KR100258016B1 - 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 prxⅱ-1과 프로모터, prxⅱ-2, prxⅱ-3의 염기서열 - Google Patents

생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 prxⅱ-1과 프로모터, prxⅱ-2, prxⅱ-3의 염기서열 Download PDF

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Abstract

본 발명은 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터(promoter), Prx Ⅱ-2, Prx Ⅱ-3의 염기서열에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 생쥐 스트레인 129 유래의 퍼옥시리독신(Peroxiredoxin)을 코딩하고 있는 게놈(genomic) DNA상의 유전자 염기서열 및 이들의 구조를 분석함으로써, 이들 퍼옥시리독신 발현효율의 조절뿐만 아니라 퍼옥시리독신이 결여된 질환을 갖는 모델동물의 개발에 유용한 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터(promoter), Prx Ⅱ-2, Prx Ⅱ-3의 염기서열에 관한 것이다.

Description

생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 PRXⅡ-1과 프로모터, PRXⅡ-2, PRXⅡ-3의 염기서열
본 발명은 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터(promoter), Prx Ⅱ-2, Prx Ⅱ-3의 염기서열에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 생쥐 스트레인 129 유래의 퍼옥시리독신(Peroxiredoxin)을 코딩하고 있는 게놈(genomic) DNA상의 유전자 염기서열 및 이들의 구조를 분석함으로써, 이들 퍼옥시리독신 발현효율의 조절뿐만 아니라 퍼옥시리독신이 결여된 질환을 갖는 모델동물의 개발에 유용한 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터(promoter), Prx Ⅱ-2, Prx Ⅱ-3의 염기서열에 관한 것이다.
퍼옥시리독신(peroxiredoxin)이라는 효소단백질은 활성산소를 제거하는 기능을 갖는데, 활성부위의 아미노산 배열이나 산화반응시 티오리독신(thioredoxin)을 필요로 한다는 점에서 통상 알려진 카탈라제(catalase), 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(superoxide dismutase; SOD), 퍼옥시다제(peroxidase) 등 항산화효소와는 특성이 다르다[Kim et al., J. Biol. Chem., 263, 4704, 1988; ibid, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86, 6018, 1989; Chae et al., J. Biol. Chem., 268, 16815, 1993]. 또한, 동식물 및 미생물에서 모두 발견되는 이들 유전자에 대한 연구도 상당히 진행되어 40개 이상의 유전자가 보고되었고, 포유동물에서 유래된 12개 유전자의 아미노산 배열을 비교하여 I, Ⅱ, Ⅲ으로 구분한다. 이러한 퍼옥시리독신 I, Ⅱ, Ⅲ은 사람이나 생쥐 모두에서 발견된다. 이중에서 생쥐의 뇌로부터 Prx Ⅱ의 엑손만으로 이루어진 921 bp의 cDNA가 보고되었는데[Chae et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 7017, 1994], 이러한 cDNA는 게놈 DNA중 스프라이싱 과정중에 인트론이 제거된, RNA로부터 역전사된 DNA형태로서, 이들 퍼옥시리독신의 발현효율을 높이거나 Prx가 결여된 질환을 갖는 모델동물을 개발하기에는 cDNA가 게놈 DNA보다 발현효율이 낮고 Prx 결손 모델동물제작을 위한 방법이 게놈 DNA의 사용을 절대적으로 요구한다는 점 때문에 기술적으로 바람직하지 않은 점이 있어 왔다. 따라서, 상기한 목적들을 위하여 게놈 DNA의 염기서열 및 이들의 분리가 절실히 요구되고 있는 실정이다.
상기한 문제점을 해결하기 위하여 본 발명의 발명자들은 생쥐 스트레인 129로부터 세 가지 형태의 게놈(genomic) Prx Ⅱ(이를 Prx Ⅱ-1, Prx Ⅱ-2, Prx Ⅱ-3으로 명명함)를 분리한 뒤, 각 유전자의 DNA 염기서열을 결정하였으며, 이에 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명은 생쥐 스트레인 129로부터 유래된 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터(promoter), Prx Ⅱ-2 및 Prx Ⅱ-3의 염기서열을 제공하는 데 그 목적이 있다.
도 1은 본 발명에 따른 생쥐 유래의 Prx Ⅱ 유전자 및 뇌 cDNA간의 염기서열을 비교하여 나타낸 것이고,
도 2는 생쥐 게놈내의 Prx Ⅱ 유전자 및 클로닝된 재조합 게놈 DNA간의 Southern 블로팅방법에 의한 비교를 나타낸 것이고,
도 3은 생쥐 성체조직을 대상으로 한 Prx Ⅱ 유전자 발현의 결과를 Northern 블로팅 방법에 의해 분석한 것을 나타낸 것이고,
도 4는 생쥐 배조직을 대상으로 한 Prx Ⅱ 유전자 발현의 결과를 Northern 블로팅 방법에 의해 분석한 것을 나타낸 것이고,
도 5는 본 발명에 따른 Prx Ⅱ-1 유전자의 제한효소지도, 전사위치, 전사방향 및 엑손/인트론 구조의 도식을 나타낸 것이고,
도 6은 본 발명에 따른 Prx Ⅱ-1 유전자의 DNA 염기서열을 나타낸 것이고,
도 7은 프라이머 연장(Primer extension) 분석에 의한 Prx Ⅱ-1 유전자의 전사개시점을 나타낸 것이고,
도 8은 본 발명에 따른 Prx Ⅱ-1 유전자 프로모터상의 전사인자 결합 예상부위를 분석하여 나타낸 것이고,
도 9는 본 발명에 따른 Prx Ⅱ 유전자의 RT-PCR을 이용한 발현성에 대한 분석을 나타낸 것이다.
본 발명은 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터(promoter), Prx Ⅱ-2 및 Prx Ⅱ-3의 염기서열을 그 특징으로 한다.
이와 같은 본 발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.
본 발명은 퍼옥시리독신(peroxiredoxin) 발현효율의 조절뿐만 아니라 퍼옥시리독신이 결여된 질환을 갖는 모델동물의 개발에 유용한 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터(promoter), Prx Ⅱ-2 및 Prx Ⅱ-3의 염기서열에 관한 것이다.
본 발명에서의 Prx Ⅱ-1과 프로모터, Prx Ⅱ-2 및 Prx Ⅱ-3 유전자의 특성을 요약하면, Prx Ⅱ-1의 전사단위(transcription unit)는 4.5 kb 크기로서, 6개의 엑손과 5개의 인트론으로 구성되는데, 6개의 엑손으로부터 198 아미노산을 암호화하는 1.1 kb의 mRNA가 제조된다. 그리고, 쥐(rat)의 Prx Ⅱ의 아미노산 서열과 98% 상동성을 갖는다.
Prx Ⅱ-1 유전자 프로모터가 존재하는 810 bp의 염기서열을 분석하면, 가까운 부위(proximal part)에는 Sp1, NF1, AP-1 또는 AP-2 결합부위(binding site)가, 먼 부위(distal part)에는 반쪽의 열충격전사인자(heat shock transcription factor; HSF) 결합부위가 17개 이상 분포되어 있다.
Prx Ⅱ-2는 약 940bp 크기의 단일 엑손으로, cDNA와는 96.9%의 상동성을, Prx Ⅱ-1과 97.5%의 상동성을, cDNA로부터 유래되는 단백질의 아미노산서열과는 95.5%의 상동성을 갖고 있으며, 또한 597 bp의 ORF를 유지하고 있다.
Prx Ⅱ-3는 약 750bp 크기로써 Prx Ⅱ-2와 비교하여 191 bp가 손실된 단일 엑손으로, Prx Ⅱ-1과 87%의 상동성을 갖고 있으며, 또한 453 bp의 ORF를 갖고 있다.
그러나, Prx Ⅱ-2와 Prx Ⅱ-3 유전자는 mRNA로 전사된다는 증거를 발견하지 못하였으며, 이로써 레트로트랜스포지션(retrotransposition)에 의한 유사유전자(pseudogene)로 여겨진다.
이와 같이 본 발명에 따른 Prx Ⅱ-1과 프로모터, Prx Ⅱ-2 및 Prx Ⅱ-3 유전자의 염기서열은 1997년 11월 4일 GenBank에 기탁하여 AF031714 - AF031722의 기탁번호를 부여받았다.
이하, 본 발명을 실시예에 의거 더욱 상세히 설명하겠는 바, 본 발명이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 : 뇌 유래의 재조합 cDNA의 염기서열 결정
생쥐 뇌 유래의 재조합 cDNA 라이브러리(in Uni-ZAP XR; Stratagene사 제품)를 소의 뇌로부터 추출한 Prx Ⅱ에 특이적인 항체(Chae et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 7017, 1994)로써 단백질 발현형 cDNA 라이브러리 검색의 일반적인 절차에 따라 양성집락을 스크리닝하고, 제조업자의 지시방법에 따라 재조합 cDNA를 λ Uni-ZAP XR 벡터 형태로부터 pBluescript SK(-) 플라스미드 벡터 형태로 전환하였다.
플라스미드를 분리하여, Taq 다이 프라이머 사이클 씨퀀싱 키트(Taq dye primer cycle sequencing kit; Applied Biosystem사 제품)를 이용하여 제조업자의 지시방법에 따라 형광표지한 후 자동화된 DNA 씨퀀서(모델 370A, Applied Biosystem사 제품)로써 염기서열을 결정하였다.
그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이 염기서열은 종래에 밝혀진 cDNA와 상호 일치하였다[Chae 등; GenBank U20611, Ichimiya 등; GenBank U51679]. 이때, 도 1에서는 유전자간에 뉴클레오티드 차이가 없는 것은 점(·)으로 표시하였고, DNA가 결손된 부위의 뉴클레오티드는 선으로 표시하였다.
또한, 분리한 플라스미드를 제한효소 EcoRI/XhoI(Boehringer-Mannheim사 제품)으로 절단하여 921 bp 크기의 Prx Ⅱ cDNA를 얻은 후, 이를 클레노우 효소(Klenow enzyme)를 이용한 랜덤 프라이밍(random priming) 방법에 의하여 동위원소32P-α-dCTP(Amersham사 제품)로 표지하여 프로브(probe)를 제조하였다.
실시예 2 : 생쥐 스트레인 129의 간으로부터 Prx Ⅱ 유전자의 스크리닝
생쥐 간으로부터 추출한 DNA 10㎍를 제한효소 EcoRI(Boehringer-Mannheim사 제품)으로 처리한 다음, 전개액(1mM EDTA in 0.04M Tris-acetate buffer)을 사용하여 0.7% 아가로스 겔로 전기영동하고, Southern 방법에 따라 나일론막(Hybond N+; Amersham사 제품)으로 옮겼다.
실시예 1에서 준비한 프로브 2 × 106cpm/㎖와 50X 덴하르츠 용액(Denhardt's solution)을 최종 1/10 되도록 첨가한 반응액(40% formamide, 1.08M NaCl, 0.006M EDTA, 0.5% SDS, 7.5% dextran sulfate, heat-denatured herring sperm DNA 100㎍/㎖ in 0.06M Na phosphate, pH 7.7)을 혼합하여 42℃에서 하루밤 혼성화(hybridization)반응시키고, 세척액 1 (0.1% SDS in 2X SSC)로 실온에서 30분간 세척하고, 다시 세척액 2 (0.1% SDS in 0.1X SSC)로 60℃에서 15분간 세척한 다음, X선 필름(RX, Fuji Photo사 제품)에 노출시켰다. 그 결과는 도 2에 요약하여 나타낸 바와 같이, 생쥐 스트레인 129는 Prx Ⅱ 유전자를 갖고 있음을 확인하였다.
실시예 3 : 생쥐 스트레인 129로부터 Prx Ⅱ 유전자의 스크리닝
생쥐 스트레인 129의 뇌, 폐, 췌장, 림프, 위, 신장, 간, 고환 등 여러 조직으로부터 추출한 RNA 10㎍씩을 사용한 점을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법을 이용하여 실험을 수행하였고, 그 결과는 다음 도 3에 요약하였다.
실시예 4 : 생쥐 스트레인 129의 Prx Ⅱ 유전자 전사확인
발생 7, 8, 9, 10, 11일된 생쥐의 태아와 이를 둘러싼 태반으로부터 추출한 RNA 10㎍씩을 사용한 점을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방법으로 실험을 수행하였다. 그리고, 그 결과는 다음 도 4에 요약하여 나타내었으며, 이상에서 생쥐 스트레인 129는 Prx Ⅱ 유전자를 전사함을 확인하였다. 이때, 도 4에서 M은 태아조직을, X는 태반을 비롯한 태아외조직(extraembryonic tissue)을 각각 나타낸다.
실시예 5 : 재조합 게놈 DNA 라이브러리내 Prx Ⅱ 유전자의 존재확인
생쥐의 재조합 게놈 DNA 라이브러리(recombinant genomic DNA library)를 실시예 1의 프로브와 반응시켜 4개의 양성집락을 분리하였고, 형질전환체를 λ-1A, λ-1B, λ-2 및 λ-3으로 명명하였다.
Prx Ⅱ 유전자를 함유한 재조합 λ DNA를 제한효소 EcoRI으로 처리한 후, 실시예 2와 동일한 방법으로 전기영동 및 Southern 분석을 수행하였다. 그리고, 그 결과는 도 2와 동일하였다. 즉, 이상에서의 결과로부터 재조합 게놈 DNA내에 서로 다른 세가지의 Prx Ⅱ 유전자가 존재함을 확인하였다.
실시예 6 : λ-1 형질전환체내의 재조합 게놈 DNA 제한효소지도
실시예 5의 Prx Ⅱ-1 유전자를 함유하는 λ-1 형질전환체로부터 재조합 게놈 DNA를 라퀴쯔가 제시한 종결효소 올리고머(terminase oligomer) 방법으로 분석하여 BamHI, EcoRi, HindⅢ, KpnI(모두 Boehringer-Mannheim사 제품) 등에 대한 제한효소 지도를 작성하였다(Rackwitz 등; Gene, 40, 259, 1985). 그리고, 결과된 제한효소 지도는 다음 도 5에 요약하여 나타내었으며, 이상에서 λ-1A와 λ-1B는 동일한 유전자를 갖고 있음을 확인할 수 있었다. 따라서, 1B를 제외하였다. 이때, 도 5에서 짙게 표시된 박스(box)는 PrxⅡ-1 유전자의 엑손부위를, 화살표는 PrxⅡ-1 유전자의 전사방향을 각각 나타낸다.
[Prx Ⅱ 유전자의 염기서열 결정]
실시예 7 : Prx Ⅱ 유전자함유 플라스미드 DNA 벡터의 제조
Prx Ⅱ 유전자를 함유하는 실시예 5의 재조합 λ DNA를 제한효소 NotI(Boehringer-Mannheim사 제품)으로 처리하고, 동효소로 처리된 pBluescript 플라즈미드 벡터에 T4 DNA 연결효소(Ligase; Boehringer-Mannheim사 제품)를 이용하여 서브클로닝한 다음, 대장균 DH5α에 형질전환하여 Prx Ⅱ 유전자를 함유하는 플라스미드 DNA 벡터를 제조하였다.
실시예 8 : Prx Ⅱ-1 유전자의 씨퀀싱
λ-1 형질전환체에서 유래된 Prx Ⅱ-1 유전자를 함유하는 상기 실시예 7의 플라스미드 DNA 벡터를 이용하여 디데옥시뉴클레오티드 사슬 종결방법(dideoxynucleotide chain termination method)으로 염기서열을 결정하였다. 그리고, 그 결과는 도 1에 함께 나타내었다.
실시예 9 : Prx Ⅱ-2 유전자의 씨퀀싱
λ-2에서 유래된 Prx Ⅱ-2 유전자를 함유하는 실시예 7의 플라스미드 DNA 벡터를 이용하여 디데옥시뉴클레오티드 사슬 종결방법(dideoxy chain termination method)으로 염기서열을 결정하였다. 그리고, 그 결과는 도 1에 함께 나타내었다.
실시예 10 : Prx Ⅱ-3 유전자의 씨퀀싱
λ-3에서 유래된 Prx Ⅱ-3 유전자를 함유하는 실시예 7의 플라스미드 DNA 벡터를 이용하여 디데옥시뉴클레오티드 사슬 종결방법(dideoxy chain termination method)으로 염기서열을 결정하였다. 그리고, 그 결과는 도 1에 함께 나타내었다.
또한, 결과된 Prx Ⅱ 각각의 유전자 서열을 가지고 DNA 스트라이더(DNA strider; version 1.1)를 사용하여 ORF를, 클러스탈 W(Clustal W; version 1.7)를 사용하여 상동성을 각각 확인하였다.
[Prx Ⅱ 유전자의 구조분석]
실시예 11 : Prx Ⅱ-1 유전자의 구조분석
DNA 써멀 사이클러(DNA Thermal Cycler; Perkin Elmer사 제품, 모델 480)를 사용하여 실시예 8의 게놈 DNA 50ng을 주형으로, 1.5mM MgCl2, 200μM dNTP, Taq 중합효소(Boehringer-Mannheim사 제품) 2.5 단위(unit)에 다음의 프라이머 0.5μM를 첨가하고, 94℃에서 5분간 처리한 다음, 94℃ 1분, 55℃(인트론 I, Ⅲ, Ⅳ) 또는 62℃(인트론 V) 1분, 72℃에서 3분의 과정을 30회 반복수행하고, 최종 72℃에서 15분간 처리하였다. 그리고, 그 결과는 도 6에 나타내었다.
이상에서 인트론 I의 크기는 640bp, 인트론 Ⅲ의 크기는 640bp, 인트론 Ⅳ의 크기는 180bp, 인트론 V의 크기는 2380bp이었다. 크기가 91bp로 작은 인트론 Ⅱ는 Prx Ⅱ-1 유전자의 염기서열을 읽는 도중에 포함되어 있었으므로, 결과에서 제외하였다. 또한, Prx Ⅱ-1 유전자는 6개의 엑손과 5개의 인트론으로 구성됨을 확인하였다.
프라이머(primer);
I 5'-TCT CTT TTC TGT CTC TAC CCG TG-3'
5'-CTG TAA GCA ATG CCC TCA TC-3'
Ⅲ 5'-CGC TTT TAG CGA CCA TGC TGA GG-3'
5'-CTG TAA GCA ATG CCC TCA TC-3'
Ⅳ 5'-CGC TTT TAG CGA CCA TGC TGA GG-3'
5'-ATG CTC GTC TGT ATA CTG AAA-3'
V 5'-CGC TTT TAG CGA CCA TGC TGA GG-3'
5'-TGC TCA GGG CAG GAT CAC TAT TC-3'
실시예 12 : Prx Ⅱ-1 유전자의 전사개시점 분석
11일째의 생쥐 태아로부터 추출한 RNA 50㎍과32P-α-dCTP(Amersham사 제품), 다음의 프라이머(primer) -34/-12 또는 프라이머 -27/+10 등을 AMV 역전사효소(reverse transcriptase; Gibco BRL사 제품)로써 처리하여 첫 번째 단일 나선의 cDNA(single strand cDNA)를 제조한 다음, DNA 씨퀀싱 겔(sequencing gel)로 전기영동하여 프라이머 연장(Primer extension) 분석방법에 의해 분석하였다.
프라이머 -34/-12; 5'-CAA GAG CCG GAC ACA CGG ACG TC-3'
프라이머 -27/+10; 5'-CGG AGG CCA TGA CTG CGT GAG CAA GAG CCG GAC ACA C-3'
그리고, 그 결과는 도 7에 나타내었다.
프라이머 -34/-12를 사용하여 제조한 Prx Ⅱ-1 유전자의 첫 번째 단일 나선 cDNA(single strand cDNA)는 60 bp이었고, 프라이머 -27/+10을 사용하여 제조한 Prx Ⅱ-1 유전자의 첫 번째 단일 나선 cDNA(single strand cDNA)는 81 bp이었다.
이상에서 전사개시점을 도 6의 G로, 제 1 엑손의 크기를 69 bp로 결정하였다.
실시예 13 : Prx Ⅱ-1 유전자상 프로모터의 전사인자 결합부위분석
실시예 8에서 판독한 Prx Ⅱ-1 유전자와 상단 1500 bp 정도의 염기서열을 시그날 스캔(Signal Scan; version 3.3) 프로그램을 운영하여 프로모터 지역내의 전사인자 결합부위를 확인하였다. 그리고, 그 결과는 도 8과 같다.
따라서, 프로모터 크기는 상기에서 확인된 전사인자 결합부위의 빈도가 낮은 부분을 제외하고, 810 bp로 결정하였다. 이때, 도 8에서 HSF, AP-1, AP-2, Sp1, NF1 등은 각각 열충격전사인자, AP-1, AP-2, Sp1, NF1 등과 같은 전사조절인자의 결합가능부위를 나타내며, 화살표는 열충격전사인자의 반쪽결합단위를 나타낸다.
[Prx Ⅱ 유전자의 RT-PCR을 이용한 발현성에 대한 분석]
실시예 14
생쥐 뇌 조직으로부터 추출한 총 RNA 10㎍을 반응액[75mM KCl, 3mM MgCl2, 2mM DTT, 500ng oligo(dT)21, 125μM dNTP, Supercript Ⅱ(Gibco BRL사 제품) 200 unit in 50mM Tris-Cl, pH 8.3] 20㎕에서 42℃로 1시간 반응시켜 poly A 꼬리를 갖는 모든 mRNA 주형에 대한 첫 번째의 단일 나선 cDNA(single-strand cDNA)를 합성하였다.
그런 다음, 상기한 첫 번째의 단일 나선 cDNA(single-strand cDNA)를 주형으로 다음의 프라이머를 사용하여, 실시예 11의 조건으로 PCR 증폭시켰으며, 이때, 어니일링(annealing) 온도는 56℃에서 수행하였다.
프라이머 1; 5'-TCT CTT TCC TGT CTC TAC CCG TG-3'
2; 5'-ATG CTC GTC TGT ATA CTG AAA-3'
증폭된 DNA를 제한효소 AvaⅡ(Boehringer-Mannheim사 제품)로 처리하였고, 1.5% 아가로스 겔에서 전기영동하였다. 실시예 14 ∼ 16에서 사용된 프라이머(Primer)의 위치와 AvaⅡ 인식부위의 위치는 도 1에 화살표와 삼각점으로 각각 표시되어 있다.
실시예 15
발생 10일된 배로부터 추출한 RNA를 사용한 점을 제외하고는 상기 실시예 14와 동일한 방법으로 실험을 수행하였다.
실시예 16
실시예 14와 15의 RNA에 대하여 다음의 프라이머 3과 4를 사용한 점을 제외하고는 상기 실시예 14와 동일한 방법을 사용하여 실험을 수행하였다. 그 결과는 다음 도 9에 요약하여 나타내었다. 이때, 도 9에서 B는 생쥐 성체의 뇌조직에서 추출한 RNA를, E는 11일된 태아에서 추출한 RNA를 각각 나타낸다.
프라이머 3; 5'-GCC AGA TCA CAG TCA ATG-3'
프라이머 4; 5'-TGC TCA GGG CAG GAT CAC TAT TC-3'
즉, 이상의 결과로부터 Prx Ⅱ-1 유전자는 전사되지만, Prx Ⅱ-2와 Prx Ⅱ-3 유전자는 전사되지 않는다는 것을 확인하였다. 따라서, 이들 Prx Ⅱ-2와 Prx Ⅱ-3 유전자는 레트로트랜스포지션(retrotransposition)에 의한 유사유전자(pseudogene)로 추정되었다.
이상에서 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터, Prx Ⅱ-2, Prx Ⅱ-3 및 그의 게놈 염기서열을 결정하였다.
서열 목록
1. 서열들에 관한 일반정보
(1) 출원인의 성명 : 한국과학기술원
(2) 발명의 명칭 : 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터(promoter), Prx Ⅱ-2, Prx Ⅱ-3의 염기서열
(3) 서열의 갯수 : 4
(4) 컴퓨터 판독형태
매체타입 : 플로피디스크
운영체계 : MS-DOS
2. 서열 1에 대한 정보
i. 서열의 특성
서열의 길이 : 1019 bp
서열의 형 : 핵산
쇄의 수 : 이본쇄
형태 : 직쇄상
ii. 서열의 종류 : 게놈 DNA(Genomic DNA)
iii. 기원 :
생물명 : 생쥐 스트레인 129
TCCCCCCACCCCCCGGCAGCCGCAATGGATCCGACCGCGGCGCTGTCCCGCCCACCTCCCCGCGCACTGCCTGGTGTGGTTTGGGCCACGCATAAAAGGTTCTCCGGCCTAGGGCTCTCTCGGTTTTGAGATCTCTTTCCTGTCTCTACCCGTGTCTGGACGTCCGTGTGTCCGGCTCTTGCTCACGCAGTCATGGCCTCCGGCAACGCGCAAATCGGAAAGTCGGCTCCTGACTTCACGGCCACAGCGGTGGTGGATGGTGCCTTCAAGGAAATCAAGCTTTCGGACTACAGAGGGAAGTACGTGGTCCTCTTTTTCTACCCACTGGACTTCACTTTTGTTTGCCCCACGGAGATCATCGCTTTTAGCGACCATGCTGAGGACTTCCGAAAGCTAGGCTGCGAGGTGCTGGGAGTGTCTGTGGACTCTCAGTTCACCCACCTGGCGTGGATCAATACCCCACGGAAAGAGGGAGGCTTGGGCCCCCTGAATATCCCTCTGCTTGCTGACGTGACTAAAAGCTTGTCCCAGAATTACGGCGTGTTGAAAAATGATGAGGGCATTGCTTACAGGGGTCTCTTTATCATCGATGCCAAGGGTGTCCTTCGCCAGATCACAGTCAATGACCTACCTGTGGGCCGCTCTGTAGACGAGGCTCTCCGCCTAGTCCAGGCCTTTCAGTATACAGACGAGCATGGAGAAGTCTGCCCTGCTGGCTGGAAGCCCGGCAGTGACAACATCAAGCCCAATGTGGATGACAGCAAGGAATACTTCTCCAAACACAACTGAGATGGGTAAACATCGGTGAGCCTGAAGCTTGGATTTCACCTGTGCCCCAACCTGGATGTCCTGTGCTGGCCCAGAAAATGCTAGATTTTCCTCCACTCTCTGAAGGGGCTGGAGTCTAGGCTGAGGCTTTCTCATTACCCACCTGGAATCTGGTGAATAGTGATCCTGCCCTGAGCACACCTAGCTGGGCCCAGGTCTATAGGAAACCAATAAAGTATTAGGGACAGTGT
3. 서열 2에 대한 정보
i. 서열의 특성
서열의 길이 : 810 bp
서열의 형 : 핵산
쇄의 수 : 이본쇄
형태 : 직쇄상
ii. 서열의 종류 : 게놈 DNA(Genomic DNA)
iii. 서열의 특징 : 프로모터(Promoter)
CTCAAGCTGACTGGCCAGTTTCTTTCTCTGCCTCCACCCTTCTAGCACTATGTTAATAGGTTGTTTATTAGACAGGCAGTGTTTAATATAATTATCAGATGACCAAGGAAGCTGCGGGGCAAGAAGTTGAGAACAAAAGGTAGTACGGTTGGGGCATGGCtGTAAATTTTCAATAAAGTGAAACGGAACAAAATAAAACAAAACAATAACTCACAGATGAGAAATCACACTCAGAGAAAAAGTGCCCAGTTCCTTGAGACCCAGCCTGCACTGAGCTGGGCAGGGATCTGAAGTCAGCCAGAGAGGGTCTGTTTGTAGGGCCTTGGCCAAGTGAGGCCTTCGGGGGTTGGGGTGGGGAGGACACCTTTTCATAGCGTAACTCCCGTCCACCTGCTAGTTTACCCTTTTGTCGCTGCAGCGTCAGCAGCTCCCAGGTATCACCTTCACCGTGCGGGCCAAAGTATTGGTAGTCTGGGTCGATCTGAGTAGGGGACACCAGACCTAGGAGCACTAGGGGAGTCAGCAACGGAGCCAAGTGGCTCNGGGCCATGCCCGGACTCCAACCGACCCCAACGCGCCCCGTGGCCGAGGCTCGCGAGGAGCCCACAGCACAGACAATCTTGGCGTCCGAAAGGGCACACCCCACCCAACCCTTGTGAAAGAGTGTGGACCGGGCCACGCGGNGCCTTCCCCCCACCCCCCGGCAGCCGCAATGGATCCGACCGCGGCGCTGTCCCGCCCACCTCCCCGCGCACTGCCTGGTGTGGTTTGGGCCACGCATAAAAGGTTCTCCGGCCTAGGGCTCTCTCG
4. 서열 3에 대한 정보
i. 서열의 특성
서열의 길이 : 1054 bp
서열의 형 : 핵산
쇄의 수 : 이본쇄
형태 : 직쇄상
ii. 서열의 종류 : 게놈 DNA(Genomic DNA)
GTAGCACATGGTTTCTTACCCTTCCATGCCATTTAGTGTTAGCATTAGATTTAGCTTCCTGACTGGGGGTGTGGGGGGGGTGACATTAAGGTATCCTAAGAAAGTTTCTTGAGGGTTTTAGATCTCTTTCCTGTCTCTACCCGTGTCTGGACGTCCGTGTGTCCGGCTCTTGCTCATGCAGTCATGGCCTCTGGCAACGCGCACATCGGAAAGTCGACTCCTGACTTCACGGCCACAGCAGTGGTGGATGGTACCTTCAAGGAAATCAAGCTTTCGGACTACAGAGGGAAGTACATGGTCCTCTTTTTCTACCCACTGGACATCACTTTTGTTTGCCCCACGGAGATCATCGCTTTTAGCGACCATGCTGAGGACTTCCGAAAGCTAGGCTGTGAGGTGTTGGGAGTGTCTGTGGACTCTCAGTTCACCCACCAGGCGTGGATCAATACCTCACGGAAGGAGGGAGGCTTGGGTCCCCTGAATATCCCTCTGCTTGCTGACGTGACTAAAAGCTTGTCCCAGAATTACGGCGTGTTGAAAAATGATGAGGGCATTGCTTACAGGGGTCTCTTTATCATCGATGCCAAGGGTGTCCTTCGCCAGATCACAGTCAATGACCTACCTGTGGGACGCTCTGTACACGAGGCTCTCCGCCTAGTCCAGGCCTTTCAGTATACAGACGAGCATGGGGAAGTCTCTCCTGCTGGCTGGAAGCCCGGCAGTGACACCATCAAGCCCAATGTGGATGACAGCAAGGAATACTTCTCCAAACACAACTGAGATGGGTAAACATAGGTGAGCCTGAAGCTTGGATTTCACCTGTGCCCCAACCTGGATGTCCTGTGCTGGCCCAGAAAATGCTAGATTTTCCTCTACTCTCTGAAGGGGCTGGAGTCTAGGCTGAGGCTTTCTCATTACCCACCTGGAATCTGGTGAATAGTGATCCTGCCCTGAGCACACCCAGCTGGGCCCAGGTCTATAGGAAAACAATAAAGTATTAGGGACTGTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAGAAAGTTTCTTGATTTT
5. 서열 4에 대한 정보
i. 서열의 특성
서열의 길이 : 884 bp
서열의 형 : 핵산
쇄의 수 : 이본쇄
형태 : 직쇄상
ii. 서열의 종류 : 게놈 DNA(Genomic DNA)
GAACAAAAGCTGGTACCGGGCCCCCCCTCGAGGTCGACGGTATCGATAAGCTTGATATCGAATTCGCTAGTGTGGGTTTGGGCCACACATAAGAGGCTCCCAGGCCTAGGGATTTCTTGGTTCTGAGATCTCTTTCCTATGTCTGCTCATGTCTGGTCAACTGCATGTCTGGCTCTTGTCCACGCAGTCATGGCCTCCAACAACACGCACATGAAAAGCCGGCCCCTGACTTCACTGTCACCGCCGCAGCAGATGGTGTTCTTAAGGAAATCAGACTTTCAGACTACAGAGGGAAGTACGTGGTCCTCCTTTTCTACCTACTGGATTTCACTTTTGTTTGCCCCACAGAGATCATCACTTTTAGCGACCATGCCAAGGACTTCCAAAAGCTAGGCTTCGAGGTGCTGGGAGTTTCTATGGACTCTCAGTTTACCCACCTGGCATTGATCAATACCCCACAGGAGGGAAGTTTGGGAACCCTGAATATCCCTCTGCTTGCTGACGTGACTAAAAGCTTGTCCCAGAATTACCGCGTGTTGAAAAATGATGAGGGCATCGTTACAGGGTTTCTTTATCATCGATGCCAAGGGTGTCCTTTGCCAGATCACAGTCAATGATCTACCTGTGGGATACTCTATAGTTAAGACTCTCTGCCTAGTCCTACCTGGATGTCCTGTGCTGGCCCAGAAAACTGCTACATCTTCCTCCACACTCTGAAGGGGGTGGAGATTAGGCCGAGGCTTTCTCATTACCCACCCGAAATCTGGTGAATAGTGACCCTGCCCTGAGAACACCCAGCTGCTTTGGAGGAAGCAGTAGGGATTATCATAGAAGCTTTCTATTTCCCTCTTTCTCAATTGTGAGTCTGCAAAAGTAGCTTCCTT
상기한 바와 같이, 본 발명에 따른 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-1과 프로모터(promoter), Prx Ⅱ-2, Prx Ⅱ-3의 염기서열을 규명함으로써, 퍼옥시리독신 발현효율을 적절히 조절할 수 있을 뿐만 아니라 퍼옥시리독신이 결여된 질환을 갖는 모델동물을 개발할 수 있어 산업상 유용한 효과가 있음을 알 수 있다.

Claims (2)

  1. 서열 2의 DNA 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ의 프로모터.
    서열 2;
    CTCAAGCTGACTGGCCAGTTTCTTTCTCTGCCTCCACCCTTCTAGCACTATGTTAATAGGTTGTTTATTAGACAGGCAGTGTTTAATATAATTATCAGATGACCAAGGAAGCTGCGGGGCAAGAAGTTGAGAACAAAAGGTAGTACGGTTGGGGCATGGCtGTAAATTTTCAATAAAGTGAAACGGAACAAAATAAAACAAAACAATAACTCACAGATGAGAAATCACACTCAGAGAAAAAGTGCCCAGTTCCTTGAGACCCAGCCTGCACTGAGCTGGGCAGGGATCTGAAGTCAGCCAGAGAGGGTCTGTTTGTAGGGCCTTGGCCAAGTGAGGCCTTCGGGGGTTGGGGTGGGGAGGACACCTTTTCATAGCGTAACTCCCGTCCACCTGCTAGTTTACCCTTTTGTCGCTGCAGCGTCAGCAGCTCCCAGGTATCACCTTCACCGTGCGGGCCAAAGTATTGGTAGTCTGGGTCGATCTGAGTAGGGGACACCAGACCTAGGAGCACTAGGGGAGTCAGCAACGGAGCCAAGTGGCTCNGGGCCATGCCCGGACTCCAACCGACCCCAACGCGCCCCGTGGCCGAGGCTCGCGAGGAGCCCACAGCACAGACAATCTTGGCGTCCGAAAGGGCACACCCCACCCAACCCTTGTGAAAGAGTGTGGACCGGGCCACGCGGNGCCTTCCCCCCACCCCCCGGCAGCCGCAATGGATCCGACCGCGGCGCTGTCCCGCCCACCTCCCCGCGCACTGCCTGGTGTGGTTTGGGCCACGCATAAAAGGTTCTCCGGCCTAGGGCTCTCTCG
  2. 서열 4의 DNA 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 생쥐 유래의 퍼옥시리독신 유전자 Prx Ⅱ-3.
    서열 4;
    GAACAAAAGCTGGTACCGGGCCCCCCCTCGAGGTCGACGGTATCGATAAGCTTGATATCGAATTCGCTAGTGTGGGTTTGGGCCACACATAAGAGGCTCCCAGGCCTAGGGATTTCTTGGTTCTGAGATCTCTTTCCTATGTCTGCTCATGTCTGGTCAACTGCATGTCTGGCTCTTGTCCACGCAGTCATGGCCTCCAACAACACGCACATGAAAAGCCGGCCCCTGACTTCACTGTCACCGCCGCAGCAGATGGTGTTCTTAAGGAAATCAGACTTTCAGACTACAGAGGGAAGTACGTGGTCCTCCTTTTCTACCTACTGGATTTCACTTTTGTTTGCCCCACAGAGATCATCACTTTTAGCGACCATGCCAAGGACTTCCAAAAGCTAGGCTTCGAGGTGCTGGGAGTTTCTATGGACTCTCAGTTTACCCACCTGGCATTGATCAATACCCCACAGGAGGGAAGTTTGGGAACCCTGAATATCCCTCTGCTTGCTGACGTGACTAAAAGCTTGTCCCAGAATTACCGCGTGTTGAAAAATGATGAGGGCATCGTTACAGGGTTTCTTTATCATCGATGCCAAGGGTGTCCTTTGCCAGATCACAGTCAATGATCTACCTGTGGGATACTCTATAGTTAAGACTCTCTGCCTAGTCCTACCTGGATGTCCTGTGCTGGCCCAGAAAACTGCTACATCTTCCTCCACACTCTGAAGGGGGTGGAGATTAGGCCGAGGCTTTCTCATTACCCACCCGAAATCTGGTGAATAGTGACCCTGCCCTGAGAACACCCAGCTGCTTTGGAGGAAGCAGTAGGGATTATCATAGAAGCTTTCTATTTCCCTCTTTCTCAATTGTGAGTCTGCAAAAGTAGCTTCCTT
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KR20030067204A (ko) * 2002-02-07 2003-08-14 한국생명공학연구원 퍼록시레독신-ⅱ 유전자 결손 생쥐 및 이의 생산방법
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WO2011081465A3 (ko) * 2009-12-29 2011-11-17 이화여자대학교 산학협력단 혈관신생 억제용 약제학적 조성물

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