KR100375017B1

KR100375017B1 - Method for Measuring Concentration of Ethosuximide in Serum

Info

Publication number: KR100375017B1
Application number: KR10-2000-0014443A
Authority: KR
Inventors: 김종원
Original assignee: (주) 디지탈바이오텍
Priority date: 2000-03-22
Filing date: 2000-03-22
Publication date: 2003-03-06
Also published as: KR20010092484A

Abstract

본 발명에 의한 혈청내 에토석시마이드의 농도 측정 방법은, 서로 다른 기지의 에토석시마이드 농도를 갖는 복수개의 표준 혈청에 대해 1665㎚ 내지 1710㎚ 범위 내의 파장을 갖는 빛을 이용하여 상기 각 표준 혈청의 흡광도를 분광광도계로 측정하는 단계; 상기 측정된 표준 혈청의 흡광도를 이용하여 상기 빛의 파장 하에서의 에토석시마이드 농도와 흡광도 간의 표준 비례 그래프 또는 식을 결정하는 단계; 에토석시마이드 농도를 측정하고자 하는 측정 대상 혈청의 흡광도를 상기 빛의 파장 하에서 분광광도계로 측정하는 단계; 및 상기 측정된 대상 혈청의 흡광도를 상기 결정된 표준 비례 그래프 또는 식에 대입하여 대상 혈청 내의 에토석시마이드의 농도를 결정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하며, 그 방법을 이용하면 혈청내 에토석시마이드의 농도에 비례하는 흡광도를 보이는 특정 파장의 빛을 사용하는 흡광도 측정법에 의하여, 저렴하고도 간편하게 혈청내 에토석시마이드의 농도를 결정할 수 있는 장점이 있다.The method for measuring the concentration of ethoxycidide in serum according to the present invention is based on each standard using light having a wavelength within a range of 1665 nm to 1710 nm for a plurality of standard serums having different known levels of ethoximide. Measuring the absorbance of the serum with a spectrophotometer; Determining a standard proportional graph or equation between ethoximide concentration and absorbance under the wavelength of light using the measured absorbance of the standard serum; Measuring the absorbance of the serum to be measured for the concentration of ethoximide with a spectrophotometer under the wavelength of light; And substituting the measured absorbance of the target serum into the determined standard proportional graph or equation to determine the concentration of ethoxycidide in the target serum. By absorbance measurement method using light of a specific wavelength showing absorbance proportional to the concentration of amide, there is an advantage that it is possible to determine the concentration of ethoxycidide in serum inexpensively and simply.

Description

Method for Measuring Concentration of Ethosimides in Serum {Method for Measuring Concentration of Ethosuximide in Serum}

본 발명은 혈청내에 존재하는 에토석시마이드(Ethosuximide)의 농도를 측정하는 방법에 관한 것으로서, 특히 농도에 따라서 흡광도가 선형적으로 비례하는 특정 파장의 빛을 알아내어, 흡광도 측정에 의하여 혈청내에 존재하는 에토석시마이드의 농도를 결정하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for measuring the concentration of Ethosuximide present in the serum, in particular, to find the light of a specific wavelength of the absorbance linearly proportional to the concentration and present in the serum by absorbance measurement It is related with the method of determining the density | concentration of the ethoxycides to be made.

종래에 사용되어온 혈청내 에토석시마이드의 농도 측정 방법으로는, 효소면역측정법(Enzyme Immunoassay), 화학발광면역측정법(Chemilunescence Immunoassay) 등을 사용하며, 이들 방법들은 약물에 대한 항체를 만들어 경쟁적 결합측정방법(competitive binding assay) 등을 사용하여 항체와 약제가 결합하여, 이들로부터 발색 반응 또는 발광 반응을 이용하여 측정하는 것이다.As a conventional method for measuring the concentration of ethoxycides in serum, enzyme immunoassay and chemiluminescence immunoassay are used, and these methods make antibodies to the drug to produce competitive binding assays. An antibody and a drug are combined using a method (competitive binding assay), etc., and it measures by using a color reaction or a luminescence reaction from these.

그러나, 이러한 종래의 측정 방법에서는 약물에 대한 항체를 개발하는 것이 필요하고, 항체 등 시약이 고가이며, 또한 여타의 소모품의 비용이 많이 드는 단점이 있다.However, such a conventional measurement method requires the development of antibodies to drugs, reagents such as antibodies are expensive, and other consumables are expensive.

한편, 일반적인 화학 물질의 농도를 결정하는데 사용되는 흡광도에 의한 농도 측정 방법은, 그 전제가 흡광도에 따른 농도가 비례 관계가 있음을 전제로 하는 것이다. 그러나, 일반적인 빛의 파장에서 측정하고자 하는 시료의 농도에 따른 흡광도가 비례하지 않으므로, 농도를 측정하고자 하는 특정 시료에 대하여 흡광도가 농도가 비례하는 특정 파장을 알아내지 않으면, 흡광도에 의한 농도 측정 방법을 적용할 수 없다.On the other hand, the concentration measurement method by absorbance used to determine the concentration of a general chemical substance is based on the premise that the concentration according to the absorbance has a proportional relationship. However, since the absorbance is not proportional to the concentration of the sample to be measured at the wavelength of general light, if the specific wavelength at which the absorbance is proportional to the specific sample to be measured is not found, a method for measuring the concentration by absorbance is used. Not applicable

본 발명은 상기한 바와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 본 발명의 목적은, 저렴한 비용으로 혈청내 에토석시마이드의 농도를 측정할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.The present invention is to solve the problems of the prior art as described above, it is an object of the present invention to provide a method that can measure the concentration of ethoxycidide in serum at low cost.

본 발명의 또 다른 목적은, 흡광도 측정에 의하여 혈청내 에토석시마이드의 농도를 측정하기 위하여, 흡광도와 농도가 선형적으로 비례하는 특정 파장의 빛을 알아내어서, 흡광도 측정에 의하여, 간편하게 혈청내 에토석시마이드의 농도를 측정할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to measure the concentration of ethoxycidide in serum by absorbance measurement, and to determine the light of a specific wavelength in which the absorbance and concentration are linearly proportional, It is to provide a method that can measure the concentration of ethoxycidide.

도 1은 1690nm 파장 하에서의 에토석시마이드 농도 대 흡광도 간의 표준 비례 그래프이다.1 is a standard proportional graph between ethoximide concentration versus absorbance under a 1690 nm wavelength.

상기한 바와 같은, 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 의한 혈청내 에토석시마이드의 농도 측정 방법은, 서로 다른 기지의 에토석시마이드 농도를 갖는 복수개의 표준 혈청에 대해 1665㎚ 내지 1710㎚ 범위 내의 파장을 갖는 빛을 이용하여 상기 각 표준 혈청의 흡광도를 분광광도계로 측정하는 단계; 상기 측정된 표준 혈청의 흡광도를 이용하여 상기 빛의 파장 하에서의 에토석시마이드 농도와 흡광도 간의 표준 비례 그래프 또는 식을 결정하는 단계; 에토석시마이드 농도를 측정하고자 하는 측정 대상 혈청의 흡광도를 상기 빛의 파장 하에서 분광광도계로 측정하는 단계; 및 상기 측정된 대상 혈청의 흡광도를 상기 결정된 표준 비례 그래프 또는 식에 대입하여 대상 혈청 내의 에토석시마이드의 농도를 결정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.As described above, in order to achieve the object, the method for measuring the concentration of ethoximide in serum according to the present invention is in the range of 1665 nm to 1710 nm for a plurality of standard sera having different known ethoximide concentrations. Measuring the absorbance of each standard serum with a spectrophotometer using light having a wavelength within; Determining a standard proportional graph or equation between ethoximide concentration and absorbance under the wavelength of light using the measured absorbance of the standard serum; Measuring the absorbance of the serum to be measured for the concentration of ethoximide with a spectrophotometer under the wavelength of light; And substituting the measured absorbance of the subject serum into the determined standard proportional graph or equation to determine the concentration of ethoximide in the subject serum.

아래에서는 실시예를 통하여 본 발명에 의한 혈청내 에토석시마이드의 농도 측정 방법을 상세하게 설명한다.The following describes in detail the method for measuring the concentration of ethoxycidide in serum according to the present invention through the examples.

본 발명에서 "대상 혈청"이라 함은, 실제 에토석시마이드 농도를 측정할 필요가 있어서 그 농도를 측정하고자 하는 대상이 되는 혈청을 말한다.In the present invention, the term "target serum" refers to a serum to which the concentration of the actual etosuccinimide needs to be measured and the concentration to be measured.

약제를 사용하고 있지 않은 정상인으로부터 혈액을 채취하여 혈청을 분리한다. 그리고, 이 혈청에 에토석시마이드를 농도별로 각각 첨가한다. 근적외선 스펙트로메타로 600㎚로부터 1800㎚까지를 스캐닝하여, 약제를 첨가하지 않은 베이스라인 샘플의 흡광도를 베이스라인으로 하여 여러 가지 농도의 검체에 대하여 흡광도를 측정한다. 측정 결과 흡광도가 농도에 선형적으로 비례하는 파장 범위를 결정한다. 혈청내 에토석시마이드의 경우 1665㎚ 내지 1710㎚ 범위의 파장에서 흡광도가 농도에 선형적으로 비례하는 결과를 보였다.Serum is isolated by taking blood from a normal person who is not using any medication. Then, etostone camide is added to the serum by concentration. Scanning from 600 nm to 1800 nm with near-infrared spectrometer, absorbance is measured for samples of various concentrations using the absorbance of the baseline sample without addition of the drug as the baseline. The measurement results determine the wavelength range in which the absorbance is linearly proportional to the concentration. In the case of serum etosuccinimide, the absorbance was linearly proportional to the concentration at wavelengths ranging from 1665 nm to 1710 nm.

본 발명자들은 상기와 같이 1665㎚ 내지 1710㎚ 범위의 파장에서 흡광도가 에토석시마이드 농도와 선형적으로 비례한다는 것을 발견하고 이를 이용하여 실제 환자 혈청 내의 에토석시마이드 농도를 구하고자 하였다.<실시예>1. 흡광도 대 에토석시마이드 농도 간의 표준 비례 그래프의 결정본 발명자들은 표준 혈청으로서 약제를 사용하지 않는 정상인들의 혈액 중 혈청을 분리한 후 에토석시마이드를 각각 50mg/dl, 10mg/dl, 5mg/dl 및 1mg/dl를 첨가함으로써 다양한 에토석시마이드 농도를 갖는 복수개의 표준 혈청을 얻었다. 그 각 표준 혈청의 1690nm에서의 흡광도를 분광광도계를 이용하여 측정하였다.다음의 표1은 1690㎚의 파장에서 혈청내의 에토석시마이드의 농도에 따른 흡광도 변화를 정리한 것이다.The present inventors have found that the absorbance is linearly proportional to the ethoximemide concentration at a wavelength in the range of 1665 nm to 1710 nm as described above. Example> 1. Determination of Standard Proportional Graph between Absorbance vs. Ethosucciamide Concentration We isolated serum from the blood of normal subjects who did not use the drug as standard serum and then treated the samples with 50 mg / dl, 10 mg / dl, 5 mg / dl, respectively. And 1 mg / dl were added to obtain a plurality of standard sera with various ethoximide concentrations. The absorbance at 1690 nm of each standard serum was measured using a spectrophotometer. Table 1 below summarizes the change in absorbance according to the concentration of ethoxycidide in serum at a wavelength of 1690 nm.

상기한 표1에 도시된 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 1690㎚의 파장에서 흡광도가 혈청내 에토석시마이드의 농도와 선형적인 비례 관계를 보였다.본 발명자들은 상기 표 1의 데이타를 기초로 하여 에토석시마이드 농도 대 흡광도 간의 표준 비례 그래프를 작성하였다. 그 작성된 그래프는 도 1에 나타나 있다. 도 1은 1690nm 파장 하에서의 에토석시마이드 농도 대 흡광도 간의 표준 비례 그래프이다. 도 1에 나타난 바와 같이, 1690nm에서는 에토석시마이드 농도와 흡광도가 선형적으로 비례하는 것을 알 수 있었다.2. 대상 혈청의 에토석시마이드 농도의 결정약제로서 에토석시마이드를 투여중인 한 환자에게 50mg/dl의 에토석시마이드를 투여하고 그 투여시점으로부터 각각 1시간, 1일, 5일 및 10일이 경과한 후에 그 환자의 혈청을 추출하고 1690nm의 파장에서 분광광도계를 이용하여 각 시점의 혈청의 흡광도를 측정하였다. 흡광도는 상기 시간 순서대로 0.00878, 0.00853, 0.00823 및 0.00767이었다. 그 흡광도를 각각 도1의 그래프에 대입한 결과, 각 혈청의 에토석시마이드 농도가 각각 48, 42, 34 및 22mg/dl인 것으로 결정되었다.As can be seen from the results shown in Table 1, the absorbance at a wavelength of 1690 nm showed a linear proportionality with the concentration of etholitecidide in serum. A standard proportional graph between ethoximide concentration versus absorbance was prepared. The created graph is shown in FIG. 1 is a standard proportional graph between ethoximide concentration versus absorbance under a 1690 nm wavelength. As shown in FIG. 1, it was found that at 1690 nm, the concentration of ethoximide and the absorbance were linearly proportional to each other. 50 mg / dl of ethoxycidide was administered to a patient who was receiving ethoxycidide as a determinant of the concentration of ethoxycidide in the serum of the subject, and 1 hour, 1 day, 5 days and 10 days, respectively, After that, the serum of the patient was extracted and the absorbance of the serum at each time point was measured using a spectrophotometer at a wavelength of 1690 nm. The absorbances were 0.00878, 0.00853, 0.00823 and 0.00767 in this time order. As a result of substituting the absorbance into the graph of Fig. 1, it was determined that the concentrations of ethoximide in each serum were 48, 42, 34 and 22 mg / dl, respectively.

이러한 결과로부터, 특정 파장의 빛을 사용하여 흡광도 측정에 의하여 혈청내 에토석시마이드의 농도를 측정할 수 있는 것을 알 수 있다.From these results, it can be seen that the concentration of ethoximide in serum can be measured by absorbance measurement using light of a specific wavelength.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 의한 혈청내 에토석시마이드의 농도 측정 방법에 의하면, 혈청내 에토석시마이드의 농도와 선형적으로 비례하는 흡광도를 보이는 특정 파장의 빛을 사용하는 흡광도 측정에 의하여, 저렴하고도 간편하게 혈청내 에토석시마이드의 농도를 결정할 수 있는 장점이 있다.As described above, according to the method for measuring the concentration of ethoxycidide in serum according to the present invention, the absorbance measurement using light having a specific wavelength exhibiting an absorbance linearly proportional to the concentration of ethoxycidide in serum is performed. Thereby, there is an advantage that can be determined inexpensively and simply the concentration of etoseoksamide in serum.

Claims

Spectrophotometrically measuring the absorbance of each standard serum using light having a wavelength in the range of 1665 nm to 1710 nm for a plurality of standard serum having different known concentrations of ethoxycides;

Determining a standard proportional graph or equation between ethoximide concentration and absorbance under the wavelength of light using the measured absorbance of the standard serum;

Measuring the absorbance of the serum to be measured for the concentration of ethoximide with a spectrophotometer under the wavelength of light; And

And substituting the measured absorbance of the target serum into the determined standard proportional graph or equation to determine the concentration of ethoximide in the serum of the subject.