KR100532678B1 - IgY titre improved egg yolk powder and process for preparation thereof - Google Patents
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Abstract
본 발명은 특수면역항체의 역가가 향상된 난황분말 및 그의 제조방법에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 특수면역항체의 역가가 향상된 난황분말 및 제조방법은 단일 또는 복합 특수 면역 항체를 함유하는 난황으로부터 초임계 상태의 조건에서 초임계 유체를 추출 용기로 통과시켜 난황에 함유되어 있는 지방 또는 콜레스테롤 성분을 선택적으로 제거하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 특수 면역 항체의 역가를 향상시킨 탈지 난황 분말의 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to an egg yolk powder having improved titer of a special immune antibody and a method for producing the yolk powder, and a method for producing an yolk powder having improved titer of a special immune antibody according to the present invention is supercritical from egg yolk containing a single or complex special immune antibody. A method for producing skim yolk powder with improved titer of special immune antibody, comprising the step of selectively removing fat or cholesterol components in egg yolk by passing a supercritical fluid through an extraction container under conditions of a state. It is about.
본 발명에 따른 특수 면역 항체의 역가를 향상시킨 탈지 난황 분말은 난황 분말의 성분 중에서 IgY 역가와는 상관없는 지방 성분만을 선택적으로 추출, 제거함에 따라 지방 성분의 비율은 상대적으로 낮아지고, IgY 역가는 기존의 동결건조 난황분말의 역가보다 향상된 효과를 가지는 특징이 있다.Degreasing egg yolk powder with improved titer of the special immune antibody according to the present invention, by selectively extracting and removing only fat components irrelevant to the IgY titer among the components of the yolk powder, the proportion of fat components is relatively low, and the IgY titer is It is characterized by having an improved effect than the titer of conventional lyophilized egg yolk powder.
Description
본 발명은 IgY 난황에 함유되어 있는 특수 면역 항체의 역가가 향상된 난황분말 및 그의 제조방법에 대한 것으로, 좀 더 상세히는 특수 면역 항체를 함유하고 있는 난황을 초임계 상태의 이산화탄소를 용매로 사용한 추출 정제 공정으로 처리함으로써, 난황 분말의 성분 중에서 IgY 역가와는 상관없는 지방 성분만을 선택적으로 추출, 제거함에 따라 지방 성분의 비율은 상대적으로 낮아지고, IgY 역가는 기존의 동결건조 난황분말의 역가보다 향상된 효과를 가지는 탈지 난황 분말에 관한 것이다.The present invention relates to an egg yolk powder having improved titer of a special immune antibody contained in IgY egg yolk and a method for preparing the same, and more specifically, an extraction and purification using egg yolk containing a special immune antibody as a solvent of supercritical carbon dioxide. By the process, by selectively extracting and removing only fat components irrelevant to IgY titer among the components of egg yolk powder, the ratio of fat component is relatively low, and the IgY titer is more effective than that of conventional lyophilized yolk powder. It relates to a skim egg yolk powder having a.
계란은 오래전부터 영양분이 풍부한 대중 식품 중의 하나로 인식되어 왔으며, 계란은 독특한 특징을 지니고 있는데 그것은 어미 닭이 가진 면역항체가 계란으로 옮겨가서 축적되고 자손에게 전해진다는 점이다. 이러한 면역 항체는 특이적으로 난황에 존재하여 포유류의 항체와 비슷하나 단백 화학적인 성질이 약간 달라 IgY(Immunoglobulin Yolk)라고 불려지고 있다. 계란 난황에 함유된 수용성 단백질인 알파, 베타, 감마－리베틴(α, β, γ－livetin)은 산란계 혈청으로부터 유래된 알부민, 알파, 2－글리코단백질(α, 2－glycoprotein) 및 혈청 IgY와 동일하다는 것이 면역학적으로 증명되었다. 또한, 최근들어 항 헬리코박터 파일로리 계란항체(Immunoglobulin Yolk, IgY)를 함유하는 계란이 개발된 이후, 각종 질병에 대한 특수 면역 항체를 함유하는 기능성 계란에 대한 연구가 활발히 진행중에 있다.Eggs have long been recognized as one of the most nutritious and popular foods, and eggs have a unique feature, which means that the mother's immune antibodies are transferred to the eggs and accumulated and transmitted to their offspring. These immune antibodies are specifically present in egg yolk, similar to mammalian antibodies, but have different protein chemistry and are called IgY (Immunoglobulin Yolk). The water-soluble proteins alpha, beta, gamma-livintin (α, β, and γ-livetin) contained in egg yolks, and albumin, alpha, 2-glycoprotein (α, 2-glycoprotein) and serum IgY The same has been demonstrated immunologically. In addition, since the eggs containing the anti-Helicobacter pylori egg antibody (Immunoglobulin Yolk, IgY) was recently developed, research on functional eggs containing special immune antibodies against various diseases is actively underway.
그러나 계란 난황은 지방 성분의 함량이 난황 자체 무게의 약 1/3이나 차지하고 있으며, 지방산의 분석 결과도 불포화 지방 대비 포화 지방의 비율이 1:2 미만의 바람직하지 못한 균형을 이루고 있음이 밝혀졌다. 또한, 난황 중의 콜레스테롤 함유량은 난황 무게의 약 1.4wt％에 이르고 있어, 각종 성인병을 우려하는 성인들에게는 기피 식품으로 인식되기도 한다. 따라서, 각종 성인병을 예방하면서 식품 또는 식품 첨가물로써 난황 분말의 영양 성분을 보존하고, 난황에 함유되어 있는 특수 면역 항체의 면역 효과를 증가시키기 위해서는 난황 중의 콜레스테롤 및 지방 성분의 제거 공정이 필수적이다.However, egg yolk contains about one-third of the fat content of egg yolk itself, and the analysis of fatty acids also found that the ratio of saturated fat to unsaturated fat was less than 1: 2. In addition, the content of cholesterol in egg yolk reaches about 1.4 wt% of the weight of egg yolk, which may be recognized as a repellent food by adults concerned about various adult diseases. Therefore, in order to preserve the nutritional components of the yolk powder as food or food additives while preventing various adult diseases, and to increase the immune effect of the special immune antibodies contained in the yolk, the removal of cholesterol and fat components in the yolk is essential.
본 발명과 관련된 종래의 기술로서, 특수 면역 항체를 함유하는 난황 분말 중에서 순수한 특수 면역 항체만을 분리해 내는 여러 기술들이 주지되어 있으나, 난황중의 지방 성분은 거의 단백질과 결합된 리포프로테인(lipoprotein)으로 존재하기 때문에 종래의 방법은 수용성 단백질과 지방성분의 분리 과정이 복잡하며, 비용과 시간이 많이 소요되어 경제적이지 못한 단점을 가지고 있다.As a conventional technique related to the present invention, various techniques for separating only pure special immune antibodies from egg yolk powder containing special immune antibodies are well known, but the fat component of egg yolk is almost as lipoprotein bound to protein. As it exists, the conventional method has a disadvantage in that the separation process of the water-soluble protein and the fat component is complicated, costly and time-consuming, and therefore it is not economical.
본 발명은 상술한 바와 같은 종래의 문제점들을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 난황 분말 내의 단백성분과 특수 면역 항체의 역가를 유지하면서 난황지질인 리포프로테인(lipoprotein)을 효과적으로 분리함으로 인하여 난황분말 단위 용량에 대한 항체의 역가가 향상된 난황분말 및 그의 제조방법을 제공하는 것이다. The present invention has been made to solve the conventional problems as described above, the object of the present invention is to effectively separate the lipoprotein (lipoprotein) of the yolk lipid while maintaining the titer of protein components and special immune antibodies in egg yolk powder It is to provide an egg yolk powder having improved titer of the antibody to a yolk powder unit dose and a method of preparing the same.
상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 단일 또는 복합 특수 면역 항체를 함유하는 난황으로부터 초임계 상태의 조건에서 초임계 유체를 추출 용기로 통과시켜 난황에 함유되어 있는 지방 또는 콜레스테롤 성분을 선택적으로 제거하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 특수 면역 항체의 역가를 향상시킨 탈지 난황 분말의 제조방법을 제공하는데 그 특징이 있다.In order to achieve the above object, the present invention selectively removes the fat or cholesterol component contained in egg yolk by passing the supercritical fluid from the egg yolk containing a single or complex special immune antibody to the extraction vessel under supercritical conditions It is characterized by providing a method for preparing skim egg yolk powder with improved titer of a special immune antibody, characterized in that it comprises a step of.
또한, 상기 제조방법은 액상 또는 분말 상태의 난황을 추출 용기에 충전하고 액체 상태의 이산화탄소를 이산화탄소 저장조에 저장하는 충전저장단계; 상기 액체 이산화탄소 저장조에 저장되어 있는 액체 상태의 이산화탄소를 고압펌프를 이용하여 압축하는 압축단계; 상기 압축된 이산화탄소를 열교환기를 통하여 온도 상승시켜 초임계 상태로 유지시킨 후, 초임계 상태의 이산화탄소를 상기 추출 용기로 통과시켜 난황에 함유되어 있는 지방 성분인 리포프로테인(lipoprotein)을 선택적으로 추출하는 추출단계; 상기 추출된 리포프로테인(lipoprotein)을 함유한 초임계 상태의 이산화탄소를 감압 밸브를 통하여 감압 팽창되면서 분리조로 주입하여 리포프로테인(lipoprotein)과 분리하는 분리단계; 상기 분리된 이산화탄소를 다시 상기 액체 이산화탄소 저장조에 저장하여 순환시키는 단계; 상기 탈지된 난황을 분무 건조, 또는 동결건조법으로 탈지 난황분말로 제조하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.In addition, the manufacturing method includes a filling and storing step of filling the extraction container with egg yolk in a liquid or powder state and storing carbon dioxide in a liquid state in a carbon dioxide storage tank; A compression step of compressing the liquid carbon dioxide stored in the liquid carbon dioxide storage tank by using a high pressure pump; After the temperature of the compressed carbon dioxide is raised through a heat exchanger to maintain the supercritical state, the supercritical carbon dioxide is passed through the extraction container to selectively extract lipoprotein, which is a fatty component contained in egg yolk. step; A separation step of injecting carbon dioxide in a supercritical state containing the extracted lipoprotein into a separation tank while expanding under reduced pressure through a pressure reducing valve to separate the lipoprotein from lipoprotein; Storing and circulating the separated carbon dioxide in the liquid carbon dioxide storage tank again; It characterized in that it further comprises the step of preparing the skim egg yolk powder by spray drying, or lyophilization method.
여기서, 상기 난황은 계란, 오리알, 메추리알, 타조알 중의 각각 독립적인 하나, 또는 2종 이상의 복합 난황을 포함하는 것을 특징으로 하며, 초임계 유체로서 이산화탄소 또는 프로판을 사용하는 것이 바람직하다.Here, the egg yolk is characterized in that each of the eggs, duck eggs, quail eggs, ostrich eggs each independently, or two or more types of complex egg yolk, carbon dioxide or propane is preferably used as a supercritical fluid.
상기 제조방법의 조업 압력은 200∼400 기압, 조업 온도는 10∼70℃인 것을 특징으로 하며, 이산화탄소의 유량이 액체 상태의 이산화탄소로 환산했을 때, 350∼550㎏／hr의 유속으로, 조업시간이 1∼20시간의 범위에 있는 것을 특징으로 하는 것이 바람직하다.The operating pressure of the production method is characterized in that the operating pressure is 200 to 400 atm, the operating temperature is 10 to 70 ℃, operating time at a flow rate of 350 ~ 550 kg / hr when the flow rate of carbon dioxide converted to liquid carbon dioxide It is preferable to exist in the range of this 1 to 20 hours.
또 다른 발명은 상기 생산방법으로 생산된 탈지 난황 분말을 제공하는데 그 특징이 있다.Another invention is characterized by providing a skim egg yolk powder produced by the production method.
이하, 본 발명의 구성을 도 1과 도 2를 이용하여 상세하게 기술한다.Hereinafter, the configuration of the present invention will be described in detail with reference to Figs.
도 1은 본 발명에서의 초임계 추출 공정을 나타내는 개략도이며, 도2는 제조공정도로서, 이를 참조하여 본 발명의 구성을 보다 상세하게 기술한다.Figure 1 is a schematic diagram showing a supercritical extraction process in the present invention, Figure 2 is a manufacturing process diagram, with reference to this the configuration of the present invention in more detail.
특수 면역 항체를 함유한 액상 또는 분말 상태의 난황을 추출 용기에 주입한다. 이 때, 추출 용기는 내부식성과 내압성이 강한 스테인레스 재질로 구성되며, 고압의 조업 압력에 적합한 두께를 갖는다. 추출 용기의 상단과 하단은 추출 용매로 사용되는 초임계 상태 이산화탄소의 흐름을 용이하게 하며, 시료가 동반되어 유출되어짐을 방지하기 위하여 스테인레스 소결필터를 사용하였다. 추출 용기를 완전히 밀봉한 후, 추출 용매가 흐를 수 있도록 상단 및 하단의 밸브를 개방한다. 액체 이산화탄소 저장조의 밸브를 개방하여 추출 용매로 사용되는 이산화탄소를 추출 용기에 주입한다. 일정한 양의 이산화탄소가 주입되어 추출 용기와 액체 이산화탄소 저장조의 압력이 균일하게 유지되면 고압펌프를 사용하여 액체상태의 이산화탄소를 추출 용기에 계속 주입하여 추출 용기 내부의 압력을 조업 압력으로 상승시킨다. 이 때, 주입되는 액체 상태의 이산화탄소는 추출 용기에 주입되기 이전에 열교환기를 통과하면서 온도가 상승되어, 초임계 상태로 변환된다. 초임계 상태의 이산화탄소는 추출 용기를 통과하면서 추출 용기 내에 충전되어 있는 난황분말 중의 리포프로테인 등의 지방 성분만을 선택적으로 추출한다. 초임계 상태의 이산화탄소는 비극성 유체로 액체 상태와 유사한 밀도를 나타내기 때문에 난황 분말에 포함되어 있는 비극성 성분인 지방 성분에 대한 용해도가 우수하며, 점도와 확산계수는 기체 상태와 유사하기 때문에 시료 내부로의 침투가 용이하기 때문에 추출 공정에서의 용매로 활용하기에 유리한 장점이 있다. 추출된 지방 성분을 함유한 초임계 상태의 이산화탄소는 감압 밸브를 통과하면서 감압 팽창되어 분리조로 주입된다. 분리조에서는 이산화탄소의 압력이 급속하게 감소하여 밀도가 저하됨에 따라 지방 성분에 대한 용해도가 감소하게 됨으로써 추출되어진 지방 성분과 분리되어진다. 분리조로 주입된 감압된 이산화탄소는 액체 또는 기체 상태로 존재하며, 액체 상태의 이산화탄소와 추출되어진 지방성분은 분리조의 하단에 잔류하게 되며, 가스 상태의 이산화탄소는 분리조 상단에 위치한 관을 따라 이동하다가 상부에 위치한 열교환기를 통하여 냉각되어 액체 상태의 이산화탄소로 변환된 후 다시 액체 이산화탄소 저장조에 저장되어 계속 순환하게 된다. 또한, 분리조 하단에 잔류하는 액체 상태의 이산화탄소 역시 분리조 상단의 가스 상태의 이산화탄소가 액화되어 액체 이산화탄소 저장조로 주입됨에 따라, 분리조의 온도, 압력 조건에서의 기-액 평형 상태를 유지하기 위하여 증발되며, 결국 분리조의 하단에는 추출된 지방 성분만이 잔류하게 된다.Egg yolk in liquid or powder form containing special immune antibodies is injected into the extraction vessel. At this time, the extraction container is made of a stainless material with strong corrosion resistance and pressure resistance, and has a thickness suitable for high pressure operating pressure. The upper and lower portions of the extraction vessel facilitate the flow of supercritical carbon dioxide used as the extraction solvent, and a stainless sintered filter was used to prevent the sample from being leaked. After the extraction vessel is completely sealed, the top and bottom valves are opened to allow the extraction solvent to flow. The valve of the liquid carbon dioxide reservoir is opened to inject carbon dioxide, which is used as an extraction solvent, into the extraction vessel. When a certain amount of carbon dioxide is injected to maintain a uniform pressure in the extraction vessel and the liquid carbon dioxide reservoir, a high pressure pump is used to continuously inject liquid carbon dioxide into the extraction vessel to increase the pressure inside the extraction vessel to the operating pressure. At this time, the temperature of the carbon dioxide in the liquid state to be injected is raised while passing through the heat exchanger before being injected into the extraction vessel, it is converted into a supercritical state. The supercritical carbon dioxide selectively extracts only fat components such as lipoprotein in the yolk powder filled in the extraction vessel while passing through the extraction vessel. Supercritical carbon dioxide is a non-polar fluid and has a density similar to that of the liquid state, so it has excellent solubility in the non-polar component of fat, which is included in egg yolk powder, and its viscosity and diffusion coefficient are similar to those in the gas phase. Since it is easy to penetrate, there is an advantageous advantage to utilize as a solvent in the extraction process. The supercritical carbon dioxide containing the extracted fat component is expanded under reduced pressure while being passed through the pressure reducing valve and injected into the separation tank. In the separation tank, the pressure of carbon dioxide decreases rapidly and the density decreases, so that the solubility of the fat component is decreased, thereby separating from the extracted fat component. The decompressed carbon dioxide injected into the separator exists in the liquid or gaseous state. The liquid carbon dioxide and the extracted fat component remain at the bottom of the separator, and the gaseous carbon dioxide moves along the tube located at the top of the separator and then Cooled through a heat exchanger located in the converted to liquid carbon dioxide and then stored in the liquid carbon dioxide storage tank to continue to circulate. In addition, the liquid carbon dioxide remaining at the bottom of the separation tank is also evaporated to maintain the gas-liquid equilibrium at the temperature and pressure conditions of the separation tank as the gaseous carbon dioxide at the top of the separation tank is liquefied and injected into the liquid carbon dioxide storage tank. As a result, only the extracted fat component remains at the bottom of the separation tank.
특수 면역 항체를 함유하고 있는 난황으로부터 면역 항체의 역가를 향상시키기 위한 추출 공정에 사용될 수 있는 용매로는 이산화탄소, 프로판 등이 있으나, 온도 및 압력 조건과 사용시의 안전성을 고려하여 이산화탄소를 용매로 사용하는 것이 바람직하다. 또한, 추출 효율의 증가를 위하여 공용매를 사용하는 것도 바람직하며, 사용할 수 있는 공용매로는 노르말 헥산 및 디메틸 에테르 등의 유기 용매와 피토스쿠알렌과 같은 화장품의 베이스 오일 또는 식용으로 사용 가능한 식물성 오일류 중 하나 또는 이들 군에서 이루어지는 2종 이상의 혼합 물질이 있다.Solvents that can be used in the extraction process to improve the titer of immune antibodies from egg yolk containing special immune antibodies include carbon dioxide and propane, but carbon dioxide is used as a solvent in consideration of temperature and pressure conditions and safety in use. It is preferable. In addition, it is preferable to use a cosolvent to increase the extraction efficiency. Among the cosolvents that can be used are organic solvents such as normal hexane and dimethyl ether and base oils of cosmetics such as phytosqualene or vegetable oils that can be used for food. There are two or more mixed materials made of one or these groups.
본 발명의 효과를 최대화하기 위해서는 난황을 건조된 분말 상태로 하는 것이 바람직하지만 필요하다면 액상 상태로 사용하여도 무방하다.In order to maximize the effect of the present invention, it is preferable to make the egg yolk dry, but if necessary, it may be used in the liquid state.
이하에서는 본 발명의 구성을 보다 구체적으로 실시예에 의거하여 보다 상세히 설명하기로 하겠다. 그러나, 본 발명의 권리범위는 실시예에 의하여 본 발명의 청구범위가 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the configuration of the present invention will be described in more detail based on examples. However, the scope of the present invention is not limited to the claims of the present invention by the embodiments.
『실시예 1 : 초임계 추출 공정의 조건』`` Example 1: Supercritical Extraction Process ''
본 발명에 있어서의 시료로 사용된 특수 면역 항체를 함유하고 있는 난황은 국내 A사에서 입수한 것으로, 특수 면역 항체를 함유하고 있는 계란을 난황과 난백으로 분리한 후, 분리된 난황을 진공 동결건조하여 난황 내 수분의 함량을 10% 이하로 건조된 분말을 사용하였다. 본 실시 예에서는 입수된 동결건조 난황분말을 추출 처리하지 않은 동결건조 난황분말과 그 분말을 초임계 이산화탄소를 이용한 추출 공정으로 정제 처리한 난황 분말 중의 지방성분 함량과 특수 면역 항체의 역가 변화를 통하여 본 발명의 성과를 설명하고자 한다.Egg yolk containing the special immune antibody used as a sample in the present invention was obtained from the domestic company A. After separating the egg containing the special immune antibody into egg yolk and egg white, the separated egg yolk was vacuum lyophilized. The powder was dried to less than 10% of the moisture content in egg yolk. In this embodiment, the lyophilized yolk powder and its powder, which were not extracted from the obtained lyophilized yolk powder, and their powders, were analyzed through the change of fat content and titer of the specific immune antibody in the yolk powder purified by the extraction process using supercritical carbon dioxide. The achievements of the invention will be described.
상기 난황 분말은 대장균, 살모넬라 엔테라이티디스, 살모넬라 티피뮤리움, 전염성 위장염 바이러스 및 헬리코박터 파일로리 등을 항원화하여, 어린 병아리에 접종하여 얻어진 특수 항체를 함유한 IgY 난황 분말과, 이들 중 2가지 이상을 어린 병아리에 동시 접종하여 2종 이상의 복합 특수 항체를 계란 하나에 공유하도록 얻어진 IgY 난황 분말인것을 특징으로 하는 것이 바람직하다.The egg yolk powder is an IgY egg yolk powder containing a special antibody obtained by inoculating E. coli, Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium, infectious gastroenteritis virus and Helicobacter pylori, and inoculated in young chicks, and at least two of them. It is preferable that it is an IgY egg yolk powder obtained by co-inoculating young chicks, and sharing two or more complex special antibodies to one egg.
난황 분말 중에 함유된 지방 성분을 제거하기 위한 추출 공정은 100리터 규모의 상용규모의 추출 시스템을 사용하였다. 우선, 추출 용기에 30㎏의 난황 분말을 충진한 후 추출 용기를 완전히 밀폐한다. 추출 온도는 난황 분말의 열변성을 방지하기 위하여 70℃ 이하의 온도에서 조업하였으며, 추출 압력은 각각 200, 250, 300 기압으로, 압력의 변화에 의한 초임계 상태 이산화탄소의 물리적 성질(밀도, 확산계수, 점도 등)을 변화시켜 추출 조건을 선정하였다. 초임계 추출 공정에 있어서, 온도 및 압력과 더불어 또하나의 중요한 변수는 초임계 유체의 유량이다. 초임계 상태의 이산화탄소는 액체 또는 가스 상태의 이산화탄소에 비하여 지방 성분에 대한 용해도가 크다는 장점이 있으나, 효율의 극대화를 위하여는 유체의 양을 증가시켜야 하며, 고압의 유체가 관을 통과할 때 관의 내압성을 유지하기 위해서는 과다한 유량의 주입은 부적절하므로 이에 대한 최적화가 필요하다. 따라서 본 발명에서는 관의 내압성과 추출 효율을 최적화 하여 유체의 유량을 60기압, 12℃의 액체 이산화탄소로 환산하였을 때 450㎏／hr으로 선정하였다. 또한, 조업 시간에 따른 경제성 평가를 위하여 추출 시간에 따른 단위 시간당 추출물의 양을 고려하였을 때 조업 시간은 6시간이 최적의 조업 시간으로 나타났다.The extraction process for removing the fat component contained in egg yolk powder used a 100 liter commercial scale extraction system. First, after filling 30 kg of egg yolk powder in the extraction container, the extraction container is completely sealed. The extraction temperature was operated at a temperature below 70 ℃ to prevent thermal denaturation of egg yolk powder. The extraction pressures were 200, 250 and 300 atm, respectively, and the physical properties (density, diffusion coefficient) of supercritical carbon dioxide due to the pressure change. , Viscosity, etc.) were changed to select extraction conditions. In a supercritical extraction process, another important variable along with temperature and pressure is the flow rate of the supercritical fluid. Supercritical carbon dioxide has the advantage of higher solubility in fat compared to liquid or gaseous carbon dioxide, but for maximum efficiency, the amount of fluid must be increased. In order to maintain the pressure resistance, excessive flow rate injection is inadequate and needs optimization. Therefore, in the present invention, the pressure resistance and the extraction efficiency of the tube were optimized, and the flow rate of the fluid was selected as 450 kg / hr when converted to 60 atm and 12 ° C of liquid carbon dioxide. In addition, when considering the amount of extract per unit time according to the extraction time for the economic evaluation according to the operating time, the operating time was 6 hours as the optimum operating time.
본 발명에서의 초임계 유체 추출 공정은 비교 설명을 위하여 세가지 조건에서 수행하였으며, 편의를 위하여 이후부터의 시료명은 다음과 같이 명명한다. The supercritical fluid extraction process in the present invention was carried out under three conditions for the purpose of comparison, and for convenience, the sample names thereafter are named as follows.
시료 1 : 초임계 추출 공정을 거치지 않은 동결 건조 난황분.Sample 1: Freeze-dried egg yolk powder not subjected to the supercritical extraction process.
시료 2 : 200 기압, 50℃, 액체 이산화탄소 유량 450㎏／hr 조건에서 6시간 조업.Sample 2: It operated for 6 hours on 200 atmospheres, 50 degreeC, and liquid carbon dioxide flow rate 450 kg / hr.
시료 3 : 250 기압, 50℃, 액체 이산화탄소 유량 450㎏／hr 조건에서 6시간 조업.Sample 3: 6 hours operation at 250 atmospheres, 50 degreeC, and liquid carbon dioxide flow rate 450 kg / hr conditions.
시료 4 : 300 기압, 50℃, 액체 이산화탄소 유량 450㎏／hr 조건에서 6시간 조업.Sample 4: 6 hours operation at 300 atmospheres, 50 degreeC, and liquid carbon dioxide flow rate 450 kg / hr conditions.
『실시예 2 : 난황 분말 중의 성분 함량 변화 분석』`` Example 2: Analysis of Changes in Component Content in Egg Yolk Powder ''
표 1은 추출 공정 전 후 시료의 함량 변화를 나타낸 것으로, 난황 분말 중의 지표 성분으로는 수분, 조단백, 조지방, 조회분 및 기타 성분으로 선정하였으며, 성분의 분석 방법은 식품공전에 준하여 분석하였다.Table 1 shows the change of the sample content before and after the extraction process, as an index component in egg yolk powder was selected as moisture, crude protein, crude fat, crude ash and other components, the analysis method of the component was analyzed according to the Food Code.
위의 표에서 볼 수 있듯이, 초임계 추출 공정에서의 압력이 200기압에서는 총 지방 함량 중 34％의 지방 성분만이 추출되었으나, 250기압에서는 73％, 300기압에서는 75％의 지방 성분이 선택적으로 제거되었음을 알 수 있었다.As shown in the table above, only 34% of the total fat content was extracted at 200 atm, but 73% at 250 atm and 75% at 300 atm. It was found that it was removed.
『실시예 3 : 난황분말로부터 IgY 성분의 분리』`` Example 3: Separation of IgY Components from Egg Yolk Powder ''
본 발명에 있어서 IgY 난황 분말로부터 IgY 성분을 분리하는 방법은 천연고무(natural gum)을 이용한 방법으로 실시하였다. 즉, 난황을 멤브레인(membrane) 없이 채취하여 같은 양의 물(w/v)로 희석하여 잘 섞은 후, 수 분간을 방치한 후, 난황의 4배 분량의 0.1％ 감마－카라기난(λ－carrageenan)을 섞어 30분간 방치한다. 10,000 x g에서 15분간 원심분리한 후, 주로 인지질로 구성된 침전물을 버리고, 수용성 단백질이 주성분인 상층액을 회수하여 여과지에 여과한다. 여과된 상층액을 회수하여 동결건조하여 수분을 분리하고 완전히 건조된 특수면역 항체를 회수한다.In the present invention, the method for separating the IgY component from the IgY egg yolk powder was carried out by a method using natural rubber. That is, egg yolk is collected without a membrane, diluted with the same amount of water (w / v), mixed well, and left for several minutes, and then 0.1% gamma-carrageenan (λ-carrageenan), which is four times the amount of egg yolk. Mix and leave for 30 minutes. After centrifugation at 10,000 x g for 15 minutes, the precipitate consisting mainly of phospholipids is discarded, and the supernatant mainly containing water-soluble protein is recovered and filtered on a filter paper. The filtered supernatant is recovered, lyophilized to separate moisture, and the specially dried special immune antibody is recovered.
표 2는 초임계 추출 공정에 따른 특수 IgY 함량 변화를 나타낸 것으로, 위에 설명한 방법에 의한 특수면역 항체의 함량 분석 결과이다.Table 2 shows the change of the special IgY content according to the supercritical extraction process, the results of analysis of the content of the special immune antibody by the method described above.
상기 표 2에서 단위는 ㎎／g이며, 위의 IgY 함량 변화 결과에서 볼 수 있듯이 난황 중의 지방 성분의 제거로 인하여 난황 단위 질량 당 특수면역 항체의 함량은 최소 136％에서 최대 178％까지 증가함을 알 수 있다.In Table 2, the unit is mg / g. As can be seen from the above IgY content change result, the content of special immune antibody per unit mass of egg yolk increases from 136% to 178% due to the removal of fat components from egg yolk. Able to know.
『실시예 4 : 전체 IgY 중에서 특이 항체의 역가 분석』Example 4 Activity Analysis of Specific Antibodies in Total IgY
Carrageenan으로 분리한 특이항체 IgY 용액의 원액 0.5㎖에 균체 분산액을 혼합하여 각각 0.5, 0.05 및 0.005％ 용액으로 희석한 후, 여기에 PBS buffer를 첨가하여 최종 부피를 1.5㎖로 조절한 다음, 37℃에서 1시간 처리하고, 이어서 4℃에서 하루 밤을 방치하여 면역 복합체를 형성시킨다. 이때, 균체 분산액에서 유래하는 가용성 물질의 영향을 배제하기 위하여 IgY 용액 대신 PBS를 사용하여 같은 방법으로 처리한 샘플도 함께 준비한다. 3,000rpm에서 원심분리하여 면역 복합체를 제거하고 상징액을 회수한다. 각 균체밀도(항원농도)별 상징액의 흡광도(280㎚)를 측정하고, 각기 그 값에서 항원 무첨가 처리시의 값을 뺀 수치를 구한다. 결과를 균체밀도 : 흡광도로 plot하여 최저 흡광도를 구한 후, 다음의 식을 사용하여 전체 용액 중 특이항체의 비율을 계산한다.After mixing the cell dispersion with 0.5 ml of the stock solution of the specific antibody IgY solution separated by Carrageenan, diluting it with 0.5, 0.05 and 0.005% solution, and adjusting the final volume to 1.5 ml by adding PBS buffer to it, 1 hour at and then overnight at 4 ° C. to form immune complexes. At this time, in order to exclude the influence of the soluble substance derived from the cell dispersion, a sample treated with the same method using PBS instead of IgY solution is also prepared. Centrifugation at 3,000 rpm removes the immune complexes and recovers the supernatant. The absorbance (280 nm) of the supernatant for each cell density (antigen concentration) is measured, and each value is obtained by subtracting the value at the time of antigen-free treatment. The results are plotted as cell density: absorbance to find the lowest absorbance, and then the ratio of specific antibodies in the total solution is calculated using the following equation.
Specific IgY ＝ (Abs.of blank － minimum Abs.)／Abs.of blank ×100(％)Specific IgY = (Abs.of blank-minimum Abs.) / Abs.of blank x 100 (%)
표 3은 초임계 추출 공정에 따른 특수 IgY 역가 변화를 나타낸 것으로, 위에 설명한 방법으로 회수한 특수 IgY 성분을 분석한 IgY 역가의 변화이다.Table 3 shows the change in the special IgY titer according to the supercritical extraction process, the change in IgY titer analyzed the special IgY component recovered by the method described above.
상기 표 3에서 a는 희석비율이며, 단위는 Specific IgY이다. 위의 IgY 역가 변화 결과에서 볼 수 있듯이, 지방 함량의 변화가 작았던 시료 2의 경우에는 모든 희석 비율에서 IgY 역가가 평균 103％ 상승함에 그쳤으나, 지방 함량의 변화가 상대적으로 증가하였던 시료 3의 경우에는 평균 150％, 시료 4의 경우에는 평균 160％ IgY 역가가 향상됨을 알 수 있다.In Table 3, a is the dilution ratio, and the unit is Specific IgY. As can be seen from the change in IgY titer above, in case of Sample 2, which had a small change in fat content, IgY titer increased by an average of 103% at all dilution ratios, but in Sample 3, where the change in fat content increased relatively. It can be seen that the average IgY titer is improved by 150% on average and 160% on sample 4.
이상과 같은 구성의 본발명의 실시예에 따르면, 특수 면역 항체를 함유하고 있는 난황을 초임계 상태의 이산화탄소를 용매로 사용한 추출 정제 공정으로 처리함으로써, 난황 분말의 성분 중에서 IgY 역가와는 상관없는 지방 성분만을 선택적으로 추출, 제거함에 따라 지방 성분의 비율은 상대적으로 낮아지고, IgY 역가는 기존의 동결건조 난황분말의 역가보다 향상된 효과를 가지는 특징이 있다.According to the embodiment of the present invention having the above-described configuration, by treating the yolk containing the special immune antibody in the extraction and purification process using the carbon dioxide in the supercritical state as a solvent, the fat irrelevant to the IgY titer in the components of the yolk powder By selectively extracting and removing only the components, the ratio of the fat component is relatively low, and the IgY titer is characterized by having an improved effect than that of the conventional lyophilized egg yolk powder.
또한 이를 음료, 아이스크림, 유제품 등의 식품 또는 식품 첨가물로 섭취했을 때 난황 중의 콜레스테롤 등으로부터 유발될 수 있는 성인병의 위험으로부터 보호하는 효과가 있다.In addition, when ingested as food or food additives such as beverages, ice cream, dairy products, there is an effect of protecting from the risk of adult diseases that can be caused from cholesterol in egg yolk.
도 1은 본 발명에서의 초임계 추출 공정 개략도이다.1 is a schematic diagram of a supercritical extraction process in the present invention.
도 2는 본 발명에서의 제조공정도이다.2 is a manufacturing process diagram in the present invention.
Claims (8)
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| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant | ||
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Payment date: 20111122 Year of fee payment: 7 |
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| FPAY | Annual fee payment |
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