KR101061140B1 - Method for preparing phospholipids using supercritical fluid - Google Patents
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Abstract
본 발명은 (a) 인지질이 포함된 천연원(natural source)을 초임계유체와 변형제(modifier)로서의 비극성 용매 또는 극성 용매의 혼합물에 접촉시켜 인지질 이외의 다른 물질을 추출 제거하는 단계; 및 (b) 상기 단계 (a)의 추출잔여물을 초임계유체와 변형제(modifier)로서의 극성 용매 또는 비극성 용매의 혼합물에 접촉시켜 인지질 이외의 다른 물질을 추출 제거하여 인지질을 수득하는 단계를 포함하며, 단계 (a)에서 변형제로서 비극성 용매가 이용된 경우에는 단계 (b)에서 극성 용매가 이용되고 단계 (a)에서 변형제로서 극성 용매가 이용된 경우에는 단계 (b)에서 비극성 용매가 이용되는 것을 특징으로 하는 인지질의 제조방법에 관한 것이다.The present invention comprises the steps of (a) contacting a natural source containing phospholipids with a mixture of a supercritical fluid and a nonpolar solvent or a polar solvent as a modifier to extract and remove substances other than phospholipids; And (b) contacting the extraction residue of step (a) with a mixture of a supercritical fluid and a polar solvent or a nonpolar solvent as a modifier to extract and remove other substances than phospholipids to obtain phospholipids. If a nonpolar solvent is used as a modifier in step (a), a polar solvent is used in step (b) and a nonpolar solvent is used in step (b) if a polar solvent is used as modifier in step (a). It relates to a method for producing a phospholipid, characterized in that it is used.
본 발명의 방법에 따르면, 인지질 천연원으로부터 비교적 간단한 공정 및 단축된 시간으로 인지질을 효율적으로 분리할 수 있다.According to the method of the present invention, the phospholipid can be efficiently separated from the phospholipid natural source in a relatively simple process and in a short time.
인지질, 레시틴, 분리, 정제, 초임계유체 Phospholipids, Lecithin, Isolation, Purification, Supercritical Fluids
Description
본 발명은 초임계유체를 이용한 인지질의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for preparing phospholipids using a supercritical fluid.
인지질, 특히 레시틴은 비누, 크림, 로션 및 다른 에멀젼 조성물에서 중요한 성분 중 하나이다. 레시틴을 포함하는 에멀젼은 피부 보습 작용을 하고, 의약용도의 연고로 일반적으로 이용된다. 레시틴은 대두 및 난(egg)과 같은 다양한 천연원으로부터 유래되며, 액상, 분말, 그래뉼 제형으로 생산될 수 있다.Phospholipids, in particular lecithin, are one of the important ingredients in soaps, creams, lotions and other emulsion compositions. Emulsions containing lecithin moisturize the skin and are commonly used as ointments for medical use. Lecithin is derived from various natural sources, such as soybeans and eggs, and can be produced in liquid, powder, granule formulations.
한편, 인지질, 특히 레시틴의 다양한 생물학적 활성이 알려져 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,498,607호에 따르면, 콜레스테롤을 환원시키는 레시틴의 용도가 개시되어 있고, 미국 특허 제4,221,784호는 레시틴을 경구 투여하여 기억력 손상을 복구할 수 있다고 기재하고 있다. 또한, 레시틴은 총 콜레스테롤 및 트리글라이세라이드를 감소시키는 데 효과적이라는 사실도 알려져 있다(Wilson, T., et al., "Soy Lecithin Reduces Plasma Lipoprotein Cholesterol and Early Atherogenisis in Hypercholesterolemic Monkeys and Hamsters: Beyond Linoleate", Atherosclerosis, 140:147-153(1998)).On the other hand, various biological activities of phospholipids, in particular lecithin, are known. For example, US Pat. No. 5,498,607 discloses the use of lecithin to reduce cholesterol, and US Pat. No. 4,221,784 describes that memory damage can be repaired by oral administration of lecithin. It is also known that lecithin is effective in reducing total cholesterol and triglycerides (Wilson, T., et al., "Soy Lecithin Reduces Plasma Lipoprotein Cholesterol and Early Atherogenisis in Hypercholesterolemic Monkeys and Hamsters: Beyond Linoleate"). , Atherosclerosis , 140: 147-153 (1998).
더불어, 레시틴은 LDL 콜레스테롤을 감소시키고 HDL 콜레스테롤을 증가시키며 동맥 플라크를 감소시키는 작용을 한다(Wojcicki, J. et al., "Clinical Evaluation of Lecithin as a Lipid-lowering Agent"; Hunt, C. et al., "Hyperlipoproteinaemia and Atherosclerosis in Rabbits Fed Low-level Cholesterol and Lecithin", British J. of Experimental Pathology 66:35-46(1985)). 미국 특허 제4,783,450호는 경피 투여 제형에 있어서 피부투과 촉진제로서의 레시틴의 용도가 개시되어 있다. In addition, lecithin reduces LDL cholesterol, increases HDL cholesterol and reduces arterial plaques (Wojcicki, J. et al., "Clinical Evaluation of Lecithin as a Lipid-lowering Agent"; Hunt, C. et al. ., "Hyperlipoproteinaemia and Atherosclerosis in Rabbits Fed Low-level Cholesterol and Lecithin", British J. of Experimental Pathology 66: 35-46 (1985). US Pat. No. 4,783,450 discloses the use of lecithin as a skin penetration enhancer in transdermal dosage forms.
이러한 다양한 생물학적 활성 및 용도를 가지고 있는 레시틴을 천연원으로부터 순수 분리하려는 다양한 시도가 있었다.Various attempts have been made to purely separate lecithin from its natural sources with these diverse biological activities and uses.
예를 들어, 미국 특허 제5028449호는 난황을 적절하게 열처리하고 냉장처리하여 인지질을 분리하는 방법을 개시하고 있다. 미국 특허 제4367178호 및 제4560513호는 초임계유체를 이용하여 레시틴을 분리하는 방법을 개시하고 있다.For example, US Pat. No. 50,248,49 discloses a method for separating phospholipids by appropriately heat treating and refrigerated egg yolk. US Pat. Nos. 4,367,178 and 4560513 disclose methods for separating lecithin using supercritical fluids.
그러나, 천연원으로부터 레시틴을 분리/정제함에 있어서 효율성 및 경제성을 개선할 필요는 여전히 남아 있다.However, there remains a need to improve efficiency and economics in separating / purifying lecithin from natural sources.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.Numerous papers and patent documents are referenced and cited throughout this specification. The disclosures of the cited papers and patent documents are incorporated herein by reference in their entirety to better understand the state of the art to which the present invention pertains and the content of the present invention.
본 발명자들은 천연원(natural sources)으로부터 인지질을 순수분리할 수 있는 보다 효율적인 방법을 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 본 발명자들은 초임계유체와 변형제의 적합한 조합을 이용하여 초임계추출을 실시하는 경우에는 보다 효율적으로 인지질을 상당한 순도로 분리/정제할 수 있음을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.The inventors have sought to develop a more efficient way to purely separate phospholipids from natural sources. As a result, the present inventors have completed the present invention by confirming that phospholipids can be separated / purified with considerable purity more efficiently when supercritical extraction is performed using a suitable combination of a supercritical fluid and a modifier. .
따라서 본 발명의 목적은 인지질의 제조방법을 제공하는 데 있다.It is therefore an object of the present invention to provide a method for preparing phospholipids.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다. Other objects and advantages of the present invention will become more apparent from the following detailed description of the invention, claims and drawings.
본 발명의 양태에 따르면, 본 발명은 (a) 인지질이 포함된 천연원(natural source)을 초임계유체와 변형제(modifier)로서의 비극성 용매 또는 극성 용매의 혼합물에 접촉시켜 인지질 이외의 다른 물질을 추출 제거하는 단계; 및 (b) 상기 단계 (a)의 추출잔여물을 초임계유체와 변형제(modifier)로서의 극성 용매 또는 비극성 용매의 혼합물에 접촉시켜 인지질 이외의 다른 물질을 추출 제거하여 인지질을 수득하는 단계를 포함하며, 단계 (a)에서 변형제로서 비극성 용매가 이용된 경우에는 단계 (b)에서 극성 용매가 이용되고 단계 (a)에서 변형제로서 극성 용매가 이용된 경우에는 단계 (b)에서 비극성 용매가 이용되는 것을 특징으로 하는 인지질의 제조방법을 제공한다.According to an aspect of the present invention, the present invention is directed to contacting a natural source containing phospholipids with a mixture of a supercritical fluid and a nonpolar or polar solvent as a modifier to form a substance other than phospholipids. Extracting and removing; And (b) contacting the extraction residue of step (a) with a mixture of a supercritical fluid and a polar solvent or a nonpolar solvent as a modifier to extract and remove other substances than phospholipids to obtain phospholipids. If a nonpolar solvent is used as a modifier in step (a), a polar solvent is used in step (b) and a nonpolar solvent is used in step (b) if a polar solvent is used as modifier in step (a). It provides a method for producing a phospholipid, characterized in that it is used.
본 발명자들은 천연원(natural sources)으로부터 인지질을 순수분리할 수 있는 보다 효율적인 방법을 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 본 발명자들은 초임계유체와 변형제의 적합한 조합을 이용하여 초임계추출을 실시하는 경우에는 보다 효율적으로 인지질을 상당한 순도로 분리/정제할 수 있음을 확인하였다.The inventors have sought to develop a more efficient way to purely separate phospholipids from natural sources. As a result, the inventors of the present invention confirmed that when supercritical extraction is performed using a suitable combination of a supercritical fluid and a modifying agent, the phospholipid can be separated / purified with considerable purity.
본 발명의 방법은 다양한 인지질 천연원에 적용되어 인지질을 순수 분리한다. 본 발명에서 이용될 수 있는 인지질 천연원은 인지질을 포함하는 어떠한 천연원도 포함하며, 바람직하게는 대두 또는 난(egg)이고, 가장 바람직하게는 대두이다. The method of the present invention is applied to various phospholipid natural sources to purely separate phospholipids. Phospholipid natural sources that can be used in the present invention include any natural source including phospholipids, preferably soy or eggs, most preferably soybean.
본 발명은 기본적으로 초임계유체 추출 과정을 따른다. 본 발명에서 이용되는 초임계유체는 당업계에서 이용되는 다양한 초임계유체를 포함한다. The present invention basically follows the supercritical fluid extraction process. Supercritical fluids used in the present invention include various supercritical fluids used in the art.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에서 이용되는 초임계유체는 이산화탄소, 암모니아, 질소, 산소, 헬륨, SO2, 에탄, 에틸렌, 프로판, 프로필렌, 설퍼 헥사플루오라이드, 니트러스 옥사이드, 클로로트리플루오로메탄, 모노플루오로메탄, 제논 및 그의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된다.According to a preferred embodiment of the present invention, the supercritical fluid used in the present invention is carbon dioxide, ammonia, nitrogen, oxygen, helium, SO 2 , ethane, ethylene, propane, propylene, sulfur hexafluoride, nitrile oxide, chlorotri Fluoromethane, monofluoromethane, xenon and combinations thereof.
가장 바람직하게는 본 발명에서 이용되는 초임계유체는 이산화탄소이다. 이산화탄소는 대기의 주성분이기 때문에 안전하고 쉽게 얻을 수 있다. 또한, 이산화탄소는 비교적 저가로 구입이 가능하다. 본 발명에서 사용되는 이산화탄소의 양은 대기에 악영향을 미치지 않기 때문에, 다른 초임계유체와 비교하여 이산화탄소는 환경친화적이다. 또한, 이산화산소는 비가연성이고 비폭발성이며, 증발 후 실질적으로 잔여물을 남기지 않는 장점도 있다. 한편, 이산화탄소는 온도 및 압력에 따라 극성이 변화되기 때문에, 필요에 따라 온도 및 압력을 조절하여 극성 및 비극성의 특성을 갖도록 조절할 수 있다. 온도 및 압력을 변화시켜 이산화탄소유체의 용매 특성을 변화시킬 수 있으며, 이는 단독 용매 시스템으로 여러 성분을 분리할 수 있도록 한다.Most preferably, the supercritical fluid used in the present invention is carbon dioxide. Since carbon dioxide is the main component of the atmosphere, it can be safely and easily obtained. In addition, carbon dioxide can be purchased at a relatively low cost. Since the amount of carbon dioxide used in the present invention does not adversely affect the atmosphere, carbon dioxide is environmentally friendly compared to other supercritical fluids. Oxygen dioxide also has the advantage of being non-flammable and non-explosive, leaving virtually no residue after evaporation. On the other hand, since carbon dioxide changes in polarity according to temperature and pressure, it can be adjusted to have polarity and nonpolarity by adjusting temperature and pressure as necessary. By varying the temperature and pressure it is possible to change the solvent properties of the carbon dioxide fluid, which allows the separation of several components in a single solvent system.
본 발명의 방법은 크게 두 개의 단계로 나누어 진다: 초임계유체와 비극성용매를 이용한 초임계유체 추출단계; 및 초임계유체와 극성용매를 이용한 초임계유체 추출단계. The method of the present invention is largely divided into two steps: supercritical fluid extraction using supercritical fluid and nonpolar solvent; And a supercritical fluid extraction step using a supercritical fluid and a polar solvent.
상기 두 단계는 순서와 무관하다. 즉, 비극성 용매를 이용하는 초임계유체 추출단계를 먼저 실시할 수도 있고, 극성 용매를 이용하는 초임계유체 추출단계를 먼저 실시할 수도 있다. 바람직하게는, 초임계유체와 비극성 용매를 이용하는 초임계유체 추출단계를 먼저 실시한다.The two steps are independent of order. That is, the supercritical fluid extraction step using the nonpolar solvent may be performed first, or the supercritical fluid extraction step using the polar solvent may be performed first. Preferably, the supercritical fluid extraction step using the supercritical fluid and the nonpolar solvent is first performed.
본 발명에서 이용되는 용매 시스템을 기재하면서 “초임계유체와 변형제로서의 비극성 용매 또는 극성 용매의 혼합물”이라는 표현을 이용하였다. 이 표현은 기재의 편의성을 위한 것으로서, 바람직하게는 초임계유체의 흐름(flow) 및 변형제의 흐름(flow)은 별개이며 이 두 흐름은 추출용기에서 혼합되며, 이 추출용기에서 인지질 천연원과 접촉하게 된다.In describing the solvent system used in the present invention, the expression “a supercritical fluid and a mixture of nonpolar solvents or polar solvents as modifiers” was used. This expression is for convenience of the substrate, preferably the flow of the supercritical fluid and the flow of the modifier are separate and these two flows are mixed in the extraction vessel, in which the phospholipid natural source and Contact.
본 발명의 가장 큰 특징 중 하나는, 두 종류의 용매 시스템을 이용하는 것이 다: 초임계유체와 비극성용매; 그리고 초임계유체와 극성용매. 이러한 두 종류의 용매 시스템은 인지질 천연원으로부터 인지질을 제외한 나머지 성분의 제거를 매우 효율적으로 달성되도록 한다.One of the greatest features of the present invention is the use of two solvent systems: supercritical fluids and nonpolar solvents; And supercritical fluids and polar solvents. These two types of solvent systems allow the removal of the components other than phospholipids from the phospholipid natural source very efficiently.
본 발명에 따르면, 초임계유체에 변형제가 혼합된다. 변형제는 초임계유체의 물리적 특성, 예컨대 극성, 임계온도 및 임계압력을 본 발명의 목적에 적합하게 조절한다. 또한, 이 변형제는 추출 시간을 단축시키며 이는 추출과정의 비용을 감소시키고, 추출과정의 효율을 개선한다. According to the invention, the modifier is mixed in the supercritical fluid. Modifiers adjust the physical properties of the supercritical fluid, such as polarity, critical temperature and critical pressure, as appropriate for the purposes of the present invention. In addition, this modifier shortens the extraction time, which reduces the cost of the extraction process and improves the efficiency of the extraction process.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 단계 (a)에서 변형제로서 비극성 용매가 이용된다. According to a preferred embodiment of the invention, in step (a) a nonpolar solvent is used as modifier.
비극성 용매가 변형제로 이용되는 초임계유체 추출 단계는, 바람직하게는 압력 50-200 bar, 보다 바람직하게는 70-130 bar, 가장 바람직하게는 90-110 bar; 바람직하게는 온도 10-100℃, 보다 바람직하게는 30℃-85℃, 가장 바람직하게는 40-50℃; 바람직하게는 초임계 유체의 유속 1-20 ml/min, 보다 바람직하게는 2-10, 가장 바람직하게는 3-8 ml/min; 및 바람직하게는 변형제의 유속 0.1-2 ml/min, 보다 바람직하게는 0.1-1 ml/min, 가장 바람직하게는 0.3-0.8 ml/min의 조건 하에서 실시된다.The supercritical fluid extraction step, in which a nonpolar solvent is used as a modifier, preferably has a pressure of 50-200 bar, more preferably 70-130 bar, most preferably 90-110 bar; Preferably at a temperature of 10-100 ° C., more preferably at 30 ° C.-85 ° C., most preferably at 40-50 ° C .; Preferably a flow rate of supercritical fluid of 1-20 ml / min, more preferably 2-10, most preferably 3-8 ml / min; And preferably at a flow rate of 0.1-2 ml / min, more preferably 0.1-1 ml / min, most preferably 0.3-0.8 ml / min.
상기 변형제로서의 비극성 용매는 당업계에서 통상적으로 이용되는 어떠한 비극성 용매도 포함하며, 바람직하게는 헥산, 아세톤, 톨루엔, 클로로포름, DMSO(dimethylsulfoxide), THF(tetrahydrofuran), N,N-디메틸아닐린, 1,4-다이옥산, 다이에틸에테르, N-메틸피롤리돈, 벤젠 또는 이의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되며, 가장 바람직하게는 헥산이다.The nonpolar solvent as the modifier includes any nonpolar solvent conventionally used in the art, and preferably hexane, acetone, toluene, chloroform, dimethylsulfoxide (DMSO), tetrahydrofuran (THF), N, N-dimethylaniline, 1 , 4-dioxane, diethyl ether, N-methylpyrrolidone, benzene or mixtures thereof, most preferably hexane.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 단계 (b)에서 변형제로서 극성 용매가 이용된다.According to a preferred embodiment of the present invention, a polar solvent is used as modifier in step (b).
극성 용매가 변형제로 이용되는 초임계유체 추출 단계는, 바람직하게는 압력 50-200 bar, 보다 바람직하게는 70-130 bar, 가장 바람직하게는 90-110 bar; 바람직하게는 온도 10-100℃, 보다 바람직하게는 30℃-85℃, 가장 바람직하게는 40-50℃; 바람직하게는 초임계 유체의 유속 1-20 ml/min, 보다 바람직하게는 2-10, 가장 바람직하게는 3-8 ml/min; 및 바람직하게는 변형제의 유속 0.05-2 ml/min, 보다 바람직하게는 0.1-0.7 ml/min, 가장 바람직하게는 0.1-0.5 ml/min의 조건 하에서 실시된다.The supercritical fluid extraction step in which a polar solvent is used as the modifier is preferably a pressure of 50-200 bar, more preferably 70-130 bar, most preferably 90-110 bar; Preferably at a temperature of 10-100 ° C., more preferably at 30 ° C.-85 ° C., most preferably at 40-50 ° C .; Preferably a flow rate of supercritical fluid of 1-20 ml / min, more preferably 2-10, most preferably 3-8 ml / min; And preferably at a flow rate of 0.05-2 ml / min, more preferably 0.1-0.7 ml / min and most preferably 0.1-0.5 ml / min.
상기 변형제로서의 극성 용매는 당업계에서 통상적으로 이용되는 어떠한 극성 용매도 포함하며, 바람직하게는 알코올, 물, 에틸렌 글라이콜, 폴리에틸렌글라이콜, 프로필렌카보네이트, 포름산, 아세트산, 아세토니트릴, 클로로디프루오로메탄 또는 이의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되며, 보다 바람직하게는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 1-헥사놀, 2-메톡시에탄올 및 그의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 알코올이고, 보다 더 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올이며, 가장 바람직하게는 메탄올이다.The polar solvent as the modifier includes any polar solvent conventionally used in the art, preferably alcohol, water, ethylene glycol, polyethylene glycol, propylene carbonate, formic acid, acetic acid, acetonitrile, chlorodiph Is selected from the group consisting of rooromethane or mixtures thereof, more preferably an alcohol selected from the group consisting of methanol, ethanol, propanol, 1-hexanol, 2-methoxyethanol and combinations thereof, even more preferably Methanol or ethanol, most preferably methanol.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 방법에 따라 최종적으로 수득되는 인지질은 레시틴이며, 보다 바람직하게는 포스파티딜콜린이 주성분인 레시틴이다.According to a preferred embodiment of the present invention, the phospholipid finally obtained according to the method of the present invention is lecithin, more preferably lecithin whose main component is phosphatidylcholine.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:The features and advantages of the present invention are summarized as follows:
(i) 본 발명은 두 종류의 용매 시스템을 이용한다: 초임계유체와 비극성용매; 그리고 초임계유체와 극성용매. (i) The present invention utilizes two types of solvent systems: supercritical fluids and nonpolar solvents; And supercritical fluids and polar solvents.
(ⅱ) 본 발명의 방법에 따르면, 인지질 천연원으로부터 비교적 간단한 공정 및 단축된 시간으로 인지질을 효율적으로 분리할 수 있다.(Ii) According to the method of the present invention, the phospholipid can be efficiently separated from the phospholipid natural source in a relatively simple process and in a short time.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only for illustrating the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not limited by these examples in accordance with the gist of the present invention to those skilled in the art. Will be self-evident.
실시예Example
실시예Example 1: 대두 인지질의 1: soy phospholipid 초임계추출Supercritical Extraction 단계 1 Step 1
(주)리제론으로부터 입수한 대두추출물(oil form)을 3 ml 취하여 추출용기에 넣고, 추출용기를 초임계 추출장치에 연결하였다. 이어, n-헥산을 변형제로 하여 다음의 조건으로 초임계 추출을 실시하였다: 압력, 100 bar; 온도, 45℃; 유속, CO2 5 ml/min, 변형제(헥산) 0.5 ml/min; 추출시간, 2 시간; CO2 밀도 498 kg/㎥.3 ml of soybean extract (oil form) obtained from Ligeron Co., Ltd. was taken into an extraction container, and the extraction container was connected to a supercritical extraction device. Subsequently, supercritical extraction was carried out using n -hexane as a modifier under the following conditions: pressure, 100 bar; Temperature, 45 ° C .; Flow rate, CO 2 5 ml / min, modifier (hexane) 0.5 ml / min; Extraction time, 2 hours; CO 2 Density 498 kg /
단계 1에 의하여 얻은 추출물을 HPLC로 분석하였다. HPLC(Shimazu)에 Spherisorb S5 NH2 컬럼(Waters)을 장착하고, 용매로서 60% 아세토니트릴, 30% 메탄올 및 5% H2O를 사용하여 등용매 농도구배(isocratic gradient) 방식으로 유속 1 ml/min로 HPLC를 실시하였다. 자외선검출기(215 nm)를 이용하여 oven temp(35℃), run time 20 min 기기조건에서 시료를 메탄올:클로로포름(3:2)인 용액에 완전 용해시켜 분석하였다.The extract obtained by step 1 was analyzed by HPLC. A Spherisorb S5 NH 2 column (Waters) was mounted on HPLC (Shimazu), and the flow rate was 1 ml / in an isocratic gradient method using 60% acetonitrile, 30% methanol and 5% H 2 O as a solvent. HPLC was performed at min. The sample was completely dissolved in a solution of methanol: chloroform (3: 2) under an oven temp (35 ° C.) and a run time of 20 min using a UV detector (215 nm).
도 1은 지표물질로 이용한 asolectin(Fluka, Switzerland)에 대한 HPLC 크로마토그램이다. asolectin은 대두 레시틴 유래 인지질의 일종으로 판매되고 있는 물질이다. 도 2는 출발물질로 이용한 대두추출물(oil form)에 대한 HPLC 크로마토그램이다. 도 3은 단계 1에 의하여 얻은 초임계유체 추출물에 대한 HPLC 크로마토그램이다. 도 3에서 확인할 수 있듯이, 초임계유체 추출 단계 1에 의하여 대두추출물에 있는 인지질 이외의 다른 불순물들(도 2의 가장 왼쪽에 있는 피크에 해당하는 물질)이 크게 제거됨을 알 수 있다.1 is an HPLC chromatogram for asolectin (Fluka, Switzerland) used as an indicator. Asolectin is a type of phospholipid derived from soy lecithin. 2 is an HPLC chromatogram for soy extract (oil form) used as a starting material. Figure 3 is an HPLC chromatogram for the supercritical fluid extract obtained by step 1. As can be seen in Figure 3, it can be seen that by the supercritical fluid extraction step 1, impurities other than the phospholipid in the soybean extract (material corresponding to the leftmost peak of FIG. 2) are greatly removed.
실시예Example
2: 대두 인지질의 2: soy phospholipid
초임계추출
실시예 1의 초임계유체 추출의 잔여물을 95% 메탄올을 변형제로 하여 다음의 조건으로 초임계유체 추출을 실시하였다: 압력, 100 bar; 온도, 45℃; 유속, CO2 5 ml/min, 변형제(95% 메탄올) 0.25 ml/min; 추출시간 2 시간; CO2 밀도 498 kg/㎥.The residue of the supercritical fluid extraction of Example 1 was subjected to supercritical fluid extraction using 95% methanol as a modifier under the following conditions: pressure, 100 bar; Temperature, 45 ° C .; Flow rate, CO 2 5 ml / min, modifier (95% methanol) 0.25 ml / min;
단계 2에 의하여 얻은 추출물을 HPLC로 분석하였다(도 4). 도 4에서 볼 수 있듯이, 초임계유체 추출 단계 2에 의하여 대두추출물에 있는 인지질 이외의 다른 불순물들(도 2의 가장 왼쪽에 있는 피크에 해당하는 물질)이 추가적으로 제거됨을 알 수 있다.The extract obtained by
도 5는 초임계유체 추출에 의하여 얻은 추출잔여물이다. 이 도 5의 피크 패턴은 시중에서 정제된 대두 인지질로 판매되고 있는 asolectin과 거의 동일한 패턴을 나타낸다. 추가적으로, 도 5의 HPLC 피크 패턴이 asolectin와 동일한 지 여부를 확인하기 위하여, 단계 2에 의해 최종적으로 추출잔여물을 asolectin과 혼합하여 HPLC 분석을 실시하였다. 도 6에서 볼 수 있듯이, 단계 2에 의해 최종적으로 추출잔여물을 asolectin과 겹치는 HPLC 피크 패턴을 나타내었다. 따라서, 본 발명의 방법에 의해 대두 인지질(레시틴)이 분리/정제되었음을 알 수 있다.5 is an extraction residue obtained by supercritical fluid extraction. This peak pattern of FIG. 5 shows almost the same pattern as asolectin sold as commercially purified soybean phospholipid. In addition, to confirm whether the HPLC peak pattern of FIG. 5 is the same as asolectin, the extraction residue was finally mixed with asolectin by
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to exemplary embodiments thereof, it is to be understood that the same is by way of illustration and example only and is not to be construed as limiting the scope of the present invention. Thus, the substantial scope of the present invention will be defined by the appended claims and equivalents thereof.
도 1은 지표물질로 이용한 asolectin에 대한 HPLC 크로마토그램이다.1 is an HPLC chromatogram for asolectin used as an indicator.
도 2는 출발물질로 이용한 대두추출물(oil form)에 대한 HPLC 크로마토그램이다. 2 is an HPLC chromatogram for soy extract (oil form) used as a starting material.
도 3은 단계 1에 의하여 얻은 초임계유체 추출물에 대한 HPLC 크로마토그램이다. Figure 3 is an HPLC chromatogram for the supercritical fluid extract obtained by step 1.
도 4는 단계 2에 의하여 얻은 초임계유체 추출물에 대한 HPLC 크로마토그램이다. Figure 4 is an HPLC chromatogram for the supercritical fluid extract obtained by
도 5는 본 발명의 초임계유체 추출에 의하여 얻은 최종적인 추출 잔여물에 대한 HPLC 크로마토그램이다. 5 is an HPLC chromatogram of the final extraction residue obtained by supercritical fluid extraction of the present invention.
도 6은 본 발명의 초임계유체 추출에 의하여 얻은 최종적인 추출 잔여물과 asolectin을 동시에 분석한 HPLC 크로마토그램이다.Figure 6 is an HPLC chromatogram simultaneously analyzing the final extraction residue and asolectin obtained by the supercritical fluid extraction of the present invention.
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