KR101329702B1 - Polyamine-based vector for delivery of small interfering RNA - Google Patents
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Abstract
본 발명은 폴리아민을 기반으로 한 유전자 또는 유전자 발현 억제인자 전달체에 관한 것이다. 본 발명에 따른 siRNA 전달체는 한 단계 반응을 통해 쉽게 합성할 수 있으며 우수한 siRNA 전달효능을 나타낸다. The present invention relates to a gene or gene expression inhibitor transporter based on polyamines. SiRNA carriers according to the present invention can be easily synthesized through a one-step reaction and exhibit excellent siRNA delivery efficiency.
Description
본 발명은 폴리아민을 기반으로 한 유전자 또는 유전자 발현 억제인자 전달체에 관한 것이다.
The present invention relates to a gene or gene expression inhibitor transporter based on polyamines.
작은 간섭 RNA(small interfering RNA, siRNA)는 19 ~ 22개의 핵산으로 구성된 이중나선 구조의 짧은 RNA로서, 그의 센스 가닥과 염기 서열이 동일한 메신저 RNA(messenger RNA, mRNA)와 결합되면 RNA유도침묵복합체(RNA induced silencing complex, RISC)가 결합된 mRNA를 분해시킴으로써 특정 단백질의 발현을 저해하는 것으로 알려져 있다(Elbashir, S. M. et al., 2001, Nature 411, 494-8). 적은 양으로도 효과적이고 정확하게 서열이 동일한 mRNA의 발현을 억제하는 이러한 siRNA의 성질을 이용하여 유전자 관련 질병 치료에 다양한 가능성이 연구되어 왔으며 siRNA를 이용한 치료약 개발 시장은 그 규모가 해마다 비약적으로 증가하고 있다.Small interfering RNA (siRNA) is a double-stranded short RNA composed of 19 to 22 nucleic acids. When the sense strand and base sequence are combined with the same messenger RNA (mRNA), an RNA-induced silencing complex ( RNA induced silencing complex (RISC) is known to inhibit the expression of specific proteins by degrading the bound mRNA (Elbashir, SM et al., 2001, Nature 411, 494-8). Various possibilities have been studied for the treatment of gene-related diseases by using the siRNA properties that effectively and precisely suppress the expression of mRNAs having the same sequence, and the market for drug development using siRNAs is increasing rapidly each year. .
한편, siRNA의 효소 불안정성과 열악한 세포 투과성 등은 실제 임상치료에 적용하는데 있어서 큰 장애가 되어왔으며, 이를 해결하기 위해 다양한 전달체의 개발 및 siRNA 자체에 다양한 분자의 접합 등이 연구되고 있다. 효소에 직접적으로 노출되는 것을 예방하고 세포 투과성을 증가시키기 위해 음이온성의 siRNA에 양이온성 고분자 또는 지질 분자, 및 펩타이드를 전기적 인력으로 결합시켜 전체적으로 양이온 성질을 가지는 나노 크기의 복합체를 형성하여 siRNA를 효소로부터 보호하고 동시에 음이온 성질을 가지는 세포막과의 상호작용을 향상시켜 세포 내 전달 효율을 증가시키는 연구가 대표적이라 할 수 있다. 그러나, siRNA는 분자량이 15000 이하 정도로 작으며 RNA 특유의 뻣뻣한 구조를 가지고 있어서 양이온성 고분자와 안정된 복합체를 이루는데 어려움이 있으므로, 기존에 개발된 다양한 유전자 전달체를 이용하는데 한계가 있다.On the other hand, the enzyme instability and poor cell permeability of siRNA has been a major obstacle in the application of the actual clinical treatment, to solve this, the development of various carriers and the conjugation of various molecules to siRNA itself. In order to prevent direct exposure to enzymes and increase cell permeability, cationic polymers or lipid molecules and peptides are coupled to anionic siRNAs by electrical attraction to form nanoscale complexes with cationic properties as a whole. The study of increasing the intracellular delivery efficiency by protecting and improving the interaction with the anion cell membrane is representative. However, siRNA has a molecular weight of less than 15000 and has a stiff structure unique to RNA, making it difficult to form stable complexes with cationic polymers. Therefore, there are limitations in using various gene carriers previously developed.
이에, 본 발명자들은 안정성 및 전달효율이 우수한 siRNA 전달체를 개발하기 위하여 연구한 결과, 에폭사이드(epoxide)와 스퍼민(spermine)을 반응시켜 우수한 전달능을 가지는 siRNA 전달체를 완성하였다.
Accordingly, the present inventors have studied to develop a siRNA carrier having excellent stability and delivery efficiency, and completed an siRNA carrier having excellent delivery ability by reacting epoxide with spermine.
본 발명의 목적은 폴리아민을 기반으로 한 유전자 또는 유전자 발현 억제인자 전달체를 제공하는 데 있다.
It is an object of the present invention to provide a gene or gene expression suppressor carrier based on a polyamine.
본 발명은 상기 목적을 달성하기 위하여, 하기 화학식 1로 표시되는 화합물과 하기 화학식 2로 표시되는 화합물을 반응시켜 유전자 또는 유전자 발현 억제인자의 전달체를 제조하는 방법을 제공한다:
The present invention provides a method for preparing a carrier of a gene or gene expression inhibitor by reacting a compound represented by the formula (1) and a compound represented by the formula (2) to achieve the above object:
[화학식 1][Formula 1]
[화학식 2](2)
R은 -(CH2)l-CH3 이고, l은 2 내지 14임.R is-(CH 2 ) l -CH 3 and l is 2 to 14;
L1은 링커로서 -(CH2)m- 이고, m은 1 내지 5임.
L2는 링커로서 -(CH2)n- 이고, n은 1 내지 5임.L 2 is — (CH 2 ) n − as a linker, n is 1-5.
본 발명에 있어서, 상기 R은 -(CH2)8-CH3 이고, 상기 L1은 -(CH2)3- 이고, 상기 L2는 -(CH2)4- 인 것을 특징으로 할 수 있다. In the present invention, R may be-(CH 2 ) 8 -CH 3 , L1 is-(CH 2 ) 3- , and L2 may be-(CH 2 ) 4- .
본 발명에 있어서, 상기 반응은 화학식 1의 화합물 6 분자와 화학식 2의 화합물 1 분자 간의 반응인 것을 특징으로 할 수 있다. In the present invention, the reaction may be characterized in that the reaction between the compound 6 molecules of the compound of
본 발명은 다른 구체예에 있어서, 하기 화학식 3으로 표시되는 유전자 또는 유전자 발현 억제인자 전달체를 제공한다:
In another embodiment, the present invention provides a gene or a gene expression suppressor carrier represented by the following Chemical Formula 3:
[화학식 3](3)
R은 -(CH2)l-CH3 이고, l은 3 내지 15임.R is-(CH 2 ) 1 -CH 3 and l is 3 to 15.
L1은 링커로서 -(CH2)m- 이고, m은 1 내지 5임.
L2는 링커로서 -(CH2)n- 이고, n은 1 내지 5임.L 2 is — (CH 2 ) n − as a linker, n is 1-5.
본 발명에 있어서, 상기 R은 -(CH2)9-CH3 이고, 상기 L1은 -(CH2)3- 이고, 상기 L2는 -(CH2)4- 인 것을 특징으로 할 수 있다. In the present invention, R may be-(CH 2 ) 9 -CH 3 , L 1 is-(CH 2 ) 3- , and L2 is-(CH 2 ) 4- .
본 발명은 또 다른 구체예에서, 상기 전달체에 유전자 또는 유전자 발현 억제인자가 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 복합체를 제공한다. In another embodiment, the present invention provides a complex characterized in that a gene or gene expression inhibitory factor is bound to the carrier.
본 발명에 있어서, 상기 유전자 또는 유전자 발현 억제인자와 전달체는 1:2.5 내지 1:10의 비율로 결합하는 것을 특징으로 할 수 있다. In the present invention, the gene or gene expression inhibitor and the carrier may be characterized in that the binding in the ratio of 1: 2.5 to 1:10.
본 발명은 또 다른 구체예에서, 상기 복합체를 세포 내로 도입시키는 것을 특징으로 하는 유전자 발현 억제 방법을 제공한다. In another embodiment, the present invention provides a method for inhibiting gene expression, wherein the complex is introduced into a cell.
본 발명에 있어서, 상기 유전자 또는 유전자 발현 억제인자는 siRNA, shRNA, microRNA 및 압타머로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다. In the present invention, the gene or gene expression inhibitor may be selected from the group consisting of siRNA, shRNA, microRNA and aptamer.
본 발명의 유전자 전달체는 다양한 길이의 에폭사이드 및 아민을 이용하여 유전자 전달체를 합성할 수 있으며(Proc Natl Acad Sci USA 2010;107(5):1864-1869 참조), 따라서 화학식 1(R은 -(CH2)l-CH3 이고, l은 2 내지 14임) 및 화학식 2(L1은 -(CH2)m- 이고, m은 1 내지 5임, L2는 -(CH2)n- 이고, n은 1 내지 5임)는 그 범위 내에서 유전자 전달체를 합성할 수 있고, 화학식 3(R은 -(CH2)l-CH3 이고, l은 3 내지 15임, L1은 -(CH2)m- 이고, m은 1 내지 5임, L2는 -(CH2)n- 이고, n은 1 내지 5임)은 그 범위 내에서 유전자 전달체의 성질을 나타내게 된다. The gene carriers of the present invention can synthesize gene carriers using epoxides and amines of varying lengths (see Proc Natl Acad Sci USA 2010; 107 (5): 1864-1869), so that formula (R) is-( CH 2 ) l -CH 3 , l is 2 to 14) and Formula 2 (L1 is-(CH 2 ) m- , m is 1 to 5, L2 is-(CH 2 ) n- , n Is 1 to 5) can synthesize a gene carrier within the range, formula 3 (R is-(CH 2 ) l -CH 3 , l is 3 to 15, L1 is-(CH 2 ) m -, M is 1 to 5, L2 is-(CH 2 ) n- , n is 1 to 5) to indicate the nature of the gene delivery within that range.
본 발명자들은 기존의 siRNA 전달체에 비하여 전달효율이 뛰어나고, 쉽게 합성할 수 있는 siRNA 전달체를 합성하기 위하여, 6 분자의 에폭사이드(C12)와 스퍼민 1분자를 반응시켜 C12-SPM 전달체를 완성하였다. C12-SPM은 한 단계의 개환반응을 통해 합성가능하고 반응 효율이 높으며 분리 및 정제과정이 매우 간단한 장점이 있다. 기존의 에폭사이드 기반의 siRNA 전달체(C12-200, Proc Natl Acad Sci USA 2010;107(5):1864-1869)의 합성과정은 여러 단계를 거쳐야 하고 초고압(1000psi) 조건, 금속촉매 이용, 독성 유기용매 사용 등 반응조건이 까다롭고 위험한 한계가 있었기에, 본 발명에 따른 siRNA 전달체의 합성은 경제적 측면에서도 커다란 의의를 갖는다. The present inventors completed the C12-SPM transporter by reacting 6 molecules of epoxide (C12) with one spermine molecule in order to synthesize a siRNA transporter having excellent delivery efficiency and easily synthesizing as compared to the existing siRNA transporter. C12-SPM can be synthesized through a single ring-opening reaction, has high reaction efficiency, and has a very simple separation and purification process. The synthesis of existing epoxide-based siRNA carriers (C12-200, Proc Natl Acad Sci USA 2010; 107 (5): 1864-1869) requires several steps, ultra-high pressure (1000 psi) conditions, the use of metal catalysts, toxic organics Since the reaction conditions, such as the use of solvents, were difficult and dangerous, the synthesis of siRNA carriers according to the present invention has great significance in terms of economics.
본 발명에서 사용된 용어 "유전자"는 최광의의 의미로 간주되어야 하며, 구조 단백질 또는 조절 단백질을 암호화할 수 있다. 이 때, 조절 단백질은 전사인자, 열 충격단백질 또는 DNA/RNA 복제, 전사 및/또는 번역에 관여하는 단백질을 포함한다. As used herein, the term “gene” should be considered in the broadest sense and may encode a structural or regulatory protein. At this time, the regulatory protein includes a transcription factor, a heat shock protein or a protein involved in DNA / RNA replication, transcription and / or translation.
본 발명에서 사용된 용어 "발현 억제인자"는 유전자의 발현 억제(gene silencing)을 유도하는 인자로서, 이에 한정되는 것은 아니나 siRNA, shRNA, microRNA 및 압타머를 포함한다. The term "expression inhibitor" as used in the present invention is a factor that induces gene silencing of expression, including but not limited to siRNA, shRNA, microRNA and aptamer.
본 발명에서 사용된 용어 "전달체"는 목적하는 유전자 또는 유전자 발현 억제인자를 세포 내에 전달하는 물질을 의미하는 것으로, 유전자를 감싸거나 함께 원하는 위치에 전달할 수 있어야 하고, 원하는 유전자를 억제시킬 수 있도록 전달을 제대로 해주어야 하며, 전달체의 체내 및 세포 내 독성을 적게 가지고 있어야 적합한 전달체로 기능할 수 있다.
As used herein, the term “carrier” refers to a substance that delivers a desired gene or gene expression suppressor into a cell. The term “carrier” means that the gene should be wrapped around the gene or delivered together to a desired position and delivered to inhibit the desired gene. It must be properly and must have less toxicity in the body and intracellular to be able to function as a suitable carrier.
본 발명에 따른 siRNA 전달체는 한 단계 반응을 통해 쉽게 합성할 수 있으며 우수한 siRNA 전달효능을 나타낸다.
SiRNA carriers according to the present invention can be easily synthesized through a one-step reaction and exhibit excellent siRNA delivery efficiency.
도 1은 폴리아민 기반의 siRNA 전달체의 합성을 나타낸 것이다.
도 2는 폴리아민 기반의 siRNA 전달체의 세포 독성을 조사한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 폴리아민 기반의 siRNA 전달체의 siRNA 전달효율을 조사한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 스퍼민 기반의 siRNA 전달체(C12-SPM)의 NMR 분석결과를 나타낸 것이다.
도 5는 C12-SPM와 siRNA의 복합체 형성을 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 C12-SPM을 이용한 siRNA의 세포 내 전달 이미징 분석결과를 나타낸 것이다.
도 7은 siRNA 전달체(C12-200)와의 세포독성을 비교한 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 siRNA 전달체(C12-200)와의 siRNA 전달효율을 비교한 결과를 나타낸 것이다. 1 shows the synthesis of polyamine based siRNA transporters.
Figure 2 shows the results of examining the cytotoxicity of the polyamine-based siRNA transporter.
Figure 3 shows the results of the siRNA delivery efficiency of the polyamine-based siRNA carrier.
Figure 4 shows the NMR analysis of spermine-based siRNA transporter (C12-SPM).
Figure 5 shows the results confirming the complex formation of C12-SPM and siRNA.
Figure 6 shows the results of intracellular delivery imaging analysis of siRNA using C12-SPM.
Figure 7 shows the result of comparing the cytotoxicity with siRNA transporter (C12-200).
Figure 8 shows the result of comparing the siRNA delivery efficiency with the siRNA carrier (C12-200).
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail by the following examples. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the contents of the present invention are not limited by the following examples.
1-1: 1-1: 폴리아민Polyamine 기반의 Based siRNAsiRNA 전달체의 합성 Synthesis of Carriers
에폭사이드(1,2-epoxidodecane)와 4 종류의 폴리아민들을 반응시켜 siRNA 전달체를 합성하였다. 에폭사이드와 폴리아민은 개환반응(ring opening reaction)을 통해 중합되었다(도 1).
SiRNA transporters were synthesized by reacting epoxide (1,2-epoxidodecane) with four types of polyamines. Epoxides and polyamines were polymerized through a ring opening reaction (FIG. 1).
1-2: 1-2: 폴리아민Polyamine 기반의 Based siRNAsiRNA 전달체의 세포독성 확인 Confirmation of Cytotoxicity of Carrier
합성된 4 종류의 폴리아민 전달체(C12-SPM, C12-SPD, C12-PUT, C12-CAD)를 사용하여 인간 간세포주(Huh-7) 내로 siRNA를 전달하고 2일 후 MTT기법을 이용한 미토콘드리아 활성 분석을 통하여 세포독성을 조사하였다. 그 결과, 합성된 신규 전달체들은 siRNA 전달 후에도 세포의 활성도를 저해하지 않았으며 낮은 세포 독성을 나타내는 것을 확인하였다. 또한, 대부분의 전달체들이 90% 이상의 세포활성도를 유지하였다(도 2).
Analysis of mitochondrial activity using MTT technique two days after delivery of siRNA into human hepatocytes (Huh-7) using four synthesized polyamine carriers (C12-SPM, C12-SPD, C12-PUT, C12-CAD) The cytotoxicity was examined through. As a result, the synthesized new carriers did not inhibit the activity of the cells even after siRNA delivery and confirmed that they exhibit low cytotoxicity. In addition, most of the carriers maintained more than 90% cellular activity (FIG. 2).
1-3: 1-3: 폴리아민Polyamine 기반의 Based siRNAsiRNA 전달체의 Carrier siRNAsiRNA 전달효율 확인 Delivery efficiency check
합성된 4 종류의 폴리아민 전달체(C12-SPM, C12-SPD, C12-PUT, C12-CAD)를 사용하여 인간 간세포주(Huh-7) 내로 리포터 단백질(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase; GAPDH)에 대한 siRNA를 전달하고 2일 후 GAPDH의 활성을 분석하여 siRNA의 전달효율을 조사하였다. 그 결과, 25nM siRNA 농도에서는 신규 폴리아민 전달체들이 비교적 낮은 siRNA 전달효율(낮은 GAPDH 활성 감소)를 나타내었으나, 50nM siRNA 농도에서는 폴리아민 전달체들의 siRNA 전달효율이 전반적으로 향상되었으며, 특히 스퍼민 기반의 전달체(C12-SPM)는 상업적으로 판매되고 있는 Lipofectamine2000(LIPO200) 보다 높은 siRNA 전달 효율을 나타내었다(도 3).Four synthetic polyamine carriers (C12-SPM, C12-SPD, C12-PUT, C12-CAD) were used to report the protein (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)) into human hepatocytes (Huh-7). Two days after delivery of siRNA, the activity of siRNA was examined by analyzing the activity of GAPDH. As a result, the new polyamine transporters showed relatively low siRNA delivery efficiency (low GAPDH activity reduction) at 25 nM siRNA concentration, but the siRNA delivery efficiency of polyamine transporters was improved overall at 50 nM siRNA concentration, especially spermine-based transporters (C12-). SPM) showed higher siRNA delivery efficiency than commercially available Lipofectamine2000 (LIPO200) (FIG. 3).
가장 우수한 siRNA 전달효율을 나타낸 스퍼민 기반의 전달체(C12-SPM)는 6분자의 에폭사이드와 1분자의 스퍼민 간의 개환반응을 통해 중합되었음을 확인하였다(도 4).
It was confirmed that the spermine-based transporter (C12-SPM) showing the best siRNA delivery efficiency was polymerized through a ring-opening reaction between 6 molecules of epoxide and 1 molecule of spermine (FIG. 4).
2-1: 2-1: 스퍼민Spermine 기반의 전달체( Based carrier ( C12C12 -- SPMSPM )와 )Wow siRNAsiRNA 의 복합체 형성 및 세포 내 전달 확인Complex formation and intracellular delivery
C12-SPM과 siRNA의 나노입자 복합체 형성 여부를 gel retardation 분석을 통해 조사하였다. 그 결과, siRNA와 전달체의 여러 혼합 비율(1:2.5, 1:5, 1:7.5, 1:10)에서 복합체가 잘 형성됨을 확인하였다(도 5).The formation of nanoparticle complexes of C12-SPM and siRNA was investigated by gel retardation analysis. As a result, it was confirmed that the complex is well formed at various mixing ratios (1: 2.5, 1: 5, 1: 7.5, 1:10) of siRNA and the carrier (FIG. 5).
또한, C12-SPM을 이용한 siRNA 전달 효율을 확인하기 위하여, C12-SPM을 이용하여 형광물질(Cy3)으로 수식된 siRNA를 인간 간세포주(Huh-7) 내로 전달하는 실험을 수행하였다. 그 결과, 전달 24시간 후 형광현미경 분석을 통해 siRNA가 세포 내로 효율적으로 전달됨을 확인하였다(도 6).
In addition, in order to confirm siRNA delivery efficiency using C12-SPM, an experiment was performed in which siRNA modified with fluorescent material (Cy3) was transferred into human hepatocyte (Huh-7) using C12-SPM. As a result, it was confirmed that siRNA was efficiently delivered into cells through fluorescence microscopy analysis after 24 hours of delivery (FIG. 6).
3-1: 3-1: C12C12 -200과의 세포 독성 비교Cytotoxicity with -200
기존의 에폭사이드와 아민을 중합시킨 siRNA 전달체(C12-200, Proc Natl Acad Sci USA 2010;107(5):1864-1869)와 스퍼민 기반의 siRNA 전달체(C12-SPM)의 세포 독성을 비교하기 위하여, C12-SPM과 C12-200을 이용하여 siRNA를 인간 간세포주 (Huh-7) 내로 전달하고 2일 후 미토콘드리아 활성(MTT 분석)을 조사하여 세포 독성을 측정하였다. 그 결과, C12-SPM은 C12-200와 비교하였을 때, 세포 독성의 측면에서 큰 차이를 보이지 않았다(도 7).To compare the cytotoxicity of siRNA transporters (C12-200, Proc Natl Acad Sci USA 2010; 107 (5): 1864-1869) polymerized with conventional epoxides and amines with spermine-based siRNA transporters (C12-SPM) SiRNA was transferred into human hepatocytes (Huh-7) using C12-SPM and C12-200, and cytotoxicity was measured by examining mitochondrial activity (MTT assay) two days later. As a result, C12-SPM did not show a significant difference in terms of cytotoxicity when compared to C12-200 (FIG. 7).
3-2: 3-2: C12C12 -200과의 With -200 siRNAsiRNA 전달효율 비교 Comparison of transfer efficiency
기존의 에폭사이드와 아민을 중합시킨 siRNA 전달체(C12-200, Proc Natl Acad Sci USA 2010;107(5):1864-1869)와 스퍼민 기반의 siRNA 전달체(C12-SPM)의 siRNA 전달효율을 비교하기 위하여, C12-SPM과 C12-200을 이용하여 GAPDH siRNA를 인간 간세포주(Huh-7) 내로 전달하고 2일 후 GAPDH의 활성을 분석하여 siRNA 전달효율을 조사하였다. 그 결과, C12-200과 비교하였을 때, C12-SPM은 더 높은 siRNA 전달효율(높은 GAPDH 활성 저해 효율)을 나타내었다(도 8).Comparing siRNA delivery efficiency of conventional epoxide and amine polymerized siRNA carriers (C12-200, Proc Natl Acad Sci USA 2010; 107 (5): 1864-1869) and spermine-based siRNA carriers (C12-SPM) For this purpose, GAPDH siRNA was delivered into human hepatocytes (Huh-7) using C12-SPM and C12-200, and siRNA delivery efficiency was examined by analyzing the activity of GAPDH two days later. As a result, C12-SPM showed higher siRNA delivery efficiency (high GAPDH activity inhibition efficiency) when compared to C12-200 (FIG. 8).
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다. While the present invention has been particularly shown and described with reference to specific embodiments thereof, those skilled in the art will appreciate that such specific embodiments are merely preferred embodiments and that the scope of the present invention is not limited thereby. something to do. It is therefore intended that the scope of the invention be defined by the claims appended hereto and their equivalents.
Claims (10)
[화학식 1]
[화학식 2]
R은 -(CH2)l-CH3 이고, l은 8 내지 12임.
L1은 링커로서 -(CH2)m- 이고, m은 3 내지 5임.
L2는 링커로서 -(CH2)n- 이고, n은 4 내지 5임.
A method for preparing a carrier of a gene or gene expression suppressor by reacting a compound represented by Formula 1 with a compound represented by Formula 2 below:
[Formula 1]
(2)
R is-(CH 2 ) 1 -CH 3 and l is 8-12.
L 1 is — (CH 2 ) m − as a linker, m is 3 to 5.
L 2 is — (CH 2 ) n − as a linker, n is 4-5.
상기 유전자 또는 유전자 발현 억제인자는 siRNA, shRNA, microRNA 및 압타머로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 제조방법.
The method of claim 1,
The gene or gene expression inhibitor is a production method, characterized in that selected from the group consisting of siRNA, shRNA, microRNA and aptamer.
상기 R은 -(CH2)8-CH3 이고, 상기 L1은 -(CH2)3- 이고, 상기 L2는 -(CH2)4- 인 것을 특징으로 하는 제조방법.
The method of claim 1,
R is-(CH 2 ) 8 -CH 3 , L 1 is-(CH 2 ) 3- , and L2 is-(CH 2 ) 4- .
상기 반응은 화학식 1의 화합물 6 분자와 화학식 2의 화합물 1 분자 간의 반응인 것을 특징으로 하는 제조방법.
The method of claim 1,
The reaction is a production method, characterized in that the reaction between the compound 6 molecules of the compound of Formula 1 and the compound 1 molecule of the formula (2).
[화학식 3]
R은 -(CH2)l-CH3 이고, l은 8 내지 12임.
L1은 링커로서 -(CH2)m- 이고, m은 3 내지 5임.
L2는 링커로서 -(CH2)n- 이고, n은 4 내지 5임.
A gene or gene expression suppressor carrier represented by Formula 3 below:
(3)
R is-(CH 2 ) 1 -CH 3 and l is 8-12.
L 1 is — (CH 2 ) m − as a linker, m is 3 to 5.
L 2 is — (CH 2 ) n − as a linker, n is 4-5.
상기 R은 -(CH2)9-CH3 이고, 상기 L1은 -(CH2)3- 이고, 상기 L2는 -(CH2)4- 인 것을 특징으로 하는 전달체.
6. The method of claim 5,
Wherein R is — (CH 2 ) 9 —CH 3 , L 1 is — (CH 2 ) 3 —, and L 2 is — (CH 2 ) 4 —.
The complex according to claim 5, wherein a gene or a gene expression inhibitory factor is bound to the carrier of claim 5.
상기 유전자 또는 유전자 발현 억제인자는 siRNA, shRNA, microRNA 및 압타머로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 복합체.
8. The method of claim 7,
The gene or gene expression inhibitor is a complex, characterized in that selected from the group consisting of siRNA, shRNA, microRNA and aptamer.
상기 유전자 또는 유전자 발현 억제인자와 전달체는 1:2.5 내지 1:10의 비율로 결합하는 것을 특징으로 하는 복합체.
8. The method of claim 7,
The gene or gene expression inhibitor and the carrier is complex, characterized in that binding in the ratio of 1: 2.5 to 1:10.
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-
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| PNAS Vol. 107(5), pp. 1864-1869 (2010.02.02) * |
| PNAS Vol. 107(5), pp. 1864-1869 (2010.02.02)* |
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| KR20130037505A (en) | 2013-04-16 |
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