KR100821966B1 - Therapeutic agent comprising biphenol compounds for prevention and treatment of cardiovascular disease - Google Patents
Therapeutic agent comprising biphenol compounds for prevention and treatment of cardiovascular disease Download PDFInfo
- Publication number
- KR100821966B1 KR100821966B1 KR1020070060987A KR20070060987A KR100821966B1 KR 100821966 B1 KR100821966 B1 KR 100821966B1 KR 1020070060987 A KR1020070060987 A KR 1020070060987A KR 20070060987 A KR20070060987 A KR 20070060987A KR 100821966 B1 KR100821966 B1 KR 100821966B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- extract
- compound
- present
- trademark
- biphenol
- Prior art date
Links
- OFSAJYZMIPNPHE-UHFFFAOYSA-N CC(NCCc(cc1O)ccc1O)=O Chemical compound CC(NCCc(cc1O)ccc1O)=O OFSAJYZMIPNPHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
- A61K31/065—Diphenyl-substituted acyclic alcohols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/03—Organic compounds
- A23L29/035—Organic compounds containing oxygen as heteroatom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C37/00—Preparation of compounds having hydroxy or O-metal groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
- C07C37/68—Purification; separation; Use of additives, e.g. for stabilisation
- C07C37/70—Purification; separation; Use of additives, e.g. for stabilisation by physical treatment
- C07C37/82—Purification; separation; Use of additives, e.g. for stabilisation by physical treatment by solid-liquid treatment; by chemisorption
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
본 발명은 상표초 추출물, 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환 예방 및 치료제에 관한 것으로, 구체적으로 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성 및 라디칼 소거능이 우수한 상표초 추출물, 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환 예방 및 치료제에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 상기와 같은 효과가 있으므로 저밀도 지질단백질의 산화 및 라디칼 생성에 의해 유발되는 동맥경화, 관상동맥 심장병, 심근경색 및 상기 질환으로부터 유발되는 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a cardiovascular extract, an acetyl dopamine-based compound or biphenol compound isolated therefrom, as an active ingredient, which relates to the prevention and treatment of cardiac circulatory diseases, specifically, a trademark having excellent antioxidant activity and radical scavenging ability against low-density lipoproteins. The present invention relates to an agent for preventing and treating cardiac circulatory diseases, which comprises an extract, an acetyldopamine compound or a biphenol compound isolated therefrom as an active ingredient. Since the composition of the present invention has the same effect as above, it can be usefully used for the prevention and treatment of atherosclerosis, coronary heart disease, myocardial infarction and cardiac circulatory diseases caused by the above-mentioned low density lipoprotein oxidation and radical production. have.
Description
본 발명은 상표초 추출물, 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환 예방 및 치료제에 관한 것으로, 보다 상세하게는 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성 및 라디칼 소거능이 우수한 상표초 추출물, 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환 예방 및 치료제에 관한 것이다. The present invention relates to a cardiovascular extract, an acetyl dopamine compound or biphenol compound isolated therefrom as an active ingredient for cardiovascular disease prevention and treatment, and more particularly, antioxidant activity and radical scavenging activity against low density lipoprotein The present invention relates to an excellent cardiac extract, an acetyl dopamine-based compound or a biphenol compound isolated therefrom as an active ingredient.
최근 성인병 증가와 아울러 동맥경화 등 혈관장애 질환이 크게 증가되고 있다. 대표적인 혈관장애 질환으로서 동맥경화는 지질대사와 관련된 유전적 요인과 식습관, 흡연, 운동부족 등의 환경적 요인에 의하여 동맥이 경화되는 질환으로, 뇌동맥 또는 관상동맥에서 일어나기 쉬우며, 이로 인하여 심장질환, 뇌혈관 질환 등의 순환계 질환으로 발전하게 된다. 뇌동맥경화의 경우에는 두통, 현기증, 정신장애 등을 나타내고 뇌연화증의 원인이 되며, 관상동맥경화의 경우에는 심장부에 동 통과 부정맥을 일으켜 협심증, 심근경색 등의 원인이 되는 것으로 알려져 있다. 또한 이로 인해 고혈압, 심장병, 뇌일혈 등이 유발되어, 동맥경화로 인한 질병이 현대 사회에 있어, 특히 50~60대의 남성들에게 가장 큰 사망요인으로 부각되고 있다.Recently, vascular disorders such as arteriosclerosis have increased significantly as adult diseases increase. Atherosclerosis is a typical vascular disorder. Atherosclerosis is a disease in which the arteries are hardened by genetic factors related to lipid metabolism and environmental factors such as eating habits, smoking, and lack of exercise, and are likely to occur in the cerebral artery or coronary artery. It develops into circulatory diseases such as cerebrovascular diseases. In the case of cerebral arteriosclerosis, headache, dizziness, and mental disorders are indicated, which causes cerebral pneumoconiosis, and in the case of coronary arteriosclerosis, it is known to cause angina arrhythmias and cause angina pectoris and myocardial infarction. In addition, this causes high blood pressure, heart disease, cerebral hemorrhage, and atherosclerosis is the leading cause of death in modern society, especially among men in their 50s and 60s.
동맥경화의 초기 발생에 관한 가설은 '손상에 대한 반응가설(responce-to-injury hypothesis)'로서, 유전적 변이, 과산화물, 고혈압, 당뇨, 혈장 호모시스테인 농도 증가, 미생물 감염 등의 원인에 의하여 혈관 내피세포가 정상적인 항상성을 유지하지 못하는 기능부전 상태가 되는 것이다. 내피세포가 기능부전 상태로 되면 세포부착물질이 크게 발현되고 세포 투과성이 증가되어 혈중 면역세포, 혈소판, 지방질 등의 부착성 및 조직으로의 투과성이 증가되며, 이들 면역세포들에 의한 염증매개인자 및 성장인자의 분비 등의 염증반응 때문에 동맥경화성 병변이 발생하고 발달하게 된다는 것이다(Ross, R., N. Engl. J. Med., 340: 115-126, 1999). 이때 혈중 저밀도 지단백질(low-density lipoprotein; LDL)이 산화, 당결합, 집적화, 당단백 결합 등을 거쳐 변형-LDL(modified-LDL; MLDL)로 변화하게 되고, 이들은 혈관 내피세포 및 평활근을 자극하고 손상을 유발한다(Steinberg, D., J. Biol. Chem., 272: 20963-20966, 1997; Griendling, K.K. et al., Circulation, 96: 3264-3265, 1997; Bavab, M. et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 16: 831-42, 1996). 이로 인하여, 내피세포의 혈관세포부착물질-1(vascular cell adhesion molecule-1; VCAM-1)의 발현 및 염증세포의 염증매개인자 방출이 촉진되면 LDL은 내피세포 아래에 유입 및 축적되고, 축적된 LDL 및 산화된 MLDL은 다시 대식세포, T 임파구 등의 면역세포의 유입 및 활성화를 유발하는 과정을 되풀이하여 병변의 염증반응을 촉진시키게 된다(Rajavashisth, T.B. et al., Nature, 344: 254-257, 1990; Quinn, M. T. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84: 2995-2998, 1987). 그 다음, 유입된 대식세포나 임파구로부터 방출된 가수분해효소, 염증매개인자, 성장인자 등의 작용으로 병반은 괴사하게 되고, 괴사된 병소 부위로 단핵구의 유입, 평활근의 이동 및 분화, 섬유성 조직의 형성 등의 반복적인 과정이 이루어진다. 상기 과정을 통해 병변 조직은 MLDL을 핵으로 한 괴사조직에 섬유질이 덮인 복잡한 구조의 섬유질 병변으로 발달하게 되며(Fuster, V. et al., Artherosclerosis and coronary artery disease, vol 1, 539-555, 585-594; vol. 2, 492-510, 1st Edition, Lippincott, 1996), 발달된 병변 조직으로부터 혈전이 생성되고 동맥이 경화되어 혈류장애 등 순환기 질환이 나타나게 되는 것이다(Ross, R., N. Engl. J. Med., 340: 115-126, 1999).The hypothesis of the early onset of atherosclerosis is the response-to-injury hypothesis, which causes vascular endothelium due to genetic variations, peroxides, hypertension, diabetes, elevated plasma homocysteine levels, and microbial infections. The cell is in a dysfunctional state that does not maintain normal homeostasis. When endothelial cells are in a dysfunctional state, cell adhesion substances are greatly expressed and cell permeability is increased, and adhesion to immune cells, platelets, lipids, etc. and permeability to tissues are increased, and inflammatory mediators by these immune cells and Atherosclerotic lesions develop and develop due to inflammatory responses such as growth factor secretion (Ross, R., N. Engl. J. Med. , 340: 115-126, 1999). At this time, low-density lipoprotein (LDL) in the blood is transformed into modified-LDL (MLDL) through oxidation, glycosylation, integration, glycoprotein binding, etc., which stimulate and damage vascular endothelial cells and smooth muscle. (Steinberg, D., J. Biol. Chem. , 272: 20963-20966, 1997; Griendling, KK et al. , Circulation , 96: 3264-3265, 1997; Bavab, M. et al. , Arterioscler Thromb. Vasc. Biol. , 16: 831-42, 1996). As a result, when the expression of vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) of endothelial cells and the release of inflammatory mediators of inflammatory cells are promoted, LDL enters and accumulates under the endothelial cells, LDL and oxidized MLDL in turn stimulate the lesion's inflammatory response by inducing the influx and activation of immune cells such as macrophages and T lymphocytes (Rajavashisth, TB et al. , Nature , 344: 254-257). , 1990; Quinn, MT et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 84: 2995-2998, 1987). Next, the lesions are necrotic by the action of the introduced macrophages or lymphocytes released from hydrolysases, inflammatory mediators, growth factors, etc., and monocytes are introduced into the necrotic lesions, smooth muscle migration and differentiation, fibrous tissue Iterative process such as the formation of a. Through this process, the lesion tissue develops into a fibrous lesion of complex structure covered with fibres in the necrotic tissue which is MLDL-based (Fuster, V. et al. , Artherosclerosis and coronary artery disease , vol 1, 539-555, 585). -594; vol. 2, 492-510, 1st Edition, Lippincott, 1996), the formation of thrombi from developed lesion tissue and the hardening of the arteries resulting in circulatory diseases such as blood flow disorders (Ross, R., N. Engl) J. Med. , 340: 115-126, 1999).
LDL 산화는 동맥경화를 유발하는 초기 요인으로 가장 중시되고 있다. 생체 내외에서 생성되는 산화적 스트레스(oxidative stress)는 혈액 내의 LDL을 산화된-LDL(oxidized-LDL)로 변형시키게 되고, 이것이 부착분자(adhesion molecule)를 통해 맥관내막(intima) 내로 유입된다. 유입된 산화된-LDL을 단핵구(monocyte)가 탐식하여 거품세포(foam cell)를 형성하면서 동맥경화 초기 병변인 지방선조(fatty streak)를 생성하게 된다. 동맥경화 초기 병변의 특징은 동맥 내피세포에서 생성되는 부착분자인 VCAM-1, ICAM-1(intracellular adhesion molecule-1) 및 MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1)이 발현된다는 것인데, 이들은 전사인 자(transcription factor)인 NF-κB(nuclear factor-κB)에 의해 유도된다. NF-κB는 p50과 p65로 구성된 이형이합체(hetero dimer)로서 많은 세포의 타겟 유전자(target gene)를 조절하는데 포함되는 전사인자이다. 활성화된 NF-κB는 IL-1, VCAM-1, ICAM-1 및 죽상동맥경화(atherosclerosis)의 진행에 관여하는 다른 인자들과 같이 특이적인 프로모터 유전자(promoter gene)에 결합하여 다양한 염증인자의 발현을 조절하며, 활성 산소종이나 사이토카인(cytokine) 등과 같은 다양한 요인에 의해 활성화된다. LDL oxidation is most important as an early cause of atherosclerosis. Oxidative stress produced in vivo and in vivo transforms LDL in the blood into oxidized-LDL, which enters the intima through an adhesion molecule. Monocytes are introduced into the oxidized-LDL to form foam cells, producing fat streak, an early lesion of atherosclerosis. Early lesions of atherosclerosis are characterized by the expression of VCAM-1, intracellular adhesion molecule-1 (IMC-1) and monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), which are produced by arterial endothelial cells. It is induced by the transcription factor, NF-κB (nuclear factor-κB). NF-κB is a heterodimer composed of p50 and p65 and is a transcription factor involved in regulating the target gene of many cells. Activated NF-κB binds to specific promoter genes such as IL-1, VCAM-1, ICAM-1, and other factors involved in the progression of atherosclerosis, resulting in the expression of various inflammatory factors. It is activated by various factors such as reactive oxygen species and cytokines.
항산화제 및 유리기 소거제는 이러한 NF-κB의 활성을 저해하는 것으로 밝혀지고 있으므로 항산화제를 적절히 섭취할 경우 생체 내(in vivo)에서 LDL의 산화를 저해하고 부착분자의 발현을 억제하며 NF-κB의 활성을 감소시켜 동맥경화를 억제할 것으로 기대되며, 이에 대한 연구들이 진행되고 있다(대한민국 공개특허 제2003-0014155호). 따라서, 고지혈증이나 동맥경화 환자에 있어서 LDL 항산화제와 함께 지질 강하제를 함께 투여하는 병행투여 요법에 대한 관심도가 높아지고 있다.Antioxidants and free radical scavengers since been shown to inhibit this NF-κB activity in case of ingestion of antioxidants adequately inhibit LDL oxidation in vivo (in vivo), and inhibiting the expression of adhesion molecules, and NF-κB It is expected to inhibit the atherosclerosis by reducing the activity of, and studies on this are in progress (Korean Patent Publication No. 2003-0014155). Therefore, there is a growing interest in the combination therapy of administering a lipid-lowering agent together with LDL antioxidant in hyperlipidemia or atherosclerosis patients.
또한, 혈중 콜레스테롤 농도가 높으면 관상동맥성 심혈관 질환이 유발되기 쉬우므로, 혈중 콜레스테롤 농도를 줄이기 위해서 콜레스테롤 및 지방의 섭취를 줄이는 식이요법을 시행하거나 지질대사와 관련된 효소를 저해함으로써 콜레스테롤의 흡수를 억제하고 생합성을 저해하여 LDL량을 감소시키려는 시도가 진행되어 왔다(Principles in Biochemistry, lipid biosynthesis, 770-817, 3rd Edition, 2000 Worth Publishers, New York; Steinberg, D. et al., N. Engl. J. Med., 320: 915-924, 1989).In addition, high blood cholesterol levels are susceptible to coronary cardiovascular disease. Therefore, to reduce blood cholesterol levels, it is necessary to reduce dietary intake of cholesterol and fat or to inhibit cholesterol absorption and biosynthesis by inhibiting enzymes related to lipid metabolism. Attempts have been made to reduce LDL levels by inhibiting (Principles in Biochemistry, lipid biosynthesis, 770-817, 3rd Edition, 2000 Worth Publishers, New York; Steinberg, D. et al. , N. Engl. J. Med) ., 320: 915-924, 1989).
현재 고지혈증 치료제로 사용되고 있는 프로부콜(Probucol), N,N'-디페닐렌디아민(N,N'-diphenylenediamine), 페놀계 합성 항산화제인 BHA (butylatedhydroxyanisol) 및 BHT(butylated hydroxy toluene)는 LDL 콜레스테롤을 감소시키고, 산화 정도를 약화시키며 병변형성을 감소시키는 항산화력은 우수하나, 부작용이 많아 사용이 제한되고 있다.Probucol, N, N'-diphenylenediamine (N, N'-diphenylenediamine), phenolic synthetic antioxidants BHA (butylatedhydroxyanisol) and BHT (butylated hydroxy toluene), which are currently being used for the treatment of hyperlipidemia, use LDL cholesterol. The antioxidant power of reducing, weakening the degree of oxidation and reducing lesion formation is excellent, but its use is limited because of its many side effects.
한편, 상표초(Mantidis ootheca)는 한방 및 민간요법에서 사용되는 약용곤충으로서 사마귀의 알둥지를 의미하며, '당랑자'라고도 한다. 상표초는 유원주형 모양이고, 길이 약 3-4 cm, 지름이 2-3 cm이며, 바깥면은 황갈색 또는 적갈색으로 냄새는 거의 없고, 맛이 짜면서 달며 독이 없다. 한방에서는 옛날부터 보신작용, 고정축뇨 효능이 있다. 또한, 유정백탁, 적백대하, 소변빈삭, 소아급경 등의 치료에도 사용된다. 그러나 아직까지 약용곤충인 상표초의 추출물 또는 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물에 대한 항산화 활성에 대해서는 발표된 바 없다.On the other hand, Mantidis ootheca is a medicinal insect used in herbal medicine and folk remedies. The trademark vine is in the shape of a columnar column, about 3-4 cm in length and 2-3 cm in diameter, and its outer surface is yellowish brown or reddish brown with almost no smell. Herbal medicine has been seen since ancient times, fixed urinary efficacy. It is also used in the treatment of oily white turbidity, red white crayfish, urine bins, and pediatric acute pulmonary disease. However, there have been no published antioxidant activities for extracts of medicinal insects, or acetyldopamine-based compounds or biphenol compounds.
이에, 본 발명자들은 부작용이 적은 새로운 동맥경화, 관상동맥 심장병 및 심근경색 등과 같은 심장순환계 질환의 예방 및 치료제를 천연물에서 탐색하던 중, 약용곤충인 상표초의 추출물 및 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물에서 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성 및 DPPH 라디칼 소거 활성이 우수함을 확인하고 저밀도 지질단백질의 산화 및 라디칼 생성에 의해 유발되는 동맥경화, 관상동맥 심장병, 심근경색 및 이와 같은 질환으로부터 유발되는 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하 였다.Accordingly, the inventors of the present invention, while searching for a natural preventive agent for preventing and treating cardiovascular diseases such as atherosclerosis, coronary heart disease, and myocardial infarction, extracts of medicinal insects, acetyl dopamine compounds, It was confirmed that the biphenol compound has excellent antioxidant activity and DPPH radical scavenging activity against low density lipoprotein, and heart caused by atherosclerosis, coronary heart disease, myocardial infarction and such diseases caused by oxidation and radical production of low density lipoprotein The present invention was completed by confirming that it can be usefully used for the prevention and treatment of circulatory diseases.
본 발명은 상표초 추출물, 그로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 유효성분으로 하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료제를 제공하고자 한다.The present invention is to provide a prophylactic and therapeutic agent for cardiovascular disease, which comprises the extract of the trademark herb, an acetyldopamine-based compound or a biphenol compound isolated therefrom.
본 발명은 상표초를 용매로 추출하여 제조하는 항산화 활성을 갖는 상표초 추출물을 제공한다.The present invention provides an extract of the trademark herb having an antioxidant activity prepared by extracting the trademark herb with a solvent.
또한, 본 발명은 상표초로부터 추출한 아세틸도파민계 화합물 및 바이페놀 화합물을 포함하는 항산화제를 제공한다.The present invention also provides an antioxidant comprising an acetyldopamine compound and a biphenol compound extracted from the trademark herb.
또한, 본 발명은 상표초 추출물로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물 및 바이페놀 화합물을 제조하는 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for producing an acetyldopamine-based compound and a biphenol compound isolated from the trademark herb extract.
아울러, 본 발명은 상표초 추출물 또는 이로부터 분리한 상기 화학식 1 및 2로 표시되는 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 유효성분으로 함유하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료제를 제공한다.In addition, the present invention provides a preventive and therapeutic agent for cardiac circulatory disorders containing an acetyldopamine-based compound and a biphenol compound represented by Chemical Formulas 1 and 2, isolated from the trademark herb extract.
이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 상표초를 용매로 추출하여 제조하는 항산화 활성을 갖는 상표초 추출물을 제공한다.The present invention provides an extract of the trademark herb having an antioxidant activity prepared by extracting the trademark herb with a solvent.
구체적으로, 본 발명자들은 상표초를 물로 세척하여 이물질을 제거한 후, 그늘에서 건조한 후, 건조된 상표초에 적당한 양의 용매를 첨가하여 완전히 침지되도록 하였다. 추출 용매로는 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 용매가 바람직하며, 가장 바람직하게는 에탄올이다. 또한, 추출시간은 바람직하게 3일이며, 상기에서 얻은 추출물을 여과하고 농축하여 조추출물을 수득하였다.Specifically, the present inventors washed the trademark herb with water to remove foreign substances, dried in the shade, and then added the appropriate amount of solvent to the dried trademark herb so as to be completely immersed. The extraction solvent is preferably a solvent selected from water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a mixed solvent thereof, most preferably ethanol. In addition, the extraction time is preferably 3 days, and the extract obtained above is filtered and concentrated to obtain a crude extract.
상기에서 수득한 조추출물에 물을 가하여 현탁시키고, 비극성 용매, 바람직하게는 n-헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 순차적으로 분획화하여, n-헥산 가용추출물, 클로로포름 가용추출물 및 에틸아세테이트 가용추출물을 수득하였다. 각 가용추출물에 대해 항산화 효과를 측정하여 에틸아세테이트 가용추출물에서 항산화 효과가 가장 우수함을 확인하였다(표 1 참조).Suspended by adding water to the crude extract obtained above, fractionated sequentially with a nonpolar solvent, preferably n-hexane, chloroform and ethyl acetate, to obtain n-hexane soluble extract, chloroform soluble extract and ethyl acetate soluble extract. It was. Antioxidant effect was measured for each soluble extract and it was confirmed that the antioxidant effect was the best in the ethyl acetate soluble extract (see Table 1).
또한, 본 발명은 상표초 추출물로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물을 포함하는 항산화제를 제공한다. The present invention also provides an antioxidant comprising an acetyldopamine-based compound or a biphenol compound isolated from the trademark herb extract.
아세틸도파민계 화합물은 하기 화학식 1로 표시되는 N-2-(3,4-다이하이드록시페닐)-에틸 아세트아마이드 N-[2-(3,4-Dihydroxyphenyl)-ethyl]-acetamide이고 바이페놀 화합물은 하기 화학식 2로 표시되는 3,5,3',5'-테트라-테트-부틸다이페닐-2,2'-다이올(3,5,3',5'-Tetra-tert-butyl-diphenyl-2,2'-diol)이다.Acetyl dopaminergic compound is N -2- (3,4- dihydroxy-phenyl) represented by the formula 1-ethyl acetamide N - [2- (3,4-Dihydroxyphenyl ) -ethyl] -acetamide a biphenol compound 3,5,3 ', 5'-tetra-tet-butyldiphenyl-2,2'-diol (3,5,3', 5'-Tetra- tert -butyl-diphenyl represented by Formula 2 below) -2,2'-diol).
상기 화합물은 약학적으로 허용되는 염의 형태로 사용될 수 있고, 통상의 방법에 의해 제조되는 모든 염, 수화물 및 용매화물을 포함한다.The compounds can be used in the form of pharmaceutically acceptable salts and include all salts, hydrates and solvates prepared by conventional methods.
또한, 본 발명은 상표초 추출물로부터 상기 아세틸도파민계 화합물 및 바이페놀 화합물을 제조하는 방법을 제공하며, 이는In addition, the present invention provides a method for preparing the acetyl dopamine-based compound and biphenol compound from the trademark herb extract, which
(1) 상표초에 물, 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 용매를 첨가하여 조추출물을 제조하는 단계; (1) preparing a crude extract by adding a solvent selected from water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a mixed solvent thereof to the trademarked herb;
(2) 상기 단계 1에서 얻은 조추출물에 물을 가하여 현탁시키고, n-헥산, 클로로포름 및 에틸아세테이트로 순차 분획하여 에틸아세테이트 가용추출물을 얻는 단계; 및(2) adding water to the crude extract obtained in step 1 and suspending, sequentially dividing with n-hexane, chloroform and ethyl acetate to obtain an ethyl acetate soluble extract; And
(3) 상기 단계 2에서 얻은 에틸아세테이트 가용추출물을 크로마토그래피로 분리 및 정제하여 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 수득하는 단계를 포함한다.(3) separating and purifying the ethyl acetate soluble extract obtained in step 2 by chromatography to obtain an acetyldopamine compound and a biphenol compound.
구체적으로, 상기에서 수득한 에틸아세테이트 가용추출물을 여과한 다음, 이동상 용매로 클로로포름, 메탄올 및 이들의 혼합용매를 사용하여 실리카 겔 크로마토그래피를 실시, 13개의 분획물(분획 1 ~ 13)로 분리하였다. 이때, 각 분획에 대해 항산화 효과를 측정하여 가장 효과가 우수한 분획물 2 내지 5를 모아 2차 실리카 겔 크로마토그래피를 실시하여 15개의 분획물(분획 1 ~ 15)로 분리하였다(이때, 이동상 용매는 클로로포름과 메탄올 혼합용매, 바람직하게는 각각의 비가 10 : 1인 혼합용매). 각 분획에 대해 항산화 효과를 측정하여 가장 효과가 우수한 분획물 2 및 9, 10을 수득한 후, 분획물 2는 3차 실리카 겔 크로마토그래피를 실시하여 13개의 분획물(분획 1 ~ 13)로 분리하였다(이 때, 이동상 용매는 핵산과 에틸아세테이트의 혼합용매, 바람직하게는 각각의 비가 1 : 1인 혼합용매). 이어서, 상기에서 수득한 활성분획물 2와 3을 4차 실리카 겔 크로마토그래피를 실시하여 화합물 2를 수득하였다. 2차 실리카겔 크로마토그래피 분리과정에서 LDL-항산화 활성이 우수한 분획물 9, 10을 모아 3차 실리카 겔 크로마토그래피를 실시하여 5개의 분획물(분획 1 ~ 5)로 분리하였다(이때, 이동상 용매는 클로로포름과 메탄올 혼합용매, 바람직하게는 각각의 비가 8 : 1인 혼합용매). 각 분획에 대해 항산화 효과를 측정하여 가장 효과가 우수한 분획물 4 및 5를 수득한 후, 이 분획물 4와 5에 대해 역상 C-18(RP-18) 컬럼을 고정상으로 하고 메탄올과 물의 혼합용매, 바람직하게 1:1(v/v)로 혼합된 혼합용매를 이동상으로 하는 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 7개의 분획물을 수득하였다. 각 분획에 대해 항산화 효과를 측정하여 분획물 4로부터 화합물 1을 수득하였다.Specifically, the ethyl acetate soluble extract obtained above was filtered, followed by silica gel chromatography using chloroform, methanol, and a mixed solvent thereof as a mobile phase solvent, and separated into 13 fractions (fractions 1 to 13). At this time, the antioxidant effect of each fraction was measured to collect the most effective fractions 2 to 5 and subjected to secondary silica gel chromatography to separate into 15 fractions (fractions 1 to 15) (at this time, the mobile phase solvent is chloroform and Methanol mixed solvent, preferably each having a ratio of 10: 1). Antioxidant effect was measured for each fraction to obtain the most effective fractions 2, 9, and 10, and fraction 2 was subjected to tertiary silica gel chromatography to separate 13 fractions (fractions 1 to 13). When the mobile phase solvent is a mixed solvent of nucleic acid and ethyl acetate, preferably a mixed solvent in which each ratio is 1: 1. Subsequently, the active fractions 2 and 3 obtained above were subjected to fourth silica gel chromatography to obtain compound 2. In the secondary silica gel chromatography separation, fractions 9 and 10 having excellent LDL-antioxidant activity were collected and subjected to tertiary silica gel chromatography to separate five fractions (fractions 1 to 5) (in the mobile phase solvents, chloroform and methanol). Mixed solvents, preferably mixed solvents having respective ratios of 1: 1. Antioxidant effect was measured for each fraction to obtain the most effective fractions 4 and 5, and then the reverse phase C-18 (RP-18) column was fixed to the fractions 4 and 5, and a mixed solvent of methanol and water, preferably 7 fractions were obtained by column chromatography using a mixed solvent mixed at 1: 1 (v / v) as a mobile phase. Antioxidant effect was measured for each fraction to give compound 1 from fraction 4.
아울러, 본 발명은 상표초 추출물 또는 이로부터 분리한 상기 화학식 1 및 2로 표시되는 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 유효성분으로 하는 심장순환계 질환의 예방 및 치료제를 제공한다.In addition, the present invention provides a prophylactic and therapeutic agent for cardiac circulatory disorders comprising an acetyldopamine-based compound represented by Formula 1 and 2, and a biphenol compound, which are separated from the trademark herb extract or the same.
본 발명의 상표초 추출물 및 이로부터 분리한 N-[2-(3,4-다이하이드록시페닐-에틸)]-아세트아마이드, 3,5,3',5'-테트라-터실-부틸-다이페닐-2,2'-다이올의 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성을 TBARS (Thiobarbituric Acid Reactive Substances) 방법으로 측정한 결과, 저밀도 지질단백질의 산화에 대한 저해 효과 및 DPPH 라디칼 소거 활성이 양성 대조군으로 사용한 프로부콜보다 우수하게 나타나므로 항산화 효과가 우수하다(표 1 참조). 마우스를 대상으로 실시한 급성 독성실험에서도 폐사한 개체가 없었으며 독성에 의한 변화를 나타내지 않았다. Extract of the trademark vinegar of the present invention and N- [2- (3,4-dihydroxyphenyl-ethyl)]-acetamide, 3,5,3 ', 5'-tetra-tersil-butyl-di separated therefrom Antioxidative activity of phenyl-2,2'-diol against low-density lipoproteins was measured by TBARS (Thiobarbituric Acid Reactive Substances) method.The inhibitory effect on the oxidation of low-density lipoproteins and DPPH radical scavenging activity were used as positive controls. It is superior to probucol and therefore has an excellent antioxidant effect (see Table 1). In acute toxicity experiments in mice, there were no deaths and no change in toxicity.
따라서, 본 발명에 따른 상표초 추출물 및 이로부터 분리한 N-[2-(3,4-다이하이드록시페닐-에틸)]-아세트아마이드, 3,5,3',5'-테트라-터실-부틸-다이페닐-2,2'-다이올은 저밀도 지질단백질의 산화 및 라디칼 생성에 의해 유발되는 동맥경화, 관상동맥 심장병, 심근경색 및 이와 같은 질환으로부터 유발되는 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.Thus, the trademark herb extract according to the present invention and N- [2- (3,4-dihydroxyphenyl-ethyl)]-acetamide, 3,5,3 ', 5'-tetra-tersil- Butyl-diphenyl-2,2'-diol is useful for the prevention and treatment of atherosclerosis, coronary heart disease, myocardial infarction and cardiovascular diseases caused by such diseases caused by oxidation and radical production of low density lipoproteins Can be used.
본 발명의 치료제는 총 중량에 대하여 상기 화합물을 0.0001 ~ 50 중량부로 포함한다.The therapeutic agent of the present invention comprises 0.0001 to 50 parts by weight of the compound, based on the total weight.
본 발명의 치료제는 상기 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1 종 이상 함유할 수 있다.The therapeutic agent of the present invention may contain one or more active ingredients exhibiting the same or similar functions in addition to the trademark herb extract or acetyldopamine-based compound and biphenol compound separated therefrom.
본 발명의 치료제는 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당해 기술분야의 적정한 방법으로 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.The therapeutic agent of the present invention may be prepared by including one or more pharmaceutically acceptable carriers in addition to the above-described active ingredients for administration. Pharmaceutically acceptable carriers may be used in combination with saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol and one or more of these components, if necessary, as antioxidants, buffers And other conventional additives such as bacteriostatic agents can be added. Diluents, dispersants, surfactants, binders and lubricants may also be added in addition to formulate into injectable formulations, pills, capsules, granules or tablets such as aqueous solutions, suspensions, emulsions and the like. Furthermore, it may be preferably formulated according to each disease or component by a suitable method in the art or using a method disclosed in Remington's Pharmaceutical Science (Recent Edition, Mack Publishing Company, Easton PA). have.
본 발명의 치료제는 목적하는 방법에 따라 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)하거나 경구 투여할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 일일 투여량은 상표초 추출물일 경우 10 ~ 2,000 ㎎/㎏ 이며, 바람직하게는 50 ~ 500 ㎎/㎏이다. 또한, 상표초 추출물로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물 또는 바이페놀 화합물일 경우 약 0.1 ~ 100 ㎎/㎏이고, 바람직하게는 0.5 ~ 10 ㎎/㎏이며, 이것을 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 효과 있다.The therapeutic agents of the present invention may be administered parenterally (eg, intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically) or orally, depending on the desired method, and the dosage may be based on the weight, age, sex, health status, The range varies depending on the diet, the time of administration, the method of administration, the rate of excretion and the severity of the disease. The daily dose is 10 to 2,000 mg / kg, preferably 50 to 500 mg / kg, for the herbaceous extract. In addition, in the case of the acetyl dopamine-based compound or biphenol compound isolated from the extract of the trademark herb extract is about 0.1 ~ 100 mg / kg, preferably 0.5 ~ 10 mg / kg, it is effective to divide this once or several times a day .
본 발명의 화합물을 마우스에 경구 투여하여 독성 실험을 수행한 결과, 경구 투여 독성시험에 의한 50% 치사량(LD50)은 적어도 1,000 ㎎/㎏ 이상인 안전한 물질로 판단된다.As a result of oral administration of the compound of the present invention to mice, 50% lethal dose (LD 50 ) by oral administration toxicity test is judged to be a safe substance of at least 1,000 mg / kg or more.
본 발명의 치료제는 심장순환계 질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The therapeutic agents of the present invention may be used alone or in combination with methods using surgery, hormonal therapy, drug therapy and biological response modifiers for the prevention and treatment of cardiovascular diseases.
본 발명의 치료제는 심장순환계 질환의 개선을 목적으로 하는 건강식품의 형태로 제공될 수 있다.The therapeutic agent of the present invention may be provided in the form of a health food for the purpose of improving the cardiovascular disease.
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 상표초 추출물 또는 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 본 발명의 상표초 추출물 또는 이로부터 분리한 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 은 원료에 대하여 1 ~ 20 중량부, 바람직하게는 5 ~ 10 중량부의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.When using the trademark herb extract or acetyl dopamine-based compound and biphenol compound isolated from the extract according to the present invention as food additives, the acetyl-dopamine-based compound and biphenol compound isolated from the trademark herb extract or separated therefrom or other food Or may be used together with food ingredients, and may be appropriately used according to conventional methods. The mixed amount of the active ingredient may be suitably determined depending on the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment). In general, in the manufacture of food or beverage, the trademark vinegar extract of the present invention or the acetyldopamine-based compound and biphenol compound separated therefrom are added in an amount of 1 to 20 parts by weight, preferably 5 to 10 parts by weight based on the raw materials. do. However, in the case of long-term intake for health and hygiene or health control, the amount may be below the above range, and the active ingredient may be used in an amount above the above range because there is no problem in terms of safety. .
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.There is no particular limitation on the kind of food. Examples of the food to which the substance can be added include dairy products including meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, ice cream, various soups, drinks, tea, drinks, Alcoholic beverages and vitamin complexes, and the like and include all of the health foods in the conventional sense.
본 발명의 건강음료는 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강식품 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.The health beverage of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates and the like as additional ingredients, as in general beverages. The natural carbohydrates described above are glucose, monosaccharides such as fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. As the sweetening agent, natural sweetening agents such as tautin and stevia extract, synthetic sweetening agents such as saccharin and aspartame, and the like can be used. The ratio of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 ml of the health food of the present invention.
상기 외에 본 발명의 건강음료는 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등 을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 건강음료는 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above, the health beverage of the present invention includes various nutrients, vitamins, electrolytes, flavoring agents, coloring agents, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, And a carbonation agent used for the carbonated beverage. In addition, the health beverage of the present invention may contain a flesh for preparing natural fruit juice, fruit juice beverage and vegetable beverage. These components can be used independently or in combination. The proportion of such additives is not critical but is usually selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
이하, 하기의 실시예 및 실험예에 의해 본 발명을 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다. Hereinafter, the present invention will be described in detail by the following examples and experimental examples. However, the content of the present invention is not limited by the following Examples and Experimental Examples.
<실시예 1> 상표초 조추출물의 제조Example 1 Preparation of Crude Herbal Extracts
건조된 상표초(운남성, 중국) 200 g에 500 ㎖의 물을 가하고 90 ℃에서 4 시간 동안 끓인 후 여과하여 추출액 및 고상 잔류물을 수득하였다. 이를 감압농축하여 3 g의 상표초 열수 추출물을 수득하였다.500 ml of water was added to 200 g of dried trademark vinegar (Yunnan Province, China), and boiled at 90 ° C. for 4 hours, followed by filtration to obtain an extract and a solid residue. The resultant was concentrated under reduced pressure to obtain 3 g of trademarked hot water extract.
또한, 건조된 상표초 500 g에 95% 에탄올(EtOH) 2000 ㎖를 가하여 실온에서 3 일 동안 방치시킨 후, 여과지로 여과하고 농축하여 상표초 에탄올 추출물인 유성물질 62.3 g을 수득하였다.In addition, 2000 ml of 95% ethanol (EtOH) was added to 500 g of dried trademark vinegar, and the mixture was left at room temperature for 3 days, and then filtered through a filter paper and concentrated to give 62.3 g of an oily substance, a trademark ethanol extract.
상기 열수 추출물 및 에탄올 추출물에 대해 하기 실험예 1의 방법에 따라 항산화 활성을 측정한 결과, 에탄올 추출물의 항산화 활성이 우수하여 이하 실시예에서 에탄올 추출물을 사용하였다(표 1).As a result of measuring the antioxidant activity according to the method of Experimental Example 1 for the hot water extract and ethanol extract, the ethanol extract was used in the following examples because the antioxidant activity of the ethanol extract was excellent (Table 1).
<실시예 2> 상표초의 비극성 용매 가용추출물의 제조Example 2 Preparation of Nonpolar Solvent Soluble Extract of Trademark Herb
상기 실시예 1에서 수득한 상표초의 에탄올 추출물에 물 200 ㎖을 가하여 현탁시키고, n-헥산(n-hexane), 클로로포름(CHCl3) 및 에틸아세테이트(EtOAc) 순으로 분획하여, n-헥산 가용추출물(n-hexane-soluble) 20.3 g, 클로로포름 가용추출물(CHCl3-soluble) 6.3 g 및 에틸아세테이트 가용추출물(EtOAc-soluble) 2.7 g을 각각 수득하였다.200 ml of water was added to the ethanol extract of the trademark herb obtained in Example 1, suspended, and fractionated in the order of n -hexane ( n -hexane), chloroform (CHCl 3 ) and ethyl acetate (EtOAc), and n-hexane soluble extract. 20.3 g of ( n- hexane-soluble), 6.3 g of chloroform soluble extract (CHCl 3 -soluble) and 2.7 g of ethyl acetate soluble extract (EtOAc-soluble) were obtained, respectively.
상기 각 분획에 대해 실험예 1과 같은 방법으로 항산화 효과를 측정한 결과, 에틸아세테이트 가용추출물에서 항산화 활성이 우수함을 확인하고 하기 실시예에서 사용하였다(표 1).As a result of measuring the antioxidant effect in the same manner as in Experimental Example 1 for each fraction, it was confirmed that the antioxidant activity is excellent in the ethyl acetate soluble extract and used in the following examples (Table 1).
<실시예 3> 상표초의 에틸아세테이트 가용추출물로부터 본 발명의 화합물의 분리Example 3 Separation of Compound of the Invention from Ethyl Acetate Soluble Extract
상기 실시예 2에서 수득한 에틸아세테이트 가용추출물 2.7 g을 컬럼 크로마토그래피를 사용하여 4 단계에 걸쳐 분리하였다.2.7 g of the ethyl acetate soluble extract obtained in Example 2 were separated in four steps using column chromatography.
첫 번째로 실리카겔 컬럼(실리카겔 : Merk, Art 9385, 컬럼크기: φ7 × 40 cm)에 클로로포름 100%, 클로로포름:메탄올 = 95:1, 90:1, 60:1, 30:1, 10:1, 5:1, 1:1(v/v) 및 메탄올 100%의 이동상 용매 조건으로 각각 500 ㎖ 씩을 전개시켜, 13개의 분획물(Fr.1~13)을 수득하였다. 각 분획물의 항산화 활성을 하기 실험예 1과 같은 방법으로 측정한 결과, 우수한 항산화 활성을 나타내는 2 ~ 5 분획물(클로로포름:메탄올 = 90:1 및 60:1 용매조건, 수득량 1.18 g)을 분리하여, 두 번째 컬럼 크로마토그래피법을 수행하였다. 두 번째로 실리카겔 컬럼(실리카겔 : Merk, Art 9385, 컬럼크기: φ4.5 × 30 cm)에 클로로포름:메탄올 = 10:1(v/v) 의 이동상 용매 조건으로 각각 400 ㎖ 씩을 전개시켜, 15개의 분획물(Fr.1~15)을 수득하였다. 각 분획물의 항산화 활성을 하기 실험예 1과 같은 방법으로 측정한 결과, 우수한 항산화 활성을 나타내는 2 분획물(수득량 331 mg) 및 9~10 분획물(230 mg)을 분리하였다.First, silica gel column (silica gel: Merk, Art 9385, column size: φ7 × 40 cm) 100% chloroform, chloroform: methanol = 95: 1, 90: 1, 60: 1, 30: 1, 10: 1, Each of 500 ml was developed at 5: 1, 1: 1 (v / v) and 100% of mobile phase solvent conditions of methanol to obtain 13 fractions (Fr. 1 to 13). The antioxidant activity of each fraction was measured in the same manner as in Experimental Example 1, and as a result, 2 to 5 fractions (chloroform: methanol = 90: 1 and 60: 1 solvent conditions, yield 1.18 g) showing excellent antioxidant activity were separated. , A second column chromatography was performed. Second, 400 ml each of silica gel columns (silica gel: Merk, Art 9385, column size: φ4.5 × 30 cm) under mobile phase solvent conditions of chloroform: methanol = 10: 1 (v / v) was developed. Fractions (Fr. 1-15) were obtained. As a result of measuring the antioxidant activity of each fraction by the same method as Experimental Example 1, two fractions (amount yield 331 mg) and 9 to 10 fractions (230 mg) showing excellent antioxidant activity were separated.
세 번째 컬럼은 두 부분으로 나누어서 실행하였다. 첫 부분은 분획물 2를 실리카겔 컬럼(실리카겔 : Merk, Art 9385, 컬럼크기: φ2.5 × 28 cm)에 핵산: 에틸아세테이트= 1:1(v/v) 의 이동상 용매 조건으로 각각 300 ㎖ 씩을 전개시켜, 13개의 분획물(Fr.1~13)을 수득하였다. 각 분획물의 항산화 활성을 하기 실험예 1과 같은 방법으로 측정한 결과, 우수한 항산화 활성을 나타내는 2~3 분획물(핵산: 에틸아세테이트= 1:1 용매조건, 수득량 30.6 mg)을 분리하였다. 분획물 2-3을 4 번째(1-4) 실리카겔 컬럼 (실리카겔 : Merk, Art 9385, 컬럼크기: φ2.5 × 28 cm)에 핵산: 에틸아세테이트= 1:1(v/v)의 이동상 용매 조건으로 각각 100 ㎖ 씩을 전개시켜, 7개의 분획물(Fr.1~7)을 수득하였다. 각 분획물의 항산화 활성을 하기 실험예 1과 같은 방법으로 측정한 결과, 우수한 항산화 활성을 나타내는 분획물 1(핵산: 에틸아세테이트= 1:1 용매조건)로부터 정제된 화합물 2를 수득하였으며, 수득량은 7.6 mg 이었다.The third column was run in two parts. In the first part, fraction 2 was developed on a silica gel column (silica gel: Merk, Art 9385, column size: φ2.5 × 28 cm) with 300 ml of nucleic acid: ethyl acetate = 1: 1 (v / v) each under mobile phase solvent conditions. To obtain 13 fractions (Fr. 1 to 13). As a result of measuring the antioxidant activity of each fraction by the same method as Experimental Example 1, two to three fractions (nucleic acid: ethyl acetate = 1: 1 solvent condition, yield 30.6 mg) showing excellent antioxidant activity were separated. Fractions 2-3 were prepared on a fourth (1-4) silica gel column (silica gel: Merk, Art 9385, column size: φ2.5 × 28 cm) nucleic acid: ethyl acetate = 1: 1 (v / v) mobile phase solvent conditions 100 ml each of them was developed, and 7 fractions (Fr.1-7) were obtained. The antioxidant activity of each fraction was measured by the same method as Experimental Example 1 below, to obtain Compound 2 purified from fraction 1 (nucleic acid: ethyl acetate = 1: 1 solvent condition) showing excellent antioxidant activity, and the yield was 7.6. mg.
두 번째 실리카겔 컬럼을 통해 얻은 분획물 9-10을 실리카겔 컬럼(실리카겔 : Merk, Art 9385, 컬럼크기: φ3.2 × 28 cm)에 클로로포름:메탄올 = 10:1 (v/v) 의 이동상 용매 조건으로 각각 300 ㎖ 씩을 전개시켜, 5개의 분획물(Fr.1~5)을 수득하였다. 각 분획물의 항산화 활성을 하기 실험예 1과 같은 방법으로 측정한 결과, 우수한 항산화 활성을 나타내는 4~5 분획물(클로로포름:메탄올 = 10:1 용매조건, 수득량 95.3 mg)을 분리하여, 네 번째(2-4) 역상 C-18 컬럼 크로마토그래피(Licroprep RP-18 : Merck, Art 13900, 컬럼크기: φ2.5 × 15 cm)를 수행하였다. 이때, 메탄올:물 = 1:1(v/v)의 이동상 용매조건으로 각각 50 ㎖ 씩 전개시켜, 7개의 분획물을 수득하였으며, 각 분획물의 항산화 활성을 하기 실험예 1과 같은 방법으로 측정한 결과, 항산화 활성이 가장 뛰어난 분획물 4로부터 정제된 화합물 1을 수득하였으며, 수득량은 19 ㎎ 이었다. Fraction 9-10 obtained through the second silica gel column was subjected to a silica gel column (silica gel: Merk, Art 9385, column size: φ3.2 × 28 cm) under mobile phase solvent conditions of chloroform: methanol = 10: 1 (v / v). 300 ml each was developed, and 5 fractions (Fr. 1-5) were obtained. The antioxidant activity of each fraction was measured by the same method as Experimental Example 1 below, and 4 to 5 fractions (chloroform: methanol = 10: 1 solvent condition, yield 95.3 mg) showing excellent antioxidant activity were separated, and the fourth ( 2-4) Reversed phase C-18 column chromatography (Licroprep RP-18: Merck, Art 13900, column size: φ2.5 × 15 cm) was performed. At this time, 50 ml each of methanol: water = 1: 1 (v / v) was developed under mobile phase solvent conditions to obtain 7 fractions, and the antioxidant activity of each fraction was measured in the same manner as in Experimental Example 1 below. , Purified compound 1 was obtained from fraction 4 having the highest antioxidant activity, and the yield was 19 mg.
<실시예 4> 본 발명의 화합물의 구조 분석Example 4 Structure Analysis of Compounds of the Invention
상기 실시예 3에서 수득한 세 화합물의 구조 분석을 위하여 하기와 같은 분석을 실시하였다. The following analysis was conducted for structural analysis of the three compounds obtained in Example 3.
VG 고분해능 GC/MS 분광기(VG high resolution GC/MS spectrometer, Election Ionization MS, Autospec-Ultima, Micromass, UK)를 사용하여 분자량 및 분자식을 결정하였으며, 선광도는 편광기(DIP-181 digital polarimeter, Jasco, Japan)를 사용하여 측정하였다. 또한 핵자기 공명(NMR) 분석(AMX 500, Bruker, Germany)을 통하여 1H NMR, 13C NMR, 호모-코지(HOMO-COSY), HMQC(1H-Detected heteronuclear Multiple-Quantum Coherence), HMBC(Heteronuclear Multiple-Bond Coherence), DEPT(Distortionless Enhancement by Polarization) 스펙트럼을 얻고, 분자구조를 결정하였다.Molecular weight and molecular formula were determined using a VG high resolution GC / MS spectrometer, Election Ionization MS, Autospec-Ultima, Micromass, UK, and the fluorescence was determined using a polarizer (DIP-181 digital polarimeter, Jasco, Japan). Nuclear magnetic resonance (NMR) analysis (AMX 500, Bruker, Germany) also revealed 1 H NMR, 13 C NMR, Homo-Cozy, HMQC (1H-Detected heteronuclear Multiple-Quantum Coherence) and HMBC (Heteronuclear). Multiple-Bond Coherence (DEP) and Distortionless Enhancement by Polarization (DEPT) spectra were obtained and the molecular structure was determined.
이상의 기기분석 결과를 발표된 문헌(Naoki, N. et al., Chem. Pharm. Bull, 48: 1749-1752, 2000)의 것과 비교 분석한 결과, 본 발명의 화합물 1은 화학식 1 로 표시되며, 화합물 1은 N-[2-(3,4-다이하이드록시페닐-에틸)]-아세트아마이드 (N-(2-(3,4-Dihydroxy-phenyl)-ethyl)-acetamide)이며, Alexakis et al.의 문헌(J. Org. Chem., 69; 5660-5667, 2004)을 참고하여 상기 화학식 2로 표시되는 화합물 2는 3,5,3',5'-테트라-터실-부틸-다이페닐-2,2'-다이올(3,5,3',5'-Tetra-tert-butyl-diphenyl-2,2'-diol)으로 각각 동정되었다.As a result of analyzing the results of the above instrumental analysis compared with that of published documents (Naoki, N. et al ., Chem. Pharm. Bull , 48: 1749-1752, 2000), the compound 1 of the present invention is represented by the formula (1), Compound 1 is N- [2- (3,4-dihydroxyphenyl-ethyl)]-acetamide (N- (2- (3,4-Dihydroxy-phenyl) -ethyl) -acetamide), Alexakis et al Compound 2 represented by the above formula (2) with reference to J. Org. Chem., 69; 5660-5667, 2004 is 3,5,3 ', 5'-tetra-tersil-butyl-diphenyl- 2,2'-diol (3,5,3 ', 5'-Tetra-tert-butyl-diphenyl-2,2'-diol), respectively.
(화합물 1)(Compound 1)
1) 물성: 적갈색 분말 1) Physical property: reddish brown powder
2) 분자량: 1952) Molecular Weight: 195
3) 분자식: C10H13NO3 3) Molecular Formula: C 10 H 13 NO 3
4) 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1.86 (3H, s, H-4), 2.60 (2H, t, J = 7.0 Hz, H-2), 3.34 (2H, t, J = 7.1 Hz, H-1), 6.70 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5'), 6.62 (1H, d, J = 1.3 Hz, H-2'), 6.49 (1H, dd, J = 7.9 Hz, J = 1.2 Hz, H-6')4) 1 H NMR (CD 3 OD, 500 MHz) δ 1.86 (3H, s, H-4), 2.60 (2H, t, J = 7.0 Hz, H-2), 3.34 (2H, t, J = 7.1 Hz, H-1), 6.70 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5 '), 6.62 (1H, d, J = 1.3 Hz, H-2'), 6.49 (1H, dd, J = 7.9 Hz, J = 1.2 Hz, H-6 ')
6) ESI-MS m/z: 218(M+Na)+, 196(10), 199(15), 217(20), 218(100)6) ESI-MS m / z : 218 (M + Na) + , 196 (10), 199 (15), 217 (20), 218 (100)
(화합물 2)(Compound 2)
1) 물성: 백색 분말1) Physical property: white powder
2) 분자량: 4102) Molecular Weight: 410
3) 분자식: C28H42O2 3) Molecular Formula: C 28 H 42 O 2
4) 1H NMR (CD3OD, 500 MHz) δ 1.30 (18H, s, 5-t-butyl), 1.43 (18H, s, 3-t-butyl), 5.19 (2H, s, -OH), 7.09 (2H, d, J = 2.1 HZ, H-4), 7.37 (2H, d, J = 2.1 Hz, H-6)4) 1 H NMR (CD 3 OD, 500 MHz) δ 1.30 (18H, s, 5- t -butyl), 1.43 (18H, s, 3- t -butyl), 5.19 (2H, s, -OH), 7.09 (2H, d, J = 2.1 HZ, H-4), 7.37 (2H, d, J = 2.1 Hz, H-6)
7) EIMS (rel. int.) m/z: 410(M)+, 57 (70), 190 (35), 283 (15), 339 (35), 354 (10), 395 (60), 410 (90). 7) EIMS (rel. Int.) M / z : 410 (M) + , 57 (70), 190 (35), 283 (15), 339 (35), 354 (10), 395 (60), 410 (90).
<실험예 1> TBARS 법을 이용한 본 발명의 화합물의 항산화 활성 측정Experimental Example 1 Measurement of Antioxidant Activity of the Compound of the Present Invention by TBARS Method
본 발명의 상표초 추출물, 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물의 저밀 도 지질단백질에 대한 항산화 활성을 측정하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to measure the antioxidant activity of the low-density lipoprotein of the trademark extract, acetyl dopamine-based compound, biphenol compound of the present invention, the following experiment was performed.
항산화 활성은 저밀도 지질단백질의 산화를 유도(Cu2+-mediated LDL-oxidation)하는 것으로 알려져 있는 Cu2+로 생성된 불포화 지방산의 산화산물인 디알데히드(dialdehyde)를 TBARS(Thiobarbituric Acid Reactive Substances)법으로 측정하였다(Packer, L. Ed., Methods in Enzymology. Vol. 234, Oxygen radicals in biological systems Part D. Academic press, San Diego, 1994).Antioxidant activity is obtained by TBARS (Thiobarbituric Acid Reactive Substances) method, which is a oxidized product of unsaturated fatty acid produced by Cu 2+ , which is known to induce oxidation of low density lipoprotein (Cu 2+ -mediated LDL-oxidation). (Packer, L. Ed., Methods in Enzymology . Vol. 234, Oxygen radicals in biological systems Part D. Academic press, San Diego, 1994).
사람으로부터 혈장 300 ㎖를 채취하여, 초원심분리기로 100,000 × g에서 24 시간 동안 원심분리하여 상층에 부유된 고밀도 지질단백질(VLDL)/킬로마이크론(chylomicron)층을 제거하고, 나머지 용액의 비중을 1.063 g/㎖로 맞춘 후, 100,000 × g에서 24 시간 동안 원심분리하여 다시 상층에 부유된 저밀도 지질단백질 25 ㎖(1.5~2.5 ㎎ 단백질/㎖)을 분리하였다. 상기에서 분리한 저밀도 지질단백질 20 ㎕(단백질 농도, 50~100 ㎍/㎖)을 10 mM 인산완충용액(phosphate-buffered saline, PBS) 210 ㎕와 혼합하고, 상기 실시예 1에서 제조한 각 용매추출물, 각 분획 및 화합물들의 용액을 각각 10 ㎕씩 첨가하였다. 이때, 화합물들은 DMSO(dimethylsulfoxide)에 녹여 사용하였으며, 실험에 사용하기 전에 여러 농도로 희석하였다. 음성 대조군으로는 용매인 DMSO 만을 첨가한 것을 사용하였으며, 양성 대조군으로는 프로부콜(Probucol, Sigma-Aldrich Co.)을 첨가한 것을 사용하였다. 상기 용액에 0.25 mM CuSO4 10 ㎕를 첨가하여 37 ℃에서 4시간 동안 반응시키 고, 20% 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid, TCA) 용액 1 ㎖를 첨가하여 반응을 중지시켰다. 다음으로, 0.05N NaOH 용액에 녹인 0.67% TBA 용액 1 ㎖를 첨가하고 10 초간 교반시킨 후 95 ℃에서 5분 동안 가열하여 발색 반응을 일으키고, 얼음물로 용액을 냉각하였다. 이후, 용액을 3000 rpm에서 5분 동안 원심분리하여 상등액을 분리하였으며, 자외선-가시광선 분광기로 540 ㎚에서의 흡광도를 측정하여 상기 발색 반응으로 생성된 말론디알데히드(malondialdehyde, MDA)의 양을 측정하였다.300 ml of plasma was collected from humans, and centrifuged at 100,000 × g for 24 hours using an ultracentrifuge to remove the high-density lipoprotein (VLDL) / chylomicron layer suspended in the upper layer. After adjusting to g / ml, 25 ml (1.5-2.5 mg protein / ml) of low density lipoprotein suspended in the upper layer was separated by centrifugation at 100,000 × g for 24 hours. 20 μl of the low-density lipoprotein isolated above (protein concentration, 50-100 μg / ml) was mixed with 210 μl of 10 mM phosphate-buffered saline (PBS), and each solvent extract prepared in Example 1 above. 10 μl of each fraction and a solution of the compounds were added. At this time, the compounds were dissolved in DMSO (dimethylsulfoxide) and used, and diluted to various concentrations before using in the experiment. As a negative control, only the solvent DMSO was added, and as a positive control, probucol (Probucol, Sigma-Aldrich Co.) was used. 10 μl of 0.25 mM CuSO 4 was added to the solution for 4 hours at 37 ° C., and 1 ml of 20% trichloroacetic acid (TCA) solution was added to stop the reaction. Next, 1 ml of a 0.67% TBA solution dissolved in 0.05N NaOH solution was added, stirred for 10 seconds, and heated at 95 ° C. for 5 minutes to cause a color reaction, and the solution was cooled with ice water. Thereafter, the supernatant was separated by centrifuging the solution at 3000 rpm for 5 minutes, and the absorbance at 540 nm was measured by an ultraviolet-vis spectrophotometer to measure the amount of malondialdehyde (MDA) produced by the color reaction. It was.
한편, 말론디알데히드의 표준곡선을 구하기 위하여, 말론알데히드 비스(디메틸아세탈)(malonaldehyde bis(dimethylacetal))의 저장용액(Sigma-Aldrich Co.)을 희석하여 0~10 nmol 말론디알데히드를 포함하는 PBS 표준용액을 250 ㎕씩 만들어 상기와 같은 방법으로 발색시키고 540 ㎚에서의 흡광도를 측정하여, 말론디알데히드의 표준곡선을 구하였다. 상기 표준곡선을 이용하여 본 발명의 화합물들로부터 생성된 말론디알데히드의 양을 정량하였다. 결과는 표 1에 나타내었다.On the other hand, in order to obtain the standard curve of malondialdehyde, diluting the stock solution (Sigma-Aldrich Co.) of malonaldehyde bis (dimethylacetal) (Sigma-Aldrich Co.) PBS containing 0 ~ 10 nmol malondialdehyde 250 μl of standard solution was prepared and developed in the same manner as described above, and the absorbance at 540 nm was measured to obtain a standard curve of malondialdehyde. The standard curve was used to quantify the amount of malondialdehyde produced from the compounds of the present invention. The results are shown in Table 1.
표 1에 나타난 바와 같이, 상기 실시예 1에서 수득한 열수 추출물은 40 ㎍/㎖에서 52%의 항산화 효과를 나타내는 반면, 에탄올 추출물은 같은 농도에서 64%의 항산화 효과를 나타내어 에탄올 추출물의 항산화 효과가 더 좋음을 확인하였다. As shown in Table 1, the hydrothermal extract obtained in Example 1 showed an antioxidant effect of 52% at 40 ㎍ / ㎖, while the ethanol extract showed an antioxidant effect of 64% at the same concentration, Confirmed better.
또한, 상기 실시예 2에서 수득한 각 용매추출물 가운데 에틸아세테이트 용매추출물이 40 ㎍/㎖ 농도에서 저밀도 지질단백질에 대해 79%의 항산화 효과를 나타내어 n-헥산, 클로로포름 가용추출물에 비해 가장 우수한 항산화 활성이 있음을 확인하였In addition, the ethyl acetate solvent extract of each solvent extract obtained in Example 2 showed an antioxidant effect of 79% against the low density lipoprotein at a concentration of 40 ㎍ / ㎖, the most excellent antioxidant activity compared to the soluble extract of n-hexane, chloroform Confirmed
또한, 실시예 3에서 수득한 화합물 1인 N-[2-(3,4-다이하이드록시페닐-에틸)]-아세트아마이드, 화합물 2인 3,5,3',5'-테트라-터실-부틸-다이페닐-2,2'-다이올의 항산화 활성은 IC50 값이 각각 5.7 μM, 44.7 μM로 화합물 1은 양성 대조군의 IC50보다 낮게 나타나 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성이 우수함을 확인하였다.Further, Compound 1 obtained in Example 3, N- [2- (3,4-dihydroxyphenyl-ethyl)]-acetamide, compound 2 , 3,5,3 ', 5'-tetra-tersil- Antioxidant activity of butyl-diphenyl-2,2'-diol showed IC 50 values of 5.7 μM and 44.7 μM, respectively, and compound 1 was lower than IC 50 of the positive control group, indicating that the antioxidant activity against low density lipoprotein was excellent. .
<실험예 2> DPPH 소거능을 이용한 본 발명의 화합물의 항산화 활성 측정Experimental Example 2 Measurement of Antioxidant Activity of the Compound of the Present Invention Using DPPH Scavenging Ability
본 발명의 상표초 추출물, 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물의 라디칼 소거능을 통한 항산화 활성을 측정하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to determine the antioxidant activity through the radical scavenging ability of the trademark herb extract, acetyl dopamine-based compound, biphenol compound of the present invention, the following experiment was performed.
DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrasyl)는 매우 안정한 자유 라디칼인데, 화합물의 처리에 의한 DPPH 잔존 정도로 라디칼 소거능을 측정하였다(Royt, P. W. et al., Bioorg. Chem. 29 : 387-397, 2001).DPPH (1,1-Diphenyl-2-picrylhydrasyl) is a very stable free radical, and the radical scavenging ability was measured to the extent of DPPH remaining by the treatment of the compound (Royt, PW et al., Bioorg. Chem. 29: 387-397, 2001).
MeOH로 녹인 시료(최종농도 100 μM) 500 ㎕에 라디칼 DPPH 용액(최종농도 100 μM, Sigma-Aldrich Co.) 1 ml을 넣는다. 대조군으로는 라디칼 DPPH 용액 1 ml과 MeOH 500 ㎕를 사용하였고, 공시험(blank)으로는 MeOH 1.5 ml만 넣어서 517 nm에서 20분 동안 UV-가시 분광광도계(visible spectrometer)로 측정하였다. DPPH 방법에 사용한 기기는 8453 UV-Visible Spectrophotometer(Agilent Technologies Co.)를 사용하였다.1 ml of radical DPPH solution (final concentration 100 μM, Sigma-Aldrich Co.) was added to 500 μl of the sample dissolved in MeOH (final concentration 100 μM). As a control, 1 ml of radical DPPH solution and 500 µl of MeOH were used, and only 1.5 ml of MeOH was used as a blank, and the result was measured by a UV-visible spectrometer at 517 nm for 20 minutes. The instrument used for the DPPH method used an 8453 UV-Visible Spectrophotometer (Agilent Technologies Co.).
그 결과 화합물 1, 2를 첨가하고 10 분 후, 남아있는 라디칼은 각각 4.3%, 58.1% 였고, 대조군으로 쓰인 프로부콜(probucol)은 38.7%로 나타났다. 화합물 1은 프로부콜보다 높은 라디칼 소거능을 나타내었다.As a result, 10 minutes after adding the compounds 1 and 2, the remaining radicals were 4.3% and 58.1%, respectively, and the probucol used as a control was 38.7%. Compound 1 showed higher radical scavenging ability than probucol.
따라서, 본 발명의 상표초 추출물 및 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물은 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성 및 라디칼 소거능이 우수함으로, 이를 포함하는 제제는 저밀도 지질단백질의 산화 및 라디칼 생성에 의해 유발되는 동맥경화, 관상동맥 심장병, 심근경색 및 이와 같은 질환으로부터 유발되는 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.Therefore, the extract of the trademark of the present invention, acetyldopamine-based compounds and biphenol compounds separated therefrom have excellent antioxidant activity and radical scavenging ability against low-density lipoproteins. It can be usefully used for the prevention and treatment of atherosclerosis caused by atherosclerosis, coronary heart disease, myocardial infarction and cardiovascular disease caused by such diseases.
<실험예 3> 급성 독성실험Experimental Example 3 Acute Toxicity
본 발명의 상표초 추출물 및 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물들에 대한 급성 독성을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to determine the acute toxicity of the trademark herb extract, acetyl dopamine-based compounds, biphenol compounds of the present invention, the following experiment was performed.
4주령의 특정 병원체 부재(SPF, specific pathogens free) ICR계 마우스를 암수 각각 3 마리씩 3개군(암수 각각 3마리/실험군)으로 나누어, 온도 22± 3℃, 습도 55± 10%, 조명 12L/12D의 동물실 내에서 사육하였다. 마우스는 실험에 사용되기 전 1주일 정도 순화시켰다. 실험 동물용 사료(마우스 및 랫트용, (주)제일제당, 서울, 대한민국) 및 음수를 멸균한 후 공급하였으며 자유 섭취시켰다.SPF (specific pathogens free) ICR mice were divided into three groups (3 males and 3 females / experimental group) at 4 weeks of age, temperature 22 ± 3 ℃, humidity 55 ± 10%, illumination 12L / 12D It was bred in the animal room of the. Mice were allowed to acclimate for about a week before being used in the experiment. Feed for experimental animals (for mice and rats, Cheil Jedang Co., Seoul, South Korea) and negative water were supplied after sterilization and freely ingested.
상기 실시예 3에서 제조한 화합물 1 및 2를 0.5% 트윈(tween) 80에 50 ㎎/㎖ 농도로 조제한 후, 마우스 체중 20 g 당 0.04 ㎖(100 ㎎/㎏), 0.2 ㎖(500 ㎎/㎏) 및 0.4 ㎖(1,000 ㎎/㎏)씩 경구 투여하였다. 시료는 단회 경구 투여하였으며, 투여 후 7 일 동안 다음과 같이 부작용 또는 치사 여부를 관찰하였다. 즉, 투여 당일은 투여 후 1 시간, 4 시간, 8 시간, 12 시간 뒤에, 그리고 투여 익일부터 7 일째까지는 매일 오전, 오후 1 회 이상씩 일반 증상의 변화 및 사망 동물의 유무를 관찰하였다. 또한, 투여 7 일째에 동물을 치사시켜 해부한 후 육안으로 내부 장기를 검사하였다. 투여 당일부터 1 일 간격으로 체중의 변화를 측정하여 화합물 1및 2에 의한 동물의 체중 감소 현상을 관찰하였다.Compounds 1 and 2 prepared in Example 3 were prepared at a concentration of 50 mg / ml in 0.5% tween 80, and then 0.04 ml (100 mg / kg) and 0.2 ml (500 mg / kg) per 20 g of mouse body weight. ) And 0.4 ml (1,000 mg / kg). Samples were administered orally once and observed for side effects or lethality for 7 days after administration. That is, on the day of administration, changes in general symptoms and the presence or absence of dead animals were observed at least 1 hour, 4 hours, 8 hours, 12 hours after the administration, and at least once every morning and afternoon from the day after the administration. In addition, on the 7th day of administration, animals were killed and dissected, and the internal organs were visually examined. Changes in body weight were measured at daily intervals from the day of administration to observe the weight loss phenomenon of animals caused by Compounds 1 and 2.
실험 결과, 시료를 투여한 모든 마우스에서 특기할 만한 임상증상이 나타나지 않았고 폐사된 마우스도 없었으며, 또한 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.As a result, no significant clinical symptoms were observed in all the mice treated with the sample, no mice died, and no toxicity change was observed in weight change, blood test, blood biochemistry test, autopsy findings, etc.
따라서, 본 발명의 화합물들은 모든 마우스에서 1,000 ㎎/㎏까지 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량(LD50)이 1,000 ㎎/㎏ 이상인 안전한 물질로 판단되었다.Therefore, the compounds of the present invention did not show a change in toxicity in all mice up to 1,000 mg / kg, it was determined that oral administration minimum dose (LD 50 ) is a safe substance of 1,000 mg / kg or more.
하기에 본 발명의 치료제를 위한 제제예를 예시한다.Examples of preparations for the therapeutic agents of the present invention are illustrated below.
<제제예 1> 약학적 제제의 제조Preparation Example 1 Preparation of Pharmaceutical Formulation
<1-1> 산제의 제조<1-1> Preparation of Powder
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 2g2 g of acetyl dopamine-based compound or biphenol compound isolated from the trademark extract according to the present invention
유당 1g1g lactose
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.The above ingredients were mixed and filled in airtight cloth to prepare a powder.
<1-2> 정제의 제조<1-2> Preparation of Tablet
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 100㎎100 mg of acetyldopamine-based compounds or biphenol compounds isolated from the trademark extract according to the present invention
옥수수전분 100㎎Corn Starch 100mg
유 당 100㎎Lactose 100mg
스테아린산 마그네슘 2㎎2 mg magnesium stearate
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.After mixing the above components, tablets were prepared by tableting according to a conventional method for producing tablets.
<1-3> 캡슐제의 제조<1-3> Preparation of Capsule
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 100㎎100 mg of acetyldopamine-based compounds or biphenol compounds isolated from the trademark extract according to the present invention
옥수수전분 100㎎Corn Starch 100mg
유 당 100㎎Lactose 100mg
스테아린산 마그네슘 2㎎2 mg magnesium stearate
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.After mixing the above components, the capsule was prepared by filling in gelatin capsules according to the conventional method for producing a capsule.
<1-4> 주사액제의 제조<1-4> Preparation of Injection Solution
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 10 ㎍/㎖10 g / ㎖ of the extract of the trademark according to the present invention or acetyl dopamine-based compound, biphenol compound isolated therefrom
묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지Dilute hydrochloric acid BP until pH 3.5
주사용 염화나트륨 BP 최대 1㎖Injectable sodium chloride BP up to 1 ml
적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물각각 을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120℃에서 15분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다.In a suitable volume of sodium chloride BP for injection, each of the trademark extract according to the present invention or the acetyldopamine-based compound and biphenol compound isolated therefrom is dissolved, and the pH of the resulting solution is adjusted to pH 3.5 using dilute hydrochloric acid BP. The volume was adjusted with sodium chloride BP for injection and mixed well. The solution was filled into a 5 ml Type I ampoule made of clear glass, encapsulated under an upper grid of air by dissolving the glass, and sterilized by autoclaving at 120 ° C. for at least 15 minutes to prepare an injection solution.
<제제예 2> 식품의 제조Preparation Example 2 Preparation of Food
본 발명의 화합물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.Foods containing the compound of the present invention were prepared as follows.
<2-1> 조리용 양념의 제조<2-1> Preparation of Cooking Seasoning
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀화합물 각각 0.2 ~ 10 중량부로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.The trademark vinegar extract according to the present invention, or acetyl dopamine-based compounds isolated from the biphenol compound, 0.2 to 10 parts by weight, respectively, was prepared for health promotion cooking seasoning.
<2-2> 토마토 케찹 및 소스의 제조<2-2> Preparation of Tomato Ketchup and Sauce
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀화합물 각각 0.2 ~ 1.0 중량부를 토마토 케찹 또는 소스에 첨가하여 건강 증진용 토마토 케찹 또는 소스를 제조하였다.Health care tomato ketchup or sauce was prepared by adding 0.2 to 1.0 parts by weight of each of the trademark herb extract or acetyldopamine-based compound and biphenol compound separated from tomato ketchup or sauce according to the present invention.
<2-3> 밀가루 식품의 제조<2-3> Preparation of flour food
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 각각 0.1 ~ 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.0.1 ~ 5.0 parts by weight of each of the extract of the trademark according to the present invention or the acetyldopamine-based compound and biphenol compound separated therefrom are added to flour, and the bread, cake, cookies, crackers and noodles are prepared using the mixture to improve health. Dragon food was prepared.
<2-4> 스프 및 육즙(gravies)의 제조<2-4> Preparation of Soups and Gravys
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 각각 0.1 ~ 1.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.0.1 to 1.0 parts by weight of each of the trademark herb extract or acetyldopamine-based compound and biphenol compound separated from the extract according to the present invention was added to soups and broths to prepare meat products for health promotion, soups and broths of noodles.
<2-5> 그라운드 비프(ground beef)의 제조<2-5> Preparation of Ground Beef
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀화합물 각각 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.10 parts by weight of each of the trademark herb extract or acetyldopamine-based compound and biphenol compound isolated from the extract was added to ground beef to prepare ground beef for health promotion.
<2-6> 유제품(dairy products)의 제조<2-6> Manufacture of Dairy Products
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 각각 0.1 ~ 1.0 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.0.1 to 1.0 parts by weight of each of the trademark herb extract according to the present invention or the acetyldopamine-based compound and biphenol compound separated therefrom were added to milk, and various dairy products such as butter and ice cream were prepared using the milk.
<2-7> 선식의 제조<2-7> Preparation of Wire
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.Brown rice, barley, glutinous rice, and yulmu were alphad by a known method, and then dried and roasted to prepare a powder having a particle size of 60 mesh using a grinder.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.Black beans, black sesame seeds, and perilla were also steamed and dried by a known method, and then ground to a powder having a particle size of 60 mesh.
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 을 진공 농축기에서 감압, 농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.The dried powder obtained by label extract according to the present invention or acetyl dopamine-based compound and biphenol compound separated therefrom under reduced pressure and concentrated in a vacuum concentrator, dried by spraying and hot air dryer, was pulverized to 60 mesh particle size with a grinder to dry powder. Got it.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.The grains, seeds and the vinegar extract according to the present invention or the acetyldopamine-based compound and biphenol compound dried powder prepared in the above ratio were prepared in the following ratio.
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),Cereals (30 parts by weight brown rice, 15 parts by weight brittle, 20 parts by weight of barley),
종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),Seeds (7 parts by weight perilla, 8 parts by weight black beans, 7 parts by weight black sesame seeds),
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물의 건조분말(1 중량부), 영지(0.5 중량부), 지황(0.5 중량부)Extract of the trademark herb according to the present invention or acetyl dopamine-based compounds isolated therefrom, dry powder (1 parts by weight), ganoderma lucidum (0.5 parts by weight), sulfuric acid (0.5 parts by weight)
<제제예 3> 음료의 제조Preparation Example 3 Preparation of Beverage
<3-1> 탄산음료의 제조<3-1> Preparation of Carbonated Drink
설탕 5~10%, 구연산 0.05 ~ 0.3%, 카라멜 0.005 ~ 0.02%, 비타민 C 0.1 ~ 1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79 ~ 94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85 ~ 98℃에서 20 ~ 180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5 ~ 0.82% 주입하여 본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 함유하는 탄산음료를 제조하였다.5-10% of sugar, 0.05-0.3% citric acid, 0.005-0.02% caramel, 0.1-1% of vitamin C are mixed, and 79-94% purified water is mixed to make syrup, and the syrup is 85-98 Sterilize at 20 ℃ for 180 seconds and mix with cooling water at a ratio of 1: 4, and then inject 0.5 to 0.82% of carbon dioxide gas to contain acetyldopamine-based compounds and biphenol compounds separated therefrom. Carbonated beverages were prepared.
<3-2> 건강음료의 제조<3-2> Preparation of health drink
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.Substances such as liquid fructose (0.5%), oligosaccharides (2%), sugars (2%), salts (0.5%), water (75%) and acetylchopamine compounds isolated from the trademark herb extract according to the present invention , Biphenol compound was homogeneously blended and then sterilized immediately and then packaged in small packaging containers such as glass bottles and plastic bottles to prepare a healthy beverage.
<3-3> 야채쥬스의 제조<3-3> Preparation of Vegetable Juice
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 0.5 g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.Health promotion vegetable juice was prepared by adding 0.5 g of acetyl dopamine-based compound or biphenol compound separated from the trademark herb extract according to the present invention to 1,000 ml of tomato or carrot juice.
<3-4> 과일쥬스의 제조<3-4> Preparation of fruit juice
본 발명에 따른 상표초 추출물 또는 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물, 바이페놀 화합물 0.1 g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.Health promotion fruit juice was prepared by adding 0.1 g of acetyldopamine-based compound or biphenol compound separated from the trademark herb extract according to the present invention to 1,000 ml of apple or grape juice.
본 발명의 상표초 추출물, 이로부터 분리된 아세틸도파민계 화합물 및 바이페놀 화합물은 저밀도 지질단백질에 대한 항산화 활성 및 라디칼 소거능이 우수하므로 이를 포함하는 조성물은 저밀도 지질단백질의 산화 및 라디칼 생성에 의해 유발되는 동맥경화, 관상동맥 심장병, 심근경색 및 이와 같은 질환으로부터 유발되는 심장순환계 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.Since the extract of the trademark of the present invention, the acetyl dopamine-based compound and the biphenol compound separated therefrom have excellent antioxidant activity and radical scavenging ability against the low density lipoprotein, the composition comprising the same is induced by oxidation and radical production of the low density lipoprotein. It can be usefully used for the prevention and treatment of atherosclerosis, coronary heart disease, myocardial infarction and cardiovascular diseases resulting from such diseases.
Claims (5)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020070060987A KR100821966B1 (en) | 2007-06-21 | 2007-06-21 | Therapeutic agent comprising biphenol compounds for prevention and treatment of cardiovascular disease |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020070060987A KR100821966B1 (en) | 2007-06-21 | 2007-06-21 | Therapeutic agent comprising biphenol compounds for prevention and treatment of cardiovascular disease |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020060042007A Division KR100778373B1 (en) | 2006-05-10 | 2006-05-10 | therapeutic agent comprising Mantidis ootheca extracts, N-acetyldopamine or biphenol compounds isolated from the same for prevention and treatment of cardiovascular disease |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20070110463A KR20070110463A (en) | 2007-11-19 |
KR100821966B1 true KR100821966B1 (en) | 2008-04-15 |
Family
ID=39089745
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020070060987A KR100821966B1 (en) | 2007-06-21 | 2007-06-21 | Therapeutic agent comprising biphenol compounds for prevention and treatment of cardiovascular disease |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR100821966B1 (en) |
-
2007
- 2007-06-21 KR KR1020070060987A patent/KR100821966B1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
대한민국공개특허공보 특2000-0000902호 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20070110463A (en) | 2007-11-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR100704299B1 (en) | Novel quinoline compound, and composition containing centipede extract or compounds isolated therefrom for prevention and treatment of cardiovascular disease | |
JP4777970B2 (en) | Novel abietane diterpenoid compound and sputum extract, or composition for prevention and treatment of cardiovascular disease comprising as an active ingredient an abietane diterpenoid compound or terpenoid compound isolated therefrom | |
KR20090010504A (en) | Compositions for the prevention and treatment of cardiovascular diseases containing sophora flavascens extracts, soluble extracts thereof, fractions thereof or flavonoid compounds isolated therefrom as an active ingredient | |
KR100883992B1 (en) | Composition containing extracts of Zanthoxylum piperitum DC or compounds isolated therefrom for the prevention and treatment of cardiovascular diseases | |
KR100823155B1 (en) | Novel catecholic xanthone compounds, and composition containing extract of Cudrania tricuspidata or catecholic xanthone compounds isolated therefrom for the prevention and treatment of cardiovascular disease | |
KR100778373B1 (en) | therapeutic agent comprising Mantidis ootheca extracts, N-acetyldopamine or biphenol compounds isolated from the same for prevention and treatment of cardiovascular disease | |
KR100772495B1 (en) | Composition comprising extract of Torreya nucifera or abietane diterpenoid compounds isolated from them for prevention and treatment of cardiovascular disease | |
KR100865514B1 (en) | Composition for prevention or treatment of vascular disease comprising the alcoholic extracts of gang-hwa mugwart | |
KR100836189B1 (en) | Composition containing extracts of Houttuynia cordata Thunb. or lignan compounds, dihydroguaiaretic acid, isolated from there for the prevention and treatment of cardiovascular disease | |
KR100758263B1 (en) | New n-acetyldopamine compounds, and the composition comprising periostracum cicadae extract or n-acetyldopamine compounds isolated from the same for prevention and treatment of cardiovascular disease | |
KR101188581B1 (en) | Composition comprising Cyperus rotundus methalnol extracts for preventing or treating Sepsis | |
KR100821966B1 (en) | Therapeutic agent comprising biphenol compounds for prevention and treatment of cardiovascular disease | |
KR100590726B1 (en) | Composition comprising extract of Phellinus sp. PL3 or Phellinsin A isolated from the same as an effective component for prevention and treatment of cardiac circuit disease | |
KR100629314B1 (en) | Composition comprising extract of Alnus japonica Steud. or diarylheptanoid compounds isolated from them for prevention and treatment of cardiovascular disease | |
KR100575253B1 (en) | Novel abietane diterpenoid compounds for prevention and treatment of cardiovascular disease and the composition comprising the same | |
KR100806226B1 (en) | A composition for the prevention and treatment of cardiovascular disease containing extract of Glycine max Roots or polypenol compounds isolated thereof | |
KR100593793B1 (en) | Novel lignan compound, preparation method thereof, and composition for prevention and treatment of cardiovascular disease comprising the active ingredient | |
KR101662887B1 (en) | Composition Comprising Actinidia arguta shoot extract for prevention or treatment of nonalcoholic fatty liver disease | |
KR100778031B1 (en) | A composition comprising glycerol compounds for prevention and treatment of cardiovascular disease | |
KR101722367B1 (en) | Composition comprising an extract of Eisenia bicyclis for preventing and treating Alzheimers disease | |
KR100631486B1 (en) | Preventive and therapeutic agent for cardiopulmonary diseases with terpenoid compounds as an active ingredient | |
KR100724088B1 (en) | Composition containing flavonoid compounds for the prevention and treatment of cardiovascular disease | |
KR101857350B1 (en) | Novel Myricetin Derivative and Anti-inflammatory Composition Using the Same | |
KR100588358B1 (en) | Agent comprising terpenoid compounds for prevention and treatment of cardiovascular disease | |
KR20240002391A (en) | Composition for anti-inflammation comprising 11-O-caffeoyl-methylphenyllactic acid |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A107 | Divisional application of patent | ||
A201 | Request for examination | ||
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
GRNT | Written decision to grant | ||
FPAY | Annual fee payment | ||
FPAY | Annual fee payment | ||
FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20150508 Year of fee payment: 8 |
|
FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20160405 Year of fee payment: 9 |
|
FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20170405 Year of fee payment: 10 |
|
LAPS | Lapse due to unpaid annual fee |