KR100330312B1 - 돼지전염성위장염바이러스의침단백질에대한단일클론항체,이를생산하는하이브리도마세포주와그의제조방법 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 생쥐 단일클론항체와 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이들의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명은 돼지에서 유행성 설사질환을 유발하는 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질을 특이적으로 인식하는 단일클론항체에 대한 것으로서 본 발명의 단일클론항체는 제조하기 간편하고 대량생산이 가능할 뿐만 아니라 돼지의 분비물에서 돼지 전염성 위장염 바이러스를 조기 진단할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.

Description

돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 단일클론항체, 이를 생산하는 하이브리도마 세포주와 그의 제조방법
본 발명은 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 단일클론항체와 이를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이들의 제조방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은 돼지에 감염시 매우 치명적인 질환을 일으키는 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 단일클론항체와 이 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주 및 이들의 제조방법에 관한 것이다.
돼지 전염성 위장염은 심한 설사를 유발하는 질병으로서 모든 연령의 돼지에서 발생되며 특히 태어난지 5주이내의 새끼돼지에서 발병될 경우 치사률이 100%에 이르며 5주된 돼지 역시 90% 이상의 치사율을 나타내는 질병이다. 이 질병은 Doyle와 Huchings에 의해 1946년 처음 보고되었으며 이후 이 질병은 일본, 영국, 여러 유럽 국가, 중남미, 캐나다, 대만, 한국, 필리핀, 중국 등 세계 전역에서 발견되고 있다(Garwes DJ. Vet Rec 7;122(19):462-3, 1988). 돼지 전염성 위장염은 돼지 전염성 위장염 바이러스에 의해 유발되는데 최근 유럽지역국가들의 경우 거의 모든 새끼돼지의 혈청에서 돼지 전염성 위장염 바이러스에 대한 항체가 발견되고 있어(O'Toole D, Brown I, Bridges A, Cartwright SF, Res Vet Sci 47(1):23-9, 1989; Pensaert Callebaut P, Vergote J, Vet Q, 8(3):257-61 1986; Callebaut P,Pensaert MB Hooyberghs J, Vet Microbiol, 20(1):9-19 1989; Pensaert and Milly C. AM J Vet Res. 50(3);345-8 1989) 거의 모든 돼지가 돼지 전염성 위장염 바이러스에 감염되어 있음을 나타내고 있다. 따라서 돼지 전염성 위장염 바이러스에 의한 경제적인 피해도 매우 크다(Toma S, Lo H, Magus M. Can Med Assoc J, 119(7):722-4 1978; Miller Adv Neurol 36:311-6 1982; Pritchard, Vet Rec 120(10):226-30 1987; Arendonk and Renkema Tijdschr Diergeneeskd. 108(15-16):608-14 1983; Mousing J, Vagsholm I, Carpenter TE. Gardner LA, Hird DW. 15;192(6):756-9 1988). 현재 돼지 전염성 위장염 바이러스에 의한 피해가 지속되고 있는 원인은 첫째 새끼돼지의 치사률이 매우 높고, 둘째 적정한 치료대책이 없으며, 셋째 바이러스에 대한 방역 대책이 어렵고, 넷째 현재 개발된 백신들에 의한 방제효과가 낮다는 것이다(Bohl EH, Saif LJ Infect, Immun, 11(1):23-32, 1975; Moxley RA, Olson LR Am, J, Vet Res, 50(5):708-16, 1989). 따라서 돼지 전염성 위장염 바이러스에 의한 돼지의 설사 질병을 감소시키는 가장 효과적인 예방방법은 돼지 전염성 위장염 바이러스 감염에 대한 조기 진단을 통한 방역 대책을 확립하는 것이다. 바이러스에 대한 진단방법은 바이러스에 대한 항체를 제조하고 이 항체를 이용하여 바이러스 감염을 측정하는 방법이 일반적으로 사용되며, 복합클론항체를 이용하기 보다는 특이성이 뛰어난 단일클론항체를 이용하는 방법이 널리 사용되고 있다.
돼지 전염성 위장염 바이러스의 단백질은 핵외피 단백질, 막단백질, 침단백질로 구성되어 있는데(Pocock DH, Garwes DJ, Arch virol 49(2-3):239-47 1975),이중 침단백질이 숙주세포의 세포표면과 접촉하여 세포내로의 감염을 유발하는 것으로 알려지고 있으며(Sune C. Jimenez G, Correa I, Bullido MI, Gebauer F. Smerdou C, Enjuanes L, Virology 177(2);559-69, 1990; Godet M Grosclaude J, Delmas B, Laude H, J Vriol, 68(12):8008-8016, 1994), 침단백질에 대한 항체와 바이러스를 반응시킨 결과 바이러스에 대한 중화반응을 나타냄으로서 돼지 전염성 위장염 바이러스에서 침단백질이 세포에의 감염에 중요한 역할을 하고 있음이 보고되어 있다(Delmas B, Gelfi J L'Haridon R, Vogel LK, Sjostrom H, Noren O, Laude H, Nature 357(6377):417-20, 1992).
돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질은 페플로마 형태의 단백질로서 폴리머레이스 C 단백질 절편이 결합되어 있는 220,000 달톤의 크기를 가진 단백질이며(Jacobs L, de Groot R, van der Zeijst BA, Horzinek MC, Spaan W, Virus Res(4);363-71, 1987), 순수한 침단백질은 분자량이 85,000 달톤의 S1(N말단)과 S2(C말단)의 서브유니트로 구성되어 있는 170,000 달톤의 단백질이다(Spaan W, Cavanagh D, Horzinek M, J Gen Virol 69(Pt 12);2939-52 1988). 침단백질의 기능은 침단백질이 세포막 표면의 아미노페티데이즈 N 단백질과 결합하여 장 세포와 돼지 전염성 위장염 바이러스의 결합을 매개함으로서 바이러스와 세포의 접합을 이루게 한다. 따라서 돼지 전염성 위장염 바이러스를 구성하는 여러 단백질 중에서 침단백질에 대한 진단은 돼지전염성 위장염 바이러스의 감염여부를 결정하는 지표로 사용될 수 있다.
본 발명자들은 상기의 사실들을 감안하여 돼지에서 심한 설사를 유발하는 돼지 전염성 위장염 바이러스의 정확한 진단시스템을 구축하여 돼지 전염성 위장염을 조기 진단하는 방법을 안출하였다. 따라서, 본 발명의 목적은 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 단일클론항체, 이를 생산하는 융합세포주 및 그들의 제조방법을 제공함에 있다. 본 발명의 다른 목적은 돼지 전염성 위장염 바이러스의 상기 침단백질에 대한 단일 클론항체를 이용하여 돼지 전염성 위장염 바이러스의 감염을 조기에 진단함에 있다.
본 발명의 상기 목적은 돼지 전염성 위장염 바이러스 입자를 생쥐에 면역화시키고 그 생쥐의 비장세포를 마이엘로마 세포와 융합하여 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 단일클론항체를 생산하는 융합세포주를 선별한 다음 이를 이용하여 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 높은 특이성을 나타내는 생쥐 단일클론 항체를 대량으로 분리하여 그의 항원 특이성을 확인함으로써 달성하였다.
이하, 본 발명의 구성 및 작용을 상세히 설명하고자 한다.
도 1은 돼지 전염성 위장염 바이러스와 피이디바이러스(PEDV), 로타바이러스 입자를 각각 SDS-폴리아크릴아마이드 전기영동을 한 결과이다.
도 2는 본 발명의 하이브리도마 세포주가 생산하는 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 단일클론항체를 확인하는 웨스턴 블랏팅 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 단일클론항체가 전염성 위장염 바이러스의 침 단백질과 특이적으로 결합하여 전염성 위장염 바이러스가 숙주세포에 감염하는 것을 억제하고 있음을 면역조직화학적인 방법으로 나타낸 결과이다.
도 3a는 바이러스를 감염시키지 않은 ST세포에 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 단일클론항체를 반응시킨 결과이다
도 3b는 ST세포에 돼지 전염성 위장염 바이러스를 감염시킨 뒤에 사람 지엔티 단백질에 대한 단일클론항체를 반응시킨 결과이다.
도 3c는 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 단일클론항체를 반응시킨 결과이다.
도 4는 본 발명의 단일클론항체가 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질과 결합함으로 인하여 돼지 전염성 위장염 바이러스가 ST세포에 감염하여 ST를 파쇄시키는 현상을 억제하고 있음을 나타낸 결과이다.
본 발명은 돼지 전염성 위장염 바이러스를 배양하고 바이러스가 포함된 배지용액으로부터 돼지 전염성 장염 바이러스를 분리하는 단계; 분리된 돼지 전염성 장염 바이러스로 생쥐를 면역한 후 하이브리도마 세포를 제조하는 단계; 제조한 하이브리도마 세포로부터 단일클론항체를 생산하는 단계; 및 단일클론항체의 각종 면역분석방법에 의한 항체 특이성을 확인하는 단계로 이루어진다.
ST세포를 최소배지에서 배양하고 돼지 전염성 장염 바이러스를 세포에 3일동안 감염시켜서 3일 후에 바이러스가 포함된 배지용액으로부터 돼지 전염성 장염 바이러스를 분리하였다. 분리된 돼지 전염성 위장염 바이러스 입자를 이용하여 생쥐에 면역화시키고 이로부터 추출한 비장세포와 마이엘로마세포를 융합하여, 효소면역분석방법으로 돼지 전염성 위장염 바이러스 항원에만 특이적으로 반응하는 융합세포군를 선별 하였다. 상기에서 선별된 융합세포군이 생산하는 단일클론항체의 소단위형(subclass type)을 면역확산법으로 결정하고 그중 소단위형이 IgG1인 하나의 생쥐 융합세포주를 'SP2/0 TGS-2-2'라 명명하여 이를 1997년 9월 26일에 한국과학기술연구원 부설 생명공학연구소 유전자은행에 수탁번호 KCTC 0391BP로 기탁하였다. 상기 융합세포를 생쥐에 주사하고 복강이 부풀어 오른 생쥐에서 고농도의 융합세포를 함유하는 복수액을 취하여 돼지 전염성 위장염 침단백질에 대한 단일클론항체를 대량으로 얻는다. 상기 융합세포주로부터 얻은 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 단일클론항체가 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 항원 특이성이 있는가를 확인하기 위하여, 돼지 전염성 위장염 바이러스를 전기영동하고 상기 과정으로 제조된 단일클론항체로 웨스턴 블랏을 수행하였다. 또한 상기 단일클론항체의 돼지 전염성 위장염 바이러스 입자에 대한 특이성을 확인하기 위하여 슬라이드 글래스에서 배양한 ST세포에 돼지 전염성 위장염 바이러스 입자를 감염시키고, 상기 과정으로 제조된 단일클론항체로 조직면역화학법을 수행하였다. 또한 상기 융합세포주로부터 얻은 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 단일클론항체가 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 대한 항원특이성이 있는가를 확인하기 위하여 돼지 전염성 위장염 바이러스와 상기 과정으로 제조된 단일클론항체를 반응시킨 후에 ST세포에 대한 세포용해 억제실험을 수행하였다.
이하, 본 발명의 구체적인 구성 및 작용을 실시예를 통하여 상세히 설명하지만 본 발명의 권리범위가 이들 실시예에만 제한되는 것은 아니다.
실시예 1. 돼지 전염성 위장염 바이러스의 배양
ST세포를 T75플라스크에서 10% 소 태아혈청(fetal bovine serum)이 섞인 최소배지(minimal essential medium)에 배양하여 플라스크 바닥에 세포가 70-90% 차지할 때까지 배양하였다. 배양된 세포를 생리식염수로 2회 세척하고 1mL의 돼지 전염성 장염 바이러스 용액(100 c.f.u.)을 넣고 1시간동안 감염시킨 다음에 20mL의 최소배지(1% 소태아혈청이 포함된 배지)를 첨가하고 3일동안 배양하였다.
실시예 2. 돼지 전염성 위장염 바이러스의 분리
돼지 전염성 위장염 바이러스(Purdue strain)을 ST 세포주에 감염시킨 다음 3일 후에 바이러스들을 분리하였다. 바이러스가 포함된 배지용액을 110,000×g로 1시간 동안 침전시킨 후에 바이러스 침전물을 200㎕의 생리식염수에 녹이고 60% 당이 포함된 용액위에 천천히 부은 후 130,000×g로 원심분리하여 바이러스 밴드를 용리하고 150,000×g로 다시 원심분리하여 돼지 전염성 위장염 바이러스를 분리하였다.
실시예 3. 생쥐의 면역화
하이브리도마 세포주의 개발에 필요한 면역화된 생쥐를 얻기 위하여, 상기에서 분리한 돼지 전염성 위장염 바이러스 입자와 동량의 완전 보조항원(Complete Freund Adjuvant)을 유상화가 될 때까지 잘 혼합하여 생후 6-8주된 Balb/c 마우스의 복강내에 주사하였다. 2주후에 처음 주사액과 같은 양을 Freund's incomplete adjuvant (FIA)에 혼합하여 동일 부위에 주사하였다. 그 후 4∼5일 후에 생쥐 꼬리 부위의 혈관에서 소량의 피를 뽑아내어 역가를 확인한 후 세포융합 실험 3∼4일 전에 0.85% 생리식염수에 녹인 10㎍의 돼지 전염성 위장염 바이러스 입자를 정맥 및 복강내에 주사하였다.
실시예 4. 세포 융합
하이브리도마 세포의 제조에 필요한 세포융합을 실시하기 위하여, 상기 실시예 2에서 분리한 돼지 전염성 위장염 바이러스입자를 주사하여 얻은 생쥐의 비장세포 108개와 마이엘로마(myeloma) 세포(SP2/0) 107개를 50mL의 시험관에 모았다. 세포융합의 모세포로는 SP2/0ㆍAg14을 사용하였다. 이 모세포는 10% FBS를 함유하는 RPMI 배지에서 최대밀도 5×105/mL 정도로 항상 유지시켰다. 그리고 상기 실시예 3에서 면역화 된 생쥐를 ether로 마취한 후 몸통의 좌측에 위치한 비장조직을 꺼내서 조직분쇄기로 곱게 갈아서 HBSS를 이용하여 현탁액을 만들고, 이 때 얻어진 비장세포를 15mL 원심분리관에 넣어서 원심하고, 이 방법을 2회 반복하여 비장세포를 충분히 세척하였다. 한편 parent 세포인 SP2/0ㆍAg14도 HBSS를 이용하여 2회 원심분리하였다. 비장세포와 SP2/0ㆍAg14을 각각 10mL씩 재현탁시킨 후 각자의 세포수를 세어서 비장세포와 SP2/0ㆍAg14을 10 : 1이 되도록 50mL의 원심분리관에서 섞어 다시 원심분리하여 침전시켰다. 원심분리된 침전물을 손가락으로 가볍게 두드려서분산시키고, 37℃에서 1분간 유지시킨 후에 HBSS에 들어있는 45% PEG(w/v) - 5% DMSO(w/v)의 혼합액 1mL을 1분간에 걸쳐 넣고 또 다시 1분간 약간 흔들어 주었다. 그 후 RPMI 9mL을 3분간 걸쳐 첨가하고, 50mL이 될 때까지 흔들어 주면서 서서히 RPMI을 첨가하였다. 이 현탁액을 다시 원심분리한 후 cell pellet을 HAT 배지에 1∼2×105/ml 정도로 재현탁시키고, 96 마이크로타이터 플레이트(microtiter plate)에 0.2mL씩 넣은 후 37℃로 조정된 CO2 습도 배양기에서 37℃하에 배양하였다.
실시예 5. 단일클론항체를 생산하는 하이브리도마 세포의 선별
상기 실시예 4에서 제조한 하이브리도마 세포군 중에서 침단백질 항원에만 특이적으로 반응하는 하이브리도마 세포를 선별하기 위해 돼지 전염성 위장염 바이러스 입자를 이용한 ELISA 분석방법으로 스크리닝하였다. 마이크로타이터 플레이트에 돼지 전염성 위장염 바이러스 입자 항원을 한 웰(well)당 각각 50㎍(2㎍/mL)씩을 가하여 플레이트 표면에 부착시키고, 반응하지 않은 항원은 세척하여 제거하였다.
하이브리도마 세포의 배양액을 각각 웰에 50㎕씩을 가하여 1시간 동안 반응시킨후 인산 완충용액-트윈 20(PBST) 용액으로 충분히 세척하여 반응하지 않은 배양액을 제거하였다. 여기에 염소 항-마우스 IgG-호스래디쉬 퍼옥시다제(goat anti-mouse IgG-HRP)를 가하여 1시간 동안 실온에서 반응시킨 다음, PBST 용액으로 충분히 세척하였다. 다음 퍼옥시다제의 기질용액(OPD)을 넣어 반응시키고, 그 반응정도는 효소면역해독기(ELISA Reader)로 492nm에서 흡광도를 측정하였다. 측정 결과에 따라, 돼지 전염성 위장염 바이러스 입자 항원에 특이적으로 높은 결합력을 갖는항체를 분비하는 하이브리도마 세포주들을 먼저 선별하였고 돼지 전염성 장염 바이러스입자 항원에만 특이적으로 반응하는 하이브리도마 세포주를 선별한 후 단일클론이 되게 제한 희석(limiting dilution)하여 단일클론항체를 생성하는 하이브리도마 세포주들을 선별하여 4개의 클론을 얻었다. 이들 클론을 선별하여 동결보존하였고 상등액을 효소면역측정법으로 역가를 측정한 후 이중면역확산법으로 서브타입(subclass type)을 확인한 결과, 표1에서 보듯이 4개의 클론중 2개의 클론은 IgM이고 다른 2개의 클론은 IgG2a와 IgG1으로 판명되었다. 또한 IgG1으로 판명된 클론을 재선별하여 가장 높은 역가를 보이는 1개의 클론(TG2-2)을 선별하여 서브타입이 IgG1인 클론(SP2/0 TGS-2-2)을 각각 생쥐에 주사하여 복수액를 만들었다. 실험결과, 선별된 SP2/0 TGS-2-2 세포주가 분비하는 침 단백질에 대한 단일클론항체의 서브타입은 IgG1으로 확인되었다.
클론의 특성
Clone OD at 492nm subclass type
TG 10 1.278 IgM
TG 80 1.160 IgM
TG 24 1.268 IgG2a
TG 25 1.747 IgG1
실시예 6. 단일클론 항체의 대량 생산
상기 실시예 5에서 얻은 계속적으로 항체를 분비하는 하이브리도마로부터 단일클론성 항체를 대량 생산하기 위하여 Balb/c 생쥐에 0.5mL pristane을 복강내로 주사하였다. 1주일 후에 각각의 하이브리도마들을 생쥐 1마리당 5×106 개씩 주사하고, 복강이 부풀어 오른 생쥐에서 복수액을 채취하였다. 이 복수액에는 하이브리도마 세포가 고농도로 자라기 때문에 이 액체를 10,000rpm에서 원심분리하여 세포를 침전시킨 후, 상층액만을 취하고 이 상층액은 -20℃에서 보관하여 다음 실험에 사용하였다.
실시예 7. 웨스턴 블랏팅에 의한 항체 특이성 확인
침 단백질에 특이적으로 반응하는 단일클론항체를 효소면역 분석방법외에도 S 단백질에 대한 SDS-폴리아크릴아마이드 젤 전기영동(도1)과 웨스턴 블랏팅 방법을 사용하여 항원과의 반응성을 확인하였다.
돼지 전염성 장염 바이러스 단백질을 10% SDS-폴리아크릴아마이드 젤에 전기영동한 다음 필터막에 전기적인 방법으로 옮겼다. 막에 옮긴 단백질의 비특이적인 반응을 줄이기 위해 3% 소혈청 알부민 용액으로 12-14시간 동안 막을 차단시켰다. 침 단백질에 특이적으로 반응하는 단일클론항체를 확인하기 위하여, 1차 항체로 본 발명의 단일클론항체를 사용하여 상온에서 2시간 반응시켰다. 이 막을 0.5% 트윈이 포함된 인산 완충액으로 3회 세척한 다음 2차 항체로는 호스래디쉬 퍼옥시다제가 결합된 항-생쥐 IgG를 사용하여 상온에서 반응시켰고, 다시 0.5% 트윈이 포함된 인산 완충액으로 세척한 후 0.018%(v/v) 4-클로로-1-나프톨과 0.045%(v/v) H2O2가 인산 완충용액과 메탄올에 녹아 있는 기질을 이용하여 발색반응을 시켰다.
실험결과, 도 2에 나타난 바와같이 본 발명 단일클론항체는 PEDV(레인3), 로타바이러스(레인4)와는 반응하지 않으면서 돼지 전염성 위장염 바이러스의 200kDa, 80kDa, 120kDa 단백질과 결합하는 패턴을 나타내었다. 여기서 200 kDa 단백질은 S1도메인과 S2도메인과 polymerase C fragment가 결합된 페플로머형태의 침단백질이고, 120kDa은 S1 도메인과 polymerase C fragment 또는 S2도메인과 polymerase C fragment가 결합된 침단백질이며, 80kDa은 S1 또는 S2 의 침단백질을 것으로써 핵외피단백질(47kDa) 막단백질(29~36kDa)에는 결합하지 않고, 침단백질에만 특이적으로 결합하는 것을 확인할 수 있었습니다.
실시예 8. 조직면역화학법에 의한 단일클론항체의 돼지 전염성 위장염 바이러스에 대한 특이성 확인
ST세포를 슬라이드글래스(slide glass)상에서 배양한 다음 돼지 전염성 위장염 바이러스를 24시간 동안 감염시킨 후에 acetone과 methanol이 1:1로 이루어진 고정액으로 고정하였다. ST세포가 고정된 슬라이드글래스에 본 발명의 단일클론항체를 1시간동안 실온에서 반응시키고, 대조군으로는 사람 N-아세틸글루코사민 전이효소III에 대한 단일클론항체를 사용하였다. 슬라이드글래스를 0.5% 트윈이 포함된 인산 완충액으로 3회 세척한 다음 2차 항체로는 호스래디쉬 퍼옥시다제가 결합된 항-생쥐 IgG를 사용하여 상온에서 반응시켰고, 다시 0.5% 트윈이 포함된 인산 완충액으로 세척한 후 6mg/10mL(w/v) 디아미노벤지딘과 0.045%(v/v) H2O2를 인산 완충용액에 첨가시킨 기질을 이용하여 발색반응을 시켰다. 실험결과, 도 3에서 알 수 있는 바와같이 돼지 전염성 장염 바이러스 입자가 항원으로 작용하여 항-침단백질 단일클론항체와 반응하는 결과를 나타내어 본 발명의 단일클론항체가 침단백질에 특이적으로 반응하는 항체임을 확인하였다. 또한 상기 단일클론항체는 돼지 전염성 위장염 바이러스에 대하여 특이적으로 높은 항원인식능력을 나타내었다.
실시예 9. 단일클론항체의 돼지 전염성 위장염 바이러스에 대한 감염중화반응
돼지 전염성 장염 바이러스 배양액을 128배 희석시킨 액과 상기 분리 정제된 단일클론항체를 제한희석시킨 액과 섞어서 1시간동안 37℃에서 반응시킨 후에 ST세포 현탁액과 혼합하여 96 세포배양 플레이트에서 1일 동안 배양하였다. 그리고 96 세포배양 플레이트의 각 웰에 MTS/PMS용액(MTS용액 975㎕에 MTS용액이 25㎕이 포함된 용액)을 첨가한 후 1 시간후에 595nm에서 각 웰의 흡광도를 측정하였다. 실험결과, 도 4에서 알 수 있듯이 본 발명의 단일클론항체는 돼지 전염성 장염 바이러스의 침단백질과 결합하므로써 돼지 전염성 장염 바이러스가 세포에 침투하는 것을 억제하였다.
본 발명은 상기의 실시예를 통하여 상세히 설명한 바와같이, 침 단백질에 대한 단일클론항체와 이를 생산하는 하이브리도마 세포주를 이용하여, 돼지의 분비물에서 전염성 위장염 바이러스를 쉽게 진단하므로써 전염성 위장염바이러스의 전파경로와 이의 조기발견 효과가 있다. 또한, 본 발명의 단일클론항체는 돼지 전염성 장염바이러스에 대한 백신으로서 사용할 수 있고, 기존 백신을 투여한 돼지에서 항체형성의 검증에 대한 임상적인 진단에 이용할 수 있는 효과가 있으므로 축산 및 동물의약산업상 매우 유용한 발명인 것이다.

Claims (3)

  1. KCTC 기탁 번호가 0391BP인 하이브리도마 세포주에 의해 생산되는 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 특이적으로 결합하는 모노클로날항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 모노클로날 항체는 IgG1의 소단위형임을 특징으로 하는 돼지 전염성 위장염 바이러스의 침단백질에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체.
  3. 제1항의 모노클로날 항체를 유효성분으로 함을 특징으로 하는 돼지전염성 위장염 바이러스 진단용 조성물.
KR1019980018811A 1998-05-25 1998-05-25 돼지전염성위장염바이러스의침단백질에대한단일클론항체,이를생산하는하이브리도마세포주와그의제조방법 KR100330312B1 (ko)

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