KR101136108B1 - Method for producing functional glucooligosaccharides from pear juice - Google Patents

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Abstract

본 발명은 배즙 30~60%, 글루칸수크라아제(Glucansucrase) 효소 및 설탕 0.1~0.3M을 혼합하고, 26~30℃에서 18시간 이상 반응시키는 것을 포함하는 배즙으로부터 기능성 글루코올리고당의 제조 방법, 상기 방법에 의해 제조된 기능성 글루코올리고당 및 상기 기능성 글루코올리고당을 함유하는 기능성 식품에 관한 것이다.The present invention is a method for producing a functional glucoglucose from pear juice comprising 30-60% of pear juice, glucansucrase enzyme and 0.1-0.3 M of sugar, and reacting at 26-30 ° C. for 18 hours or more. The present invention relates to a functional gluco oligosaccharide prepared by the method and a functional food containing the functional gluco oligosaccharide.

배즙, 글루칸수크라아제 효소, 설탕, 글루코올리고당, 기능성 식품, 당전이 효소 Pear juice, glucan sucrase enzyme, sugar, gluco oligosaccharide, functional food, sugar transfer enzyme

Description

배즙으로부터 기능성 글루코올리고당의 제조 방법{Method for producing functional glucooligosaccharides from pear juice}Method for producing functional glucoigosaccharides from pear juice

본 발명은 배즙으로부터 기능성 글루코올리고당의 제조 방법에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 배즙 30~60%, 글루칸수크라아제 효소 및 설탕 0.1~0.3M을 혼합하고, 26~30℃에서 18시간 이상 반응시키는 것을 포함하는 배즙으로부터 기능성 글루코올리고당의 제조 방법, 상기 방법에 의해 제조된 기능성 글루코올리고당 및 상기 기능성 글루코올리고당을 함유하는 기능성 식품에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing functional gluco oligosaccharides from pear juice, and more specifically, to mix pear juice 30-60%, glucan sucralase enzyme and 0.1-0.3 M of sugar, and to react at 26-30 ° C. for 18 hours or more. The present invention relates to a method for producing a functional gluco oligosaccharide from a pear juice, comprising a functional gluco oligosaccharide prepared by the method and a functional food containing the functional gluco oligosaccharide.

올리고당은 글루코스, 프락토스 같은 단당류가 2 내지 8개 결합한 탄수화물이며 감미를 가지는 수용성 물질로 식물체에 소량씩 널리 분포되어 있으며, 설탕, 말토스 또는 이들의 혼합물에 특이한 당 전이효소를 작용시켜 여러 가지 종류의 올리고당이 생성되는데, 락토당, 갈락토당, 글루코당(이소말토) 등이 생성된다. 이들의 감미도의 강도는 설탕을 1로 보았을 때 대두올리고당(0.7), 이소말토올리고당(0.5), 갈락토올리고당(0.4), 프락토올리고당(0.3) 순이다.Oligosaccharides are carbohydrates in which two to eight monosaccharides such as glucose and fructose are combined and are water-soluble substances that are sweet and widely distributed in plants in small amounts. Oligosaccharides are produced, such as lactose, galactose, and glucose (isomalto). The intensity of sweetness is soy oligosaccharide (0.7), isomaltooligosaccharide (0.5), galactooligosaccharide (0.4), and fructooligosaccharide (0.3).

글루코올리고당을 만드는 효소인 트랜스글리코시다아제는 말토스를 기질로 하여 이소말토올리고당을 생성하며 주로 α-1,6-glucosidic linkage를 가지고 있는 glucosylsaccharide를 말하며 이소말토오스, 판노스(panose), 이소말토트리오스 등을 주성분으로 한다 (안장우 등 1996, Korean J. Food Sci. Technol. 28: 273-278; Seo et al., 2004. Biotechnol. Bioproc. Eng. 9: 339-344). 전분 생성효소의 일종인 글루칸수크라아제는 설탕을 기질로 하여 주로 설탕의 글루코스를 α-1,3 과 α-1,6-glucosidic linkage를 가지고 있는 glucosylsaccharide로 판노스, 이소말토오스, 이소말토판노스, 이소말토트리오스, 이소말토테트리오스, 이소말토판토스 등을 주성분으로 한다 (Yoo et al, 2004, Food Sci. Biotechnol. 13: 240-243). 이러한 이소말토 올리고당들은 효모로 발효되지 않는 비발효성 당으로 청주, 굴, 간장 등에 존재한다.Transglycosidase, an enzyme that makes gluco-oligosaccharides, produces isomaltooligosaccharides based on maltose, and refers to glucosylsaccharides containing α-1,6-glucosidic linkage, and isomaltose, panose, and isomaltote Rios et al. (Ahn Jang et al. 1996, Korean J. Food Sci. Technol. 28: 273-278; Seo et al., 2004. Biotechnol. Bioproc. Eng. 9: 339-344). Glucansucrase, a type of starch-producing enzyme, is a glucosylsaccharide with sugar as a substrate and mainly with glucose of α-1,3 and α-1,6-glucosidic linkage. Panos, isomaltose and isomaltanopanose , Isomaltriotriose, isomaltotetriose, isomaltantopantose and the like (Yoo et al, 2004, Food Sci. Biotechnol. 13: 240-243). These isomalto oligosaccharides are non-fermentable sugars that are not fermented by yeast and are present in sake, oyster, and soy sauce.

배는 수분이 85-88%를 차지하며 당분이 10-13%, 단백질이 0.3% 내외를 차지하며 식이섬유 함량이 높아 변비 및 정장작용이 뛰어나다. 배의 당 성분은 설탕이 가장 많이 들어있으며 프락토스, 글루코스, 솔비톨 등이 나머지를 차지한다. 특히 당 알콜류로서 솔비톨은 1g당 15-25mg을 함유 당뇨병 환자의 대체 감미료로 각광받고 있다.Pear is 85-88% of water, sugar is 10-13%, protein is about 0.3%, and its dietary fiber is high. Pears have the highest sugar content, and fructose, glucose, and sorbitol make up the rest. In particular, sorbitol as a sugar alcohol has been in the spotlight as an alternative sweetener for diabetics containing 15-25 mg per gram.

이소말토올리고당과 같은 글루코올리고당은 생리적으로 여러 가지 유효한 특성을 지니는데, 장내의 비피도박테리아(Bifidobacteria)를 증식시켜 정장작용을 촉진하며(Hidaka et al, 1986, Bifidobacteria microflora. 5: 37-40; Djouzi et al., 1995, J. Appl. Bacteriol. 79: 117-127), 장내 pH를 저하시켜 유해균의 증식을 억제하는데(Hoover, 1993. Food Technol. 47: 120-124) 이소말토올리고당을 장기간 토끼에 투여한 경우 생체 면역계에 중심적인 역할을 담당하는 T 임파구, B 임 파구의 수가 증가하고, 장내에 비피더스균 및 유산균의 수가 현저히 증가하고 유해균인 Clostridium은 감소한다고 보고되었다. 그 외에도 비수용성 글루칸 합성과 치면에 글루칸 부착을 강력히 억제하는 효과가 있어서 충치예방에 좋고, 혈청지질의 감소 효과(이현우, 1994, 식품 기술, 7: 49-57)도 있다고 보고하였다.Gluco-oligosaccharides, such as isomaltooligosaccharides, have several physiologically effective properties: they promote intestinal action by proliferating intestinal bifidobacteria (Hidaka et al, 1986, Bifidobacteria microflora. 5: 37-40; Djouzi et al., 1995, J. Appl. Bacteriol. 79: 117-127), inhibiting proliferation of harmful bacteria by lowering intestinal pH (Hoover, 1993. Food Technol. 47: 120-124). When administered to rabbits, it was reported that the number of T lymphocytes and B lymphocytes, which play a central role in the biological immune system, increased the number of bifidus and lactic acid bacteria in the intestine, and reduced the harmful bacterium Clostridium. In addition, it has been reported to be effective in the prevention of tooth decay due to the synthesis of water-insoluble glucan and strongly inhibiting adhesion of glucan to the tooth surface (Lee Hyun-woo, 1994, Food Technology, 7: 49-57).

글루코올리고당은 비슷한 기능을 가지는 식이섬유와는 물성이 크게 다르고 고분자 물질이 아니므로 식품에 첨가하여도 물성과 조직감이 크게 달라지지 않는 장점이 있고, 설탕보다 낮은 감미도, 비발효성, 보습성, 난흡습성, 침투성, 청량감, 변색방지, 감칠맛 보강, 수분활성 저하작용 등의 특성이 있어 음료수, 과자, 캬라멜, 초콜렛, 쿠키, 빵, 아이스크림, 쨈, 젤리, 요구르트, 케이크, 건강식품에 주로 이용되고 있다.Gluco-oligosaccharide has the advantage that physical properties and texture are not significantly different from dietary fiber, which is very different from dietary fiber with similar function and added to food, and it has lower sweetness, non-fermentability, moisturizing property, and moisture absorption than sugar. It is mainly used in beverages, sweets, caramels, chocolate, cookies, bread, ice cream, 쨈, jelly, yogurt, cake, and health food because it has properties such as permeability, cooling, discoloration prevention, reinforcing taste, and water activity lowering action.

한국특허등록 제0479752호에는 보리 유래 올리고당의 제조방법이 개시되어 있으며, 한국특허등록 제0385914호에는 인삼 식이섬유와 인삼 올리고당을 함유하는 기능성 음료 및 그 제조방법이 개시되어 있으나, 본 발명의 배즙 유래의 글루코올리고당과는 상이하다.Korean Patent Registration No. 0479752 discloses a method for preparing barley-derived oligosaccharides, and Korean Patent Registration No. 0385914 discloses a functional beverage containing ginseng dietary fiber and ginseng oligosaccharides and a method for preparing the same. Is different from gluco-oligosaccharide.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 안출된 것으로서, 본 발명은 배 과즙에 함유된 설탕을 이용하여 글루칸수크라아제 효소로 배즙 내 설탕의 75-89%를 올리고당으로 전환시키고, 상기 생성된 올리고당의 항당뇨 증진 효과와 장 건강증진 효과를 확인 후 이를 이용한 기능성 제품을 개발함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.The present invention has been made in accordance with the above requirements, the present invention converts 75-89% of the sugar in pear juice to oligosaccharides using glucan sucrase enzyme using the sugar contained in the pear juice, The present invention was completed by developing a functional product using the antidiabetic enhancement effect and the intestinal health promoting effect.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 배즙, 글루칸수크라아제 효소 및 설탕을 혼합하고, 26~30℃에서 18시간 이상 반응시키는 것을 포함하는 배즙으로부터 기능성 글루코올리고당의 제조 방법을 제공한다.In order to solve the above problems, the present invention provides a method for producing a functional gluco oligosaccharide from pear juice, comprising mixing pear juice, glucan sukrase enzyme and sugar and reacting at 26 to 30 ° C. for 18 hours or more.

또한, 본 발명은 상기 방법에 의해 제조된 기능성 글루코올리고당을 제공한다.The present invention also provides a functional glucooligosaccharide prepared by the above method.

또한, 본 발명은 상기 기능성 글루코올리고당을 함유하는 기능성 식품을 제공한다.The present invention also provides a functional food containing the functional glucooligosaccharide.

본 발명에 따르면, 배즙으로부터 글루칸수크라아제 효소를 이용하여 배즙의 75~89%를 항당뇨 증진 효과 및 장 건강 증진 효과를 갖는 기능성 글루코올리고당으로 전환시킬 수 있으므로, 상기 글루코올리고당을 이용하여 다양한 기능성 식품의 개발에 응용이 가능하다.According to the present invention, 75-89% of the pear juice can be converted from the pear juice into functional glucopolysaccharides having anti-diabetic and intestinal health effects by using the glucan sucrase enzyme. It is possible to apply to the development of food.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 배즙 30~60%, 글루칸수크라아제 효소 및 설탕 0.1~0.3M을 혼합하고, 26~30℃에서 18시간 이상 반응시키는 것을 포함하는 배즙으로부터 기능성 글루코올리고당의 제조 방법을 제공한다.In order to achieve the object of the present invention, the present invention is a functional glucoglucose from pear juice comprising 30-60% of pear juice, glucan sucrase enzyme and 0.1-0.3M of sugar and reacting at 26-30 ° C. for 18 hours or more. Provided are methods for preparing oligosaccharides.

본 발명의 방법은 상기 배즙의 75~89%를 글루코올리고당으로 전환시킬 수 있으며, 상기 글루코올리고당은 항당뇨 증진 효과 및 장 건강 증진 효과를 갖는다.The method of the present invention can convert 75 to 89% of the pear juice to gluco-oligosaccharides, wherein the gluco-oligosaccharides have anti-diabetic and intestinal health-promoting effects.

본 발명의 방법에 이용된 글루칸수크라아제 효소는 10% 이상 첨가하는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 10~30% 첨가하는 것이다. 또한, 상기 글루칸수크라아제 효소는 바람직하게는 류코노스톡 메센테로이데스(Leuconostoc mesenteroides) 유래이며, 2unit/ml 이다.The glucan sucrase enzyme used in the method of the present invention is preferably added 10% or more, more preferably 10-30%. In addition, the glucan sucrase enzyme is preferably derived from Leuconostoc mesenteroides and is 2 units / ml.

본 발명의 방법에 이용된 설탕은 0.3M 이하, 바람직하게는 0.1~0.3M을 혼합한다. 반응 조건은 배즙, 글루칸수크라아제 및 설탕을 혼합하고, 26~30℃에서 18시간 이상 반응시키며, 바람직하게는 28℃에서 18~24시간 반응시킨다.The sugar used in the method of the present invention mixes 0.3 M or less, preferably 0.1-0.3 M. The reaction conditions are mixed with pear juice, glucan sucrase and sugar, and reacted for at least 18 hours at 26 ~ 30 ℃, preferably at 18 ℃ for 24 hours.

본 발명의 방법에 이용된 배즙은 배를 이용하여 배즙을 만드는 통상적인 방법에 의해 제조할 수 있다.The pear juice used in the method of the present invention can be prepared by a conventional method of making pear juice using pears.

본 발명은 가장 바람직하게는 배즙 30~60%, 글루칸수크라아제 효소 및 설탕 0.1~0.3M을 혼합하고, 26~30℃에서 18~24시간 동안 반응시켜 배즙의 75~89%를 글루코올리고당으로 전환시키는 것을 포함하는 배즙으로부터 항당뇨 증진 효과 및 장 건강 증진 효과를 갖는 기능성 글루코올리고당의 제조 방법을 제공한다.The present invention is most preferably mixed with 30 ~ 60% of pear juice, glucan sucrase enzyme and 0.1 ~ 0.3M of sugar, and reacted at 26 ~ 30 ℃ for 18 to 24 hours to 75 ~ 89% of pear juice to gluco-oligosaccharide Provided are a method for producing a functional glucooligosaccharide having antidiabetic and intestinal health promoting effects from pear juice comprising the conversion.

본 발명은 또한, 본 발명의 방법에 의해 제조된 기능성 글루코올리고당을 제공한다. 상기 방법에 의해 제조된 기능성 글루코올리고당은 항당뇨 증진 효과 및 장 건강 증진 효과를 가지므로 식품에 매우 유용하게 이용될 수 있다.The present invention also provides a functional glucooligosaccharide prepared by the method of the present invention. Functional gluco oligosaccharides prepared by the above method have anti-diabetic and intestinal health-promoting effects and thus can be very useful for food.

본 발명은 또한, 본 발명의 기능성 글루코올리고당을 함유하는 기능성 식품을 제공한다. 상기 기능성 식품은 예를 들면, 음료수, 과자, 캬라멜, 초콜렛, 쿠키, 빵, 아이스크림, 쨈, 젤리, 요구르트, 케이크 등일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The present invention also provides a functional food containing the functional glucooligosaccharide of the present invention. The functional food may be, for example, beverages, sweets, caramel, chocolate, cookies, bread, ice cream, bread, jelly, yogurt, cake, and the like, but is not limited thereto.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

재료 및 방법Materials and methods

가. 실험재료end. Experimental material

배(신고배), Folin-Denis Griess 시약, 알루미늄 니트레이트, 타르타르산제일철(ferrous tartarte), DPPH(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl), α-글루코시다아제, 말토오스 등의 시약은 Sigma에서, TLC 실리카 겔 60 F254 플레이트는 Merck에서 구입하였다.Reagents such as pear, Folin-Denis Griess reagent, aluminum nitrate, ferrous tartarte, DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl), α-glucosidase, maltose, etc. TLC silica gel 60 F254 plates were purchased from Merck.

나. 올리고당 제조 및 성분 분석I. Oligosaccharide Preparation and Component Analysis

글루코올리고당은 배즙 내 설탕을 기질로 하는 글루칸수크라아제와 말토스를 기질로 하는 트랜스글리코시다아제(transglycosidase) 효소를 이용해 제조 후 기능성을 비교하였다.Gluco-oligosaccharides were compared with post-production functionality using glucans sucrase based on sugar in pear juice and transglycosidase enzyme based on maltose.

1) 올리고당 제조 조건1) Oligosaccharide Preparation Conditions

가) 글루칸수크라아제 (L. mesenteroides)A. Glucan sucrose ( L. mesenteroides )

글루칸수크라아제 효소를 이용하여 올리고당을 생성하기 위해 효소는 1~50%를 첨가하였고 기질로 배즙은 10~60%까지 첨가한 후 배즙 내 설탕 외에도 추가로 0.1-0.5M 까지 첨가하였다. 반응 조건은 28℃~60℃에서 1시간~48시간을 반응시켜 최적 생성 조건을 확립하였다.In order to produce oligosaccharides using glucan sucrase enzyme, 1 ~ 50% of enzyme was added and 10 ~ 60% of pear juice was added as substrate, and then 0.1-0.5M was added in addition to sugar in pear juice. Reaction conditions were 1 hour-48 hours at 28 degreeC-60 degreeC, and the optimal production conditions were established.

나) 트랜스글리코시다아제 L. Amano (A. niger)B) transglycosidase L. Amano ( A. niger )

트랜스글리코시다아제 효소를 이용하여 올리고당을 생성하기 위해 효소는 0.1~1%까지 첨가하였고, 기질은 말토스로 10~50%까지 첨가, 배즙도 10~60% 첨가하였다. 반응 조건은 28℃~60℃에서 1시간~48시간을 반응시켜 최적 생성 조건을 확립하였다.To produce oligosaccharides using transglycosidase enzymes, enzymes were added up to 0.1-1%, substrates were added up to 10-50% with maltose, and pear juices were added up to 10-60%. Reaction conditions were 1 hour-48 hours at 28 degreeC-60 degreeC, and the optimal production conditions were established.

2) 올리고당 구조분석- Two dimentional TLC2) Oligosaccharide Structure Analysis-Two dimentional TLC

올리고당 생성물을 Preparartive 실리카겔 플레이트에 점적한 후 1차 용매 85:20:50:50(v/v/v/v) 아세토니트릴/에틸아세테이트/1-프로판올/물로 2번 전개했으며 끝부분을 잘라서 황산 발색한 후 발색되지 않는 부분과 비교하였다. 각 부분의 spot들을 회수해서 물로 담근 후 원심분리해 동결건조로 각 성분들을 얻었다. 각 성분들은 Two-Dimentional TLC를 이용하여 성분을 분석하였다. 먼저 각 성분을 TLC 플레이트에 점적한 후 1차 용매 85:20:50:50(v/v/v/v) 아세토니트릴/에틸아세테이 트/1-프로판올/물로 2번 전개했으며, 다시 90도로 회전한 후 2차 용매로 20:50:15 (v/v/v) 니트로메탄/1-프로판올/물로 2번 전개한 후 standard IMn (Isomaltoseries)와 Mn (Maltose series)로 비교해 성분을 분석하였다. 또한 LC/MS/MS를 통해 질량을 확인하였다.The oligosaccharide product was deposited on a preparartive silica gel plate and then developed twice with primary solvent 85: 20: 50: 50 (v / v / v / v) acetonitrile / ethylacetate / 1-propanol / water and the tip was cut to give sulfuric acid development. And then compared with the non-colored part. The spots of each part were recovered, soaked in water, and centrifuged to obtain each component by lyophilization. Each component was analyzed using Two-Dimentional TLC. Each component was first dropped onto a TLC plate and then developed twice with primary solvent 85: 20: 50: 50 (v / v / v / v) acetonitrile / ethylacetate / 1-propanol / water, again at 90 degrees. After rotation, the mixture was developed twice with 20:50:15 (v / v / v) nitromethane / 1-propanol / water as a secondary solvent, and the components were analyzed by comparing them with standard IMn (Isomaltoseries) and Mn (Maltose series). In addition, mass was confirmed through LC / MS / MS.

다. 올리고당의 기능성 조사All. Functional investigation of oligosaccharides

1) 항산화 (Electron donating ability) 효과1) Electron donating ability

항산화 효능은 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)을 이용하여 라디칼 소거능(radical scavenging effect)을 측정하였다. 96-웰 플레이트에 100μM DPPH 에탄올 용액에 농도별로 희석한 시료용액을 가하여 37℃에서 30분 동안 반응시킨 후, VERSAmax, microplate reader (Molecular Devices, USA)를 이용하여 515 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 항산화 효능은 흡광도가 50% 감소할 때 나타나는 시료의 라디칼 소거능(IC50)으로 표시하였으며, 3회 반복 실험하여 데이터를 구하였다.Antioxidant efficacy was measured using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) to determine the radical scavenging effect. Sample solution diluted by concentration to 100 μM DPPH ethanol solution was added to a 96-well plate and reacted at 37 ° C. for 30 minutes, and then absorbance was measured at 515 nm using VERSAmax and a microplate reader (Molecular Devices, USA). Antioxidant efficacy was expressed by the radical scavenging ability (IC 50 ) of the sample when the absorbance was reduced by 50%, and the data were obtained by three repeated experiments.

2) 아질산 소거능 (nitrite sacvenging ability) 측정2) Measurement of nitrite sacvenging ability

아질산 소거능은 Marcocco 등의 방법에 의해 측정하였다. 10mM sodium nitroprusside 수용액 2mL에 0.01M 인산염 버퍼 (pH 7.4) 0.5mL와 시료 용액 0.5mL를 가하여 25℃에서 100분간 반응시켰다. 이 반응액을 1mL 취해 sulfanilic acid (20% 아세트산 중의 0.33%) 1mL와 혼합한 후 5분간 방치하였다. 여기에 20% 아세트 산 중의 0.1% (w/v) 나프틸에틸렌-디아민 디히드로클로라이드 용액을 1mL 가하여 30 분간 방치 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다.Nitrite scavenging ability was measured by Marcocco et al. 0.5 mL of 0.01 M phosphate buffer (pH 7.4) and 0.5 mL of sample solution were added to 2 mL of 10 mM sodium nitroprusside aqueous solution, and the mixture was reacted at 25 ° C. for 100 minutes. 1 mL of this reaction solution was taken, mixed with 1 mL of sulfanilic acid (0.33% in 20% acetic acid), and left for 5 minutes. 1 mL of a 0.1% (w / v) naphthylethylene-diamine dihydrochloride solution in 20% acetic acid was added thereto, and the absorbance was measured at 540 nm after standing for 30 minutes.

3) 항당뇨 효과3) antidiabetic effect

당 분해 효소인 α-글루코시다아제 (Aspergillus niger) (0.9U/mL)를 100mM 인산염 버퍼(pH7.0), 2g/L 소혈청알부민, 0.2g/L NaN3, 5mM p-니트로페닐-α-D-글루코피라노시드 용액에 넣어서 사용하였다. 올리고당을 0, 1, 5, 10, 50, 100 ug/mL의 농도별로 첨가하여 효소 억제 정도를 IC50 (50% 효소 억제에 필요한 시료 농도) 값을 산출하였다. 양성 대조군으로 당뇨병 치료제인 아카보스 0.5mg/mL를 이용하였다. 각 시료는 3번씩 측정해서 평균과 표준편차 값을 구하였다.Glycolytic enzyme α-glucosidase ( Aspergillus niger ) (0.9 U / mL) in 100 mM phosphate buffer (pH 7.0), 2 g / L bovine serum albumin, 0.2 g / L NaN 3 , 5 mM p-nitrophenyl-α-D-glucopyranoside solution It was. Oligosaccharides were added at concentrations of 0, 1, 5, 10, 50 and 100 ug / mL to calculate the IC 50 (sample concentration required for 50% enzyme inhibition) value of enzyme inhibition. As a positive control, 0.5 mg / mL of acarbose, a diabetes drug, was used. Each sample was measured three times to obtain the mean and standard deviation.

4) 장건강 증진 효과4) Intestinal health promotion effect

올리고당의 장건강 증진 효과를 조사하기 위해 유익균인 비피더스균 (Bifidobacterius bifidum-KCCN12096, Bifidobacterium adolescentis-KCCM11206) 와 유해균인 살모넬라균 (Salmonella typhimurium-KCCM11806)의 생장 정도를 탄소원으로 글루코스(1%)와 올리고당(1%)를 첨가한 후 지수성장기에서 성장 속도를 비교하였다. Bifidobacterius bifidum -KCCN12096, Bifidobacterium , a beneficial bacterium, was investigated to investigate the intestinal health-promoting effects of oligosaccharides. adolescentis -KCCM11206) and the harmful bacterium Salmonella The growth rate of typhimurium -KCCM11806) was measured by adding glucose (1%) and oligosaccharides (1%) as carbon sources and comparing the growth rates in the exponential growth phase.

라. 올리고당 함유 기능성 제품 제조la. Production of oligosaccharide-containing functional products

사용된 밀가루(박력분)는 제일제당, 버터, 베이킹파우더, 탈지분유와 쇼트닝은 동서식품에서, 설탕은 삼양사, 젤라틴은 삼미산업에서 제조된 제품을 사용하였다. 올리고당은 본 발명에서 제조한 것으로 배즙 30%, 설탕 0.3M, 효소 글루칸수크라아제 (L. mesenteroides 유래) 0.1%를 넣고 28℃에서 24시간 동안 pH 5.2에서 반응시켜서 얻은 후 5배 농축한 것이다(64brix).The flour used in this study was manufactured from Cheil Jedang, butter, baking powder, skim milk powder and shortening from East-West food, sugar from Samyang, and gelatin from Sammi. Oligosaccharides prepared in the present invention is 30% pear juice, sugar 0.3M, 0.1% of enzyme glucan sucrase (from L. mesenteroides) and obtained by reacting at pH 5.2 for 24 hours at 28 5 times concentrated ( 64brix).

1) 파운드 케익1) Pound Cake

파운드 케익의 일반 조리법을 변형하여 설탕 양을 올리고당으로 조절하여 첨가하였다. 먼저 밀가루 200g, 버터 120g, 소금 2g, 쇼트닝 40g, 계란 3개(160g), 베이킹파우더 4g, 탈지분유 4g, 설탕(또는 올리고당) 160g을 섞어서 길게 사각형 모양으로 기름종이에 말아서 -20℃에 3시간 냉동시켰다. 꺼낸 반죽을 0.8cm 간격으로 절단한 후 200℃ 오븐에서 20분씩 방향 바꿔서 2번에 걸쳐 구워냈다. 여기에서 올리고당이 지니는 추가 수분함량은 첨가될 물 40g을 조절해 처리 간 표준화 하였다. 첨가된 올리고당 함량은 각 0%(+설탕 160g), 3%(+설탕 149g), 5%(+설탕 141g), 7%(+설탕 135g) 등이다. A general recipe for pound cakes was modified to add the sugar amount adjusted to oligosaccharides. First, 200g flour, 120g butter, 2g salt, 40g shortening, 3 eggs (160g), baking powder 4g, skim milk powder 4g, sugar (or oligosaccharides) 160g, rolled into oil paper in a rectangular shape for 3 hours at -20 ℃ Frozen. The dough was taken out at 0.8 cm intervals and then baked twice in a 200 ° C. oven for 20 minutes. The additional moisture content of oligosaccharides was normalized between treatments by adjusting 40 g of water to be added. The added oligosaccharide content was 0% (+ 160g sugar), 3% (+ 149g sugar), 5% (+ 141g sugar), 7% (+ 135g sugar), and so on.

2) 냉동 쿠키2) frozen cookies

쿠키의 일반 조리법을 변형하여 설탕 양을 올리고당으로 조절하여 첨가하였다. 먼저 밀가루 200g, 버터 113g, 소금 2g, 계란 1개, 베이킹파우더 2g, 설탕(또는 올리고당) 63g을 섞어서 길게 사각형 모양으로 기름종이에 말아서 -20℃에 3시 간 냉동시켰다. 꺼낸 반죽을 0.8cm 간격으로 절단한 후 180℃ 오븐에서 20분씩 방향 바꿔서 2번에 걸쳐 구워냈다. 여기에서 올리고당이 지니는 추가 수분함량은 계란 흰자부피를 줄여 처리 간 표준화 하였다. 첨가된 올리고당 함량은 각 0% (+설탕 63g), 3%(+설탕 52g), 5%(+설탕 44g), 7%(+설탕 38g) 등이다.The general recipe for cookies was modified to add the sugar amount adjusted to oligosaccharides. First, 200 g of flour, 113 g of butter, 2 g of salt, 1 egg, 2 g of baking powder, and 63 g of sugar (or oligosaccharide) were mixed, rolled into oil paper in a long square shape, and frozen at −20 ° C. for 3 hours. The dough was taken out at 0.8 cm intervals and then baked twice in a 180 ° C. oven for 20 minutes. Here, the additional moisture content of oligosaccharides was normalized between treatments by reducing egg white volume. The added oligosaccharide content is 0% (+ 63g sugar), 3% (+ 52g sugar), 5% (+ 44g sugar), 7% (+ 38g sugar) and so on.

3) 오렌지 젤리3) Orange Jelly

물 90mL에 젤라틴 3.5g, 오렌지 쥬스를 갈아서 채로 거른액 10mL을 넣고 10분간 가열한 후 실온에서 냉각, 배즙으로 만든 올리고당(28brix)과 설탕을 0% (설탕 14%), 12%(설탕 7%), 24%(설탕 0%)(v/v)를 각각 첨가하였으며, 일정한 용기에 넣고 -70℃에서 30분간 냉각시켜 올리고당 젤리를 제조하였다.Add 90 mL of gelatin, 3.5 g of gelatin, and orange juice to 90 mL of water, heat it for 10 minutes, and then cool at room temperature.Oligose sugar (28brix) and sugar made from 0% (sugar 14%) and 12% (sugar 7%) ), 24% (sugar 0%) (v / v) was added, respectively, put in a constant container and cooled to -70 ℃ for 30 minutes to prepare an oligosaccharide jelly.

4) 음료 (시호맥문동)4) Drinks (Siho Macmun-dong)

올리고당 함유 음료는 전통적으로 원기회복 및 강장효과로 알려진 시호맥문동 음료로 물 1.8L에 시호(30g), 맥문동(50g)을 넣고 100℃에서 1시간 끓인 후 찬물로 1:1로 희석한 액체에 올리고당 또는 설탕을 첨가해 준비하였다. 오미자(30g)는 꺼내기 20분 전에 넣어서 건져내야 하였다. 음료에 첨가한 올리고당은 0%(설탕14%), 12%(설탕 7%), 24%(설탕 0%)을 각각 함량을 조절해서 첨가하였다.Oligosaccharide-containing beverages are traditionally known for its rejuvenation and tonic effects. Siho-Macmun-dong beverages are made by adding Siho (30g) and Mcmun-dong (50g) to 1.8L of water and boiling at 100 ° C for 1 hour. Or by adding sugar. Schizandra chinensis (30g) had to be removed 20 minutes before taking out. Oligosaccharides added to the beverage were added with 0% (sugar 14%), 12% (sugar 7%), and 24% (sugar 0%), respectively.

마. 올리고당 함유 제품의 물리화학적 특성 및 기호도 조사hemp. Investigation of Physicochemical Properties and Preference of Oligosaccharide-Containing Products

1) 물리적 특성1) physical properties

올리고당 함유 케익, 쿠키, 젤리의 물리적 특성은 시료를 동일한 크기 (2.5x2.5cm)로 잘라내어 Rheometer(COMPAC-100, Sun scientific Co. LTD. Japan)로 경도(Hardness), 부착성(Adhesive), 씹힘성(chewiness), 끈적임(cohesiveness), 탄력성(Springiness), 휨성(resilience)을 측정하였다. Rheometer의 조건은 Distance 2mm(케익, 쿠키) 또는 20mm(젤리), Test speed 2mm/sec(케익, 쿠키) 또는 5mm/sec(젤리) 및 사용된 probe는 케익, 쿠키는 1 mm의 number 4 needle type으로 젤리는 5mm cyclidrical plunger를 이용하였다.The physical properties of oligosaccharide-containing cakes, cookies, and jelly were obtained by cutting samples to the same size (2.5x2.5 cm) and using a Rheometer (COMPAC-100, Sun scientific Co. LTD. Japan) for hardness, adhesiveness, and chewiness. Chewiness, cohesiveness, springiness, and resilience were measured. The condition of the rheometer is Distance 2mm (cake, cookie) or 20mm (jelly), Test speed 2mm / sec (cake, cookie) or 5mm / sec (jelly) and the probe used is cake, cookie is 1 mm number 4 needle type Jelly was used as a 5mm cyclidrical plunger.

2) 이화학적 특성2) Physicochemical Properties

케익과 쿠키의 이화학적 특성은 무게, 부피, 수분함유율, 색도를 조사하였으며 젤리와 음료의 이화학적 특성은 당도, 산도, pH, 색도를 조사하였다. 당도(brix)는 굴절당도계(Atago hand refractometer, Japan)로, pH는 pH meter로 측정하였으며 적정 산도(%)는 0.1N NaOH로 중화 적정하여 citric acid로 환산하였다. 시료의 색도는 색차계(color 555, color Technol System co. Japan)을 이용해 L(lightness), a(redness), b(yellowness)를 사용하였다. 무게는 저울로 측정, 부피는 메스실린더에 조를 넣어서 시료와의 차를 구하는 방법으로, 수분함유율은 5g 시료를 15분간 100℃에서 반응시켜서 증발된 수분량을 측정하였다.The physicochemical properties of cakes and cookies were examined by weight, volume, water content and color, and the physicochemical properties of jelly and beverages by sugar, acidity, pH, and color. The sugar (brix) was measured by using a refractometer (Atago hand refractometer, Japan), the pH was measured by a pH meter and the titratable acidity (%) was converted to citric acid by neutralization titration with 0.1N NaOH. The chromaticity of the sample was measured using L (lightness), a (redness), and b (yellowness) using a color difference meter (color 555, color Technol System co. Japan). The weight was measured by a balance and the volume was measured by putting a tank in a measuring cylinder to obtain a difference from the sample. The moisture content was measured by evaporating a 5 g sample at 100 ° C. for 15 minutes.

3) 기호도 조사3) sign level survey

관능검사 평가항목은 주관적인 평가로 색, 맛, 향, 촉감, 끝맛, 전체 기호도 에 대해 실시하였는데, 1에서 9까지 분류한 등급을 사용하여 평가하는 9점 기호 척도법으로 실시하였는데 1에 가까울수록 극도로 나쁘고, 9에 가까울수록 극도로 좋은 것으로 나타내었다. 패널요원은 반복적으로 훈련된 10명을 선정, 실시하였다.The sensory evaluation items were subjective evaluations on color, taste, aroma, touch, finish, and overall taste.The 9-point scale was used to evaluate using grades classified from 1 to 9. It is bad, and the closer to 9, the better. Panelists selected and conducted 10 repetitively trained individuals.

4) 통계처리4) Statistical Processing

기호도 조사를 제외한 물리적, 이화학적 특성은 3번 반복 실험하여 분석하였으며 시료들 간의 유의적 차이는 평균값에 대해 Duncan의 이중범위검정(Duncan's multiple test)으로 a=0.05 수준에서 검정하였다. 기호도 조사는 분산분석과 Duncan의 다중범위검정을 실시하여 통계 처리하였다. 모든 통계자료는 SAS 프로그램을 이용하였다.Physical and physicochemical properties except palatability were analyzed by three replicates. Significant differences between samples were tested by Duncan's Duncan's multiple test for the mean value at a = 0.05. Favorability surveys were statistically analyzed by analysis of variance and Duncan's multirange test. All statistics were taken using the SAS program.

실시예Example 1. 기능성  1. Functionality 글루코올리고당Glucooligosaccharide 생성 최적화 Generation optimization

1) 글루칸수크라아제 (L. mesenteroides)1) Glucan sucrose ( L. mesenteroides )

글루칸수크라아제 효소는 10% 이상, 배즙은 30~60%까지, 추가 설탕은 0.3M 이하로, 반응 조건은 28℃에서 18시간 이상이 되어야 50% 이상의 올리고당 생성이 되며, pH는 배즙 자체가 pH 5.2~5.5를 가지므로 따로 보정할 필요는 없다.More than 10% of glucan sucrase enzyme, up to 30-60% of pear juice, less than 0.3M of additional sugar, reaction conditions must be at least 18 hours at 28 ℃ to produce more than 50% of oligosaccharides. It has a pH of 5.2 to 5.5 and does not need to be calibrated separately.

2) 트랜스글리코시다아제 L. Amano (A. niger)2) transglycosidase L. Amano ( A. niger )

트랜스글리코시다아제 효소는 0.5% 이하 첨가해야 하고, 기질은 말토스로 25% 이상, 배즙 첨가는 30~60% 첨가해 보았으나 첨가가 올리고당 생성에 영향이 없었다. 반응 조건은 50℃에서 1시간에서 3시간 내 반응시 최적으로 생성되었다.Transglycosidase enzyme should be added less than 0.5%, the substrate was maltose more than 25%, pear juice was added 30 ~ 60%, but the addition did not affect the oligosaccharide production. Reaction conditions were optimally produced at reactions of from 1 hour to 3 hours at 50 ° C.

반응 결과, 트랜스글리코시다아제 L Amano 효소는 반응이 빨라서 1시간~2시간 내 올리고당이 많이 생성되나 시간이 지날수록 모두 재분해되어 글루코스로 돌아가는 경향을 보였고 글루칸수크라아제 효소는 반응이 느려서 12시간 이상이 지나야 올리고당이 생성되며 올리고당보다는 10당 이상의 글루칸 중합체가 형성되었다. 그러나 효소가 생성하는 올리고당은 시간에 안정적으로 글루코스로 돌아가지 않고 올리고당으로 남았다.As a result of the reaction, the transglycosidase L Amano enzyme was rapidly reacted to produce a lot of oligosaccharides within 1 to 2 hours, but as time passed, all of them showed a tendency to re-decompose and return to glucose, and the glucan sucrase enzyme was slow to react for 12 hours. After this, oligosaccharides were formed, and more than 10 glucan polymers were formed rather than oligosaccharides. However, the oligosaccharides produced by the enzyme remained oligosaccharides without returning to glucose stably in time.

트랜스글리코시다아제 L Amano 효소가 올리고당을 효율적으로 생성하는 것을 볼 수 있으나 시간이 지날수록 단당으로 돌아가는 것을 볼 수 있으며 특히 6시간 이후 급격히 사라졌다. 반대로 글루칸수크라아제에 의해 생성된 올리고당은 12시간부터 24시간이 지나자 더 많은 양이 생성되었다. 트랜스글리코시다아제 L Amano 효소는 말토스의 75%가 올리고당으로 전환되며, 글루칸수크라아제 효소는 배즙 내 설탕의 86.5%가 올리고당으로 전환되었다.It can be seen that the transglycosidase L Amano enzyme efficiently produces oligosaccharides, but over time it returns to monosaccharides, especially after 6 hours. Conversely, oligosaccharides produced by glucans sucrase produced greater amounts after 12 to 24 hours. The transglycosidase L Amano enzyme converted 75% of maltose to oligosaccharides, and the glucans sucrase enzyme converted 86.5% of sugar in pear juice to oligosaccharides.

실시예Example 2. 생성된 올리고당 구조분석 2. Oligosaccharide Structure Analysis

도 3은 트랜스글리코시다아제와 배즙을 이용하여 올리고당을 생성 후 성분 분석을 위해 1차 TLC(오른쪽)와 Two-Dimentional TLC(왼쪽)로 분석하였다. 1차 용매로 2번 전개했으며 85:20:50:50(v/v/v/v) 아세토니트릴/에틸아세테이트/1-프로판올/물 2차 용매로 2번 전개한 후 20:50:15 (v/v/v) 니트로메탄/1-프로판올/물 후 각 끝을 잘라서 standard IMn(Isomaltoseries)와 Mn (Maltose series)로 비교해 성분 분석하였다.Figure 3 after the oligosaccharides were generated using transglycosidase and pear juice was analyzed by primary TLC (right) and Two-Dimentional TLC (left) for component analysis. Developed twice with primary solvent and developed twice with 85: 20: 50: 50 (v / v / v / v) acetonitrile / ethylacetate / 1-propanol / water secondary solvent 20:50:15 ( v / v / v) After nitromethane / 1-propanol / water, each tip was cut and analyzed for comparison with standard IMn (Isomaltoseries) and Mn (Maltose series).

트랜스글리코시다아제 L Amano 효소로 만든 올리고당(T 올리고당)은 25% 글루코스(G1), 5% 말토오스(G2), 15% 이소말토오스(G2), 2% 말토트리오스(G3), 5% 판노스(G3), 8% 이소말토트리오스(G3), 40% 다당(G4<)으로 구성되었다.Oligosaccharides (T oligosaccharides) made with transglycosidase L Amano enzyme were 25% glucose (G1), 5% maltose (G2), 15% isomaltose (G2), 2% maltotriose (G3), 5% pannos (G3), 8% isomaltotriose (G3), 40% polysaccharide (G4 < ).

글루칸수크라아제 효소로 만든 올리고당(G 올리고당)은 3.5% 프락토스(S1), 17% 수크로스(S2), 20.2% 이소말토오스(S2), 9.2% 이소말토트리오스(S3), 16.1% 이소말토테트리오스(S4), 11% 이소말토판토스(S4), 13% 다당(S5<)으로 구성되었다.Oligosaccharides (G oligosaccharides) made with the glucan sucrase enzyme were 3.5% fructose (S1), 17% sucrose (S2), 20.2% isomaltose (S2), 9.2% isomaltotriose (S3), 16.1% iso Maltotetriose (S4), 11% isomaltopantose (S4), and 13% polysaccharide (S5 < ).

실시예Example 3. 올리고당의 기능성 조사 3. Functional investigation of oligosaccharides

1) 항산화 효과(DPPH법)1) Antioxidant Effect (DPPH Method)

도 4는 생성된 올리고당의 항산화 효과를 조사한 것이다. 배즙(1%), 4종류의 올리고당(1%) - 즉 트랜스글루코시다아제를 이용해 생성한 T 올리고당과 글루칸수크라아제 효소를 이용해 제조한 G 올리고당, 또한 이들을 제조시 기질로 배즙을 첨가하거나(+) 첨가하지 않고 설탕이나 말토스만을 이용해 제조한 올리고당(-)의 항산화 효과를 측정하였다.4 is to investigate the antioxidant effect of the resulting oligosaccharides. Pear juice (1%), four types of oligosaccharides (1%)-T oligosaccharides produced using transglucosidase and G oligosaccharides prepared using glucan sucase enzyme, or pear juice added to the substrate when preparing them ( Antioxidant effect of oligosaccharide (-) prepared using only sugar or maltose without +) was measured.

DPPH 소거능을 통한 항산화효과를 조사한 결과, 배즙 자체는 0.2 mM vitC 효과가 있었으며, 올리고당 중에는 G 올리고당의 배즙 첨가 없이 제조된 올리고당이 가장 높은 1.44mM VitC 효과가 있었다.As a result of examining the antioxidant effect through DPPH scavenging activity, pear juice itself had 0.2 mM vitC effect, and among oligosaccharides, oligosaccharide prepared without the addition of G oligosaccharide had the highest 1.44 mM VitC effect.

2) 아질산염 소거능 효과2) nitrite scavenging effect

도 5는 생성된 올리고당의 아질산염 소거 효과를 조사한 것이다. 배즙(1%), 4종류의 올리고당(1%) - 즉 트랜스글루코시다아제를 이용해 생성한 T 올리고당과 글루칸수크라아제 효소를 이용해 제조한 G 올리고당, 또한 이들을 제조시 기질로 배즙을 첨가하거나(+) 첨가하지 않고 설탕이나 말토스만을 이용해 제조한 올리고당(-)의 항산화 효과를 측정하였다.5 is to investigate the nitrite scavenging effect of the resulting oligosaccharides. Pear juice (1%), four types of oligosaccharides (1%)-T oligosaccharides produced using transglucosidase and G oligosaccharides prepared using glucan sucase enzyme, or pear juice added to the substrate when preparing them ( Antioxidant effect of oligosaccharide (-) prepared using only sugar or maltose without +) was measured.

아질산염 소거 정도를 측정한 결과, 배즙 자체도 12%까지 소거 효과가 있었으며, 올리고당 중에는 G 올리고당이 T 올리고당보다 2배 정도 소거능이 나타났으며 배즙을 첨가해 생성된 T 올리고당이 첨가하지 않고 생성된 T 올리고당보다 2배 가까이 소거 효능이 있었다.As a result of measuring the degree of nitrite scavenging, the pear juice itself had a scavenging effect up to 12%. Among the oligosaccharides, G oligosaccharides showed two times more scavenging activity than T oligosaccharides. Nearly twice as effective as oligosaccharides.

3) 항당뇨 효과3) antidiabetic effect

생성된 올리고당에 대한 항당뇨 효과를 조사하기 위해 α-글루코시다아제 억제 정도를 관찰하였는데 모든 시료는 1%로 준비하였고 배즙, T 올리고당(트랜스글리코시다아제)과 G 올리고당(글루칸수크라아제) 관련 효소 억제 정도를 %로 계산하였다.To investigate the anti-diabetic effect on the resulting oligosaccharides, the degree of α-glucosidase inhibition was observed. All samples were prepared at 1% and related to pear juice, T oligosaccharides (transglycosidase) and G oligosaccharides (glucan sucrase). Enzyme inhibition was calculated in%.

도 6은 생성된 올리고당의 항당뇨 효과를 조사한 것이다. 배즙(1%), 글루코스(1%), 프락토스(1%), T 올리고당(1%)와 G 올리고당(1%)를 α-글루코시다아제 효소와 10분간 37℃에서 반응시킨 후 효소 억제 정도를 측정하였다. 배즙이나 올리고당의 당 분해 정도를 측정시 양성 대조군으로 글루코스, 프락토스, 말토오스, 수크로스를 사용하였다.6 is to investigate the anti-diabetic effect of the resulting oligosaccharides. Pear juice (1%), glucose (1%), fructose (1%), T oligosaccharides (1%) and G oligosaccharides (1%) were reacted with α-glucosidase enzyme at 37 ° C for 10 minutes to inhibit enzyme The degree was measured. Glucose, fructose, maltose and sucrose were used as a positive control when measuring the degree of sugar degradation of pear juice or oligosaccharide.

α-글루코시다아제 억제 정도를 측정한 결과 배즙 자체는 10%까지, 단당류는 11-18% 억제를 보였으며 두가지 올리고당은 비슷하게 32-39%까지 당분해 효소를 억제함으로써 배즙이나 단당류보다는 20-25% 항당뇨 효과가 있음을 확인하였다.As a result of measuring α-glucosidase inhibition, up to 10% of pear juice itself and 11-18% of monosaccharides were inhibited, and two oligosaccharides similarly inhibited glycolytic enzymes by 32-39%, 20-25 than pear juice or monosaccharides. It was confirmed that the anti-diabetic effect.

4) 장건강 증진 효과4) Intestinal health promotion effect

도 7은 글루코스를 탄소원으로 사용할 때 얻어지는 각 균의 성장에 비교한 상대적인 성장 정도(%)를 비교하여 측정하였다. 각 탄소원으로 글루코스, 2가지 효소인 트랜스글리코시다아제, 글루칸수크라아제와 배즙을 이용해 생성된 올리고당 1%씩 첨가해서 넣고 37℃에서 배양하였다. 균의 성장 곡선은 파장 600 nm에서 측정하였다.Figure 7 was measured by comparing the relative growth (%) compared to the growth of each bacteria obtained when using glucose as a carbon source. Each carbon source was added with glucose, two enzymes, transglycosidase, glucan sucrase, and 1% of oligosaccharides produced using pear juice and incubated at 37 ° C. The growth curve of the bacteria was measured at a wavelength of 600 nm.

글루코스를 탄소원으로 사용할 때 얻어지는 각 균의 성장에 비교한 상대적인 성장 정도를 비교한 결과, 올리고당을 첨가해 준 것이 글루코스만 첨가한 것에 비해서 Bifidobacterium균의 성장 촉진 효과가 있고 유해균인 Salmonella균에 대해서는 38-40% 정도 생장 억제 효과를 확인하였다.As a result of comparing the relative growth level compared to the growth of each bacteria obtained when using glucose as a carbon source, it was found that the addition of oligosaccharides promoted the growth of Bifidobacterium bacteria and the harmful bacteria Salmonella bacteria compared to that of glucose alone. About 40% growth inhibition effect was confirmed.

실시예Example 4. 배즙을 이용해 제조된 기능성 올리고당 이용 제품 4. Products using functional oligosaccharides prepared using pear juice

도 8은 배즙을 이용한 올리고당 제조 및 농축(조미료)을 보여준다. 도 9 내지 도 12는 각각 올리고당을 이용한 파운드케익, 쿠키, 젤리 및 음료 제조(생맥산)를 보여준다.8 shows oligosaccharide preparation and concentration (seasoning) using pear juice. 9-12 show pound cakes, cookies, jelly, and beverage preparation (raw malic acid) using oligosaccharides, respectively.

올리고당 64%를 사용하여 파운드케익, 쿠키, 젤리 및 생맥산 음료를 제조하였고 케익의 경우 3%가 기호도와 물리적 특성(씹힙성, 색도,등)이 가장 우수하였으 며 쿠키의 경우 5%가 가장 선호되었다. 젤리의 경우 배즙 올리고당만 첨가한 것보다는 오렌지즙이 첨가된 것이, 올리고당 첨가량별로는 올리고당과 설탕을 혼합해서 첨가한 것이 올리고당만 또는 설탕만 첨가한 것보다 선호도가 높았다. 생맥산 음료에 첨가된 올리고당은 설탕만 첨가한 것을 선호하는 것으로 나타났다.Pound cakes, cookies, jelly and raw maize beverages were prepared using 64% oligosaccharides, with 3% having the highest palatability and physical properties (chewability, color, etc.) and 5% being the most preferred for cookies. . In the case of jelly, orange juice was added rather than pear oligosaccharide only, and oligosaccharide was more preferred by adding oligosaccharide and sugar than oligosaccharide or sugar alone. Oligosaccharides added to the draft liquor were found to favor the addition of sugar only.

실시예Example 5. 기능성 올리고당 제품의 물리화학적 특성 및 기호도 조사 5. Investigation of Physicochemical Properties and Preference of Functional Oligosaccharide Products

1) 올리고당 함유 파운드케익1) Oligosaccharide-containing Pound Cake

가) 물리적 특성A) physical properties;

올리고당
함유량
oligosaccharide
content
Hardness
(g)
Hardness
(g)
Adhesiveness
(g.sec)
Adhesiveness
(g.sec)
Springiness
(mm)
Springiness
(mm)
CohesivenessCohesiveness GumminessGumminess ChewinessChewiness ResilienceResilience
0%0% 457.7457.7 -0.12-0.12 0.900.90 0.650.65 298.3298.3 267.1267.1 0.290.29 3%3% 353.8353.8 -0.52-0.52 0.900.90 0.710.71 249.8249.8 225.1225.1 0.310.31 5%5% 520.2520.2 -0.71-0.71 0.910.91 0.660.66 344.7344.7 314.6314.6 0.290.29 7%7% 495.2495.2 -1.34-1.34 0.880.88 0.660.66 326.4326.4 288.6288.6 0.290.29

나) 이화학적 특성 B) Physicochemical properties

올리고당
함유량
oligosaccharide
content
무게
(g)
weight
(g)
부피
(ml)
volume
(ml)
수분함유율
(%)
Water content
(%)
Color valuesColor values
LL aa bb 0%0% 82.7082.70 113.33113.33 23.0323.03 81.4881.48 -3.56-3.56 34.3734.37 3%3% 83.5683.56 128.00128.00 22.1322.13 79.9079.90 -2.90-2.90 32.5932.59 5%5% 82.2082.20 114.00114.00 23.0023.00 75.8375.83 -0.70-0.70 34.8234.82 7%7% 81.2381.23 77.3377.33 22.5322.53 75.3475.34 0.350.35 34.8534.85

다) 기호도 조사C) symbology investigation

올리고당
함유량
oligosaccharide
content
color flavor incense 촉감touch 끝맛Finish 전체 기호도Overall likelihood
0%0% 7.407.40 7.407.40 7.607.60 8.008.00 7.607.60 7.207.20 3%3% 8.608.60 8.608.60 8.208.20 8.608.60 8.408.40 8.608.60 5%5% 6.806.80 7.607.60 6.806.80 7.207.20 7.607.60 7.007.00 7%7% 5.805.80 7.407.40 6.806.80 7.007.00 7.007.00 6.006.00

올리고당 5%를 첨가시 가장 경도와 탄력성이 높았고 부착성은 3% 올리고당 함유 케익이 가장 높았다. 무게나 부피는 5% 첨가시료가 가장 컸으나 수분은 무첨가시료가 가장 높았다. 색도는 올리고당 첨가량이 많을수록 색이 어두워 졌으며 노 란색을 나타내는 b값은 유의적 차이를 보이지 않았다. 기호도 조사 결과, 3% 첨가 시료가 가장 선호되었으며 특히 색과 촉감에서 큰 점수를 받았다.The addition of 5% oligosaccharides showed the highest hardness and elasticity and the highest adhesiveness of the cake containing 3% oligosaccharides. The weight and volume of the 5% added sample were the largest, but the moisture-free sample was the highest. The chromaticity became darker as the amount of oligosaccharide added, and the value of b, which was yellow, showed no significant difference. The palatability test showed that the 3% addition sample was the most preferred, especially in terms of color and touch.

2) 올리고당 함유 냉동 쿠키2) oligosaccharide-containing frozen cookies

가) 물리적 특성A) physical properties;

올리고당
함유량
oligosaccharide
content
Hardness
(g)
Hardness
(g)
Adhesiveness
(g.sec)
Adhesiveness
(g.sec)
Springiness
(mm)
Springiness
(mm)
CohesivenessCohesiveness GumminessGumminess ChewinessChewiness ResilienceResilience
0%0% 557.48557.48 -13.14-13.14 0.810.81 0.040.04 24.3224.32 19.7319.73 0.020.02 3%3% 779.39779.39 -5.29-5.29 0.720.72 0.080.08 62.8462.84 49.2949.29 0.030.03 5%5% 320.46320.46 -5.86-5.86 0.760.76 0.080.08 18.1018.10 14.1414.14 0.020.02 7%7% 508.92508.92 -8.77-8.77 0.870.87 0.080.08 38.9938.99 34.1234.12 0.020.02

나) 이화학적 특성 B) Physicochemical properties

올리고당
함유량
oligosaccharide
content
무게
(g)
weight
(g)
부피
(ml)
volume
(ml)
수분함유율
(%)
Water content
(%)
Color valuesColor values
LL aa bb 0%0% 10.4010.40 52.6752.67 2.552.55 58.0358.03 14.3714.37 40.0240.02 3%3% 9.609.60 48.6748.67 2.972.97 45.9245.92 15.8015.80 32.9132.91 5%5% 11.8611.86 55.3355.33 3.203.20 41.2041.20 15.3015.30 29.7929.79 7%7% 11.6311.63 48.3348.33 2.832.83 39.6639.66 14.6514.65 28.5228.52

다) 기호도 조사C) symbology investigation

올리고당
함유량
oligosaccharide
content
color flavor incense 촉감touch 끝맛Finish 전체 기호도Overall likelihood
0%0% 8.008.00 7.407.40 7.807.80 7.807.80 8.008.00 7.607.60 3%3% 7.607.60 8.208.20 7.007.00 7.407.40 8.208.20 7.407.40 5%5% 6.606.60 6.406.40 5.805.80 7.007.00 5.605.60 6.406.40 7%7% 5.805.80 6.806.80 5.005.00 6.606.60 5.405.40 5.605.60

올리고당 3%를 첨가시 가장 경도와 씹힘성이 높았고, 탄력성은 7% 올리고당 함유 쿠키가 가장 높았다. 무게, 부피, 수분은 5% 이상 첨가시료가 가장 컸으며 색도는 올리고당 첨가량이 적을수록 색이 어두워 졌으며 노란색을 나타내는 b값은 올리고당이 첨가되지 않는 시료가 높았다. 기호도 조사 결과, 올리고당 무첨가가 선호되었으며 특히 향과 색도에서 낮은 점수를 받았다.The addition of 3% oligosaccharides showed the highest hardness and chewiness, and the highest resilience of cookies containing 7% oligosaccharides. The weight, volume, and moisture were the highest in the sample added more than 5%. The color was darker as the amount of oligosaccharide was added. In the palatability survey, oligosaccharide-free was preferred, with low scores in terms of flavor and color.

3) 올리고당 함유 젤리3) Oligosaccharide-containing Jelly

가) 물리적 특성A) physical properties;

올리고당
함유량
oligosaccharide
content
Hardness
(g)
Hardness
(g)
Springiness
(mm)
Springiness
(mm)
CohesivenessCohesiveness GumminessGumminess ChewinessChewiness ResilienceResilience
0%0% 55.1955.19 2.132.13 0.750.75 46.7946.79 69.9169.91 0.800.80 12%12% 63.7163.71 1.751.75 0.950.95 53.5653.56 84.0284.02 0.840.84 24%24% 60.5760.57 1.151.15 0.950.95 57.5357.53 62.7862.78 0.780.78

나) 이화학적 특성B) Physicochemical properties

올리고당
함유량
oligosaccharide
content
당도Sugar content 산도Acidity pH valuepH value Color valuesColor values
LL aa bb 0%0% 8.07 8.07 0.68 0.68 4.32 4.32 40.37 40.37 -3.11 -3.11 35.02 35.02 12%12% 6.27 6.27 0.77 0.77 4.21 4.21 44.47 44.47 -4.97 -4.97 37.53 37.53 24%24% 6.80 6.80 0.84 0.84 4.28 4.28 43.51 43.51 -3.30 -3.30 37.70 37.70

다) 기호도 조사C) symbology investigation

올리고당
함유량
oligosaccharide
content
color flavor incense 촉감touch 끝맛Finish 전체 기호도Overall likelihood
0%0% 7.507.50 6.836.83 7.337.33 7.507.50 6.836.83 7.007.00 12%12% 7.837.83 8.168.16 8.168.16 7.837.83 8.008.00 7.807.80 24%24% 7.507.50 7.507.50 7.837.83 7.507.50 7.167.16 7.407.40

올리고당 24%를 첨가시 가장 경도와 부착성이 높았고, 탄력성은 0% 올리고당 함유 젤리가 가장 높았다. 당도는 무첨가가, 산도는 24% 첨가 시료가 가장 높고 색도는 올리고당 첨가량이 많을수록 색이 밝아졌으며 노란색을 나타내는 b값도 높았다. 기호도 조사 결과, 올리고당 12%가 가장 선호되었으며 특히 향과 색도에서 높은 점수를 받았다.The addition of 24% oligosaccharides showed the highest hardness and adhesion, and the highest elasticity was 0% oligosaccharide-containing jelly. The highest sugar content was added, the acidity was 24%, and the color was brighter as the oligosaccharides were added. In the palatability survey, 12% of oligosaccharides were the most preferred, with high scores especially in fragrance and color.

4) 올리고당 함유 음료(시호맥문동)4) Oligosaccharide-containing beverages (Shihomacmun-dong)

가) 이화학적 특성Physicochemical Properties

올리고당
함유량
oligosaccharide
content
당도Sugar content 산도Acidity pH valuepH value Color valuesColor values
LL aa bb 무첨가No additives 1.071.07 0.440.44 3.303.30 85.9385.93 0.180.18 10.2110.21 0%0% 12.3012.30 0.500.50 4.054.05 86.8086.80 -1.47-1.47 18.2418.24 12%12% 9.909.90 0.510.51 3.773.77 88.9688.96 -0.77-0.77 23.9923.99 24%24% 7.937.93 0.500.50 3.303.30 87.2587.25 0.420.42 11.2111.21

나) 기호도 조사B) surveying symbols

올리고당
함유량
oligosaccharide
content
color flavor incense 끝맛Finish 전체 기호도Overall likelihood
무첨가No additives 6.666.66 5.805.80 7.837.83 5.605.60 6.336.33 0%0% 7.337.33 7.607.60 7.507.50 7.407.40 7.007.00 12%12% 7.507.50 8.408.40 8.168.16 7.407.40 8.008.00 24%24% 7.667.66 7.407.40 7.667.66 7.207.20 7.667.66

*무첨가란 설탕이나 올리고당을 전혀 첨가하지 않은 음료임.* No additives are drinks without added sugar or oligosaccharides.

당도와 pH 값은 0% 음료가 가장 높고 색도는 올리고당 첨가 12% 음료가 가장 밝았으며 노란색을 나타내는 b값도 높았다. 기호도 조사 결과, 올리고당 12%가 가장 선호되었으며 특히 향과 맛에서 높은 점수를 받았다.The sugar and pH values were highest in 0% beverages, the highest in color and 12% beverages in oligosaccharides. The palatability survey showed that 12% of oligosaccharides were the most preferred, with high scores especially in aroma and taste.

도 1은 2가지 효소 (트랜스글리코시다아제와 글루칸수크라아제)와 배즙을 이용하여 올리고당을 생성 후, 당 표준물질들과 같이 TLC 분석한 결과이다. 반응조건은 1시간 또는 18시간으로 반응, 트랜스글리코시다아제 효소반응은 0.5% 효소, 기질 30% + 배즙 30%, 60℃, pH 5.2; 글루칸수크라아제 효소 반응은 10% 효소, 기질 0.3M + 배즙 30%, 28℃, pH 5.2 이다.1 shows oligosaccharides using two enzymes (transglycosidase and glucan sukrase) and pear juice, followed by TLC analysis with sugar standards. Reaction conditions were 1 hour or 18 hours, transglycosidase enzyme reaction was 0.5% enzyme, substrate 30% + pear juice 30%, 60 ℃, pH 5.2; The glucan sucrase enzyme reaction is 10% enzyme, substrate 0.3M + pear juice 30%, 28 ° C., pH 5.2.

도 2는 2가지 효소인 트랜스글리코시다아제(윗쪽)와 글루칸수크라아제(아래쪽)로 0.5시간-24시간까지 시간별로 반응시킨 올리고당의 TLC 분석 결과이다.FIG. 2 shows the results of TLC analysis of oligosaccharides reacted with two enzymes, transglycosidase (top) and glucan sucase (bottom), for 0.5 hours to 24 hours.

도 3은 트랜스글리코시다아제와 배즙을 이용하여 올리고당을 생성 후 성분 분석을 위해 1차 TLC(오른쪽)와 Two-Dimentional TLC(왼쪽)로 분석하였다. 1차 용매로 2번 전개했으며 85:20:50:50(v/v/v/v) 아세토니트릴/에틸아세테이트/1-프로판올/물 2차 용매로 2번 전개한 후 20:50:15 (v/v/v) 니트로메탄/1-프로판올/물 후 각 끝을 잘라서 standard IMn(Isomaltoseries)와 Mn (Maltose series)로 비교해 성분 분석하였다.Figure 3 after the oligosaccharides were generated using transglycosidase and pear juice was analyzed by primary TLC (right) and Two-Dimentional TLC (left) for component analysis. Developed twice with primary solvent and developed twice with 85: 20: 50: 50 (v / v / v / v) acetonitrile / ethylacetate / 1-propanol / water secondary solvent 20:50:15 ( v / v / v) After nitromethane / 1-propanol / water, each tip was cut and analyzed for comparison with standard IMn (Isomaltoseries) and Mn (Maltose series).

도 4는 생성된 올리고당의 항산화 효과를 조사한 것이다. 배즙(1%), 4종류의 올리고당(1%) - 즉 트랜스글루코시다아제를 이용해 생성한 T 올리고당과 글루칸수크라아제 효소를 이용해 제조한 G 올리고당, 또한 이들을 제조시 기질로 배즙을 첨가하거나(+) 첨가하지 않고 설탕이나 말토스만을 이용해 제조한 올리고당(-)의 항산화 효과를 측정하였다.4 is to investigate the antioxidant effect of the resulting oligosaccharides. Pear juice (1%), four types of oligosaccharides (1%)-T oligosaccharides produced using transglucosidase and G oligosaccharides prepared using glucan sucase enzyme, or pear juice added to the substrate when preparing them ( Antioxidant effect of oligosaccharide (-) prepared using only sugar or maltose without +) was measured.

도 5는 생성된 올리고당의 아질산염 소거 효과를 조사한 것이다. 배즙(1%), 4종류의 올리고당(1%) - 즉 트랜스글루코시다아제를 이용해 생성한 T 올리고당과 글루칸수크라아제 효소를 이용해 제조한 G 올리고당, 또한 이들을 제조시 기질로 배즙을 첨가하거나(+) 첨가하지 않고 설탕이나 말토스만을 이용해 제조한 올리고당(-)의 항산화 효과를 측정하였다.5 is to investigate the nitrite scavenging effect of the resulting oligosaccharides. Pear juice (1%), four types of oligosaccharides (1%)-T oligosaccharides produced using transglucosidase and G oligosaccharides prepared using glucan sucase enzyme, or pear juice added to the substrate when preparing them ( Antioxidant effect of oligosaccharide (-) prepared using only sugar or maltose without +) was measured.

도 6은 생성된 올리고당의 항당뇨 효과를 조사한 것이다. 배즙(1%), 글루코스(1%), 프락토스(1%), T 올리고당(1%)와 G 올리고당(1%)를 α-글루코시다아제 효소와 10분간 37℃에서 반응시킨 후 효소 억제 정도를 측정하였다. 배즙이나 올리고당의 당 분해 정도를 측정시 양성 대조군으로 글루코스, 프락토스, 말토오스, 수크로스를 사용하였다.6 is to investigate the anti-diabetic effect of the resulting oligosaccharides. Pear juice (1%), glucose (1%), fructose (1%), T oligosaccharides (1%) and G oligosaccharides (1%) were reacted with α-glucosidase enzyme at 37 ° C for 10 minutes to inhibit enzyme The degree was measured. Glucose, fructose, maltose and sucrose were used as a positive control when measuring the degree of sugar degradation of pear juice or oligosaccharide.

도 7은 글루코오스를 탄소원으로 사용할 때 얻어지는 각 균의 성장에 비교한 상대적인 성장 정도(%)를 비교하여 측정하였다. 각 탄소원으로 글루코스, 2가지 효소인 트랜스글리코시다아제, 글루칸수크라아제와 배즙을 이용해 생성된 올리고당 1%씩 첨가해서 넣고 37℃에서 배양하였다. 균의 성장 곡선은 파장 600 nm에서 측정하였다.Figure 7 was measured by comparing the relative growth (%) compared to the growth of each bacteria obtained when using glucose as a carbon source. Each carbon source was added with glucose, two enzymes, transglycosidase, glucan sucrase, and 1% of oligosaccharides produced using pear juice and incubated at 37 ° C. The growth curve of the bacteria was measured at a wavelength of 600 nm.

도 8은 배즙을 이용한 올리고당 제조 및 농축(조미료)을 보여준다.8 shows oligosaccharide preparation and concentration (seasoning) using pear juice.

도 9 내지 도 12는 각각 올리고당을 이용한 파운드케익, 쿠키, 젤리 및 음료 제조(생맥산)를 보여준다.9-12 show pound cakes, cookies, jelly, and beverage preparation (raw malic acid) using oligosaccharides, respectively.

Claims (6)

배즙 30~60 중량부, 글루칸수크라아제 효소 10~30 중량부 및 설탕 3~10 중량부를 혼합하고, 26~30℃에서 18~24시간 동안 반응시켜 배즙의 75~89%를 글루코올리고당으로 전환시키는 것을 포함하는 배즙으로부터 항당뇨 증진 효과 및 장 건강 증진 효과를 갖는 글루코올리고당의 제조 방법.30 to 60 parts by weight of pear juice, 10 to 30 parts by weight of glucan sucrase enzyme and 3 to 10 parts by weight of sugar are mixed, and 75 to 89% of pear juice is converted to gluco-oligosaccharide by reacting at 26 to 30 ° C. for 18 to 24 hours. A method for producing gluco oligosaccharides having an antidiabetic enhancing effect and an intestinal health enhancing effect from a pear juice comprising 삭제delete 삭제delete 삭제delete 제1항의 방법에 의해 제조된 항당뇨 증진 효과 및 장 건강 증진 효과를 갖는 글루코올리고당.Gluco-oligosaccharides having an anti-diabetic effect and an intestinal health-promoting effect produced by the method of claim 1. 제5항에 따른 글루코올리고당을 함유하는 식품.Food containing a glucomoligosaccharide according to claim 5.
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