KR100271053B1 - Microdissection device for tumor procurement using microscope - Google Patents
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Abstract
본 발명은 현미경을 이용한 종양세포 미세 절제장치에 관한 것으로서, 종래에는 슬라이드 상의 표적세포에 펜 잉크를 수작업으로 도포하고 자외선을 조사하여 필요 없는 세포들의 DNA를 파괴시켜 펜 잉크로 도포된 세포의 DNA만이 온전하게 남아 있는 것을 긁어모으는 것이므로 자외선 조사로 필요 없는 DNA가 완전히 파괴되었는지를 확인하기가 어려울 뿐만 아니라 표적세포 위에만 정확히 도포하는 것조차 어려운 문제점이 있었다.The present invention relates to a microscopic tumor cell ablation apparatus, which conventionally applies only the pen ink to the target cells on the slide by hand and irradiates with ultraviolet rays to destroy the DNA of unnecessary cells so that only the DNA of the cells coated with the pen ink is applied. Because it scrapes what remains intact, it is not only difficult to determine whether the unnecessary DNA is completely destroyed by ultraviolet irradiation, but also difficult to apply correctly only on target cells.
이를 해결하기 위하여 본 발명은 미세한 높이 및 수평이동이 가능한 현미경의 스테이지에 주사바늘을 위치시킬 수 있도록 베이스; 상기 베이스 상에서 제1,2 가이드를 따라 수평방향인 X-Y방향으로 이동 가능케 마련되는 제1,2 가동 베이스; 상기 제1 가동베이스에 마련되며 제2 가동베이스를 이동시키는 중공나사축이 마련되고 그 내부로 관통되어 제1 가동베이스의 워엄휘일을 회전시키도록 맞물린 워엄축이 유니트화되어 있는 제1 조정유니트; 상기 제2 가동베이스의 상단에 180° 범위 내에서 회전되는 회전판이 마련되고 이 회전판에 제3 가이드를 따라 상승/하강되는 승강 베이스; 상기 제2 가동베이스에는 회전판에 회전이 자유롭게 관통되고 상부의 나사부가 승강베이스를 관통하는 나사축이 마련되며 상기 나사축과 직교되는 조정축이 한 쌍의 베벨기어로 맞물려 구동되는 제2 조정유니트; 상기 승강 베이스에 고정되는 고정축을 중심으로 하여 회전되며 고정봉의 끝단에 주사바늘이 고정되고 조정스크류의 회전에 따라 제3 가이드에 의해 안내되는 주사바늘 고정대;가 구비되어 현미경의 스테이지에 염색된 조직절편이 부착되어 있는 슬라이드를 올려놓고 상기 슬라이드 위에 바늘조정기구의 주사바늘이 닿도록 고정시킨 후 현미경 초점조정나사와 스테이지 조정나사를 이용해 슬라이드상의 종양세포부위만을 현미경으로 확인하면서 주사바늘로 용이하게 긁어낼 수 있는 현미경을 이용한 종양세포 미세 절제장치를 제공하는데 있다.In order to solve this problem, the present invention includes a base for positioning the needle on the stage of the microscope capable of fine height and horizontal movement; First and second movable bases provided on the base to be movable in the X-Y direction in a horizontal direction along the first and second guides; A first adjusting unit provided on the first movable base and provided with a hollow screw shaft for moving the second movable base and penetrated thereinto and engaged with the worm shaft to rotate the worm wheel of the first movable base; ; A lifting base provided at a top of the second movable base to be rotated within a range of 180 °, and the lifting base being raised / lowered along the third guide; A second adjusting unit having a screw shaft through which the rotation is freely passed through the rotating plate and an upper threaded portion passing through the lifting base, and an adjustment shaft orthogonal to the screw shaft is driven in engagement with a pair of bevel gears; Tissue section stained on the stage of the microscope is provided; is rotated around a fixed axis fixed to the lifting base and the needle is fixed to the end of the fixed rod and guided by a third guide in accordance with the rotation of the adjusting screw; Place the attached slide and fix it so that the needle of the needle adjusting mechanism touches the slide, and then use the microscope focusing screw and stage adjusting screw to check the tumor cell area on the slide with a microscope and easily scrape off with the needle. To provide a tumor cell microdissection apparatus using a microscope that can be.
Description
본 발명은 현미경을 이용한 종양세포 미세 절제장치에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 현미경의 스테이지에 슬라이드를 올려놓고 상기 슬라이드상의 종양세포부위만을 현미경으로 확인하면서 주사바늘로 긁어낼 수 있도록 한 현미경을 이용한 종양세포 미세 절제장치에 관한 것이다.The present invention relates to a tumor cell microdissection apparatus using a microscope, and more particularly, a tumor using a microscope that allows the microscopic stage to be placed on the stage of the microscope and scrape off with a needle while only confirming the tumor cells on the slide under a microscope. It relates to a cell microdissection device.
어떤 종양에 특이한 유전자 변화를 알아내려면 정상조직과 종양조직을 순수하게 분리하여야 한다. 이때, 실험재료로 파라핀 포매조직을 가장 많이 사용하고 있는데 그 이유는 짧은 시간에 대량의 재료를 손쉽게 구할 수 있기 때문이다.Identifying genetic changes specific to a tumor requires pure separation of normal and tumor tissue. At this time, paraffin embedding tissues are most frequently used as experimental materials because a large amount of materials can be easily obtained in a short time.
이와 같이 정상조직에서 종양조직만을 분리하는 것을 미세 절제술이라 한다. 이러한 기존의 미세 절제술은 파라핀 포매 조직으로부터 5 내지 10장의 연속절편을 얻어서 그중 1개를 염색하여 종양부위와 정상부위를 현미경으로 구분한 뒤 나머지 염색되지 않은 슬라이드에서 동일부위의 조직을 예리한 수술용 칼이나 주사바늘로 긁어내고 여기서 추출한 DNA를 중합효소반응에 사용하고 있다.As such, separating only tumor tissue from normal tissue is called microscopic resection. This conventional microtomy is obtained by obtaining 5 to 10 consecutive sections from paraffin-embedded tissue, staining one of them, dividing the tumor site and the normal site with a microscope, and then sharpening the tissue at the same site on the remaining unstained slide. DNA is scraped off with a needle or used in a polymerase reaction.
그러나 생검조직이 너무 적어 충분한 양의 DNA를 얻을 수 없거나, 종양세포보다도 주위의 긴질세포나 염증세포의 침윤이 많은 경우, 종양의 구조가 복잡하여 순수한 종양세포의 분리가 불가능한 경우에는 종양세포에 특이한 유전자 변화를 찾아내기가 쉽지 않았다.However, if the biopsy tissue is too small to obtain a sufficient amount of DNA, or the infiltration of surrounding stromal cells or inflammatory cells is greater than that of the tumor cells, the tumor structure is complicated and the tumor cells cannot be isolated. It was not easy to detect genetic changes.
이러한 기술과 관련된 종래의 미세 절제장치는 펜 잉크(Pen Ink)를 얻고자 하는 슬라이드 상의 표적세포에 도포한 뒤 자외선을 조사하면 필요 없는 세포들의 DNA가 파괴되고 펜 잉크로 도포된 세포의 DNA만이 온전하게 남아 있어서 이것을 긁어모으는 방법을 제시하고 있으나 이는 자외선 조사로 필요 없는 DNA가 완전히 파괴되었는지를 확인하기가 어려울 뿐만 아니라 표적세포 위에만 정확히 도포하는 것조차 어려운 문제점이 있었다.The conventional microdissection apparatus related to this technique is applied to target cells on a slide to obtain pen ink, and then irradiated with ultraviolet rays, DNA of unnecessary cells is destroyed, and only DNA of cells coated with pen ink is intact. It has been proposed to scrape this, but it is not only difficult to determine whether the unnecessary DNA is completely destroyed by ultraviolet irradiation, but also difficult to apply correctly only on the target cells.
본 발명의 목적은 상기한 바와 같은 선행 기술의 제반 폐단 및 문제점을 해결하기 위해 연구 개발한 것으로서, 현미경의 스테이지에 염색된 조직절편이 부착되어 있는 슬라이드를 올려놓고 상기 슬라이드 위에 바늘조정기구의 주사바늘이 닿도록 고정시킨 후 현미경 초점조정나사와 스테이지 조정나사를 이용해 슬라이드상의 종양세포부위만을 현미경으로 확인하면서 주사바늘로 용이하게 긁어낼 수 있도록 한 현미경을 이용한 종양세포 미세 절제장치를 제공하는데 있다.An object of the present invention has been researched and developed in order to solve all the above-described disadvantages and problems of the prior art, a slide of a stained tissue section attached to the stage of the microscope and the needle of the needle adjustment mechanism on the slide After fixing to reach the microscopic focusing screw and stage adjusting screw to provide a tumor cell microscopic ablation apparatus using a microscope that can easily scrape off with a needle while checking the tumor cells on the slide under a microscope.
도 1은 본 발명의 현미경을 이용한 종양세포 미세 절제장치에 대한 사시도,1 is a perspective view of a tumor cell microdissection apparatus using a microscope of the present invention,
도 2는 본 발명의 단면도,2 is a cross-sectional view of the present invention,
도 3은 도 2의 A-A선에 대한 단면도,3 is a cross-sectional view taken along the line A-A of FIG.
도 4는 본 발명에서 제2 가동베이스와 회전판의 연결부분을 나타낸 분리 사시도,Figure 4 is an exploded perspective view showing a connecting portion of the second movable base and the rotating plate in the present invention,
도 5는 본 발명의 설치사용상태를 나타낸 정면도이다.5 is a front view showing the installation and use of the present invention.
*도면의 주요부분에 대한 부호의 설명** Description of the symbols for the main parts of the drawings *
10: 현미경 11: 스테이지 12: 렌즈10: microscope 11: stage 12: lens
13: 초점조정 미동나사 14: 스테이지 조정나사 15: 슬라이드13: Focusing fine adjustment screw 14: Stage adjustment screw 15: Slide
20: 바늘조정기구 21: 베이스 22: 주사바늘20: needle adjusting mechanism 21: base 22: needle
23: 제1 가동베이스 24: 제2 가동베이스 28: 승강베이스23: first movable base 24: second movable base 28: lifting base
29: 고정축 30: 주사바늘 고정대 31: 중공나사축29: fixed shaft 30: needle holder 31: hollow screw shaft
32: 워엄휘일 33: 워엄축 34: 제1 조정유니트32: worm wheel 33: worm axis 34: 1st adjustment unit
35: 회전판 36: 나사축 37: 조정축35: rotating plate 36: screw shaft 37: adjusting shaft
38: 베벨기어 39: 제2 조정유니트 40: 고정나사38: Bevel Gear 39: 2nd Adjustment Unit 40: Fixing Screw
41: 제4 가이드 42: 조정스크류 43: 스토퍼41: fourth guide 42: adjusting screw 43: stopper
본 발명은 상기와 같은 목적을 달성하기 위하여 미세한 높이 및 수평이동이 가능한 현미경의 스테이지에 주사바늘을 위치시킬 수 있도록 베이스; 상기 베이스 상에서 제1,2 가이드를 따라 수평방향인 X-Y방향으로 이동 가능케 마련되는 제1,2 가동 베이스; 상기 제1 가동베이스에 마련되며 제2 가동베이스를 이동시키는 중공나사축이 마련되고 그 내부로 관통되어 제1 가동베이스의 워엄휘일을 회전시키도록 맞물린 워엄축이 유니트화되어 있는 제1 조정유니트; 상기 제2 가동베이스의 상단에 180° 범위 내에서 회전되는 회전판이 마련되고 이 회전판에 제3 가이드를 따라 상승/하강되는 승강 베이스; 상기 제2 가동베이스에는 회전판에 회전이 자유롭게 관통되고 상부의 나사부가 승강베이스를 관통하는 나사축이 마련되며 상기 나사축과 직교되는 조정축이 한 쌍의 베벨기어로 맞물려 구동되는 제2 조정유니트; 상기 승강 베이스에 고정되는 고정축을 중심으로 하여 회전되며 고정봉의 끝단에 주사바늘이 고정되고 조정스크류의 회전에 따라 제3 가이드에 의해 안내되는 주사바늘 고정대;가 구비됨을 특징으로 한다.The present invention provides a base for positioning the needle on the stage of the microscope capable of fine height and horizontal movement to achieve the above object; First and second movable bases provided on the base to be movable in the X-Y direction in a horizontal direction along the first and second guides; A first adjusting unit provided on the first movable base and provided with a hollow screw shaft for moving the second movable base and penetrated thereinto and engaged with the worm shaft to rotate the worm wheel of the first movable base; ; A lifting base provided at a top of the second movable base to be rotated within a range of 180 °, and the lifting base being raised / lowered along the third guide; A second adjusting unit having a screw shaft through which the rotation is freely passed through the rotating plate and an upper threaded portion passing through the lifting base, and an adjustment shaft orthogonal to the screw shaft is driven in engagement with a pair of bevel gears; It is rotated around a fixed shaft fixed to the lifting base and the needle is fixed to the end of the fixed rod and the needle guide guided by the third guide in accordance with the rotation of the adjustment screw; characterized in that it is provided.
이하에서 본 발명을 첨부도면에 의거하여 상세하게 설명함으로써 본 발명의 구체적인 특징들이 보다 쉽게 이해될 것이다.Hereinafter, the specific features of the present invention will be more readily understood by explaining the present invention in detail with reference to the accompanying drawings.
도 1 내지 도 5는 본 발명의 현미경을 이용한 종양세포 미세 절제장치에 대하여 구체적으로 설명하기 위해 나타낸 도면들이다.1 to 5 are views showing for explaining in detail the tumor cell microdissection apparatus using a microscope of the present invention.
도면에 도시한 바와 같이, 현미경(10)은 100배 이상의 배율을 갖는 광학현미경으로서, 이는 시료를 올려놓을 수 있는 스테이지(11)와, 이 스테이지(11)상의 시료를 확대하여 볼 수 있는 렌즈(12)가 구비되어 있으며 상기 렌즈(12)의 초점을 조정할 수 있는 현미경 초점조정나사(13)가 구비되고 상기 스테이지(11)의 높낮이를 조정할 수 있는 스테이지 조정나사(14)가 구비되어 있다.As shown in the figure, the microscope 10 is an optical microscope having a magnification of 100 times or more, which is a stage 11 on which a sample can be placed, and a lens for magnifying and viewing the sample on the stage 11. 12), a microscope focusing screw (13) for adjusting the focus of the lens (12) is provided, and a stage adjusting screw (14) for adjusting the height of the stage (11).
상기 현미경(10)의 일측에는 별도로 된 바늘조정기구(20)가 마련되어 있으며, 이는 현미경(10)측 스테이지(11)상에 놓이는 슬라이드(15)에다 주사바늘(22)을 위치시킬 수 있도록 수평방향인 X-Y방향과 수직방향인 Z방향으로 높낮이 조절이 가능하여야 한다.One side of the microscope 10 is provided with a separate needle adjustment mechanism 20, which is positioned in the horizontal direction so that the needle 22 can be placed on the slide 15 placed on the stage 11 on the microscope 10 side. The height should be adjustable in the XY direction and in the Z direction perpendicular to the
상기 바늘조정기구(20)는 베이스(21) 상에서 제1,2 가이드(25,26)를 따라 수평방향인 X-Y방향으로 이동 가능케 마련되는 제1,2 가동 베이스(23,24)와, 상기 제2 가동베이스(24) 상에서 회전되면서 제3 가이드(27)를 따라 상승/하강되는 승강 베이스(28)와, 상기 승강 베이스(28)에 고정되는 고정축(29)을 중심으로 하여 회전되며 끝단에 주사바늘(22)이 고정되고 제4 가이드(41)에 의해 안내되는 주사바늘 고정대(30)로 구성되어 있다.The needle adjusting mechanism 20 includes first and second movable bases 23 and 24 provided on the base 21 so as to be movable along the first and second guides 25 and 26 in the XY direction in the horizontal direction. 2 is rotated around the movable base 24 and the lifting base 28, which is raised and lowered along the third guide 27, and the fixed shaft 29 fixed to the lifting base 28, The needle 22 is fixed and consists of a needle holder 30 guided by the fourth guide 41.
상기 제1 가동베이스(23)에는 제2 가동베이스(24)를 이동시키는 중공나사축(31)이 회전 가능케 마련되고 그 내부에는 제1 가동베이스(23)에 회전 가능케 마련되는 워엄휘일(32)과 맞물리는 워엄축(33)이 유니트화된 제1 조정유니트(34)가 마련되어 있다. 상기 워엄휘일(32)은 워엄축(33)과 맞물려 회전됨에 따라 제1 가동베이스(23)가 제1 가이드(25)에 의해 안내되어 이동되게 마련되어 있다.The worm wheel 32 is provided on the first movable base 23 so as to be rotatably provided with a hollow screw shaft 31 for moving the second movable base 24 to the first movable base 23. ) Is provided with a first adjustment unit 34 in which a worm shaft 33 is engaged. As the worm wheel 32 is engaged with the worm shaft 33 and rotated, the first movable base 23 is guided and moved by the first guide 25.
상기 제2 가동베이스(24)의 상단에는 180° 범위 내에서 회전 가능케 회전판(35)이 마련되고 이 회전판(35)에 제3 가이드(27)를 따라 승강 베이스(28)가 상승/하강되도록 마련되어 있다. 상기 회전판(35)이 180°범위 내에서 회전되도록 하는 하는 이유는 현미경(10)의 스테이지(11)상에 위치된 주사바늘(22)을 원위치시켜 반복작업이 용이하도록 상기 회전판(35)에 180°간격으로 돌출 고정시킨 제3 가이드(27)의 끝단이 제2 가동베이스(28)의 상단에 형성되는 스토퍼(43)에 의해 걸리도록 구성되어 있기 때문이다.The upper side of the second movable base 24 is provided with a rotatable plate 35 so as to be rotatable within a 180 ° range, and the elevating base 28 is provided on the rotatable plate 35 along the third guide 27. have. The reason for causing the rotating plate 35 to be rotated within a 180 ° range is to rotate the scanning needle 22 positioned on the stage 11 of the microscope 10 to the rotating plate 35 so as to easily repeat the work. It is because the end of the 3rd guide 27 which protruded and fixed by the space | interval (°) is comprised so that it may be caught by the stopper 43 formed in the upper end of the 2nd movable base 28. As shown in FIG.
상기 제2 가동베이스(24)와 그 상부의 회전판(35)에는 상부의 나사부(36a)가 승강 베이스(28)를 관통하는 나사축(36)이 자유롭게 회전되도록 관통되고 상기 나사축(36)과 직교되는 조정축(37)이 한 쌍의 베벨기어(38)로 맞물려 구동되는 제2 조정유니트(39)가 구비되어 있다.The screw shaft 36 through which the upper threaded portion 36a penetrates the lifting base 28 is freely rotated to the second movable base 24 and the rotating plate 35 thereon, and the screw shaft 36 and The orthogonal adjustment shaft 37 is provided with a second adjustment unit 39 which is driven by being engaged by a pair of bevel gears 38.
상기 주사바늘 고정대(30)는 승강베이스(28)에 체결되는 고정나사(40)에 의해 고정되고 조정스크류(42)에 의해 제4 가이드(41)를 따라 안내되면서 이동되도록 구성되어 있다.The needle holder 30 is fixed by a fixing screw 40 fastened to the lifting base 28 and configured to be moved while being guided along the fourth guide 41 by the adjusting screw 42.
상기와 같이 구성된 본 발명은 먼저 슬라이드(15)위에 부착된 조직절편을 탈 파라핀 과정에 의해 조직염색을 한 뒤 공기중에 말린다. 이미 덮개유리로 봉입된 슬라이드(15)는 덮개유리가 제거될 때까지 용해용액에 담가둔 후 공기중에 말린다.According to the present invention configured as described above, the tissue sections attached to the slide 15 are first stained by a deparaffin process and dried in the air. The slide 15, which is already encapsulated with the cover glass, is immersed in the dissolving solution until the cover glass is removed and then dried in the air.
이렇게 마련된 슬라이드(15)를 현미경(10)의 스테이지(11) 상에 올려놓고 현미경(10) 근처에 설치된 바늘조정기구(20)의 주사바늘(22) 끝단이 슬라이드(15)의 표적세포 주위로 조심스럽게 옮긴다.The slide 15 thus prepared is placed on the stage 11 of the microscope 10, and the end of the needle 22 of the needle adjusting mechanism 20 installed near the microscope 10 is moved around the target cell of the slide 15. Move it carefully.
상기 바늘조정기구(20)를 조정하는 과정을 참고적으로 설명하면, 제1,2 가동베이스(23,24)와 승강베이스(28) 및 주사바늘 고정대(30)를 제1 조정유니트(34)와 제2 조정유니트(39)를 조작하여 현미경(10)의 스테이지(11)상에 주사바늘 고정대(30)의 주사바늘(22) 끝단이 위치되게 고정시킨다.Referring to the process of adjusting the needle adjustment mechanism 20 for reference, the first and second movable bases (23, 24) and the lifting base (28) and the needle holder 30, the first adjustment unit (34) And the second adjusting unit 39 to fix the end of the needle 22 of the needle holder 30 on the stage 11 of the microscope 10.
이러한 상태에서 현미경(10)의 스테이지(11)상에 주사바늘 고정대(30)의 주사바늘(22) 끝단이 위치된 정도를 현미경 시야에서 관찰하여 제1 가동베이스(23)상의 제1 조정유니트(34)를 조작하여 제1,2 가동베이스(23,24)를 조정하면서 제2 가동베이스(24)상의 제2 조정유니트(39)를 회전시키는 방향에 따라 승강베이스(28)가 상하로 이동됨을 현미경 시야에서 보면서 미세하게 조정한다. 이때, 바늘조정기구(20)의 주사바늘(22) 끝단이 정확히 표적세포에 닿아야 한다.In this state, the degree of position of the tip of the needle 22 of the needle holder 30 on the stage 11 of the microscope 10 is observed in the microscope field of view so that the first adjustment unit on the first movable base 23 ( 34) to adjust the first and second movable bases 23 and 24 while the lifting base 28 is moved up and down in the direction of rotating the second adjustment unit 39 on the second movable base 24. Fine tune while looking in the microscope field of view. At this time, the end of the needle 22 of the needle adjustment mechanism 20 should exactly touch the target cell.
이렇게 슬라이드(15)상의 표적세포에 닿아있는 주사바늘(22) 끝단을 현미경(10)의 렌즈(12)를 들여다보면서 현미경 초점조정나사(13)와 스테이지 조정나사(14)를 이용해 슬라이드(15)의 표적세포에 닿지 않게 스테이지(11)의 높낮이를 낮추어 수거하고자 하는 종양세포 위치로 이동시킨 후 다시 현미경(10)의 렌즈(12)를 들여다보면서 현미경 초점조정나사(13)와 스테이지 조정나사(14)를 이용해 슬라이드(15)의 표적세포인 종양세포에 주사바늘(22) 끝단이 닿게 하여 스테이지(11)를 이동시켜 표적세포를 미세 절제한다.The end of the needle 22 touching the target cell on the slide 15 is looked into the lens 12 of the microscope 10 while using the microscope focusing screw 13 and the stage adjusting screw 14. The height of the stage 11 is lowered so as not to touch the target cells of the stage 11, and then moved to the position of the tumor cell to be collected. Then, the microscope focusing screw 13 and the stage adjusting screw 14 are looked into the lens 12 of the microscope 10 again. The end of the needle 22 is brought into contact with the tumor cells, which are the target cells of the slide 15, and the stage 11 is moved to finely excite the target cells.
이때, 슬라이드(15)가 너무 건조하면 세포가 잘 떨어지지 않을 뿐만 아니라 세포와 주사바늘(22) 끝단간에 서로 반발하는 정전기 때문에 절제한 세포를 수거하기가 어렵다. 또 이와 반대로 용해용액에 너무 젖어있어도 조직을 덮고 있는 액체의 표면장력 때문에 주사바늘(22) 끝단에 붙어있는 세포를 수거하기가 어렵다. 그러므로, 슬라이드(15)는 용해용액에 약간 젖어있는 마르기 직전 상태가 가장 좋다.At this time, if the slide 15 is too dry, the cells may not fall well, and it may be difficult to collect the excised cells due to static electricity that repels each other between the cells and the ends of the needle 22. On the contrary, even if the solution is too wet, it is difficult to collect the cells attached to the end of the needle 22 due to the surface tension of the liquid covering the tissue. Therefore, the slide 15 is best in the state just before drying out slightly wet in the dissolved solution.
이러한 상태에서 주사바늘(22)에 절제된 표적세포가 떨어지지 않도록 현미경(10)의 스테이지(11)의 높이를 낮춘 다음 회전판(35)을 전방으로 회전시켜 인출한다. 이때, 승강베이스(28)는 회전판(35)에 180°간격으로 고정된 제3 가이드(27)와 제2 가동베이스(24) 상단의 스토퍼(43)에 의해 180°내에서만 회전되게 된다. 이렇게 수거한 세포를 20㎕의 용해용액에 주사바늘(22)을 담그기만 하면 용해용액의 표면장력 때문에 주사바늘(22) 끝단에 붙었던 모든 세포가 용해용액으로 옮겨진다.In this state, the height of the stage 11 of the microscope 10 is lowered so that the target cells excised from the needle 22 do not fall, and then the rotating plate 35 is rotated forward and taken out. At this time, the elevating base 28 is rotated only within 180 degrees by the stopper 43 of the upper end of the third guide 27 and the second movable base 24 fixed to the rotating plate 35 by 180 degrees. When the collected cells are immersed in 20 µl of lysis solution, all the cells attached to the ends of the injection needle 22 are transferred to the lysis solution because of the surface tension of the lysis solution.
이러한 방법으로 세포절제작업을 반복하여 1000개의 세포들을 수거(1㎕ 용해용액에 50개의 세포가 포함됨)하고 이 용해용액 위에 미네랄 오일을 한 방울 떨어뜨린 후 52℃에서 1∼2일간 방치시켜 프로테이나제K에 의해 단백질을 완전히 파괴하도록 하며 100℃에서 10분간 프로테이나제K를 불활성화시킨 후 이를 중합효소반응을 위한 DNA로 사용하는 일단계 DNA추출방법을 사용한다.Repeat the cell excision in this way to collect 1000 cells (50 cells in 1 μl lysis solution), drop a drop of mineral oil on the lysate solution and leave it at 52 ° C. for 1-2 days. One step DNA extraction method is used to completely destroy protein by Inase K and inactivate proteinase K at 100 ° C. for 10 minutes and use it as DNA for polymerase reaction.
보통, 한번 중합효소반응에 사용하는 DNA양은 20㎕의 용해용액 중 1㎕를 사용하므로 한 슬라이드(15)에서 분리한 DNA로 약 20번의 이형접합성 소실, 점돌연변이분석과 염기서열분석 등과 같은 종양에 대한 분자생물학적 연구에 긴요하게 사용할 수 있는 것이다.Normally, the amount of DNA used for one polymerase reaction is 1 µl of 20 µl of lysis solution. Thus, DNA isolated from one slide (15) is used for tumors such as loss of 20 heterozygosity, point mutation analysis, and sequencing. It can be used critically for molecular biological research.
이상에서 상세하게 설명한 바와 같이 본 발명의 현미경을 이용한 미세 절제장치는 슬라이드 상의 표적세포에 펜 잉크를 수작업으로 도포한 뒤 자외선을 조사하여 필요 없는 세포들의 DNA를 파괴시켜 펜 잉크로 도포된 세포의 DNA만이 온전하게 남아 있는 것을 긁어모으는 방법과는 달리 현미경의 스테이지에 염색된 조직절편이 부착되어 있는 슬라이드를 올려놓고 상기 슬라이드 위에 바늘조정기구의 주사바늘을 근접시켜 고정시킨 후 현미경의 초점조정 미동나사와 스테이지 조정나사를 이용해 슬라이드상의 종양세포부위만을 현미경으로 확인하면서 주사바늘로 용이하게 긁어낼 수 있는 특유의 효과가 있다.As described in detail above, the microscopic ablation apparatus using the microscope of the present invention manually applies pen ink to target cells on a slide, and then irradiates with ultraviolet rays to destroy DNA of unnecessary cells, thereby DNA of the cells coated with pen ink. Unlike the method of scraping only what remains intact, place the slide with the stained tissue section attached to the stage of the microscope, and fix the needle of the needle adjusting mechanism close to the slide. The stage adjustment screw has a unique effect that can be easily scraped off with a needle while checking the tumor cells on the slide under a microscope.
또 본 발명은 비교적 간단한 장치이면서도 정교하게 원하는 세포들만을 미세 절제할 수 있기 때문에 유전자 종양학 연구분야의 활성화를 꾀할 수 있는 것이다.In addition, the present invention can be activated in the field of gene oncology because it is a relatively simple device and can precisely excision only cells that are precisely desired.
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