KR100536108B1 - Acid tolerant Leuconostoc mesenteroides isolated from Kimchi and method for producing a tasty Kimchi using the same - Google Patents
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Abstract
본 발명은 저온에서 최적으로 숙성시켜 가장 맛이 좋은 김치에서 분리한 내산성 류코노스톡 메센테로이드 균주, 그리고 상기 균주와 혈압강하 및 긴장완화 기능을 갖는 가바를 첨가하여 맛과 기능성이 향상된 김치의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따라 제조된 김치는 일반적인 유산균 균주를 첨가하여 제조된 김치와 비교할 때 맛에 있어 우수할 뿐만 아니라, 기능성도 우수하다는 효과를 갖고 있다. The present invention is a method of producing kimchi improved taste and functionality by the addition of acid-resistant leukonostock mesentoid strain isolated from the most delicious kimchi by aging optimally at low temperature, and Gaba having the strain and blood pressure lowering and relaxation function It is about. Kimchi prepared according to the present invention has an effect not only excellent in taste, but also excellent in functionality when compared with kimchi prepared by adding a general lactic acid bacteria strain.
Description
본 발명은 김치에서 분리한 내산성 류코노스톡 메센테로이드 균주 및 이를 이용한 김치의 제조방법에 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 저온에서 최적으로 숙성시켜 가장 맛이 좋은 김치에서 분리한 내산성 류코노스톡 메센테로이드 균주, 그리고 상기 균주와 혈압강하 및 긴장완화 기능을 갖는 가바를 첨가하여 맛과 기능성이 향상된 김치의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing an acid-resistant leukonostock mesentoid strain isolated from kimchi and a method of preparing kimchi using the same, more specifically, an acid-resistant leukonostock mesene separated from the most delicious kimchi by aging optimally at low temperature. The present invention relates to a method for producing kimchi with improved taste and functionality by adding a steroid strain and Gabba having a blood pressure lowering and relaxation function with the strain.
김치는 주원료인 절임 배추에 고춧가루, 마늘, 생강, 파 및 무 등을 혼합한 후, 제품의 보존성과 숙성도를 확보하기 위하여 저온에서 발효시킨 식품으로서, 우리나라 고유의 대표적인 전통발효식품이다. 1990년대까지만 해도 김치는 주로 가정에서 자체적으로 생산이 되어온 식품이었으나, 급속한 경제성장과 국민 소득의 증가, 산업구조 및 생활환경의 변화에 의하여 1990년대 이후 본격적으로 상품화되기 시작하였다. 최근에는 상품김치에 대한 인식의 개선과 함께 국내 수요량과 수출량이 꾸준히 증가하고 있는 추세에 있다. 그러나, 상품화되고 있는 김치의 경우 김치의 발효를 주도하고 김치 특유의 맛을 내는 자연발생적 균주들이 원재료의 산지, 계절, 발효 조건에 따라 달라지게 되어 상품김치의 품질이나 맛을 원하는 상태로 일정하게 유지하기가 대단히 어려웠다. 또한, 대부분 숙성된 상태에서 판매가 되기 때문에 맛이 쉽게 변질되는 문제점이 있었다. 따라서, 품질과 맛이 일정하면서도 우수한 상품김치에 대한 개발이 요구되고 있는 실정이다. Kimchi is fermented at low temperature to ensure the preservation and maturity of the product after mixing red pepper powder, garlic, ginger, green onion and radish with pickled cabbage which is the main raw material, and is a representative traditional fermented food unique to Korea. Until the 1990s, kimchi was mainly produced at home, but it began to be commercialized since the 1990s due to rapid economic growth, increased national income, and changes in industrial structure and living environment. Recently, domestic demand and export volume have been steadily increasing along with improved awareness of commodity kimchi. However, in the case of kimchi being commercialized, naturally occurring strains that lead the fermentation of kimchi and produce the unique taste of kimchi vary depending on the origin, season, and fermentation conditions of the raw materials. It was very difficult to do. In addition, there is a problem that the taste is easily changed because it is sold in the most mature state. Therefore, the development of excellent kimchi with a constant quality and taste is required.
한편, 겨울철 김장김치의 시원하고 깊은 맛을 내는 주된 요인은 김치를 저온에서 숙성 시켰을 때 유산균 중 이상젖산발효균(heterofermentative lactic acid bacteria)인 류코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) 균주가 증가하기 때문이다(So M.H. and Kim Y.B., Korean J. Food Sci. Technol., 27(4):495-505, 1995; So M.H. and Kim Y.B., Korean J. Food Sci. Technol., 27(4):506-515, 1995). 이 류코노스톡 메센테로이드 균주는 김치 제조시 초기부터 생육을 시작하여 이산화탄소, 젖산, 초산, 에탄올 및 기타 휘발성 대사 산물을 생산하여 김치를 복합적이며 독특한 풍미를 지닌 상태로 발효시킨다. 또한, 생산된 이산화탄소로 하여금 김치내부를 혐기적 조건으로 유지시켜 호기성 세균의 번식을 강력히 억제시킴으로써 정상적인 김치발효가 되게 한다. 김치의 발효중기에 이르면 이 류코노스톡 메센테로이드 균주의 수가 급격히 감소되며 정상젖산발효균(homofermentative lactic acid bacteria)인 락토바실러스 플란타리움(Lactobacillus plantarium) 균주가 왕성히 증식하게 된다. 락토바실러스 플란타리움 균주는 김치의 신맛을 내는 주된 균이며 산패에 관여한다고도 알려져 있다. 이 락토바실러스 플란타리움 균주는 젖산을 다량으로 생성하고 pH 3.0의 산성 환경에서도 생육이 가능하다. 따라서, 김치의 발효 말기부터는 상대적으로 산에 약한 균주인 류코노스톡 메센테로이드 균주의 생육은 감소되면서 신맛의 원인균인 락토바실러스 플란타리움 균주의 생육이 증가되고 이에 따라 김치의 시원하고 깊은 맛이 사라지게 된다.On the other hand, the main reason for the cool and deep taste of kimjang kimchi in winter is the increase in the strain of Leuconostoc mesenteroides , a heterofermentative lactic acid bacterium, among the lactic acid bacteria when it is aged at low temperature ( So MH and Kim YB, Korean J. Food Sci.Technol . , 27 (4): 495-505, 1995; So MH and Kim YB, Korean J. Food Sci.Technol . , 27 (4): 506-515, 1995). This leukonostock mesentoid strain starts growing from the beginning when making kimchi and produces carbon dioxide, lactic acid, acetic acid, ethanol and other volatile metabolites to ferment kimchi in a complex and unique flavor. In addition, the produced carbon dioxide maintains the kimchi in anaerobic conditions to strongly inhibit the growth of aerobic bacteria to be normal kimchi fermentation. As the fermentation time of kimchi reaches the fermentation rate, the number of leukonostock mesentoid strains is drastically reduced, and the Lactobacillus plantarium strain, a homofermentative lactic acid bacterium, grows vigorously . The Lactobacillus plantarium strain is known to be a major bacterium that makes kimchi sour and is involved in rancidity. This Lactobacillus plantarium strain produces a large amount of lactic acid and can grow in an acidic environment of pH 3.0. Therefore, from the end of the fermentation of kimchi, the growth of the relatively weak acid leuconosstock mesenteroid strain is reduced, so that the growth of Lactobacillus plantarium strain, which is a causative agent of sourness, is increased, and thus the cool and deep taste of kimchi disappears. do.
따라서, 김치내 류코노스톡 메센테로이드 균주의 생육을 유지시키면서 김치의 신맛을 내는 주된 원인균인 락토바실러스 플란타리움 균주의 생육을 억제하여 김장김치의 깔끔한 맛을 재현하는 것이 품질과 맛이 좋은 김치를 생산할 수 있는 주요 관건이라 할 수 있다. Therefore, while suppressing the growth of Lactobacillus plantarium strain, which is the main causative bacterium that makes kimchi sour while maintaining the growth of leuconosstock mesentroid strains in kimchi, reproducing the clean taste of kimchi kimchi with good quality and taste It is a key factor to produce.
최근에는 김치에서 유래되는 유산균을 분리한 후, 김치 제조시 스타터(starter)로 첨가함으로써 김치의 맛과 발효를 조절하려는 연구들이 많이 진행되고 있다. 즉, 대한민국특허 제 1989-4894호에는 차아염소산나트륨과 류코노스톡 메센테로이드 균주를 첨가하여 산패가 억제되고 보존성이 연장된 김치를 제조하는 방법이 개시된 바 있고, 대한민국특허 제 0181009호에는 류코노스톡 파라메센테로이드와 류코노스톡 메센테로이드 균주를 혼합 첨가함으로써 맛이 좋을 뿐만 아니라 락토바실러스 속 균주의 생육을 억제하여 산패가 지연되도록 한 김치의 제조방법이 개시된 바 있는 등 류코노스톡 메센테로이드를 이용하여 김치의 품질을 향상시키려는 연구가 진행되었다. 그러나, 류코노스톡 파라메센테로이드와 류코노스톡 메센테로이드의 혼합균주를 사용하는 경우 락토바실러스 플란타리움 균주의 생육은 억제되었으나 혼합배양의 경우 각각의 균주를 분리 배양하여 첨가해야 하는 등 기술적 적용성과 편리성이 저하된다는 문제점이 있다. 또한, 류코노스톡 메센테로이드 균주는 내산성이 약하기 때문에 단독 첨가시 김치의 발효가 점차 진행되면서 균주의 수가 감소되고, 상대적으로 산에 강한 균주인 락토바실러스 플란타리움 균주의 생육은 억제되지 않아 김치의 신선한 맛을 지속적으로 유지시킬 수 없다는 문제점이 있었다. Recently, many studies have been conducted to control the taste and fermentation of kimchi by separating lactic acid bacteria derived from kimchi and adding it as a starter during the production of kimchi. That is, Korean Patent No. 1989-4894 discloses a method of preparing kimchi with suppressed rancidity and extended shelf life by adding sodium hypochlorite and leuconosstock mesenteroid strains, and Korean Patent No. 0181009 By mixing and adding paramesenteroids and leukonostock mesenteroid strains, a method of preparing kimchi that delays the growth of lactobacillus strains and delays rancidity has been disclosed. A study was conducted to improve the quality of kimchi. However, the growth of Lactobacillus plantarium strains was inhibited in the case of using the mixed strains of the leukonostock paramesenteroid and the leukonostock mesenteroid, but in the case of the mixed culture, each strain must be separately cultured and added. There is a problem that the convenience is lowered. In addition, since the leuconosstock mesenteroid strain has a weak acid resistance, fermentation of kimchi proceeds gradually when added alone, and the number of strains decreases, and growth of Lactobacillus plantarium strain, which is relatively acid-resistant, is not inhibited. There was a problem that can not keep the fresh taste continuously.
따라서, 이러한 문제점들을 극복하기 위하여 대한민국특허 제 1996-1940호에서는 류코노스톡 속 균주의 내산성을 향상시키기 위하여 류코노스톡 속 균주를 자외선 처리하여 내산성 변이균주를 제조하였고, 이를 김치 제조시 스타터로 첨가한 결과 김치의 관능성을 향상시키고 김치의 산패를 지연시켰다. 그러나, 이러한 내산성 변이균주를 첨가하여 제조한 김치는 맛이 좋고 산패가 지연되기는 하였으나 김치의 신맛을 내는 주원인균이면서 강력한 내산성 균주인 락토바실러스 플란타리움의 생육이 억제됨을 보이지는 못했다. Therefore, in order to overcome these problems, in Korean Patent No. 1996-1940, in order to improve acid resistance of the strains of the genus leuconosstock, the strains of the genus leuconosstock were UV-treated to prepare acid-resistant mutant strains, which were added as starters in the production of kimchi. As a result, it improved the sensory of kimchi and delayed rancidity of kimchi. However, kimchi prepared by adding these acid-resistant mutant strains tasted good and delayed rancidity, but did not show that the growth of Lactobacillus plantarium, which is the main cause of kimchi's sour taste and a strong acid-resistant strain, was suppressed.
한편, 가바(GABA; γ-aminobutyric acid)는 포유류의 뇌속에 존재하는 아미노산으로서 글루타메이트 디카르복실라아제(Glutamate decarboxylase)에 의해 글루타메이트로부터 생성되는 신경전달물질이다. 특히, 혈관의 운동을 활성화시켜 혈압을 저하시키고(Kayahara H. and Sgiura D., Food & Development., 36(6):4-6, 2001), 뇌기능 개선작용을 하여 정신안정 및 학습능력을 증가시킨다고 알려져 있다(Ishikawa K. and Saito S., Psychopharmacology, 56:127-131, 1978; Akaga T., Food & development, 36(6):7-9, 2001). 김치의 맛뿐만 아니라 기능성을 향상시키기 위한 일환으로 이러한 가바가 다량 함유된 김치가 개발된 바 있으나(대한민국 특허출원 제 2001-14638호) 대두단백질이나 두류 등을 첨가하여 간접적으로 가바가 김치 내에서 생산되게 하였기 때문에, 대두나 두류 등에 의해 김치 고유의 맛이 없어질 수도 있다는 문제점이 있었다.Meanwhile, GABA (γ-aminobutyric acid) is an amino acid present in the brain of a mammal and is a neurotransmitter produced from glutamate by glutamate decarboxylase. In particular, it activates the movement of blood vessels to lower blood pressure (Kayahara H. and Sgiura D., Food & Development ., 36 (6): 4-6, 2001), and improves brain function to improve mental stability and learning ability. It is known to increase (Ishikawa K. and Saito S., Psychopharmacology , 56: 127-131, 1978; Akaga T., Food & development , 36 (6): 7-9, 2001). As a part of improving the taste as well as the functionality of kimchi, kimchi containing a large amount of Gaba has been developed (Korean Patent Application No. 2001-14638), but indirectly produced in Gabba Kimchi by adding soy protein or soybeans. Because of this, there was a problem that the taste of kimchi may be lost by soybeans or soybeans.
김치의 기능적인 측면을 향상시키려는 연구가 활발해 지면서 장내균총 개선 효과 있는 키토산을 첨가한 김치, 수삼의 약리효과를 이용한 수삼김치 등과 같이 다양한 형태의 기능성 김치에 대한 연구가 진행되고 있다. 그러나, 상기 연구들에서 사용된 첨가물들의 경우 그 기능성들이 입증은 되었으나 유효농도로 첨가할 경우 김치의 풍미에 영향을 주기 때문에 실용화되지는 못하고 있는 실정이다. As researches to improve the functional aspects of kimchi have been actively conducted, researches on various types of functional kimchis such as kimchi added chitosan, which improves the intestinal flora, and ginseng kimchi using the pharmacological effects of fresh ginseng are being conducted. However, in the case of the additives used in the above studies, the functionalities have been proved, but when added to the effective concentration has not been put to practical use because it affects the flavor of kimchi.
본 발명자들은 연중 김치의 시원하고 깔끔한 맛을 유지하면서도 기능성을 갖는 김치를 제조하기 위하여 연구를 수행하던 중, 저온숙성된 맛이 좋은 김치로부터 내산성 유산균 균주를 분리하였고, 상기 분리한 내산성 유산균 균주와 가바를 첨가함으로써 맛과 함께 기능성이 향상된 김치를 제조하는 방법을 개발하였으며, 상기 방법으로 제조된 김치가 일반적인 류코노스톡 메센테로이드 균주를 첨가한 김치와 비교하여 맛이 월등히 좋음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.The inventors of the present invention while conducting research to produce a kimchi having a functional while maintaining the cool and clean taste of kimchi throughout the year, the acid-resistant lactic acid bacteria strain was isolated from the low-temperature matured taste of kimchi, the isolated acid-resistant lactic acid bacteria strain and Gabba It was developed a method of producing kimchi with improved taste and functionality by the addition of, and completed the present invention by confirming that the kimchi prepared by the method is much better taste compared to kimchi added to the general leuconosstock mesentoid strains It was.
본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 저온숙성된 맛이 좋은 김치로부터 분리된 내산성 유산균 균주 및 상기 균주를 이용하여 맛과 기능성이 우수한 김치를 제조하는 방법을 제공하는 것이다. The technical problem to be achieved by the present invention is to provide a acid-resistant lactic acid bacteria strain isolated from low-temperature ripened taste kimchi and a method for producing kimchi excellent in taste and functionality using the strain.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 김치에서 분리된 pH 3.5-5.0에서 내산성을 갖으며 젖산 생성능이 낮은 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211(Leuconostoc mesenteroides DRC 0211)(기탁번호 : KFCC-11318)을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention has a acid resistance at pH 3.5-5.0 isolated from kimchi and low lactic acid production ability of the leuconosstock mesenteroid DRC 0211 ( Leuconostoc mesenteroides DRC 0211) (Accession Number: KFCC-11318) To provide.
또한, 본 발명은 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211(Leuconostoc mesenteroides DRC 0211; KFCC-11318) 균주 또는 그의 배양액과 가바(GABA; γ-aminobutyric acid)를 첨가하는 것을 특징으로 하는 김치의 제조방법을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a method for producing kimchi, characterized by adding a Leuconostoc mesenteroides DRC 0211 (KFCC-11318) strain or its culture solution and GABA (γ-aminobutyric acid). .
이하 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211(Leuconostoc mesenteroides DRC 0211; KFCC-11318) 균주 또는 그 배양액과 가바(GABA;γ- aminobutyric acid)를 첨가하여 김치를 제조하는 방법을 제공하는 것을 특징으로 한다.The present invention is characterized by providing a method for producing kimchi by adding Leuconostoc mesenteroides DRC 0211 (KFCC-11318) strain or its culture solution and GABA (γ-aminobutyric acid).
본 발명에서는 깔끔하고 시원한 맛을 갖는 김치를 제조하기 위하여 김치가 가장 맛있을 때 생육되는 균주를 분리하였다. 김치의 시원하고 깔끔한 맛을 재현시킬 수 있는 균주의 분리를 위한 김치로는 저온에서 숙성되고, pH가 4.3-4.5 범위에 있으며, 산도가 0.6-0.8% 범위에 있는 김치를 사용하는 것이 바람직하다. 구체적으로 본 발명에서는 -1℃에서 숙성되고, pH가 4.46, 산도가 0.7%인 김치로부터 유산균을 분리하였고, 상기 분리된 유산균의 동정을 수행하였다. 그 결과, 류코노스톡 메센테로이드에 속하는 균주임을 확인할 수 있었고, 이 균주를 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211이라 명명하였으며, 상기 균주를 한국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms)에 2002년 11월 22일자로 기탁하였다(기탁번호 : KFCC-11318). In the present invention, to produce kimchi having a clean and cool taste was isolated strain grown when kimchi is the most delicious. Kimchi for the separation of strains that can reproduce the cool and clean taste of kimchi is aged at low temperatures, pH is in the 4.3-4.5 range, it is preferable to use kimchi in the acidity range of 0.6-0.8%. Specifically, lactic acid bacteria were isolated from kimchi aged at -1 ° C, pH 4.46, and acidity 0.7%, and the lactic acid bacteria were identified. As a result, it could be confirmed that the strain belonging to the leuconostock mesentoid, and the strain was named the leukonostock mesentoid DRC 0211, and the strain was assigned to the Korean Culture Center of Microorganisms. It was deposited on the date (Accession No .: KFCC-11318).
본 발명은 상기 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주를 제공하는 것을 특징으로 한다. 일반적으로 류코노스톡 메센테로이드 균주는 산성 조건, 특히 pH 4.0 이하에서 증식이 급격히 저하되나 본 발명에 따른 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주는 pH 3.5-5.0의 산성 조건에서 내산성을 갖고 있으며, 특히 pH 3.5에서 생육하여 내산성이 강한 것으로 나타났다. 또한 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211를 이용하여 김치를 제조하는 경우 김치의 산도 증가 속도가 완만하며 김치내 젖산 생성량이 종래 류코노스톡 메센테로이드에 비하여 상대적으로 낮은 것으 로 나타났다. 따라서 김치 제조시 본 발명에서 분리된 균주 또는 그 배양액을 이용하는 경우에는 산패가 억제되고 적정 숙도를 유지하는 기간이 연장되어 좋은 김치맛을 오래 유지할 수 있게 된다. The present invention is characterized in that the present invention provides a strain of leukonostock mecetheroid DRC 0211. In general, the proliferation of leuconosstock mesentoid strains is sharply lowered under acidic conditions, especially pH 4.0 or less, but the leuconosstock mesentoid DRC 0211 strain according to the present invention has acid resistance under acidic conditions of pH 3.5-5.0, especially pH It grew at 3.5 and showed strong acid resistance. In addition, when kimchi was prepared using the leukonostock mecetheroid DRC 0211, the rate of acidity increase of kimchi was slow and the lactic acid production in kimchi was relatively lower than that of the conventional leuconostock mecetheroid. Therefore, when using the isolated strain or the culture medium in the present invention when manufacturing kimchi is suppressed rancidity is extended to maintain a proper maturity it is possible to maintain a good kimchi for a long time.
본 발명에 따른 김치 제조시 상기 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주를 직접 김치에 첨가할 수도 있으나, 균주의 배양액 형태로 첨가하는 것이 바람직하다. 본 발명의 김치 제조시 사용되는 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주의 배양액은 상기 균주를 펩톤, 효모 추출액, 포도당이 2:1:2의 비율로 첨가된 영양배지에 접종한 후 25-30℃에서 18-24시간 동안 1차 전배양하는 단계; 상기 1차 전배양액을 멸균된 배추즙에 0.5-1.0%(v/v) 접종한 후 25-30℃에서 18-24시간 동안 2차 전배양하는 단계; 상기 2차 전배양액을 멸균된 배추즙에 0.5-1.0%(v/v) 접종한 후 25-30℃에서 18-24시간 동안 본배양하는 단계를 거쳐 제조되는 것이 바람직하다.When manufacturing kimchi according to the present invention may be added directly to the kimchi leuconosstock mesenteroid DRC 0211 strain, it is preferable to add in the form of culture of the strain. Culture medium of the leukonostock mecetheroid DRC 0211 strain used in the production of kimchi of the present invention is inoculated into the nutrient medium containing the peptone, yeast extract, glucose 2: 1: 2 ratio at 25-30 ℃ Primary preculture for 18-24 hours; Inoculating the primary preculture with 0.5-1.0% (v / v) in sterilized cabbage juice and then performing secondary preculture at 25-30 ° C. for 18-24 hours; After inoculating 0.5-1.0% (v / v) in the sterile cabbage juice, the secondary pre-culture solution is preferably prepared through the main culture step for 25-18 ℃ for 18-24 hours.
본 발명에 따른 김치 제조시 첨가되는 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주를 가장 효과적으로 배양하기 위해서는 상기 균주를 천연배지인 멸균된 배추즙에서 배양하는 것이 바람직하다. 상기 멸균된 배추즙은 절임배추를 분쇄하고 착즙한 후, 효과적인 균주의 생육을 위하여 염농도를 2.5-3.0%로 조정하고, 포도당을 1.0-2.0%(w/v) 첨가하여 제조되는 것이 바람직하며, 구체적으로 염농도를 2.8%로 조정하고 포도당을 1.0%(w/v) 첨가하는 것이 가장 바람직하다.In order to most effectively cultivate the leukonostock mecetheroid DRC 0211 strain added during the production of kimchi according to the present invention, it is preferable to culture the strain in sterilized cabbage juice, which is a natural medium. The sterilized Chinese cabbage juice is preferably prepared by grinding the pickled cabbage and juice, adjusting the salt concentration to 2.5-3.0% for growth of effective strain, and adding 1.0-2.0% (w / v) of glucose, Specifically, it is most preferable to adjust the salt concentration to 2.8% and add 1.0% (w / v) of glucose.
이와 같이 제조된 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주의 배양액은 본 발명에 따른 김치 제조시 가바와 함께 첨가되는데, 상기 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주의 배양액은 김치 전체 중량에 대해 0.5-5중량% 첨가되는 것이 바람직하고, 가바는 김치 전체 중량에 대해 0.12-0.35중량% 첨가되는 것이 바람직하다. The culture solution of the leukonostock mecetheroid DRC 0211 strain prepared as described above is added together with Gaba when preparing kimchi according to the present invention, and the culture solution of the leukonostock mecetheroid DRC 0211 strain is 0.5-5% by weight based on the total weight of kimchi. It is preferable to add, and it is preferable that GABA is added 0.12-0.35 weight% with respect to the kimchi total weight.
상기에서 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주의 배양액이 김치 전체 중량에 대하여 0.5중량% 미만으로 첨가되면 균주에 의한 효과가 미미하고, 5중량%를 초과하여 첨가하게 되면 김치의 풍미가 저하되고 김치가 과숙성되는 문제점이 발생할 수 있기 때문에 상기 범위로 첨가하는 것이 바람직하며, 구체적으로는 1중량% 첨가하는 것이 가장 바람직하다. 또한, 가바가 김치 전체 중량에 대하여 0.12중량% 미만으로 첨가되면 가바에 의한 효과가 미미하게 되고, 0.35중량%를 초과하여 첨가하게 되면 김치의 풍미가 저하될 수 있기 때문에 상기 범위로 첨가하는 것이 바람직하며, 구체적으로는 0.12중량% 첨가하는 것이 가장 바람직하다.When the culture medium of the leukonostock mecetheroid DRC 0211 strain is added less than 0.5% by weight relative to the total weight of kimchi, the effect of the strain is insignificant, and when added in excess of 5% by weight, the flavor of kimchi is lowered and the kimchi is reduced. It may be preferable to add the above-mentioned range because the problem of over-maturation may occur, and it is most preferable to add 1% by weight. In addition, when the GABA is added in less than 0.12% by weight relative to the total weight of kimchi, the effect of the GABA is insignificant, and when added in excess of 0.35% by weight may reduce the flavor of kimchi is preferably added in the above range. Specifically, it is most preferable to add 0.12% by weight.
이상과 같이 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주와 가바를 첨가하여 제조된 김치는 깔끔하고 상쾌한 맛을 낼뿐만 아니라, 신맛이 억제되어 맛을 오래 보존할 수 있으며 혈압강하 및 긴장완화 효과를 갖고 있다는 특징이 있다.Kimchi prepared by adding the leukonostock mecetheroid DRC 0211 strain and Gaba as described above not only has a refreshing and refreshing taste, but also has a sour taste that can be preserved for a long time, and has a blood pressure lowering and relaxation effect. have.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.
<실시예 1><Example 1>
저온에서 숙성된 맛이 우수한 김치로부터 유산균의 분리Isolation of Lactic Acid Bacteria from Kimchi with Superior Taste at Low Temperature
통상적인 방법으로 여러 종류의 김치를 제조한 후, 가장 맛이 좋다고 평가되는 김치를 선택하였다. 이 김치를 -1℃의 저온에서 숙성시킨 후(도 1 참조), pH 4.46 산도 0.7%가 되는 시기에 관능평가를 실시하여 가장 풍미가 우수한 시점의 김치를 유산균 분리 김치시료로 사용하였다. 상기 김치시료를 0.85% 식염수로 10배 희석하였고, 0.1ml씩 PES 아가(Penylethyl alcohol sucrose agar; tryptone 5g, yeast extract 0.5g, sucrose 20g, ammonium sulfate 2g, dipotassium phosphate 1g, magnesium sulfate 0.244g, phenylethyl alcohol 2.5ml, agar 15g/D.W. 1L) 플레이트에 접종한 후, 유리막대로 도말하였다. 상기 김치시료가 도말된 아가 플레이트를 25℃의 항온배양기에서 1일 동안 배양한 후, 생성된 각각의 콜로니를 PES 아가 플레이트에 획선 접종하였고, 25℃에서 1일 동안 배양하여 유산균 균주를 분리하였다. After making various kinds of kimchi by the conventional method, the kimchi which is evaluated to be the most delicious was selected. After the kimchi was aged at a low temperature of -1 ° C (see FIG. 1), the sensory evaluation was performed at a pH of 4.46 acidity of 0.7%, and the kimchi at the most flavorful time was used as a lactic acid bacterium separating kimchi sample. The kimchi sample was diluted 10-fold with 0.85% saline, and 0.1 ml of PES agar (Penylethyl alcohol sucrose agar; tryptone 5g, yeast extract 0.5g, sucrose 20g, ammonium sulfate 2g, dipotassium phosphate 1g, magnesium sulfate 0.244g, phenylethyl alcohol 2.5 ml, agar 15 g / DW 1 L) plate was inoculated, and then plated with a glass rod. After agar plated with the kimchi sample incubated for 1 day in a 25 ℃ incubator, each colony was inoculated into the PES agar plate, and incubated for 1 day at 25 ℃ to isolate the lactic acid bacteria strains.
<실시예 2><Example 2>
김치에서 분리한 유산균 중 내산성 균주 분리Isolation of Acid-resistant Strains among Lactic Acid Bacteria Isolated from Kimchi
상기 실시예 1에서 분리된 각 유산균 콜로니를 젖산(lactic acid)으로 pH 3.5, 4.0, 4.5, 5.0으로 조정한 MRS 브로스(MRS broth, Difco.; bacto peptone 10g, beef extract 10g, yeast extract 5g, glucose 2 0g, tween 80 1g, ammonium citrate 2g, dipotassium phosphate 2g, sodium acetate 5g, manganese sulfate 0.1g, magnesium sulfate 0.05g/D.W. 1L) 5ml에 각각 접종한 후 25℃에서 72시간 배양하면서 생육유무를 관찰하여 상기 pH 범위에서도 생육이 활발한 내산성 균주를 선별하였다. 상기 내산성 유산균 균주는 pH 3.5-5.0에서 생육이 활발하며, 특히 pH 3.5에서 생육하여 내산성이 강한 것으로 나타났다. In Example 1 above MRS broth (MRS broth, Difco .; bacto peptone 10g, beef extract 10g, yeast extract 5g, glucose 2 0g, tween 80) with lactic acid colonies isolated to pH 3.5, 4.0, 4.5, 5.0 1g, ammonium citrate 2g, dipotassium phosphate 2g, sodium acetate 5g, manganese sulfate 0.1g, magnesium sulfate 0.05g / DW 1L), respectively, inoculated in 5ml and incubated at 25 ℃ for 72 hours to observe the growth and growth at the above pH range This active acid resistant strain was selected. The acid-resistant lactic acid bacteria strains were actively grown at pH 3.5-5.0, especially at pH 3.5, which showed strong acid resistance.
<실시예 3><Example 3>
김치에서 분리한 내산성 유산균 균주의 동정Identification of Acid-resistant Lactic Acid Bacteria Isolated from Kimchi
상기 실시예 2에서 분리된 내산성 유산균 균주와 이외 실시예 1에서 분리된 다른 유산균 균주들을 각각 단일 콜로니로 분리한 후, 버기의 분류 세균학 매뉴얼(Bergy's manual of systematic bacteriology)에 준하여 형태학적, 생화학적 특성을 조사하였고, 그람 염색을 수행하였다. 그 결과, 상기 분리된 균주들이 모두 그람 양성 균주이며 구균의 형태를 갖고 있음을 확인할 수 있었다. The acid-resistant lactic acid bacteria strain isolated in Example 2 and the other lactic acid bacteria strains isolated in Example 1 were separated into single colonies, respectively, followed by morphological and biochemical characteristics according to the Buggy's manual of systematic bacteriology. Was examined and Gram staining was performed. As a result, it was confirmed that all the isolated strains were Gram-positive strains and had the form of cocci.
이후, 상기 균주들을 API 시스템(API system; La Balme-les-Grottes, France)으로 동정하였다. 우선, 멸균 백금이로 균 콜로니를 취한 후 멸균 증류수 2ml에 부유시키고, 다시 멸균 증류수 5ml에 API 50CH 키트(BioMerieux, France)에서 제공되는 맥팔란드 표준 용액 No.2(MccFaland Standard Solution No.2)의 농도로 균액을 부유시켰다. 상기 부유액을 API 50CH 키트의 액체배지에 첨가하여 균질화 시킨 후, API 50CH 키트의 50개 각 튜브에 200㎕씩 접종하였다. 미네랄 오일로 튜브 위를 엎어준 후, 30℃에서 48시간 동안 배양시켰다. 상기 배양액을 API 시스템으로 분석하여 49종의 탄수화물 발효패턴을 확인한 후, 이 결과를 ATB 동정 컴퓨터 시스템에 입력하여 동정하였다. Thereafter, the strains were identified by an API system (La Balme-les-Grottes, France). First, the bacterial colonies were taken with sterile platinum, and then suspended in 2 ml of sterile distilled water, and again in 5 ml of sterile distilled water of McFarland Standard Solution No. 2 (MccFaland Standard Solution No. 2) provided by API 50CH kit (BioMerieux, France). The bacterial solution was suspended at the concentration. The suspension was added to the liquid medium of the API 50CH kit for homogenization, and then 200 µl of each 50 tubes of the API 50CH kit was inoculated. After injecting over the tube with mineral oil, it was incubated for 48 hours at 30 ℃. The culture was analyzed by the API system to confirm 49 carbohydrate fermentation patterns, and the results were identified by inputting the ATB identification computer system.
그 결과, 상기 실시예 2에서 분리한 내산성 균주는 하기 표 1의 탄수화물 발효패턴을 갖고 있는, 류코노스톡 메센테로이드에 속하는 균주인 것으로 판명되었다. 또한, 상기 내산성 균주 이외에 분리된 다른 류코노스톡 메센테로이드 균주들은 동정 결과 일반적인 류코노스톡 메센테로이드 균주의 특성을 갖고 있음을 확인할 수 있었으며, 이중 한 개를 류코노스톡 메센테로이드 0-20으로 명명하고 이후 비교실험에서 대조군 김치 제조시 사용하였다. 상기 류코노스톡 메센테로이드 0-20 균주의 탄수화물 발효패턴 결과는 표 2에 나타내었다.As a result, the acid resistant strain isolated in Example 2 was found to be a strain belonging to the leuconosstock mesentoid, which has a carbohydrate fermentation pattern of Table 1 below. In addition, it was confirmed that the other leuconosstock mesentoid strains isolated in addition to the acid resistant strains had the characteristics of the general leuconosstock mesentoid strains, and one of them was named leuconosstock mesentoid 0-20. Since it was used to prepare a control kimchi in a comparative experiment. Carbohydrate fermentation pattern results of the leukonostock mesentoid 0-20 strain are shown in Table 2.
한편, 상기에서 분리된 내산성 균주의 16S rRNA의 염기서열을 분석한 결과, 류코노스톡 메센테로이드와 99% 동일성을 가짐을 확인할 수 있었다. 본 발명에서는 류코노스톡 메센테로이드와 99% 동일성을 갖는 균주를 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211로 명명하였고, 이를 한국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms)에 2002년 11월 22일자로 기탁하였다(기탁번호 : KFCC-11318).On the other hand, as a result of analyzing the nucleotide sequence of the 16S rRNA of the acid resistant strain isolated from the above, it was confirmed that it has 99% identity with the leukonostock mesentoid. In the present invention, the strain having a 99% identity with the leukonostock mesentaroid is named as leuconostock mesentaroid DRC 0211, which was deposited on November 22, 2002 to the Korean Culture Center of Microorganisms ( Accession number: KFCC-11318).
<실시예 4><Example 4>
김치에서 분리한 내산성 유산균 균주와 종래 유산균 균주의 내산성 비교Comparison of Acid Resistance of Acid-resistant Lactic Acid Bacteria Isolated from Kimchi and Conventional Lactic Acid Bacteria
상기 실시예 2에서 분리된 내산성 유산균 균주(류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211균주)와 종래 공지된 유산균 균주인 류코노스톡 메센테로이드 KCCM 11324 및 류코노스톡 속 균주 KFCC 10774의 내산성 정도를 비교하였다. The acid resistance levels of the acid-resistant lactic acid bacteria strains (leukonostock mesenteroid DRC 0211 strains) isolated in Example 2 and the conventionally known lactic acid bacteria strains of leukonostock mesentoid KCCM 11324 and the strains of the genus Lyukonostok strain KFCC 10774 were compared.
상기 각 유산균을 젖산(lactic acid)으로 pH 3.2, 3.5, 4.0, 5.0으로 조정한 MRS 브로스(MRS broth, Difco.; bacto peptone 10g, beef extract 10g, yeast extract 5g, glucose 2 0g, tween 80 1g, ammonium citrate 2g, dipotassium phosphate 2g, sodium acetate 5g, manganese sulfate 0.1g, magnesium sulfate 0.05g/D.W. 1L) 10ml에 각각 접종한 후 25℃에서 72시간 배양하면서 생육유무를 관찰하여 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. MRS broth adjusted to pH 3.2, 3.5, 4.0, 5.0 with lactic acid (MRS broth, Difco .; bacto peptone 10g, beef extract 10g, yeast extract 5g, glucose 2 0g, tween 80 1g, Ammonium citrate 2g, dipotassium phosphate 2g, sodium acetate 5g, manganese sulfate 0.1g, magnesium sulfate 0.05g / DW 1L) inoculated respectively in 10ml and incubated at 25 ℃ for 72 hours to observe the growth and the results are shown in Table 3 Indicated.
상기 표 3에 기재되어 있는 바와 같이, 본 발명에서 분리 동정한 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211은 종래 류코노스톡 속 미생물에 비하여 내산성이 강하여 pH 3.5-5.0에서도 생육이 활발하게 유지됨이 확인되었다.As described in Table 3, it was confirmed that the leuconosstock mesentoid DRC 0211 isolated and identified in the present invention has strong acid resistance compared to the microorganisms of the conventional leuconosstock, so that growth is actively maintained even at pH 3.5-5.0.
<실시예 5>Example 5
류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주의 김치첨가 배양액 제조Preparation of Kimchi-Added Culture Medium of Leukonostock Mesenteroid DRC 0211 Strain
상기 실시예 2와 3에서 분리, 동정된 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주를 배양하기 위한 천연배지를 제조하였다. 우선, 절임배추를 브랜더로 분쇄, 착즙 후 재제염을 사용하여 염도가 2.8%가 되도록 조정하였다. 여기에 포도당을 1.0%(w/v) 첨가한 후, 멸균하여 배추즙을 제조하였다. In Example 2 and 3 to prepare a natural medium for culturing the isolated and identified leuconosstock mesenteroid DRC 0211 strain. First, the pickled cabbage was crushed with a brander, juiced, and then adjusted to have a salinity of 2.8% using recontamination. After adding 1.0% (w / v) of glucose thereto, sterilized cabbage juice was prepared.
류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주를 영양배지(Nutrient broth; peptone 5g, yeast extract 2.5g, glucose 5g/D.W. 1L) 5ml에 접종하여 25℃에서 24시간 1차 전배양을 하였다. 이후, 상기 1차 전배양액을 멸균된 배추즙에 1.0% 접종하여 25℃에서 24시간 동안 2차 전배양을 하였다. 상기 2차 전배양액을 다시 멸균된 배추즙에 1.0% 접종하여 25℃에서 18시간 동안 본배양하였다. The leukonostock mecetheroid DRC 0211 strain was inoculated in 5 ml of nutrient broth (Nutrient broth; peptone 5g, yeast extract 2.5g, glucose 5g / D.W. 1L) and pre-cultured at 25 ° C for 24 hours. Thereafter, the primary preculture was inoculated with 1.0% of sterilized cabbage juice and subjected to secondary preculture for 24 hours at 25 ° C. The second preculture was inoculated again 1.0% in sterilized cabbage juice was incubated for 18 hours at 25 ℃.
<실시예 6><Example 6>
김치내에서의 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주의 특성 분석 Characterization of the Leukonostock Mestheteroid DRC 0211 Strain in Kimchi
본 발명에서 분리, 동정한 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211를 이용하여 김치를 제조함으써 상기 균주가 김치 내에서 갖는 특성, 산도 변화와 젖산 생성량을 분석하였다. In the present invention, the kimchi was prepared using the isolated and identified leukonostock meceteroid DRC 0211 to analyze the characteristics, acidity changes and lactic acid production in the strain.
6-1) 김치 제조 6-1) Kimchi Manufacturing
상기 실시예 5에서 제조한 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주의 배양액을 첨가하여 일반적인 김치 제조 방법으로 김치를 제조하였다. Kimchi was prepared by a general method of preparing kimchi by adding a culture solution of the leukonostock mesenteroid DRC 0211 strain prepared in Example 5.
우선, 배추를 각각 소금으로 절여 배추의 염도가 2.3%가 되도록 한 후 절여진 배추(82.5중량%)에 고춧가루(2.5중량%), 마늘(2중량%), 생강(0.5중량%), 대파(2중량%), 무채(9중량%), 설탕(0.5중량%)의 김치 양념을 혼합하였다. 이렇게 제조된 김치에 상기 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주 배양액을 전체 김치 중량에 대해 1중량% 첨가하였다. First, salt the Chinese cabbage with salt to make the salinity of the Chinese cabbage 2.3%, and then add red pepper powder (2.5% by weight), garlic (2% by weight), ginger (0.5% by weight), and green onions to the pickled cabbage (82.5% by weight). 2 wt%), radish (9 wt%), sugar (0.5 wt%) kimchi seasoning was mixed. To the kimchi thus prepared was added 1% by weight of the leuconosstock mecetheroid DRC 0211 strain culture based on the total weight of kimchi.
이때 대조군으로 종래 공지된 류코노스톡 메센테로이드 KCCM 11324를 사용한다는 점만 제외하고는 상기와 같이 일반적인 김치 제조 방법과 동일한 방법으로 김치를 제조하였다. At this time, the kimchi was prepared in the same manner as the general kimchi production method, except that it uses a conventionally known leukonostock mecetheroid KCCM 11324 as a control.
김치제조 후 각각의 김치는 김치의 일반 숙성 온도인 20℃에서 저장하면서 산도와 젖산 생성량을 비교하였다. After making kimchi, each kimchi was stored at 20 ℃, which is the normal ripening temperature of kimchi, to compare acidity and lactic acid production.
6-2) 산도 측정 6-2) pH measurement
상기에서 제조한 본 발명의 김치와 대조군으로 사용된 김치를 대상으로 산도를 측정하여 비교하였다. 우선, 산도를 측정하기 위하여 각 김치 100g을 마쇄한 후 거즈로 여과하여 김치액을 제조하였다. 이후, 상기 김치액 20ml를 0.1N NaOH을 사용하여 pH 8.1이 되도록 중화적정한 후, 소비된 NaOH량을 젖산 함량(%)으로 환산하여 나타내었다. The kimchi of the present invention prepared above and the kimchi used as a control was compared to measure the acidity. First, in order to measure the acidity, 100 g of each kimchi was ground, and then filtered by gauze to prepare a kimchi solution. Thereafter, 20 ml of the kimchi solution was neutralized and titrated to pH 8.1 using 0.1 N NaOH, and the amount of NaOH consumed was converted to lactic acid content (%).
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주를 이용하여 제조된 김치는 20℃에서 숙성 3일째 적정 산도인 0.6% 에 도달하였고 이후 완만하게 증가가 되었었다. 반면, 류코노스톡 메센테로이드 KCCM11324 균주를 첨가한 대조군 김치는 20℃에서 숙성 2일째 적정숙도 인 0.6%에 도달한 다음 산도가 급상승되는 것으로 나타났다.As a result, as shown in Figure 2, kimchi prepared by using the leukonostock mesenteroid DRC 0211 strain according to the present invention reached the titratable acidity of 0.6% on the third day of aging at 20 ℃ 3 and then gradually increased. On the other hand, the control kimchi added with the leukonostock mecetheroid KCCM11324 strain reached the optimum maturity of 0.6% at 20 ° C. on the second day of fermentation, and then the acidity increased rapidly.
6-3) 젖산 생성량 비교 6-3) Comparison of Lactic Acid Production
상기에서 제조한 본 발명의 김치와 대조군으로 사용된 김치를 대상으로 젖산 생성량을 측정하여 비교하였다. 젖산 생성량은 산도측정에 사용된 김치즙액과 같은 방법으로 김치액을 준비한 뒤 13,000rpm, 3min간 원심분리 한 후 0.22 μm syringe filter로 여과하였다. 여과된 시료는 HPLC(High performance liquid chromatography)로 시료 20 μl를 50℃에서 0.008M H2SO4(0.5ml/min) 용매를 사용하여 분석하였다.The production of lactic acid in the kimchi prepared as described above and the kimchi used as a control was measured and compared. The amount of lactic acid produced was prepared by the same method as the kimchi juice solution used for acidity measurement, and then centrifuged for 13,000 rpm and 3 min, followed by filtration with a 0.22 μm syringe filter. The filtered sample was analyzed by HPLC (High performance liquid chromatography) 20 μl of the sample at 50 ℃ using 0.008MH 2 SO 4 (0.5ml / min) solvent.
그 결과, 하기 표 4에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주를 이용하여 제조된 김치는 20℃에서 숙성 6일째 젖산이 0.36%이고, 류코노스톡 메센테로이드 KCCM 11324 균주를 첨가한 대조군 김치는 20℃에서 숙성 6일째 0.53%로 나타났다. As a result, as shown in Table 4, kimchi prepared using the leuconosstock mesentoid DRC 0211 strain according to the present invention is 0.36% lactic acid at 6 days of aging at 20 ° C, and leuconosstock mestheroid KCCM 11324 strain. Addition of the control kimchi appeared 0.53% at 6 days of aging at 20 ℃.
따라서 본 발명에서 분리, 동정된 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주를 이용하여 김치를 제조하는 경우, 젖산 생성능이 상대적으로 낮고, 김치의 적정 숙도에 도달된 다음 산도 증가속도가 완만하여 김치의 적정 숙도를 유지하는 기간이 길어지게 된다. 즉 본 발명의 균주로 김치를 제조하는 경우 맛있는 상태의 김치가 오랜 기간 지속되며 산패로의 진행이 지연되는 효과가 있다. Therefore, when the kimchi is prepared using the isolated and identified leukonostock mecetheroid DRC 0211 strain in the present invention, the lactic acid production ability is relatively low, and the rate of acidity is gradually increased after reaching the optimum maturity of kimchi. The longer the period is maintained. In other words, when manufacturing kimchi with the strain of the present invention, kimchi in a delicious state lasts for a long time, and there is an effect of delaying the progress to rancidity.
<실시예 7><Example 7>
류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주 및 가바를 첨가한 김치의 제조Preparation of Kimchi Added with Leukonostock Mesenteroid DRC 0211 Strain and Gaba
상기 실시예 5에서 제조한 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주의 배양액과 가바(Pharma Foods International Co. Ltd.)를 첨가하여 일반적인 김치 제조 방법으로 김치를 제조하였다. The kimchi was prepared by the general method of preparing kimchi by adding the culture solution of Gluconstock stock mesenteroid DRC 0211 strain prepared in Example 5 and Gaba (Pharma Foods International Co. Ltd.).
우선, 배추를 각각 소금으로 절여 배추의 염도가 2.3%가 되도록 한 후 절여진 배추(82.5중량%)에 고춧가루(2.5중량%), 마늘(2중량%), 생강(0.5중량%), 대파(2중량%), 무채(9중량%), 설탕(0.5중량%)의 김치 양념을 혼합하였다. 이렇게 제조된 김치에 상기 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주 배양액을 전체 김치 중량에 대해 1중량% 첨가하였다. First, salt the Chinese cabbage with salt to make the salinity of the Chinese cabbage 2.3%, and then add red pepper powder (2.5% by weight), garlic (2% by weight), ginger (0.5% by weight), and green onions to the pickled cabbage (82.5% by weight). 2 wt%), radish (9 wt%), sugar (0.5 wt%) kimchi seasoning was mixed. To the kimchi thus prepared was added 1% by weight of the leuconosstock mecetheroid DRC 0211 strain culture based on the total weight of kimchi.
기존에 발표된 문헌(東口 伸二, 上野 義榮, 早川 潔, 八田 一, 金武祚, 日本農藝化學會 2001 學術大會 p.271-275; Kim M.J., Higashiguchi S., Iwamoto Y., Lee S.Y., Hurh B.S. and Lee Y.H., Proc. KMB Autumn Meeting, 2002, p.9-11)에는 최고혈압이 140이상인 고혈압환자 10명을 대상으로 가바를 100mg/1day 섭취시킨 경우 4개월 후 최고혈압이 140이하로 저하되는 효과를 보였으며, SD-래트에게 가바를 100mg/kg의 농도로 5주간 매일 투여한 경우 쥐의 학습능력 상승효과를 나타낸다고 기재되어 있다. 이를 근거로 한국인 1일 섭취하는 김치의 양이 87g이므로 유효 기능성을 갖는 가바의 농도는 0.12%이다. 따라서, 본 발명에서는 김치 제조시 가바를 김치 중량에 대해 0.12중량% 첨가하였다. 김치제조 후 각각의 김치는 10℃에서 저장하면서 산도, pH 측정 및 관능검사를 수행하였다. Previously published literature (Toguchi, Tono, Sagawa, Yada, Iwa, Kim, and Nippon Chemical Institute, p. 271-275; Kim MJ, Higashiguchi S., Iwamoto Y., Lee SY, Hurh) BS and Lee YH, Proc.KMB Autumn Meeting, 2002, p. 9-11), the highest blood pressure drops to less than 140 after 4 months when 100 mg / 1day of Gabba was administered to 10 patients with hypertension who had a peak blood pressure of 140 or higher. It has been shown that SD-rats have a synergistic effect on the learning ability of rats when Gaba is administered daily at a concentration of 100 mg / kg for 5 weeks. Based on this, the amount of Kimchi consumed daily for Koreans is 87g, so the concentration of Gaba having effective functionality is 0.12%. Therefore, in the present invention, when the kimchi is manufactured, 0.12% by weight of GABA is added to the kimchi weight. After making kimchi, each kimchi was stored at 10 ° C for acidity, pH measurement and sensory evaluation.
<비교예 1>Comparative Example 1
일반적인 류코노스톡 메센테로이드 균주를 첨가한 김치의 제조Preparation of Kimchi Added with General Leukonosstock Mesenteroid Strains
김치 제조시 상기 실시예 2와 3에서 분리, 동정된 류코노스톡 메센테로이드 O-20 균주를 사용한 것을 제외하고는 상기 실시예 7에서와 같이 일반적인 김치 제조 방법과 동일한 방법으로 김치를 제조하였고 이를 대조군으로 하여 이후 비교실험을 수행하였다. Kimchi was prepared in the same manner as in the general kimchi production method as in Example 7, except for using the isolated and identified leukonostock mecetheroid O-20 strains in Examples 2 and 3 to prepare the kimchi. After that, a comparative experiment was performed.
<실시예 8><Example 8>
김치의 산도, pH, 유산균 수 측정 및 관능검사Acidity, pH, Lactic Acid Bacteria Measurement and Sensory Evaluation of Kimchi
8-1) 산도 및 pH 측정 8-1) Acidity and pH Measurement
상기 실시예 7에서 제조한 본 발명의 김치와 비교예 1에서 제조한 대조군 김치를 대상으로 산도와 pH를 측정하여 비교하였다. 우선, pH 및 산도를 측정하기 위하여 각 김치 100g을 마쇄한 후 거즈로 여과하여 김치액을 제조하였다. 이후, 상기 김치액 20ml를 시료로 하여 pH 미터(Thermo Orion 720A., USA)로 각 김치의 pH를 측정하였다. 산도는 상기 실시예 6-2)와 동일한 방법으로 측정하였다. The kimchi of the present invention prepared in Example 7 and the control kimchi prepared in Comparative Example 1 were compared by measuring the acidity and pH. First, in order to measure pH and acidity, 100 g of each kimchi was ground and then filtered through gauze to prepare a kimchi solution. Thereafter, the pH of each kimchi was measured by using a pH meter (Thermo Orion 720A., USA) using 20 ml of the kimchi solution as a sample. Acidity was measured in the same manner as in Example 6-2.
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주와 가바를 첨가한 김치는 10℃에서 숙성 4일째 pH 4.2의 적정 pH에 도달하면서 이후 계속 유지되었다. 반면, 류코노스톡 메센테로이드 0-20 균주를 첨가한 대조군 김치는 10℃에서 숙성 3일째부터 pH가 빠르게 감소되었고, 이후 적정숙도 이하의 pH를 나타내었으며, 14일 이후에는 빠르게 pH가 내려갔다. 또한, 도 4에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따라 제조된 김치의 경우 적정산도인 0.6% 도달이후 증가율이 완만하였으나 대조군 김치는 산도가 급상승되는 것으로 나타났다.As a result, as shown in Figure 3, the kimchi added to the leuconosstock mesenteroid DRC 0211 strain according to the present invention and Gaba was maintained at a constant pH of pH 4.2 on the fourth day of fermentation at 10 ° C and subsequently maintained. On the other hand, the control kimchi containing the 0-20 strain of leukonostock mecetheroidoid decreased rapidly from the third day of fermentation at 10 ° C., and then showed a pH below the optimum maturity, and rapidly dropped after 14 days. In addition, as shown in Figure 4, in the case of kimchi prepared according to the present invention was increased slowly after reaching the optimum acidity of 0.6%, but the control kimchi acidity was shown to increase rapidly.
8-2) 유산균 수 측정 결과8-2) Lactic acid bacteria count result
상기 실시예 7에서 제조한 본 발명의 김치와 비교예 1에서 제조한 대조군 김치의 유산균 수를 측정하였다. 상기 각 김치를 0.85% 식염수로 10배 희석하였고, 류코노스톡 속 균수를 측정하는 경우, 김치 희석액 0.1ml씩을 PES 아가(Penylethyl alcohol sucrose agar; tryptone 5g, yeast extract 0.5g, sucrose 20g, ammonium sulfate 2g, dipotassium phosphate 1g, magnesium sulfate 0.244g, phenylethyl alcohol 2.5ml, agar 15g/D.W. 1L) 플레이트에 접종한 후 유리막대로 도말하였다. 또한, 락토바실러스 속 균수를 측정하는 경우, 김치 희석액 0.1ml씩을 m-LBS 아가(tryptone 10g, yeast extract 5g, glucose 20g, tween 80 1g, ammonium citrate 2g, dipotassium phosphate 6g, sodium acetate 35g, glacial acetic aicd 2.5ml, manganese sulfate 0.12g, magnesium sulfate 0.57g, iron sulfate 0.034g/D.W. 1L) 플레이트에 접종한 후 유리막대로 도말하였다. 상기 김치 희석액이 도말된 각 아가 플레이트를 25℃의 항온배양기에서 1일 동안 배양한 후, 생성된 집락의 수를 각각의 균수로 계수하였다.The number of lactic acid bacteria of the kimchi of the present invention prepared in Example 7 and the control kimchi prepared in Comparative Example 1 was measured. Each kimchi was diluted 10-fold with 0.85% saline, and when measuring the number of bacteria in the leukonostock, 0.1 ml of diluent of kimchi was added to PES agar (Penylethyl alcohol sucrose agar; tryptone 5g, yeast extract 0.5g, sucrose 20g, ammonium sulfate 2g). , dipotassium phosphate 1g, magnesium sulfate 0.244g, phenylethyl alcohol 2.5ml, agar 15g / DW 1L) plate and inoculated with glass rod. In addition, when measuring the number of bacteria in the Lactobacillus, 0.1 ml of kimchi diluent was added to each m-LBS agar (tryptone 10g, yeast extract 5g, glucose 20g, tween 80 1g, ammonium citrate 2g, dipotassium phosphate 6g, sodium acetate 35g, glacial acetic aicd 2.5ml, manganese sulfate 0.12g, magnesium sulfate 0.57g, iron sulfate 0.034g / DW 1L) plate and inoculated with a glass rod. Each agar plate coated with the kimchi dilution solution was incubated for 1 day in an incubator at 25 ° C., and the number of colonies produced was counted by the number of bacteria.
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 본 발명에 의해 제조된 김치의 유산균 수는 발효기간 동안 류코노스톡 메센테로이드 균주의 수가 108 - 109 cfu/ml의 수준으로 일정하게 유지가 되어 첨가된 유산균이 김치에서 우점종으로 발효를 주도하였다. 또한, 김치 발효 후기에 왕성하게 증식하여 김치의 신맛의 원인이 되는 락토바실러스 속 균주의 수는 감소됨을 확인할 수 있었다. 반면, 류코노스톡 메센테로이드 0-20 균주를 첨가하여 제조한 김치는 본 발명에 따라 제조된 김치에 비해 발효 경과에 따라 류코노스톡 메센테로이드 균주의 수가 급감하였으며, 락토바실러스 속 균주의 수는 오히려 증가되었음을 확인할 수 있었다.As a result, as shown in Figure 5, the number of lactic acid bacteria of the kimchi manufactured according to the invention is 10 8 The number of flow Pocono stock mesen steroid strains during the fermentation period is the kept constant at 10 9 levels of cfu / ml was added Lactic acid bacteria led the fermentation from Kimchi to dominant species. In addition, it was confirmed that the number of strains of the genus Lactobacillus, which proliferates late in kimchi fermentation and causes sour taste of kimchi, is reduced. On the other hand, kimchi prepared by adding 0-20 strains of leuconosstock mesenteroids significantly decreased the number of strains of leuconosstock mesentoids as the fermentation progressed, compared to the kimchi prepared according to the present invention. It was confirmed that the increase.
8-3) 관능 검사8-3) Sensory test
상기 실시예 7에서 제조한 김치와 비교예 1에서 제조한 대조군 김치에 대해 50명을 대상으로 관능 검사를 수행하였고, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다. 또한, 가바를 각각 0.12, 0.35, 0.50% 첨가하여 상기 실시예 5의 방법으로 김치를 제조한 후, 가바의 첨가량에 따른 관능 검사를 수행하였고, 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다. 테스트 결과는 5점을 만점으로 기호도 척도법에 의해 실시하였다. 유의성 검증은 t-test에 의해 실시하였다.For the kimchi prepared in Example 7 and the control kimchi prepared in Comparative Example 1 was carried out a sensory test on 50 people, the results are shown in Table 5 below. In addition, after adding kima 0.12, 0.35, 0.50% respectively to prepare kimchi by the method of Example 5, the sensory test according to the amount of Gaba was performed, the results are shown in Table 6 below. The test result was implemented by the preference scale method out of 5 points. Significance test was performed by t-test.
상기 표 5에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따라 제조된 김치는 전반적으로 류코노스톡 메센테로이드 0-20 균주를 첨가한 대조군 김치에 비해 관능특성이 우수한 것으로 평가되었다. 즉, 대조군 김치의 경우 류코노스톡 균주가 감소되고 락토바실러스 균주가 증가하면서(도 5 참조) 산도가 증가되어 이미가 강하게 평가되었으며, 배추의 색이 어둡게 변색되어 외관에서도 낮게 평가되었다. 반면, 본 발명에 따라 제조된 김치는 가바의 양과 류코노스톡 균수가 발효기간내 일정 수준으로 유지되면서 맛, 외관에 대해 풍미상승의 효과가 있고, 산미도 강하지 않아 대조군과 비교하여 이미가 거의 없음을 알 수 있었다. As shown in Table 5, the kimchi prepared according to the present invention was evaluated to have superior sensory characteristics as compared to the control kimchi added with the leuconosstock mesentoid 0-20 strain as a whole. That is, in the case of the control kimchi, the acidity was increased due to the decrease of the leukonostock strain and the increase of the Lactobacillus strain (see FIG. 5), and the image was strongly evaluated, and the color of the cabbage was darkly discolored, which was low in appearance. On the other hand, the kimchi prepared according to the present invention has the effect of increasing the flavor on taste and appearance while the amount of Gabba and the number of leuconosstock bacteria remain at a constant level during the fermentation period, and the acidity is not strong, so there is almost no already compared with the control group. Could know.
또한, 상기 표 6에 나타난 바와 같이, 가바의 첨가량을 달리하여 제조한 김치의 관능 검사 결과, 가바의 유효농도 범위내인 0.12-0.35중량%를 첨가하여도 김치의 관능에는 영향을 미치지 않음을 알 수 있었다. 즉, 이러한 가바의 첨가에 의해 김치의 맛에는 영향을 미치지 않으면서도 혈압강하 및 긴장완화 효과가 있는 김치를 제조할 수 있었다.In addition, as shown in Table 6, as a result of sensory test of kimchi prepared by varying the amount of Gaba, even if added 0.12-0.35% by weight within the effective concentration range of Gaba, it does not affect the sensory of Kimchi Could. That is, the addition of Gabba was able to produce kimchi having a blood pressure lowering and relaxation effect without affecting the taste of kimchi.
상기에서 기술한 바와 같이, 본 발명에서는 저온 숙성된 김치로부터 김장김치의 시원하고 깔끔한 맛을 재현시킬 수 있는 내산성 유산균 균주를 분리하였다. 또한 상기 균주와 혈압강하 및 긴장완화 기능을 갖는 가바가 첨가된 김치는 일반적인 유산균 균주를 첨가하여 제조된 김치와 비교할 때 맛에 있어 우수할 뿐만 아니라, 기능성도 우수하다는 효과를 갖고 있다. As described above, in the present invention, the acid-resistant lactic acid bacteria strain that can reproduce the cool and clean taste of kimjang kimchi from low-temperature aged kimchi was isolated. In addition, the kimchi added to the strain and Gaba having a blood pressure lowering and relaxation function is not only excellent in taste when compared to kimchi prepared by adding a general lactic acid bacteria strain, has the effect of excellent functionality.
도 1은 김치의 맛을 연중 재현시킬 수 있는 유산균을 분리하기 위하여 사용된 김치의 저온숙성 중 품온 변화를 나타낸 그래프이다.1 is a graph showing the temperature change during the low temperature aging of kimchi used to separate the lactic acid bacteria that can reproduce the taste of kimchi throughout the year.
도 2는 본 발명의 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주를 첨가하여 제조한 김치와 종래 공지된 류코노스톡 메센테로이드 KCCM 11324 균주를 첨가하여 제조한 김치의 산도 변화를 비교하여 나타낸 그래프이다.Figure 2 is a graph showing a comparison of the acidity change of kimchi prepared by adding the leukonostock mecetheroid DRC 0211 strain of the present invention and the conventionally known leukonostock mesenteroid KCCM 11324 strain.
◆ : 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주를 첨가하여 제조된 김치 ◆: Kimchi prepared by adding leukonostock mecetheroid DRC 0211 strain
■ : 류코노스톡 메센테로이드 KCCM 11324 균주를 첨가하여 제조된 김치 ■: Kimchi prepared by adding leukonostock mecetheroid KCCM 11324 strain
도 3은 본 발명에서 제조한 김치와 일반적인 류코노스톡 메센테로이드 균주를 첨가하여 제조한 김치의 pH 변화를 비교하여 나타낸 그래프이다.Figure 3 is a graph showing the pH of the kimchi prepared by the addition of the kimchi prepared in the present invention and the general leukonostock mesentoid strain.
◆ : 류코노스톡 메센테로이드 O-20 균주 첨가군◆: Leukonostock mesentoid O-20 strain added group
■ : 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주 첨가군■: Addition group of leukonostock mecetheroidoid DRC 0211 strain
도 4는 본 발명에서 제조한 김치와 일반적인 류코노스톡 메센테로이드 균주를 첨가하여 제조한 김치의 산도 변화를 비교하여 나타낸 그래프이다.Figure 4 is a graph showing a comparison of the acidity change of kimchi prepared by adding the kimchi prepared in the present invention and the general leukonostock mesentoid strain.
◆ : 류코노스톡 메센테로이드 0-20 균주 첨가군◆: Addition group of 0-20 strain of leukonostock mesentoid
■ : 류코노스톡 메센테로이드 DRC 0211 균주 첨가군■: Addition group of leukonostock mecetheroidoid DRC 0211 strain
도 5는 본 발명에서 제조한 김치와 일반적인 류코노스톡 메센테로이드 균주를 첨가하여 제조한 김치의 숙성 중 유산균의 수를 비교하여 나타낸 그래프이다.Figure 5 is a graph showing the comparison of the number of lactic acid bacteria during the ripening of kimchi prepared by adding the kimchi prepared in the present invention and the general leukonostock mesentoid strain.
◆ : 류코노스톡 메센테로이드 0-20 균주를 첨가하여 제조된 김치에서의 류코노스톡 속 균주 수◆: Number of Strains in the Leukonostok in Kimchi Prepared by the Addition of 0-20 Strains
▲ : 류코노스톡 메센테로이드 0-20 균주를 첨가하여 제조된 김치에서의 락토바실러스 속 균주 수▲: Number of Lactobacillus spp. In Kimchi Prepared by Addition of Leukonostock Mesenteroid 0-20
■ : 본 발명에 따라 제조된 김치에서의 류코노스톡 속 균주 수■: The number of strains of the genus Leukonostok in kimchi prepared according to the present invention
× : 본 발명에 따라 제조된 김치에서의 락토바실러스 속 균주 수× number of strains of the genus Lactobacillus in kimchi prepared according to the present invention
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