KR100537914B1 - Cosmetic Composition Comprising Calyx Kaki as Active Ingredient for Improving Skin Wrinkle and Elasticity - Google Patents
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Abstract
본 발명은 감꼭지 추출물을 유효성분으로 포함하는 엘라스타아제 저해용 조성물과 피부 주름 및 탄력 개선용 조성물을 제공한다. 본 발명의 감꼭지 추출물은 탁월한 엘라스타아제 저해 및 섬유아세포 증식 효과가 있으며, 특히 감꼭지 추출물의 물 또는 클로로포름의 분획물이 탁월한 엘라스타아제 저해 활성을 갖는다. 본 발명의 감꼭지 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 피부 주름 및 피부 탄력을 개선하는 효과가 탁월하며, 우수한 안정성을 나타낸다.The present invention provides a composition for inhibiting elastase and a composition for improving skin wrinkles and elasticity comprising the extract as an active ingredient. The extract of the present invention has excellent elastase inhibition and fibroblast proliferation effect, in particular, the fraction of water or chloroform of the extract has excellent elastase inhibitory activity. Cosmetic composition containing the extract of the present invention as an active ingredient is excellent in improving the skin wrinkles and skin elasticity, and shows excellent stability.
Description
본 발명은 감꼭지 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 본 발명은 감꼭지 추출물을 유효성분으로 포함하는 엘라스타아제 저해용 조성물과 피부 주름 및 탄력 개선용 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition comprising a teat extract, and more particularly, the present invention relates to a composition for inhibiting elastase and a composition for improving skin wrinkles and elasticity comprising the extract as an active ingredient.
피부는 몸의 체표면을 덮고 있는 장기이다. 피부는 크게 표피 (epidermis)와 진피 (dermis)로 구분된다. 표피는 피부의 가장 바깥쪽에 위치하며 내부기관을 위한 보호막 역할을 한다. 표피는 각질층, 투명층, 과립층, 유극층 및 기저층으로 구성되어 있다. 진피는 표피에 영양소를 공급해 주는 일과 피부 조직내에서 피부의 틀을 형성해 주는 역할을 한다. 진피는 유두층 (papillary layer)과 망상층 (deep reticular layer)으로 구성되어 있는데, 유두층은 섬유아세포의 활동에 의한 피부세포 증식이 이루어지는 곳이다. 망상층은 피부 전체의 탄력을 유지하는 역할을 하며 콜라겐 (collagen; 교원질) 및 엘라스틴 (elastin; 탄력섬유)이 그물모양으로 짜여져 있다 (Braverman, J.Invest. Dermatol., 78, 434-443 (1982)).Skin is an organ that covers the body's surface. The skin is largely divided into epidermis and dermis. The epidermis is the outermost of the skin and acts as a protective barrier for internal organs. The epidermis is composed of a stratum corneum, a clear layer, a granule layer, a play layer and a base layer. The dermis serves to nourish the epidermis and form the skin's framework within the skin tissue. The dermis is composed of a papillary layer and a deep reticular layer, which is a place where skin cell proliferation is induced by fibroblast activity. The reticular layer plays a role in maintaining the elasticity of the entire skin, and collagen (collagen) and elastin (elastic fiber) are meshed (Braverman, J. Invest. Dermatol. , 78, 434-443 (1982). )).
탄력섬유는 결합조직에 포함되는 탄성을 가지는 섬유로서 결합조직에 포함되는 교원섬유에 비해 신장성이 훨씬 더 큰 섬유이다. 탄력섬유는 피부에 가해진 힘에 의해 변형된 피부가 원래의 모습으로 회복될 수 있도록 피부에 탄력성을 제공한다.Elastic fibers are elastic fibers included in connective tissue and are much more stretchable than collagen fibers included in connective tissue. Elastic fibers provide elasticity to the skin so that the deformed skin can be restored to its original shape by the force applied to the skin.
엘라스틴은 상기 탄력섬유의 주요 구성성분으로 탄력섬유의 90%가 무정형의 불용성 단백질인 엘라스틴 (elastin)으로 구성되어 있다. 엘라스타아제 (elastase)는 엘라스틴을 분해하는 활성이 있는 효소로서 엘라스타아제에 의해 엘라스틴이 분해되면 피부의 탄력이 감소되고 또한, 주름의 생성이 가속화된다 (피부과학 pp 18, 대한피부과학회 교과서 편찬위원회 편저, 려문각)Elastin is the main component of the elastic fiber is composed of elastin (90%) of the amorphous insoluble protein 90% of the elastic fiber. Elastase is an enzyme that degrades elastin, and the breakdown of elastin by elastase decreases the elasticity of the skin and accelerates the production of wrinkles (Dermatology pp 18, Korean Dermatology Textbook). Committee compilation, Ryeomungak)
따라서 피부 주름 및 탄력의 개선 방법으로 엘라스타아제의 활성을 저해하여 엘라스틴의 분해를 억제하는 방법이 보고되고 있다 (김인영 외, Kor. J. Pharmacogn 33(4):364-371(2002)).Therefore, a method of inhibiting the degradation of elastin by inhibiting the activity of elastase as a method for improving skin wrinkles and elasticity has been reported (Kim In-young et al . , Kor. J. Pharmacogn 33 (4): 364-371 (2002)).
종래 기술에서 사용되고 있는 레티노이드와 같은 주름개선 물질은 안정성이 낮아 화장료에서 이용하는 것에 한계가 있고, 피부 적용 시에 자극 및 발적이 일어나므로 안전성에도 문제가 있어 사용량이 제한되어 있다.Wrinkle improvement materials, such as retinoids used in the prior art has a low stability, there is a limit to use in cosmetics, irritation and redness occurs during application of the skin, there is also a safety problem, the amount of use is limited.
따라서, 보다 우수한 주름 및 탄력 개선 효과는 물론 안정성 및 안전성이 우수한 새로운 물질 개발이 필요한 실정이다. Therefore, there is a need for development of a new material having excellent stability and safety as well as an effect of improving wrinkles and elasticity.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.Throughout this specification, a number of articles are referenced and their citations are indicated. The disclosures of cited articles are incorporated herein by reference in their entirety to more clearly describe the level of the technical field to which the present invention pertains and the content of the present invention.
본 발명자들은 안정성이 높으며 피부 주름 및 탄력 개선 효과가 우수한 물질을 찾기 위해 생약재를 대상으로 예의 연구 노력한 결과, 감꼭지 추출물이 탁월한 엘라스타아제 저해 활성 및 섬유아세포 증식 효과가 있으며, 안정성 또한 우수함을 확인하여 본 발명을 완성하였다.The inventors of the present invention conducted a thorough research on herbal medicines to find a substance having high stability and excellent skin wrinkle and elasticity improvement. As a result, the extract has excellent elastase inhibitory activity and fibroblast proliferation effect, and stability was also excellent. The present invention was completed.
따라서, 본 발명의 목적은 감꼭지 추출물을 유효 성분으로 포함하는 엘라스타아제 저해용 조성물을 제공하는 데 있다.Therefore, it is an object of the present invention to provide a composition for inhibiting elastase, which comprises a extract of persimmon as an active ingredient.
본 발명의 다른 목적은 감꼭지 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 주름 및 탄력 개선용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다. Another object of the present invention to provide a cosmetic composition for improving skin wrinkles and elasticity comprising the extract extract as an active ingredient.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 감꼭지 추출물을 유효 성분으로 포함하는 엘라스타아제 저해용 조성물을 제공한다.According to one aspect of the present invention, the present invention provides a composition for inhibiting elastase comprising the extract of persimmon as an active ingredient.
본 발명의 다른 일 양태에 따르면, 본 발명은 감꼭지 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 주름 및 탄력 개선용 화장료 조성물를 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides a cosmetic composition for improving skin wrinkles and elasticity comprising the extract as an active ingredient.
본 발명은 감나무 열매의 꽃받침인 감꼭지의 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다.The present invention is characterized in that it comprises an extract of the persimmon which is calyx of persimmon fruit as an active ingredient.
감꼭지 (시체)는 감나무과의 낙엽 교목인 디소피로스 카키 (Disopyros kaki L.)의 열매 꽃받침으로써 라틴명은 카키 칼릭스 (Kaki Calyx)이다. 감꼭지는 구토 및 기침을 멎게 하는 등의 효능이 있는 있으며 한방에서 약재로 사용되어 왔다 (본초학, pp 363~364, 전국한의과대학 본초학교수공저, 영림사). 감꼭지가 포함하고 있는 주요 성분으로는 숙신산, 퀘르세틴 (quercetin), 캠프페롤 (kaempferol), 네오디오스피린 (neodiospyrin), 올레아놀린 (oleanolin), 우르솔릭 (ursolic), 베툴린 (Betulin) 및 다우코스테롤 (daucosterol) 등이 알려져 있다 (International Collation of Traditional and Folk Medicine, pp 125~126, World Scientific (1997)).Is touching the faucet (body) is the Latin name Carl Riggs Khaki (Kaki Calyx) as the fruit buds of deciduous tall tree which Sophie de los Khaki (Disopyros kaki L.) Of ebenaceae. It is effective in relieving vomiting and coughing, and has been used as a medicinal herb in herbal medicine. The main components of the teat include succinic acid, quercetin, kaempferol, neoodiospyrin, oleanolin, ursolic, betulin and doucosterol. (daucosterol) and others are known (International Collation of Traditional and Folk Medicine, pp 125-126, World Scientific (1997)).
본 발명에서 이용되는 감꼭지 추출물은, 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 얻어질 수 있고, 바람직하게는 (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), (c) 아세톤, (d) 에틸 아세테이트, (e) 클로로포름 또는 (f) 1,3-부틸렌글리콜을 추출 용매로 하여 얻은 것이다. 추출용매는 보다 바람직하게는 알코올이며, 가장 바람직하게는 에탄올 및 메탄올이다. 추출의 재료가 되는 감꼭지는 이를 건조하여 사용하거나 또는 그대로 사용할 수 있으며, 바람직하게는 건조하여 사용하는 것이다. 건조법으로는 자연 건조 또는 열풍 건조법을 이용할 수 있다.The teat extract used in the present invention may be obtained through various methods known in the art, and preferably comprises (a) water, (b) anhydrous or hydrous lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms (eg, methanol, Ethanol, propanol, butanol and the like), (c) acetone, (d) ethyl acetate, (e) chloroform or (f) 1,3-butylene glycol. The extraction solvent is more preferably alcohol, most preferably ethanol and methanol. The nipple as the material for extraction can be dried or used as it is, and preferably used by drying. As a drying method, natural drying or a hot air drying method can be used.
본 발명의 하기 특정 제조예를 참조하여 감꼭지 추출물의 제조방법을 설명하면 다음과 같다: 감꼭지를 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분쇄한다. 분쇄된 감꼭지 미세분말을 메탄올 또는 에탄올에 넣어 상온에서 수 일 동안 침출한다. 와트만 여과지로 여과하여 침출액을 회수하고 다시 메탄올 또는 에탄올을 넣고 재침출한다. 상기 재침출 과정을 수 회 반복하고 회수된 침출액은 감압농축장치로 농축한다.Referring to the following specific preparation of the present invention, a method for preparing a teat extract is described as follows: The teat is washed with purified water, dried and then ground. The milled teat fine powder is placed in methanol or ethanol and leached for several days at room temperature. The leachate was recovered by filtering with Whatman filter paper, and re-leached with methanol or ethanol. The releach process is repeated several times and the recovered leachate is concentrated in a vacuum concentrator.
한편, 본 발명의 추출물은 상기한 추출용매 뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 감꼭지 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.On the other hand, it will be apparent to those skilled in the art that the extract of the present invention can be obtained not only the above-described extraction solvent but also extract extracts having substantially the same effect using other extraction solvents.
또한, 본 발명의 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물 뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 감꼭지 추출물에 포함되는 것이다.In addition, the extract of the present invention includes not only the extract by the above-described extraction solvent, but also the extract that has undergone a conventional purification process. Obtained by various additional purification methods, such as, for example, separation using ultrafiltration membranes having a constant molecular weight cut-off value, separation by various chromatography (manufactured for separation according to size, charge, hydrophobicity or affinity). The fraction is also included in the extract of the teat of the present invention.
본 발명의 감꼭지 추출물은 감압 증류, 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.The teat extract of the present invention may be prepared in powder form by an additional process such as distillation under reduced pressure, freeze drying or spray drying.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에서 사용되는 감꼭지 추출물은 상술한 추출용매를 이용한 추출 이후에, 유효성분의 추가적인 분획 (fractionation)을 위하여, 물 및 유기 용매 (예: 헥산, 에틸아세테이트 및 클로로포름)를 이용한 분획화 과정을 거치게 된다. 따라서, 본 발명의 추출물은 보다 바람직하게는 물층 분획물 및 클로로포름층 분획물이고, 가장 바람직하게는 클로로포름층 분획물이다.According to a preferred embodiment of the present invention, the extract for use in the present invention, after the extraction using the above-mentioned extraction solvent, for further fractionation of the active ingredient, water and organic solvents (eg, hexane, ethyl acetate) And chloroform). Thus, the extract of the present invention is more preferably a water layer fraction and a chloroform layer fraction, and most preferably a chloroform layer fraction.
본 발명자들은 감꼭지 추출물을 다양한 용매로 분획하여 각각의 용매별 분획물의 엘라스타아제 저해 효과를 측정하였으며, 그 결과 물층 및 클로로포름층 분획물이 우수한 엘라스타아제 저해 효과가 있는 것을 확인하였으며, 특히, 클로로포름층 분획물이 가장 우수한 효과가 있는 것을 확인하였다.The present inventors determined the elastase inhibitory effect of the fraction of each solvent by fractionation of the persimmon extract with various solvents, and as a result, it was confirmed that the water layer and the chloroform layer fractions had an excellent elastase inhibitory effect, in particular, chloroform It was confirmed that the layer fraction had the best effect.
상기 사실로부터 본 발명의 감꼭지 추출물에서 클로로포름에 용해도가 높은 물질이 엘라스타아제 저해 효과가 특히 우수함을 알 수 있다. 또한, 감꼭지 추출물을 추가적으로 용매별로 분획하는 것은 불필요한 물질들을 제거하고 핵심적인 성분만을 사용할 수 있게 한다.From the above fact, it can be seen that the substance having high solubility in chloroform is particularly excellent in elastase inhibitory effect in the extract of the present invention. In addition, fractionation of the extract by the solvent allows removal of unnecessary substances and the use of only essential ingredients.
본 발명의 하기 특정 제조예를 참조하여 감꼭지 추출물의 용매별 분획을 제조방법을 설명하면 다음과 같다: 추출용매를 사용하여 얻은 감꼭지 추출물을 정제수에 분산시키고 헥산를 가하여 진탕시켰다. 헥산층 및 물층이 충분히 분리된 후 상층인 헥산층을 취하였다. 하층 (물층)에 헥산을 첨가하여 수 회 더 추출하였다. 회수된 상층을 모두 합한 후 감압증류장치를 이용하여 용매를 제거한다. 헥산 대신 클로로포름 및 에틸아세테이트를 사용하여 상기 하층 (물층)을 상기와 같은 방법으로 재추출하고 농축한다. 마지막으로 물층을 감압증류하여 물층 분획물 얻는다.Referring to the following specific preparation of the present invention, the solvent-specific fractions of the extract of the teat will be described as follows: The teat extract obtained using the extraction solvent was dispersed in purified water and shaken by adding hexane. After the hexane layer and the water layer were sufficiently separated, an upper hexane layer was taken. Hexane was added to the lower layer (water layer) to extract several more times. After all the recovered upper layers were combined, the solvent was removed using a vacuum distillation apparatus. The lower layer (water layer) is reextracted and concentrated in the same manner as above using chloroform and ethyl acetate instead of hexane. Finally, the water layer is distilled under reduced pressure to obtain a water layer fraction.
본 발명의 감꼭지 추출물은 탁월한 엘라스타아제 활성 억제 효과가 있다. 피부 전체의 탄력을 유지하는 역할을 수행하는 망상층은 콜라겐 (교원섬유) 및 엘라스틴 (탄력섬유)이 그물모양으로 짜여져 있다. 피부의 탄력은 엘라스틴을 주 성분으로 하는 탄력섬유에 크게 영향을 받으며, 탄력섬유의 엘라스틴이 엘라스틴 분해 효소에 의해 분해되면, 피부가 탄력을 잃고 주름 생성이 가속화된다. 본 발명의 감꼭지 추출물은 엘라스타아제 활성을 저해함으로써 엘라스틴 분해 효소에 의한 엘라스틴의 분해를 억제하여 탄력섬유가 그 기능을 원할히 수행할 수 있도록 하며, 결과적으로 피부의 탄력이 유지 및 개선되고 나아가 주름의 생성이 억제되고 주름이 개선되는 효과를 얻는다.The teat extract of the present invention has an excellent effect of inhibiting elastase activity. The reticular layer, which plays a role of maintaining the elasticity of the entire skin, is composed of collagen (collagen fiber) and elastin (elastic fiber) in a net shape. The elasticity of the skin is greatly influenced by elastic fibers, which are mainly composed of elastin, and when the elastin of the elastic fibers is decomposed by elastin degrading enzymes, the skin loses elasticity and accelerates wrinkle formation. The teat extract of the present invention inhibits the degradation of elastin by elastinase by inhibiting the elastase activity so that the elastic fiber can perform its function smoothly, and as a result, the elasticity of the skin is maintained and improved and further wrinkles The production of is suppressed and the effect of improving wrinkles is obtained.
한편, 본 발명의 감꼭지 추출물은 진피의 섬유성결합조직을 구성하는 섬유아세포의 증식을 촉진한다. 본 발명의 추출물에 의한 섬유아세포의 증식효과는 섬유성 결합조직에 건강한 젊은 세포의 수급을 가능하게 함으로써 감꼭지 추출물의 엘라스타아제 활성과 함께 결과적으로 피부의 섬유성 결합조직을 강화시키는 효과를 준다.On the other hand, the teat extract of the present invention promotes the proliferation of fibroblasts constituting the fibrous connective tissue of the dermis. The proliferative effect of the fibroblasts by the extract of the present invention enables the supply of healthy young cells to the fibrous connective tissues, resulting in the effect of strengthening the fibrous connective tissue of the skin together with the elastase activity of the extract .
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 감꼭지 추출물의 함량은 전체 조성물에 대하여 0.0001 내지 15 중량%이며, 바람직하게는 0.001 내지 10중량%이고 보다 바람직하게는 0.01 내지 5 중량%이다. 상기 감꼭지 추출물의 함량의 양이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 효과가 나타나지 않는 문제점이 있고, 15 중량%를 초과하는 경우에는 효과에 큰 차이가 없다.According to a preferred embodiment of the present invention, the content of the teat extract is 0.0001 to 15% by weight, preferably 0.001 to 10% by weight and more preferably 0.01 to 5% by weight based on the total composition. If the amount of the extract is less than 0.0001% by weight, there is a problem that the effect does not appear, and when the amount exceeds 15% by weight, there is no significant difference in the effect.
본 발명의 화장품 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 감꼭지 추출물이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.The components included in the cosmetic composition of the present invention include components conventionally used in cosmetic compositions in addition to the extract of persimmon as an active ingredient, and include, for example, conventional auxiliaries such as antioxidants, stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and perfumes, And carriers.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 수렴 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may be prepared in any formulation commonly prepared in the art, for example, solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing , Oils, powder foundations, emulsion foundations, wax foundations and sprays, and the like, but are not limited thereto. More specifically, it may be prepared in the form of a flexible lotion, astringent lotion, nutrition lotion, nutrition cream, massage cream, essence, eye cream, cleansing cream, cleansing foam, cleansing water, pack, spray or powder.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal oils, vegetable oils, waxes, paraffins, starches, trachants, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide may be used as carrier components. Can be.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.When the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used, in particular in the case of a spray, additionally chlorofluorohydrocarbon, propane Propellant such as butane or dimethyl ether.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solubilizer or emulsifier is used as the carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 Fatty acid esters of, 3-butylglycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a suspension, liquid carrier diluents such as water, ethanol or propylene glycol, suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystals Soluble cellulose, aluminum metahydroxy, bentonite, agar or tracant and the like can be used.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing, the carrier component is an aliphatic alcohol sulfate, an aliphatic alcohol ether sulfate, a sulfosuccinic acid monoester, isethionate, an imidazolinium derivative, a methyltaurate, a sarcosinate, a fatty acid amide. Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, lanolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.
감꼭지 추출물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 엘라스타아제의 활성을 억제할 뿐만 아니라, 섬유아세포 증식을 촉진하여 피부 주름 및 탄력을 개선하는 효과가 탁월하다. 또한, 본 발명의 감꼭지 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 뛰어난 온도 안정성을 나타낸다.The cosmetic composition of the present invention comprising the extract as an active ingredient is not only inhibits the activity of the elastase, but also promotes fibroblast proliferation to improve skin wrinkles and elasticity. In addition, the cosmetic composition containing the extract of the present invention exhibits excellent temperature stability.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only for illustrating the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not limited by these examples in accordance with the gist of the present invention to those skilled in the art. Will be self-evident.
실시예Example
제조예 1: 감꼭지 추출물의 제조Preparation Example 1 Preparation of Tap Extract
감꼭지를 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분쇄하였다. 분쇄된 감꼭지 미세분말 200 g을 메탄올 또는 에탄올 1 ℓ에 넣어 상온에서 2일 동안 침출하였다. 와트만 2번 여과지로 여과하여 침출액을 회수하고 다시 메탄올 또는 에탄올 1ℓ을 넣고 재침출하였다. 상기 재침출 과정은 총 2회 반복되었다. 회수된 침출액은 감압농축장치로 농축하였으며, 건조 추출물 10 g을 얻었다.The pacifier was washed with purified water, dried and then ground. 200 g of the ground teat fine powder was added to 1 L of methanol or ethanol and leached at room temperature for 2 days. The leachate was recovered by filtering the filter using Whatman No. 2, and then re-leached with 1 L of methanol or ethanol. The releach process was repeated twice. The recovered leachate was concentrated with a vacuum concentrator, and 10 g of dry extract was obtained.
제조예 2: 용매별 분획의 제조Preparation Example 2 Preparation of Fractions by Solvent
상기 제조예 1에서 얻은 감꼭지의 메탄올 추출물을 정제수 1 ℓ에 분산시키고 헥산 1 ℓ를 가하여 진탕시켰다. 헥산층 및 물층이 충분히 분리된 후 상층인 헥산층을 취하였다. 하층 (물층)에 헥산을 첨가하여 두 번 더 추출하였다. 회수된 상층을 모두 합한 후 감압증류장치를 이용하여 용매를 제거하고 670 ㎎의 헥산층 분획물을 얻었다. 헥산 대신 클로로포름 및 에틸아세테이트를 사용하여 상기 하층 (물층)을 상기와 같은 방법으로 재추출하고 농축하여 클로로포름층 분획물 4.4 g 및 에틸아세테이트층 분획물 1.1 g을 얻었다. 마지막으로 물층을 감압증류하여 물층 분획물 3.6g을 얻었다.The methanol extract of the teat obtained in Preparation Example 1 was dispersed in 1 L of purified water and shaken by adding 1 L of hexane. After the hexane layer and the water layer were sufficiently separated, an upper hexane layer was taken. Hexane was added to the lower layer (water layer) to extract twice more. The combined upper layers were combined and the solvent was removed using a vacuum distillation apparatus to obtain 670 mg of a hexane layer fraction. Using chloroform and ethyl acetate instead of hexane, the lower layer (water layer) was reextracted and concentrated in the same manner as above to obtain 4.4 g of chloroform fraction and 1.1 g of ethyl acetate layer. Finally, the water layer was distilled under reduced pressure to obtain 3.6 g of a water layer fraction.
실험예 1: 엘라스타아제 저해 효과 실험 (Elastase inhibition assay)Experimental Example 1: Elastase inhibition assay
제조예 1의 감꼭지 추출물을 각 농도별로 조제한 용액 (용매: 100 mM Tris HCl pH 8.0) 60 ㎕와 0.6 units/ml 엘라스타아제 효소 (Sigma, 미합중국) 용액 100 ㎕를 30분간 37℃에서 반응시켰다. 그 다음, 4 mM sucAla3-PNA 용액 (Sigma, 미합중국) 40 ㎕를 첨가하고 30분간 37℃에서 반응시킨 후 분광광도기를 이용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 실험결과는 하기 표 1에 나타나 있다. 엘라스타아제 저해활성은 하기 수학식 1에 따라 계산하였다.60 μl of a solution prepared for each concentration of the teat extract of Preparation Example 1 (solvent: 100 mM Tris HCl pH 8.0) and 100 μl of a 0.6 units / ml elastase enzyme (Sigma, United States) solution were reacted at 37 ° C. for 30 minutes. . Then, 40 μl of a 4 mM sucAla3-PNA solution (Sigma, USA) was added and reacted at 37 ° C. for 30 minutes, and then absorbance was measured at 405 nm using a spectrophotometer. The experimental results are shown in Table 1 below. Elastase inhibitory activity was calculated according to the following equation.
상기 표 1에서 보는 바와 같이 감꼭지 추출물은 농도 의존적으로 엘라스타아제의 활성을 저해하였으며, 그 저해 효과가 탁월하였다.As shown in Table 1, the extract was inhibited the activity of elastase in a concentration-dependent manner, the inhibitory effect was excellent.
실험예 2: 감꼭지 추출물의 용매별 분획의 엘라스타아제 저해 효과 실험Experimental Example 2: Elastase inhibitory effect of the solvent-specific fractions of the extract
상기 제조예 2에서 얻은 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 물의 용매별 분획의 엘라스타아제 저해 효과를 실험예 1에 기재된 방법에 의해 측정하였다.The elastase inhibitory effect of the solvent-specific fractions of hexane, chloroform, ethyl acetate and water obtained in Preparation Example 2 was measured by the method described in Experimental Example 1.
상기 표 2에서 알 수 있듯이 모든 용매층에서 엘라스타아제 저해 활성이 나타났으나 물층 및 클로로포름층이 다른 층에 비하여 월등한 엘라스타아제 저해 활성을 보였으며 클로로포름층이 가장 높은 저해 활성을 나타내었다. 따라서, 클로로포름층에 엘라스타아제 저해 활성이 높은 물질이 존재함을 예상할 수 있다.As can be seen in Table 2, the elastase inhibitory activity was observed in all solvent layers, but the water layer and the chloroform layer showed superior elastase inhibitory activity compared to the other layers, and the chloroform layer showed the highest inhibitory activity. Therefore, it can be expected that a substance having high elastase inhibitory activity exists in the chloroform layer.
실험예 3: 섬유아세포 증식 효과 실험Experimental Example 3: Fibroblast Proliferation Effect Experiment
3-1: 쥐 섬유아세포의 일차 세포배양3-1: Primary Cell Culture of Rat Fibroblasts
(주)바이오 제노믹스에서 구입한 SD계 쥐 (4 주령)을 마취시키고 등을 제모한 후 조직을 적출하였다. 적출한 조직을 표피와 진피를 분리한 후, 진피에서 섬유아세포를 분리하여 형태를 확인하였다. 확인된 섬유아세포를 DMEM 배지에 10 % FBS (fetal bovine serum), 1% 페니실신-스트렙토마이신을 가하여 25 ㎠ 조직 배양 플라스크 내에서 배양기 내부 공기 5% CO2 농도로 37 ℃에서 3-5 일간 안정화하였다. 안정화 후 트립신-EDTA 용액을 처리하여 계대 배양하였으며 초기 계대 세포 (passage 3)를 사용하였다.SD rats (4 weeks old) purchased from BIO GEOMENIX were anesthetized, their backs were removed, and tissues were extracted. After removing the epidermis and the dermis from the extracted tissue, fibroblasts were isolated from the dermis to confirm the morphology. The identified fibroblasts were stabilized at 37 ° C. for 3-5 days with 5% CO 2 concentration in the incubator in a 25 cm 2 tissue culture flask by adding 10% FBS (fetal bovine serum) and 1% penicillin-streptomycin to DMEM medium. It was. After stabilization, passages were treated with trypsin-EDTA solution and initial passage cells (passage 3) were used.
3-2: 섬유아세포 증식율 측정3-2: Fibroblast Proliferation Rate Measurement
96-웰 플레이트의 각 웰에 대수증식기의 정상 쥐 섬유아세포 4 × 104 cells/well를 접종하여 DMEM 배지에서 24 시간 배양하였다. 제조예 1의 메탄올을 사용하여 얻은 감꼭지의 추출물의 최종 농도가 각각 0.01, 0.1 및 1 ㎎/㎖이 되도록 처리된 5% 혈청이 포함된 DMEM 배지로 교환하고 72 시간 배양하였다. MTT 용액을 50 ㎕ (5 ㎎/㎖)씩 첨가하고 4 시간 후 원심분리하여 상등액을 제거하였다. DMSO를 100 ㎕씩 첨가한 후 570 ㎚에서 엘라이자 리더로 흡광도를 측정하였다. 세포증식률 (%)은 하기 수학식 2에 따라 계산하였다.Normal rat fibroblasts 4 × 10 4 in logarithmic cells in each well of a 96-well plate Cells / well were seeded and incubated in DMEM medium for 24 hours. Methanol of Preparation Example 1 was exchanged with DMEM medium containing 5% serum treated so that the final concentration of the extract of the teat obtained using 0.01, 0.1 and 1 mg / ml, respectively, and incubated for 72 hours. 50 μl (5 mg / ml) of the MTT solution was added and centrifuged after 4 hours to remove the supernatant. After 100 μl of DMSO was added, the absorbance was measured with an ELISA reader at 570 nm. Cell growth rate (%) was calculated according to the following equation (2).
상기 표 3에서 보는 바와 같이 감꼭지 추출물은 정상 쥐 섬유아세포의 세포증식 효과가 있음을 알 수 있었다. 추출물의 농도가 0.01 ㎎/㎖ 일 때, 가장 높은 증식 효과를 가져왔으며, 농도가 증가할 수록 증식 효과는 감소하였다. 하지만, 전반적으로 우수한 효과를 보여주었으므로 감꼭지 추출물은 탁월한 세포증식효과가 있음을 알 수 있었다.As shown in Table 3, the extract was found to have a cell proliferation effect of normal rat fibroblasts. When the concentration of the extract was 0.01 mg / ㎖, the highest proliferation effect was obtained, and as the concentration was increased, the proliferation effect was decreased. However, because it showed an excellent overall effect, the extract was found to have an excellent cell proliferation effect.
이하, 본 발명의 제형예로서 유연 화장수, 영양 로션 및 영양 크림 등을 예시하고 있으나, 본 발명의 조성물을 포함하는 화장료의 제형은 이에 제한되는 것은 아니다.Hereinafter, examples of the formulation of the present invention include a flexible lotion, a nutrient lotion and a nourishing cream, but the formulation of the cosmetic including the composition of the present invention is not limited thereto.
제형예Formulation example
제형예 1Formulation Example 1
감꼭지 추출물을 함유한 화장료 중 화장수(스킨)의 제형예는 표 4과 같다.Formulation examples of the skin lotion (skin) in the cosmetic composition containing the extract is shown in Table 4.
제형예 2Formulation Example 2
감꼭지 추출물을 함유한 화장료 중 영양로션의 제형예는 표 5와 같다.Formulation examples of the nutrition lotion in the cosmetic composition containing the extract is shown in Table 5.
제형예 3Formulation Example 3
감꼭지 추출물을 함유한 화장료 중 영양크림의 제형예는 표 6과 같다. Table 6 shows an example of the formulation of nutrition cream in the cosmetic composition containing the extract.
제형예 4Formulation Example 4
감꼭지 추출물을 함유한 화장료 중 맛사지 크림의 제형예는 표 7과 같다.Formulation example of the massage cream in the cosmetic composition containing the extract is shown in Table 7.
제형예 5Formulation Example 5
감꼭지 추출물을 함유한 화장료 중 영양 에센스의 제형예는 표 8과 같다.Formulation examples of the nutritional essence in the cosmetic composition containing the extract is shown in Table 8.
제형예 6Formulation Example 6
감꼭지 추출물을 함유한 화장료 중 유화형 화운데이션의 제형예는 표 9와 같다.Formulation examples of the emulsion-based foundation in the cosmetic composition containing the extract is shown in Table 9.
실험예 1: 온도 보존 안정성Experimental Example 1: Temperature Storage Stability
상기 제조예 1에서 에탄올을 용매로 하여 제조한 감꼭지 추출물을 사용하여 상기 제형예 1 및 2의 실시예 1 내지 6의 화장료를 제조하고 화장료의 온도 보존 안정성을 평가하였다. 온도 보존 안정성을 확인하기 위하여 온도별 변화에 따른 안정성을 조사하였으며, 그 결과는 하기 표 10에 나타나 있다.The cosmetic preparations of Examples 1 to 6 of Formulation Examples 1 and 2 were prepared using the extract of the pacifier produced by using ethanol as a solvent in Preparation Example 1, and the temperature storage stability of the cosmetic was evaluated. In order to confirm the temperature storage stability, the stability of the temperature-dependent change was investigated, and the results are shown in Table 10 below.
상기 표 10의 결과로부터, 본 발명의 감꼭지 추출물을 함유하는 화장품은 온도 보존 안정성이 매우 우수함을 알 수 있었다.From the results in Table 10, it was found that the cosmetic containing the extract of the present invention is very excellent in temperature storage stability.
실험예 2: 피부 주름 개선의 임상효과Experimental Example 2: Clinical Effect of Skin Wrinkle Improvement
본 발명의 감꼭지 추출물을 함유하는 화장료에 대한 피부 주름 개선 임상효과를 측정하였다.The clinical effect of skin wrinkle improvement on the cosmetic containing the extract of the present invention was measured.
본 임상 시험은 주름이 생성되기 시작하거나 이미 생성된 25세 이상의 여성 20명을 2 그룹으로 나누고, A 그룹에는 실시예 6의 화장료, B 그룹에는 비교실시예2의 화장료를 안면 중 좌측 및 우측 눈가를 중심으로 12주간 도포하게 하였다. 숙련자의 객관적 평가와 피검자의 주관적 평가를 다음의 4등급으로 분류하여 평가함으로써 피부주름의 개선정도를 측정하였다. 결과는 하기 표 11 및 표 12에 나타나 있다.This clinical trial divides 20 women over the age of 25 who have started or have already developed wrinkles into 2 groups, the cosmetics of Example 6 in Group A, and the cosmetics of Comparative Example 2 in Group B of the left and right eyes 12 weeks was applied. The degree of improvement of skin wrinkles was measured by classifying the objective evaluation of the expert and the subjective evaluation of the subject into the following four grades. The results are shown in Tables 11 and 12 below.
피부주름개선 평가 기준:Skin wrinkle improvement evaluation criteria:
0: 변화없음 0: no change
1: 약간 개선 1: slightly improved
2: 개선 2: improve
3: 매우개선 3: highly improved
상기 임상시험 결과, 표 11 및 표 12에서 알 수 있듯이 실시예 6의 경우 숙련자의 객관적 평가 및 피검자의 주관적 평가의 평균값이 각각 2.7 및 2.8로 비교실시예 2의 0.7 및 0.9에 비하여 월등히 높았다. 따라서, 본 발명의 감꼭지 추출물을 첨가하여 제조한 제형의 주름 개선 효과가 매우 우수함을 알 수 있다.As can be seen from Table 11 and Table 12, in Example 6, the average value of the objective evaluation of the skilled person and the subjective evaluation of the subject was 2.7 and 2.8, respectively, which was much higher than 0.7 and 0.9 of Comparative Example 2. Therefore, it can be seen that the wrinkle improvement effect of the formulation prepared by adding the extract of the present invention is very excellent.
이상에서 상세히 설명하듯이, 본 발명은 감꼭지 추출물을 유효성분으로 포함하는 엘라스타아제 저해용 조성물과 피부 주름 및 탄력 개선용 조성물을 제공한다. 본 발명의 감꼭지 추출물은 탁월한 엘라스타아제 저해 및 섬유아세포 증식 효과가 있으며, 특히 감꼭지 추출물의 물 또는 클로로포름의 분획물이 탁월한 엘라스타아제 저해 활성을 갖는다. 본 발명의 감꼭지 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 피부 주름 및 피부 탄력을 개선하는 효과가 탁월하며, 우수한 안정성을 나타낸다.As described in detail above, the present invention provides a composition for inhibiting elastase and a skin wrinkle and elasticity improvement comprising the extract as an active ingredient. The extract of the present invention has excellent elastase inhibition and fibroblast proliferation effect, in particular, the fraction of water or chloroform of the extract has excellent elastase inhibitory activity. Cosmetic composition containing the extract of the present invention as an active ingredient is excellent in improving the skin wrinkles and skin elasticity, and shows excellent stability.
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