KR100858168B1 - Method of Diagnosis of Toxicity for Polybrominated Diphenyl Ethers using Target organ-array and PBDEs-specific proteins - Google Patents

Method of Diagnosis of Toxicity for Polybrominated Diphenyl Ethers using Target organ-array and PBDEs-specific proteins Download PDF

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Abstract

본 발명은 브롬화합물의 노출 및 중독증 진단을 위한 표적장기어레이와 브롬화합물에 대한 특이단백질을 이용한 진단방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 브롬화합물에 민감하게 영향을 받는 장기와 특이단백질을 선택하여 표적 장기에서 특이적인 변화를 보이는 단백질 양의 변화를 확인함으로써 브롬화합물 노출 및 중독증을 진단하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a diagnostic method using a target organ array and a specific protein for bromine compounds for the exposure and exposure of bromine compounds, more specifically, by selecting organs and proteins that are sensitive to bromine compounds. The present invention relates to a method for diagnosing bromine compound exposure and intoxication by identifying a change in the amount of protein showing a specific change in a target organ.

본 발명은 뇌하수체 조직의 프레그네인 X 수용체 또는 아포리포프로테인 A-1, 갑상선 조직의 Bcl-2, 간장 조직의 CYP1A1 또는 UGT1A 또는 전립선 조직의 안드로겐 수용체의 단백질 발현량을 검출함으로써, 환경 중 널리 오염되어 있으며 지능저하, 갑상선 기능 장해 등 내분비계 장애를 유발하는 브롬화합물의 노출 및 중독증을 진단할 수 있게 한다.  The present invention is widely contaminated in the environment by detecting the amount of protein expression of pregrine X receptor or apolipoprotein A-1 of pituitary tissue, Bcl-2 of thyroid tissue, CYP1A1 or UGT1A of hepatic tissue or androgen receptor of prostate tissue, It can be used to diagnose bromine compounds exposure and intoxication that cause endocrine disorders such as decreased intelligence and thyroid dysfunction.

브롬화합물, 표적장기어레이, 특이단백질 Bromine Compounds, Target Organ Arrays, Specific Proteins

Description

브롬화합물의 노출 및 중독증 진단을 위한 표적장기어레이와 브롬화합물에 대한 특이단백질을 이용한 진단방법{Method of Diagnosis of Toxicity for Polybrominated Diphenyl Ethers using Target organ-array and PBDEs-specific proteins} Method of Diagnosis of Toxicity for Polybrominated Diphenyl Ethers using Target organ-array and PBDEs-specific proteins for exposure of bromine compound and diagnosis of intoxication

도 1은 브롬화합물(PBDEs) 노출 및 중독증 진단을 위한 표적장기 어레이 세트의 모식도를 나타낸 것이다. 1 shows a schematic of a set of target organ arrays for diagnosing bromine compounds (PBDEs) exposure and intoxication.

도 2a는 브롬화합물 중독 시 간장 중 CYP1A1 발현도를 나타낸 것이다. Figure 2a shows the expression of CYP1A1 in the liver when bromine compound poisoning.

도 2b는 브롬화합물 중독 시 간장 중 UGT1A 발현도를 나타낸 것이다.Figure 2b shows the expression of UGT1A in liver when bromine compound poisoning.

도 3은 브롬화합물 중독 시 갑상선 중 Bcl-2 발현도를 나타낸 것이다.Figure 3 shows the expression of Bcl-2 in the thyroid gland upon bromine compound poisoning.

도 4는 브롬화합물 중독시 전립선 중 AR 발현도를 나타낸 것이다.Figure 4 shows the AR expression in the prostate when bromine compound poisoning.

도 5a는 브롬화합물 중독시 뇌하수체 중 PXR 발현도를 나타낸 것이다.Figure 5a shows the expression of PXR in the pituitary gland when bromine compound poisoning.

도 5b는 브롬화합물 중독시 뇌하수체 중 Apolipoprotein A-1 발현도를 나타낸 것이다.Figure 5b shows the expression of Apolipoprotein A-1 in the pituitary gland when bromine compound poisoning.

본 발명은 브롬화합물의 노출 및 중독증 진단을 위한 표적장기어레이와 브롬화합물에 대한 특이단백질을 이용한 진단방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 브롬화합물에 민감하게 영향을 받는 장기와 특이단백질을 선택하여 표적장기에서 특이적인 변화를 보이는 단백질 양의 변화를 확인함으로써 브롬화합물 노출 및 중독증을 진단하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a diagnostic method using a target organ array and a specific protein for bromine compounds for the exposure and exposure of bromine compounds, more specifically, by selecting organs and proteins that are sensitive to bromine compounds. The present invention relates to a method for diagnosing bromine compound exposure and intoxication by identifying changes in the amount of protein showing specific changes in target organs.

브롬화합물은 난분해성 유기할로겐계열 화합물로 연간 전 세계적으로 약 40,000톤 정도 생산되고 있으며 화염방지제로 각종 플라스틱 제품, 벽지, 장판, 카펫, 직물, 각종 전기제품 등에 혼합되어 사용된다. 최근 산업이 발달함에 따라 환경시료, 식품 및 모유 중 오염이 계속 증가하고 있어 문제시되고 있다. 사람은 환경으로부터 호흡 및 피부를 통한 노출 외에 주로 지방을 다량 함유하는 식품을 섭취함으로써 노출되며 영·유아의 경우에는 모유나 분유를 통하여 노출된다. 이는 브롬화합물이 높은 지방친화성을 띠며 체내 반감기도 화학구조에 따라 19-119일 정도로 길어 생체 내 잔류하는 시간이 길기 때문이다. Bromine compounds are hardly decomposable organic halogen compounds produced around 40,000 tons annually worldwide. They are used as flame retardants mixed with various plastic products, wallpaper, floorings, carpets, textiles, and various electrical appliances. With the recent development of the industry, pollution in environmental samples, foods and breast milk continues to increase, which is a problem. In addition to breathing and skin exposure from the environment, humans are exposed mainly by eating foods containing large amounts of fat. In infants and young children, they are exposed through breast milk or milk powder. This is because the bromine compound has high fat affinity and the half-life in the body is long, such as 19-119 days depending on the chemical structure, so that the residence time in the living body is long.

브롬화합물은 발암물질로 의심되고 있으며 내분비계 장애물질이며 신경발달 독성물질이다. 특히, 브롬화합물은 갑상선 기능장애를 일으키며 태생기 및 신생아가 모유 또는 분유를 통해 노출 시에는 인지능력 저하와 행동발달 이상이 유발된다. 아울러, 수컷의 성 성숙 지연이 유발되며 정자수, 정자운동성 저하도 보고되고 있다. 그러나 이러한 내분비계 독성은 증상이 다이옥신과 폴리염화비페닐(Polychlorinated Biphenyls, PCBs) 및 프로필티오우라실(propylthiouracil) 등의 유사환경오염물질 또는 약물에 의한 독성 증상과 유사하여 독성증상만으로는 원인물질을 구분하기 어렵다. Bromine compounds are suspected carcinogens, endocrine barriers and neurodevelopmental toxins. In particular, bromine compounds cause thyroid dysfunction, and when babies and newborns are exposed through breast milk or milk powder, cognitive decline and behavioral abnormalities are induced. In addition, male maturation is delayed and sperm count and sperm motility have been reported. However, the endocrine toxicity is similar to the toxic symptoms caused by similar environmental pollutants or drugs such as dioxins, polychlorinated biphenyls (PCBs), and propylthiouracil (propylthiouracil). it's difficult.

브롬화합물은 환경 중 오염량이 증가하면서 모유중 함유량이 과거 30년 전 대비 100배 이상 증가하였으며 주요 인체 노출원이 돼지고기와 같은 지방을 다량 함유하는 식품이라고 보고되고 있다. 브롬화합물이 인체에 노출되면 갑상선 기능저하증, 성성숙 지연, 인지능 저하, 신경계 장애 등 여러 장기에서 문제를 야기하므로 각 장기별 독성 검색 및 평가는 보름화합물의 중독증 진단에 매우 중요한 지표이다. 브롬화합물은 간장 내에서 마이크로좀 페이스(microsomal phase) II 효소인 우리딘 디포스포-글루쿠로노실 트랜스퍼라아제(uridine diphospho-glucuronosyl transferase: UDPGT) 활성도를 증가시키고 이 효소에 의해 갑상선호르몬 (T4)의 대사가 증가하여 담즙으로의 배출이 증가하여 저갑상선혈증을 유발하며 간장의 마이크로좀 페이스(microsomal phase)I 효소계열인 CYP1A1 및 CYP2B계열의 효소계도 활성화시켜 EROD, MROD 및 PROD(ethoxy-, methoxy- 및 pentoxy-resorufin-O-deethylase)가 증가하여 간장의 대사능에 변화를 일으킨다.Bromine compounds have been reported to be more than 100 times higher than in the past 30 years as the pollution of the environment has increased, and that the main source of human exposure is foods containing large amounts of fat such as pork. Exposure to human body causes problems in various organs such as hypothyroidism, delayed maturation, cognitive decline, and nervous system disorders. Toxicity detection and evaluation of each compound is a very important indicator for the diagnosis of intoxication of full compounds. Bromine compounds increase the activity of the uridine diphospho-glucuronosyl transferase (UDPGT), a microsomal phase II enzyme in the liver, and by this enzyme thyroid hormone (T4) Increased metabolism of bile, leading to increased bile thyroidemia, and activating EROD, MROD, and PROD (ethoxy-, methoxy) by activating the enzyme system of CYP1A1 and CYP2B, the microsomal phase I enzymes in the liver. -And pentoxy-resorufin-O-deethylase) increases the metabolic capacity of the liver.

브롬화합물의 체내 독성 검색을 위해 갑상선호르몬계와 간장효소계의 변화를 조사하는데 호르몬 및 대사효소계의 변화 역시 유사계열의 환경오염물질인 다이옥신, PCBs 같은 화학물질의 독성과 구분이 용이하지 않으며 갑상선호르몬계 이상을 유발하는 프로필티오우라실과 같은 약물의 작용과도 구별이 쉽지 않다. 브롬화 합물에 의해 유발되는 각종 내분비계 장애와 신경장애를 보면 갑상선이나 뇌가 손상을 받을 것으로 의심되나 현재까지는 표적장기로서 갑상선 외에는 명백히 밝혀져 있지 않으며 본 물질의 독성발현 기전에 있어서도 간장에서의 상기 효소(UDPGT, CYP1A1 및 CYP2B 계열 효소)의 활성도 증가 외에는 밝혀진 바가 없다.  In order to detect the toxicity of bromine compounds in the body, changes in thyroid hormone and hepatic enzymes are examined, and changes in hormones and metabolic enzymes are not easy to distinguish from toxicity of chemicals such as dioxins and PCBs, which are similar environmental pollutants. It is also difficult to distinguish from the action of drugs such as propylthiouracil. Various endocrine and neurological disorders caused by brominated compounds are suspected of damaging the thyroid gland or brain, but until now the target organs are not clearly identified except the thyroid gland. Other than increased activity of UDPGT, CYP1A1 and CYP2B family enzymes).

브롬화합물의 노출시 전 장기를 이용한 독성진단은 시간, 인력 등이 다량 요구되고 병리조직학적 전문지식이 중요하게 요구되는바, 단시간 내에 간편하게 수행하기 어려우며 생체 장기중 브롬화합물 오염량 분석도 브롬화합물 종류별 독성이 다양하고 200여 종 이상의 동족화학물질로 구성되어 있어 일일이 검사하여 분석하는 것이 용이하지 않다. 더욱이 신경계, 갑상선계 기능 이상 등 여러 독성이 밝혀지고는 있으나 독성 기전이 명백히 밝혀져 있지 않아 결정적인 진단 지표도 부족한 실정이다.Toxicity diagnosis using whole organs when exposure of bromine compounds requires a lot of time, manpower, etc., and pathological histological expertise is important, and it is difficult to carry out easily in a short time. It is composed of more than 200 species of homologous chemicals, so it is not easy to inspect and analyze them individually. In addition, various toxicities such as nervous system, thyroid dysfunction, etc. have been revealed, but the mechanism of toxicity is not clearly revealed, which is a definite diagnostic indicator.

최근 외부의 자극(질병, 감염, 약물 등에 의한 노출)에 대해 생체 내 변화를 손쉽게 파악하기 위하여 생체 내 특이지표(bio marker)를 찾아내는 연구가 활발히 이루어지고 있다. 브롬화합물과 같은 화학물질에 의하여 특이적으로 변화한 단백질 또는 유전자 등을 탐색하고 이들이 각 장기에서 특이적으로 변화되는 정도를 조사하면 진단 또는 노출평가가 용이할 것이며 진단키트 등으로도 응용될 수 있어 그 활용성이 매우 크다. Recently, researches to find biomarkers in vivo have been actively conducted to easily detect changes in vivo in response to external stimuli (exposures caused by diseases, infections, drugs, etc.). Searching for proteins or genes that have been specifically changed by chemicals such as bromine compounds and investigating the extent of their specific changes in each organ will facilitate diagnosis or exposure assessment and can be applied as diagnostic kits. Its utility is very large.

본 발명의 목적은 브롬화합물에 대한 노출 및 독성에 대하여 민감하게 반응 하는 브롬화합물 노출 및 중독증 진단용 표적장기어레이 세트를 제공하는데 있다. SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to provide a target organ array set for diagnosing bromine compound exposure and intoxication which is sensitive to exposure and toxicity to bromine compounds.

본 발명의 다른 목적은 뇌하수체 조직의 프레그네인 X 수용체 또는 아포리포프로테인 A-1, 갑상선 조직의 Bcl-2, 간장 조직의 사이토크롬 P4501A1 또는 UGT1A 또는 전립선 조직의 안드로겐 수용체의 발현량 검출에 의한 브롬화합물 노출 및 중독증 진단방법을 제공하는데 있다. Another object of the present invention is to detect bromine by detecting the expression level of pregrine X receptor or apolipoprotein A-1 of pituitary tissue, Bcl-2 of thyroid tissue, cytochrome P4501A1 or UGT1A of hepatic tissue, and androgen receptor of prostate tissue. To provide a method for diagnosing compound exposure and intoxication.

상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 정상군의 뇌하수체 조직, 갑상선 조직, 간장 조직, 전립선 조직 중에서 선택된 어느 하나 이상이 표면에 부착된 대조군 샘플 부착부 및 대조군에 대한 피측정 샘플을 부착할 수 있는 피측정 부착부를 포함하는 브롬화합물 노출 및 중독증 진단용 표적장기어레이 세트를 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention can attach a control sample attached to the surface and a sample to be measured for any one or more selected from the normal group of pituitary tissue, thyroid tissue, liver tissue, and prostate tissue. Provided is a set of target organ arrays for diagnosing bromine compound exposure and intoxication, including attachments under test.

또한, 본 발명은 항 프레그네인 X 수용체 항체, 항 아포리포프로테인 A-1 항체, 항 Bcl-2 항체, 항 사이토크롬 P4501A1 항체, 항 UDP-글루쿠로노실트랜스퍼라아제 1A 항체, 항 안드로겐 수용체 항체 중에서 선택된 어느 하나 이상의 항체를 포함하는 브롬화합물 노출 및 중독증 진단용 항체세트를 제공한다.In addition, the present invention provides antipregine X receptor antibody, anti apolipoprotein A-1 antibody, anti Bcl-2 antibody, anti cytochrome P4501A1 antibody, anti UDP-glucuronosyltransferase 1A antibody, anti androgen receptor Provided is a bromine compound exposure and addiction diagnostic set comprising at least one antibody selected from among antibodies.

또한, 본 발명은 뇌하수체 조직의 프레그네인 X 수용체 또는 아포리포프로테인 A-1, 갑상선 조직의 Bcl-2, 간장 조직의 사이토크롬 P4501A1 또는 UDP-글루쿠로노실트랜스퍼라아제 1A 또는 전립선 조직의 안드로겐 수용체 중에서 선택된 어느 하나 이상의 단백질 발현량을 검출하는 것을 특징으로 하는 브롬화합물 노출 및 중독증 진단방법을 제공한다.In addition, the present invention relates to pregrine X receptor or apolipoprotein A-1 of pituitary tissue, Bcl-2 of thyroid tissue, cytochrome P4501A1 or UDP-glucuronosyltransferase 1A of hepatic tissue, and androgens of prostate tissue. It provides a bromine compound exposure and toxicosis diagnostic method characterized by detecting the expression level of any one or more proteins selected from the receptor.

이하 본 발명에 대하여 상세히 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 환경 중 널리 오염되어 있으며 지능저하, 갑상선 기능 장애 등 내분비계 장애를 유발하는 브롬화합물의 중독증 진단 및 노출 평가를 위하여 브롬화합물에 의해 특이적으로 영향을 받는 단백질 및 표적장기를 세트로 하여 민감하고 정확하게 노출 및 중독증을 검사하고자 수행하였다. The present invention is a set of proteins and target organs specifically affected by bromine compounds for the diagnosis and exposure evaluation of bromine compounds that are widely contaminated in the environment and cause endocrine disorders such as intelligence loss and thyroid dysfunction. This was done to examine exposure and intoxication sensitively and accurately.

본 발명은 플라스틱제품 등 인화성이 높은 제품에 방화제로 주로 쓰이는 화학물질인 브롬화합물이 산업의 발달로 그 사용량이 증가하면서 생체, 식품 및 환경 중 오염량이 증가하여 인체노출이 증가함에 따라 이의 독성 및 노출평가가 중요시되고 있어 다장기어레이 기법과 단백질 분석 기법을 사용하여 더욱 간단하고 민감하게 브롬화합물의 노출검색 및 중독증진단법을 개발하고자 하였다. The present invention is bromine compound, a chemical that is mainly used as a fire retardant in high-flammability products, such as plastic products, as its use increases with the development of the industry, the amount of pollution in living organisms, foods, and the environment increases, so as to increase human exposure, its toxicity and exposure. Since evaluation is important, we tried to develop bromine compound exposure detection and addiction diagnosis method more simply and sensitively using multi-array array technique and protein analysis technique.

본 발명의 브롬화합물 노출 및 중독증 진단용 표적장기어레이 세트는 정상군의 뇌하수체 조직, 갑상선 조직, 간장 조직, 전립선 조직 중에서 선택된 어느 하나 이상이 표면에 부착된 대조군 샘플 부착부 및 대조군에 대한 피측정 샘플을 부착할 수 있는 피측정 부착부를 포함한다.The target organ array set for diagnosing bromine compound exposure and intoxication of the present invention comprises a control sample attachment portion and a sample to be measured to which a control group is attached to the surface of at least one selected from the pituitary tissue, thyroid tissue, liver tissue, and prostate tissue of a normal group. It includes an attachment to be measured.

브롬화합물 노출 및 중독증 진단을 위하여 진단하고자 하는 각 장기에 따라, 항 프레그네인 X 수용체 항체, 항 아포리포프로테인 A-1 항체, 항 Bcl-2 항체, 항 사이토크롬 P4501A1 항체, 항 UDP-글루쿠로노실트랜스퍼라아제 1A 항체, 항 안드로겐 수용체 항체 중에서 어느 하나 이상의 항체를 선택하여 사용할 수 있다.Depending on the organ to be diagnosed for bromine compound exposure and addiction diagnosis, antipregine X receptor antibody, anti apolipoprotein A-1 antibody, anti Bcl-2 antibody, anti cytochrome P4501A1 antibody, anti UDP-glucu One or more antibodies can be selected and used from a lonosyltransferase 1A antibody and an anti-androgen receptor antibody.

본 발명의 브롬화합물 노출 및 중독증 진단방법은 뇌하수체 조직의 프레그 네인 X 수용체 또는 아포리포프로테인 A-1, 갑상선 조직의 Bcl-2, 간장 조직의 사이토크롬 P4501A1 또는 UDP-글루쿠로노실트랜스퍼라아제 1A 또는 전립선 조직의 안드로겐 수용체의 단백질 발현량의 검출을 통해 브롬화합물 노출 및 중독증을 진단하는 것이다.Bromine compound exposure and toxicosis diagnostic method of the present invention is a pregnein X receptor or apolipoprotein A-1 of pituitary tissue, Bcl-2 of thyroid tissue, cytochrome P4501A1 or UDP-glucuronosyltransferase of hepatic tissue Bromine compound exposure and intoxication are diagnosed by detecting the amount of protein expression of the androgen receptor of 1A or prostate tissue.

브롬화합물 노출 및 중독증 진단을 위하여 진단하고자 하는 각 장기의 조직을 파라핀 블록으로 만들어 약 2㎜ 직경의 핀을 사용해서 블록을 원주형태로 파내어 새로운 파라핀 블락에 옮겨 심는다. 조직과 파라핀이 완전히 결합하면 마이크로톰을 이용하여 약 3㎛ 두께로 절편하여 상기 표적장기어레이세트의 피측정 샘플을 부착할 수 있는 피측정 부착부에 올려놓고 함수 과정을 거친 후, 항원복원을 위해 pH 6의 시트레이트 버퍼(Citrate buffer)에 슬라이드를 담아 고압멸균기를 이용해서 121℃에서 10~15분간 끓인다. 항원복원이 끝나면 3% 과산화수소를 메탄올에 1:5의 비율로 희석한 용액에 슬라이드를 10분간 방치하여 퍼옥시다아제(peroxidase) 효소를 제거한다.For the exposure of bromine compound and diagnosis of intoxication, the tissues of each organ to be diagnosed are made into paraffin blocks, and the blocks are circumferentially circulated using a pin of about 2 mm diameter and transferred to a new paraffin block. When the tissue and paraffin are completely combined, the microtome is cut into a thickness of about 3 μm and placed on a measuring attachment to which the sample of the target organ array is attached. Put the slide in the citrate buffer of 6 and boil it for 10-15 minutes at 121 ℃ using autoclave. After antigen restoration, the slides were left for 10 minutes in a solution of 3% hydrogen peroxide diluted 1: 5 in methanol to remove peroxidase enzyme.

간장에는 CYP1A1 또는 UGT1A 에 대한 항체를, 갑상선에는 Bcl-2 에 대한 항체를, 뇌하수체에는 PXR 과 아포리포프로테인(Apolipoprotein) A-1에 대한 항체를 반응시키고, 효소가 결합된 2차 항체를 반응시킨 후, 디아미노-벤지딘(diamino-benzidine: DAB)을 사용해 발색하고 헤마토자일린(Hematoxylin)으로 핵을 카운터 염색(counter staining) 후 고정하여 커버슬라이드를 덮어준다. 이미지 분석 소프트웨어(i-Solution)를 사용해서 면역염색 결과를 정량화한다. CYP1A1, UGT1A, Bcl-2, 프레그네인 X 수용체(Pregnane X receptor), 아포리포프로테인(Apolipoprotein) A-1은 세포질에 염색되어 총 면적에 대한 염색된 면적의 백분율을, 안드로겐 수용체(Androgen receptor)는 선 조직의 두께를 총 네 부위에서 측정한 평균으로 계산한다.Antibodies against CYP1A1 or UGT1A in the liver, antibodies against Bcl-2 in the thyroid gland, and antibodies against apolipoprotein A-1 to the pituitary gland were reacted. Afterwards, it is developed using diamino-benzidine (DAB) and the stained nucleus with hematoxylin (Hematoxylin) and fixed to cover the cover slide. Image analysis software (i-Solution) is used to quantify the immunostaining results. CYP1A1, UGT1A, Bcl-2, Pregnane X receptor and Apolipoprotein A-1 are stained in the cytoplasm to give a percentage of the stained area relative to the total area of the androgen receptor. Calculate the thickness of the line tissue as the average of the four measurements.

본 발명에 의하면 간장의 CYP1A1, UGT1A 단백질과 뇌하수체의 프레그네인 X 수용체, 아포리포프로테인 A-1 단백질이 각각 정상군과 비교하여 약 2배 이상 증가하면 브롬화합물 노출 및 중독증을 판단할 수 있다. 또한, 갑상선의 Bcl-2와 전립선의 안드로겐 수용체 단백질이 정상군과 비교하여 약 2배 이하로 감소 되면 브롬화합물 노출 및 중독을 판단할 수 있다.According to the present invention, bromine compound exposure and intoxication can be determined by increasing the CYP1A1, UGT1A protein of the liver, the pregine X receptor of the pituitary gland, and the apolipoprotein A-1 protein by more than two times, respectively. In addition, when the Bcl-2 of the thyroid and the androgen receptor protein of the prostate are reduced to about 2 times or less compared to the normal group, bromine compound exposure and poisoning can be determined.

이상에서와 같이 본 발명은 뇌하수체 조직의 프레그네인 X 수용체 또는 아포리포프로테인 A-1, 갑상선 조직의 Bcl-2, 간장 조직의 사이토크롬 P4501A1 또는 UDP-글루쿠로노실트랜스퍼라아제 1A 또는 전립선 조직의 안드로겐 수용체 중에서 선택된 어느 하나 이상의 단백질 발현량을 검출하여 브롬화합물 노출 및 중독증을 진단할 수 있다.As described above, the present invention provides a pregrine X receptor or apolipoprotein A-1 of pituitary tissue, Bcl-2 of thyroid tissue, cytochrome P4501A1 or UDP-glucuronosyltransferase 1A of hepatic tissue, or prostate tissue. Bromine compound exposure and intoxication can be diagnosed by detecting the expression level of any one or more proteins selected from androgen receptors.

따라서 본 발명의 브롬화합물 노출평가 및 중독증 진단용 특이단백질-표적장기 세트는 브롬화합물의 중독증 진단 및 독성 기전연구를 용이하게 하는데 도움이 될 뿐만 아니라 노출평가에도 매우 유용하게 이용될 것이다.Therefore, the bromine compound exposure assessment and the specific protein-target organ set for diagnosing toxicosis not only help to facilitate the diagnosis of toxicosis of bromine compounds and to study the toxicity mechanism, but also be useful for the exposure evaluation.

이하 본 발명의 내용을 실시예에 의해 더욱 상세하게 설명하기로 한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명의 내용을 이해하기 위해 제시되는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the content of the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, these examples are only presented to understand the content of the present invention, but the scope of the present invention is not limited to these embodiments.

[실시예 1] 공시동물 및 공시약물 투여Example 1 Administration of Test Animals and Test Drugs

28일령 수컷 랫드(Wistar rat: n=3)에 각 0, 3, 30, 100 ㎎/㎏체중의 DE-71(PBDEs의 혼합물, Cambridge Isotope Laboratories Inc.)을 옥수수기름(corn oil)에 희석하여 2주간 경구로 투여하였다. 투여가 종료된 후 랫드를 희생하여 뇌, 뇌하수체, 간장, 갑상선, 신장, 전립선, 고환, 부고환, 부신, 비장 등의 장기 중량을 측정하고 포름알데히드로 고정하였다. 장기 중량 측정 결과 투여군에서 간장과 갑상선의 중량이 증가했으며, 전립선의 중량은 감소하였다. In 28-day-old male rats (Wistar rat: n = 3), DE-71 (mixture of PBDEs, Cambridge Isotope Laboratories Inc.) at 0, 3, 30 and 100 mg / kg body weight was diluted in corn oil. Administration was oral for 2 weeks. After administration, the rats were sacrificed to measure organ weights of the brain, pituitary gland, liver, thyroid, kidney, prostate, testicle, epididymis, adrenal gland, spleen, and fixed with formaldehyde. As a result of long-term gravimetric analysis, the hepatic and thyroid gland weights increased and the prostate weight decreased in the administration group.

[실시예 2] 표적 장기 및 특이단백질 선정방법Example 2 Target Organ and Specific Protein Selection Method

실시예 1에 의해 포르말린에 고정된 조직은 탈수과정을 거친 후 파라핀 블록에 포매하였다. 각각의 블락을 조직절편을 하여 조직 슬라이드를 제작하고 헤마톡실린·에오진(HE) 염색을 하였다. 각 조직의 슬라이드의 HE 염색상을 보면서 2㎜ 직경의 핀을 사용해서 파라핀에 포매된 각 장기(뇌, 뇌하수체, 간장, 갑상선, 신장, 전립선, 고환, 부고환, 부신)의 조직을 원주 형태로 파내어 새로운 파라핀 블락에 옮겨 심어 다장기 어레이 블락을 제조하였다. The tissue fixed in formalin by Example 1 was embedded in a paraffin block after dehydration. Tissue sections were prepared by sectioning each block and hematoxylin and eosin (HE) staining were performed. While looking at the HE staining of the slides of each tissue, using a 2 mm diameter pin, the tissue of each organ (brain, pituitary gland, liver, thyroid, kidney, prostate, testes, epididymis, adrenal gland) embedded in paraffin was circumferentially excavated. The long-term array blocks were prepared by transferring to new paraffin blocks.

다장기 어레이 블록은 총 9종류의 조직 (뇌, 뇌하수체, 간장, 갑상선, 신장, 전립선, 고환, 부고환, 부신)에 대해 PBDEs의 용량별로 0, 3㎎/㎏, 30㎎/㎏, 100㎎/㎏의 총 4개 용량군으로 구성하여 한 개의 블락에 총 36개의 서로 다른 조직이 박힐 수 있도록 구성하였다. 만들어진 블락의 파라핀과 새로 심어진 조직 사이에 틈 을 완전히 메우기 위해서 58℃의 항온기에 블락을 넣고 한 시간 방치하는 과정을 2회 반복하였다. 조직과 파라핀이 완전히 결합되었으면 마이크로톰을 이용하여 3㎛ 두께로 절편을 하여 유리슬라이드 위에 올렸다. 함수 과정을 거친 후, 항원복원을 위해 pH 6의 시트레이트 버퍼(Citrate buffer)에 슬라이드를 담아 고압멸균기를 이용해서 121℃에서 10분간 끓인 후, 항원복원이 끝나면 퍼옥시다아제(peroxidase) 효소의 제거를 위해서 3% 과산화수소를 메탄올에 1:5의 비율로 희석한 용액에 슬라이드를 10분간 방치하였다. Multi-organ array block is 0, 3mg / kg, 30mg / kg, 100mg / by dose of PBDEs for 9 kinds of tissues (brain, pituitary, liver, thyroid, kidney, prostate, testes, epididymis, adrenal gland). A total of four dose groups of ㎏ consisted of a total of 36 different tissues in one block. In order to completely fill the gap between the prepared block paraffin and the newly planted tissue, the block was placed in a thermostat at 58 ° C. and left for one hour. When the tissue and paraffin were completely bonded, the microtomes were used to slice 3 μm thick and placed on the glass slide. After hydration, the slides are placed in a citrate buffer of pH 6 for antigen restoration and boiled at 121 ° C. for 10 minutes using an autoclave. After antigen restoration, the peroxidase enzyme is removed. The slides were left for 10 minutes in a solution of 3% hydrogen peroxide diluted 1: 5 in methanol.

브롬화합물 노출시 유발되는 내분비교란 등의 임상시험결과를 고려하여 단백질을 크게 혈중 아포리포프로테인 A-1의 증가와 관계가 있을 것으로 추정되는 단백질, 내분비 교란 시 변화하는 단백질, 발암이나 세포사멸(apoptosis)과 관계되는 단백질의 세 그룹으로 나누어 선발하였다. 제1군의 단백질에는 아포리포프로테인(Apolipoprotein) A-1, 프리세닐린(presenilin) 2, PXR, CYP1A1, UGT1A 등 5종, 제2군의 단백질에는 AR, PR, ER-α, EGFR 등 4종, 제3군의 단백질에는 c-Myc, PKC-α, PCNA, Bax, Bcl-2, Cox2 등 6종의 단백질을 선발하여 총 15종의 단백질에 대해 면역염색을 실시하였다. 선발된 각각의 단백질 항체를 5% 스킴 밀크(skim milk), 0.05% Tween-20을 녹인 PBS에 1:100으로 희석하여 100㎕씩 30분간 슬라이드와 반응 후에 0.05% Tween-20을 녹인 PBS로 3회 세척하여 결합하지 않은 항체들은 제거하였다. SuperPicTureTM Polymer Detection Kit (Zymed Laboratory Inc., U.S.A)를 사용하여 효소가 결합된 2차 항체를 100㎕씩 슬라이드에 20분간 방치 후 0.05% Tween- 20을 녹인 PBS로 3회 세척하여 결합하지 않은 항체들은 제거하였다. 디아미노-벤지딘(diamino-benzidine: DAB)을 사용해 발색 후 0.05% Tween-20을 녹인 PBS로 3회 세척하고 헤마토자일린(Hematoxylin)으로 핵을 카운터 염색(counter staining) 후 0.05% Tween-20을 녹인 PBS로 3회 세척하였다. 헤마토자일린이 깨끗이 제거되면 탈수 후에 마운팅 솔루션을 한 방울 떨어뜨리고 커버슬라이드를 덮어주었다. 이미지 분석 소프트웨어(i-Solution)를 사용해서 면역염색 결과를 정량화하였다. Considering the results of clinical trials such as endocrine disruption induced by bromine compound exposure, the protein is considered to be related to the increase of apolipoprotein A-1 in the blood, the protein that changes during endocrine disruption, carcinogenesis or apoptosis Were divided into three groups of proteins. Group 1 proteins include Apolipoprotein A-1, presenilin 2, PXR, CYP1A1, and UGT1A, and group 2 proteins include AR, PR, ER-α, and EGFR. Six proteins, including c-Myc, PKC-α, PCNA, Bax, Bcl-2, and Cox2, were selected for species and the third group of proteins, and a total of 15 proteins were immunostained. Each selected protein antibody was diluted 1: 100 in PBS dissolved in 5% skim milk, 0.05% Tween-20, and then reacted with slides of 100 μl for 30 minutes, followed by PBS dissolved in 0.05% Tween-20. Antibodies that did not bind by washing were removed. Unbound antibody was washed with PBS dissolved in 0.05% Tween-20 for 20 minutes of the enzyme-bound secondary antibody on a slide of 100 μl using a SuperPicTure TM Polymer Detection Kit (Zymed Laboratory Inc., USA). Were removed. After developing with diamino-benzidine (DAB), washed three times with PBS dissolved 0.05% Tween-20, and 0.05% Tween-20 after counter staining with hematoxylin. Washed three times with dissolved PBS. Once the hematozain was cleared, a drop of mounting solution was dropped and the cover slide covered after dehydration. Immunostaining results were quantified using image analysis software (i-Solution).

15종의 단백질에 대한 면역염색 결과를 분석하여 브롬화합물의 노출 양과 상관성 있게 증가 또는 감소하는 단백질 및 장기를 선택하여 표적장기어레이 및 특이단백질 세트를 구성하였다(표 1). 표 1에 나타난 바와 같이, 간장 조직의 CYP1A1와 UGT1A, 뇌하수체 조직의 프레그네인 X 수용체(Pregnane X receptor)와 아포리포프로테인(Apolipoprotein) A-1의 발현 양은 브롬화합물의 농도가 증가함에 따라 증가하였으며, 갑상선 조직의 Bcl-2와 전립선 조직의 안드로겐 수용체(Androgen receptor)의 발현량은 브롬화합물의 농도가 증가함에 따라 감소하는 경향이었다. Immunostaining results for 15 proteins were analyzed to select target organ arrays and specific protein sets by selecting proteins and organs that increased or decreased correlated with the amount of bromine compound exposed (Table 1). As shown in Table 1, the expression levels of CYP1A1 and UGT1A in the hepatic tissue, pregnane X receptor and Apolipoprotein A-1 in the pituitary gland increased with increasing bromine compound concentration. The expression levels of Bcl-2 in thyroid tissue and androgen receptor in prostate tissue tended to decrease with increasing bromine concentration.

<표 1> 표적 장기별 정량화된 특이 단백질의 면역염색결과 발현도 (%) <Table 1> Immunostaining results and expression levels of specific proteins quantified by target organs (%)

조직group 단백질protein 정상군Normal 투여군 (PBDEs 3㎎/체중㎏)Administration group (PBDEs 3mg / kg) 투여군 (PBDEs 30㎎/체중㎏)Administration group (PBDEs 30mg / kg) 투여군 (PBDEs 100㎎/체중㎏)Administration group (PBDEs 100mg / kg) 간장Soy sauce CYP1A1CYP1A1 0.8±1.40.8 ± 1.4 1.1±1.91.1 ± 1.9 16.6±11.216.6 ± 11.2 26.4±11.626.4 ± 11.6 간장Soy sauce UGT1AUGT1A 12.3±3.512.3 ± 3.5 10.9±3.910.9 ± 3.9 24.4±3.624.4 ± 3.6 32.4±14.632.4 ± 14.6 갑상선thyroid Bcl-2Bcl-2 1.3±1.51.3 ± 1.5 0.3±0.20.3 ± 0.2 0.8±0.90.8 ± 0.9 0.8±0.60.8 ± 0.6 전립선prostate ARAR 15.4±8.015.4 ± 8.0 12.5±4.812.5 ± 4.8 7.7±1.97.7 ± 1.9 5.7±3.45.7 ± 3.4 뇌하수체pituitary PXRPXR 2.5±0.72.5 ± 0.7 3.0±1.73.0 ± 1.7 15.8±1.715.8 ± 1.7 16.8±0.316.8 ± 0.3 뇌하수체pituitary Apolipoprotein A-1Apolipoprotein A-1 6.6±4.76.6 ± 4.7 28.1±14.628.1 ± 14.6 29.3±13.629.3 ± 13.6 30.2±8.930.2 ± 8.9

CYP1A1: 사이토크롬 P4501A1(cytochrome P4501A1) CYP1A1: cytochrome P4501A1

UGT1A: UDP-글루쿠로노실트랜스퍼라아제 1A(UDP-glucuronosyltransferase 1A)UGT1A: UDP-glucuronosyltransferase 1A

AR: 안드로겐 수용체(Androgen receptor)AR: Androgen receptor

PXR: 프레그네인 X 수용체(Pregnane X receptor)PXR: Pregnane X receptor

[실시예 3] 표적장기 어레이 세트 구성·제작 및 특이 반응 방법Example 3 Constructing, Producing and Specific Reaction Method of Target Organ Array Set

2㎜ 직경의 핀을 사용해서 파라핀에 포매된 표적 장기 (뇌하수체, 갑상선, 간장, 전립선)의 조직을 원주 형태로 파내어 새로운 파라핀 블락에 옮겨 심어 다장기어레이 블락을 제조하였다. 새로 만들어진 블락의 파라핀과 새로 심어진 조직 사이에 틈을 완전히 메우기 위해서 58℃의 항온기에 블락을 넣고 한 시간 방치하는 과정을 2회 반복하였다. 조직과 파라핀이 완전히 결합되었으면 마이크로톰을 이용하여 3㎛ 두께로 절편하여 유리슬라이드 위에 올려놓고 함수 과정을 거친 후, 항원복원을 위해 pH 6의 시트레이트 버퍼(Citrate buffer)에 슬라이드를 담아 고압멸균기를 이용해서 121℃에서 10분간 끓였다. Using a 2 mm diameter pin, tissues of the target organs (pituitary, thyroid, hepatic and prostate) embedded in paraffin were circumferentially excised and transferred to a new paraffin block to prepare a multi-organ array block. In order to completely fill the gap between the newly prepared block paraffin and the newly planted tissue, the block was placed twice in an incubator at 58 ° C. for one hour. When the tissue and paraffin are completely combined, the microtome is cut into 3 μm thickness, placed on a glass slide, and hydrated. The slide is placed in a citrate buffer of pH 6 to restore the antigen. Then boiled at 121 ° C. for 10 minutes.

항원복원이 끝나면 퍼옥시다아제(peroxidase) 효소 제거를 위해서 3% 과산화수소를 메탄올에 1:5의 비율로 희석한 용액에 슬라이드를 10분간 방치하였다. 특이 단백질에 대한 항체를 각각 처리하기 위해 팝펜을 이용하여 조직주변에 도 1에서와 같이 테두리를 그려주었다. 팝펜으로 테두리를 그린 후 조직이 마르지 않도록 주의하면서 간장에는 CYP1A1 또는 UGT1A 에 대한 항체를, 갑상선에는 Bcl-2 에 대한 항체를, 뇌하수체에는 PXR 과 아포리포프로테인 A-1 에 대한 항체를 5% 스킴 밀크, 0.05% Tween-20을 녹인 PBS에 1:100으로 희석하여 40㎕씩 장기 위에 떨어뜨려 주었 다. After antigen restoration, the slides were left for 10 minutes in a solution of 3% hydrogen peroxide diluted 1: 5 in methanol to remove peroxidase enzyme. In order to treat the antibodies to specific proteins, a border was drawn around the tissue using a pop pen as shown in FIG. 1. 5% skim milk with antibodies against CYP1A1 or UGT1A in the liver, antibodies against Bcl-2 in the thyroid gland, and antibodies against PXR and apolipoprotein A-1 in the pituitary gland , 0.05% Tween-20 was diluted 1: 100 in PBS dissolved in 40μL drop on the organ.

조직이 마르지 않도록 관찰하면서 30분간 방치 후에 0.05% Tween-20을 녹인 PBS로 3회 세척하여 결합하지 않은 항체들은 제거해 주었다. SuperPicTureTM Polymer Detection Kit (Zymed Laboratory Inc., U.S.A)를 사용하여 효소가 결합된 2차 항체를 100㎕씩 조직에 떨어뜨리고 20분간 방치 후에 0.05% Tween-20을 녹인 PBS로 3회 세척하여 결합하지 않은 항체들은 제거해주었다. 디아미노-벤지딘(diamino-benzidine: DAB)을 사용해 발색 후 0.05% Tween-20을 녹인 PBS로 3회 세척하고 헤마토자일린(Hematoxylin)으로 핵을 카운터 염색(counter staining) 후 0.05% Tween-20을 녹인 PBS로 3회 세척한다. 헤마토자일린이 깨끗이 제거되면 탈수 후에 마운팅 솔루션을 한 방울 떨어뜨리고 커버슬라이드를 덮어주었다. Observing the tissues do not dry out, and left for 30 minutes, washed three times with PBS dissolved in 0.05% Tween-20 to remove the unbound antibodies. Using the SuperPicTure TM Polymer Detection Kit (Zymed Laboratory Inc., USA), 100 μl of the enzyme-bound secondary antibody was dropped into the tissue and left for 20 minutes, followed by washing three times with PBS in 0.05% Tween-20. Antibodies were removed. After developing with diamino-benzidine (DAB), washed three times with PBS dissolved 0.05% Tween-20, and 0.05% Tween-20 after counter staining with hematoxylin. Wash three times with dissolved PBS. Once the hematozain was cleared, a drop of mounting solution was dropped and the cover slide covered after dehydration.

이미지 분석 소프트웨어(i-Solution)를 사용해서 면역염색 결과를 정량화하였다. CYP1A1, UGT1A, Bcl-2, 프레그네인 X 수용체, 아포리포프로테인 A-1 은 세포질에 염색되어 총 면적에 대한 염색된 면적의 백분율을, 안드로겐 수용체는 선 조직의 두께를 총 네 부위에서 측정한 평균으로 계산하였다.Immunostaining results were quantified using image analysis software (i-Solution). CYP1A1, UGT1A, Bcl-2, Pregine X Receptor, and Apolipoprotein A-1 were stained in the cytoplasm and the percentage of the stained area relative to the total area, and the Androgen Receptor measured the thickness of the gland tissue in all four areas. Calculated on average.

[실시예 4] 결과 판정 및 진단방법Example 4 Results Determination and Diagnosis Method

브롬화합물 투여군(PBDEs 30㎎/체중㎏ 이상)의 표적장기어레이를 제작하여 브롬화합물 특이단백질로 면역염색을 한 슬라이드는 무처치 대조군(n=3)을 기준으로 특정 단백질의 발현 정도를 측정한 결과 간장에서 약물대사에 작용하는 CYP1A1 과 UGT1A의 약 2배 이상 증가, 뇌하수체에서 PXR의 2배 이상의 증가와 아포리포프로테인 A-1의 약 2배 이상의 증가가 관찰되고, 반면 전립선에서 안드로겐 수용체 및 갑상선에서의 Bcl-2의 감소가 관찰되면 브롬화합물에 독성 발현량 이상으로 노출되었거나 중독증이 발현된 것으로 진단하였다. 이때의 이미지 분석은 각각의 면역염색 결과를 이미지 분석 프로그램을 사용하여 전체 면적 중 면역 염색된 부분의 면적을 백분율로 환산하여 실시하였다. Target organ arrays of bromine compound-administered groups (PBDEs 30 mg / kg body weight or more) were prepared and immunostained with bromine compound-specific proteins, and the expression level of specific proteins was measured based on the untreated control (n = 3). More than two-fold increase in CYP1A1 and UGT1A acting on drug metabolism in the liver, more than two-fold increase in PXR in the pituitary gland and about two-fold increase in apolipoprotein A-1, while in the androgen receptor and thyroid in the prostate When the decrease of Bcl-2 was observed, it was diagnosed that the bromine compound was exposed to more than the amount of toxic expression or toxicosis was expressed. At this time, the image analysis was performed by converting each immunostaining result into a percentage of the area of the immunostained portion of the total area using an image analysis program.

이미지 분석 프로그램을 사용하여 얻은 백분율(면역염색/전체면적)을 통계처리하고, 평균(n=3) 및 오차범위에 대한 결과를 바탕으로 판정기준표(표 2)에 따라 결과 판정 및 진단을 설정하였다.The percentage (immune staining / total area) obtained using the image analysis program was statistically processed and the result judgment and diagnosis were set according to the criteria (Table 2) based on the results for the mean (n = 3) and the error range. .

<표 2> 브롬화합물 중독증 진단 시 면역염색 결과의 판정기준표<Table 2> Criteria for Determination of Immunostaining Results in Bromine Compound Addiction

장기long time 단백질protein 판정기준Criteria 간장Soy sauce CYP1A1CYP1A1 정상군의 2배 이상 증가More than double the normal group 간장Soy sauce UGT1AUGT1A 정상군의 2배 이상 증가More than double the normal group 갑상선thyroid Bcl-2Bcl-2 정상군의 1/2 이하 감소 Less than 1/2 of normal group 전립선prostate Androgen receptorAndrogen receptor 정상군의 1/2 이하 감소 Less than 1/2 of normal group 뇌하수체pituitary Pregnane X receptorPregnane X receptor 정상군의 2배 이상 증가More than double the normal group 뇌하수체pituitary Apolipoprotein A-1Apolipoprotein A-1 정상군의 2배 이상 증가More than double the normal group

※ 의심시료 중 브롬화합물의 독성량 이상 오염 여부를 확인시, 4주령-6주령의 미성숙 랫드를 사용하며 의심시료를 랫드에 강제 투여 후 해당 단백질의 발현도를 검사하며 이때의 양성시료 판정 기준임.      ※ To check whether the bromine compound is contaminated more than the toxicity of bromine compounds, immature rats of 4 to 6 weeks of age are used, and the suspected sample is forcibly administered to the rats and tested for expression of the protein.

그 결과 브롬화합물 중독 시, 도 2a 및 2b에서 보는 바와 같이 간장 중 CYP1A1의 발현, UGT1A의 발현은 증가하였고, 도 3에서 보는 바와 같이 갑상선 중 Bcl-2 발현은 감소하였다. 또한, 도 4에서 보는 바와 같이 전립선 중 안드로겐 수 용체 발현은 감소하였고, 도 5a 및 도 5b에서 보는 바와 같이 뇌하수체 중 PXR 및 아포리포프로테인 A-1 발현은 증가하였다. As a result, when bromine compound poisoning, the expression of CYP1A1 and the expression of UGT1A in the liver increased as shown in FIGS. 2A and 2B, and the expression of Bcl-2 in the thyroid gland decreased as shown in FIG. 3. In addition, androgen receptor expression was decreased in the prostate as shown in FIG. 4, and PXR and apolipoprotein A-1 expression in the pituitary gland was increased as shown in FIGS. 5A and 5B.

이상에서 살펴본 바와 같이 본 발명에 의해 다장기어레이 및 단백질 분석 기술을 이용하여 브롬화합물의 독성 및 중독증 진단을 위해 브롬화합물에 특이적으로 반응하는 장기와 특이단백질을 이용한 진단방법을 제공함으로써, 브롬화합물에 민감하게 영향을 받는 장기 및 특이단백질의 변화를 신속하게 수행할 수 있다. 또한, 사람 및 가축에서의 브롬화합물의 중독 및 오염도 확인을 용이하게 할 수 있어 인체건강관리와 가축의 브롬화합물 노출평가를 간편하게 할 수 있다. As described above, bromine compounds by providing a diagnostic method using organs and specific proteins that specifically react with bromine compounds for the diagnosis of toxicity and poisoning of bromine compounds using multi-organ array and protein analysis technology according to the present invention. Changes in organs and specific proteins that are sensitive to the virus can be performed quickly. In addition, it is easy to confirm the poisoning and contamination of bromine compounds in humans and livestock, which facilitates human health management and assessment of bromine compound exposure in livestock.

Claims (3)

삭제delete 항 프레그네인 X 수용체 항체, 항 아포리포프로테인 A-1 항체, 항 Bcl-2 항체, 항 사이토크롬 P4501A1 항체, 항 UDP-글루쿠로노실트랜스퍼라아제 1A 항체 및 항 안드로겐 수용체 항체를 포함하는 브롬화합물 노출 및 중독증 진단용 항체세트.Bromine including antipregine X receptor antibody, anti apolipoprotein A-1 antibody, anti Bcl-2 antibody, anti cytochrome P4501A1 antibody, anti UDP-glucuronosyltransferase 1A antibody and anti androgen receptor antibody Set of antibodies for diagnosing compound exposure and intoxication. 가축의 브롬화합물 노출 및 중독증 진단에 있어서,In the diagnosis of bromine compound exposure and poisoning in livestock, 정상군의 뇌하수체 조직, 갑상선 조직, 간장 조직 및 전립선 조직을 각각 대조군 샘플로 표면에 부착하고, 상기 대조군에 대한 피측정 샘플을 부착하여 표적 장기 어레이 세트를 만드는 단계;Attaching a normal group of pituitary tissue, thyroid tissue, liver tissue and prostate tissue to the surface as a control sample, and attaching a sample to be measured for the control to create a target organ array set; 상기 표적 장기 어레이 세트에 상기 제2항의 항체 세트를 반응시키는 단계; 및Reacting the antibody set of claim 2 with the target organ array set; And 뇌하수체 조직의 프레그네인 X 수용체(Pregnane X receptor) 및 아포리포프로테인 A-1, 갑상선 조직의 Bcl-2, 간장 조직의 사이토크롬 P4501A1 및 UDP-글루쿠로노실 트랜스퍼라아제 1A 및 전립선 조직의 안드로겐 수용체의 단백질 발현량을 검출하는 것을 특징으로 하는 가축의 브롬화합물 노출 및 중독증 진단방법.Pregnane X receptor and apolipoprotein A-1 in pituitary tissue, Bcl-2 in thyroid tissue, cytochrome P4501A1 and UDP-glucuronosyl transferase 1A in hepatic tissue and androgen in prostate tissue Bromine compound exposure and intoxication diagnostic method for livestock, characterized in that for detecting the amount of protein expression of the receptor.
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