KR100885070B1

KR100885070B1 - Oligopeptide which binds specifically to PLGA

Info

Publication number: KR100885070B1
Application number: KR1020020025272A
Authority: KR
Inventors: 장준혁; 정종평; 이승진
Original assignee: 재단법인서울대학교산학협력재단
Priority date: 2002-05-08
Filing date: 2002-05-08
Publication date: 2009-02-25
Also published as: KR20030087276A

Abstract

본 발명은 PLGA에 특이적으로 부착하는 올리고 펩타이드에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 펩타이드 라이브러리를 이용한 스크리닝을 통하여 선별한 PLGA에 특이적으로 부착하는 서열번호 1 내지 서열번호 5로 기재되는 올리고 펩타이드에 관한 것이다. 본 발명의 PLGA에 특이적으로 부착하는 펩타이드는 생체적합성 PLGA를 선택적으로 분리하거나, 또는 PLGA와 생체분자간의 연결물질(linker)로 유용하게 사용될 수 있다.
The present invention relates to an oligopeptide that specifically attaches to PLGA, and more particularly, to an oligopeptide described in SEQ ID NOs: 1 to 5 , which specifically attaches to PLGA selected by screening using a peptide library. will be. Peptides specifically attached to the PLGA of the present invention can be usefully used to selectively isolate the biocompatible PLGA, or as a linker between the PLGA and the biomolecule.

Description

Oligopeptide which binds specifically to PLGA

도 1은 PLGA에 특이적으로 부착하는 본 발명의 올리고 펩타이드의 서열을 분석한 그래프이다.
1 is a graph analyzing the sequence of the oligopeptide of the present invention specifically attached to PLGA.

본 발명은 PLGA에 특이적으로 부착하는 올리고 펩타이드에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 펩타이드 라이브러리를 이용한 스크리닝을 통하여 선별한 PLGA에 특이적으로 부착하는 서열번호 1 내지 서열번호 5로 기재되는 올리고 펩타이드에 관한 것이다.
The present invention relates to an oligopeptide that specifically attaches to PLGA, and more particularly, to an oligopeptide described in SEQ ID NOs: 1 to 5 , which specifically attaches to PLGA selected by screening using a peptide library. will be.

인간을 비롯한 모든 다세포 생물은 다양한 기능과 형태를 지닌 조직 세포들의 집합체라고 할 수 있다. 이러한 조직 세포들은 수많은 진화 과정을 거쳐 그들만의 고유한 기능이 원활히 발휘되는 독특한 형상의 신체 조직으로 발전하였다. 따라서, 이들은 매우 복잡한 구조 및 기능을 가지게 되어 외부의 자극이나 질병 등에 의한 손상으로부터 매우 취약한 문제점을 안고 있다.
All multicellular organisms, including humans, are a collection of tissue cells with a variety of functions and forms. These tissue cells have undergone numerous evolutionary processes and have evolved into uniquely shaped body tissues that exhibit their unique functions. Therefore, they have a very complicated structure and function, which is very vulnerable to damage from external stimulation or disease.

인체는 질병이나 외상에 의한 손상을 면역반응에 의하여 정상상태로 복구하려 하며, 이는 신체의 기본 단위인 손상된 조직 세포를 정상 세포로 대체하려는 현상으로 볼 수 있다. 우리가 흔히 받는 약물이나 물리 치료법은 이러한 신체의 자동 복구 현상을 도와 주는 역할을 하는 것이며, 신체의 손상이 지나쳐 스스로 복구되지 못할 경우 외과 수술을 통해 손상된 조직을 제거하여 남아 있는 정상 조직에 더 이상의 손상이 발생하지 않도록 하기도 한다. 이러한 고전적인 외과 치료의 개념은 현대에 들어 손상 부위를 정상적인 조직이나 장기로 대체하거나 재생되도록 하는 시도가 이루어지면서 적극적으로 변모하고 있다. 이에 따라 의료공학기술이 급속히 발전하게 되었다. 그러나 또한 현대 기술 사회의 발전은 그 구성원인 인간에게 각종 사고와 질병을 동반하게 하였으며, 이의 치료에는 막대한 경비가 소요되고 발병의 빈도가 매우 높아 근래에 들어서는 사회전반적으로 심각한 문제로 대두되고 있다. 일례로 보건의료기술의 선진국인 미국에서는 매년 10만명 이상의 환자들이 간, 췌장, 피부, 뼈, 심장혈관의 질환과 손상으로 인하여 장기이식에 의한 치료를 필요로 하나 그 중 약 2만명 정도에 대해서만 장기 기증이 이루어지고 있으며, 대기자 조건을 갖춘 약 3만 6천명 중에서 최근 5년간 대기중에 사망한 환자의 수가 만여명에 이른다. 또한, 치료비, 간호비와 생활보조비 및 생산성에 대한 손실이 매년 4천억불에 달하는 것으로 집계되고 있다. 우리나라의 경우에도 매년 만 여회의 장기이식수술이 이루어지고 있으나, 장기의 절대 부족 현상은 다른 나라와 다를 바 없이 심각한 공급 부족에 직면하고 있다.
The human body attempts to recover disease or trauma damage to a normal state by an immune response, which can be seen as a phenomenon of replacing damaged tissue cells, which are the basic units of the body, with normal cells. The drugs or physiotherapy we often receive help to repair the body's self-healing, and if the body's damage is not repaired by itself, surgery can remove the damaged tissue and further damage the remaining normal tissue. Sometimes this does not happen. This concept of classical surgical treatment is actively changing in modern times with attempts to replace or regenerate damaged areas with normal tissues or organs. As a result, medical engineering technology has rapidly developed. However, the development of modern technology society has caused various accidents and illnesses to human beings, and the treatment of them has enormous expenses and the incidence of onset has become a serious social problem in recent years. For example, in the United States, an advanced nation of health technology, more than 100,000 patients need treatment by organ transplantation every year because of diseases and injuries of the liver, pancreas, skin, bones, and cardiovascular system. Donations have been made, and out of the approximately 36,000 people with waiting conditions, more than 10,000 patients have died in the air in the last five years. In addition, the cost of treatment, nursing care, subsidies and productivity is estimated to reach $ 400 billion annually. In Korea, more than 10,000 transplants are performed every year. However, the absolute shortage of organs is facing a severe supply shortage, unlike other countries.

이렇듯 손상된 신체의 일부를 대체할 기증 장기의 수요는 날로 증가하고 있으나, 개선의 여지가 없는 장기의 부족은 여전하여 장기의 암거래 등과 같은 사회적 문제를 야기하고 있다. 따라서, 인체를 이루는 체세포를 인공적으로 조작하거나 크게는 장기까지 인공적으로 처리하여 생명 기능을 가진 인공 조직을 개발할 필요가 대두되었다. 조직이나 장기의 이식은 자가 조직 이식(autograft) 외에 면역억제제의 발달 덕에 동종 이식(allograft)이 사용되고 있지만 제한 이식용 장기의 공급과 이식 후 면역반응에 의한 후유증을 완전히 방지하는 것은 요원한 것이 현실이다. 또한 이식용 장기로부터 후천성 면역결핍증(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)이나 감염 등과 같은 치명적인 질환의 감염 가능성도 간과할 수 없다. 그밖에 유전공학적으로 개량된 돼지 및 원숭이 등의 동물로부터 심장, 간, 폐, 신장 등의 장기를 얻는 방안이나 최근 급속히 발달하고 있는 체세포 복제와 간세포(幹細胞 ; stem cell) 배양 기술을 이용하여 환자의 손상된 신체 조직 세포를 체외에서 재생하는 방향이 모색되고 있으나 윤리적인 문제와 면역체계와의 적합성, 간세포로부터 유래한 조직 세포의 장기 형성 등의 문제가 과제로 남아 있다.
The demand for donor organs to replace parts of the damaged body is increasing day by day, but the shortage of organs with no room for improvement is still causing social problems such as cancer trading. Therefore, there is a need to develop artificial tissues having life functions by artificially manipulating somatic cells constituting the human body or by artificially processing the organs up to large organs. The transplantation of tissues or organs is based on the development of immunosuppressive agents in addition to autograft, but allograft is used.However, it is far from supplying restricted organs and completely preventing the sequelae of immune response after transplantation. . In addition, the possibility of infecting a deadly disease, such as acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) or infection, from an organ for transplantation cannot be overlooked. In addition, methods of obtaining organs such as heart, liver, lungs, and kidneys from genetically modified animals such as pigs and monkeys, as well as recently developed somatic cell cloning and stem cell culture techniques, can be used to damage patients. The direction of regenerating body tissue cells in vitro has been sought, but problems such as ethical issues, compatibility with the immune system, and organ formation of tissue cells derived from hepatocytes remain challenges.

인공 조직의 세포외기질로 사용되는 생체재료는 크게 천연고분자와 합성 고분자 두 가지로 나누어진다. 천연고분자로는 콜라젠(collagen), 섬유결합소(fibronectin), 젤라틴(gelatin), 키토산(chitosan), 알긴산(alginic acid), 하이알우론산(hyaluronic acid) 등이 널리 이용되고 있으며, 합성 고분자로는 폴리-젓산(poly lactic acid), PGA(poly glycolic acid), PLGA와 그 유사 공중합체들과 폴리-카프로락톤(poly ε-caprolactone), 폴리-안하이드라이드(polyanhydrides) 및 폴리-오르토에스테르(polyorthoester) 등이 있다.
Biomaterials used as extracellular matrix of artificial tissue are largely divided into natural polymer and synthetic polymer. As the natural polymer, collagen, fibronectin, gelatin, chitosan, alginic acid, hyaluronic acid, etc. are widely used. Poly lactic acid, poly glycolic acid (PGA), PLGA and its like copolymers with poly ε-caprolactone, polyanhydrides and polyorthoesters ).

이러한 고분자 중 조직 공학 분야에서 널리 응용되는 생분해성 고분자는 생체 내에서 서서히 화학적 분해가 일어나면서 그 형태와 무게가 점차 소멸되는 고분자를 총칭하는 것으로서, 이를 사용하여 조직세포의 담체를 제작하여 세포와 함께 체내에 이식하게 되면, 세포가 신체 조직에 적응하여 조직을 형성하는 도중에 생분해성 고분자는 차차 분해되어 사라지므로 재수술을 통해 고분자를 제거하는 불편을 덜 수 있으며 이물질 삽입에 의한 만성적인 면역반응 또한 감소하는 효과를 기대할 수 있게 된다. 이 중, 천연 생분해성 고분자는 인위적으로 생분해속도를 조절하기 어려운 것에 비해서 유기합성을 통해 제조한 고분자는 그의 조성을 조절함에 의해서 생분해속도를 조절할 수 있는 장점이 있다.
Among these polymers, biodegradable polymers widely used in the field of tissue engineering generally refer to polymers that gradually lose their shape and weight as chemical degradation occurs in vivo, and use them to prepare carriers for tissue cells and together with the cells. When transplanted into the body, the biodegradable polymers are gradually degraded and disappeared as cells adapt to body tissue and form tissues, thereby reducing the inconvenience of removing the polymers through reoperation and reducing the chronic immune response by foreign body insertion. You can expect the effect. Of these, natural biodegradable polymers are difficult to artificially control the rate of biodegradation, whereas polymers prepared through organic synthesis have the advantage of controlling the biodegradation rate by adjusting their composition.

생분해성 합성 고분자로 대표적인 PLGA족 고분자는 지방족 폴리에스터로서 젖산(lactic acid)과 글리콜산(glycolic acid)이 에스테르 결합으로 서로 연결되어 있다. 이들 고분자는 분해하여 젖산과 글리콜산으로 분해되어 생체내의 대사산물 로 전환되어 결국 이산화탄소와 물로서 체외 배설되는 완전 생분해성이고 우수한 생체적합성을 지니고 있다. 이러한 생체재료로서의 장점을 이용하여 체내 흡수용 수술용 봉합사로서 오래 전부터 사용되어 왔고, 근래에는 펩타이드나 약물들의 지속성 약물전달용 담체로서 널리 사용되고 있으며, 또한 미국 식품보건안전원(FDA)의 승인 하에 장기간에 걸쳐 의료용 재료로 사용된 체내 이식용 고분자로도 알려져 있다. 그러나, 상기와 같이 생체에 적합한 PLGA에 특이적으로 결합하는 물질이 동정되지 않아 이러한 생체적합성 고분자를 이용하는데 어려움이 있었다.
The PLGA group polymer, which is a biodegradable synthetic polymer, is an aliphatic polyester in which lactic acid and glycolic acid are linked to each other by ester bonds. These polymers are decomposed into lactic acid and glycolic acid, converted into metabolites in vivo, and are thus completely biodegradable and excellent biocompatibility, which is excreted in vitro as carbon dioxide and water. It has been used for a long time as a surgical suture for absorption in the body by using the advantages as a biomaterial, and in recent years, it has been widely used as a carrier for sustained drug delivery of peptides and drugs, and also under the approval of the Food and Health Safety Administration (FDA) for a long time. It is also known as a polymer for implantation in the body used as a medical material throughout. However, there is a difficulty in using such a biocompatible polymer because a substance that specifically binds to PLGA suitable for a living body is not identified as described above.

이에, 본 발명자들은 펩타이드 라이브러리를 이용한 스크리닝을 통해서 PLGA에 특이적으로 부착하는 올리고 펩타이드를 선별하였으며, 상기 PLGA에 특이적으로 부착하는 올리고 펩타이드가 생체적합성 PLGA의 선택적인 분리 및 PLGA와 생체분자간의 연결물질(linker)로 유용하게 사용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
Accordingly, the present inventors screened an oligopeptide that specifically attaches to PLGA through screening using a peptide library, and the oligopeptide that specifically attaches to the PLGA selectively selects biocompatible PLGA and links between PLGA and biomolecules. The present invention has been completed by revealing that it can be usefully used as a linker.

본 발명의 목적은 PLGA에 특이적으로 부착하는 올리고 펩타이드를 제공하는 것이다.
It is an object of the present invention to provide oligopeptides that specifically attach to PLGA.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 PLGA에 특이적으로 부착하는 올리 고 펩타이드를 제공한다.
In order to achieve the above object, the present invention provides oligo peptides that specifically attach to PLGA.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 PLGA에 특이적으로 부착하는 올리고 펩타이드를 제공한다.The present invention provides oligopeptides that specifically attach to PLGA.

본 발명의 올리고 펩타이드는 서열번호 1 내지 서열번호 5로 기재되며, PLGA에 특이적으로 부착한다. 상기 올리고 펩타이드는 펩타이드 라이브러리를 이용한 스크리닝을 통하여 선별되며, 생체적합성 PLGA의 선택적인 분리 및 PLGA와 생체분자간의 연결물질로 유용하게 사용될 수 있다.
Oligopeptides of the invention are described in SEQ ID NOs: 1 to 5 , and specifically attach to PLGA. The oligopeptides are screened through screening using a peptide library and can be usefully used as selective separation of biocompatible PLGA and as a linker between PLGA and biomolecules.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.

<실시예 1> 대장균에서 발현되는 펩타이드 라이브러리의 제조Example 1 Preparation of Peptide Library Expressed in Escherichia Coli

본 발명자들은 PLGA에 부착하는 무작위의 아미노산 부위를 스크리닝하기 위하여, 티오레독신(thioredoxin)의 활성 부위에 발현될 수 있는 융합 단백질 형태로 무작위의 아미노산 서열을 발현시켰다. 구체적으로, 무작위의 아미노산 서열을 티오레독신의 활성부위를 포함하는 pFLITRIX 벡터에 삽입시켜 티오레독신과 융합된 단백질이 세포표면에 노출될 수 있도록 하였다. 상기의 방법으로 발현되는 FLITRIX 펩타이드는 PL 프로모터에 의해 발현이 조절되고 박테리오파지(bacteriophage) cI 억제제(repressor)에 의해 발현이 억제된다. 상기 박테리오파지 유래의 cI 억제제는 단백질의 발현을 강력하게 억제하는 역할을 하며, PL 프로모터의 조절 하에 있는 FLITRIX 펩타이드의 발현을 억제하게 된다. 그러나, 배지에 트립토판이 첨가되면 트립토판-trp 억제제의 복합체가 형성되며, 트립토판-trp 억제제의 복합체는 trp 오퍼레이터(operator)에 결합하게 된다. trp 오퍼레이터에 결합하게 되면 cI 억제제의 발현이 억제되고 cI 억제제의 조절하에 있는 FLITRIX 펩타이드의 발현이 유도된다.
We screened random amino acid sequences in the form of fusion proteins that can be expressed at the active site of thioredoxin to screen for random amino acid sites that attach to PLGA. Specifically, a random amino acid sequence was inserted into the pFLITRIX vector containing the active site of thioredoxin so that the protein fused with thioredoxin can be exposed to the cell surface. The expression of the FLITRIX peptide expressed by the above method is controlled by the PL promoter, and the expression is inhibited by the bacteriophage cI repressor. The bacteriophage-derived cI inhibitor plays a role of strongly inhibiting the expression of the protein and inhibits the expression of the FLITRIX peptide under the control of the PL promoter. However, when tryptophan is added to the medium, a complex of tryptophan-trp inhibitors is formed, and the complex of tryptophan-trp inhibitors binds to the trp operator. Binding to the trp operator inhibits the expression of the cI inhibitor and induces the expression of the FLITRIX peptide under the control of the cI inhibitor.

<실시예 2> 대장균에서 발현되는 펩타이드 라이브러리를 이용한 스크리닝Example 2 Screening Using Peptide Library Expressed in Escherichia Coli

본 발명자들은 상기 실시예 1의 방법으로 제조된 pFLITRIX 벡터를 대장균(E. coli)에 형질전환 시킨 후 암피실린이 첨가되어 있는 IMC 선택배지에서 배양하였다. 15시간동안 배양한 후 트립토판을 첨가하여 6시간동안 더 배양함으로써 FLITRIX 펩타이드의 발현을 유도하였다. 미리 PLGA를 고정한 배양접시를 블록시킨 후, 상기에서 발현이 유도된 대장균 형질전환체를 부착시켰다. 상기의 과정을 반복적으로 시행하여 PLGA에 특이적으로 부착하는 펩타이드 후보군을 선별하였다.
The present inventors transformed the pFLITRIX vector prepared by the method of Example 1 to E. coli and cultured in an IMC selection medium to which ampicillin was added. After incubation for 15 hours, tryptophan was added to incubate for 6 hours to induce the expression of the FLITRIX peptide. After blocking the culture plate in which PLGA was fixed in advance, E. coli transformants induced expression above were attached. The above procedure was repeated to select peptide candidate groups that specifically attach to PLGA.

<실시예 3> 자동염기서열 분석기를 이용한 펩타이드의 서열 분석Example 3 Sequence Analysis of Peptides Using an Autobase Sequence Analyzer

본 발명자들은 자동염기서열분석기(ABI Prism 377, 퍼킨엘머사, 미국)를 이용하여 ABI PRISMTMDye 종결 순환 시퀀싱(terminator cycle sequencing) 방법으로 염기서열 분석은 실시하였다. 구체적으로, PCR 증폭산물을 QIAquick PCR 정제 키 트(QIAGEN사, 미국)를 이용하여 PCR 산물만을 정제해내었다. 상기 PCR 정제산물을 GeneQuant(파마시아사, 미국)를 이용하여 정량하였다. 자동염기서열분석을 위한 PCR 반응은 다음과 같다. 8.0 ㎕의 종결 반응 혼합물(terminator ready reaction mix, 퍼킨엘머사, 미국), 10-30 ng/㎕ 농도의 정제한 PCR 산물 5 ㎕, 6.4 pmole의 PCR 프라이머 쌍 1 ㎕ 및 증류수 6 ㎕를 첨가하여 전체 반응액의 부피를 20 ㎕가 되도록 조정하였다. PCR 반응은 GeneAMP PCR system 9600(퍼킨엘머사, 미국)을 이용하여 96℃에서 핫 스타트(hot start) PCR을 시작하여 96℃에서 10초, 50℃에서 5초, 60℃에서 4분으로 25 사이클(cycle)을 시행한 후 4℃로 급냉시켰다. 각각의 PCR 증폭산물에 3 M의 나트륨 아세트산(sodium acetate, pH 5.2) 1 ㎕와 100% 에탄올 25 ㎕를 가한 후 얼음에 30분간 정치시켜 PCR 산물의 침전반응을 증가시켰으며, 4℃, 15,000 rpm에서 30분간 원심분리하여 PCR 침전물(pellet)을 수집하였다. 상층액을 제거한 후, 염을 제거하기 위하여 70% 에탄올로 세척한 후 공기중에서 건조시켰다. 탈이온화된 포름아마이드(deionized formamide)와 25 mM EDTA/ 50 ㎎/㎖ 블루 덱스트란(bule dextran)을 5 대 1의 비율로 혼합한 시퀀싱 로딩 버퍼(sequencing loading buffer) 6 ㎕을 이용하여 침전시킨 PCR 산물을 부유시켰다. 상기 부유물을 90℃에서 2분동안 방치하여 변성시킨 후 얼음에서 급냉시켰다. 자동염기서열분석용 겔을 제조하기 위하여 18 g의 요소(urea)를 25 ㎖의 증류수에 용해시키고 5.625 ㎖의 40% 아크릴아마이드를 첨가한 후, 0.5 g의 혼합된 비드 레진(mixed bed resin)을 첨가하여 15분간 잘 교반함으로써 탈이온화(deionization)시켰다. 진공펌프를 이용하여 겔 용액을 0.2 μM 여과지로 거른 후 5분간 가스를 제거시켰다(degassing). 여기에 5 ㎖의 10×TBE를 첨가하고 최종부피가 50 ㎖가 되도록 증류수를 채운 후 4.5% 아크릴아마이드/6 M 요소(urea)/1×TBE 겔을 제조하였다. 자동 염기서열 분석기에 겔을 장치한 후 염기서열분석을 위하여 급냉시켰던 PCR 산물을 로딩하였다. 2×Run, 1,680 볼트로 7시간동안 전기영동을 실시한 후 ABI Prism Sequence Navigator와 ABI Prism Factura 등의 ABI Prism DNA 서열 분석 소프트웨어를 이용하여 데이터를 분석하였다.The inventors performed sequencing by ABI PRISMTM Dye terminator cycle sequencing using an automatic base sequencer (ABI Prism 377, Perkin Elmer, USA). Specifically, the PCR amplification product was purified using only the PCR product using a QIAquick PCR purification kit (QIAGEN, USA). The PCR purified product was quantified using GeneQuant (Pharmacia, USA). PCR reaction for auto sequencing is as follows. 8.0 μl of terminator ready reaction mix (Perkin Elmer, USA), 5 μl of purified PCR product at 10-30 ng / μl concentration, 1 μl of PCR primer pair of 6.4 pmole and 6 μl of distilled water The volume of the reaction solution was adjusted to 20 μl. PCR reactions were performed using GeneAMP PCR system 9600 (Perkin Elmer, USA) to start hot start PCR at 96 ° C, 25 cycles of 10 seconds at 96 ° C, 5 seconds at 50 ° C, and 4 minutes at 60 ° C. After the cycle was quenched to 4 ℃. 1 μl of 3 M sodium acetate (pH 5.2) and 25 μl of 100% ethanol were added to each PCR amplification product, which was then allowed to stand on ice for 30 minutes to increase the precipitation of the PCR product, 4 ° C. and 15,000 rpm. PCR pellets were collected by centrifugation for 30 minutes at. After removing the supernatant, it was washed with 70% ethanol to remove salt and dried in air. PCR precipitated using 6 μl of sequencing loading buffer mixed with deionized formamide and 25 mM EDTA / 50 mg / ml blue dextran at a ratio of 5 to 1 The product was suspended. The suspension was denatured by standing at 90 ° C. for 2 minutes and then quenched on ice. To prepare a gel for auto sequencing, 18 g of urea was dissolved in 25 ml of distilled water, 5.625 ml of 40% acrylamide was added, and 0.5 g of mixed bed resin was added. Deionization was added by stirring well for 15 minutes. The gel solution was filtered through a 0.2 μM filter paper using a vacuum pump and then degassed for 5 minutes. To this was added 5 ml of 10 × TBE and filled with distilled water so that the final volume was 50 ml, to prepare 4.5% acrylamide / 6 M urea / 1 × TBE gel. The gel was placed on an automatic sequencing analyzer and loaded with the PCR product that was quenched for sequencing. After electrophoresis for 7 hours at 2 × Run, 1680 volts, the data were analyzed using ABI Prism Sequence Navigator and ABI Prism DNA sequencing software such as ABI Prism Factura.

상기의 방법으로 DNA 염기 서열을 결정함으로써, 본 발명자들은 PLGA에 특이적으로 부착하는 서열번호 1 내지 서열번호 5로 기재되는 펩타이드의 아미노산 서열을 결정하였다.
By determining the DNA base sequence by the above method, the present inventors determined the amino acid sequence of the peptide described in SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 5 specifically attaching to PLGA.

상기에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 PLGA에 특이적으로 부착하는 펩타이드는 생체적합성 PLGA의 선택적인 분리 및 PLGA와 생체분자간의 연결물질로 유용하게 사용될 수 있다.

As described above, the peptide specifically attached to the PLGA of the present invention may be usefully used as a selective separation of the biocompatible PLGA and a linkage between the PLGA and the biomolecule.

<110> JANG, JUN-HYEOG CHUNG, CHONG PYOUNG LEE, SEUNG JIN <120> Oligopeptide which binds specifically to PLGA <130> 2p-05-08B <160> 5 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide which binds specifically to PLGA <400> 1 Cys Val Val Val Glu Arg Arg 1 5 <210> 2 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide which binds specifically to PLGA <400> 2 Cys Val Val Val Glu Arg 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide which binds specifically to PLGA <400> 3 Cys Val Val Val Glu 1 5 <210> 4 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide which binds specifically to PLGA <400> 4 Cys Val Val Val 1 <210> 5 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide which binds specifically to PLGA <400> 5 Val Val Val 1 <110> JANG, JUN-HYEOG CHUNG, CHONG PYOUNG LEE, SEUNG JIN <120> Oligopeptide which binds specifically to PLGA <130> 2p-05-08B <160> 5 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide which binds specifically to PLGA <400> 1 Cys Val Val Val Glu Arg Arg 1 5 <210> 2 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide which binds specifically to PLGA <400> 2 Cys Val Val Val Glu Arg 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide which binds specifically to PLGA <400> 3 Cys Val Val Val Glu 1 5 <210> 4 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide which binds specifically to PLGA <400> 4 Cys val val val One <210> 5 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide which binds specifically to PLGA <400> 5 Val Val Val One

Claims

Oligo peptides that specifically attach to PLGA having an amino acid sequence selected from the group set forth in SEQ ID NOs: 1-4.

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