KR100802905B1 - Method that minimize cell damage on protein glycosylation and lipid peroxidation in human red blood cells exposed to high glucose levels - Google Patents
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Abstract
본 발명에서는 세포에 고농도의 당을 부과할 때 이를 보호할 수 있는 항산화제와 이의 효과를 상승시키는 물질에 관한 연구이다. 세포에 고농도의 당을 부과하면 세포의 생존에 필요한 단백질과 지방이 손상을 입게 되는데 단백질은 당화(protein glycosylation)현상이, 지질은 과산화(lipid peroxidation)현상이 발생한다. 이러한 현상을 줄이는데 항산화제가 도움이 되는 것은 여러 실험에서 이미 알려져 있지만 세포에 고농도의 당을 처리하기 이전의 상태와 비슷한 상태로 만드는 방법은 없다. In the present invention, when the high concentration of sugar is imposed on the cells to study the antioxidant and a substance that increases its effect that can protect it. Imposing high levels of sugar on cells damages the proteins and fats necessary for cell survival. Protein glycosylation and lipid peroxidation occur in lipids. While antioxidants have been known to help reduce this phenomenon, there is no way to bring them into a state similar to the one prior to processing high levels of sugar in cells.
세포 모델로는 인간의 적혈구 세포를 선택했으며 실험방법으로는 적혈구를 24시간 37℃에서 배양하면서 여러 실험 조건을 가하였다. 이 실험에서 세포가 고농도의 당(6x10-2M)에 노출될 때 단백질의 당화 현상과 지질의 과산화 현상을 최소화하는데 도움이 되는 물질과 농도는 10-2M diferuloylmethane, 10-2M L-ascorbic acid, 10-5M melatonin, 그리고 10-5M insulin이었다. 결론적으로 항산화제는 적혈구 모델에서 단백질의 당화 현상과 지질의 과산화 현상을 줄이며 또한 적절한 농도의 insulin은 이 효과를 상승시키며 고농도의 당에 의한 세포 손상을 최소화하는 것을 알수 있었다. 이것은 세포를 동결 건조시 고농도의 당을 세포에 부과하는 특수한 상황에서 세포의 생존에 도움을 줄 수 있는 방법이기에 이의 내용에 대해 특허를 신청한다.Human erythrocytes were selected as the cell model. Various experimental conditions were applied while erythrocytes were incubated at 37 ° C. for 24 hours. In this experiment, substances and concentrations that help minimize protein glycosylation and lipid peroxidation when cells are exposed to high concentrations of sugar (6x10 -2 M) are 10 -2 M diferuloylmethane, 10 -2 M L-ascorbic. acid, 10 -5 M melatonin, and 10 -5 M insulin. In conclusion, antioxidants reduce protein glycation and lipid peroxidation in the erythrocyte model. In addition, the proper concentration of insulin enhances this effect and minimizes the cellular damage caused by high concentration of sugar. This is a method that can help the survival of the cell in a special situation that imposes a high concentration of sugar on the cells when the cells are freeze-dried, so the patent is applied for its contents.
고농도의 당, diferuloylmethane, L-ascorbic acid, melatonin, insulin High concentrations of sugar, diferuloylmethane, L-ascorbic acid, melatonin, insulin
Description
도 1은 당과 항산화제 각각의 조건에 대한 헤모글로빈의 당화 현상 결과이다.1 is a result of glycation of hemoglobin for the conditions of sugar and antioxidant, respectively.
도 2는 당과 항산화제 각각의 조건에 대한 지질의 과산화 현상 결과이다.2 shows the results of peroxidation of lipids for the conditions of sugars and antioxidants, respectively.
도면의 주요 부호에 대한 설명Description of the main symbols in the drawings
G6 : 6x10-3M의 저농도 당에 적혈구가 노출되는 조건G6: red blood cells exposed to 6x10 -3 M low sugar
G60 : 6x10-2M의 고농도 당에 적혈구가 노출되는 조건G60: Conditions where red blood cells are exposed to high glucose of 6x10 -2 M
G60D : 6x10-2M의 고농도 당과 10-2M의 diferuloylmethane에 적혈구가 노출되는 조건 G60D: Conditions where red blood cells are exposed to high concentrations of 6x10 -2 M and 10 -2 M diferuloylmethane
G60DM : 6x10-2M의 고농도 당과 10-2M의 diferuloylmethane과 10-5M melatonin에 적혈구가 노출되는 조건 G60DM: Red blood cells exposed to high concentrations of 6x10 -2 M, 10 -2 M diferuloylmethane and 10 -5 M melatonin
G60DML : 6x10-2M의 고농도 당과 10-2M의 diferuloylmethane과 10-5M melatonin과 10-2M의 L-ascorbic acid에 적혈구가 노출되는 조건 G60DML: Red blood cells exposed to 6x10 -2 M high sugar, 10 -2 M diferuloylmethane, 10 -5 M melatonin and 10 -2 M L-ascorbic acid
G60DMLI : 6x10-2M의 고농도 당과 10-2M의 diferuloylmethane과 10-5M melatonin과 10-2M의 L-ascorbic acid과 10-5M insulin에 적혈구가 노출되는 조건 G60DMLI: Red blood cells exposed to 6x10 -2 M high sugar, 10 -2 M diferuloylmethane, 10 -5 M melatonin, 10 -2 M L-ascorbic acid and 10 -5 M insulin
본 발명은 세포를 장기간 보관하고자 하는 방법에 관한 분야이다. 세포를 장기간 보관하는 방법은 여러 가지가 있다. 일반적으로 많이 사용하는 방법은 초저온 냉동고에 보관하는 방법이지만 동결 건조시켜 보관하는 방법도 있다. 일부 미생물은 동결 건조시켜 보관하는 방법이 일반화되어있지만 진핵세포에서는 장기간 보관하는데 여러 가지 문제점이 있다. 동결건조 방법은 고농도의 당을 부과하는 방법이 있는데 진핵세포 특히 인간의 세포에서 고농도의 당은 세포의 생존에 치명적인 문제점이 있다. 현재 고농도의 당을 세포에 처리하는 방법은 여러 가지 개발된 것이 많지만 어떤 방법도 장기간 보관하는 데는 실패하였다. 이는 여러 가지 원인이 있지만 고농도의 당에 의해 세포의 생존에 필요한 단백질, 지질 등이 손상되는 것도 하나의 원인이다.The present invention relates to a method for long-term storage of cells. There are several ways to store cells for a long time. In general, the most commonly used method is to store in a cryogenic freezer, but there is also a method of freeze drying. Some microorganisms are commonly stored in a freeze-dried manner, but eukaryotic cells have various problems in long-term storage. The freeze-drying method imposes a high concentration of sugars. In eukaryotes, particularly human cells, high concentrations of sugars are fatal to cell survival. Currently, there are many methods for treating high concentrations of sugar in cells, but none of them have failed to store for a long time. This is due to various causes, but high levels of sugar damage proteins, lipids, etc. necessary for cell survival is one cause.
항산화제는 그 연구가 정말 광범위하게 이루어지고 있고 하루가 다르게 새로운 항산화제와 새로운 기전과 효능이 발표되고 있다. 최근 항산화제의 하나로 diferuloylmethane도 연구되고 있는데 이 물질은 백내장을 방지하고 상처회복을 촉진하고 혈당과 혈지질을 낮추는 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 당과 항산화제의 관계는 주로 당뇨병 실험동물이나 환자를 대상으로 어느 정도 연구가 되어있다. 하지만, 이들 연구의 모든 결론은 어느 정도 도움이 된다는 정도뿐이다. 그리고 이들 세포는 대부분 당뇨병 모델이고 정상 세포에 있어 고농도의 당을 부과할 때 생기는 현상에 대해서는 아직 뚜렷한 연구가 없다. 이것은 사실 정상 세포에 고농도의 당을 부과하는 상황은 특수한 경우를 제외하고는 없기 때문이다. 배양 중에 우연히 당 농도가 올라가거나 세포를 동결 건조할 때 인위적으로 고농도 상황을 만드는 것 외는 흔한 상황이 아니기 때문이다. 현재까지 세포의 동결 건조모델로서 고농도의 당을 부과할 때 고농도의 당 효과를 없앨 수 있는 방법에 대해서는 보고가 아직 없다. Antioxidants are being studied extensively and new antioxidants, new mechanisms and benefits are being announced every day. Recently, diferuloylmethane has been studied as an antioxidant, which is known to prevent cataracts, promote wound healing, and lower blood sugar and blood lipids. The relationship between sugar and antioxidants has been studied to some extent in diabetic animals and patients. However, all the conclusions from these studies are to some extent helpful. And these cells are mostly diabetic models, and there is no clear study of what happens when high concentrations of sugar are imposed on normal cells. This is because, in fact, there is no situation in which high concentrations of sugar are imposed on normal cells except in special cases. This is because it is not common to create artificially high concentrations when sugar levels increase by chance during culture or when lyophilized cells. To date, there have been no reports on how to eliminate the high concentration of sugar effect when imposing high concentration of sugar as a freeze-drying model of cells.
문제는 과연 유리전자기에 의한 산화 정도가 고농도의 당을 부과한 상태와 부과하지 않은 상태가 동일하게 되도록 하는 강력한 항산화제가 있는가 하는 것이다. 당연한 이야기지만 항산화제가 유리전자기를 줄이는데 어느 정도는 도움된다. 하지만, 세포를 동결 건조할 때 필요한 항산화제는 고농도의 당을 부과하기 이전의 상태로 되돌릴 수 있을 정도로 강력해야만 우리가 이용할 수 있다.The question is whether there is a strong antioxidant that allows the degree of oxidation caused by free electrons to be equal to the state in which high concentrations of sugar are imposed. Not surprisingly, antioxidants help some extent to reduce free electrons. However, the antioxidants needed to lyophilize cells can be used only when they are strong enough to return them to their pre-imposed state.
세포에 고농도의 당을 부과하는 모델을 만드는 것을 어렵지 않다. 배양 배지에 세포를 넣고 고농도의 당만 넣어주면 된다. 하지만, 어떤 항산화제가 도움이 될지 연구하는 것은 쉽지 않다. 이때까지 개발된 항산화제를 하나씩 넣고 결과를 하 나하나 관찰해야 한다. 그리고 이들 항산화제를 조합해서도 넣어보아야 한다. 본 연구소에서는 이전의 실험에서 여러 가지 항산화제로 실험을 하였지만 각각의 항산화제는 모두 그 한계가 있었다. 하나하나의 항산화제든 조합을 해서 사용한 항산화제든 어느 정도 단백질의 당화 현상과 지질의 과산화 현상을 줄여주는 효과는 있지만 고농도의 당을 부과하기 이전 상태와 동일하게 되도록 하는 항산화제는 없었다. It is not difficult to create a model that imposes high concentrations of sugar on cells. Cells are added to the culture medium and only a high concentration of sugar is added. However, it is not easy to study which antioxidants will help. At this point, the developed antioxidants should be added one by one and the results should be observed. You should also add these antioxidants in combination. In our previous experiment, we tested with various antioxidants, but each antioxidant had its limitations. Antioxidants used in combination with one or more antioxidants have some effect on reducing glycosylation of proteins and peroxidation of lipids.
이에 고농도의 당을 부과할 때 항산화제를 사용한다면 이러한 항산화제의 기능을 상승시키는 물질을 찾아내는 것이 필요하고 또한 그 물질의 농도를 동시에 결정해야하는 것이 기술적인 과제이다. 하지만, 이러한 물질은 항산화제에만 국한된 것이 아니기 때문에 시간방비를 방지하기 위해 가능성 있는 물질을 잘 선정해야하고 발견이 될 때까지 이것저것 넣어보는 반복적인 작업이 해결해야하는 기술적 과제이다.When antioxidants are used to impose high concentrations of sugar, it is a technical challenge to find a substance that enhances the function of these antioxidants and to determine the concentration of the substance simultaneously. However, since these substances are not limited to antioxidants, it is a technical challenge to select the potential substances well in order to prevent time wasting and to repeat them until they are found.
고농도의 당을 부과하는 세포모델로는 인간의 적혈구 모델을 사용하고 당에 의한 손상 정도를 측정하는 것은 단백질의 당화 정도와 지질의 과산화 정도로 측정하였다. 항산화제조합은 기존실험에서 가장 효과가 좋은 diferuloylmethane, L-ascorbic acid, melatonin을 선택했다. 항산화제를 상승시키는 물질로는 insulin을 사용하였다. 다음은 실험의 순서와 측정방법 그리고 결과이다.Human erythrocyte model was used as a cell model that imposed high concentration of sugar, and the degree of sugar damage was measured by the degree of glycosylation of protein and the degree of lipid peroxidation. The antioxidant combination selected the most effective diferuloylmethane, L-ascorbic acid and melatonin in the previous experiment. Insulin was used as a substance to raise antioxidants. The following is the sequence, measurement method and results of the experiment.
1. 실험의 순서1. Sequence of experiment
① 실험당일 전혈(whole blood)을 채취한다. ① Collect whole blood on the day of the experiment.
② 전혈을 EDTA(ethylenediaminetetraacetate)가 들어있는 튜브에 모은다. ② collect the whole blood in the tube containing EDTA (ethylenediaminetetraacetate).
③ 전혈을 원심분리기(329g, 14분)를 이용하여 각각의 혈구를 분리한다. ③ Whole blood is centrifuge (329g, 14 minutes) to separate each blood cell.
이때 아래쪽 기저 쪽에서 적혈구를 모으고 위쪽의 buffy coat와 혈장성분은 폐기한다. At this time, red blood cells are collected at the bottom and the buffy coat and plasma components at the top are discarded.
④ 이후 생리식염수(PBS)로 세척하고 원심분리 (515g, 10분)를 하는 것을 세 차례 한다. 각각의 원심분리기를 사용할 때마다 같은 요령으로 적혈구 세포를 모은다. 세척한 적혈구는 6x10-3M의 당이 들어있는 PBS에 넣고 hematocrit 10%로 만든다.④ After washing with physiological saline (PBS) and centrifuged (515g, 10 minutes) three times. Each time each centrifuge is used, the red blood cells are collected in the same manner. The washed red blood cells are placed in PBS containing 6x10 -3 M of sugar and 10% hematocrit.
⑤ 세포 현탁액의 일부를 삼각플라스크 (Erlenmeyer flask)에 넣고 실험을 한다. 이후 실험에서 요구하는 조건대로 물질을 플라스크에 넣어주는데 이후 모든 농도 표시는 세포 현탁액에 대한 최종농도로 표시한다. 당의 최종 농도는 6x10-2M이 되도록 하고 항산화제는 10-2M의 diferuloylmethane, 10-5M melatonin, 10-2M의 L-ascorbic acid을 조건에 따라 넣어주고 insulin의 양은 10-5M을 넣어 준다. 배양은 온도는 37℃에서 24시간 배양한다. ⑤ Insert a part of the cell suspension into Erlenmeyer flask and experiment. Subsequently, the material is placed in the flask according to the conditions required by the experiment, after which all concentrations are expressed as the final concentration for the cell suspension. The final concentration of sugar is 6x10 -2 M, and antioxidants are added 10 -2 M diferuloylmethane, 10 -5 M melatonin, 10 -2 M L-ascorbic acid, and the amount of insulin is 10 -5 M. Put it. The culture is incubated at 37 ° C. for 24 hours.
⑥ 모든 배양은 10 penicillin-streptomycin/㎖ 으로 배양 중에 균이 증식하는 것을 억제한다. penicillin-streptomycin용액은 300mg penicillin G와 500mg streptomycin이 10㎖ buffer에 들어있다.⑥ All the culture is 10 penicillin-streptomycin / ㎖ inhibit the growth of bacteria during the culture. Penicillin-streptomycin solution contains 300mg penicillin G and 500mg streptomycin in 10ml buffer.
2. 당화된 헤모글로빈(GHb)과 당의 농도 측정방법2. How to measure the concentration of glycated hemoglobin (GHb) and sugar
GHb 값은 Glyc-affinity columns & Kit [Iso-Lab Inc. Akron]을 사용하여 전체 헤모글로빈의 백분율로 표시한다. 당의 수치는 Accucheck Advantage glucometer [Boehringer Mannheim Corporation, Indiapapolis]에 의한 글루코즈산화효소(glucose oxidase)에 의해 결정한다. GHb values are calculated from Glyc-affinity columns & Kit [Iso-Lab Inc. Akron] is used as a percentage of total hemoglobin. The level of sugar is determined by glucose oxidase by Accucheck Advantage glucometer (Boehringer Mannheim Corporation, Indiapapolis).
3. 지질의 과산화 농도 측정3. Measurement of lipid peroxidation concentration
지질의 과산화 과정에서 나오는 melondialdehyde(MDA)의 수치로 측정한다. 시약은 ALPCO사의 melondialdehyde HPLC Kit를 사용하고 Kit안에는 네 가지 종류의 용액이 들어있는데 mobile phase(KC 1900lm), lyophilized calibrator(KC 1900ka), derivatisation solution(KC 1900dl), reaction solution(KC 1900rl)로 구성되어 있다. 실험은 Kit에서 제시하고 있는 순서대로 20㎕ 세포를 1㎖ derivatisation용액과 와류교반기에서 15초간 섞는다. 이후 95℃에서 60분간 배양하고 4℃로 냉각한다. 5분간 원심분리한 후 상층액 500㎕을 reaction용액 500㎕와 와류교반기에서 섞는다. 이후 혼합액 20㎕을 Shimadzu HPLC 시스템에 주입(injection)한다. 크로마토그래피 조건은 다음과 같다. column material은 Zobra Extend-c18 ,5㎛, column dimension은 150mm x 4.6mm, flow rate는 1ml/min, detection은 fluorescence (excitation;515nm, emission;553nm), injection volume은 20㎕, running time은 4분으로 한다. 세척한 적혈구의 용적 비는 (packed cell volume)은 Autocrit centrifuge를 사용한다.Measured by melondialdehyde (MDA) from lipid peroxidation. The reagent is used with ALPCO's melondialdehyde HPLC Kit, and the kit contains four types of solutions: mobile phase (KC 1900lm), lyophilized calibrator (KC 1900ka), derivatisation solution (KC 1900dl), and reaction solution (KC 1900rl). have. In the experiment, mix 20 µl cells in 1 ml derivatisation solution and vortex stirrer for 15 seconds in the order suggested by Kit. After incubation at 95 ℃ for 60 minutes and cooled to 4 ℃. After centrifugation for 5 minutes, 500 µl of the supernatant was mixed with 500 µl of the reaction solution in a vortex stirrer. 20 μl of the mixture is then injected into the Shimadzu HPLC system. Chromatography conditions are as follows. Column material is Zobra Extend-c18, 5㎛, column dimension is 150mm x 4.6mm, flow rate is 1ml / min, detection is fluorescence (excitation; 515nm, emission; 553nm), injection volume is 20µl, running time is 4 minutes It is done. For packed cell volume, use an Autocrit centrifuge.
4. 통계처리 4. Statistical Processing
모든 시약은 특별한 언급이 없으면 모두 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO)에서 구입한다. 자료는 systat program의 비모수적 윌콕슨 검정 (n=5)을 실시한다. P value 0.05내를 의미 있는 것을 한다.All reagents are specified by Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). Data are run on a nonparametric Wilcoxon test (n = 5) of the systat program. Do something meaningful within P value 0.05.
5. 결과5. Results
헤모글로빈의 당화 현상에 대한 결과는 도 1과 같다. 통계학적은 유의성은 G6 (6x10-3M의 당에 적혈구가 노출되는 조건)와 G60DMLI (6x10-2M의 당과 10-2M의 diferuloylmethane과 10-5M melatonin과 10-2M의 L-ascorbic acid과 10-5M insulin에 적혈구가 노출되는 조건)이, G60DM (6x10-2M의 당과 10-2M의 diferuloylmethane과 10-5M melatonin에 적혈구가 노출되는 조건)과 G60DML (6x10-2M의 당과 10-2M의 diferuloylmethane과 10-5M melatonin과 10-2M의 L-ascorbic acid에 적혈구가 노출되는 조건)이 통계학적으로 의미가 없었으며 다른 조건들은 모두 통계학적으로 의미 있는 차이가 났다. 이것은 당의 농도가 고농도(G60)가 되면 단백질의 당화 현상은 통계학적으로 의미가 있게 증가하는 것을 알 수 있다. 이러한 단백질의 당화 현상은 처음에 10-2M의 diferuloylmethane를 투여하면 통계학적으로 의미 있게 감소했으며 10-5M의 melatonin을 같이 투여하면 통계학적으로 의미 있게 한번 더 감소했지만 저농도 당 상태의 GHb 수치까지로는 내려오지 않음을 알 수 있다. 그리고 10-2M의 L-ascorbic acid를 더 추가하여 투여해도 더 이상 통계학적으로 의미 있게 감소하지는 않는 것을 알 수 있다. 이것은 항산화제 숫자와 양만 증가시킨다고 단백질의 당화 현상이 계속해서 감소하는 것은 아니라는 것을 알 수 있다. 하지만, 기존의 항산화제 조합에 10-5M insulin을 넣으면 처음 상태인 저농도의 당에(G6) 노출된 상태와 통계학적으로 차이를 보이지 않는 수준으로 떨어지는 것을 알 수 있다. 이는 insulin이 항산화제의 효과를 상승시키는 것을 알 수 있다. Results of the glycosylation phenomenon of hemoglobin are shown in FIG. The statistical significance was G6 (condition of red blood cell exposure to 6x10 -3 M sugar) and G60DMLI (6x10 -2 M sugar and 10 -2 M diferuloylmethane and 10 -5 M melatonin and 10 -2 M L-ascorbic red blood cells exposed to acid and 10 -5 M insulin), G60DM (6x10 -2 M sugar and 10 -2 M diferuloylmethane and 10 -5 M melatonin) and G60DML (6x10 -2) The exposure of red blood cells to M sugar, 10 -2 M diferuloylmethane, 10 -5 M melatonin, and 10 -2 M L-ascorbic acid was not statistically significant; all other conditions were statistically significant. There was a difference. This suggests that the glycosylation of protein increases statistically significantly when the sugar concentration becomes high (G60). The glycosylation of these proteins was initially statistically significant after 10 -2 M of diferuloylmethane, and once again with 10 -5 M of melatonin, which was statistically significant, but up to low levels of GHb. You can see that it does not come down. In addition, administration of additional 10 -2 M L-ascorbic acid did not show any statistically significant decrease. This suggests that increasing the number and amount of antioxidants does not mean that glycosylation of proteins continues to decrease. However, when 10 -5 M insulin is added to the existing antioxidant combination, it can be seen that there is no statistical difference between the initial state of exposure to low concentration of sugar (G6). It can be seen that insulin increases the effectiveness of antioxidants.
지질의 과산화 정도는 도 2와 같다. 통계학적은 유의성은 G6 (6x10-3M의 당에 적혈구가 노출되는 조건)와 G60DMLI (6x10-2M의 당과 10-2M의 diferuloylmethane과 10-5M melatonin과 10-2M의 L-ascorbic acid과 10-5M insulin에 적혈구가 노출되는 조건)이, G60DM (6x10-2M의 당과 10-2M의 diferuloylmethane과 10-5M melatonin에 적혈구가 노출되는 조건)과 G60DML (6x10-2M의 당과 10-2M의 diferuloylmethane과 10-5M melatonin과 10-2M의 L-ascorbic acid에 적혈구가 노출되는 조건)이 통계학적으로 의미가 없었으며 다른 조건들은 모두 통계학적으로 의미 있는 차이가 났다. 이것은 당의 농도가 고농도가(G60) 되면 지질의 과산화 현상은 통계학적으로 의미가 있게 증가하는 것을 알 수 있다. 이러한 지질의 과산화 현상은 처음에 10-2M의 diferuloylmethane를 투여하면 통계학적으로 의미 있게 감소했으며 10-5M의 melatonin을 같이 투여하면 통계학적으로 의미 있게 한번 더 감소했지만 저농도 당 상태의 MDA 수치까지로는 내려오지 않음을 알 수 있다. 그리고 10-2M의 L-ascorbic acid를 더 추가하여 투여해도 더 이상 통계학적으로 의미 있게 감소하지는 않는 것 을 알 수 있다. 이것은 항산화제 숫자와 양만 증가시킨다고 지질의 과산화 현상이 계속해서 감소하는 것이 아니라는 것을 알 수 있다. 하지만, 기존의 항산화제에 10-5M insulin을 넣으면 처음 상태인 저농도의 당에(G6) 노출된 상태와 통계학적으로 차이를 보이지 않는 수준으로 떨어지는 것을 알 수 있다. 이것은 insulin이 항산화제의 효과를 상승시키는 것을 알 수 있다. The degree of lipid peroxidation is shown in FIG. 2. The statistical significance was G6 (condition of red blood cell exposure to 6x10 -3 M sugar) and G60DMLI (6x10 -2 M sugar and 10 -2 M diferuloylmethane and 10 -5 M melatonin and 10 -2 M L-ascorbic red blood cells exposed to acid and 10 -5 M insulin), G60DM (6x10 -2 M sugar and 10 -2 M diferuloylmethane and 10 -5 M melatonin) and G60DML (6x10 -2) The exposure of red blood cells to M sugar, 10 -2 M diferuloylmethane, 10 -5 M melatonin, and 10 -2 M L-ascorbic acid was not statistically significant; all other conditions were statistically significant. There was a difference. This suggests that the peroxidation of lipids increases statistically when the sugar concentration is high (G60). Peroxidation of these lipids was statistically significant at the first dose of 10 -2 M diferuloylmethane, and once again at a dose of 10 -5 M melatonin, but significantly lowered to the MDA level of low glucose. You can see that it does not come down. In addition, administration of additional 10 -2 M L-ascorbic acid did not show any statistically significant decrease. This increases the number and amount of antioxidants only, and does not indicate that the peroxidation of lipids continues to decrease. However, when 10 -5 M insulin is added to the existing antioxidants, it can be seen that the initial state of low levels of sugar (G6) exposed to the level that does not show a statistical difference. This suggests that insulin increases the effectiveness of antioxidants.
1. 진핵세포를 동결건조하고자 할 때 고농도의 당을 이용하는 방법으로도 장기간 보관할 수 있다는 하나의 가능성을 제시한다. 1. When eukaryotic cells are to be lyophilized, they offer one possibility of long-term storage by using high concentrations of sugar.
2. 본 실험결과를 진핵세포의 동결건조 이전에 행할 수 있는 전 처치 프로토콜의 하나로 제시할 수 있다.2. The results of this experiment can be presented as one of the pretreatment protocols that can be performed prior to lyophilization of eukaryotic cells.
3. 진핵세포의 동결건조는 하나의 특정물질만으로 사용하는 것이 아니라 여러 가지 물질을 사용하는 복합적 방법이 용이함을 알 수 있고 이 복합적 물질의 지속적인 연구가 필요함을 알 수 있다. 3. The lyophilization of eukaryotic cells is not only used by one specific substance but also by the complex method using several substances, and it can be seen that the continuous study of this complex substance is needed.
Claims (3)
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| KR20020075372A (en) * | 1999-11-22 | 2002-10-04 | 유니버설 프리저베이션 테크놀로지스 인코포레이티드 | Preservation of Sensitive Biological Material |
| KR20040054671A (en) * | 2001-08-09 | 2004-06-25 | 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | Erythrocytic cells and method for preserving cells |
| KR20040065208A (en) * | 2001-08-09 | 2004-07-21 | 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | Eukaryotic cells and method for preserving cells |
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2007
- 2007-02-21 KR KR1020070017627A patent/KR100802905B1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20020075372A (en) * | 1999-11-22 | 2002-10-04 | 유니버설 프리저베이션 테크놀로지스 인코포레이티드 | Preservation of Sensitive Biological Material |
| KR20040054671A (en) * | 2001-08-09 | 2004-06-25 | 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | Erythrocytic cells and method for preserving cells |
| KR20040065208A (en) * | 2001-08-09 | 2004-07-21 | 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | Eukaryotic cells and method for preserving cells |
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