is preferably produced by a method of extracting the mastisia alboria extract with an organic solvent, but is not limited thereto.

상기 유기용매로는 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 또는 부탄올인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 분획물로는 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 부탄올을 단계적으로 첨가한 후, 각 용매 첨가 단계에서 가용성 분획을 획득한 n-헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물, 및 상기 부탄올 분획물을 제거하고 남은 물층을 농축한 물 분획물이 모두 사용가능하나, 바람직하게는 n-헥산 또는 에틸아세테이트 분획물이다.
The organic solvent is preferably n-hexane, chloroform, ethyl acetate or butanol, but is not limited thereto. As the fractions, n-hexane, chloroform, ethyl acetate and butanol were added step by step, and then n-hexane fraction, chloroform fraction, ethyl acetate fraction and butanol fraction obtained by obtaining a soluble fraction in each solvent addition step, and the butanol fraction All the water fractions obtained by removing the remaining water layer after concentration are usable, but preferably n-hexane or ethyl acetate fractions.

본 발명의 한가지 측면에서, 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물의 세포독성을 알아보기 위해, MTT 검사를 수행한 결과, 마스티시아 알보리아 추출물은 30 ㎍/㎖ 이하의 농도에서 세포독성이 거의 없는 것을 확인하였다(표 1 참조). In one aspect of the present invention, the MTT assay was performed to determine the cytotoxicity of the mastissia alboria extract or fractions thereof, and the mastisia alboria extract showed almost no cytotoxicity at a concentration of 30 μg / ml or less. It was confirmed that no (see Table 1).

또한, 본 발명의 한가지 측면에서, 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물의 염증 억제 효과를 확인하기 위하여, LPS로 유도된 나이트릭 옥사이드 생성량을 측정한 결과, LPS를 단독 처리한 군에 비해 마스티시아 알보리아 추출물을 LPS와 함께 처리한 군에서 농도의존적으로 나이트릭 옥사이드 생성량이 현저히 감소하는 것을 확인하였다(표 2 참조).In addition, in one aspect of the present invention, in order to confirm the inhibitory effect of the mastissia alboria extract or fractions thereof, the amount of nitric oxide produced by LPS was measured, and compared to the group treated with LPS alone, In the group treated with alboria extract with LPS, it was confirmed that the concentration of nitric oxide produced was significantly reduced (see Table 2).

또한, 본 발명의 한가지 측면에서, 마스티시아 알보리아 추출물의 iNOS 단백질 발현 저해 효과를 가지는지 알아보기 위해, 대식세포에 LPS를 처리하여 인위적으로 유발시킨 염증에서 iNOS의 발현 정도를 웨스턴 블라팅과 형광염색법으로 측정한 결과, LPS만 처리한 세포에 비해 LPS와 함께 마스티시아 알보리아 추출물을 처리한 세포에서 iNOS의 발현량이 현저히 감소함을 확인하였다(도 1a와 1b 참조). In addition, in one aspect of the present invention, in order to determine whether the inhibitory effect of iNOS protein expression of the mastia alboria extract, the expression of iNOS in the artificially induced inflammation of LPS-treated macrophages and Western blotting and As a result of fluorescence staining, it was confirmed that iNOS expression was significantly reduced in cells treated with LPS and mastissia alboria extract compared to cells treated with LPS only (see FIGS. 1A and 1B).

아울러, 본 발명의 한가지 측면에서, 마스티시아 알보리아 추출물의 염증 억제효과를 확인하기 위하여, 프로스타글란딘 E2 생성 저해 효과를 확인한 결과, 마스티시아 알보리아 추출물의 농도의존적으로 프로스타글란딘 E2 생산량이 유의적으로 감소하는 것을 확인하였다(도 2 참조).In addition, the eseo one aspect of the present invention, maseuti cyano al boria in order to determine the inflammation inhibitory effect of the extract, confirming the prostaglandin E 2 production-inhibiting effect results, maseuti cyano al boria concentration dependent manner with the prostaglandin E 2 production of the extract significantly It was confirmed that the decrease (see Fig. 2).

또한, 마스티시아 알보리아 추출물이 사이토카인인 IL-6와 IL-1beta의 생성을 농도의존적으로 억제함을 확인하였다(도 3 참조).In addition, it was confirmed that the mastia alboria extract inhibits the production of the cytokines IL-6 and IL-1beta in a concentration-dependent manner (see FIG. 3).

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물이 염증이 유도됨으로써 일어나는 신호전달물질의 인산화에 대하여 미치는 영향을 확인하기 위하여 웨스턴블라팅으로 확인한 결과, 신호전달물질인 JNK와 ERK의 전체양은 동일하였으나, 인산화형태의 단백질이 마스티시아 알보리아를 전처리한 세포에서 증가하지 않음을 확인하였다(도 4 참조).As a result of confirming by Western blotting to determine the effect of the mastissia alboria extract of the present invention on the phosphorylation of the signaling material caused by inflammation induction, the total amount of JNK and ERK, the signaling material was the same, but the phosphorylation form It was confirmed that the protein of did not increase in the cells pretreated with the mastisia alboria (see Fig. 4).

카라기난으로 유도된 마우스 족부종에 대한 마스티시아 알보리아 추출물 및 에틸아세테이트 분획물의 효과를 확인한 결과, 40, 80mg/kg의 양으로 처리하였을 때, 카라기난만 처리하여 유도된 족부종에 대하여 마우스의 발 두께가 감소함을 확인하였다(도 5 참조).As a result of confirming the effects of the mastissia alboria extract and the ethyl acetate fraction on carrageenan-induced mouse foot edema, the mouse foot was treated with carrageenan-induced foot edema when treated with 40 and 80 mg / kg. It was confirmed that the thickness was reduced (see FIG. 5).

따라서, 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물은 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 NO 및 프로스타글란딘 E2 과 IL-6와 IL-1beta 사이토카인의 생성을 억제하며, iNOS 단백질의 발현을 농도의존적으로 저해하며, 염증신호전달 물질의 인산화를 억제하였으며, 카라기난으로 유도된 마우스 족부종을 억제하는 효과가 있음을 확인하였다. 또한 이 식물의 에틸아세테이트 분획물 또한 NO 생성 저해효과와 족부종 억제효과가 있음을 확인하였다. 따라서, 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물은 NO 및 프로스타글란딘 E2 생성과 IL-6와 IL-1beta 사이토카인의 생성을 억제하고, iNOS 단백질의 발현을 유의적으로 억제하며, 식물에서 유래한 세포독성이 없는 안전한 물질이므로, 염증관련 질환의 예방 및 치료용 약학적 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
Therefore, the masticia alboria extract of the present invention inhibits the production of NO and prostaglandin E 2 and IL-6 and IL-1beta cytokines, which are rapidly increased by inflammation, and inhibits the expression of iNOS protein in a concentration-dependent manner. Inhibition of phosphorylation of inflammatory signaling substances, it was confirmed that the effect of inhibiting carrageenan-induced mouse foot edema. In addition, the ethyl acetate fraction of this plant was also found to have an inhibitory effect on NO production and foot edema. Thus, the masticia alboria extract or fractions thereof inhibit NO and prostaglandin E 2 production and IL-6 and IL-1beta cytokine production, significantly inhibit the expression of iNOS protein, and plant-derived cells. Since it is a safe material without toxicity, it can be seen that it can be usefully used as an active ingredient of the pharmaceutical composition for preventing and treating inflammation-related diseases.

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 조성물은 상기 성분에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. The composition containing the mastisia alboria extract of the present invention or a fraction thereof may further contain one or more active ingredients which exhibit the same or similar functions in addition to the above components.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바 납, 합성규산알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당, 덱스트로스, 소르비톨 및 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용 가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 ~ 90 중량부 포함되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.The composition of the present invention may further comprise a pharmaceutically acceptable additive, wherein pharmaceutically acceptable additives include starch, gelatinized starch, microcrystalline cellulose, lactose, povidone, colloidal silicon dioxide, calcium hydrogen phosphate, lactose Starch glycolate, sodium starch glycolate, carnauba wax, synthetic aluminum silicate, stearic acid, magnesium stearate, aluminum stearate, calcium stearate, calcium stearate, , White sugar, dextrose, sorbitol and talc. The pharmaceutically acceptable additives according to the present invention are preferably included in the composition in an amount of 0.1 to 90 parts by weight, but are not limited thereto.

즉, 본 발명의 조성물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 마스티시아 알보리아 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스(Sucrose), 락토오스(Lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.That is, the composition of the present invention can be administered in various formulations of oral and parenteral administration at the time of actual clinical administration. In the case of formulation, a diluent such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, . &Lt; / RTI &gt; Solid formulations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules and the like, which may contain at least one excipient, such as starch, calcium carbonate, Sucrose, lactose, gelatin, and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate talc may also be used. Examples of the liquid preparation for oral use include suspensions, solutions, emulsions and syrups, and various excipients such as wetting agents, sweetening agents, fragrances, preservatives and the like may be included in addition to water and liquid paraffin, which are simple diluents commonly used . Formulations for parenteral administration may include sterile aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like can be used as the non-aqueous solvent and suspension agent. Examples of suppository bases include witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin, and the like.

본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다.The composition of the present invention may be administered orally or parenterally in accordance with the intended method, and may be administered orally, parenterally or intraperitoneally, rectally, subcutaneously, intravenously, intramuscularly, . The dosage varies depending on the patient's body weight, age, sex, health condition, diet, administration time, administration method, excretion rate, and disease severity.

본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 일일 투여량은 마스티시아 알보리아 추출물의 양을 기준으로 0.0001 내지 100 mg/kg이고, 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg이며, 하루 1 ~ 6 회 투여될 수 있다.The dosage of the composition of the present invention varies depending on the weight, age, sex, health condition, diet, time of administration, method of administration, excretion rate and severity of the disease of the patient, the daily dosage is mastis alboria 0.0001 to 100 mg / kg, preferably 0.001 to 10 mg / kg, based on the amount of extract, may be administered 1 to 6 times per day.

본 발명의 조성물은 염증성 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
The composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy and biological response modifiers for the prevention and treatment of inflammatory diseases.

또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 염증성 질환에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환의 치료 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for treating an inflammatory disease comprising administering to a subject suffering from an inflammatory disease a composition containing a pharmaceutically effective amount of an extract of Mastiscia alboria or a fraction thereof as an active ingredient.

또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 마스티시아 알보리아 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환의 예방 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for preventing inflammatory disease comprising administering to a subject a composition comprising a pharmaceutically effective amount of an extract of mastiscia alboria as an active ingredient.

상기 약학적으로 유효한 양이란 0.0001 내지 100 mg/kg이고, 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg이며, 이에 제한되는 것은 아니다. 투여량은 특정 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여기간, 투여방법, 제거율, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다. The pharmaceutically effective amount is 0.0001 to 100 mg / kg, preferably 0.001 to 10 mg / kg, but is not limited thereto. The dose may vary depending on the weight, age, sex, health condition, diet, administration period, method of administration, rate of elimination, severity of disease, and the like of a particular patient.

상기 개체는 척추동물이고 바람직하게는 포유동물이며, 그보다 바람직하게는 쥐, 토끼, 기니아피크, 햄스터, 개, 고양이와 같은 실험동물이고, 가장 바람직하게는 침팬지, 고릴라와 같은 유인원류 동물이다. The subject is a vertebrate and preferably a mammal, more preferably an experimental animal such as a rat, rabbit, guinea pig, hamster, dog, cat, and most preferably an ape-like animal such as a chimpanzee or gorilla.

상기 투여 방법은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 복강내주사, 직장내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사, 자궁내 경막 주사, 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사 또는 흉부내 주사에 의해 투여될 수 있다. The above-mentioned administration method may be oral or parenteral administration. In the case of parenteral administration, intraperitoneal injection, intramuscular injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intramural injection, intracerebroventricular injection, Can be administered by injection.

상기 염증성 질환은 알레르기, 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통 (fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.The inflammatory diseases include allergic, dermatitis, atopic dermatitis, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, colitis, gout, ankylosing spondylitis, rheumatic fever, lupus, fibromyalgia, psoriatic arthritis , Osteoarthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis, tendonitis, hay salt, peritonitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, Sjogren's syndrome, multiple sclerosis, and acute and chronic inflammatory diseases Preferred but not limited to.

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물은 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 나이트릭옥사이드(NO) 및 프로스타글란딘 E2 생성을 현저하게 낮추고, iNOS 단백질의 발현을 유의적으로 억제하며, 식물에서 유래한 세포독성이 없는 안전한 물질이므로, 염증관련 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.Mastisia alboria extract of the present invention significantly lowers the production of nitric oxide (NO) and prostaglandin E 2 which are rapidly increased by inflammation, significantly inhibits the expression of iNOS protein, and cytotoxicity derived from plants Since it is a safe substance without, it can be seen that it can be usefully used for the prevention and treatment of inflammatory diseases.

또한, 본 발명은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 피부외용제를 제공한다.In addition, the present invention provides a skin external preparation for preventing and treating inflammatory diseases, which contains a masticia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient.

상기 염증성 질환에는 알레르기, 부종, 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 궤양성 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 다양한 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하나 이에 한정되는 것은 아니다.Inflammatory diseases include allergies, edema, dermatitis, atopy, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, ulcerative colitis, gout, ankylosing spondylitis, rheumatic fever, lupus, fibromyalgia Selected from the group consisting of psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis, tendinitis, hay fever, perianal inflammation, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, sjogren's syndrome, multiple sclerosis and various acute and chronic inflammatory diseases But the present invention is not limited thereto.

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물은 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 나이트릭옥사이드 생성을 현저하게 낮추었고, 특히, 추출물은 프로스타글란딘 E2 생성을 현저하게 낮추고, iNOS 단백질의 발현을 유의적으로 억제하며, 식물에서 유래한 세포독성이 없는 안전한 물질이므로, 알레르기를 포함하는 다양한 염증성 질환 예방 및 치료용 피부외용제의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
The masticia alboria extract or fractions thereof of the present invention significantly lowered nitric oxide production which is dramatically increased by inflammation, and in particular, the extract significantly lowered prostaglandin E 2 production and significantly reduced the expression of iNOS protein. As it is suppressed and is a safe substance without cytotoxicity derived from plants, it can be seen that it can be usefully used as an active ingredient in skin external preparations for preventing and treating various inflammatory diseases including allergies.

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.When the mastiscia alboria extract of the present invention or a fraction thereof is used as an external preparation for skin, it is further added to fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents (foaming) agents), fragrances, surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, metal ion sequestrants and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, It may contain adjuvants commonly used in the field of dermatology, such as lipid vesicles or any other ingredients commonly used in external preparations for skin. In addition, the components can be introduced in amounts commonly used in the dermatology field.

상기 피부 외용제에 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물의 투여량은 0.0001 내지 100 mg/kg이고, 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg이며, 이에 제한되는 것은 아니다. 투여량은 특정 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 투여기간, 제거율, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.
The dosage of the masticia alboria extract or fractions thereof in the external preparation for skin is 0.0001 to 100 mg / kg, preferably 0.001 to 10 mg / kg, but is not limited thereto. Dosage may vary depending on the weight, age, sex, health status, duration of administration, clearance, severity of the disease, and the like of the particular patient.

또한, 본 발명은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a cosmetic composition for preventing and improving inflammatory diseases containing a mastia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient.

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물은 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 NO 및 프로스타글란딘 E2 생성을 현저하게 낮추고, iNOS 단백질의 발현을 유의적으로 억제하며, 식물에서 유래한 세포독성이 없는 안전한 물질이므로, 염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.
The masticia alboria extract or fractions thereof of the present invention significantly lower NO and prostaglandin E 2 production, which are dramatically increased by inflammation, significantly inhibit the expression of iNOS protein, and are free of plant-derived cytotoxicity. Since it is a safe substance, it can be seen that it can be usefully used as an active ingredient of the cosmetic composition for preventing and improving inflammatory diseases.

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 화장료 조성물로 사용하는 경우, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.When using the masticia alboria extract or fractions thereof of the present invention as a cosmetic composition, for example, emulsions, suspensions, microemulsions, microcapsules, obtained by dispersing an oil phase in a solution, gel, solid or pasty anhydrous product, aqueous phase, It may be provided in the form of microgranular or ionic (liposomal), nonionic vesicle dispersant, cream, skin, lotion, powder, ointment, spray or cone stick. It can also be prepared in the form of a foam or an aerosol composition further containing a compressed propellant.

상기 화장료 조성물은 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
The cosmetic composition is in addition to the masticia alboria extract or fractions thereof of the present invention, fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickening and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, Fragrances, surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, metal ion sequestrants and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or It may contain adjuvants conventionally used in the cosmetic field, such as any other ingredient conventionally used in cosmetics.

아울러, 본 발명은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.In addition, the present invention provides a health food for preventing and improving inflammatory diseases containing a mastia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient.

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물은 염증 유발에 의해 급격히 증가하는 NO 및 프로스타글란딘 E2 생성을 현저하게 낮추고, iNOS 단백질의 발현을 유의적으로 억제하며, 식물에서 유래한 세포독성이 없는 안전한 물질이므로, 다양한 염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품의 성분으로 유용하게 사용될 수 있다.The masticia alboria extract or fractions thereof of the present invention significantly lower NO and prostaglandin E 2 production, which are dramatically increased by inflammation, significantly inhibit the expression of iNOS protein, and are free of plant-derived cytotoxicity. Since it is a safe substance, it can be usefully used as a component of health food for preventing and improving various inflammatory diseases.

상기 염증성 질환에는 알레르기, 부종, 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 궤양성 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통(fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 다양한 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하나 이에 한정되는 것은 아니다.
Inflammatory diseases include allergies, edema, dermatitis, atopy, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, ulcerative colitis, gout, ankylosing spondylitis, rheumatic fever, lupus, fibromyalgia Selected from the group consisting of psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis, tendinitis, hay fever, perianal inflammation, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, sjogren's syndrome, multiple sclerosis and various acute and chronic inflammatory diseases But the present invention is not limited thereto.

본 발명의 건강식품은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.The health food of the present invention may be used as it is, or may be used in combination with other food or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.

상기 건강식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.There is no particular limitation on the kind of the health food. Examples of foods to which the above-mentioned mastisia alboria extract or its fractions can be added include dairy products including meat, sausage, bread, chocolate, candy, snack, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, ice cream, Soups, drinks, tea, drinks, alcoholic beverages, and vitamin complexes, all of which include health foods in a conventional sense.

본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ml당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.The health beverage composition of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates as an additional ingredient such as ordinary beverages. Such natural carbohydrates are monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. Examples of sweeteners include natural sweeteners such as tau martin and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame, and the like. The proportion of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 ml of the composition of the present invention.

상기 외에 본 발명의 건강식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일주스, 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
In addition to the above, the health food of the present invention may contain various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acids and salts thereof, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, , A carbonating agent used in carbonated drinks, and the like. It may also contain flesh for the production of natural fruit juices, fruit juice drinks and vegetable drinks. These components may be used independently or in combination. The proportion of such additives is not critical, but is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.

이하, 본 발명을 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the following Examples, Experimental Examples and Production Examples.

단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 한정되는 것은 아니다.
However, the following Examples, Experimental Examples and Preparation Examples are merely illustrative of the present invention, and the content of the present invention is not limited by the following Examples, Experimental Examples and Preparation Examples.

<< 실시예Example 1>  1> 마스티시아Mastissia 알보리아Alboria (( MastixiaMastixia arboreaarborea C.B.C.B. ClarkeClarke ) 추출물의 제조) Preparation of extract

본 발명의 마스티시아 알보리아 메탄올 추출물은 한국생명공학연구원 해외생물소재허브센터의 해외식물추출물은행에서 구입하였으며, 한국생명공학연구원 식물표본관(KRIB, Herbarium of the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology)에 증거표본(KRIB 0019270)이 보관되어 있다. 추출과정을 살펴보면, 마스티시아 알보리아(잎, 어린가지)를 건조한 후, 분쇄된 분말시료 67 g에 메탄올 1 ℓ를 가한 후 초음파추출기(SDN-900H, SD-ULTRASONIC CO., LTD)를 이용하여 상온에서 30회(40KHz, 15분 추출-120분 정지) 반복 추출하였다. 그런 다음 여과하여 감압농축한 후, 마스티시아 알보리아 메탄올 추출물(이하 마스티시아 알보리아 추출물이라 명함) 4.13 g을 수득하였다. 마스티시아 알보리아 추출물은 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 20 mg/ml의 농도가 되도록 용해시킨 후, 농도별로 희석하여 사용하였다.
The masticsia alboria methanol extract of the present invention was purchased from the Overseas Plant Extract Bank of the Korea Center for Biomaterials Herbal Research, Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology, and the herbarium of the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology (KRIB). A sample of evidence (KRIB 0019270) is kept. Looking at the extraction process, after drying the mastia alboria (leaves, sprigs), add 1 ℓ of methanol to the powdered powder sample 67 g and using an ultrasonic extractor (SDN-900H, SD-ULTRASONIC CO., LTD) 30 times (40KHz, 15 minutes extraction-120 minutes stop) was extracted repeatedly at room temperature. After filtration and concentration under reduced pressure, 4.13 g of a mastia alboria methanol extract (hereinafter referred to as a mastia alboria extract) was obtained. Masticia alboria extract was dissolved in DMSO (dimethyl sulfoxide) to a concentration of 20 mg / ml, and then diluted by concentration.

<< 실시예Example 2>  2> 마스티시아Mastissia 알보리아의Alborian 용매  menstruum 분획물Fraction 제조 Produce

상기 <실시예 1>에서 얻어진 마스티시아 알보리아 추출물 중 430 mg 에 증류수를 첨가하여 현탁시키고, 동량의 n-헥산을 가하여 혼합 후 n-헥산가용성 분획부와 물가용성 분획부를 분리하였으며, 이를 3회 실시하여 여과, 감압농축하여 n-헥산 분획물 93.4 mg을 수득하였다. 그런 다음, 상기 n-헥산 분획물을 제거하고 남은 물층에 클로로포름을 동량 가하여 같은 방법으로 클로로포름 분획물 69.6 mg 수득하였고, 다시 남은 물층에 에틸아세테이트를 동량 가하여 같은 방법으로 에틸아세테이트 분획물 84.4 mg을 수득하였으며, 또 다시 남은 물층에 부탄올을 동량 가하여 동일한 방법으로 부탄올 분획물 72.6 mg을 수득하였으며, 남은 물층을 농축하여 물 분획물 78.1 mg을 수득하였다(도 6).
Suspended by adding distilled water to 430 mg of the mastissia alboria extract obtained in Example 1, the same amount of n-hexane was added and mixed, and then the n-hexane soluble fraction and the water soluble fraction were separated. Filtration and concentration under reduced pressure gave 93.4 mg of n-hexane fractions. Then, the same amount of chloroform was removed from the n-hexane fraction and the remaining water layer was added to obtain 69.6 mg of chloroform fraction in the same manner. Ethyl acetate was added to the remaining water layer to obtain 84.4 mg of ethyl acetate fraction in the same manner. The same amount of butanol was added to the remaining water layer to obtain 72.6 mg of butanol fraction in the same manner, and the remaining water layer was concentrated to obtain 78.1 mg of water fraction (FIG. 6).

<< 실시예Example 3>  3> 마스티시아Mastissia 알보리아Alboria 추출물과  Extract and 분획물의Fraction TLCTLC 조사 Research

상기 <실시예 1>과 <실시예 2>에서 얻어진 마스티시아 알보리아 추출물과 분획물을 10mg/ml의 농도로 메탄올에 녹인 후 실리카겔 박층 크로마토그래피(TLC Silica gel 60 F254, Merck)를 실시하였다. 전개용매로는 n-헥산 : 아세톤의 비율이 2 : 1 인 혼합용매로 하였다. 또한 실리카겔 역상 크로마토그래피(TLC Silica gel 60 RP-18 F254S, Merck)를 실시하였고, 전개용매는 메탄올 90%로 하였다(도 2).
The mastisia alboria extract and fractions obtained in Example 1 and Example 2 were dissolved in methanol at a concentration of 10 mg / ml and subjected to silica gel thin layer chromatography (TLC Silica gel 60 F 254 , Merck) . As a developing solvent, a mixed solvent of n-hexane: acetone at a ratio of 2: 1 was used. Also, silica gel reverse phase chromatography (TLC Silica gel 60 RP-18 F 254 S, Merck) was performed and the developing solvent was 90% methanol (FIG. 2).

<< 실시예Example 4>  4> 마스티시아Mastissia 알보리아의Alborian 추출물과  Extract and 분획물의Fraction UPLCUPLC 분석 analysis

상기 <실시예 1>과 <실시예 2>에서 얻어진 마스티시아 알보리아 추출물과 분획물을 10mg/ml로 메탄올에 녹인 후 0.2 ㎛의 막필터(membrane filter)로 여과하였다. 초고성능 액체 크로마토그래피(UPLC, Ultra Performance Liquid Chromatography)는 Waters Acquity UPLC 시스템을 이용하였으며, 컬럼은 ACQUITY UPLCTMBEHC18(10mm 2.1 mm, i.d., 1.7m, waters, USA)을 35℃에서 사용하였으며, 이동상 A는 물과 포름산(formic acid) (100:0.1, v/v)로 이동상 B는 아세토나이트릴(acetonitril)과 포름산(formic acid) (100:0.1,v/v)로 하여 초기에 이동상 B를 5%로 1분 동안 유지시킨 후, 7분까지 60%로 증가, 7.5분까지 100%로 이동상 B를 증가시켜 분석 한 후, 이동상 B를 100%로 9분까지 유지시키고, 9.5분까지 이동상 B를 5%로 낮추고 11분까지 5%로 안정화시켜 분석에 사용하였다. 이동상의 유속량은 0.4 ml/min 그리고 시료 주입량은 3 μl로 하였다. The mastissia alboria extract and fractions obtained in <Example 1> and <Example 2> were dissolved in methanol at 10 mg / ml and filtered through a 0.2 μm membrane filter. Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC) was used with the Waters Acquity UPLC system, and the column was ACQUITY UPLC BEHC 18 (10mm 2.1 mm, id, 1.7m, waters, USA) at 35 ° C. Mobile phase A is initially water and formic acid (100: 0.1, v / v) and mobile phase B is acetonitrile and formic acid (100: 0.1, v / v). Is maintained at 5% for 1 minute, then increased to 60% until 7 minutes, mobile phase B is increased to 100% by 7.5 minutes, and then mobile phase B is maintained at 100% for 9 minutes, and mobile phase is maintained to 9.5 minutes. B was lowered to 5% and stabilized to 5% by 11 minutes for use in the analysis. The flow rate of the mobile phase was 0.4 ml / min and the sample injection amount was 3 μl.

CAD(Charge Aerosol Detector)는 UPLC로부터 분리되어진 물질들에 전하(Charge)를 붙여주어 그 전하를 측정하는 탐지기(detector)로써 크로마토그래피 형식으로 물질의 상대적 함량과 분리도를 확인해 볼 수 있다 (도 8).
CAD (Charge Aerosol Detector) is a detector that measures the charge by attaching a charge to the materials separated from the UPLC (Chroma Aerosol Detector) can check the relative content and degree of separation in the chromatographic form (Fig. 8). .

<< 실험예Experimental Example 1>  1> 마스티시아Mastissia 알보리아Alboria 추출물 또는 이의  Extract or its 분획물에In the fraction 대한 세포독성실험 Cytotoxicity test for

본 발명자들은 마스티시아 알보리아 추출물에 세포 생존율을 확인하기 위하여, 생쥐의 대식세포인 Raw264.7 세포를 소태아혈청(Fetal Bovine Serum) 5% 첨가한 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium, Gibco사) 배지에 1 105 개/ml의 농도로 현탁하여 100 ㎕씩 96웰 플레이트에 접종하여 부착하였다. 4시간 후에 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 각각 0, 5, 10, 20 및 30㎍/㎖ 농도로 처리하였다. 24시간 동안 배양한 후, 5 mg/ml의 MTT용액을 웰 당 10 ㎕씩 첨가하여 4시간 더 배양한 후, 상등액을 제거하고, DMSO를 100 ㎕씩 첨가한 후, 570 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 세포생존률은 DMSO를 0.2% 처리한 음성대조군을 100%로 하여 하기 수학식에 따라 계산하였다.
In order to confirm cell viability in the mastia alboria extract, the present inventors added DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium, Gibco Co., Ltd.) medium containing 5% Fetal Bovine Serum (macrophage) of Mouse macrophage Raw264.7 cells. Was suspended at a concentration of 1 10 5 / ml and inoculated in a 96 well plate by 100 μl. After 4 hours the masticia alboria extract or fractions thereof were treated at concentrations of 0, 5, 10, 20 and 30 μg / ml, respectively. After incubation for 24 hours, 10 mg of 5 mg / ml MTT solution was added to each well for 4 hours, and then the supernatant was removed, 100 μl of DMSO was added, and the absorbance was measured at 570 nm. , The cell survival rate was calculated according to the following equation with 100% of the negative control group treated with 0.2% DMSO.

Figure 112012049878126-pat00001
Figure 112012049878126-pat00001

시료농도(/)Sample concentration (/) 세포생존율(%)Cell survival rate (%) 음성대조군Negative control group 100.004.68100.004.68 마스티시아 알보리아 추출물Mastisia alboria extract 55 101.565.16101.565.16 1010 93.360.5893.360.58 2020 97.136.1797.136.17 3030 95.091.3495.091.34 마스티시아 알보리아 헥산 분획물Mastisia alboria hexane fraction 55 100.334.33100.334.33 1010 115.097.89115.097.89 2020 81.284.6181.284.61 3030 48.141.2148.141.21 마스티시아 알보리아 클로로포름 분획물Mastisia alboria chloroform fraction 55 96.225.2796.225.27 1010 100.5910.13100.5910.13 2020 50.143.5650.143.56 3030 32.480.9332.480.93 마스티시아 알보리아 에틸아세테이트 분획물Mastisia alboria ethyl acetate fraction 55 102.936.55102.936.55 1010 86.136.8186.136.81 2020 94.780.6294.780.62 3030 91.200.4491.200.44 마스티시아 알보리아 부탄올 분획물Mastisia alboria fraction 55 86.778.2186.778.21 1010 94.846.9894.846.98 2020 90.127.3090.127.30 3030 92.071.9892.071.98 마스티시아 알보리아 물 분획물Mastisia alboria water fraction 55 99.7211.2899.7211.28 1010 92.1013.8392.1013.83 2020 101.346.89101.346.89 3030 115.7110.24115.7110.24

그 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물은 30 ㎍/㎖의 농도까지 세포 독성이 거의 없음을 확인하였다(표 1).
As a result, as shown in Table 1, it was confirmed that the mastissia alboria extract or fractions thereof had little cytotoxicity up to a concentration of 30 µg / ml (Table 1).

<< 실험예Experimental Example 1>  1> 마스티시아Mastissia 알보리아Alboria 추출물의  Extract 나이트릭옥사이드Nitric oxide 생성 억제 효과 Generation suppression effect

본 발명자들은 마스티시아 알보리아 추출물의 염증 억제 효과를 알아보기 위하여, Raw264.7 세포에서 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide; LPS, Sigma사)로 유도된 나이트릭 옥사이드(nitric oxide; NO)의 생성량을 측정하였다.The inventors have found that inflammation of mastia alboria extract In order to investigate the inhibitory effect, the amount of nitric oxide (NO) induced by lipopolysaccharide (LPS, Sigma) in Raw264.7 cells was measured.

구체적으로, 페놀레드(phenol-Red)가 들어있지 않은 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium, Gibco사) 배지에 소태아혈청(Fetal Bovine Serum)을 5% 첨가하고, 세포를 2.5 105 개/㎖ 농도로 현탁하여 96웰 플레이트(96 well plate)에 200 ㎕씩 접종하였다. 4시간 동안 부착시킨 후, 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물을 각각 0, 5, 10, 20 및 30 ㎍/㎖의 농도로 처리하여 1시간 동안 배양한 후 0.5 ㎍/㎖의 LPS를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 상층액 100 ㎕를 회수하여 새로운 96웰 플레이트에 넣고, 그리스 시약(Griess reagent, Sigma사)을 동량 첨가하여 상온에서 10분간 반응시킨 후, 마이크로플레이트 측정기(microplate reader, Bio-Rad사)로 540 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 소디움 나이트라이트(sodium nitrite)를 이용하여 검량선을 작성하고, 이를 기준으로 배양액 내의 나이트릭 옥사이드 생성량을 구하였으며, 리포폴리사카라이드를 처리한 군의 나이트릭 옥사이드 생성량을 100%로 하여 각 시료의 저해율을 계산하였다.Specifically, 5% Fetal Bovine Serum was added to DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium, Gibco) medium without phenol red, and the cells were added at a concentration of 2.5 10 5 / ml. The suspension was inoculated with 200 μl in 96 well plate (96 well plate). After attaching for 4 hours, the mastissia alboria extract of the present invention was treated at concentrations of 0, 5, 10, 20 and 30 ㎍ / ml, respectively, and incubated for 1 hour, followed by 0.5 ㎍ / mL LPS treatment. Incubated for 24 hours. 100 μl of the supernatant was collected and placed in a new 96-well plate, and the same amount of a grease reagent (Sigma) was added thereto. The mixture was allowed to react at room temperature for 10 minutes and then transferred to a microplate reader (Bio-Rad) The absorbance was measured at a wavelength of 540 nm. A calibration curve was prepared by using sodium nitrite, and the amount of nitric oxide produced in the culture solution was calculated based on this, and the amount of nitric oxide produced in the lipopolysaccharide treated group was 100%. Was calculated.

그 결과, LPS만 처리한 세포에서 나이트릭 옥사이드 생성량이 급격히 증가하는 것을 확인하였으나, 마스티시아 알보리아 추출물을 전처리한 후, LPS를 처리한 세포에서는 농도의존적으로 나이트릭 옥사이드 생성량이 현저히 감소하는 것을 확인하였다. 특히, 30 ㎍/㎖의 농도로 분획물을 처리하였을 때, 에틸아세테이트 분획물은 세포독성은 나타나지 않으면서, 나이트로옥사이드의 생성은 93.13± 6.09% 저해하는 것을 확인하였다(표 2).
As a result, it was confirmed that the production of nitric oxide was rapidly increased in cells treated with LPS only. However, after pretreatment of the mastis alboria extract, the production of LPS significantly reduced the concentration of nitric oxide in the concentration-dependent manner. Confirmed. In particular, when the fractions were treated at a concentration of 30 ㎍ / ㎖, ethyl acetate fractions were found to inhibit the production of nitrooxide 93.13 ± 6.09% without showing cytotoxicity (Table 2).

시료농도(/)Sample concentration (/) NONO 생성저해율(%)Generation inhibition rate (%) 마스티시아 알보리아 추출물Mastisia alboria extract 55 8.718.71 ±± 12.5712.57 1010 30.2030.20 ±± 7.457.45 2020 87.2687.26 ±± 7.267.26 3030 102.47102.47 ±± 3.503.50 마스티시아 알보리아 헥산 분획물Mastisia alboria hexane fraction 55 25.8025.80 ±± 17.1817.18 1010 76.9076.90 ±± 8.308.30 2020 103.35103.35 ±± 1.231.23 3030 105.59105.59 ±± 2.592.59 마스티시아 알보리아 클로로포름 분획물Mastisia alboria chloroform fraction 55 18.2918.29 ±± 12.1212.12 1010 78.1978.19 ±± 6.486.48 2020 99.9199.91 ±± 7.657.65 3030 102.11102.11 ±± 7.397.39 마스티시아 알보리아 에틸아세테이트 분획물Mastisia alboria ethyl acetate fraction 55 22.8222.82 ±± 8.308.30 1010 29.8429.84 ±± 6.036.03 2020 58.9458.94 ±± 1.561.56 3030 93.1393.13 ±± 6.096.09 마스티시아 알보리아 부탄올 분획물Mastisia alboria fraction 55 21.3621.36 ±± 7.137.13 1010 40.0140.01 ±± 4.214.21 2020 64.1664.16 ±± 7.787.78 3030 72.3672.36 ±± 2.922.92 마스티시아 알보리아 물 분획물Mastisia alboria water fraction 55 9.409.40 ±± 5.775.77 1010 23.4223.42 ±± 6.556.55 2020 39.2839.28 ±± 5.905.90 3030 58.7158.71 ±± 1.881.88

<< 실험예Experimental Example 2>  2> 마스티시아Mastissia 알보리아Alboria 추출물의  Extract iNOSiNOS 발현 억제 효과 Expression inhibitory effect

<2-1> <2-1> 웨스턴Western 블라팅Blasting

본 발명자들은 마스티시아 알보리아 추출물의 iNOS 단백질의 발현 억제 효과를 확인하기 위하여 웨스턴 블라팅을 수행하였다.The inventors performed western blotting to confirm the inhibitory effect of iNOS protein expression of the mastissia alboria extract.

구체적으로, 상기 <실험예 1>과 동일한 방법으로 처리한 세포에서 배지를 제거하고, PBS로 세척한 후, 단백질 분해효소 저해제(Protease inhibitor cocktail, Roche, USA)를 함유한 단백질 용출용액(CelLyticTM-MT Tissue Lysis Reagent, Sigma, USA)을 사용하여 균질화하였다. 추출액은 20분 동안 14000 rpm에서 원심분리한 뒤 상등액과 불용성 응집체를 분리하였다. 분리된 상등액의 단백질 농도는 바이오-라드 단백질 분석 키트(Bio-Rad protein assay kit, Bio-Rad, USA)를 이용하여 측정하였다. 또한, 상등액을 5 SDS(0.156M Tris-HCl, pH 6.8, 2.5% SDS, 37.5% 글리세롤, 37.5 mM DTT)와 1:4로 섞어 100℃에서 10분간 끓였다. 끓인 시료에서 20 ㎍ 단백질을 SDS 4-12% SDS-PAGE 겔에 로딩하고 125 V에서 2시간 동안 전기영동 하여 분자량에 따라 분리하였고, 상기 단백질을 겔 한 장당 100mA의 조건으로 1시간 동안 전기영동 하여 PVDF 막으로 옮겼다. 이 막에 1차 항체로 항-iNOS 항체(1:100, Santa Cruz Biotechnology, USA)를 결합시킨 후, 감광하여 분석하였다. Specifically, in the same manner as in <Experimental Example 1> The medium was removed from the treated cells, washed with PBS, and then homogenized using a protein eluate (CelLyticTM-MT Tissue Lysis Reagent, Sigma, USA) containing a protease inhibitor cocktail (Roche, USA). It was. The extract was centrifuged at 14000 rpm for 20 minutes and the supernatant and insoluble aggregates were separated. The protein concentration of the separated supernatant was measured using a Bio-Rad protein assay kit (Bio-Rad, USA). In addition, the supernatant was mixed with 5 SDS (0.156M Tris-HCl, pH 6.8, 2.5% SDS, 37.5% glycerol, 37.5 mM DTT) 1: 4 and boiled at 100 ° C for 10 minutes. In a boiled sample, 20 μg of protein was loaded on an SDS 4-12% SDS-PAGE gel and subjected to electrophoresis at 125 V for 2 hours, and separated according to molecular weight. The protein was electrophoresed for 1 hour under conditions of 100 mA per gel. Transferred to PVDF membrane. Anti-iNOS antibody (1: 100, Santa Cruz Biotechnology, USA) was bound to the membrane as primary antibody and photosensitized.

그 결과, LPS만 처리한 세포에서 iNOS 단백질의 발현량이 급격히 증가하는 것을 확인하였으나, 마스티시아 알보리아 추출물을 전처리한 후, LPS를 처리한 세포에서는 iNOS 단백질의 발현량이 농도의존적으로 감소하는 것을 확인하였다(도 1a).
As a result, it was confirmed that the expression level of iNOS protein was rapidly increased in cells treated with LPS only, but the concentration of iNOS protein was decreased in concentration-dependently in LPS treated cells after pretreatment of mastis alboria extract. (FIG. 1A).

<2-2> <2-2> 면역형광염색법Immunofluorescence Staining ( ( ImmunofluoresenceImmunofluoresence ))

약 2 105 개/㎖ 세포를 퍼머녹스 챔버 플라스틱 슬라이드(Permanox chambered plastic slides; Nunc, USA)에 부착시키고, 실험예 <2-1>에서와 같이 대식세포에 염증을 유도한 후, 상등액을 제거하고, 인산완충액(PBS)로 세척하였다. 이후 4℃에서 30분간 에탄올로 고정하였고, 세척한 후, 3% 소혈청알부민(bovine serum albumin)으로 실온에서 30분간 차단하였다. 차단 후 1차 항체[항-iNOS 항체(1:100)]를 4℃에서 하루 동안 반응시켰다. 인산완충액으로 3번 세척한 이후에 텍사스레드(Texas red; Santa Cruz Biotechnology, USA))가 연결된 2차 항체(Santa Cruz Biotechnology, USA)를 실온의 암조건에서 2시간 동안 반응하였다. 인산완충액으로 프로롱 골드 안티페드 용액(ProLong Gold Antifade reagent, Invitrogen, USA)으로 3번 마운팅한 후 공초점 현미경(LSM510m Carl Zeiss, Germany)으로 촬영하였다. About 2 10 5 pcs / ml The cells were attached to Permanox chambered plastic slides (Nunc, USA), induced inflammation in macrophages as in Experiment <2-1>, and then the supernatant was removed and phosphate buffer (PBS) Washed with. The cells were fixed with ethanol at 4 ° C for 30 minutes, washed and then blocked with 3% bovine serum albumin at room temperature for 30 minutes. After blocking, the primary antibody [anti-iNOS antibody (1: 100)] was reacted at 4 ° C for one day. After washing 3 times with phosphate buffer, the red (Texas red; Santa Cruz Biotechnology, USA)) was incubated with secondary antibody (Santa Cruz Biotechnology, USA) was reacted for 2 hours under dark conditions at room temperature. (ProLong Gold Antifade reagent, Invitrogen, USA) with phosphate buffer and photographed with a confocal microscope (LSM510m Carl Zeiss, Germany).

그 결과, 도 1b에서 보는바와 같이, 리포폴리사카라이드만 처리한 세포에서는 iNOS의 단백질 발현이 급격히 증가하는 반면, 마스티시아 알보리아 추출물을 전처리한 세포에서는 단백질의 발현이 유의적으로 감소되는 것을 확인하였다(도 1b).
As a result, as shown in FIG. 1B, the protein expression of iNOS is rapidly increased in the cells treated with lipopolysaccharide, whereas the expression of the protein is significantly decreased in the cells pretreated with the mastis alboria extract. It was confirmed (FIG. 1B).

<< 실험예Experimental Example 3>  3> 마스티시아Mastissia 알보리아Alboria 추출물의 프로스타글란딘  The extract of prostaglandin EE 22 생성 억제 효과 Generation suppression effect

본 발명자들은 마스티시아 알보리아 추출물의 프로스타글란딘 E2(Prostaglandin E2) 생성 저해 효과를 확인하기 위하여, 상기 <실험예 1>과 동일한 방법으로 마스티시아 알보리아 추출물과 LPS를 처리한 Raw264.7 세포의 배양 상층액을 수득한 후, 프로스타글란딘 측정 키트(PGE2 assay kit; R&D systems, Minneapolis, 미국)를 사용하여 프로스타글란딘 E2(Prostaglandin E2)의 생성 저해효과를 확인하였다. The inventors have seen maseuti cyano boria extract of prostaglandin E 2 (Prostaglandin E 2) to confirm the production-inhibiting effect, the <Experiment 1> and Raw264.7 treated maseuti cyano al boria extract and LPS in the same manner After the culture supernatant of the cells was obtained, the production inhibitory effect of prostaglandin E 2 (Prostaglandin E2) was confirmed using a PGE 2 assay kit (R & D systems, Minneapolis, USA).

그 결과, LPS에 의해 프로스타글란딘 E2 생성량이 증가하였고, LPS와 마스티시아 알보리아 추출물을 농도별로 처리한 군에서는 농도의존적으로 프로스타글란딘 E2의 생성량이 감소하는 것을 확인하였다(도 2).
As a result, the production of prostaglandin E2 was increased by LPS, and the concentration of prostaglandin E 2 was decreased in the concentration-dependent group in the LPS and mastis alboria extracts (FIG. 2).

<< 실험예Experimental Example 4>  4> 마스티시아Mastissia 알보리아Alboria 추출물의 사이토카인 생성 저해 효과 Inhibitory effect of extract on cytokine production

본 발명자들은 마스티시아 알보리아 추출물의 사이토카인 생성 저해 효과를 확인하기 위하여, LPS로 유도된 IL-6(interleukin-6)와 IL-1beta의 생성량을 효소면역학적 분석키트(mouse IL-6 ELISA set; BD OptEIATM, USA 혹은 mouse IL-1beta Enzyme Immunometric Assay Kit; Assay designs, USA)를 이용하여 측정하였다.In order to confirm the cytokine production inhibitory effect of the mastia alboria extract, the present inventors analyzed the production of LPS-induced IL-6 (interleukin-6) and IL-1beta in an enzyme immunoassay kit (mouse IL-6 ELISA). set; BD OptEIA , USA or mouse IL-1beta Enzyme Immunometric Assay Kit; Assay designs, USA).

구체적으로, 상기 <실험예 1>과 동일한 방법으로 Raw264.7 세포를 배양한 후, 상층액 100 ㎕를 회수하여 마우스 면역글로불린을 코팅한 96 웰플레이트에 분주하여 2시간 동안 교반하며 반응시켰다. 그런 다음, 세척용액으로 4회 세척한 다음, 제 1차 항체인 항-IL-6 항체 혹은 항-IL-1beta 항체를 100 ㎕씩 분주한 후 2시간 반응시켰다. 반응 후에 세척을 하고 제 2차 항체를 분주하고 30분간 반응시켰다. 다시 세척한 후 기질을 넣어 30분간 반응시킨 다음, 발색 정도를 마이크로플레이트 측정기로 450 nm에서 측정하였다. Specifically, after culturing Raw264.7 cells in the same manner as in <Experimental Example 1>, 100 µl of the supernatant was recovered, and the mixture was dispensed into a 96 well plate coated with mouse immunoglobulin, followed by stirring for 2 hours. Then, the cells were washed four times with a washing solution, and then 100 μl of anti-IL-6 antibody or anti-IL-1beta antibody as the primary antibody was dispensed and reacted for 2 hours. After the reaction, the cells were washed and the secondary antibody was dispensed and reacted for 30 minutes. After washing again, the substrate was incubated for 30 minutes, and the degree of color development was measured at 450 nm with a microplate meter.

그 결과, LPS의 처리로 증가된 각각의 IL-6와 IL-1beta 사이토카인의 양이 마스티시아 알보리아 추출물을 전처리함으로 인하여 농도의존적으로 감소하는 것을 확인하였다(도 3a와 3b).
As a result, it was confirmed that the amount of each IL-6 and IL-1beta cytokine increased by the treatment of LPS decreased concentration-dependently by pre-treatment of the mastia alboria extract (Fig. 3a and 3b).

<< 실험예Experimental Example 5>  5> 마스티시아Mastissia 알보리아Alboria 추출물의 신호전달 단백질의 인산화 억제 효과  Inhibitory effect of extracts on signal transduction protein phosphorylation

Raw264.7 세포에 마스티시아 알보리아 추출물을 30㎍/㎖의 농도로 처리하고 30분 후에 LPS를 0.5㎍/㎖의 농도로 처리한 후, 시간별로 세포를 수집하여 단백질 분해효소 저해제 및 인산화분해저해효소(phosphatase inhibitor, Roche, 독일)를 함유한 단백질 용출용액을 사용하여 균질화하였다. 추출액은 20분 동안 14000 rpm에서 원심분리한 뒤 상등액과 불용성 응집체를 분리하였다. 분리된 상등액의 단백질을 정량하여 시료당 20 ㎍의 단백질을 SDS 10% SDS-PAGE 겔에 전기영동한 후, PVDF 막으로 옮겼다. 단백질이 옮겨진 막에서 단백질이 없는 부분을 탈지분유로 차단(blocking)시킨 다음, 1차 항체로 항-ERK, 항-p38 MAPK, 항-JNK(1:1000, Santa Cruz Biotechnology, USA)의 전체형태의 항체를 부착하거나, 항-p38 MAPK과 항-JNK(1:1000, Enzo, Rarmingdale, NY) 또는 항-ERK(1:1000, Cell Signaling Technology, 미국)의 인산화형태의 항체를 부착한 후, 2차 항체를 순차적으로 결합시켰다. After treatment with Mastcia alboria extract at a concentration of 30 ㎍ / ㎖ in Raw264.7 cells and a concentration of 0.5 ㎍ / ㎖ LPS after 30 minutes, the cells were collected by time to protease inhibitors and phosphorylation Homogenized using protein eluate containing inhibitor enzyme (phosphatase inhibitor, Roche, Germany). The extract was centrifuged at 14000 rpm for 20 minutes and the supernatant and insoluble aggregates were separated. Proteins of the separated supernatant were quantified, and 20 μg of protein per sample was electrophoresed on SDS 10% SDS-PAGE gel and transferred to PVDF membrane. Blocking the protein-free portion of the protein-transferred membrane with skim milk powder, then using the primary antibody as a whole form of anti-ERK, anti-p38 MAPK, anti-JNK (1: 1000, Santa Cruz Biotechnology, USA) After attaching the antibody of the anti-p38 MAPK and anti-JNK (1: 1000, Enzo, Rarmingdale, NY) or anti-ERK (1: 1000, Cell Signaling Technology, USA) Secondary antibodies were bound sequentially.

그 결과, 대식세포에 LPS를 단독 처리했을 경우, 처리시간에 따라 인산화된 신호전달 단백질들이 증가함을 확인하였다. 마스티시아 알보리아 추출물을 전처리하고 LPS를 처리한 경우, JNK, p38 및 ERK의 전체단백질의 양에는 변화가 없었으나, 인산화단백질인 pJNK와 pERK의 단백질 발현양이 억제됨을 확인하였다(도 4).
As a result, when LPS was treated only with macrophages, it was confirmed that phosphorylated signaling proteins increased with treatment time. In the case of pretreatment of the mastia alboria extract and LPS treatment, the total protein levels of JNK, p38 and ERK were not changed, but the protein expression levels of pJNK and pERK, which are phosphorylated proteins, were inhibited (FIG. 4). .

<< 실험예Experimental Example 6>  6> 카라기난Carrageenan (( carrageenancarrageenan ) 유도 마우스 ) Induced mice 족부종에On foot 대한  About 마스티시아Mastissia 알보리아Alboria 추출물 및 에틸아세테이트  Extract and Ethyl Acetate 분획물의Fraction 억제효과 Inhibitory effect

마스티시아 알보리아 추출물이 동물세포에 대해 염증저해효과가 우수하였기에 동물실험을 통해 염증저해 효과를 확인하였다.Since the mastia alboria extract had an excellent anti-inflammatory effect on animal cells, the anti-inflammatory effect was confirmed through animal experiments.

구체적으로, 무게가 20-25g인 BALB/c 암컷 마우스(코아텍, 대한민국)를 4-5마리씩 무작위적으로 선정하여 각 그룹으로 나누었다. 마스티시아 알보리아 추출물 혹은 에틸아세테이트 분획물은 인산완충액(PBS)에 초음파로 녹여서 40 혹은 80 mg/kg의 농도로 투여하였으며, 음성대조군으로는 PBS를 투여하였으며, 양성대조군으로는 인도메타신(Indomethacin, Sigma, USA)을 5 mg/kg의 농도로 투여하였다. 30분 후에, 염증을 유도하기 위하여 PBS에 녹인 카라기난(1% v/v) 용액을 마우스의 왼발에 25 ul씩 주사하였다. 발의 두께는 카라기난을 주사하기 전에 캘리퍼(Digital caliper, Niigata Seiki, 일본)로 측정하였으며, 카라기난 주사하고 4시간 후에 다시 측정하여 염증유도정도를 계산하였다.Specifically, 4 to 5 BALB / c female mice (Koatech, Korea) weighing 20-25 g were randomly selected and divided into groups. Masticia alboria extract or ethyl acetate fraction was dissolved in phosphate buffer (PBS) by ultrasound and administered at a concentration of 40 or 80 mg / kg, PBS was administered as a negative control, and indomethacin as a positive control. , Sigma, USA) was administered at a concentration of 5 mg / kg. After 30 minutes, 25 μl of carrageenan (1% v / v) solution dissolved in PBS was injected into the left foot of the mouse to induce inflammation. The thickness of the feet was measured with a caliper (Digital caliper, Niigata Seiki, Japan) before injection of carrageenan, and the degree of inflammation was calculated by measuring again 4 hours after the carrageenan injection.

그 결과, 음성대조군은 카라기난에 의해 발의 두께가 0.90 ± 0.12mm 증가하였으나, 마스티시아 알보리아 추출물을 전처리한 군에서는 카라기난으로 유도된 마우스 발의 두께 증가가 억제됨을 확인하였으며(40mg/kg;0.54 ± 0.07mm, 80mg/kg;0.52 ± 0.08mm) 마스티시아 알보리아 에틸아세테이트 분획물 또한 마우스 발두께 증가에 대해 억제효과(40mg/kg;0.55 ± 0.06mm, 80mg/kg;0.49 ± 0.08mm)가 있음을 확인하였다(도 5).
As a result, the negative control group increased the thickness of the foot by carrageenan 0.90 ± 0.12mm, but it was confirmed that the carrageenan-induced increase in the thickness of the mouse foot was suppressed in the group treated with the mastia alboria extract (40 mg / kg; 0.54 ± 0.07 mm, 80 mg / kg; 0.52 ± 0.08 mm) The mastissia alboria ethyl acetate fraction also has an inhibitory effect on the increase in mouse thickness (40 mg / kg; 0.55 ± 0.06 mm, 80 mg / kg; 0.99 ± 0.08 mm) It was confirmed (Fig. 5).

<< 제조예Manufacturing example 1> 약학적 제제의 제조 1> Preparation of Pharmaceutical Formulations

<1-1> <1-1> 산제의Sanje 제조 Produce

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 2 g2 g of masticia alboria extract of the present invention or a fraction thereof

유당 1 gLactose 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
The above components were mixed and packed in airtight bags to prepare powders.

<1-2> 정제의 제조<1-2> Preparation of tablets

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 100 mgMasticia alboria extract or fractions thereof of the present invention 100 mg

옥수수전분 100 mgCorn starch 100 mg

유 당 100 mgLactose 100 mg

스테아린산 마그네 2 mgStearic Acid Magnesium 2 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
After mixing the above components, tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.

<1-3> 캡슐제의 제조&Lt; 1-3 > Preparation of capsules

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 100 mgMasticia alboria extract or fractions thereof of the present invention 100 mg

옥수수전분 100 mgCorn starch 100 mg

유 당 100 mgLactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg2 mg magnesium stearate

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
After mixing the above components, the capsules were filled in gelatin capsules according to the conventional preparation method of capsules.

<1-4> 환의 제조&Lt; 1-4 >

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 1 g1 g of masticia alboria extract of the present invention or a fraction thereof

유당 1.5 gLactose 1.5 g

글리세린 1 g1 g of glycerin

자일리톨 0.5 gXylitol 0.5 g

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하였다.
After mixing the above components, they were prepared so as to be 4 g per one ring according to a conventional method.

<1-5> 과립의 제조<1-5> Preparation of granules

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 150 mg150 mg of masticia alboria extract or fractions thereof of the present invention

대두추출물 50 mgSoy extract 50 mg

포도당 200 mgGlucose 200 mg

전분 600 mgStarch 600 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 30% 에탄올 100 mg을 첨가하여 섭씨 60℃ 에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
After mixing the above components, 100 mg of 30% ethanol was added and dried at 60 ° C. to form granules, and then filled into fabrics.

<< 제조예Manufacturing example 2> 식품의 제조 2> Manufacturing of food

<2-1> 밀가루 식품의 제조<2-1> Production of flour food

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
0.5 to 5.0 parts by weight of the mastisia alboria extract of the present invention or its fractions were added to wheat flour and the mixture was used to prepare bread, cake, cookies, crackers and noodles.

<2-2> <2-2> 스프soup 및 육즙( And juicy ( graviesgravies )의 제조Manufacturing

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
0.1 to 5.0 parts by weight of the mastisia alboria extract of the present invention or its fractions were added to soups and juices to prepare health-promoting meat products, noodles and juices.

<2-3> 그라운드 <2-3> Ground 비프(ground beef)의Beef 제조 Produce

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
10 parts by weight of the mastisia alboria extract of the present invention or its fraction was added to ground beef to prepare ground beef for health promotion.

<2-4> 유제품(<2-4> Dairy products ( dairydairy productsproducts )의 제조Manufacturing

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
5 to 10 parts by weight of a mastisia alboria extract of the present invention or a fraction thereof was added to milk, and various dairy products such as butter and ice cream were prepared using the milk.

<2-5> <2-5> 선식의Solar 제조  Produce

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.Brown rice, barley, glutinous rice, and yulmu were dried by a known method and dried, and the mixture was granulated to a powder having a particle size of 60 mesh.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.Black soybeans, black sesame seeds, and perilla seeds were steamed and dried by a conventional method, and then they were prepared into powder having a particle size of 60 mesh by a pulverizer.

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.The mastisia alboria extract of the present invention or its fraction was concentrated under reduced pressure in a vacuum concentrator, sprayed and dried with a hot air drier, and the resulting dried product was pulverized to a size of 60 mesh with a pulverizer to obtain a dried powder.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.The grains, seeds and the mastiscia alboria extract of the present invention or fractions thereof were prepared by combining the following ratios.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),(30 parts by weight of brown rice, 15 parts by weight of yulmu, 20 parts by weight of barley)

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),Seeds (7 parts by weight of perilla, 8 parts by weight of black beans, 7 parts by weight of black sesame seeds)

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물(3 중량부),Masticia alboria extract or fractions thereof (3 parts by weight) of the present invention,

영지(0.5 중량부),(0.5 part by weight),

지황(0.5 중량부).
Rhubarb (0.5 parts by weight).

<< 제조예Manufacturing example 3> 음료의 제조 3> Manufacturing of beverage

<3-1> <3-1> 건강음료의Health drink 제조 Produce

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
5 g of the mastisia alboria extract or fraction thereof of the present invention is added to a homogeneous mixture such as liquid fructose (0.5%), oligosaccharide (2%), sugar (2%), salt (0.5% And sterilized at the moment, and then packaged in small containers such as glass bottles and plastic bottles.

<3-2> 야채 주스의 제조<3-2> Preparation of vegetable juice

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
Vegetable juice was prepared by adding 5 g of the masticia alboria extract of the present invention or a fraction thereof to 1,000 tomato or carrot juices.

<3-3> 과일 주스의 제조<3-3> Production of fruit juice

본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.
A fruit juice was prepared by adding 1 g of the masticia alboria extract of the present invention or a fraction thereof to 1,000 apple or grape juices.

Claims (11)

마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
A pharmaceutical composition for preventing and treating inflammatory diseases, which contains an extract of Mastixia arborea CBClarke or a fraction thereof as an active ingredient.
제 1항에 있어서, 상기 마스티시아 알보리아는 물, C1 ~ C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
The pharmaceutical composition for preventing and treating inflammatory diseases of claim 1, wherein the mastissia alboria is extracted using water, a lower alcohol of C 1 to C 2 or a mixture thereof as a solvent.
제 2항에 있어서, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
The pharmaceutical composition according to claim 2, wherein the lower alcohol is ethanol or methanol.
제 1항에 있어서, 상기 분획물은 상기 마스티시아 알보리아 추출물에 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 또는 부탄올을 가하여 추출한 분획물인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
The pharmaceutical composition of claim 1, wherein the fraction is a fraction extracted by adding n-hexane, chloroform, ethyl acetate, or butanol to the masticia alboria extract.
제 1항에 있어서, 상기 염증성 질환은 알레르기, 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통 (fibromyalgia), 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군(sjogren's syndrome), 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
The method of claim 1, wherein the inflammatory disease is allergic, dermatitis, atopic dermatitis, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, colitis, gout, ankylosing spondylitis, rheumatic fever, lupus, fibromyalgia (fibromyalgia), psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis, tendinitis, hay salt, peritonitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, sjogren's syndrome, multiple sclerosis, and acute and chronic inflammatory diseases Pharmaceutical composition for preventing and treating inflammatory diseases, characterized in that any one selected.
마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 치료용 피부 외용제.
A skin external preparation for preventing and treating inflammatory diseases, which contains a mastia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient.
제 6항에 있어서, 상기 염증성 질환은 알레르기, 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통, 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 치료용 피부 외용제.
The method of claim 6, wherein the inflammatory disease is allergic, dermatitis, atopic dermatitis, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, colitis, gout, ankylosing spondylitis, rheumatic fever, lupus, fibromyalgia Psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis, tendinitis, hay salt, peritonitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, Sjogren's syndrome, multiple sclerosis, and acute and chronic inflammatory diseases Skin external preparation for preventing and treating inflammatory diseases.
마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물.
Cosmetic composition for preventing and improving inflammatory diseases containing a mastia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient.
제 8항에 있어서, 상기 염증성 질환은 알레르기, 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통, 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 개선용 화장료 조성물.
The method of claim 8, wherein the inflammatory disease is allergic, dermatitis, atopic dermatitis, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, colitis, gout, ankylosing spondylitis, rheumatic fever, lupus, fibromyalgia Psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis, tendinitis, hay salt, peritonitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, Sjogren's syndrome, multiple sclerosis, and acute and chronic inflammatory diseases Cosmetic composition for preventing and improving inflammatory diseases.
마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품.
Inflammatory disease prevention and improvement health food containing a mastia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient.
제 10항에 있어서, 상기 염증성 질환은 알레르기, 피부염, 아토피, 결막염, 치주염, 비염, 중이염, 인후염, 편도염, 폐렴, 위궤양, 위염, 크론병, 대장염, 통풍, 강직성 척추염, 류마티스 열, 루푸스, 섬유근통, 건선관절염, 골관절염, 류마티스 관절염, 견관절주위염, 건염, 건초염, 건주위염, 근육염, 간염, 방광염, 신장염, 쇼그렌 증후군, 다발성 경화증, 및 급성 및 만성 염증 질환으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염증성 질환 예방 및 개선용 건강식품.
The method of claim 10, wherein the inflammatory disease is allergic, dermatitis, atopic dermatitis, conjunctivitis, periodontitis, rhinitis, otitis media, sore throat, tonsillitis, pneumonia, gastric ulcer, gastritis, Crohn's disease, colitis, gout, ankylosing spondylitis, rheumatic fever, lupus, fibromyalgia Psoriatic arthritis, osteoarthritis, rheumatoid arthritis, periarthritis, tendinitis, hay salt, peritonitis, myositis, hepatitis, cystitis, nephritis, Sjogren's syndrome, multiple sclerosis, and acute and chronic inflammatory diseases Inflammatory disease to prevent and improve health food.
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