KR101323491B1 - 새로운 표준 조성물, 제조 방법 및 ｒｎａ 바이러스 감염의 해결을 위한 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 식물성 원료 즉, 시나모뮴(Cinnamomum), 여지(Litchi) 및 땅콩(Arachis)으로부터 얻어지는 항바이러스성 조제용약물에 관한 것이다. 조성물 및 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 삼량체 및 사량체를 포함하는 상기 조성물을 제조하는 공정이 제공된다. 상기 조성물은 면역 반응을 향상시키고, HIV 감염 및 AIDS의 치료 및 관리 및 인플루엔자 바이러스 및 감염의 예방, 치료 및 관리에 유용하다.

Description

새로운 표준 조성물, 제조 방법 및 ＲＮＡ 바이러스 감염의 해결을 위한 용도 {A NOVEL STANDARDIZED COMPOSITION, METHOD OF MANUFACTURE AND USE IN THE RESOLUTION OF RNA VIRUS INFECTION}

본 발명은 항바이러스성 조제용 물질에 관한 것이다. 본 발명은 식물로부터 얻어지고, 면역반응을 향상시키고 HIV 감염, AIDS 및 인플루엔자 바이러스 및 감염에 대해 효과적이라고 판명되는 항바이러스성 조제용 물질을 제공한다.

카테킨(catechin)은 플라보노이드 계열에 속하는 폴리페놀 식물 대사산물이다. 카테킨의 분자식 및 분자량은 C₁₅H₁₄O₆ 및 290g/mol이다. 카테킨 및 에피카테킨(epicatechin)은 자연에서 발견되는 가장 일반적인 광학 이성질체인 (-)-에피카테킨 및 (+)-카테킨을 갖는 에피머(epimer)이다.

프로시아니딘(procyanidin) 또는 농축된 타닌은 구성요소가 (-)-에피카테킨 및 (+)-카테킨인 플라보노이드 저중합체이다. 프로시아니딘 또는 농축된 타닌은 상기 플라보노이드 생합성 경로의 저중합체 말단 산물이고, 인간에게 유익한 효과에 대하여 현재 인정받고 있다. 프로시아니딘 또는 농축된 타닌은 빛, 산화 및 포식자로부터 지켜주는 과일, 나무 껍질, 잎사귀 및 씨앗의 식물계에 풍부하게 존재한다. 프로시아니딘은 많은 식물, 주로 사과, 소나무 껍질, 계피, 여지 과피, 땅콩, 포도씨, 코코아, 포도 껍질, 월귤나무, 크랜베리, 까막까치밥나무, 녹차 및 홍차에서 발견된다.

연속적인 단량체 단위간의 결합에 기초하여, 프로시아니딘은 타입 A, B 또는 C 폴리페놀로 분류된다.

일반적으로 상기 프로시아니딘의 연속적인 단량체 단위간의 상기 결합은 타입 B 프로시아니딘이 되는 '상부' 단위의 제4 위치 및 '하부' 단위의 제8 위치 사이에 있다. 상기 결합은 타입 C 프로시아니딘이 되는 상기 '상부' 단위의 C₄ 및 상기 하부 단위의 C₆ 사이에서 발생할 수 있다. 타입 B 및 C 폴리페놀은 식물성 원료에서 풍부하게 발견된다. 연속적인 단량체 단위들이 상기 '상부' 단위의 C2 및 C4 및 상기 하위 단위의 C7 위치 및 C⁶/C⁸ 위치(각각)에서의 산소와의 에테르 결합에 의하여 결합될 때, 타입 A 프로시아니딘이 형성된다. 타입 A 프로시아니딘들은 타입 B 및 C 폴리페놀과 비교할 때 드물게 발견된다.

항원에 대한 면역 반응

면역계는 병원균을 인식하고 제거하는 것에 의하여 병으로부터 숙주(host)를 지키는 메커니즘의 집합체이다. 병원균에 대한 상기 면역계의 반응은 이물 단백질(foreign protein)의 인식으로부터 시작하여 최종적으로 이물 단백질의 근원을 파괴하고, 그럼으로써 상기 숙주를 지킨다. 단세포 유기체로부터 단순 단백질의 인식까지도 상기 숙주로부터 상기 유기체를 최종적으로 제거하게 하는 일련의 복잡한 단계 수반한다. 이 전체 과정이 이물 단백질 또는 상기 병원체의 존재에 대한 면역 반응이다.

상기 면역계에 의한 감염의 해결 능력은 상기 항원에 대한 상기 면역 반응이고, 이것은 세 단계로 나눌 수 있다.

활성화 및 가동화( activation and mobilization ): 백혈구(White Blood Cell; WBC)는 이물질 분자 또는 항원을 인식할 때 활성화된다. 대식세포 및 T세포와 같은 면역 세포는 인식된 이물질 분자의 위치에 다른 면역 세포를 공격하고 상기 병원균을 박멸하기 위하여 무수한 면역 세포를 가동화하는 물질을 방출한다.

통제( Regulation ): 상기 유도된 면역 반응은 상기 숙주에 과도한 손상을 주는 것을 막기 위하여 조절되어야 한다. 조절 T림프구는 상기 면역계의 전달자로서 작용하고, 지나친 면역 작용을 제어하는 시토킨을 분비하여 면역 작용의 제어를 용이하게 한다.

해결( Resolution ): 감염 해결은 상기 병원균의 활동을 국한시키고, 상기 신체로부터 그것을 제거하는 과정을 수반한다. 상기 병원균이 제거된 후, 상기 대부분의 백혈구는 파괴되고, 남은 백혈구는 '기억 세포'라고 불리우고, 상기 병원균에 대하여 빠른 면역 반응을 이끌어내는 것으로 같은 병원균에 의한 향후의 감염에 대해서 상기 숙주를 보호한다. 상기 숙주가 병원균을 제거할 만큼 충분히 강한 방어로 극복할 수 없다면, 상기 병원체는 감염을 일으키는 것에 성공한다. 이런 경우, 상기 숙주에 의하여 생산된 상기 항체는 상기 항원의 존재하는 수를 상쇄시키기에는 불충분하다. 따라서 상기 자유 항원은 상기 숙주를 감염시키는 것에 성공한다. 이런 경우에, 항생제 및 항바이러스제와 같은 외부적인 보조제들은 상기 항원의 수를 줄이는 데 사용된다. 상기 항원의 수가 줄어들면, 상기 면역 반응은 병원균을 제거하기 위해 충분하다.

HIV 감염 및 AIDS :

인간 면역 결핍 바이러스(Human Immunodeficiency Virus; HIV)는 상기 면역계를 파괴하는 RNA 종양 바이러스(retrovirus)이다. 이 감염은 결국 상기 면역계가 적절히 작용하지 못하는 심각하고 생명을 위협하는 후천성 면역 결핍 증후군(Acquired ImmunoDeficiency Syndrome; AIDS)를 유발할 수 있다. HIV는 인간 면역계에서 “헬퍼(helper)” T림프구(특히 CD4⁺ T세포), 대식세포 및 수상돌기세포와 같은 특정한 세포를 먼저 감염시킨다. CD4⁺ T세포 수가 위험 수위까지 감소하고, 세포성 면역은 상실되고, 상기 신체는 기회감염에 점진적으로 더 민감해지게 된다.

HIV 생존 사이클: HIV가 숙주의 몸으로 들어가면, HIV는 복제 및 증식을 용이하게 하기 위하여 특정한 숙주 세포를 필요로 한다. HIV인 경우 상기 숙주 세포는 T세포 또는 CD4 세포이다.

1. 숙주의 인식 및 결합: HIV는 CD4 세포를 찾아내서 상기 세포 표면에서 공수용체(coreceptor)를 통하여 “자물쇠와 열쇠”의 방법으로 CD4 세포들을 공격한다. HIV 표면의 단백질은 상기 CD4 세포에 보완단백질을 부착시킨다.

2. 숙주에 접근 및 침입: 접근 후에 상기 HIV는 상기 T세포의 세포액(세포질)로 바이러스성 단백질을 주입한다. 이것은 상기 HIV의 외부 껍질에 세포막의 융합을 초래한다.

3. 바이러스성 세포의 분해: 증식에 HIV의 유전물질(RNA)을 사용하기 위하여, 상기 RNA 주변의 보호 코팅은 용해된다. 이 단계 없이는 DNA(새로운 HIV 복제본의 구성요소)와 RNA의 소통이 불가능하고, 복제는 정지된다.

4. 역(逆) 전사: 상기 세포 내부에서, 상기 HIV의 단사 구조 RNA는 이중사 구조 DNA와 소통해야 한다. 이 단계는 효소 역 전사에 의하여 초래된다. 역 전사는 바이러스의 RNA를 DNA로 전환시키도록 하는 T세포로부터의 구성요소를 사용한다. 상기 DNA는 HIV 복제에 필요한 유전 정보를 포함한다.

5. 새로운 비리온(virion)으로 복제 및 조립: 복제하기 위하여, 상기 새롭게 형성된 바이러스의 DNA는 상기 숙주 세포핵으로 통합되어야 한다. 이 과정은 아직 전체적으로 이해되고 있지 않지만, 바이러스의 수송 단백질에 의하여 보조된다고 여겨진다. 통합적으로 상기 바이러스는 상기 숙주 세포가 단백질을 만들어내는 동안 상기 바이러스는 복제를 완료할 것을 요구한다. 상기 재료가 갖추어지면, 그것들은 필요요건 및 구조에 근거하여 상기 바이러스에 의해 둘로 나뉘어지고, 그리고 나서 새로운 HIV로 조립된다. 이 과정은 상기 단백질 분해 효소에 의해 촉진된다.

6. 숙주 세포로부터 분리: 상기 바이러스의 복제 순환의 최종 단계는 “버딩(budding)”라고 불려진다. 감춰진 유전 물질 및 상기 숙주 CD4세포막으로부터 만들어진 새로운 외피로, 새롭게 형성된 HIV 전체 과정을 다시 시작할 준비가 되어 있는 순환으로 끼어 들어간다.

최근 중재( Current Intervention )

HIV 복제 및 증식을 막는 최근 방법은 바이러스 침입 억제, 세포막 융합 억제 및 역전사 효소 억제, 인테그라제(integrase) 억제, 단백질 분해효소 억제, 성숙 억제 등을 포함한다. FDA는 HIV 감염을 치료하기 위한 승인된 다수의 약을 보유하고 있다. 이 약들 대부분은 작용의 항레트로바이러스(antiretroviral; ARV) 메커니즘에 의해 작용한다.

상기 인간 면역 결핍 바이러스(HIV)의 감염은 전 세계적으로 정치적, 경제적, 공중 위생, 사회적 및 과학적 도전을 보여주고 있다. 2007년 말까지, 세계에서 약 320만 명의 사람들이 HIV/AIDS를 가지고 살아갔다. 따라서 더 안전하고 더 효과적인 약으로 이 질병의 관리 및/또는 치료가 시급하게 필요하다. 이 바이러스에 의해 나타나는 추가적인 도전사항은 돌연변이에 대한 민감도이다. HIV의 상기 바이러스 단백질은 돌연변이가 되기 쉽고, 따라서 약 내성을 갖는 종류는 더 새로운 종류의 약에 대한 필요를 만들어내는 추가적인 치료를 요구할 것이다.

인플루엔자 바이러스:

조류나 포유류에 영향을 미치는 인플루엔자는 오르소믹소바이러스군(family Orthomyxoviridae)(인플루엔자 바이러스)의 RNA 바이러스 의하여 발생되는 감염 질병이다. 이 바이러스에 의한 감염은 주로 코, 목, 기관지 및 때때로 폐에 영향을 미친다.

인플루엔자 바이러스의 구조: 상기 인플루엔자 바이러스는 인플루엔자 바이러스 A, B 및 C의 세 개의 카테고리로 분류된다. 인플루엔자 바이러스의 상기 세 개의 하위 타입들은 전체적으로 매우 유사한 구조를 갖는다. 상기 바이러스들은 중심 핵 주변을 둘러싼 당단백의 두 개의 주요 타입을 포함하는 외피로 이루어진다. 상기 중심 핵은 바이러스의 RNA 게놈 및 이 RNA를 둘러싸고 보호하는 다른 바이러스 단백질을 포함한다. 헤마글루티닌(hemagglutinin, HA) 및 뉴트라미니다제(neutraminidase, NA)는 상기 바이러스 입자들의 바깥쪽에 있는 두 개의 큰 당단백이다.

인플루엔자 바이러스 A: 상기 타입 A 바이러스들은 상기 세 개의 인플루엔자 타입 중에서 가장 치명적인 인간 병원균이다. 상기 인플루엔자 A 바이러스는 이들 바이러스에 반응하는 항체에 기초한 다른 혈청형(serotype)으로 세분될 수 있다. 알려진 인간 유행병 사방의 수에 의해 정렬된, 인간에게서 확인되어 온 상기 혈청형은 H1N1, H2N2, H3N2, H5N1, H7N7, H1N2, H9N2, H7N2, H7N3 및 H10N7이다. 인플루엔자 A 바이러스들은 지난 세기 동안 각종 유행병들의 원인이 되어 왔고, 연례 유행성 전염병을 계속 일으킨다. 인플루엔자의 새로운 종류의 출현은 공중 위생 및 과학계에 대한 도전을 계속 요구하고 있다. 상기 H1N1 바이러스는 상기 인플루엔자 A 바이러스의 혈청형이고, 인류에게 영향을 미치는 것으로 알려진 가장 치명적인 종류 중 하나이다. 상기 H1N1 혈청형은 1918년(스패니쉬 플루, Spanish Flu)에 몇 백만 명을 죽음에 이르게 하였고, 더 최근에는 세계적 유행병인 스윈 플루(Swine Flu)의 원인이 되었다.

인플루엔자 바이러스의 생체 순환: 상기 인플루엔자 바이러스 복제 및 전파 과정은 다음과 같이 나타내진다.

1. 숙주의 인식 및 결합: 시알산에 상기 HA 단백질을 이용하여 상기 숙주 세포에 상기 바이러스가 결합하는 것은 상피 세포의 표면에 당질이 경계를 이룬다. 상피세포들은 일반적으로 포유 동물의 코, 목 및 폐 및 조류의 창자에 존재한다.

2. 숙주로의 공격 및 침입: 결합 후에, 상기 HA 단백질은 쪼개지고, 상기 바이러스는 엔토시토시스(endocytosis)에 의하여 상기 세포에 들어간다.

3. 바이러스 단백질의 해체: 상기 바이러스가 상기 세포에 들어가면, 상기 엔도솜(endosome)의 pH 및 주변 조건은 다음과 같은 상황을 초래한다.

(a) HA의 일부분이 액포막(vacuole membrane)에 바이러스의 외피를 결합하는 것

(b) M2 이온 채널은 그것의 분해 및 상기 바이러스의 RNA 및 상기 숙주 세포질로의 핵 단백질의 이어지는 방출을 초래하는 상기 바이러스의 핵을 산성화한 바이러스 중심에 프로톤의 침입을 허용한다

4. 역전사 ( reverse transcription ): 상기 바이러스의 RNA 및 중심 단백질은 상기 RNA가 전사되고 바이러스 단백질로 더 바뀌는 상기 세포핵으로 운반된다.

5. 숙주 세포로부터 분리된 새 조직: HA 및 NA단백질은 또한 이어서 상기 바이러스의 RNA 및 중심 단백질을 수용하는 세포막 가까이에 형성되고, 상기 바이러스의 “버딩(budding)” 및 다음 감염에 대한 전파를 초래한다.

위에서 상세히 설명한 감염 및 전파 단계로부터 알 수 있는 것과 같이, 상기 HA 및 NA 감염에서 중요한 역할을 수행한다. 비리온의 방출 전에, NA는 또한 시알산에 HA의 결합을 막기 위하여 시알산을 나눈다.

인플루엔자 A 바이러스에 대한 최근 중재( current intervention ): 상기 인플루엔자 A 바이러스에 대하여, 미국 FDA에 의해 승인된 약의 두 종류는 아다만탄(adamantanes)(아만타딘 하이드로클로라이드(amantadine hydrochloride) 및 리만타딘(rimantadine))과 같은 이온 채널 억제제 및 오셀타미비르(타미플루; TAMIFLU) 및 자나미비르(릴렌자; RELENZA)와 같은 뉴라민가수분해효소(neuraminidase)이다.

상기 인플루엔자 A 바이러스는 돌연변이 하기 쉽다. 이 돌연변이들은 주로 NA, HA 및 M2 이온 채널 단백질과 같은 바이러스의 단백질이고, 이 단백질의 억제제는 변종에 대해 효과적이지 않을 수 있다. 상기 돌연변이 가능성 및 2009 인플루엔자 A 세계 감염병은 이 바이러스에 대한 치료 및 예방 옵션을 제공하는 치료법에 대한 긴급한 요구를 나타낸다.

Richard Anderson 외, “ Isolation and characterization of polyphenols Type A polymers from cinnamon with insulin - like biological activity ”, Journal of Agricultural and Food Chemistray , 2004, 페이지 52, 65~70

이 논문은 시판중인 계피의 수용성 추출물에 대해 설명하고 있고, 시험관 세포계에서 대략 20배에 의하여 글루코스 신진대사를 증가시키는 폴리페놀릭 고분자를 발견하였다. 그들은 이 추출물의 제조에 대하여 Cinnamomum cassia(Korintji cassia)를 사용했다. 이 품종은 쿠머린 및 계피알데하이드의 성분이 높다.

이 논문은 이 수용성 추출물의 제조 및 특성에 대한 예비의 HPLC 방법에 대해 더 설명한다.

이 논문은 카테킨의 A-타입 쌍연결 프로시아니딘에 대하여 설명한다. 이 논문은 계피로부터 분리된 카테킨의 삼량체(분자량 864), 사량체(분자량 1152) 및 저중합체를 확인하였다.

Kilkuskie 외, “ HIV and reverse transcriptase inhibition by tannis ”, Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters , 1992, Vol2 , 페이지 1529~1534

이 논문은 항 HIV 작용에 대한 탄닌 및 농축 탄닌 및 역전사효소를 억제하기 위한 가능성을 평가한다. 이 연구는 비록 항 HIV 작용을 갖는 일부 탄닌을 발견했지만, 연관된 독성들은 부담이 된다. 이 논문은 카테킨의 형태로 농축된 세 개의 조성물에 대하여 언급한다. 분자 40, 44 및 45는 카테킨의 이량체, 삼량체 및 사량체이다. 이 논문은 RT 효소의 억제 및 이 탄닌들의 항 HIV 작용 사이에 상관관계가 없다고 결론내렸다. 또한 분자 44 및 45는 각각 90% 및 73%의 항 HIV 작용을 보였지만, 상기 RT 효소의 의미 있는 억제는 보이지 않았다.

Michael Ovadia 외, 특허출원 US2006 275515A1

“천연 계피 추출물로 수득된 항바이러스 조제용 물질(Anti-viral preparations obtained from a natural cinnamon extract)”라는 제목의 이 특허는 항바이러스 특성을 찾는 계피로부터 수득된 천연 수용성 추출물에 대하여 설명한다. 이 특허는 염류를 가하여 석출된 계피의 수용성 추출물에 대하여 설명한다. 이 침전물은 물 또는 완충제로 희석되고 세파로오스(sepharose) 크로마토그래피를 이용하여 정제되고, 그리고 나서 다른 완충제 및 갈락토오스로 녹여서 분리된다.

상기 일반적으로 사용되는 염류를 가하여 석출하는 과정은 고분자량 분자(일반적으로 펩타이드)의 선택을 나타낸다. 이 특허에서 설명된 과정은 고분자량 분자(약 10Kda)를 되찾는데 목적이 있다는 것은 이 과정으로부터 상당히 명백하다.

청구항에 따른 조성물의 활성성분은 10KDA보다 큰 분자량을 가지며, 약 15 내지 20 OD 사이에서 280nm에서의 흡수에 반응한다. 이 조성물은 마지막으로 인 완충제 및 갈락토오스를 사용하여 상기 세파론(sepharon) 칼럼으로부터 녹여서 분리된다. 따라서 상기 최종 조성물은 인 및 갈락토오스의 고함유량을 가질 것이다.

이 특허에서 설명된 이 고분자량 조성물은 인플루엔자 A PR 8 바이러스, 파라 인플루엔자(Sendai) 바이러스, 적혈구로의 전(前) 흡수 및 인플루엔자 또는 상기 센다이 바이러스에 감염된 쥐들에게서의 무게 부가 및 HIV 융합세포 연구에서 측정되어 왔다.

이 특허의 실시예 13은 융합세포 형성에서 효과를 체크하기 위하여 MT2 세포에 이 추출물로 실시된 실험에 대해 설명한다. 60 내지 100 마이크로그램의 농도에서 이 특허의 도 15에서와 같이, 융합세포 형성이 억제된다. 융합세포 형성은 항바이러스 작용에 대하여 확증적인 실험이 아니다. 이것은 다음 문서에서 증거들 들어 설명된다(Gueseppe pantaleo 외, Eur J immunology 1991, 21, 1771~1774, 'dissociation between syncytia formation and HIV spreading'. 융합세포 형성을 억제하는 것은 HIV 감염의 억제를 필연적으로 반영하는 것은 아니다).

비록 기재된 추출물이 융합세포 형성을 억제하는 작용을 나타낸다 하더라도, HIV의 일부 종만이 융합세포 형성을 일으킨다고 언급되어야 한다. 추가적으로 융합세포 형성은 HIV 감염 또는 AIDS의 존재 또는 전파와 연결될 수 없다. 융합세포 형성은 일부 종류들에 의해 발현되는 단지 표현형일 뿐이다. 융합세포 형성의 부족은 HIV의 존재 또는 상기 감염의 관리와 연결될 수 없다.

본 발명의 첫 번째 목적은 식물성 원료로부터 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 두 번째 목적은 시나모뮴(Cinnamomum), 여지(Litchi) 및 땅콩(Arachis)과 같은 식물성 원료로부터 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성물을 제조하기 위한 공정을 제공하는 것이다.

본 발명의 세 번째 목적은 실험대상에서의 면역반응을 향상시키고, 또한 HIV 감염, AIDS 및 인플루엔자 바이러스 및 감염에 대하여 효과적인 조성물을 제공하는 것이다.

따라서, 본 발명은 약 55%w/w 내지 약 99%w/w의 농도범위의 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 선택적으로 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 각각 약 0.5%w/w 내지 약 35%w/w의 농도범위의 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성물; 약 55%w/w 내지 약 99%w/w의 농도범위의 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 각각 약 0.5%w/w 내지 약 35%w/w의 농도범위의 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성물의 제조하기 위한 공정, 독성 물질을 제거하기 위하여 유기 용매를 이용하여 분쇄된 식물성 매스(mass)를 추출하는 단계를 포함하는 상기 공정; 상기 유기 용매를 제거하기 위하여 상기 매스를 건조하는 단계; 추출물을 얻기 위하여 수용성 용매를 이용하여 건조된 매스를 재추출하는 단계; 및 상기 조성물을 얻기 위하여 농축, 정제, 표정(標定) 및 건조에 이어지는 크로마토그래피 칼럼을 통하여 상기 추출물을 정제하는 단계; 실험 대상에서 면역 반응을 향상시키기 위한 방법, 약 55%w/w 내지 약 99%w/w의 농도범위의 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 선택적으로 상기 실험 대상에게 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 각각 약 0.5%w/w 내지 약 35%w/w의 농도범위의 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성물의 약제적으로 효과적인 양을 투여하는 단계를 포함하는 상기 방법; 및 실험 대상에게 RNA 종양 바이러스 감염을 치료, 예방 및 관리하는 방법, 약 55%w/w 내지 약 99%w/w의 농도범위의 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 선택적으로 상기 실험 대상에게 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 각각 약 0.5%w/w 내지 약 35%w/w의 농도범위의 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성믈의 약제적으로 효과적인 양을 투여하는 단계를 포함하는 상기 방법에 관한 것이다.

본 발명은 식물성 원료 즉, 시나모뮴, 여지 및 땅콩으로부터 얻어지는 항바이러스성 조제용 약물에 관한 것이다. 조성물 및 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 삼량체 및 사량체를 포함하는 상기 조성물을 제조하는 공정이 제공된다. 상기 조성물은 면역 반응을 향상시키고, HIV 감염 및 AIDS의 치료 및 관리 및 인플루엔자 바이러스 및 감염의 예방, 치료 및 관리에 유용하다.

도 1은 플라보노이드 오량체의 분자구조식이다.
도 2는 플라보노이드 오량체의 EI-MS 그래프이다.
도 3은 플라보노이드 오량체의 13C NMR 그래프이다.
도 4는 플라보노이드 오량체를 확인하기 위한 조성물의 플래쉬 크로마토그래피의 그래프이다.
도 5는 플라보노이드 오량체의 HPLC 그래프이다.

본 발명은 약 55%w/w 내지 약 99%w/w의 농도범위의 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 선택적으로 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 각각 약 0.5%w/w 내지 약 35%w/w의 농도범위의 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 일실시예에서, 조성물은 시나모뮴, 여지 및 땅콩을 포함하는 군으로부터 선택되는 식물성 원료로부터 얻어진다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 오량체 프로시아니딘 플라보노이드의 바람직한 농도는 약 55%w/w 내지 약 99%w/w, 각각 약 0.5%w/w 내지 약 35%w/w의 농도범위이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 오량체 프로시아니딘 플라보노이드는 약 1440의 분자량을 갖는다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 오량체는 타입 A 프로시아니딘 오량체이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 첨가제는 점성 물질(gum), 입화제(granulating agent), 결합제(binding agent), 윤활제, 붕해제(disintegrating agent), 감미료, 색소, 향료, 코팅제, 가소제, 보존료, 분산제, 유화제, 정전기 방지제 및 구형화제(spheronization agent)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 조성물은 정제(錠劑), 트로키(troche), 치료용 캔디(lozenge), 수용성 또는 지용성 현탁액, 분산성 분말 또는 입제, 경화 또는 유화 겔 캡슐 속의 유화제, 시럽 및 엘릭서(elixir)로 이루어진 군으로부터 선택된 다양한 복용 형태로 만들어진다.

본 발명은 약 55%w/w 내지 약 99%w/w의 농도범위의 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 각각 약 0.5%w/w 내지 약 35%w/w의 농도범위의 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성물의 제조하기 위한 공정, 독성 물질을 제거하기 위하여 유기 용매를 이용하여 분쇄된 식물성 매스(mass)를 추출하는 단계를 포함하는 상기 공정; 상기 유기 용매를 제거하기 위하여 상기 매스를 건조하는 단계; 추출물을 얻기 위하여 수용성 용매를 이용하여 건조된 매스를 재추출하는 단계; 및 상기 조성물을 얻기 위하여 농축, 정제, 표정(標定) 및 건조에 이어지는 크로마토그래피 칼럼을 통하여 상기 추출물을 정제하는 단계에 관한 것이다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 분쇄된 식물성 매스는 시나모뮴, 여지 및 땅콩을 포함하는 식물군으로부터 선택된다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 유기 용매는 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 아밀아세테이트, 2-에틸헥실아세테이트 및 이것들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 추출은 8시간 내지 12시간, 바람직하게는 10시간 동안 수행된다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 독성 물질은 쿠머린(coumarin) 및 알데하이드를 포함한다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 추출물은 두 단계의 크로마토그래피 칼럼을 통하여 여과된다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 크로마토그래피 칼럼은 XAD-1180, XAD-7HP 및 XAD-1140 수지로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 수용성 용매로 하는 상기 재추출은 pH 3.8 내지 5.8, 바람직하게는 4.0의 범위에서 수행된다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 재추출은 8시간 내지 12시간, 바람직하게는 10시간 동안 30℃ 내지 90℃의 온도, 바람직하게는 31℃ 내지 40℃의 온도 범위에서 수행된다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 수용성 용매는 산성화된 탈이온화수(deionised water)이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 조성물은 점성 물질(gum), 입화제(granulating agent), 결합제(binding agent), 윤활제, 붕해제(disintegrating agent), 감미료, 색소, 향료, 코팅제, 가소제, 보존료, 분산제, 유화제, 정전기 방지제 및 구형화제(spheronization agent)로 이루어진 군으로부터 선택되는 첨가제를 더 포함한다.

본 발명은 실험 대상에서 면역 반응을 향상시키기 위한 방법, 약 55%w/w 내지 약 99%w/w의 농도범위의 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 선택적으로 상기 실험 대상에게 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 각각 약 0.5%w/w 내지 약 35%w/w의 농도범위의 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성물의 약제적으로 효과적인 양을 투여하는 단계를 포함하는 상기 방법에 관한 것이다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 면역 반응은 인플루엔자, HIV 감염 및 AIDS로 제한하지 않는 군으로부터 선택된 질병에서 개선된다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 면역 반응은 개선이 필요한 대상에서 개선된다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 조성물의 약제적으로 효과적인 양은 대상의 체중에 대하여 1mg/kg 내지 100mg/kg의 범위이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 방법은 상기 대상의 병원균으로 인한 감염의 치료, 예방 및 관리에 사용된다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 병원균은 인플루엔자 A 바이러스 및 HIV 바이러스를 포함한다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 바이러스 타입은 인플루엔자 바이러스 H1N1 및 H3N2이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 바이러스 타입은 HIV X4 및 R5 영양성 바이러스(tropic viruses)이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 대상은 동물 또는 인간이다.

본 발명은 실험 대상에게 바이러스 감염을 치료, 예방 및 관리하는 방법, 약 55%w/w 내지 약 99%w/w의 농도범위의 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 선택적으로 상기 실험 대상에게 항바이러스 조제용 약물로써 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 각각 약 0.5%w/w 내지 약 35%w/w의 농도범위의 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성믈의 약제적으로 효과적인 양을 투여하는 단계를 포함하는 상기 방법에 관한 것이다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 조성물은 인플루엔자 A 바이러스, HIV의 X4 영양성 및 R5 영양성 바이러스를 억제한다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 조성물의 약제적으로 유효한양은 대상의 체중에 대하여 1mg/kg 내지 100mg/kg의 범위이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 대상은 동물 또는 인간이다.

본 발명은 실험 대상에게 RNA 종양 바이러스 감염을 치료, 예방 및 관리하는 방법, 약 55%w/w 내지 약 99%w/w의 농도범위의 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 선택적으로 상기 실험 대상에게 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 각각 약 0.5%w/w 내지 약 35%w/w의 농도범위의 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성물의 약제적으로 효과적인 양을 투여하는 단계를 포함하는 상기 방법에 관한 것이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 RNA 종양 바이러스 감염은 인플루엔자 A 감염 및 HIV 감염 및 AIDS이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 조성물의 약제적으로 유효한 양은 대상의 체중에 대하여 1mg/kg 내지 100mg/kg의 범위이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 대상은 동물 또는 인간이다.

본 발명은 도 1과 같이 플라보노이드의 타입 A 프로시아니딘 오량체의 50% 내지 99%로 표준화된 식물성 원료로부터 유도된 새로운 표준화 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 플라보노이드의 타입 A 프로시아니딘 오량체의 50% 내지 99%로 표준화된 식물성 원료로부터 유도된 새로운 표준화한 조성물을 수득하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 HIV 및 인플루엔자 감염을 예방, 치료 및 관리를 위한 플라보노이드의 타입 A 프로시아니딘 오량체의 50% 내지 99%로 표준화된 식물성 원료로부터 유도된 새로운 표준화한 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 실험 대상에게 항체에 대하여 향상된 면역반응을 유도하기 위한 플라보노이드의 타입 A 프로시아니딘 오량체의 50% 내지 99%로 표준화된 식물성 원료로부터 유도된 새로운 표준화한 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 면역 반응은 자연적인 치료, 관리 또는 예방법일 수 있다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 조성물을 얻기 위해 사용된 상기 식물성 원료는 시나모뮴, 여지 및 땅콩이다.

본 발명의 일실시예에서, 식물성 원료로부터 유도된 상기 새로운 표준화 조성물은 플라보노이드의 타입 A 프로시아니딘 오량체이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 오량체는 도 1과 같이 1440의 분자량을 갖는다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 조성물은 50% 내지 99% 범위의 오량체를 포함한다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 조성물은 1% 내지 35% 범위의 삼량체 및 사량체를 포함한다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 조성물은 도 5의 크로마토그램에 의해서 특성이 측정된다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 새로운 조성물의 상기 단량체 단위는 카테킨, 바람직하게는 카테킨 또는 에피카테킨의 군으로부터 선택된다.

본 발명은 또한 여기서 설명된 공정에 의한 상기 새로운 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.

본 발명의 일실시예에서, 상기 표준화 조성물은 선택적으로 약제적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 포함한다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 첨가제는 첨가물, 점성 물질, 감미료, 코팅제, 결합제, 붕해제, 윤활제, 붕해제, 분산제, 용매, 색소, 활택제(glidant), 피착 방지제, 정전기 방지제, 표면 활성제, 가소제, 유화제, 향료, 점도 개선제 및 항산화제이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 조성물은 액상, 분말, 캡슐, 정제, 주사 가능 물질, 패치, 연고, 젤, 유화액, 크림, 로션, 치약, 스프레이 및 드랍이다. 본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 조성물은 분말 또는 액상 중 하나이다.

본 발명은 또한 플라보노이드의 타입 A 프로시아니딘 오량체의 50% 내지 99%로 표준화된 식물성 원료로부터 유도된 새로운 표준화 조성물을 수득하는 공정에 관한 것이고, 상기 공정은 다음과 같은 단계를 포함한다.

1. 예정된 크기로 상기 식물성 원재료를 분쇄하는 단계

2. 원하지 않는 독성 물질을 제거하기 위하여 유기 용매로 추출하는 단계

3. 탈이온화수로 상기 식물성 분말의 수용성 추출하는 단계

4. 2단계 크로마토그래피 정제 셋업을 이용하여 추출 정제하는 단계

5. 도 1과 같이 순도 50% 내지 99%의 플라보노이드의 오량체를 포함하는 상기 조성물을 수득하기 위하여 건조, 블렌드 및 체로 거르는 단계

본 발명은 또한 HIV의 치료 및 관리 및 인플루엔자 바이러스 감염의 예방, 치료 및 관리를 위한 약제를 제조하기 위하여 선택적으로 첨가제와 함께 상기 본 발명의 새로운 조성물의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 예방, 치료 및 관리가 필요한 실험 대상의 HIV 감염을 치료 및 관리하는 것 및 인플루엔자 감염을 예방, 치료 및 관리하기 위한 약제를 제조하기 위하여 선택적으로 첨가제와 함께 상기 본 발명의 새로운 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 향상된 면역 반응이 필요한 실험 대상에게 면역 반응을 향상시키는 약제를 제조하기 위하여 선택적으로 첨가제와 함께 상기 본 발명의 새로운 조성물의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 향상된 면역 반응이 필요한 실험 대상에게 향상된 면역 반응을 유도하기 위한 상기 본 발명의 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 다른 일실시예에서, 상기 실험대상은 동물 또는 인간이다.

본 발명은 또한 다음과 같은 단계를 포함하는 50% 내지 99%로 표준화된 플라보노이드의 타입 A 프로시아니딘 오량체의 식물성 원료로부터 유도된 새로운 표준화 조성물을 제조하기 위한 공정에 관한 것이다.

1. 붉은색 종피(seed coat)로 식물성 계피 또는 여지 과피 또는 땅콩껍질의 분쇄하는 단계

2. 단일 용매 또는 용매들의 혼합물로써 주로 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 아밀아세테이트 또는 2-에틸헥실아세테이트로 구성된 유기 용매(바람직하게 에스테르)를 사용하여, 지방 및 독소 및 다른 방향족 화합물을 제거하기 위하여 상기 재료를 추출하는 단계. 이 단계는 계피에 대하여 선택적이다.

3. 상기 용매를 제거하기 위하여 상기 추출된 식물성 재료를 건조하는 단계

4. pH 4 또는 pH 3.8 내지 pH 5.8 사이, 바람직하게는 pH4.0에서 탈 이온화수로 추출하는 단계. 극성 또는 비극성 분자에 대하여, 2단계 크로마토그래피 분리를 이용하여 정제 추출하는 단계

5. 상기 흡수된 물질은 알코올성 용매를 이용하여 녹여서 분리하는 단계

6. 상기 녹여서 분리된 용매는 미세한 분말로 농축되는 단계

7. 상기 농축된 매스는 물로 희석되고, 잔여 용매를 제거하기 위하여 선택적으로 분무 건조되는 단계

상기 과정에 의하여 수득된 상기 새로운 조성물은 50%~99% 오량체, 1%~35% 삼량체 및 1%~35% 사량체를 포함하고, 도 5에 나타낸 것과 같이 측정된다.

본 발명은 다음 실시예를 들어 더 설명될 것이다. 그러나 이 실시예들은 본 발명의 범위에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1

16 메쉬 범위의 평균 크기로 분쇄된 계피 분말 1000g은 에틸아세테이트 3000ml에 담궈져, 바닥이 뚫린 체인 200 메쉬를 갖는 추출기에 부어진다. 상기 바닥의 용리액(eluent)은 약 8시간 동안 효과적인 추출을 달성하기 위하여 채워진 매스를 넘어 되풀이해서 재순환된다. 상기 용리액은 폐기되고, 상기 매스는 상기 추출기 밖으로 꺼내져 30℃에서 강제 송풍식 오븐에서 건조된다. 건조에 의하여 용매가 제거된 후에, 상기 매스는 상기 추출기에 다시 채워진다. 상기 채워진 매스는 pH 4.0에서 산성화된 탈이온화수 5000ml로 추출되고, 상기 추출물은 효과적인 추출을 달성하기 위하여 35℃에서 약 8시간 동안 베드(bed)에서 재순환된다.

상기 추출물은 분자량 1440인 플라보노이드의 타입 A 프로시아니딘 오량체의 80%를 갖는 상기 조성물을 수득하기 위하여 2단계 크로마토그래피 칼럼으로 여과한다. 상기 추출물은 상기 조성물의 상대적으로 낮은 극성 분자를 추출하기 위해서 첫 번째 칼럼에 통과되고, 크로마토그래피 분리의 두 번째 단계는 상기 조성물의 상대적으로 더 극성인 분자에 대한 것이다. 사용된 상기 수지는 각각 XAD-1180 및 XAD-7HP 수지에 대응하는 것이었다. 상기 칼럼은 기판에 부착된 것이 없도록 D.M.수로 철저하게 세척되었고, 상기 용리액은 중성이다. 상기 칼럼은 175ml 순수 이소프로필 알코올로 더 녹여서 분리되고, 상기 모아진 용리액은 40℃, 진공에서 농축되고, 물로 희석되고, 다음과 같은 조건 하에서 분무 건조된다.

분무 건조기: 유동하는 기류

주입 온도: 140℃

출구 온도: 60℃

분무기 RPM: 14000

상기 최종무게는 5g이다.

실시예 2

16 메쉬 범위의 평균 크기로 분쇄된 계피 분말 1000g은 에틸아세테이트 3000ml에 담궈져, 바닥이 뚫린 체인 200 메쉬를 갖는 추출기에 부어진다. 상기 바닥의 용리액(eluent)은 약 10시간 동안 효과적인 추출을 달성하기 위하여 채워진 매스를 넘어 되풀이해서 재순환된다. 상기 용리액은 폐기되고, 상기 매스는 상기 추출기 밖으로 꺼내져 30℃에서 강제 송풍식 오븐에서 건조된다. 건조에 의하여 용매가 제거된 후에, 상기 매스는 상기 추출기에 다시 채워진다. 상기 채워진 매스는 pH 4.0에서 산성화된 탈이온화수 5000ml로 추출되고, 상기 추출물은 효과적인 추출을 달성하기 위하여 35℃에서 약 8시간 동안 베드(bed)에서 재순환된다.

상기 추출물은 분자량 1440인 플라보노이드의 타입 A 프로시아니딘 오량체의 75%를 갖는 상기 조성물을 수득하기 위하여 2단계 크로마토그래피 칼럼으로 여과한다. 첫 번째 상기 용리액은 상기 조성물의 상대적으로 낮은 극성 분자를 추출하기 위하여 첫 번째 칼럼에 통과되고, 크로마토그래피 분리의 두 번째 단계는 상기 조성물의 상대적으로 더 극성인 분자에 대한 것이다. 사용된 상기 수지는 각각 XAD-1180 및 XAD-7HP 수지에 대응하는 것이었다. 상기 칼럼은 기판에 부착된 것이 없도록 D.M.수로 철저하게 세척되었고, 상기 용리액은 중성이다. 상기 칼럼은 250ml 순수 메틸 알코올로 더 녹여서 분리되고, 상기 모아진 용리액은 40℃, 진공에서 농축되고, 물로 희석되고, 다음과 같은 조건 하에서 분무 건조된다.

분무 건조기: 유동하는 기류

주입 온도: 145℃

출구 온도: 60℃

분무기 RPM: 14000

상기 최종무게는 4.5g이다.

실시예 3

16 메쉬 범위의 평균 크기로 분쇄된 계피 분말 1000g은 부틸아세테이트 2500ml에 담궈져, 바닥이 뚫린 체인 200 메쉬를 갖는 추출기에 부어진다. 상기 바닥의 용리액(eluent)은 약 10시간 동안 효과적인 추출을 달성하기 위하여 채워진 매스를 넘어 되풀이해서 재순환된다. 상기 용리액은 폐기되고, 상기 매스는 상기 추출기 밖으로 꺼내져 30℃에서 강제 송풍식 오븐에서 건조된다. 증발에 의하여 용매가 제거된 후에, 상기 매스는 상기 추출기에 다시 채워진다. 상기 채워진 매스는 산성화된 탈이온화수로 추출되고, 상기 추출물은 효과적인 추출을 달성하기 위하여 30℃에서 약 12시간 동안 베드(bed)에서 재순환된다.

상기 추출물은 분자량 1440인 플라보노이드의 타입 A 프로시아니딘 오량체의 89%를 갖는 상기 조성물을 수득하기 위하여 2단계 크로마토그래피 칼럼으로 여과한다. 첫 번째 상기 용리액은 상기 조성물의 상대적으로 낮은 극성 분자를 추출하기 위하여 첫 번째 칼럼에 통과되고, 크로마토그래피 분리의 두 번째 단계는 상기 조성물의 상대적으로 더 극성인 분자에 대한 것이다. 사용된 상기 수지는 각각 XAD-1180 및 XAD-7HP 수지에 대응하는 것이었다. 상기 칼럼은 기판에 부착된 것이 없도록 D.M.수로 철저하게 세척되었고, 상기 용리액은 중성이다. 상기 칼럼은 200ml 순수 에틸 알코올로 더 녹여서 분리되고, 상기 모아진 용리액은 40℃, 공에서 농축되고, 물로 희석되고, 다음과 같은 조건 하에서 분무 건조된다.

분무 건조기: 유동하는 기류

주입 온도: 145℃

출구 온도: 60℃

분무기 RPM: 14000

상기 최종무게는 4.8g이다.

실시예 4

16 메쉬 범위의 평균 크기로 분쇄된 계피 분말 1000g은 부틸아세테이트 2500ml에 담궈져, 바닥이 뚫린 체인 200 메쉬를 갖는 추출기에 부어진다. 상기 바닥의 용리액(eluent)은 약 10시간 동안 효과적인 추출을 달성하기 위하여 채워진 매스를 넘어 되풀이해서 재순환된다. 상기 용리액은 폐기되고, 상기 매스는 상기 추출기 밖으로 꺼내져 30℃에서 강제 송풍식 오븐에서 건조된다. 증발에 의하여 용매가 제거된 후에, 상기 매스는 상기 추출기에 다시 채워진다. 상기 채워진 매스는 산성화된 탈이온화수 5리터로 추출되고, 상기 추출물은 효과적인 추출을 달성하기 위하여 30℃에서 약 12시간 동안 베드(bed)에서 재순환된다.

상기 추출물은 분자량 1440인 플라보노이드의 타입 A 프로시아니딘 오량체의 99%를 갖는 상기 조성물을 수득하기 위하여 2단계 크로마토그래피 칼럼으로 여과한다. 첫 번째 상기 용리액은 상기 조성물의 상대적으로 낮은 극성 분자를 추출하기 위하여 첫 번째 칼럼에 통과되고, 크로마토그래피 분리의 두 번째 단계는 상기 조성물의 상대적으로 더 극성인 분자에 대한 것이다. 사용된 상기 수지는 각각 XAD-1180 및 XAD-7HP 수지에 대응하는 것이었다. 상기 칼럼은 기판에 부착된 것이 없도록 D.M.수로 철저하게 세척되었고, 상기 용리액은 중성이다. 상기 칼럼은 순수 에틸 알코올로 더 녹여서 분리되고, 상기 모아진 용리액은 40℃, 진공에서 농축되고, 물로 희석되고, 다음과 같은 조건 하에서 분무 건조된다.

분무 건조기: 유동하는 기류

주입 온도: 145℃

출구 온도: 60℃

분무기 RPM: 14000

상기 최종무게는 5g이다.

실시예 5

16 메쉬 범위의 평균 크기로 분쇄된 계피 분말 1000g은 에틸아세테이트 3000ml에 담궈져, 바닥이 뚫린 체인 200 메쉬를 갖는 추출기에 부어진다. 상기 바닥의 용리액(eluent)은 약 8시간 동안 효과적인 추출을 달성하기 위하여 채워진 매스를 넘어 되풀이해서 재순환된다. 상기 용리액은 폐기되고, 상기 매스는 상기 추출기 밖으로 꺼내져 30℃에서 강제 송풍식 오븐에서 건조된다. 증발에 의하여 용매가 제거된 후에, 상기 매스는 상기 추출기에 다시 채워진다. 상기 채워진 매스는 pH4.0에서 산성화된 탈이온화수 5000ml로 추출되고, 상기 추출물은 효과적인 추출을 달성하기 위하여 35℃에서 약 8시간 동안 베드(bed)에서 재순환된다.

상기 추출물은 분자량 1440인 플라보노이드의 타입 A 프로시아니딘 오량체의 55%를 갖는 상기 조성물을 수득하기 위하여 2단계 크로마토그래피 칼럼으로 여과한다. 첫 번째 상기 용리액은 상기 조성물의 상대적으로 낮은 극성 분자를 추출하기 위하여 첫 번째 칼럼에 통과되고, 크로마토그래피 분리의 두 번째 단계는 상기 조성물의 상대적으로 더 극성인 분자에 대한 것이다. 사용된 상기 수지는 각각 XAD-1180 및 XAD-7HP 수지에 대응하는 것이었다. 상기 칼럼은 기판에 부착된 것이 없도록 D.M.수로 철저하게 세척되었고, 상기 용리액은 중성이다. 상기 칼럼은 175ml 순수 이소프로필 알코올로 더 녹여서 분리되고, 상기 모아진 용리액은 40℃, 진공에서 농축되고, 물로 희석되고, 다음과 같은 조건 하에서 분무 건조된다.

분무 건조기: 유동하는 기류

주입 온도: 140℃

출구 온도: 60℃

분무기 RPM: 14000

상기 최종무게는 2.5g이다.

실시예 6: 여지의 건조과피로부터의 추출

분쇄된 건조 여지 과피 1000g은 12시간 동안 산성화수 5000ml에 담궈지고 깨끗하게 여과된다. 상기 깨끗한 여과액은 극성 및 상대적으로 비극성 화합물을 걸러내기 위하여 XAD-1180 및 XAD-7HP에 대응하는 흡수 수지를 포함하는 칼럼에 통과시킨다. 상기 비극성인 첫 번째 칼럼은 에틸 알코올 및 자유롭게 흐르는 분말 수율 500mg을 얻기 위하여 농축된 용리액으로 녹여서 분리된다. 상기 모든 극성 물질을 포함하는 상기 두 번째 칼럼은 따로따로 에틸 알코올로 녹여서 분리되고, 분말 1g을 얻기 위하여 농축된다. HLPC 분석에서, 이 비율은 분자량 1440인 플라보노이드 타입 A 프로시아니딘 85%를 나타내었다.

실시예 7: 분쇄된 견과의 붉은 껍질과 함께 분쇄된 견과 껍질로부터의 추출

씨앗의 붉은 껍질과 함께 분쇄된 건조 견과 껍질 1000g은 48시간 동안 pH 3.8에서 산성화수 5000ml에 담궈지고, 깨끗한 액체로 여과된다. 상기 깨끗한 여과액은 극성 및 상대적으로 비극성 화합물을 걸러내기 위하여 XAD-1180 및 XAD-7HP에 대응하는 흡수 수지를 포함하는 칼럼에 통과시킨다. 상기 비극성인 첫 번째 칼럼은 에틸 알코올 및 자유롭게 흐르는 분말 수율 20g을 얻기 위하여 농축된 용리액으로 녹여서 분리된다. 상기 모든 극성 물질을 포함하는 상기 두 번째 칼럼은 따로따로 에틸 알코올로 녹여서 분리되고, 분말 500mg으로 농축된다. HLPC 분석에서, 이 비율은 도 5에 나타낸 것과 같이 분자량 1440인 플라보노이드 타입 A 프로시아니딘 82%를 나타내었다.

실시예 8: 플라보노이드 오량체를 얻기 위한 정제

실시예 1~6에서 자세히 설명관 과정에 의하여 분리된 상기 분말은 물 200ml에 용해되고, 깨끗하게 여과된다. 상기 깨끗한 여과액은 60℃에서 상기 용액을 탈색하기 위하여 활성탄으로 처리되고, 모든 불용성 입자를 제거하기 위하여 여과지에서 깨끗하게 여과된다. 수득된 여과 용액은 모든 용매를 제거하기 위하여 에틸 아세테이트로 두 번 추출되고, 분말을 얻기 위하여 농축된다. 상기 분말은 다음과 같은 파라미터를 이용하여 플래쉬 크로마토그래피에서 기울어진 매너(manner)에서 0.1% 포름산 수용액 및 0.1% 포름산 메탄올 수용액을 이용하여 역상 C-18 실리카겔에 칼럼 크로마토그래피된다.

장비: Combiflash Companion with variable UV detector

칼럼: Redisep 12g (역상 실리카(Reverse Phase Silica))

탐지 파장: 254nm 및 280nm

유동률: 18ml/min

피크 튜브 부피: 18ml

피크 폭: 1min

한계점: 0.20AU

용매 A: 0.1% 포름산 수용액

용매 B: 0.1% 포름산 아세톤니트릴 용액

부분 숫자 1 내지 19는 제거되었다. 부분 숫자 20 내지 22는 모아졌고, 담갈색 분발 256g을 얻기 위하여 농축되었다. TLC 심사 용매 시스템 0.1M 아세트산 나트륨 : 아세토니트릴=7:3의 비율로 상기 얻어진 분말은 프로안토시니딘(proanthocynidin)의 특성이라고 여겨지는 주황색으로 나타난 아니스알데하이드/설폰산 시약이 분부된 0.75Rt에서 UV 흡수점을 나타낸다.

EI-MS(M-H)(도 2에 나타낸 것과 같이) 이온 피크는 다섯 유닛의 총합에 상응하는 카테킨 구조(288배)의 다기능에 상응하는 m/z 1439.9에 있다. 상기 분리된 조성불의 분자량은 1440.9이다. 상기 카테킨 유닛의 배열은 플라반-3-올(flavan-3-ol)유닛에서 2,3-시스 입체화학(cis stereochemistry)의 단일체(고분자량 저중합체 때문에 피크의 폭이 넓어짐)의 네 개 신호 중 δ4.84 내지 4.91 사이의 두 개 신호의 커플링 패턴에 의하여 확인된 에피카테킨과 함께 일직선을 이루었다. 말단 유닛 터미널 고리인 CH2- 메틸렌 프로톤들의 2개의 위치에서 F-고리의 신호는 고분자량 저중합체 특성 때문에 관찰된 δ2.5 내지 2.9 사이의 피크 폭 넓어짐이 관찰된다. 방향족 구역 신호는 고리 B 및 E에 대하여 두 개의 시스템으로서 δ6.6 내지 7 사이에 있다. 상기 13C 탄소 신호는 C2 탄소로 확인한 δ100.9에서 발견되고, 꼭대기 고리 C의 C4 탄소의 δ27.9는 도 3에 나타낸 것과 같이 중간계 고리의 이중 결합을 확인해 준다.

약 55%w/w 내지 약 99%w/w의 농도범위의 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 선택적으로 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 각각 약 0.5%w/w 내지 약 35%w/w의 농도범위의 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성물은 앞에서 열거한 실시예 1 내지 8에 의해 얻어진다. 또한 상기 조성물은 체외 실험에 대하여 사용되었고, 체내 작용은 다음의 실시예 9 내지 14에 자세히 열거하였다.

실시예 9: 시클로포스파미드(절충된 면역)으로 처리된 실험 대상에서의 체액 항체 역가에서의 실험 조성물의 효과

암컷 또는 수컷 중 어느 하나의 스위스 알비노 쥐들은 그것들이 받는 치료에 근거하여 그룹당 6마리로 5개의 그룹으로 나뉘어졌다.

0번째 날, 다섯 모든 그룹은 생리식염수에 1x10⁸ 세로를 포함하는 양 적혈구(Sheep Red Blood Cell; SRBC)로 민감하게 만들어진다. 2~5그룹은 8일 동안(0번째 날부터 7번째 날까지) 표준 약물 및 실험 조성의 혼합물로 처리되었다. 7번째 날에, 혈액 시료는 1차 항체 역가의 결정을 위하여 후안구동 천자(retro orbital punctur)에 의하여 다섯 그룹에서 각각의 쥐로부터 수집되었다. 그 후 7번째 날에, 혈액을 채취한 후, 상기 쥐들은 발바닥으로 SRBC 0.1ml로 면역성 테스트 되었다. 14번째 날에, 혈액 시료들은 2차 항체 역가의 결정을 위하여 후안구동 천자에 의하여 다섯 그룹에서 각각의 쥐로부터 수집되었다.

이 실험의 결과는 다음과 같다.

그룹	처 리	7번째 날에서의 1차 HA 역가	14번째 날에서의 2차 HA 역가
1	대조그룹	5.33	13.33
2	시클로포스파미드 25 mg/kg p.o	0.33	6.67
3	시클로포스파미드 (25mg/kg) + 실험 조성물 (10 mg/kg) p.o	0.33	13.33
4	시클로포스파미드 (25mg/kg) + 실험 조성물 (25 mg/kg) p.o	12	34.66
5	시클로포스파미드 (25mg/kg) + 실험 조성물 (50 mg/kg) p.o	13.33	40

체액 면역은 감염에 대하여 숙주를 방어 및 보호하는 첫 번째 선으로서 기여한다. 증가된 체액 면역은 전염성 병원균에 대하여 더 크게 보호하게 해 준다. 항체에 개체의 반응은 다양하고, 상기 개체의 유전적 체격 및 내력을 포함하는 다양한 요소에 따라 다르다. 시클로포스파미드는 상기 면역계를 억제하는 약물이다. 이 약물의 사용에 의하여 본 연구에서 평가된 모든 동물들은 항체에 대한 그것들의 반응이 판단될 수 있다.

위의 표에서 나타낸 것과 같이, 상기 실험 조성물은 실험대상의 절충된 면역 1차 및 2차 항체 역가에서의 증가로 반영되었다. 상기 1차 내지 2차 항체 역가(체액 면역)에서 몇 배 중가했다. 이 면역 반응은 상기 항체, SRBC의 존재에 대한 반응에 고정되고, 시클로포스파미드의 전처리 때문에 면역 반응에서의 변동을 고려한다.

실시예 10: 혈액 다핵 세포의 복막 대식세포, 식균성 세포의 활동에서의 실험 조성물의 효과

항체에 대한 면역반응을 고정한 것은, 효과적인 반면에, 이 공격의 유효성을 결정하기 위하여 더 많은 평가가 요구된다. 이 유효성은 병원체를 제거하기 위하여 면역 반응의 능력에 의해 평가된다. 이것은 상기 반응의 식균성 세포의 능력을 평가하는 것에 의해 결정된다.

암컷 또는 수컷 중 어느 하나의 스위스 알비노 쥐들은 그것들이 받는 치료에 근거하여 그룹당 6마리로 3개의 그룹으로 나뉘어졌다. 대조군 및 실험 조성물의 단일 투여는 세 그룹 각각에 주어졌다.

각 그룹은 20일 동안 처리되었고, 21번째 날에 그것들은 복강내에 냉인산완충염(PBS) 5ml가 주입되었다. 그 후에, 상기 복막액은 채취되었고, 상기 대식세포 수는 해모시토미터(haemocytometer)에서 WBC 제곱을 이용하여 세어졌다. 상기 세포 수는 세제곱 밀리미터 당 측정되었다. 상기 남은 쥐들은 28일째까지 계속해서 치료되었고, 29일째 날, 혈액은 후안구동총(叢)으로부터 뽑아내졌다. 각 쥐로부터 뽑아진 피 두 방울을 슬라이드에 떨어뜨려 응고시키고, 25분간 37℃에서 유지되는 수분 챔버에 놓아두었다. 이 피착 세포들은 칸디다 알비칸스(Candida Albicans) 포자 분산액으로 배양되었고, 착색하여 관찰되었다. 그 후에 칸디다 분산액을 머금은 세포의 수가 세어졌다.

식세포지수(phagocytic index) 및 % 식균작용은 다음 식을 이용하여 계산된다.

% 식균작용= 관찰된 모든 100 세포 중에 삼켜진 PMN 세포의 수

상기 단계를 수행했고 그 결과를 표로 만들었다.

군	처 리	복막의 대식세포	PMN 세포의 포식세포 작용
			칸디다균 / PMN 의 평균	식균작용을 보이는 PMN
1	대조군	3558 + 1361	2.185 + 0.34	81 + 3.88
2	실험 조성물 (25mg/kg)	4300 + 1241	2.73 + 0.37	95 + 2.73
3	실험 조성물 (50 mg/kg)	7758 + 1512	1.901 0.48	92 + 2.48

상기 결과는 복막 대식 세포 수 및 식균 작용에서 증가를 보인다. 증가한 대식 세포 수는 항체에 대한 향상된 면역반응의 직접적인 암시이다. 이 대식 세포들의 추가적으로 증가된 식균 작용은 항체에 대한 그것들의 효율성의 증거이다.

실시예 11: 복부 염증을 유도하는 대장균에 대하여 숙주의 저항력에 대한 실험 조성물의 효과

암컷 또는 수컷 중 어느 하나의 스위스 알 비노 쥐들은 세 개의 그룹으로 나눠졌고, 대조 그룹 및 실험 조성물로 처리되었다. 28일 동안 쥐들에게 단일 투여량이 주입되었다. 29번째 날, 상기 쥐들에게 PBS에 2.5x10⁹ 포함된 대장균 분산액으로 복강 내에 주사하였다. 상기 쥐들은 주사 후 24시간 동안 사망률이 관찰되었다. 상기 관찰된 사망률은 대장균 감염 때문이고, 또한 염증이라고 불려진다. 생존한 동물들은 사망률에 대하여 7일간 더 관찰되었다.

이 실험의 결과는 아래 표로 나타낸다.

군	처리	24시간 내의 사망률
1	대조군	8/8
2	10 mg/kg에서 실험 조성물	8/8
3	50 mg/kg에서 실험 조성물	3/8

상기 결과로부터 알 수 있는 것과 같이, 대조 그룹 및 실험 조성물의 낮은 투여량에서의 사망률은 100%였다. 상기 실험 조성물의 50mg/kg의 투여량에서 상기 사망률은 63%까지 줄었다. 다른 두 그룹에서 8 마리 모두 죽은 것에 반해 8 마리의 쥐 중에서 3 마리의 쥐만이 죽었다. 또한 이 세 번째 그룹에서는 사망률이 더 관찰되지 않았다.

이것은 숙주에 있어서 상기 실험 조성물의 예방효과를 나타낸다. 상기 실험 조성물로 전처리하는 것은 병원체에 노출된 쥐의 사망률의 줄였다. 이것은 박테리아 및 바이러스를 포함한 병원체에 의한 감염을 예방하는 상기 실험 조성물의 능력을 확인해 준다.

이 감염의 예방은 병원체가 존재할 때 상기 조성물에 의해 유도된 향상된 면역 반응 때문이다. 이 반응은 숙주가 상기 병원체의 수를 제어할 수 있게 하여, 감염을 예방하게 된다.

실시예 12: 인플루엔자 A( H1N1 및 H3N2 ) 바이러스의 억제

이 실시예는 H1N1 및 H3N2 바이러스를 억제하는 상기 실험 조성물의 효능을 보여주고, 이 바이러스 감염의 치료, 예방 및 관리의 방법으로서 그 유효성 밝힌다.

개의 원위세뇨관(Madin-Darby canine kidney; MDCK) 세포(세포배양틀(well) 당 3x10⁵ 세포)는 상기 H1N1 및 H3N2 바이러스로 감염되기 전 하루 6웰 배양판에 접종되었다. 3일 후, 세포들은 3ml 오버레이 배양액(overlay medium)이 각 배양틀에 첨가되기 전, 1시간 동안 연속적으로 희석된 H1N1 및 H3N2 바이러스로 감염된다. 4시간 후, 상기 세포들은 1시간 동안 10% 포르말린으로 고정되었고, 15분 동안 1% 크리스탈바이올렛으로 염색되었다. 상기 바이러스 역가는 세어진 용균반에 따라 결정되었다.

화합물에 대한 바이러스의 민감도는 용균반 환원 검사에 의하여 결정된다. 상기 절차는 화합물의 지시양이 오버레이 배양액에 첨가된 것을 제외하고는 용균반 검사와 유사하다. 억제 백분율은 [100-(V_D/V_C)]x100%로 계산되었고, 여기서 V_D 및 V_C는 각각, 상기 화합물이 존재하거나 존재하지 않는 바이러스 역가를 나타낸다. 용균반 수 (EC₅₀)의 50%를 감소시키기 위하여 요구된 화합물의 최소 농도는 용균반 검사로부터 발생된 투여량-반응 곡선의 회귀 분석에 의하여 계산되었다.

	민감한 종류 (676)	저항력 있는 종류 (6706)
실험 조성물 ( ug / mL )
0	78.5	11
25	40	7
50	25.5	3.5
EC50	25.5 (17.7 nM )	36.1 (25 nM )
타미플루 ( nM )
EC50	4.5	>5000

실험 조성물(μg/ mL )	H3N2
	PFU	억제율 (%)
	141.67	0
	110.33	22.11
	57.33	59.53
	27.67	80.47
IC50	43.64

상기 표로부터 실험 조성물로 처리된 감염된 세포는 용균반 형성에서 눈에 띄는 감소를 나타냈다는 것이 눈에 띈다. 또한 상기 실험 조성물은 H1N1에 저항력이 있는 타미플루와는 달리 매우 효과적이라는 것을 보여주었고, 이것은 인플루엔자(H1N1) 바이러스 감염의 치료제로서의 유효성을 증명한다. 또한 두 번째 표는 상기 인플루엔자 A 바이러스의 H3N2 종류를 억제하는데 있어서 실험 조성물의 유효성을 보여준다.

실시예 13: PBMC 활성화된 HIV -1( X4 영양성 바이러스( X4 tropic virus ) 및 R5 영양성 바이러스)에 대한 실험 조성물의 효과

HIV(HXB3-X4 영양성) 바이러스는 293T 세포에 대한 HXB2 분자의 클론을 세포로 감염시킨 후, 48 시간 얻어졌다. 바이러스 역가는 실시간 PCR에 의해 감지되었다. 바이러스는 24개의 배양판에서 식물성적혈구응집소(phytohemagglutinin; PHA)로 자극된 말포혈 단핵세포(Peripheral Blood Mononuclear Cell; PBMC)에 감염되었다. 16~16시간 후, PBMC는 인산 완충 용액(PBS)로 세척되었고, 2% 소태아혈청(Fetal Bovine Serum; FBS)과 함께 신선한 Roswell Park Memorial Institute(PRMI) 배양액은 첨가되었다. 감염 후(dpi) 3, 5 및 7일째에 세포 및 바이러스 수프가 채취되었다.

상기 실험 조성물 및 3개의 표준 약물(AZT, AMD3100 및 Tak-779)는 HXB2 HIV-1 바이러스(X4 바이러스 및 R5 바이러스)로 세포 감염된 실물성적혈구 응집소(PHA-2μg/ml) 자극 PBMC 세포에서 시험되었다. 감염 다중도(Multiplicity of Infection; MOI)는 0.26로 발견되었다. 바이러스의 부하 검출은 감염 후 3, 5 및 7번째 날에 위에서 설명한 것과 같이 RT-PCR에 의해 행해졌다.

AMD3100은 CXCR4 영양성 바이러스(평균 EC₅₀=2.05nM)에 대해서만 억제 작용을 나타냈고, 여기서 Tak-799는 CCR5 영양성 바이러스(평균 EC₅₀=0.56nM)에 대해서만 억제 작용을 나타냈다. AZT는 CCR5 영양성 바이러스 및 CXCR4 영양성 바이러스 양쪽에 대해서 억제 작용을 나타냈다. 상기 실험 조성물은 X4 바이러스에 대하여 22.5μg/ml(15.625nM) 및 R5 바이러스에 대하여 15.5μg/ml(10.77nM)의 EC₅₀값을 나타냈다. 이 값들은 비슷하거나 일부의 경우에 있어서 사용된 상기 표준 약물보다 더 효과적이었다.

실시예 12~13이 HIV 및 인플루엔자 바이러스(H1N1)에 대하여 상기 실험 조성물의 항바이러스 효과를 보이는 반면, 실시예 9~11은 상기 실험 조성물의 면역 반응 특성을 나타낸다. 조합에서 실시예 9~13은 상기 실험 조성물이 두 연장된 메커니즘에 의하여 감염을 예방하도록 작용하는 것을 나타낸다. 향상된 면역 반응은 동시에 감염을 예방하기 위한 보호적인 옵션 또는 예방적인 옵션으로서 작용한다. 두 번째로 감염의 경우, 실험 조성물의 항바이러스 특성은 혈중 바이러스 농도(viral load)(HIV 및 인플루엔자 모두)를 줄여서, 감염을 해결하기 위하여 면역반응이 향상되도록 하고 더 큰 손상을 예방한다. 이 면역 반응은 병원체가 존재할 때만 유도된다는 것은 매우 중요한 사실이다. 이것은 상기 어떠한 동물들에게서도 과활성화된 면역계와 연관된 염증의 신호 및/또는 다른 증상도 나타나지 않았다는 사실에 의하여 확인된다.

상기 실험 조성물의 이 특성은 감염을 예방하기 위한 예방 약품으로서 장기 복용에 대하여 매우 순응적으로 만든다.

본 발명의 상기 조성물은 약 55%w/w 내지 약 99%w/w의 농도범위의 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 선택적으로 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 각각 약 0.5%w/w 내지 약 35%w/w의 농도범위의 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성물의 폭넓은 농도 범위에서뿐만 면역 반응을 향상시키는 것은 아니다. 면역반응을 유도하는 데 있어 상기 조성물의 효능은 약 80%w/w 내지 약 99%w/w의 농도범위의 오량체 프로시아니딘 플라보노이드, 선택적으로 약제학적으로 허용 가능한 첨가제와 함께 각각 약 0.5%w/w 내지 약 20%w/w의 농도범위의 삼량체 및 사량체를 포함하는 조성물의 특정한 범위에서 더 좋거나 탁월하다.

실시예 14: HIV 및 AIDS 환자에서 상기 새로운 조성물의 효과 및 안전을 나타내는 개념검증 연구

유망한 이중맹검의 임의로 추출된 플라시보 제어 연구는 투약된 적 없고 증상이 없는 HIV-1 감염 환자 40명에게서 수행되었다. 상기 실험 조성물은 CD4 250~500/mm³ 사이로 산출된 투약된 적 없고 증상이 없는 HIV-1 감염 환자 40명에서 연구되었다. 상기 실험 조성물은 12주 동안 하루에 300mg씩 테스트되었고, 캡슐형태로 투여되었다. 상기 실험 조성물은 67.28%까지 증가를 보였던 플라시보와 비교했을 때 11.29%까지 혈중 바이러스의 농도가 감소한 것으로 나타냈다. 양쪽 그룹에서 CD4의 수의 감소가 있었지만, 상기 실험 조성물 그룹에서 CD4 수에서의 백분율 감소는 플라시보의 절반으로 관찰되었다(플라시보에서 13.88% 감소된 반면에 실험 조성물에서는 7.74%). 상기 실험 조성물은 주요 장기 기능 및 생화학적 파라미터 대부분에 대하여 안전하고 효과적인 것으로 관찰되었다. 실시예 14는 상기 혈중 바이러스의 농도를 억제하는 상기 실험 조성물의 능력을 자세히 설명하고, 상기 실험 조성물의 항바이러스 효과를 분명히 한다. 또한 상기 플라시보와 비교했을 때 WBC(CD4)의 수에서의 향상는 면역 반응을 향상하는 것의 중요한 시사점이다.

Claims (35)

1. 55%w/w 내지 99%w/w의 농도범위를 갖는 프로시아니딘 플라보노이드 오량체(pentameric procyanidin flavonoid), 각각 0.5%w/w 내지 35%w/w의 농도범위를 갖는 삼량체들(trimer) 및 사량체들(tetramer) 및 선택적으로 약제적으로 수용가능한 첨가제를 포함하는, 바이러스 감염을 치료, 예방 및 관리하거나 바이러스 감염에서 면역 반응을 향상시키기 위한 약제학적 조성물로서,
   상기 바이러스 감염은 인플루엔자 A 감염, 인간 면역 결핍 바이러스(HIV) 감염 및 후천성 면역 결핍증(AIDS)으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 약제학적 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 시나모뮴(Cinnamomum), 여지(Litchi) 및 땅콩(Arachis)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 식물 원료로부터 얻어지는 약제학적 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 프로시아니딘 플라보노이드 오량체의 농도는 80%w/w 내지 98%w/w이고, 삼량체 및 사량체는 각각 0.5%w/w 내지 20%w/w 범위의 농도를 갖는 약제학적 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 프로시아니딘 플라보노이드 오량체는 1440 분자량을 갖고, 상기 오량체는 타입A 프로시아니딘 오량체인 약제학적 조성물.
5. 제1항에 있어서,
   상기 첨가제는, 점성 물질(gum), 입화제(granulating agent), 결합제(binding agent), 윤활제, 붕해제(disintegrating agent), 감미료, 색소, 향료, 코팅제, 가소제, 보존료, 분산제, 유화제, 정전기 방지제 및 구형화제(spheronization agent)로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
6. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은, 정제(錠劑), 트로키(troche), 치료용 캔디(lozenge), 수용성 또는 지용성 현탁액, 분산성 분말 또는 입제, 경화 또는 유화 겔 캡슐 속의 유화제, 시럽 및 엘릭서(elixir)로 이루어진 군으로부터 선택된 다양한 복용 형태로 만들어지는 약제학적 조성물.
7. 55%w/w 내지 99%w/w의 농도범위를 갖는 프로시아니딘 플라보노이드 오량체, 각각 0.5%w/w 내지 35%w/w의 농도범위를 갖는 삼량체들 및 사량체들을 포함하는 약제학적 조성물을 제조하는 방법으로서,
   독성 물질을 제거하기 위하여 유기 용매를 사용하여 분쇄된 식물성 매스(mass)를 추출하는 단계;
   상기 유기 용매를 제거하기 위하여 상기 매스를 건조하는 단계;
   추출물을 수득하기 위하여 수용성 용매를 사용하여 상기 건조된 매스를 재추출하는 단계; 및
   크로마토그래피 칼럼 후에 이어지는 상기 조성물을 수득하기 위하여 농축, 정화, 표준화 및 건조하는 단계를 통하여 상기 추출물을 정화하는 단계(purifying the extract through chromatographic column followed by concentrating, purifying, standardizing and drying to obtain the composition)
   를 포함하는 방법.
8. 제7항에 있어서,
   상기 분쇄된 식물성 매스는 시나몬, 여지 및 땅콩으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
9. 제7항에 있어서,
   상기 유기 용매는 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 아밀아세테이트, 2-에틸헥실아세테이트 및 이것들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 수용성 용매는 산성화된 탈이온화수(deionised water)인 방법.
10. 제7항에 있어서,
    상기 추출은 8시간 내지 12시간 동안 수행되는 방법.
11. 제7항에 있어서,
    상기 독성 물질은 쿠머린(coumarin) 및 알데하이드를 포함하는 방법.
12. 제7항에 있어서,
    상기 추출물은 두 단계의 크로마토그래피 칼럼을 통하여 여과되고, 상기 크로마토그래피 칼럼은 XAD-1180, XAD-7HP 및 XAD-1140 수지로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
13. 제7항에 있어서,
    수용성 용매로 하는 상기 재추출은 pH 3.8 내지 5.8의 범위에서 수행되고, 상기 재추출은 8시간 내지 12시간 동안 30℃ 내지 90℃의 온도 범위에서 수행되는 방법.
14. 제7항에 있어서,
    상기 조성물은 점성 물질(gum), 입화제(granulating agent), 결합제(binding agent), 윤활제, 붕해제(disintegrating agent), 감미료, 색소, 향료, 코팅제, 가소제, 보존료, 분산제, 유화제, 정전기 방지제 및 구형화제(spheronization agent)로 이루어진 군으로부터 선택되는 첨가제를 더 포함하는 방법.
15. 삭제
16. 삭제
17. 삭제
18. 제1항에 있어서,
    상기 인플루엔자 A 감염은 인플루엔자 바이러스 H1N1 및 H3N2로 이루어진 군으로부터 선택된 바이러스에 의해 야기되고; 및
    상기 HIV 감염은 HIV X4 및 R5 영양성(tropic) 바이러스로 이루어지는 군으로부터 선택된 바이러스에 의해 야기되는 약제학적 조성물.
19. 삭제
20. 삭제
21. 삭제
22. 삭제
23. 삭제
24. 삭제
25. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 대상의 체중에 대하여 1mg/kg 내지 100mg/kg의 범위의 약제학적으로 유효한 양으로 투여되는 약제학적 조성물.
26. 제7항에 있어서,
    상기 추출은 10시간 동안 수행되는 방법.
27. 제7항에 있어서,
    수용성 용매로 하는 상기 재추출은 pH 4.0 에서 수행되고, 상기 재추출은 10시간 동안 31℃ 내지 40℃의 온도 범위에서 수행되는 방법.
    
    
28. 삭제
29. 삭제
30. 삭제
31. 삭제
32. 삭제
33. 삭제
34. 삭제
35. 삭제

Images