KR100551096B1 - Novel Y-PEG Derivatives and the preparation method thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 신규한 생체고분자인 Y-PEG(세 개의 결합부위를 지닌 핵분자를 중심으로 두 개의 결합부위에는 PEG를 부착하며 나머지 하나의 결합부위에는 반응기를 부착하는 Y자 형태의 화합물) 유도체 및 그의 합성방법에 관한 것으로, 상세하게는 생체친화성이 높은 PEG의 성질을 가짐과 동시에 목표물에 공유결합할 수 있는 반응기를 가짐으로써, 그 용도로서 다당류, 단백질, 효소, 당단백질, 항체, 세포 등의 생명공학 제품이나 화학의약품 등의 특정 부위에 선택적으로 공유결합 함으로서 최종제품의 약리작용을 향상시키고 독성을 감소시키는 등 치료제 또는 의료기기로서 유용성이 높다.The present invention is a novel biopolymer Y-PEG (Y-shaped compound that attaches PEG to two binding sites around the nuclear molecule having three binding sites and a reactor attached to the other binding site) and The present invention relates to a synthetic method thereof, and in particular, it has a biocompatible PEG property and a reactor capable of covalently binding to a target, so that polysaccharides, proteins, enzymes, glycoproteins, antibodies, cells, etc. It is highly useful as a therapeutic or medical device by selectively covalently binding to specific sites such as biotechnological products or chemicals, thereby improving the pharmacological action and reducing toxicity of the final product.

폴리에틸렌글리콜, 생체고분자, 공유결합Polyethylene glycol, biopolymer, covalent bond

Description

신규한 와이-폴리에틸렌글리콜 유도체 및 그의 제조방법{Novel Y-PEG Derivatives and the preparation method thereof}Novel Y-PEG Derivatives and the Preparation Method

본 발명은 신규한 생체고분자인 Y-PEG(세 개의 결합부위를 지닌 핵분자를 중심으로 두 개의 결합부위에는 PEG를 부착하며 나머지 하나의 결합부위에는 반응기를 부착하는 Y자 형태의 화합물) 유도체 및 그의 제조방법에 관한 것으로, 상세하게는 생체친화성이 높은 PEG의 성질을 가짐과 동시에 목표물에 공유결합할 수 있는 반응기를 가짐으로써, 그 용도로서 다당류, 단백질, 효소, 당단백질, 항체, 세포 등의 생명공학 제품이나 화학의약품 등의 특정 부위에 선택적으로 공유결합 함으로서 최종제품의 약리작용을 향상시키고 독성을 감소시키는 등 치료제 또는 의료기기로서 유용성이 높다.The present invention is a novel biopolymer Y-PEG (Y-shaped compound that attaches PEG to two binding sites around the nuclear molecule having three binding sites and a reactor attached to the other binding site) and The present invention relates to a method for preparing the same, and in particular, having a biocompatible PEG property and having a reactor capable of covalently binding to a target, polysaccharides, proteins, enzymes, glycoproteins, antibodies, cells, etc. It is highly useful as a therapeutic or medical device by selectively covalently binding to specific sites such as biotechnological products or chemicals, thereby improving the pharmacological action and reducing toxicity of the final product.

일반적으로 유기용매 및 물에 잘 녹는 양친매성 고분자인 폴리에틸렌글리콜(이하 'PEG'라 함)은 폴리에틸렌 옥사이드(PEO)로도 잘 알려져 있으며, 수용성이 극히 낮은 물질이라도 PEG와 결합하게 되면 수용성을 가지게 된다. 또한 PEG는 인체내 면역 반응성이 거의 없고 무독성이라는 장점이 있어, 생명공학 치료제의 분자나 표면에 대한 화학적 결합은 약학적으로 매우 유용하며, 결과적으로 인체내 주사제 등으로 다수 사용되고 있다. PEG의 가장 일반적인 형태는 양쪽 끝부분에 히드록실(hydroxyl)기를 갖는 선형 고분자로서, 그 구조식은 HO-(CH2CH2O)n-H로 표현되며 간단히 HO-PEG-OH로도 나타낼 수 있는데, 여기서 PEG-는 (CH2CH2O)로서, 말단의 반응기가 없는 고분자 골격을 의미한다. 또 다른 형태의 PEG로는 메톡시(methoxy, CH3O-)기를 한쪽 말단에 포함하고 나머지 한쪽 말단에는 히드록실기를 갖는 메톡시-PEG-OH(이하 'mPEG'라 함)가 일반적으로 사용되고 있다. 그 구조식은 CH3O-(CH2CH2O)n-H로 표현된다.In general, polyethylene glycol (hereinafter referred to as 'PEG'), an amphiphilic polymer that is well soluble in organic solvents and water, is also known as polyethylene oxide (PEO), and has a water solubility when combined with PEG even in an extremely low water solubility material. In addition, PEG has the advantage that it has little immune reactivity in the human body and is non-toxic, and chemical bonding to the molecule or surface of the biotechnological therapeutic agent is very useful pharmacologically, and as a result, it is used in a large number as an injection in human body. The most common form of PEG is a linear polymer having hydroxyl groups at both ends, the structural formula of which is expressed as HO- (CH 2 CH 2 O) nH and can also be referred to simply as HO-PEG-OH, where PEG -Is (CH 2 CH 2 O), which means a polymer skeleton without a terminal reactor. As another type of PEG, methoxy-PEG-OH (hereinafter referred to as 'mPEG') containing a methoxy (methoxy, CH 3 O-) group at one end and a hydroxyl group at the other end is generally used. . The structural formula is represented by CH 3 O- (CH 2 CH 2 O) nH.

생체 활성을 갖는 여러 가지 효소, 단백질 또는 기타 폴리펩티드 등은 오래 전부터 화학적, 유전학적 방법으로 합성, 개발되어 왔다. 그러나 이러한 화합물들은 생체 내 면역거부반응이 일어나거나 장기독성을 유발하는 등의 단점이 있으며, 또한 체내 반감기가 매우 짧아 그 효능이 떨어지거나 물에 불용성인 경우 치료제재로 사용할 수 없는 등 여러 가지 한계점이 있다. Various enzymes, proteins or other polypeptides having biological activity have been synthesized and developed by chemical and genetic methods for a long time. However, these compounds have disadvantages such as in vivo immune rejection reactions or long-term toxicity, and also have various limitations, such as their short half-life, which can lead to poor efficacy or insoluble water. have.

이러한 한계점을 극복하기 위해 폴리펩티드에 PEG를 결합시켜 그 폴리펩티드의 주변에 친수성 PEG 구름을 형성시키고자 하는 시도가 있었으며, 이처럼 인체 친화적인 PEG와 결합된 생명공학 제품은 친수성이외에도 구조적 안정성도 가지게 되어 다양한 신약 개발 제재로 응용될 수 있다. 특히 체내에서 사용될 경우, 거대한 PEG 구름은 폴리펩티드의 다른 활성 부위에 부가적인 화학적 반응이 일어나지 않도록 보호해주며 또한 체내의 단백질분해효소에 의해 분해되는 것을 방지하여, 결과 적으로 빨리 생리활성을 잃거나 또는 신장으로 빠르게 여과되는 등의 다양한 부정적인 효과들을 감소시킨다. 또한 폴리펩티드 주변을 둘러싼 PEG 구름은 체내 면역반응을 감소시키고 다른 체내 기관에 독성으로 작용하는 효과를 현저히 감소시킨다.In order to overcome these limitations, attempts have been made to bind PEG to a polypeptide to form a hydrophilic PEG cloud around the polypeptide. Such biotech products combined with human-friendly PEG have structural stability in addition to hydrophilicity, resulting in various new drugs. It can be applied as a development sanction. Especially when used in the body, huge PEG clouds protect against additional chemical reactions on other active sites of the polypeptide and also prevent degradation by proteolytic enzymes in the body, resulting in rapid loss of physiological activity or kidneys. To reduce various negative effects such as rapid filtration. The PEG cloud surrounding the polypeptide also reduces the body's immune response and significantly reduces its toxic effects on other organs.

그러나 이러한 장점에도 불구하고 부수적인 문제들이 발생하였으며, 이 문제들은 PEG와 폴리펩티드의 연결이 어렵다는 점에서 발생되었다. 양반응성 (bifunctional) 또는 다반응성(multi-functional) 고분자 유도체는 단백질들끼리 서로 교차연결시켜 오히려 수용액상에서의 용해도를 감소시켰고 혈관을 통한 순환에 부적합하였다. 폴리펩티드나 단백질의 일반적인 아미노산에 PEG를 연결시키고자 하는 가장 고전적인 방법으로는 숙신이미드 활성 그룹을 가진 mPEG-숙신이미딜 숙신네이트(mPEG-succinimidyl succinate, 이하 "PEG-SS"라 한다)가 사용되었다. 폴리펩티드 또는 단백질과 PEG가 에스터(ester) 결합으로 연결되면 체내에서 단백질 가수분해 효소에 의해 쉽게 분해되는 것으로 보고되었으며, 약한 염기성 조건에서도 단백질로부터 분리되어 mPEG-숙신 산(mPEG-succinic acid)으로 남게 되는데 이것은 체내 다른 기관에 대하여 독성을 가질 수 있다고 알려져 있다(US patent 5,932,462).However, in spite of these advantages, additional problems have arisen, which are caused by the difficulty in linking the PEG to the polypeptide. Bifunctional or multi-functional polymer derivatives cross-linked proteins to each other, rather reducing solubility in aqueous solution and unsuitable for circulation through blood vessels. The most classical method of linking PEG to a common amino acid of a polypeptide or protein is the use of mPEG-succinimidyl succinate (hereinafter referred to as "PEG-SS") with succinimide active groups. It became. When a polypeptide or protein is linked to an ester bond, it is reported to be easily degraded by proteolytic enzymes in the body, and is separated from the protein even under mild basic conditions, leaving it as mPEG-succinic acid. It is known to be toxic to other organs in the body (US patent 5,932,462).

위와 같은 단점을 극복하기 위한 노력으로 단백질 또는 폴리펩티드 및 PEG와의 연결부위에 단백질가수분해 효소들의 접근을 입체적으로 방해하는 새로운 형태의 PEG가 개발되었다. 미국 특허 제 5,643,575 및 미국 특허 제 5,919,455호에 기재된 가지상의 PEG 고분자(Branched PEG polymer)는 이러한 형태의 PEG의 대표적인 예이다. 상기 가지상의 PEG 고분자는 라이신 등의 핵분자를 중심으로 두 개의 PEG 분자가 연결된 형태로서, 이것은 우산형태의 구조를 가지기 때문에 선형 구조의 단일 PEG에 비해 입체적 부피효과가 현저하게 증가하여 단백질 분해 효소의 접근을 방해하는 효과를 가져오므로 앞서 기술한 단점들을 극복할 수 있는 것으로 알려져 있다(Bioconjugate Chem. 12, pp62-70, 2001; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 12, pp177-180, 2002).In an effort to overcome the above drawbacks, a new type of PEG has been developed that stericly interferes with the access of proteolytic enzymes to the protein or polypeptide and the PEG site. Branched PEG polymers described in US Pat. No. 5,643,575 and US Pat. No. 5,919,455 are representative examples of this type of PEG. The branched PEG polymer is a form in which two PEG molecules are linked around a nuclear molecule such as lysine, which has an umbrella-like structure, and thus a steric volume effect is significantly increased compared to a single PEG having a linear structure. It is known to overcome the disadvantages described above because it has the effect of disturbing access ( Bioconjugate Chem . 12 , pp62-70, 2001; Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 12 , pp177-180, 2002).

이와 비슷한 형태로 미국 특허 제 6,251,382호에는 여러 개의 결합가능부위를 가진 핵분자에 약물 전구체를 연결한 후 PEG를 도입한 화합물을 개시하였다. 이것은 하나의 분자에 생체 활성을 가진 약물 전구체를 여러 개 도입함으로써 약물전달 효과를 높일 수 있는 장점을 가지며, 또한 기존에 알려져 있는 멀티-암(multi-arm) PEG에 약물 전구체를 연결한 화합물에 비하여 인체내 유동성이나 약물 전구체의 손실을 줄일 수 있는 등의 이점을 가지고 있는 것으로 알려져 있다. 또 다른 예로 미국 특허 제5,932,462호에 개시된 멀티-암(multi-armed), 단일반응성의 고분자(monofunctional polymer)도 이와 유사한 형태를 가지고 있다. 이 화합물은 핵분자를 기반으로 하였으며, 핵분자로서는 세 개의 부착가능부위를 지닌 라이신(lysine)을 채택하였다. 이 세 개의 부착가능부위는 두개의 아민(amine)기와 하나의 산(acid)기이며, 여기에서 두 개의 아민기에는 PEG를 부착하고 연이어 반대편의 한 개 산기에는 숙신이미딜기 등의 반응기를 부착시켜 단백질 또는 폴리펩티드 등의 목표물질과 공유결합을 일으킬 수 있는 새로운 구조의 폴리머를 개발하였다. 이의 임상적 응용으로서 라이신을 핵분자로 갖는 PEG 유도체와 인터페론-α(알 파)가 결합된 형태로 페가시스(PegaSys)라는 이름의 C형 간염치료제로 시장에 나와 있으며 기존의 인터페론-α(알파)와 비교하여 체내 잔류시간이 길고 항바이러스성이 향상되는 등 뛰어난 임상효과를 보여주는 것으로 나타났다(J. Control. Rel. 72, pp217-224, 2001). In a similar manner, US Pat. No. 6,251,382 discloses a compound in which PEG is introduced after linking a drug precursor to a nuclear molecule having several bondable sites. This has the advantage of increasing the drug delivery effect by introducing several drug precursors having bioactivity in one molecule, and also compared to the compound that connects the drug precursor to a known multi-arm PEG. It is known to have advantages such as reducing fluidity and loss of drug precursors in the human body. In another example, the multi-armed, monofunctional polymer disclosed in US Pat. No. 5,932,462 has a similar form. The compound is based on nuclear molecules, and lysine with three attachable sites is adopted as the nuclear molecule. These three attachable moieties are two amine groups and one acid group, in which two amine groups are attached with PEG and one acid group on the other side is followed by a succinimide group and the like. New polymers have been developed that can covalently bind to targets such as proteins or polypeptides. As a clinical application, it is marketed as a hepatitis C treatment drug called Pegasis (PegaSys) in the form of a combination of PEG derivative with lysine as a nuclear molecule and interferon-α (alpha). Compared with the study results, it showed excellent clinical effects such as longer residence time and improved antivirality ( J. Control. Rel . 72 , pp217-224, 2001).

본 발명에서는 새로운 형태의 다중암, 단일반응성의 고분자(monofunctional polymer)를 개발하기 위하여 일반적인 아미노산, 바람직하게는 아스파르트산 (aspartic acid) 또는 글루타민 산(glutamic acid)을 핵분자로 채택하여 이 핵이 가지는 두개의 산기에 PEG를 부착하고 연이어 반대편 한 개의 아민기에 활성기를 부착하는 새로운 형태의 Y-PEG을 합성하여 본 발명을 완성하였다.  In the present invention, in order to develop a new type of multi-cancer, monofunctional polymer, a common amino acid, preferably aspartic acid or glutamic acid, is adopted as a nuclear molecule. The present invention was completed by synthesizing a new form of Y-PEG, which attaches PEG to two acid groups followed by attaching an active group to the opposite amine group.

본 발명의 목적은, 기존의 PEG 부착형태와는 다른 두 개의 산기에 PEG를 부착하고 한 개의 아민기에 반응기를 부착하는 새로운 형태로, 아민기로서 화학구조식이 시작되는 말레이미드(maleimide)기, 니트로페닐 카보네이트(nitrophenyl carbonate)기, 이소시아네이트(isocyanate)기 등의 반응기의 합성에 절대적으로 유리함을 특징으로 하는 신규한 구조의 Y-PEG 유도체를 제공하는 것이다.
An object of the present invention is a novel form of attaching PEG to two acid groups different from the conventional PEG attachment form and attaching a reactor to one amine group, a maleimide group in which a chemical structure starts as an amine group, nitro It is to provide a Y-PEG derivative having a novel structure characterized in that the absolute advantage in the synthesis of the reactor, such as phenyl carbonate (nitrophenyl carbonate) group, isocyanate group.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 세 개의 결합부위를 가진 핵분자(core)를 기반으로 하여, 두 개의 산기에는 PEG를 부착하고 나머지 한 개의 아민기에는 반응기를 부착하는 Y자 형태의 Y-PEG 유도체를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention is based on a nuclear molecule having three binding sites (core), Y-shaped Y- to attach a PEG to the two acid groups and a reactor to the other amine group Provides PEG derivatives.

상기 핵분자는 아스파르트 산(aspartic acid) 또는 글루타민 산(glutamic acid)인 Y자 형태의 Y-PEG 유도체를 제공한다.The nuclear molecule provides a Y-PEG derivative in the form of a Y which is aspartic acid or glutamic acid.

또한, 반응기는 말레이미드(maleimide), 파라-니트로페닐 카보네이트(p-nitrophenyl carbonate), 이소시아네이트(isocyanate)인 Y자 형태의 Y-PEG 유도체를 제공한다.The reactor also provides Y-PEG derivatives in the Y-shape which are maleimide, p-nitrophenyl carbonate, isocyanate.

상세하게는, 본 발명은 신규한 생체적합성 고분자인 하기 일반식 (Ⅰ)의 화학구조를 갖는 L-아스파르틱(Aspartic)-Y-PEG 화합물을 제공한다.Specifically, the present invention provides a L-Aspartic-Y-PEG compound having a chemical structure of the following general formula (I), which is a novel biocompatible polymer.

Figure 112003029394318-pat00001
(Ⅰ)
Figure 112003029394318-pat00001
(Ⅰ)

또한, 본 발명은 신규한 생체적합성 고분자인 하기 일반식 (Ⅱ)의 화학구조를 갖는 L-아스파르틱-Y-PEG-말레이미드 화합물을 제공한다. The present invention also provides a L-aspartic-Y-PEG-maleimide compound having a chemical structure of the following general formula (II), which is a novel biocompatible polymer.

Figure 112003029394318-pat00002
(Ⅱ)
Figure 112003029394318-pat00002
(Ⅱ)

또한, 본 발명은 신규한 생체적합성 고분자인 하기 일반식 (Ⅲ)의 화학구조 를 갖는 L-아스파르틱-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트 화합물을 제공한다. The present invention also provides a L-aspartic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate compound having a chemical structure of the following general formula (III), which is a novel biocompatible polymer.

Figure 112003029394318-pat00003
(Ⅲ)
Figure 112003029394318-pat00003
(Ⅲ)

또한, 본 발명은 신규한 생체적합성 고분자인 하기 일반식 (Ⅳ)의 화학구조를 갖는 L-아스파르틱-Y-PEG-이소시아네이트 화합물을 제공한다. The present invention also provides a L-aspartic-Y-PEG-isocyanate compound having a chemical structure of the following general formula (IV), which is a novel biocompatible polymer.

Figure 112003029394318-pat00004
(Ⅳ)
Figure 112003029394318-pat00004
(Ⅳ)

또한, 본 발명은 신규한 생체적합성 고분자인 하기 일반식 (Ⅴ)의 화학구조를 갖는 L-글루타믹(Glutamic)-Y-PEG 화합물을 제공한다. The present invention also provides a L-glutamic-Y-PEG compound having a chemical structure of the general formula (V) below which is a novel biocompatible polymer.

Figure 112003029394318-pat00005
(Ⅴ)
Figure 112003029394318-pat00005
(Ⅴ)

또한, 본 발명은 신규한 생체적합성 고분자인 하기 일반식 (Ⅵ)의 화학구조를 갖는 L-글루타믹-Y-PEG-말레이미드 화합물을 제공한다. The present invention also provides a L-glutamic-Y-PEG-maleimide compound having a chemical structure of the following general formula (VI) which is a novel biocompatible polymer.

Figure 112003029394318-pat00006
(Ⅵ)
Figure 112003029394318-pat00006
(Ⅵ)

또한, 본 발명은 신규한 생체적합성 고분자인 하기 일반식 (Ⅶ)의 화학구조를 갖는 L-글루타믹-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트 화합물을 제공한다. The present invention also provides an L-glutamic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate compound having a chemical structure of the following general formula (VII), which is a novel biocompatible polymer.

Figure 112003029394318-pat00007
(Ⅶ)
Figure 112003029394318-pat00007
(Ⅶ)

또한, 본 발명은 신규한 생체적합성 고분자인 하기 일반식 (Ⅷ)의 화학구조를 갖는 L-글루타믹-Y-PEG-이소시아네이트 화합물을 제공한다. The present invention also provides an L-glutamic-Y-PEG-isocyanate compound having a chemical structure of the following general formula (VII), which is a novel biocompatible polymer.

Figure 112003029394318-pat00008
(Ⅷ)
Figure 112003029394318-pat00008
(Ⅷ)

또한, 본 발명은 생체적합성 고분자인 상기 일반식(Ⅰ)의 L-아스파르틱-Y-PEG 화합물을 제조하는 방법에 있어서, N-Boc-L-아스파르트 산(Aspartic acid)에 mPEG-아민을 1-[3-(디메틸아미노)프로필-3-에틸카보디이미드 히드로클로라이드(1- [3-(dimethylamino)propyl-3-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDC)로 처리하여 유기용매 하에 반응시켜 두개의 mPEG을 연결시킨 후, 이 유도체를 탈보호화 반응화제(deprotection)로 처리함으로써 보호기(Boc)를 제거하여 상기 일반식(Ⅰ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention is a method for producing a L- aspartic-Y-PEG compound of the general formula (I) which is a biocompatible polymer, m-PEG-amine to N-Boc-L- aspartic acid (aspartic acid) Treated with 1- [3- (dimethylamino) propyl-3-ethylcarbodiimide hydrochloride (1- [3- (dimethylamino) propyl-3-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDC) to react under organic solvent to link two mPEGs After this, the derivative is treated with a deprotection deactivation to remove the protecting group (Boc) to provide the above-mentioned general formula (I) polymer compound.

또한, 본 발명은 상기 일반식(Ⅱ)의 L-아스파르틱-Y-PEG-말레이미드 중합체 화합물을 제조하는 방법에 있어서, 상기 일반식(Ⅰ)에 말레산 무수물(maleic anhydride) 및 펜타플루오로페닐 트리플루오로아세테이트(pentafluoro phenyl trifluoroacetate)와 같은 반응화제를 유기용매 존재 하에 반응시킴으로써 상기 일반식(Ⅱ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for preparing the L-aspartic-Y-PEG-maleimide polymer compound of the general formula (II), wherein maleic anhydride and pentafluor in the general formula (I) Provided is a preparation method characterized in that the above general formula (II) polymer compound is prepared by reacting a reactant such as penafluoro phenyl trifluoroacetate in the presence of an organic solvent.

또한, 본 발명은 상기 일반식(Ⅲ)의 L-아스파르틱-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트 중합체 화합물을 제조하는 방법에 있어서, 상기 일반식(Ⅰ)에 파라-니트로페닐 클로로포메이트(p-nitrophenyl chloroformate)와 같은 반응화제를 염기 및 유기용매 존재 하에 반응시킴으로써 상기 일반식(Ⅲ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법을 제공한다.The present invention also provides a method for producing the L-aspartic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate polymer compound of the general formula (III), wherein in the general formula (I), para-nitrophenyl chloroformate (p) It provides a general formula (III) polymer compound by the reaction of a reaction agent such as -nitrophenyl chloroformate) in the presence of a base and an organic solvent.

또한, 본 발명은 상기 일반식(Ⅳ)의 L-아스파르틱-Y-PEG-이소시아네이트 중합체 화합물을 제조하는 방법에 있어서, 상기 일반식(Ⅰ)에 트라이포스겐 (triphosgene)과 같은 반응화제를 염기 및 유기용매 존재 하에 반응시킴으로써 상 기 일반식(Ⅳ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for preparing the L-aspartic-Y-PEG-isocyanate polymer compound of the general formula (IV), the general formula (I) is a base of a reactive agent such as triphosgene (triphosgene) And it provides a production method characterized in that to prepare the general formula (IV) polymer compound by reacting in the presence of an organic solvent.

또한, 본 발명은 생체적합성 고분자인 상기 일반식(Ⅴ)의 L-글루타믹-Y-PEG화합물을 제조하는 방법에 있어서, N-Boc-L-글루타민 산(Glutamic acid)에 mPEG-아민을 EDC로 처리하여 유기용매 하에 반응시키고 이 유도체를 탈보호화 반응화제로 처리함으로써 보호기(Boc)를 제거하여 상기 일반식(Ⅴ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention is a method for producing a L- glutamic-Y-PEG compound of the general formula (V) as a biocompatible polymer, mPEG-amine to N-Boc-L- glutamic acid (Glutamic acid) It is treated with an EDC to react in an organic solvent and the derivative is treated with a deprotection reaction agent to remove the protecting group (Boc) to provide the above general formula (V) polymer compound.

또한, 본 발명은 상기 일반식(Ⅵ)의 L-글루타믹-Y-PEG-말레이미드 중합체 화합물을 제조하는 방법에 있어서, 상기 일반식(Ⅴ)에 말레산 무수물(maleic anhydride) 및 펜타플루오로페닐 트리플루오로아세테이트(pentafluoro phenyl trifluoroacetate)와 같은 반응화제를 유기용매 존재하에 반응시킴으로써 상기 일반식(Ⅵ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for preparing the L- glutamic-Y-PEG- maleimide polymer compound of the general formula (VI), maleic anhydride and pentafluor in the general formula (V) Provided is a process for preparing the above general formula (VI) polymer compound by reacting a reaction agent such as penafluoro phenyl trifluoroacetate in the presence of an organic solvent.

또한, 본 발명은 상기 일반식(Ⅶ)의 L-글루타믹-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트 중합체 화합물을 제조하는 방법에 있어서, 상기 일반식(Ⅴ)에 파라-니트로페닐 클로로포메이트(p-nitrophenyl chloroformate)와 같은 반응화제를 염기 및 유기용매 존재하에 반응시킴으로써 상기 일반식(Ⅶ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법을 제공한다.The present invention also provides a method for producing the L-glutamic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate polymer compound of the general formula (VII), wherein para-nitrophenyl chloroformate (p) It provides a preparation method characterized in that the general polymer compound is prepared by reacting a reactant such as -nitrophenyl chloroformate) in the presence of a base and an organic solvent.

또한, 본 발명은 상기 일반식(Ⅷ)의 L-글루타믹-Y-PEG-이소시아네이트 중합체 화합물을 제조하는 방법에 있어서, 상기 일반식(Ⅴ)에 트라이포스겐 (triphosgene)과 같은 반응화제를 염기 및 유기용매 존재하에 반응시킴으로써 상기 일반식(Ⅷ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention is a method for producing the L- glutamic-Y-PEG-isocyanate polymer compound of the general formula (VII), wherein in the general formula (V) a reactive agent such as triphosgene (triphosgene) And it provides a production method characterized in that the general formula (V) polymer compound is prepared by reacting in the presence of an organic solvent.

이하 본 발명의 제조방법을 구체적으로 기재한다.Hereinafter, the manufacturing method of the present invention will be described in detail.

본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위하여, 예를 들어, 하기의 반응식 1 내지 8에 도시 된 방법에 의하여 생체적합성 고분자인 일반식(Ⅰ) 내지 일반식(VIII)을 제조할 수 있으며, 하기 반응식들은 본 발명을 설명하기 위해 도시한 것이지, 본 발명의 범위를 제한하거나 한정하고자 함이 아니다. In order to explain the present invention in more detail, for example, the biocompatible polymers of general formula (I) to general formula (VIII) may be prepared by the method shown in Schemes 1 to 8 below. It is shown to illustrate the invention, but is not intended to limit or limit the scope of the invention.

예를 들어, 본 발명의 일반식(Ⅰ)의 L-아스파르틱-Y-PEG는 하기 반응식 1에 기재된 바와 같은 제조방법에 의해 제조될 수 있다.For example, L-aspartic-Y-PEG of the general formula (I) of the present invention can be prepared by a preparation method as described in Scheme 1 below.

Figure 112003029394318-pat00009
Figure 112003029394318-pat00009

상기의 반응식에 기재된 바와 같이, 본 발명은 N-Boc-L-아스파르트 산(I-b)에 반응화제로 mPEG-아민(mPEG-NH2), EDC 및 1-히드록시벤조트리아졸(HOBt)과 같은 커플링 시약(coupling reagent)를 넣고 DMF(Dimethylformamide)을 유기용매로 사용하여 N-Boc-L-아스파르틱-Y-PEG을 제조하는 1단계, 이 합성된 화합물(Ⅰ-a)에 탈보호화 반응화제를 메탄올을 유기용매로 사용하여 L-아스파르틱-Y-PEG를 얻는 제 2단계의 합성방법을 포함하는 제조 방법을 제공한다. As described in the above scheme, the present invention is a reaction agent to N-Boc-L-aspartic acid (Ib) such as mPEG-amine (mPEG-NH 2 ), EDC and 1-hydroxybenzotriazole (HOBt). Step 1 to prepare N-Boc-L-aspartic-Y-PEG using a coupling reagent and using dimethylformamide (DMF) as an organic solvent, deprotection to the synthesized compound (I-a). It provides a manufacturing method comprising the second step of the synthesis method of obtaining L-aspartic-Y-PEG using methanol as an organic solvent.

이와 같은 방법으로 얻은 혼합물은 이온교환크로마토그래피(ion exchange chromatography) 또는 크기배제 크로마토그래피 (size exclusion chromatography)를 이용하여 분리 정제한다. The mixture obtained in this manner is separated and purified using ion exchange chromatography or size exclusion chromatography.

본 발명의 일반식 (Ⅱ)의 L-아스파르틱-Y-PEG-말레이미드 화합물은 하기 반응식 2에 기재된 바와 같은 제조방법에 의해 제조될 수 있다.The L-aspartic-Y-PEG-maleimide compound of the general formula (II) of the present invention can be prepared by a preparation method as described in Scheme 2 below.

Figure 112003029394318-pat00010
Figure 112003029394318-pat00010

상기의 반응식에 기재된 바와 같이, 본 발명은 L-아스파르틱-Y-PEG(Ⅰ)에 반응화제로 말레산 무수물(maleic anhydride)을 사용하고 유기용매로 N,N-디메틸아세트아미드(DMAC, N,N-dimethylacetamide) 및 N-사이클로헥실피롤리디논(CHP, N-cyclopyrolidinone)의 혼합용매를 사용하여 L-아스파르트 산-Y-PEG-말레아민 산(maleamic acid) 화합물(Ⅱ-a)을 얻는 제 1단계, 이 합성된 화합물(Ⅱ-a)에 반응화제로서 펜타플루오로페닐 트리플루오로아세테이트(pentafluorophenyl trifluoro acetate) 등과 같은 반응화제를 첨가하고 DIEA(N,N-diisopropylethylamine)와 같은 염기촉매 하에서 디클로메탄과 DMF의 혼합용매를 사용하여, 본 발명의 L-아스파르틱-Y-PEG-말레이미드 유도체(Ⅱ)를 얻는 제 2단계의 합성방법을 포함하는 제조방법을 제공한다.As described in the above scheme, the present invention uses maleic anhydride as a reaction agent to L-aspartic-Y-PEG (I) and N, N-dimethylacetamide (DMAC, L-aspartic acid-Y-PEG-maleamic acid compound (II-a) was prepared using a mixed solvent of N, N-dimethylacetamide) and N-cyclohexylpyrrolidinone (CHP, N-cyclopyrolidinone). In the first step obtained, a synthesized compound (II-a) was added with a reactant such as pentafluorophenyl trifluoro acetate as a reactant and a base catalyst such as DIEA (N, N-diisopropylethylamine). The following provides a method for preparing a compound comprising a second step of obtaining the L-aspartic-Y-PEG-maleimide derivative (II) of the present invention using a mixed solvent of dichloromethane and DMF.

본 발명의 일반식 (III)의 L-아스파르틱-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트 화합물은 하기 반응식 3에 기재된 바와 같은 제조방법에 의해 제조될 수 있다.The L-aspartic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate compound of the general formula (III) of the present invention can be prepared by a preparation method as described in Scheme 3 below.

Figure 112003029394318-pat00011
Figure 112003029394318-pat00011

상기의 반응식에 기재된 바와 같이, 본 발명은 L-아스파르틱-Y-PEG(Ⅰ)에 반응화제로 파라-니트로페닐 클로로포메이트(p-nitrophenyl chloroformate)를 사용하 고 TEA(triethylamine)와 같은 염기촉매 하에서 유기용매로 메틸렌 클로라이드를 사용하여 L-아스파르틱-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트 (III)를 얻는 합성방법을 포함하는 제조방법을 제공한다.As described in the above scheme, the present invention uses p-nitrophenyl chloroformate as a reactive agent to L-aspartic-Y-PEG (I), Provided is a preparation method including a synthesis method of obtaining L-aspartic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate (III) using methylene chloride as an organic solvent under a base catalyst.

본 발명의 일반식(Ⅳ)의 L-아스파르틱-PEG-이소시아네이트 화합물은 하기 반응식 4에 기재된 바와 같은 제조방법에 의해 제조될 수 있다.The L-aspartic-PEG-isocyanate compound of the general formula (IV) of the present invention can be prepared by a preparation method as described in Scheme 4 below.

Figure 112003029394318-pat00012
Figure 112003029394318-pat00012

상기의 반응식에 기재된 바와 같이, 본 발명은 L-아스파르틱-Y-PEG(Ⅰ)에 반응화제로 트라이포스겐을 사용하고 TEA와 같은 염기촉매 하에서 유기용매로 메틸렌 클로라이드를 사용하여 L-아스파르틱-Y-PEG-이소시아네이트 (IV)를 얻는 합성방법을 포함하는 제조방법을 제공한다.As described in the above scheme, the present invention uses L-aspartic acid using triphosgene as a reactive agent to L-aspartic-Y-PEG (I) and methylene chloride as an organic solvent under a base catalyst such as TEA. There is provided a production method including a synthesis method for obtaining tic-Y-PEG-isocyanate (IV).

예를 들어, 본 발명의 일반식(V)의 L-글루타믹-Y-PEG는 하기 반응식 5에 기재된 바와 같은 제조방법에 의해 제조될 수 있다.For example, L-glutamic-Y-PEG of the general formula (V) of the present invention may be prepared by a preparation method as described in Scheme 5 below.

Figure 112003029394318-pat00013
Figure 112003029394318-pat00013

상기의 반응식에 기재된 바와 같이, 본 발명은 N-Boc-L-글루타민 산(V-b)에 반응화제로 mPEG-아민, EDC 및 1-히드록시벤조트리아졸(HOBt)와 같은 커플링 시약를 넣고 DMF을 유기용매로 사용하여 N-Boc-L-글루타믹-Y-PEG을 제조하는 1단계, 이 합성된 화합물(V-a)에 탈보호화 반응화제를 메탄올을 유기용매로 사용하여 L-글루타믹-Y-PEG (V)를 얻는 제 2단계의 합성방법을 포함하는 제조 방법을 제공한다. As described in the above scheme, the present invention adds coupling reagents such as mPEG-amine, EDC and 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) to N-Boc-L-glutamic acid (Vb) as a reactive agent. Step 1 to prepare N-Boc-L-glutamic-Y-PEG using an organic solvent, L-glutamic- using a deprotection reaction agent for the synthesized compound (Va) as methanol as an organic solvent It provides a manufacturing method comprising a second step of the synthesis method to obtain Y-PEG (V).

이와 같은 방법으로 얻은 혼합물은 이온교환 크로마토그래피 또는 크기배제 크로마토그래피를 이용하여 분리 정제한다. The mixture obtained in this manner is separated and purified using ion exchange chromatography or size exclusion chromatography.

본 발명의 일반식 (VI)의 L-글루타믹-Y-PEG-말레이미드 화합물은 하기 반응식 6에 기재된 바와 같은 제조방법에 의해 제조될 수 있다.The L-glutamic-Y-PEG-maleimide compound of the general formula (VI) of the present invention can be prepared by a preparation method as described in Scheme 6 below.

Figure 112003029394318-pat00014
Figure 112003029394318-pat00014

상기의 반응식에 기재된 바와 같이, 본 발명은 L-글루타믹-Y-PEG (V)에 반응화제로 말레산 무수물(maleic anhydride)을 사용하고 유기용매로 N,N-디메틸아세트아미드 및 N-사이클로헥실피롤리디논의 혼합용매를 사용하여 L-글루타민 산-Y-PEG-말레아민 산(VI-a)를 얻는 제 1단계, 이 합성된 화합물(VI-a)에 반응화제로서 펜타플루오로페닐 트리플루오로아세테이트 등과 같은 반응화제를 첨가하고 DIEA와 같은 염기촉매 하에서 디클로메탄 및 DMF의 혼합용매를 사용하여 본 발명의 L-글루타믹-Y-PEG-말레이미드 유도체(VI)를 얻는 제 2단계의 합성방법을 포함하는 제조방법을 제공한다.As described in the above reaction scheme, the present invention uses maleic anhydride as a reactive agent in L-glutamic-Y-PEG (V) and N, N-dimethylacetamide and N- as an organic solvent. First step to obtain L-glutamic acid-Y-PEG-maleamic acid (VI-a) using a mixed solvent of cyclohexylpyrrolidinone, pentafluoro as a reactive agent to the synthesized compound (VI-a) L-glutamic-Y-PEG-maleimide derivative (VI) of the present invention was obtained by adding a reactive agent such as phenyl trifluoroacetate and the like and using a mixed solvent of dichloromethane and DMF under a base catalyst such as DIEA. It provides a manufacturing method comprising the synthesis method of the second step.

본 발명의 일반식 (VII)의 L-글루타믹-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트 화합물은 하기 반응식 7에 기재된 바와 같은 제조방법에 의해 제조될 수 있다.The L-glutamic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate compound of the general formula (VII) of the present invention can be prepared by a preparation method as described in Scheme 7 below.

Figure 112003029394318-pat00015
Figure 112003029394318-pat00015

상기의 반응식에 기재된 바와 같이, 본 발명은 L-글루타믹-Y-PEG (V)에 반응화제로 파라-니트로페닐 클로로포메이트를 사용하고 TEA와 같은 염기촉매 하에서 유기용매로 메틸렌 클로라이드를 사용하여 L-글루타믹-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트 (VII)를 얻는 합성방법을 포함하는 제조방법을 제공한다.As described in the above reaction scheme, the present invention uses para-nitrophenyl chloroformate as a reactive agent to L-glutamic-Y-PEG (V) and methylene chloride as an organic solvent under a base catalyst such as TEA. To provide L-glutamic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate (VII).

본 발명의 일반식 (VIII)의 L-글루타믹-Y-PEG-이소시아네이트 화합물은 하기 반응식 8에 기재된 바와 같은 제조방법에 의해 제조될 수 있다.The L-glutamic-Y-PEG-isocyanate compound of the general formula (VIII) of the present invention can be prepared by a preparation method as described in Scheme 8 below.

Figure 112003029394318-pat00016
Figure 112003029394318-pat00016

상기의 반응식에 기재된 바와 같이, 본 발명은 L-글루타믹-Y-PEG (V)에 반응화제로 트라이포스겐을 사용하고 TEA와 같은 염기촉매 하에서 유기용매로 메틸렌 클로라이드를 사용하여 L-글루타믹-Y-PEG-이소시아네이트 (VIII)를 얻는 합성방법 을 포함하는 제조방법을 제공한다.As described in the above scheme, the present invention uses L-gluta using L-glutamic-Y-PEG (V) as a reagent and using methylene chloride as an organic solvent under a base catalyst such as TEA. There is provided a production method including a synthesis method for obtaining Mic-Y-PEG-isocyanate (VIII).

상기한 본 발명의 제조방법으로 제조될 수 있는 중합체는 에틸렌 글리콜을 기본으로 하는 Y-PEG로서 그 분자량이 100내지 1,000,000 좀더 바람직하게는 약 1000 내지 100,000 달톤(Dalton)인 중합체를 포함한다.Polymers that can be prepared by the process of the present invention described above include Y-PEG based on ethylene glycol, the polymer having a molecular weight of 100 to 1,000,000 more preferably about 1000 to 100,000 Daltons (Dalton).

본 발명의 화합물 중, 말레이미드로 유도체화 된 일반식(Ⅱ) 화합물 및 일반식 (Ⅵ) 화합물은 목표물 단백질의 아미노산 배열 중 시스테인(cysteine) 부위와 선택적 공유결합을 형성하는 특징을 가지며 이러한 성질을 이용한 항체의 자유 시스테인(free cystein)과의 결합, 다당류의 특정 도메인과의 선택적 결합, 기타 설프하이드릴(sulfhydryl)기를 포함하는 화합물과의 결합 등에 유용하게 사용할 수 있다. Among the compounds of the present invention, the general formula (II) compound and the general formula (VI) compound derivatized with maleimide have the characteristic of forming a selective covalent bond with a cysteine site in the amino acid sequence of the target protein and having such properties. It can be usefully used for binding the used antibody to free cysteine, selective binding of a polysaccharide to a specific domain, and binding to a compound containing other sulfhydryl groups.

또한, 니트로페닐 카보네이트(nitrophenyl carbonate)로 유도체화 된 일반식 (Ⅲ) 화합물 및 일반식 (Ⅶ) 화합물, 그리고 이소시아네이트(isocyanate)로 유도체화 된 일반식(Ⅳ) 화합물 및 일반식 (Ⅷ) 화합물은 단백질의 N-말단기와의 결합, 다당류의 특정 도메인과의 결합 등 목표물의 선택적 부위와의 결합, 또는 반응 조건에 따라 기타 아민(amine)기, 히드록실(hydroxyl)기, 알데히드(aldehyde)기, 카르복실(carboxyl)기 등을 포함하는 목표물과의 비선택적 결합 등에 유용하게 사용할 수 있다. In addition, general formula (III) compounds and general formula (VIII) compounds derivatized with nitrophenyl carbonate, and general formula (IV) compounds and general formula (VIII) compounds derivatized with isocyanates Binding to selective sites of the target, such as binding to N-terminal groups of proteins, specific domains of polysaccharides, or other amine groups, hydroxyl groups, aldehyde groups, It can be usefully used for non-selective coupling with the target object containing a carboxyl group, etc.

본 발명은 하기의 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명되나, 본 발명이 하기의 실시예에 의해 제한되지는 않는다.The invention is explained in more detail based on the following examples, but the invention is not limited by the following examples.

실시예 1. L-아스파르틱-Y-PEG(L-Aspartic-Y-PEG)의 제조Example 1 Preparation of L-Aspartic-Y-PEG

단계 1-1. N-Boc-L-아스파르틱-Y-PEG(N-Boc-L-Aspartic-Y-PEG)의 제조Step 1-1. Preparation of N-Boc-L-Aspartic-Y-PEG (N-Boc-L-Aspartic-Y-PEG)

출발물질로 메톡시 폴리에틸렌글리콜-아민(mPEG-amine) (0.75mM, MW=20,000) 15g 및 N-(3급-부톡시카르보닐)-L-아스파르트 산(N-(tert- butoxycarbonyl)-L-aspartic acid, 0.375M) 84mg를 DMF 100ml에 녹인 후, EDC(0.0075M) 1.43g 및 1-히드로벤조트리아졸(HOBt, 0.0075M) 1.15g를 각각 첨가하여 실온에서 4일 동안 교반하였다. 반응이 끝난 후, 반응 혼합물을 에틸에테르로 침전시켜 여과, 건조하여 하기 물성치를 갖는 고체상태의 N-Boc-L-아스파르틱-Y-PEG 화합물 14g을 수득하였다.15 g of methoxy polyethylene glycol-amine (mPEG-amine) (0.75 mM, MW = 20,000) and N- (tert-butoxycarbonyl) -L-aspartic acid (N- (tert-butoxycarbonyl) -L as starting materials 84 mg of -aspartic acid, 0.375 M) was dissolved in 100 ml of DMF, followed by addition of 1.43 g of EDC (0.0075 M) and 1.15 g of 1-hydrobenzotriazole (HOBt, 0.0075 M), respectively, and the mixture was stirred at room temperature for 4 days. After the reaction was completed, the reaction mixture was precipitated with ethyl ether, filtered and dried to obtain 14 g of a solid N-Boc-L-aspartic-Y-PEG compound having the following physical properties.

1H-NMR (CDCl3) δ: 4.25 ppm (t, 1H, mPEG-NHCOCH2 CH), 3.65 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH2-), 3.38 ppm (s, 6H, OCH3), 2.03 ppm (t, 2H, mPEG-NHCOCH 2CH), 1.45 ppm (s, 9H, NHCOOC(CH 3 )) 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ: 4.25 ppm (t, 1H, mPEG-NHCOCH 2 CH ), 3.65 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH 2- ), 3.38 ppm (s, 6H, OCH 3 ) , 2.03 ppm (t, 2H, mPEG-NHCO CH 2 CH), 1.45 ppm (s, 9H, NHCOOC ( CH 3 ))

단계 1-2. L-아스파르틱-Y-PEG(L-Aspartic-Y-PEG)의 제조Step 1-2. Preparation of L-Aspartic-Y-PEG

둥근바닥 플라스크에 메탄올 10ml를 넣고, 0℃로 냉각한 다음 아세틸 클로라이드 30ml를 천천히 가하여 30분간 교반한 후, 메탄올 30ml에 실시예 1-1 단계에서 얻은 N-Boc-L-아스파르틱-Y-PEG(0.35mM) 14g을 희석한 용액을 천천히 가하여 30분간 교반 한 다음, 상온에서 2시간 동안 다시 교반하였다. 반응이 끝난 후, 반응 혼 합물을 메틸렌 클로라이드로 추출하여 유기층을 무수 황산마그네슘(MgSO4)으로 건조하고 감압 농축하였다. 농축물을 에틸에테르로 침전시키고, 걸러낸 고체는 건조하여 아스파라긴산(L-aspartic acid)을 핵분자(core)로 하여 하기 물성치를 갖는 L-아스파르틱-Y-PEG 화합물 13.5g을 수득하였다.10 ml of methanol was added to a round bottom flask, cooled to 0 ° C., and 30 ml of acetyl chloride was slowly added thereto, followed by stirring for 30 minutes. Then, N-Boc-L-aspartic-Y- obtained in Example 1-1 was added to 30 ml of methanol. A solution of 14 g of PEG (0.35 mM) was slowly added thereto, stirred for 30 minutes, and then stirred again at room temperature for 2 hours. After the reaction was completed, the reaction mixture was extracted with methylene chloride, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate (MgSO 4 ) and concentrated under reduced pressure. The concentrate was precipitated with ethyl ether, and the filtered solid was dried to give 13.5 g of L-aspartic-Y-PEG compound having the following physical properties using L-aspartic acid as a core molecule.

1H-NMR (CDCl3) δ: 3.65 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH2-), 3.38 ppm (s, 6H, OCH3) 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ: 3.65 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH 2- ), 3.38 ppm (s, 6H, OCH 3 )

실시예 2. L-아스파르틱-Y-PEG-말레이미드의 제조Example 2. Preparation of L-Aspartic-Y-PEG-maleimide

단계 2-1. L-아스파르틱-Y-PEG-말레아민 산(L-Aspartic-Y-PEG-maleamic acid)의 제조Step 2-1. Preparation of L-Aspartic-Y-PEG-maleamic acid

질소 풍선하에서 실시예 1에서 얻은 L-아스파르틱-Y-PEG (0.11mM, MW=40000) 4.5g를 N,N-디메틸아세트아미드(DMAC, 4ml/gPEG) 18ml 및 N-시클로헥실 피롤리돈 (CHP, 1ml/DMAC 5ml) 3.6ml 용매에 녹인 후, 말레산 무수물(maleic anhydride, 1.1mM) 0.1g을 적가하였다. 수분정량기(Dean-Stark trap set)를 설치하고 공존용매(cosolvent)로서 톨루엔을 사용하여, 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 끝난 후, 반응 혼합물을 에틸에테르로 침전시켜 여과한 다음 고체상태의 L-아스파르틱-Y-PEG-말레아민 산 화합물 4g을 수득하였다. 4.5 g of L-aspartic-Y-PEG (0.11 mM, MW = 40000) obtained in Example 1 under a nitrogen balloon was charged with 18 ml of N, N-dimethylacetamide (DMAC, 4 ml / gPEG) and N-cyclohexyl pyrroli After dissolving in 3.6 ml of solvent (CHP, 1 ml / DMAC 5 ml), 0.1 g of maleic anhydride (1.1 mM) was added dropwise. A water meter (Dean-Stark trap set) was installed and toluene was used as a cosolvent and stirred at 80 ° C. for 16 hours. After the reaction was completed, the reaction mixture was precipitated with ethyl ether, filtered, and 4g of a solid L-aspartic-Y-PEG-maleamic acid compound was obtained.

단계 2-2. L-아스파르틱-Y-PEG-말레이미드(L-Aspartic-Y-PEG-maleimide)의 제조Step 2-2. Preparation of L-Aspartic-Y-PEG-maleimide

상기 실시예 2-1 단계에서 얻은 L-아스파르틱-Y-PEG-말레아민 산(maleamic acid, 0.1mM) 4g을 메틸렌 클로라이드 및 DMF에 녹인 후, 0℃에서 DIEA 및 펜타플루오로페닐 트리플루오로아세테이트를 가하여 55℃에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 증류하여 디에틸에테르를 가하여 침전을 유도하고, 침전화합물을 감압 여과하였다. 여과물을 메틸렌 클로라이드 1L에 녹인 다음 활성탄(activated charcoal)을 넣고 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트 패드(celite pad)에 여과하여 활성탄을 제거하고 용매는 증류하여 제거한 후, 디에틸에테르를 가하여 침전을 유도하였다. 침전화합물은 감압 여과하여 하기 물성치를 갖는 L-아스파르틱-Y-PEG-말레이미드 화합물 3.5g을 수득하였다.4 g of L-aspartic-Y-PEG-maleamic acid (0.1 mM) obtained in step 2-1 was dissolved in methylene chloride and DMF, and then DIEA and pentafluorophenyl trifluoro at 0 ° C. Low acetate was added and stirred at 55 ° C. for 24 hours. The solvent was distilled off, diethyl ether was added to induce precipitation, and the precipitated compound was filtered under reduced pressure. The filtrate was dissolved in 1 L of methylene chloride and activated charcoal was added thereto, followed by stirring for 3 hours. The mixture was filtered through a celite pad to remove activated carbon and the solvent was distilled off, followed by addition of diethyl ether to induce precipitation. The precipitated compound was filtered under reduced pressure to obtain 3.5 g of L-aspartic-Y-PEG-maleimide compound having the following physical properties.

1H-NMR (CDCl3) δ: 6.37 ppm (s, 2H, 말레이미드), 3.65 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH2-), 3.38 ppm (s, 6H, OCH3) 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ: 6.37 ppm (s, 2H, maleimide), 3.65 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH 2- ), 3.38 ppm (s, 6H, OCH 3 )

실시예 3. L-아스파르틱-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트(L-Aspartic-Y-PEG-nitro phenyl carbonate)의 제조Example 3 Preparation of L-Aspartic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate

출발물질로 상기 실시예 1에서 얻은 L-아스파르틱-Y-PEG (0.11mM) 4.5g을 메틸렌 클로라이드에 녹이고 트리에틸아민(0.44mM) 0.044g을 0℃에서 천천히 적가한 후, p-니트로페닐 클로로포메이트(0.44mM) 0.088g을 적가하여 실온에서 하루 동안 반응시켰다. 반응이 끝난 후, 감압 증류하여 용매를 제거하고 글래스 필터를 이용하여 여과하였다. 농축된 반응 혼합물에 디에틸에테르를 첨가하여 침전을 유도한 다음, 감압 여과하여 하기 물성치를 갖는 L-아스파르틱-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트 화합물 3.5g을 수득하였다. As a starting material, 4.5 g of L-aspartic-Y-PEG (0.11 mM) obtained in Example 1 was dissolved in methylene chloride and 0.044 g of triethylamine (0.44 mM) was slowly added dropwise at 0 ° C., followed by p-nitro 0.088 g of phenyl chloroformate (0.44 mM) was added dropwise to react for one day at room temperature. After the reaction was completed, the mixture was distilled under reduced pressure to remove the solvent, and the resultant was filtered using a glass filter. Diethyl ether was added to the concentrated reaction mixture to induce precipitation, followed by filtration under reduced pressure to obtain 3.5 g of L-aspartic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate compound having the following physical properties.

1H-NMR (CDCl3) δ: 8.29 ppm (d, 2H, aromatic), 7.40 ppm (d, 2H, aromatic), 4.45 ppm (t, 1H, mPEG-NHCOCH2 CH), 3.64 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH2-), 3.38 ppm (s, 6H, OCH3), 2.04 ppm (t, 2H, mPEG-NHCOCH 2CH) 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ: 8.29 ppm (d, 2H, aromatic), 7.40 ppm (d, 2H, aromatic), 4.45 ppm (t, 1H, mPEG-NHCOCH 2 CH ), 3.64 ppm (s, 3636H , PEG backbone, -OCH 2- ), 3.38 ppm (s, 6H, OCH 3 ), 2.04 ppm (t, 2H, mPEG-NHCO CH 2 CH)

실시예 4. L-아스파르틱-Y-PEG-이소시아네이트(L-Aspartic-Y-PEG-iso cyanate)의 제조 Example 4 Preparation of L-Aspartic-Y-PEG-Isocyanate

출발물질로 상기 실시예 1에서 얻은 L-아스파르틱-Y-PEG(0.11mM) 4.5g을 진공감압하여 건조한 후, 증류로 정제한 무수 메틸렌 클로라이드에 녹였다. 질소 가스하에 트리에틸아민(1.76mM) 0.176g을 가하여 30분간 교반한 다음, 트라이포스겐 (1.32mM) 0.39g을 가하여 다시 3시간 이상 환류, 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 식힌 후, 질소 가스를 15분 이상 넣어주면서 남아있는 포스겐 가스를 제거하였다. 반응혼합물을 감압 여과하여 트리에틸아민염을 제거하고 다시 감압 증류하여 용매를 농축한 다음, 디에틸에테르를 가하여 침전을 유도한 후, 감압 여과를 수행하여 하기 물성치를 갖는 L-아스파르틱-Y-PEG-이소시아네이트 화합물을 3.5g 수득하였다. 4.5 g of L-aspartic-Y-PEG (0.11 mM) obtained in Example 1 was dried under reduced pressure as a starting material, and then dissolved in anhydrous methylene chloride purified by distillation. 0.176 g of triethylamine (1.76 mM) was added and stirred for 30 minutes under nitrogen gas. Then, 0.39 g of triphosgene (1.32 mM) was added thereto, and the mixture was further refluxed and stirred for 3 hours or more. After the reaction mixture was cooled to room temperature, the remaining phosgene gas was removed while adding nitrogen gas for at least 15 minutes. The reaction mixture was filtered under reduced pressure to remove triethylamine salt, distilled under reduced pressure, and the solvent was concentrated. Then, diethyl ether was added to induce precipitation, and the resultant was filtered under reduced pressure to give L-aspartic-Y having the following physical properties. 3.5 g of -PEG-isocyanate compound was obtained.

1H-NMR (CDCl3) δ: 3.64 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH2-), 3.40 ppm (t, 2H, -CH2-이소시아네이트), 3.37 ppm (s, 6H, OCH3) 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ: 3.64 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH 2- ), 3.40 ppm (t, 2H, -CH 2 -isocyanate), 3.37 ppm (s, 6H, OCH 3 )

실시예 5. L-글루타믹-Y-PEG의 제조Example 5 Preparation of L-Glutamic-Y-PEG

5-1. N-Boc-L-글루타믹-Y-PEG(N-Boc-L- Glutamic-Y-PEG)의 제조5-1. Preparation of N-Boc-L-Glutamic-Y-PEG (N-Boc-L- Glutamic-Y-PEG)

출발물질로 메톡시 폴리에틸렌글리콜(mPEG-amine, 0.7mM, mw=20,000) 14g 및 N-(3급-부톡시카르보닐)-L-글루타민 산(N-(tert-butoxycarbonyl)-L-glutamic acid, 0.35mM) 86mg를 DMF 100ml에 녹인 후, EDC(0.007M) 1.34g 및 1-히드록시벤조트리아졸(0.007M) 1.06g를 각각 가하여 실온에서 4일 동안 교반하였다. 반응이 끝난 후, 반응 혼합물을 에틸에테르로 침전시켜 걸러낸 다음 건조하여, 하기 물성치를 갖는 고체상태의 N-Boc-L-글루타믹-Y-PEG 화합물 13g을 수득하였다.14 g of methoxy polyethylene glycol (mPEG-amine, 0.7 mM, mw = 20,000) and N- (tert-butoxycarbonyl) -L-glutamic acid (N- (tert-butoxycarbonyl) -L-glutamic acid as starting materials , 0.35 mM) 86 mg was dissolved in 100 ml of DMF, and then 1.34 g of EDC (0.007 M) and 1.06 g of 1-hydroxybenzotriazole (0.007 M) were added thereto, followed by stirring at room temperature for 4 days. After the reaction was completed, the reaction mixture was precipitated with ethyl ether, filtered and dried to obtain 13 g of a solid N-Boc-L-glutamic-Y-PEG compound having the following physical properties.

1H-NMR (CDCl3) δ: 4.31 ppm(t, 1H, mPEG-NHCOCH2 CH), 3.64 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH2-), 3.38 ppm (s, 6H, OCH3), 2.04 ppm(d, 4H, mPEG-NHCOCH 2 CH 2 CH), 1.43 ppm (s, 9H, NHCOOC(CH 3 )) 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ: 4.31 ppm (t, 1H, mPEG-NHCOCH 2 CH ), 3.64 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH 2- ), 3.38 ppm (s, 6H, OCH 3 ) , 2.04 ppm (d, 4H, mPEG-NHCO CH 2 CH 2 CH), 1.43 ppm (s, 9H, NHCOOC ( CH 3 ))

5-2. L-글루타믹-Y-PEG(L-Glutamic-Y-PEG)의 제조5-2. Preparation of L-Glutamic-Y-PEG

둥근바닥 플라스크에 메탄올 30ml를 넣고 0℃로 냉각한 다음 아세틸 클로라이드 30ml를 천천히 가하여 30분간 교반한 후, 메탄올 30ml에 실시예 5-1 단계에서 얻은 N-Boc-L-글루타믹-Y-PEG(0.325mM) 13g을 희석한 용액을 천천히 가하여 30분간 교반한 후, 상온에서 2시간 동안 다시 교반하였다. 반응이 끝난 후, 반응 혼합물을 메틸렌클로라이드로 추출하여 유기층을 무수 황산마그네슘(MgSO4)으로 건조하고 감압 농축하였다. 농축물을 에틸에테르로 침전시키고, 걸러낸 고체를 건조하여 글루타민 산(L-Glutamic acid)을 핵분자(core)로 하는 L-글루타믹-Y-PEG 화합물을 12.5g 수득하였다.30 ml of methanol was added to a round bottom flask, cooled to 0 ° C., 30 ml of acetyl chloride was slowly added thereto, and stirred for 30 minutes. Then, N-Boc-L-glutamic-Y-PEG obtained in Example 5-1 was added to 30 ml of methanol. 13 g (0.325 mM) of the diluted solution was added slowly and stirred for 30 minutes, and then stirred again at room temperature for 2 hours. After the reaction, the reaction mixture was extracted with methylene chloride, the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate (MgSO4) and concentrated under reduced pressure. The concentrate was precipitated with ethyl ether, and the filtered solid was dried to give 12.5 g of L-glutamic-Y-PEG compound having L-Glutamic acid as a core molecule.

1H-NMR (CDCl3) : 3.64 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH2-), 3.38 ppm (s, 6H, OCH3) 1 H-NMR (CDCl 3 ): 3.64 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH 2- ), 3.38 ppm (s, 6H, OCH 3 )

실시예 6. L-글루타믹-Y-PEG-말레이미드의 제조Example 6 Preparation of L-Glutamic-Y-PEG-Maleimide

단계 6-1. L-글루타믹-Y-PEG-말레아민 산(L-glutamic-Y-PEG-maleamic acid)의 제조Step 6-1. Preparation of L-glutamic-Y-PEG-maleamic acid

질소 풍선하에서 상기 실시예 5에서 얻은 L-글루타믹-Y-PEG(0.11mM, mw=40000) 4.5g를 N,N-디메틸아세트아미드(4ml/PEG g) 18ml 및 N-시클로헥실 피롤리돈(1ml/DMAC 5ml) 3.6ml 용매에 녹인 후, 말레산 무수물( 1.1mM) 0.1g를 가하였다. 수분정량기(Dean-Stark trap set)를 설치하고 공존용매로서 톨루엔을 사용하여, 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 끝난 후, 반응 혼합물을 에틸에테르로 침전시켜 걸러내어 고체상태의 L-글루타믹-Y-PEG-말레아민 산 화합물 4g을 수득하였다.4.5 g of L-glutamic-Y-PEG (0.11 mM, mw = 40000) obtained in Example 5 was added to 18 ml of N, N-dimethylacetamide (4 ml / PEG g) and N-cyclohexyl pyrroli under a nitrogen balloon. After dissolving in 3.6 ml of solvent (1 ml / DMAC 5 ml), 0.1 g of maleic anhydride (1.1 mM) was added. A water meter (Dean-Stark trap set) was installed and toluene was used as a co-solvent, followed by stirring at 80 ° C. for 16 hours. After the reaction was completed, the reaction mixture was precipitated with ethyl ether and filtered to give 4 g of L-glutamic-Y-PEG-maleamic acid compound in the solid state.

단계 6-2. L-글루타믹-Y-PEG-말레이미드(L-glutamic-Y-PEG-maleimide)의 제조Step 6-2. Preparation of L-glutamic-Y-PEG-maleimide

상기 실시예 6-1 단계에서 얻은 L-글루타믹-Y-PEG-말레아민 산(0.1mM) 4g을 메틸렌 클로라이드 및 DMF에 녹이고, 0℃에서 DIEA 및 펜타플루오로페닐 트리플루오로아세테이트를 가하여, 55℃에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 증류하여 디에틸에테르를 가하여 침전을 유도하고, 침전화합물은 감압 여과하였다. 여과물을 메틸렌 클로라이드 1L에 녹인 다음 활성탄을 넣고 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트 패드(celite pad)에 여과하여 활성탄을 제거하고 용매는 증류하여 제거한 후, 디에틸에테르를 가하여 침전을 유도하였다. 침전화합물은 감압 여과하여 하기 물성치를 갖는 L-글루타믹-Y-PEG-말레이미드 화합물 3.5g을 수득하였다. 4 g of L-glutamic-Y-PEG-maleamic acid (0.1 mM) obtained in step 6-1 was dissolved in methylene chloride and DMF, and DIEA and pentafluorophenyl trifluoroacetate were added at 0 ° C. And stirred at 55 ° C. for 24 h. The solvent was distilled off, diethyl ether was added to induce precipitation, and the precipitated compound was filtered under reduced pressure. The filtrate was dissolved in 1 L of methylene chloride and activated carbon was added thereto, followed by stirring for 3 hours. The mixture was filtered through a celite pad to remove activated carbon and the solvent was distilled off, followed by addition of diethyl ether to induce precipitation. The precipitated compound was filtered under reduced pressure to obtain 3.5 g of L-glutamic-Y-PEG-maleimide compound having the following physical properties.

1H-NMR (CDCl3) δ: 6.37 ppm (s, 2H, 말레이미드), 3.64 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH2-), 3.38 ppm (s, 6H, OCH3) 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ: 6.37 ppm (s, 2H, maleimide), 3.64 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH 2- ), 3.38 ppm (s, 6H, OCH 3 )

실시예 7. L-글루타믹-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트(L-Glutamic-Y-PEG-nitro phenyl carbonate)의 제조Example 7 Preparation of L-Glutamic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate

출발물질로 상기 실시예 5에서 얻은 L-글루타믹-Y-PEG (0.1mM) 4g을 메틸렌 클로라이드에 녹인 후, 트리에틸아민(0.4mM) 0.04g을 0℃에서 천천히 적가한 다음, p-니트로페닐 클로로포메이트(0.4mM) 0.08g를 가하여, 실온에서 하루 동안 반응시켰다. 반응이 끝난 후, 감압 증류하여 용매를 제거하고 글래스 필터를 이용하여 여과하였다. 농축된 반응 혼합물에 디에틸에테르를 가하여 침전을 유도한 다음, 감압 여과하여 하기 물성치를 갖는 L-글루타믹-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트 화합물 3.5g을 수득하였다. As a starting material, 4 g of L-glutamic-Y-PEG (0.1 mM) obtained in Example 5 was dissolved in methylene chloride, and 0.04 g of triethylamine (0.4 mM) was slowly added dropwise at 0 ° C., followed by p- 0.08 g of nitrophenyl chloroformate (0.4 mM) was added and reacted at room temperature for one day. After the reaction was completed, the mixture was distilled under reduced pressure to remove the solvent, and the resultant was filtered using a glass filter. Diethyl ether was added to the concentrated reaction mixture to induce precipitation, followed by filtration under reduced pressure to obtain 3.5 g of L-glutamic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate compound having the following physical properties.

1H-NMR (CDCl3) δ: 8.29 ppm (d, 2H, aromatic), 7.40 ppm (d, 2H, aromatic), 4.45 ppm (t, 1H, mPEG-NHCOCH2CH2 CH), 3.64 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH2-), 3.38 ppm (s, 6H, OCH3), 2.04 ppm (d, 4H, mPEG-NHCOCH 2 CH 2 CH) 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ: 8.29 ppm (d, 2H, aromatic), 7.40 ppm (d, 2H, aromatic), 4.45 ppm (t, 1H, mPEG-NHCOCH 2 CH 2 CH ), 3.64 ppm (s , 3636H, PEG backbone, -OCH 2- ), 3.38 ppm (s, 6H, OCH 3 ), 2.04 ppm (d, 4H, mPEG-NHCO CH 2 CH 2 CH)

실시예 8. L-글루타믹-Y-PEG-이소시아네이트(L-Glutamic-Y-PEG-isocyanate)의 제조 Example 8 Preparation of L-Glutamic-Y-PEG-isocyanate

출발물질로 상기 실시예 5에서 얻은 L-글루타민 산-Y-PEG(0.1mM) 4g을 진공감압하여 건조한 후, 증류로 정제한 무수 메틸렌 클로라이드에 녹였다. 질소 가스하에 트리에틸아민(1.6mM) 0.16g을 적가하여 30분간 교반한 다음, 트라이포스겐 (1.2mM) 0.35g을 가하여 다시 3시간 이상 환류, 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 식힌 후 질소 가스를 15분 이상 넣어주면서 남아있는 포스겐 가스를 제거하였다. 반응혼합물을 감압 여과하여 트리에틸아민염을 제거하고 다시 감압 증류하여 용매를 농축한 다음, 디에틸에테르를 가하여 침전을 유도한 후, 감압 여과를 수행하여 하기 물성치를 갖는 L-글루타믹-Y-PEG-이소시아네이트 화합물 3.5g을 수득하였다. 4 g of L-glutamic acid-Y-PEG (0.1 mM) obtained in Example 5 was dried under reduced pressure as a starting material, and then dissolved in anhydrous methylene chloride purified by distillation. 0.16 g of triethylamine (1.6 mM) was added dropwise under nitrogen gas, followed by stirring for 30 minutes. Then, 0.35 g of triphosgen (1.2 mM) was added thereto, and the mixture was further refluxed and stirred for 3 hours or more. After cooling the reaction mixture to room temperature, the remaining phosgene gas was removed while nitrogen gas was added for at least 15 minutes. The reaction mixture was filtered under reduced pressure to remove triethylamine salt, distilled under reduced pressure, and the solvent was concentrated. Then, diethyl ether was added to induce precipitation, and the resultant mixture was filtered under reduced pressure to give L-glutamic-Y having the following physical properties. 3.5 g of -PEG-isocyanate compound was obtained.

1H-NMR (CDCl3) δ: 3.64 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH2-), 3.40 ppm (t, 2H, -CH2-이소시아네이트), 3.37 ppm (s, 6H, OCH3) 1 H-NMR (CDCl 3 ) δ: 3.64 ppm (s, 3636H, PEG backbone, -OCH 2- ), 3.40 ppm (t, 2H, -CH 2 -isocyanate), 3.37 ppm (s, 6H, OCH 3 )

이상에서 살펴본 본 바와 같이, 본 발명에 따라 다당류, 단백질, 항체 등의 생명공학 제품이나 화학의약품 등의 특정 부위나 도메인에 선택적으로 결합할 수 있는 신규한 Y-PEG 유도체 및 그의 제조방법을 제공하여 고수율, 고순도의 제품을 생산하는 것이다.














As described above, in accordance with the present invention, a novel Y-PEG derivative capable of selectively binding to specific sites or domains of biotechnology products such as polysaccharides, proteins, antibodies, chemicals, and the like, and a method for preparing the same are provided. It is to produce high yield and high purity products.














Claims (17)

세 개의 결합부위를 가진 핵분자(core)를 기반으로 하여, 두 개의 산기에는 PEG를 부착하고 나머지 한 개의 아민기에는 반응기를 부착하는 Y자 형태의 Y-PEG 유도체.A Y-PEG derivative having a Y-shape that attaches PEG to two acid groups and a reactor to one amine group based on a core having three binding sites. 제 1항에 있어서, 핵분자는 아스파르트 산(aspartic acid) 또는 글루타민 산(glutamic acid)인 Y자 형태의 Y-PEG 유도체.The Y-PEG derivative according to claim 1, wherein the nuclear molecule is aspartic acid or glutamic acid. 제 1항에 있어서, 반응기는 말레이미드(maleimide), 파라-니트로페닐 카보네이트(p-nitrophenyl carbonate), 이소시아네이트(isocyanate)인 Y자 형태의 Y-PEG 유도체.The Y-PEG derivative according to claim 1, wherein the reactor is maleimide, p-nitrophenyl carbonate, isocyanate. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서 화합물은;The compound of claim 1, wherein the compound is selected from the group consisting of: L-아스파르틱-Y-PEG, L-아스파르틱-Y-PEG-말레이미드, L-아스파르틱-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트, L-아스파르틱-Y-PEG-이소시아네이트, L-글루타믹-Y-PEG, L-글루타믹-Y-PEG-말레이미드, L-글루타믹-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트, L-글루타 믹-Y-PEG-이소시아네이트에서 선택된 것임을 특징으로 하는 Y자 형태의 Y-PEG 유도체.L-aspartic-Y-PEG, L-aspartic-Y-PEG-maleimide, L-aspartic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate, L-aspartic-Y-PEG-isocyanate, L -Glutamic-Y-PEG, L-glutamic-Y-PEG-maleimide, L-glutamic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate, L-glutamic-Y-PEG-isocyanate Y-PEG derivative characterized by the Y-shape. 하기 일반식(Ⅰ)의 L-아스파르틱(Aspartic)-Y-PEG 화합물을 제조하는 방법에 있어서, N-Boc-L-아스파르트 산(Aspartic acid)에 mPEG-아민을 1-[3-(디메틸아미노)프로필-3-에틸카보디이미드 히드로클로라이드(1-[3-(di methylamino)propyl- 3-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDC)로 처리하여 유기용매 하에 반응시켜 두개의 mPEG을 연결시킨 후, 이 유도체를 탈보호화 반응화제(deprotection)로 처리함으로써 보호기(Boc)를 제거하여 일반식(Ⅰ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법.In the method for producing an L-aspartic-Y-PEG compound of the general formula (I), mPEG-amine is added to N-Boc-L-aspartic acid in 1- [3- ( Treated with dimethylamino) propyl-3-ethylcarbodiimide hydrochloride (1- [3- (di methylamino) propyl-3-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDC) to react in an organic solvent to link two mPEGs, A process for producing a polymer compound of general formula (I) by removing the protecting group (Boc) by treating with a deprotection reaction agent (deprotection).
Figure 112003029394318-pat00017
(Ⅰ)
Figure 112003029394318-pat00017
(Ⅰ) 하기 일반식(Ⅱ)의 L-아스파르틱-Y-PEG-말레이미드 중합체 화합물을 제조하는 방법에 있어서, 제 5항의 일반식(Ⅰ)에 말레산 무수물(maleic anhydride) 및 펜타플루오로페닐 트리플루오로아세테이트(pentafluoro phenyl trifluoroacetate)와 같은 반응화제를 유기용매 존재 하에 반응시킴으로써 일반식(Ⅱ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법.In the method for producing the L-aspartic-Y-PEG-maleimide polymer compound of the general formula (II), maleic anhydride and pentafluorophenyl tri A process for producing a general formula (II) polymer compound by reacting a reactant such as fluoroacetate (pentafluoro phenyl trifluoroacetate) in the presence of an organic solvent.
Figure 112003029394318-pat00018
(Ⅱ)
Figure 112003029394318-pat00018
(Ⅱ) 하기 일반식(Ⅲ)의 L-아스파르틱-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트 중합체 화합물을 제조하는 방법에 있어서, 제 5항의 일반식(Ⅰ)에 파라-니트로페닐 클로로포메이트(p-nitrophenyl chloroformate)와 같은 반응화제를 염기 및 유기용매 존재 하에 반응시킴으로써 일반식(Ⅲ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법.In the method for preparing the L-aspartic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate polymer compound of formula (III), para-nitrophenyl chloroformate is represented by general formula (I) of claim 5 A process for producing a general formula (III) polymer compound by reacting a reactant such as) in the presence of a base and an organic solvent.
Figure 112003029394318-pat00019
(Ⅲ)
Figure 112003029394318-pat00019
(Ⅲ) 하기 일반식(Ⅳ)의 L-아스파르틱-Y-PEG-이소시아네이트 중합체 화합물을 제조하는 방법에 있어서, 제 5항의 일반식(Ⅰ)에 트라이포스겐(triphosgene)과 같은 반응화제를 염기 및 유기용매 존재 하에 반응시킴으로써 일반식(Ⅳ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법.In the method for preparing the L-aspartic-Y-PEG-isocyanate polymer compound of the following general formula (IV), a reaction agent such as triphosgene in general formula (I) of claim 5 is used as a base and an organic solvent. A process for producing a general formula (IV) polymer compound by reacting in the presence of a compound.
Figure 112003029394318-pat00020
(Ⅳ)
Figure 112003029394318-pat00020
(Ⅳ) 하기 일반식(Ⅴ)의 L-글루타믹-Y-PEG화합물을 제조하는 방법에 있어서, N-Boc-L-글루타민 산(Glutamic acid)에 mPEG-아민을 EDC로 처리하여 유기용매 하에 반응시키고 이 유도체를 탈보호화 반응화제로 처리함으로써 보호기(Boc)를 제거하여 일반식(Ⅴ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법.In the method for preparing the L-glutamic-Y-PEG compound of the general formula (V), mPEG-amine is treated with N-Boc-L- glutamic acid by EDC and reacted under an organic solvent. A process for producing a polymer compound of formula (V) by removing the protecting group (Boc) by treating this derivative with a deprotection reaction agent.
Figure 112003029394318-pat00021
(Ⅴ)
Figure 112003029394318-pat00021
(Ⅴ) 하기 일반식(Ⅵ)의 L-글루타믹-Y-PEG-말레이미드 중합체 화합물을 제조하는 방법에 있어서, 제 9항의 일반식(Ⅴ)에 말레산 무수물(maleic anhydride) 및 펜타플루오로페닐 트리플루오로아세테이트(pentafluoro phenyl trifluoroacetate)와 같은 반응화제를 유기용매 존재하에 반응시킴으로써 일반식(Ⅵ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법.In the process for preparing the L-glutamic-Y-PEG-maleimide polymer compound of formula (VI), maleic anhydride and pentafluorophenyl tri A process for producing a polymer compound of formula (VI) by reacting a reactant such as fluoroacetate (pentafluoro phenyl trifluoroacetate) in the presence of an organic solvent.
Figure 112003029394318-pat00022
(Ⅵ)
Figure 112003029394318-pat00022
(Ⅵ) 하기 일반식(Ⅶ)의 L-글루타믹-Y-PEG-니트로페닐 카보네이트 중합체 화합물 을 제조하는 방법에 있어서, 제 9항의 일반식(Ⅴ)에 파라-니트로페닐 클로로포메이트(p-nitrophenyl chloroformate)와 같은 반응화제를 염기 및 유기용매 존재하에 반응시킴으로써 일반식(Ⅶ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법.In the method for preparing the L-glutamic-Y-PEG-nitrophenyl carbonate polymer compound of the general formula (VII), para-nitrophenyl chloroformate in the general formula (V) of claim 9 A method of producing a general formula (III) polymer compound by reacting a reactant such as in the presence of a base and an organic solvent.
Figure 112003029394318-pat00023
(Ⅶ)
Figure 112003029394318-pat00023
(Ⅶ) 하기 일반식(Ⅷ)의 L-글루타믹-Y-PEG-이소시아네이트 중합체 화합물을 제조하는 방법에 있어서, 제 9항의 일반식(Ⅴ)에 트라이포스겐(triphosgene)과 같은 반응화제를 염기 및 유기용매 존재하에 반응시킴으로써 일반식(Ⅷ) 중합체 화합물을 제조함을 특징으로 하는 제조방법.In the method for preparing the L-glutamic-Y-PEG-isocyanate polymer compound of the following general formula (VIII), a reaction agent such as triphosgene is added to the general formula (V) of claim 9 in a base and an organic solvent. A method for producing a general formula polymer compound by reacting in the presence of a compound.
Figure 112003029394318-pat00024
(Ⅷ)
Figure 112003029394318-pat00024
(Ⅷ) 제 5항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 반응화제는 펜타플루오로페닐 트리플루오로아세테이트, 파라-니트로페닐 클로로포메이트, 트라이포스겐 또는 탈보호화제로부터 선택된 단독 또는 2종이상의 혼합물임을 특징으로 하는 제조방법.13. The reactive agent according to any one of claims 5 to 12, wherein the reactive agent is a single or a mixture of two or more selected from pentafluorophenyl trifluoroacetate, para-nitrophenyl chloroformate, triphosgene or deprotecting agent. Manufacturing method. 제 5항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 염기는 TEA 또는 DIEA(N,N-diisopropylethylamine)로부터 선택된 단독 또는 2종이상의 혼합물임을 특징으로 하는 제조방법.The method according to any one of claims 5 to 12, wherein the base is a single or a mixture of two or more selected from TEA or DIEA (N, N-diisopropylethylamine). 제 5항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 유기용매는 디클로로메탄, 메틸렌 클로라이드 또는 DMF(Dimethylformamide)로부터 선택된 단독 또는 2종이상의 혼합물임을 특징으로 하는 제조방법.The method according to any one of claims 5 to 12, wherein the organic solvent is a single or a mixture of two or more selected from dichloromethane, methylene chloride or dimethylformamide (DMF). 제 5항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 일반식 (Ⅰ) 내지 일반식 (Ⅷ)의 Y-PEG 중합체는 분자량이 100내지 1,000,000달톤(Dalton)인 제조방법.13. The process according to any one of claims 5 to 12, wherein the Y-PEG polymers of formulas (I) to (VIII) have a molecular weight of 100 to 1,000,000 Daltons. 제 16항에 있어서, 일반식 (Ⅰ) 내지 일반식 (Ⅷ)의 Y-PEG 중합체는 분자량이 1000 내지 100,000 달톤(Dalton)인 제조방법.17. The process according to claim 16, wherein the Y-PEG polymers of formulas (I) to (VIII) have a molecular weight of 1000 to 100,000 Daltons.
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