KR101047141B1 - A method of collecting semen from lab animals and artificial insemination method thereof - Google Patents
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Abstract
본 발명은 실험동물의 정소상체 또는 정관에서 정액을 채취하는 방법 및 이를 이용한 인공수정 방법에 관한 것이다. 본 발명은 인공수정을 이용한 동물생산 분야에서의 새로운 적용법에 관한 것으로서, 종래의 실험동물 인공수정 방법의 문제점을 개선하여, 임신률 및 생산성이 뛰어나고 시간적으로 효율적이며 동물의 대량사육 유지비용에 있어 막대한 경제적 손실을 방지하여 경제성 및 산업성이 뛰어나다. The present invention relates to a method for collecting semen from the testis or body of test animals and artificial insemination method using the same. The present invention relates to a new application method in the field of animal production using artificial insemination, to improve the problems of the conventional experimental animal artificial insemination method, excellent pregnancy rate and productivity, time efficient and enormous in the maintenance cost of mass breeding of animals Excellent economic and industrial performance by preventing economic loss.
Description
본 발명은 실험동물의 정소상체 또는 정관에서 정액을 채취하는 방법 및 이를 이용한 인공수정 방법에 관한 것이다.
The present invention relates to a method for collecting semen from the testis or body of test animals and artificial insemination method using the same.
실험동물로서 중요한 동물종의 하나인 토끼(domestic rabbit)는 약리, 대사, 면역, 혈액, 병리, 내분비 등 여러분야에서 연구용 또는 검정용 목적으로 많이 이용되고 있다. 생식독성학적인 측면에서 토끼는 약물의 최기형성 유무의 검색을 위한 유용한 동물종으로 이용되고 있다. 암컷 토끼는 자연적으로는 배란이 되지 않고 수컷의 교미자극이나 호르몬 또는 전기자극에 의해 배란이 유도되기 때문에 필요에 따리 교미시기와 교미동물 수를 조절할 수 있으며, 태자의 크기가 랫트나 마우스보다 상대적으로 커서 태자의 형태학적 검사시 보다 정확한 소견을 관찰할 수 있는 이점이 있다(Gibson, JP, Staples, RE and Newberne, JW(1966):Use of rabbit in teratogenecity studies. Toxicol and Appl Pharmacol, 9:398-408). 이러한 여러가지 이점으로 인하여 미국 식품의약품안정청(FDA), OECD, 국립보건안전연구원 등의 독성시험 지침에서도 비설치류를 이용한 최기형성의 평가시에는 반드시 토끼를 이용하도록 규정하고 있다. Rabbits, one of the important animal species as experimental animals, are widely used for research or assay purposes in pharmacology, metabolism, immunity, blood, pathology and endocrine. In terms of reproductive toxicology, rabbits are used as useful animal species for the detection of teratogenicity of drugs. Female rabbits are not naturally ovulated and ovulation is induced by male mating stimulation, hormonal or electrical stimulation, so the mating time and number of mating animals can be adjusted as needed. Morphological examination of cursor fetuses has the advantage of more accurate findings (Gibson, JP, Staples, RE and Newberne, JW (1966): Use of rabbit in teratogenecity studies.Toxicol and Appl Pharmacol, 9: 398-) 408). Because of these benefits, the US Food and Drug Administration (FDA), the OECD, and the National Institutes of Health and Safety have also stated that the use of rabbits should be used to assess teratogenicity with non-rodents.
토끼를 이용한 최기형성 시험에서는 단기간에 많은 수의 임신동물이 요구된다. 상기 목적을 위하여 현재 사용되는 방법으로는 암수 토끼의 직접 교배에 의한 자연교배방법과 수컷 토끼간의 자연승가 행위에 따라 외부로 사출된 정액을 인공질을 이용하여 채취하고 채취된 정액을 암컷 토끼에 주입하여 인공수정하는 방법 2가지가 있다.Teratogenicity studies using rabbits require large numbers of pregnant animals in a short period of time. The method currently used for this purpose is a natural breeding method by direct breeding of male and female rabbits and semen injected externally according to the natural synergism between male rabbits using artificial vagina and injecting the collected semen into female rabbits There are two ways of artificial insemination.
그러나 자연교배방법은 많은 시간과 노력이 필요하고 다수의 수컷 동물을 유지하고 있어야 하는 단점이 있다. 인공질법을 이용한 토끼의 인공수정 방법은 수컷 토끼의 상태에 따라 정액 채취 소요시간이 매우 유동적이고 정액사출 및 채취률이 매우 낮으며, 뇨 등의 불순물에 의한 실패확률이 높은 문제점이 있다. 또한 승가행위를 유도하기 위한 불필요한 수컷 토끼를 다량 보유해야 하므로 시설 유지 및 사육공간 활용의 비효율성이 대단히 높은 실정이다.
However, the natural breeding method has a disadvantage of requiring a lot of time and effort and maintaining a large number of male animals. The artificial insemination method of rabbit using artificial method has a problem that the time required for semen collection is very fluid, semen injection and collection rate is very low, and the probability of failure due to impurities such as urine is high depending on the condition of the male rabbit. In addition, it is very inefficient to maintain the facility and use of the breeding space because a large number of unnecessary male rabbits must be retained to induce the act of becoming a monk.
한편, 동물의 인공수정을 위해서는 정액의 채취가 선행적으로 요구된다. 인위적으로 사정중추를 자극하여 사정을 유발하는 정액의 채취는 동물의 종에 따라 여러가지 방법이 이용되고 있다. 예를 들면 마사지법, 전기자극법, 수압법, 인공질법 등이 있다.On the other hand, for artificial insemination of animals, the collection of semen is required in advance. Semen is artificially stimulated ejaculation centers to cause ejaculation, various methods are used depending on the species of animal. For example, there is a massage method, an electrical stimulation method, a hydraulic method, an artificial method.
마사지법은 칠면조나 닭에 이용되는 주된 방법으로서 닭의 경우 머리가 아래로 가도록 보정한 후 치골과 용골돌기 사이를 마사지하고 퇴화교미기의 기부를 눌러 누출된 정액을 채취하는 방법이다. Massage method is the main method used in turkey or chicken is a method of calibrating the head to go down after the chicken massage between the pubic bone and keel projections and press the base of the degenerative mater to collect the leaked semen.
전기자극법은 돼지, 소, 양, 개 등에 이용되는데 천골부위에 전기적인 자극을 가하여 사정중추를 흥분시켜 정액을 채취하는 방법이다.Electro stimulation method is used in pigs, cows, sheep, dogs, etc. by applying electrical stimulation to the sacral region is a method of collecting semen to excite the ejaculation center.
수압법은 돼지에 이용되는 주된 방법으로서 돼지의 성욕을 자극하고 의빈대에 승가하게 하여 음경이 나오는 순간 손으로 압박을 가하여 사정시키는 방법이다.Hydrostatic pressure is the main method used in pigs to stimulate the pig's sexual desire and to rise to the bedbugs to press the hand to ejaculate when the penis comes out.
인공질법은 소, 말, 양, 토끼 등에서 주로 이용되고 돼지에서는 부분적으로 이용되는 방법으로서, 동물의 생식기와 유사한 온도와 압력조건을 가진 인공적으로 만든 질을 이용하여 인공질 내에 사정시키는 방법이다.
Artificial method is mainly used in cows, horses, sheep, rabbits, etc., and partially used in pigs, it is a method of evaluating the artificial vagina using artificially made vagina with temperature and pressure conditions similar to the animal genitalia.
한편, 정관 및 정소상체 내에는 미세혈관이 복잡하게 얽혀있기 때문에, 상기 정관 및 정소상체에 카테터를 직접 삽입하여 정액을 채취하는 경우 정액과 혈액이 혼재되어 순수한 정액을 얻을 수 없는 문제가 있었다.
On the other hand, since the microvessels are intricately intertwined in the vas deferens and testicular bodies, there is a problem in that pure semen is not obtained because semen and blood are mixed when the catheter is directly inserted into the vas deferens and the testicular bodies.
이에 본 발명자들은 종래 실험동물의 인공수정 방법의 문제점을 개선할 새로운 인공수정 방법 및 정액 채취 방법을 연구하여, 임신률 및 생산성이 뛰어나고 시간적으로 효율적이며 동물의 대량사육 유지비용에 있어 막대한 경제적 손실을 방지하여 경제성 및 산업성이 뛰어난, 실험동물의 정소상체 또는 정관에서 정액을 채취하는 방법 및 이를 이용한 인공수정 방법에 관한 본 발명을 완성하였다.
Therefore, the present inventors studied a new artificial insemination method and semen collection method to improve the problems of the conventional artificial insemination method, excellent pregnancy rate and productivity, time-efficient and huge economic loss in the maintenance cost of mass breeding of animals The present invention relates to a method for collecting semen from the testis body or vas deferens of experimental animals having excellent economic and industrial properties, and an artificial insemination method using the same.
본 발명의 목적은 임신률 및 생산성이 뛰어나고 시간적으로 효율적이며 동물의 대량사육 유지비용에 있어 막대한 경제적 손실을 방지하여 경제성 및 산업성이 뛰어난, 실험동물의 정소상체 또는 정관에서 정액을 채취하는 방법 및 이를 이용한 인공수정 방법을 제공하는 것이다.
An object of the present invention is excellent in pregnancy rate and productivity, time-efficient and prevents enormous economic loss in the cost of maintaining large numbers of animals, excellent in economics and industrial performance, method of collecting semen from the testicular epididymis or vas deferens and It is to provide an artificial insemination method using the same.
상기 목적 달성을 위하여 본 발명은, 실험동물의 정관의 외부 혈관을 제거한 후 상기 혈관이 제거된 정관에서 정액을 채취하는 방법을 제공한다.
In order to achieve the above object, the present invention provides a method for collecting semen from the vas deferens in which the vessels are removed after removing the outer vessels of the vas deferens of the experimental animal.
또한 본 발명은 실험동물의 정관의 외부에 있는 정소 동정맥을 제거한 후 상기 정소 동정맥이 제거된 정관에서 정액을 채취하는 방법을 제공한다.
The present invention also provides a method for collecting semen from the vas deferens in which the testes arteriovenous veins are removed after removing the testicular arteriovenous on the outside of the vas deferens of experimental animals.
나아가 본 발명은 정관 및 정소 동정맥에 사이에 존재하는 막에 용매를 주입하여 정관과 정소 동정맥을 분리시켜서 정소 동정맥을 제거한 후 상기 정소 동정맥이 제거된 정관에서 정액을 채취하는 방법을 제공한다. 상기 용매는 식염수인 것이 바람직하다.
Furthermore, the present invention provides a method of collecting semen from the vas deferens in which the testes are removed after injecting a solvent into the membrane between the vas deferens and the testes arteriovenous to separate the vas deferens and the testicular arteriovenous to remove the testicular arteriovenous. It is preferable that the said solvent is saline.
나아가 본 발명은 실험동물의 정관 외부 혈관의 혈액을 제거한 후 상기 혈액이 제거된 정관에서 정액을 채취하는 방법을 제공한다.
Furthermore, the present invention provides a method for collecting semen from the vas deferens in which the blood is removed after removing blood from external vessels of the vas deferens of laboratory animals.
또한 본 발명은 실험동물의 정관 외부에 있는 정소 동정맥의 혈액을 제거한 후 상기 혈액이 제거된 정소 동정맥에서 정액을 채취하는 방법을 제공한다.
In another aspect, the present invention provides a method for collecting semen from the testicular arteriovenous from which the blood is removed after removing blood from the testicular arteriovenous that is outside the vas deferens of the experimental animal.
나아가 본 발명은 실험동물의 정관 외부에 있는 정소 동정맥에 용매를 주입하여 혈액을 세정(flushing)하여 혈액을 제거한 후 상기 혈액이 제거된 정소 동정맥에서 정액을 채취하는 방법을 제공한다. 상기 용매는 식염수인 것이 바람직하다.
Furthermore, the present invention provides a method of collecting semen from the testes arteriovenous veins from which the blood is removed after the blood is removed by injecting a solvent into the testes arteriovenous veins outside the vas deferens of the experimental animal to remove the blood. It is preferable that the said solvent is saline.
또한 본 발명은 실험동물의 복대동맥 또는 복대정맥을 절개하여 혈액을 제거한 후 정관에서 정액을 채취하는 방법을 제공한다.
In another aspect, the present invention provides a method for collecting semen from the vas deferens after incision of the abdominal artery or abdominal vein of the experimental animal to remove blood.
나아가 본 발명은 실험동물의 정소상체의 외부 혈관을 제거한 후 상기 혈관이 제거된 정소상체에서 정액을 채취하는 방법을 제공한다.
Furthermore, the present invention provides a method for collecting semen from the testis taken from which the blood vessels are removed after removing the external blood vessels from the testes of the testis.
또한 본 발명은 실험동물의 정소상체의 외부 혈관을 제거한 후 상기 혈관이 제거된 정소상체를 절개하여 정액을 채취하는 방법을 제공한다.
In another aspect, the present invention provides a method for collecting semen by removing the external blood vessels of the testicular epithelium of the experimental animal and then dissecting the testicular epithelium from which the blood vessels have been removed.
나아가 본 발명의 정액을 채취하는 방법은 30~45℃의 온도를 유지하면서 혈액 또는 혈관을 제거하고 정액을 채취하는 것이 바람직하다. 상기 혈액을 제거할 때의 온도는 30~45℃로 유지하는 것이 바람직하다. 온도는 정관 및 정소상체 속에 존재하는 정자의 활성에 매우 큰 영향을 미치기 때문에, 주사침, 생리식염수 등 혈액 제거에 사용된 모든 부속품의 온도는 토끼의 체온과 유사한 37~40℃의 범위 내에서 가온하여 사용하였다.
Furthermore, in the method of collecting semen of the present invention, it is preferable to remove blood or blood vessels while collecting the semen while maintaining the temperature of 30 ~ 45 ℃. It is preferable to maintain the temperature at the time of removing the said blood at 30-45 degreeC. Because temperature greatly affects the activity of sperm in the vas deferens and testicular body, the temperature of all accessories used for blood removal, such as needles and saline solution, is warmed in the range of 37 ~ 40 ℃ similar to rabbit body temperature. Used.
또한 본 발명의 정액을 채취하는 방법은 토끼, 마우스, 랫드, 개 또는 기니픽의 정액 채취 방법으로 바람직하다.
In addition, the method of collecting semen of the present invention is preferably a method of collecting semen from rabbits, mice, rats, dogs, or guinea pigs.
나아가 본 발명은 실험동물의 정관의 외부 혈관을 제거한 후 상기 혈관이 제거된 정관에서 정액을 채취하고, 채취한 정액을 암컷에 주입하는 인공수정 방법을 제공한다. 상기 혈관은 정소 동정맥인 것이 바람직하다. 구체적으로는 정관 및 정소 동정맥에 사이에 존재하는 막에 용매를 주입하여 정관과 정소 동정맥을 분리시켜서 정소 동정맥을 제거한 후 상기 정소 동정맥이 제거된 정관에서 정액을 채취하여 채취된 정액을 암컷에 주입하는 인공수정 방법을 제공한다. 상기 용매는 식염수인 것이 바람직하다.
Furthermore, the present invention provides an artificial insemination method in which semen is collected from the vas deferens in which the blood vessels are removed after the external blood vessels of the vas deferens are removed, and the collected semen is injected into the female. Preferably, the blood vessels are testicular arteriovenous veins. Specifically, a solvent is injected into the membrane between the vas deferens and the testicular arteriovenous veins to separate the vas deferens and the testicular arteriovenous veins to remove the testicular arteriovenous veins, and the semen collected by collecting semen from the vas deferens in which the testicular arteriovenous has been removed is injected into the female. Provide an artificial insemination method. It is preferable that the said solvent is saline.
또한 본 발명은 실험동물의 정관 외부 혈관의 혈액을 제거한 후 상기 혈액이 제거된 정관에서 정액을 채취하고, 채취한 정액을 암컷에 주입하는 인공수정 방법을 제공한다. 상기 혈관은 정소 동정맥인 것이 바람직하다. 구체적으로는 실험동물의 정관 외부에 있는 정소 동정맥에 용매를 주입하여 혈액을 세정(flushing)하여 혈액을 제거한 후 상기 혈액이 제거된 정관에서 정액을 채취하여 채취된 정액을 암컷에 주입하는 인공수정 방법을 제공한다. 상기 용매는 식염수인 것이 바람직하다. 또한 채취한 정액을 희석하여 암컷에 주입하는 것이 바람직하다.
In another aspect, the present invention provides an artificial insemination method for removing semen from the blood vessels of the external vas deferens of the laboratory animal, collecting semen from the vas deferens, and injecting the collected semen into females. Preferably, the blood vessels are testicular arteriovenous veins. Specifically, an artificial insemination method in which a solvent is injected into a testicular arteriovenous outside the vas deferens of a laboratory animal to flush blood to remove blood, and then semen is collected from the vas deferens in which the blood is removed and the semen collected is injected into a female. To provide. It is preferable that the said solvent is saline. It is also preferable to dilute the collected semen and inject it into the female.
나아가 본 발명은 실험동물의 복대동맥 또는 복대정맥의 혈액을 제거한 후 정관에서 정액을 채취하고, 채취한 정액을 암컷에 주입하는 인공수정 방법을 제공한다. 또한 채취한 정액을 희석하여 암컷에 주입하는 것이 바람직하다.
Furthermore, the present invention provides an artificial insemination method for removing semen from the abdominal aorta or abdominal vein of an experimental animal, collecting semen from the vas deferens, and injecting the collected semen into females. It is also preferable to dilute the collected semen and inject it into the female.
나아가 본 발명은 실험동물의 정소상체의 외부 혈관을 제거한 후 상기 혈관이 제거된 정소상체에서 정액을 채취하고, 채취한 정액을 암컷에 주입하는 인공수정 방법을 제공한다. 상기 혈관은 정소 동정맥인 것이 바람직하다. 구체적으로는 실험동물의 정소상체의 외부 혈관을 제거한 후 상기 혈관이 제거된 정소상체를 절개하여 정액을 채취하여 채취된 정액을 암컷에 주입하는 인공수정 방법을 제공한다. 상기 용매는 식염수인 것이 바람직하다. 또한 채취한 정액을 희석하여 암컷에 주입하는 것이 바람직하다.
Furthermore, the present invention provides an artificial insemination method in which semen is collected from the testicular body from which the blood vessels have been removed after removing external blood vessels of the testicular body of the experimental animal, and injected into the female. Preferably, the blood vessels are testicular arteriovenous veins. Specifically, an artificial insemination method is provided in which an external blood vessel of the testicular epithelium of an experimental animal is removed, and then the semen is collected by removing the testicular epithelium from which the blood vessel has been removed, and the semen collected is injected into the female. It is preferable that the said solvent is saline. It is also preferable to dilute the collected semen and inject it into the female.
또한 본 발명의 인공수정 방법은 30~45℃의 온도를 유지하면서 혈액 또는 혈관을 제거하고 정액을 채취하는 것이 바람직하다.
In addition, in the artificial insemination method of the present invention, it is preferable to remove blood or blood vessels while collecting the semen while maintaining the temperature of 30 ~ 45 ℃.
나아가 본 발명의 인공수정 방법은 토끼, 마우스, 랫드, 개 또는 기니픽의 인공수정 방법으로 바람직하다.
Furthermore, the artificial insemination method of the present invention is preferable as an artificial insemination method of rabbit, mouse, rat, dog or guinea pig.
본 발명은 임신률 및 생산성이 뛰어나고 시간적으로 효율적이며 동물의 대량사육 유지비용에 있어 막대한 경제적 손실을 방지하여 경제성 및 산업성이 뛰어난, 실험동물의 정소상체 또는 정관에서 정액을 직접 채취하는 방법 및 이를 이용한 인공수정 방법을 제공할 수 있다.
The present invention is excellent in pregnancy rate and productivity, time-efficient and prevents enormous economic loss in the cost of maintaining large numbers of animals, and excellent economic and industrial properties, the method of directly collecting semen from the testicular epididymis or vas deferens The artificial insemination method used can be provided.
도 1의 (A)는 외부 혈관을 제거하기 전 정관이고, (B)는 외부 혈관이 제거된 정관 사진이다.
도 2의 (A)는 외부 혈관의 혈액을 제거하기 전 정소상체 및 정관이고, (B)는 외부 혈관의 혈액이 제거된 정소상체 및 정관 사진이다.Figure 1 (A) is a vas deferens before removal of the external vessels, (B) is a picture of the vas deferens external vessels.
Figure 2 (A) is a testicular body and vas deferens before removing the blood of the external blood vessels, (B) is a picture of the epididymis and vas deferens in which blood of the external blood vessels are removed.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명이 하기의 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, preferred examples are provided to aid in understanding the present invention. However, the following examples are provided only to more easily understand the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.
실시예Example 1: 토끼의 정관에서 정액을 직접 채취 1: collecting semen directly from the rabbit incorporation
(1) 온도를 30~45℃로 유지하면서 수컷 토끼의 정관 외벽 및 정관 동정맥 사이에 존재하는 막에 주사침을 투과 후 생리식염수를 주입하여 정관과 정관 동정맥을 분리하여 혈관을 제거하였다. 상기 혈관이 제거된 정관에 카테터를 삽입하고 생리식염수 관류를 통해 정액를 채취하였다.
(1) While maintaining the temperature at 30 ~ 45 ℃ penetrate the needle between the membrane between the vas deferens and the vas deferens of the male rabbit, and then physiological saline was injected to separate the vas deferens and vas deferens. The catheter was inserted into the vas deferens, and the semen was collected through saline perfusion.
(2) 다른 방법으로, 온도를 30~45℃로 유지하면서 수컷 토끼의 정관 외벽에 위치한 정관 동정맥에 주사침을 투과 후 생리식염수 주입관류를 통해 혈액을 제거하였다(flushing). 상기 혈액이 제거된 정관에 카테터를 삽입하고 생리식염수 관류를 통해 정액를 채취하였다.
(2) Alternatively, blood was removed through physiological saline infusion perfusion after penetrating the needle through the vas deferens located on the outer wall of the male rabbit's vas deferens while maintaining the temperature at 30-45 ° C. The catheter was inserted into the vas deferens and blood was collected through physiological saline perfusion.
(3) 또 다른 방법으로, 온도를 30~45℃로 유지하면서 수컷 토끼의 복대동맥 또는 복대정맥을 절개하여 혈액을 제거시켰다. 정관에 카테터를 삽입하고 생리식염수 관류를 통해 정액를 채취하였다.
(3) In another method, blood was removed by cutting the abdominal aorta or abdominal vein of a male rabbit while maintaining the temperature at 30 to 45 ° C. The catheter was inserted into the vas deferens and the semen was collected through saline perfusion.
실시예Example 2: 토끼의 정소상체에서 정액을 직접 채취 2: collecting semen directly from the testis of rabbits
온도를 30~45℃로 유지하면서 수컷 토끼의 정소 상체의 혈관을 제거하고 상기 혈관이 제거된 정소상체를 절개하여 정액을 채취하였다.
While maintaining the temperature at 30 ~ 45 ℃ the blood vessels of the testis upper body of the male rabbit was removed, and the semen was collected by dissecting the testis upper body removed the blood vessels.
상기 실시예 1 또는 실시예 2의 방법을 통하여 개체당 20ml의 정액을 채취하였다. 상기 방법을 통하여 정자 및 식염수가 혼합된 높은 순도의 건강한 정자를 수득할 수 있었다.
20 ml of semen was collected per individual by the method of Example 1 or 2 above. Through this method, high purity healthy sperm mixed with sperm and saline was obtained.
비교예Comparative example 1: One: 인공질법에On artificial methods 의한 토끼의 정액 채취 Semen collection of rabbits
인공질은 내부의 고무관과 외부의 플라스틱관 사이에 물을 채워 넣고 완전히 조립한 다음 인공질 내의 수온이 45~50℃가 될 때까지 50℃의 항온수조에 충분히 부유시켜 두었다. The artificial body was filled with water between the inner rubber tube and the outer plastic tube, completely assembled, and then sufficiently suspended in a constant temperature water bath at 50 ° C. until the water temperature in the artificial body reached 45 to 50 ° C.
두 마리의 수컷토끼를 상부가 트인 사육상자에 넣어 두었다. 교미동작을 시작할 때 항온수조에 부유시켜둔 인공질을 꺼내어 밑부분에 정액채집관을 고정한 다음 교미동작을 하는 수컷의 뒷다리 사이에 갖다 대어 정액을 채취하였다. 이 방법을 통하여 0.5 ml의 정액을 채취하였다. 이는 상기 실시예 1의 부피의 1/40이었다.
Two male rabbits were placed in an open breeding box. At the beginning of the mating operation, the artificial matter suspended in the thermostatic bath was taken out, the semen collecting tube was fixed at the bottom, and the semen was collected between the hind legs of the male mating operation. 0.5 ml of semen was collected by this method. This was 1/40 of the volume of Example 1 above.
실험예Experimental Example 1: 정액 채취 방법에 따른 정액의 성상 비교 1: Comparison of Semen Characteristics According to Semen Collection Methods
수컷토끼로부터 채집된 정자의 운동성, 정자수(농도), 기타 형태학적 이상 유, 무 비교를 위해 정자분석기(Hamilton-thorn, USA)를 사용하여 실시예 1 또는 실시예 2 및 비교예 1의 정액을 비교 분석하였다. 그 결과는 표 1에 나타내었다. Semen of Example 1 or 2 and Comparative Example 1 using a sperm analyzer (Hamilton-thorn, USA) for the comparison of motility, sperm count, other morphological abnormalities and no sperm collected from male rabbits Was analyzed comparatively. The results are shown in Table 1.
머리가 없는 경우
머리가 2개 인 경우
꼬리가 없는 경우
꼬리가 2개인 경우
꼬리가 구부러진 경우
이상 비율(abnormality)(%)Normal sperm
Without head
2 heads
Without tail
2 tails
The tail is bent
Abnormality (%)
1
-
2
-
-
3 (%)3/100
One
-
2
-
-
3 (%)
1
-
1
-
-
2 (%)2/100
One
-
One
-
-
2 (%)
표 1과 같이 실시예 및 비교예는 80 % 이상의 활발한 정자 운동성을 나타내었다. 정자의 형상에 있어서 정상 정자수는 실시예와 비교예가 큰 차이를 보이지 않았다. 실시예가 비교예에 비하여 이상 비율(abnormality)(%)이 낮음을 알 수 있다.
As shown in Table 1, Examples and Comparative Examples showed more than 80% active sperm motility. In the shape of sperm, the number of normal sperm showed no significant difference between the Example and the comparative example. It can be seen that the Example has a lower abnormality (%) than the Comparative Example.
실험예Experimental Example 2: 토끼의 정소상체 또는 정관에서 채취한 정액을 이용한 인공수정 2: artificial insemination using semen from rabbit testes or vas deferens
실시예 1 또는 실시예 2 및 비교예 1의 정액을 생리식염수에 희석하거나 희석없이 3.5kg 이상의 암컷토끼(20수) 좌, 우측 자궁에 주입관을 이용하여 각각 0.5~1ml씩 주입하였다. 인공수정 종료 후 과배란 유도를 위해 hCG(10iu/KG/B.W.Rabbit)를 이정맥 주사하였다. 인공 수정일을 임신0일로 하였으며, 임신 28일 이후 임신모체에 대한 제왕절개를 수행하여, 임신유무 및 착상률(수), 생존태자, 태반 및 태자의 무게, 성비, 외표이상, 골격 및 내장이상 유, 무 등을 관찰하였다. 그 결과는 표 2 에 나타내었다. The semen of Example 1 or Example 2 and Comparative Example 1 was injected into the uterine saline without injection or dilution of 0.5 ~ 1ml by the injection tube into the left and right uterus of 3.5kg or more female rabbit (20 males). After insemination, hCG (10iu / KG / B.W.Rabbit) was injected intravenously to induce ovulation. The artificial insemination date was 0 days of gestation, and after 28 days of gestation, caesarean section was performed on the pregnant mother, and the pregnancy and implantation rate (number), survival weight, placenta and fetus weight, sex ratio, external abnormality, skeletal and visceral abnormality, The radish was observed. The results are shown in Table 2.
(평균=8.3 태자)123/15
(Average = 8.3 character)
(평균=8.1 태자)146/18
(Mean = 8.1)
임신 28일 제왕절개를 수행한 결과 20마리의 암컷토끼 중 20수(100%)의 모체에서 최종 임신(초기유산 포함)이 확인 되었다. 착상률에 있어 평균 84.9% 관찰되었다. 모체당 평균 생존태자수에 있어 초기유산으로 인한 개체를 제외한 18수의 모체로부터 146수(8.1수/모체별 평균 생존태자수)의 태자가 확인 되었다. 태자의 성비 비교에 있어 암·수 비율이 1:0.91 으로 산출되었다. 태반 및 태자의 무게를 측정한 결과 태반의 평균무게는 5.13g, 태자의 평균체중은 36.84g으로 측정되었다. 태자에 대한 외표이상 유, 무를 관찰한 결과 특이한 이상 발현은 관찰되지 않았다.
A caesarean section on 28 days of gestation revealed a final pregnancy (including early miscarriage) in 20 mothers (100%) of 20 female rabbits. An average of 84.9% of implantation rate was observed. In the mean number of surviving fetuses per mother, 146 (8.1 number / average surviving fetuses per mother) were identified from 18 mothers, except for those caused by early miscarriage. The sex-to-female ratio was 1: 0.91 in the comparison of the sex ratios of fetuses. The weight of placenta and fetus was measured and the mean weight of placenta was 5.13g and fetal body weight was 36.84g. As a result of observing the presence or absence of external abnormality for the fetus, no unusual abnormality was observed.
또한 인공질법에 의한 인공수정의 경우, 수컷 정액 채취부터 인공수정 종료시까지 평균 4~5시간 이상이 소요된 반면, 본원발명의 경우, 30분 이내에 모든 작업이 완료되었으며, 동물의 상태 및 조건과 무관하게 인공수정 시간, 시기의 임의적 조정이 가능하였다.
In addition, in the case of artificial insemination by artificial method, it took 4 ~ 5 hours or more from collecting male semen to the completion of artificial insemination, whereas in the present invention, all work was completed within 30 minutes, regardless of the condition and condition of the animal. It was possible to arbitrarily adjust the insemination time and timing.
상기에서 살펴본 바와 같이, 실험동물의 정소상체 또는 정관에서 정액을 직접 채취하는 방법 및 이를 이용한 인공수정 방법은 임신률 및 생산성이 뛰어나고 시간적으로 효율적이며 동물의 대량사육 유지비용에 있어 막대한 경제적 손실을 방지하여 경제성 및 산업성이 뛰어나다. As discussed above, the method of directly collecting semen from the testis or vas deferens of experimental animals and the artificial insemination method using the same are excellent in pregnancy rate, productivity, time efficient, and prevent the enormous economic loss in the cost of maintaining large numbers of animals. Excellent economic and industrial performance.
Claims (12)
b) 상기 혈액이 제거된 정관에서 정액을 채취하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 정액 채취 방법.
a) injecting a solvent into the external blood vessel surrounding the vas deferens of the laboratory animal to flush the blood to remove blood from the external blood vessels surrounding the vas deferens; And
b) collecting semen from the vas deferens in which the blood is removed.
a) 단계는 정관을 둘러싸고 있는 정소 동정맥의 혈액을 제거하는 것을 특징으로 하는 정액 채취 방법.
The method of claim 1,
Step a) is the semen collection method, characterized in that to remove blood from the testicular arteriovenous vein surrounding the vas deferens.
정소 동정맥에 용매를 주입하여 혈액을 세정(flushing)하여 혈액을 제거하는 것을 특징으로 하는 정액 채취방법.
The method of claim 2,
Semen collection method characterized in that the blood is removed by flushing the blood by injecting a solvent into the testicular arteriovenous vein.
용매는 식염수임을 특징으로 하는 정액 채취 방법.
The method of claim 3,
A method of collecting semen, characterized in that the solvent is saline.
a) 단계 및 b) 단계가 30~45℃의 온도를 유지하는 것을 특징으로 하는 정액 채취 방법.
The method according to any one of claims 1 to 4,
Semen collection method characterized in that the steps a) and b) maintain the temperature of 30 ~ 45 ℃.
상기 실험 동물은 토끼, 마우스, 랫드, 개 및 기니픽로 구성된 군에서 선택된 어느 하나임 것을 특징으로 하는 정액 채취 방법.
The method according to any one of claims 1 to 4,
The experimental animal is a semen collection method, characterized in that any one selected from the group consisting of rabbits, mice, rats, dogs and guinea pigs.
채취한 정액을 암컷에 주입하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 인공수정 방법.
Collecting semen by the method of any one of claims 1 to 4; And
Insemination method comprising the step of injecting the collected semen into the female.
상기 채취한 정액을 희석하여 암컷에 주입하는 것을 특징으로 하는 인공수정 방법.
The method of claim 7, wherein
Artificial insemination method, characterized in that the collected semen is diluted and injected into the female.
채취한 정액을 암컷에 주입하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 인공수정 방법.
Collecting semen by the method of claim 5; And
Insemination method comprising the step of injecting the collected semen into the female.
상기 채취한 정액을 희석하여 암컷에 주입하는 것을 특징으로 하는 인공수정 방법.
10. The method of claim 9,
Artificial insemination method, characterized in that the collected semen is diluted and injected into the female.
채취한 정액을 암컷에 주입하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 인공수정 방법.
Collecting semen by the method of claim 6; And
Insemination method comprising the step of injecting the collected semen into the female.
상기 채취한 정액을 희석하여 암컷에 주입하는 것을 특징으로 하는 인공수정 방법.The method of claim 11,
Artificial insemination method, characterized in that the collected semen is diluted and injected into the female.
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|---|---|---|---|---|
| JP2009005651A (en) | 2007-06-29 | 2009-01-15 | Institute Of Physical & Chemical Research | Method for preserving spermatid |
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| KR20090013543A (en) * | 2007-08-02 | 2009-02-05 | 건국대학교 산학협력단 | Method for isolating spermatogonial stem cell |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 정액채취, 2004 |
| 정자성상검사, 2005 |
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