KR100194283B1

KR100194283B1 - Peptide derived from X protein with human immunomodulatory function against hepatitis B virus

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Publication number: KR100194283B1
Application number: KR1019960027942A
Authority: KR
Inventors: 이기영; 최명준; 조성유; 황유경; 김태연; 정홍석; 문홍모
Original assignee: 허영섭; 재단법인목암생명공학연구소
Priority date: 1996-07-11
Filing date: 1996-07-11
Publication date: 1999-06-15
Also published as: KR980009280A

Abstract

본 발명은 B형 간염 바이러스에 대한 인체의 면역성 조절기능을 가지는 신규한 펩타이드군에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 본 발명은 B형 간염 바이러스의 X 단백질 중 바이러스에 대한 세포독성 T-임파구(cytotoxic T lymphocytes, 이하 'CTL'이라 함)를 유도하거나, 그 바이러스에 대해 면역관용(immunological tolerance)을 유도하는 항원의 특정부위(epitope)에 해당하는 펩타이드군 및 그를 이용하여 B형 간염 바이러스에 특이성을 가지는 세포특성 T-임파구를 유도하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 X 단백질 유래의 X3, X4, X5, X6, X7 등 5종의 펩타이드군은 인체내에 존재하는 B형 간염 바이러스의 항원을 인지하는 CTL을 활성화시키며, 그 CTL에 의해 다시 인지될 수 있는 펩타이드로서, B형 간염 바이러스 관련 질환의 예방과 치료에 사용될 수 있을 것이다.The present invention relates to a novel group of peptides having an immune regulatory function of the human body against hepatitis B virus. More specifically, the present invention induces cytotoxic T lymphocytes (hereinafter referred to as 'CTLs') for viruses in the X protein of hepatitis B virus or immunological tolerance to the virus. It relates to a group of peptides corresponding to a specific site (epitope) of the antigen that induces and a method for inducing cell-specific T-lymphocytes having specificity for hepatitis B virus. Groups of five peptides, such as X3, X4, X5, X6, and X7, derived from the X protein of the present invention, activate CTLs that recognize antigens of hepatitis B virus present in the human body, and can be recognizable by the CTLs. As a peptide, it may be used for the prevention and treatment of hepatitis B virus-related diseases.

Description

Peptides derived from X protein with human immunomodulatory function against hepatitis B virus

본 발명은 B형 간염 바이러스에 대한 인체의 면역성 조절기능을 가지는 신규한 펩타이드군에 관한 것이다. 좀 더 구체적으로, 본 발명은 B형 간염 바이러스의 X 단백질 중 바이러스에 대한 세포독성 T-임파구(cytotoxic T lymphocytes, 이하 'CTL'이라 함)를 유도하거나, 그 바이러스에 대해 면역관용(immunological tolerance)을 유도하는 항원의 특정부위(epitope)에 해당하는 펩타이드군 및 그를 이용하여 B형 간염 바이러스에 특이성을 가지는 세포독성 T-임파구를 유도하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a novel group of peptides having an immune regulatory function of the human body against hepatitis B virus. More specifically, the present invention induces cytotoxic T lymphocytes (hereinafter referred to as 'CTLs') for viruses in the X protein of hepatitis B virus or immunological tolerance to the virus. It relates to a group of peptides corresponding to a specific site (epitope) of the antigen that induces and a method for inducing cytotoxic T-lymphocytes having specificity for hepatitis B virus.

인체가 B형 간염 바이러스에 감염되면, 인체내에서는 이 바이러스를 제거할 목적으로 여러가지 생리현상이 나타나는데, 가장 중요한 현상 중의 하나는 이미 감염된 세포를 파괴하여 제거하는 일이며, 이러한 과정을 통하여 궁극적으로 바이러스 감염으로 부터 회복할 수 있다. 이러한 감염세포의 파괴는 세포살해능(cytotoxicity)을 가진 또 다른 종류의 세포에 의해 이루어지는데, 이 세포는 '세포독성 T-임파구(CTL)'라 불리워진다. CTL이 자신이 갖고 있는 세포 살해능을 발휘하기 위해서는 감염된 바이러스를 구성하는 단백질의 일부를 먼저 인지하는 과정을 거쳐야 한다. 일반적으로, 바이러스 단백질은 감염된 세포내에서 합성된 다음, 세포내 분해과정을 통하여 8 내지 15개의 아미노산으로 구성된 짧은 펩타이드 형태로 전환된다. 이렇게 생성된 펩타이드 중의 일부가 세포내에 있는 주조직 적합분자(major histocompatibility complex molecule, 이하 'MHC'라 함)와 결합한 형태로 세포표면에 나타나게 되면, CTL이 이를 인지하여 감염된 세포를 파괴하게 된다. 한편, MHC는 제1군(Class Ⅰ)과 제2군(Class Ⅱ)의 두 종류로 나누어지는데, 이들 중 제1군(Class Ⅰ)이 CTL의 유도에 더욱 중요한 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 그러나, CTL이 인지하는 단백질의 부위(펩타이드)는 바이러스 단백질의 분해결과로 생성된 펩타이드 중 반드시 특정한 아미노산 서열을 갖고 있는 경우에 한정되는 것으로 알려지고 있다(참조:Fremont, D. et al., Science, 257:919-926(1992); Matsumura, M. et al., Science, 257:929-934(1922)). 따라서, 이러한 특정한 부위의 아미노산 서열을 알게 되면 그 아미노산 서열에 상응하는 펩타이드를 화학적 방법으로 합성, 생산할 수 있게 되고, 이를 이용하여 인체내에 간염 바이러스를 특이적으로 인지하는 CTL을 인위적으로 유도해내거나 면역억제 등의 다른 면역 반응을 조절함으로써, 간염 바이러스에 의해 유발되는 질환의 예방과 치료에 효과를 거둘 수 있게 된다.When the human body is infected with the hepatitis B virus, various physiological phenomena occur in the human body for the purpose of removing the virus. One of the most important phenomena is destroying and removing already infected cells. Can recover from infection The destruction of these infected cells is caused by another type of cell with cytotoxicity, called 'cytotoxic T-lymphocytes' (CTLs). In order for CTLs to exert their cellular killing capacity, they must first recognize some of the proteins that make up the infected virus. Generally, viral proteins are synthesized in infected cells and then converted into short peptide forms consisting of 8 to 15 amino acids via intracellular degradation. When some of the peptides appear on the cell surface in combination with a major histocompatibility complex molecule (MHC), the CTL recognizes and destroys the infected cells. On the other hand, MHC is divided into two types, the first group (Class I) and the second group (Class II), of which the first group (Class I) is known to play a more important role in the induction of CTL. However, it is known that the site (peptide) of the protein recognized by the CTL is limited to a specific amino acid sequence among peptides generated as a result of the degradation of the viral protein (Fremont, D. et al., Science). , 257: 919-926 (1992); Matsumura, M. et al., Science, 257: 929-934 (1922). Therefore, knowing the amino acid sequence of such a specific site, it is possible to synthesize and produce a peptide corresponding to the amino acid sequence by chemical method, by using this to artificially induce or immunize CTL that specifically recognizes hepatitis virus in human body By regulating other immune responses, such as inhibition, it is possible to have an effect on the prevention and treatment of diseases caused by hepatitis virus.

이러한 배경 아래, 여러 연구자들이 간염 바이러스 단백질의 아미노산 서열 가운데서 CTL에 의해 인지되는 펩타이드의 아미노산 서열을 알아내기 위한 노력을 기울여 왔으며, 그 결과 이미 몇개의 특정 아미노산 서열이 보고되었고, 앞으로도 몇 종류가 더 발견되리라고 기대되고 있다. 아울러, 간염 바이러스 관련 질환의 예방과 치료에 이와 같은 펩타이드를 사용하려면 되도록 많은 종류의 펩타이드를 동시에 사용하는 것이 필요할 뿐만 아니라, 펩타이드의 종류에 따라 그 효능이 달라질 수 있기 때문에, 새로이 발견되는 펩타이드의 아미노산 서열은 매우 중요한 의미를 갖는다.Against this background, several researchers have made efforts to determine the amino acid sequence of peptides recognized by CTL among the amino acid sequences of hepatitis virus proteins. As a result, several specific amino acid sequences have already been reported and some more are found in the future. It is expected to be. In addition, in order to use such peptides for the prevention and treatment of hepatitis virus-related diseases, it is not only necessary to use as many peptides as possible at the same time, and the efficacy of the peptides may vary depending on the types of peptides. Sequences have a very important meaning.

B형 간염 바이러스의 예방과 치료를 위하여, 지금까지 발견된 CTL에 의해 인지되는 펩타이드는 주로 B형 간염 바이러스의 S(표면항원) 단백질과 C(코어) 단백질에서 유래하였으며, 항원단백질 중의 하나인 X 단백질에서 유래한 펩타이드는 아직까지 보고된 바 없다. X 단백질은 B형 간염 바이러스가 간암을 유발하는데 있어 직접적인 원인이 되는 것으로 유전자 이식 마우스(transgenic mice)를 이용한 연구에서 명백히 규명되었다(참조:Hoyhne et al., EMBO J., 9:1137-1145(1990); Kim et al., Nature, 351:317-320((1991)).For the prevention and treatment of hepatitis B virus, the peptides recognized by the CTLs discovered so far are mainly derived from the S (surface antigen) and C (core) proteins of hepatitis B virus, one of the antigenic proteins, X Peptides derived from proteins have not been reported so far. Protein X has been clearly identified in studies using transgenic mice as a direct cause of hepatitis B virus in inducing liver cancer (Hoyhne et al., EMBO J., 9: 1137-1145). 1990); Kim et al., Nature, 351: 317-320 ((1991)).

이러한 배경하에, 본 발명자들은 B형 간염 바이러스 X 단백질의 아미노산 서열 중에 CTL에 의해 인지되는 일련의 펩타이드군을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.Against this background, the inventors have found a group of peptides recognized by CTL in the amino acid sequence of hepatitis B virus X protein and completed the present invention.

결국, 본 발명의 목적은 CTL에 의해 인지되어 바이러스에 대한 살해능을 나타내는 B형 간염 바이러스 X 단백질 유래의 펩타이드군을 제공하는 것이다.Finally, it is an object of the present invention to provide a group of peptides derived from hepatitis B virus X protein that is recognized by CTL and exhibits killing ability against viruses.

제1도는 T2 세포의 표면에 발현되는 MHC Class Ⅰ분자의 변화를 형광강도로 나타낸 그래프이다.1 is a graph showing the change in MHC Class I molecules expressed on the surface of T2 cells by fluorescence intensity.

제2도는 CTL에 의한 T2 세포의 살해능을 나타내는 그래프이다.2 is a graph showing the killing ability of T2 cells by CTL.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명에서 발견된 신규한 펩타이드 서열은 하기 표 1에 나타낸 바와 같다.The novel peptide sequences found in the present invention are shown in Table 1 below.

또한, 본 발명은 그 취지에 따라 전기 9개의 아미노산으로 구성된 펩타이드 뿐만 아니라, 전기 펩타이드 전, 후에 최소 1개 내지 5개의 아미노산을 추가로 포함하는 모든 펩타이드 및 그의 기능적 등가물을 포함한다. 본 발명에서, '기능적 등가물'이라 함은 전기 펩타이드의 아미노산 서열 중 1개 또는 2개가 치환된 모든 펩타이드를 의미한다. 예를 들면, 치환은 Gly, Ala; Val, Ile, Leu; Asp, Glu; Asn, Gln; Ser, Thr; Lys, Arg; Phe, Tyr과 같은 조합을 포함한다.In addition, the present invention includes not only peptides consisting of the foregoing nine amino acids, but also all peptides and functional equivalents thereof further including at least one to five amino acids before and after the electric peptide. In the present invention, the term "functional equivalent" means all peptides in which one or two of the amino acid sequences of the peptide are substituted. For example, substitutions may include Gly, Ala; Val, Ile, Leu; Asp, Glu; Asn, Gln; Ser, Thr; Lys, Arg; Combinations such as Phe, Tyr.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples.

이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.These examples are only for illustrating the present invention in more detail, it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not limited to these examples.

[실시예 1]Example 1

[X 단백질 중에서 MHC 분자와의 결합가능성이 높은 펩타이드 결정][Determination of Peptides with High Ability to MHC in X Protein]

본 발명에서 사용한 펩타이드는 MHC 제1군(Class Ⅰ) 분자와 결합할 수 있는 펩타이드가 특정 아미노산 서열을 가진다는 사실 및 MHC 제1군(Class Ⅰ) 분자가 갖는 구조적 특성에 착안하여, B형 간염 바이러스의 X 단백질의 전체 아미노산 서열로 부터 MHC 제1군(Class Ⅰ) 분자와 결합할 가능성이 있는 펩타이드의 아미노산 서열을 결정하였다. 즉, 사람의 MHC 제1군(Class Ⅰ) 분자인 HLA-A2와 결합할 수 있는 펩타이드는 N말단으로 부터 두번째 위치의 아미노산과 C말단의 아미노산이 루신(leucine), 발린(valine) 혹은 이소루신(isoleucine) 등으로 이루어진다는 사실을 근거로 하여(참조:Matsumura, M. et al., Science, 257:929-934(1922)), 이러한 조건을 충족시키는 아미노산 서열을 B형 간염 바이러스 X 단백질의 전체 아미노산 서열로 부터 찾아내고, 이들 중 HLA-A2 분자의 3차구조에 적합하게 결합될 가능성이 가장 높은 것들을 선택하여 이들의 아미노산 서열에 따라 화학적으로 합성하였다.The peptide used in the present invention is hepatitis B based on the fact that the peptide capable of binding to MHC class I molecules has a specific amino acid sequence and the structural characteristics of the MHC class I molecules. From the entire amino acid sequence of the X protein of the virus, the amino acid sequence of the peptide that is likely to bind to the MHC class 1 (Class I) molecule was determined. That is, the peptide that can bind to HLA-A2, the first class MHC molecule of human (Class I) molecule, is composed of leucine, valine or isoleucine at amino acid at position 2 and amino acid at position C. (Matsumura, M. et al., Science, 257: 929-934 (1922)), based on the fact that it consists of isoleucine, etc. It was found from the entire amino acid sequence and selected among them most likely to be bound to the tertiary structure of the HLA-A2 molecule and chemically synthesized according to their amino acid sequence.

[실시예 2]Example 2

[펩타이드의 합성 및 MHC 분자와의 결합도 측정][Synthesis of Peptides and Their Binding to MHC Molecules]

B형 간염 바이러스 X 단백질의 아미노산 서열로 부터 상기 표 1에 나타낸 바와 같은 펩타이드를 포함하여 서로 다른 아미노산 서열을 가진 7종의 펩타이드를 화학적 방법으로 합성하고, 이들을 인산완충용액(phosphate buffered saline, 이하 'PBS'라 함)에 용해시켰다. 이들 펩타이드가 MHC 분자, 그 중에서도 CTL의 유도와 관계가 있는 제1군(Class Ⅰ) 분자와 결합할 수 있는지의 여부를 확인하기 위하여, 이들 펩타이드를 T2 세포주에 100μg/ml부터 시작하여 64, 32, 16, 8, 4, 2, 1μg/ml의 농도가 되도록 각각 넣어주고, 37℃에서 4시간 동안 반응시켰다. 그런 다음, PBS로 세척하여 미반응 펩타이드를 제거하고, 이 세포를 사람 MHC 제1군(Class Ⅰ) 분자의 일종인 HLA-A2.1에 대한 항체(anti-HLA-A2.1 antibody) BB7.2를 첨가해준 다음, 다시 1시간 동안 4℃에서 반응시켰다. 이 세포를 다시 PBS로 세척하고, 여기에 플루오르신 이소치오시아네이트(fluorescein isothiocyanate, FITC)를 부착한 항-마우스 면역글로불린 항체(anti-mouse immunoglobulin antibody)를 가하여 1시간 동안 4℃에서 반응시킨 다음, 이 세포들이 띠고 있는 형광강도를 형광분광기(Spectrofluorometer)를 이용하여 측정하였으며, 그 결과를 제1도에 나타내었다.From the amino acid sequence of hepatitis B virus X protein, seven peptides having different amino acid sequences, including peptides as shown in Table 1 above, were synthesized by a chemical method, and these were synthesized into phosphate buffered saline (hereinafter ' PBS '). To determine whether these peptides could bind to MHC molecules, especially the first class (Class I) molecules involved in the induction of CTLs, these peptides were used starting at 100 μg / ml in T2 cell lines, 64, 32 , 16, 8, 4, 2, 1μg / ml each was put in a concentration, and reacted for 4 hours at 37 ℃. Then, the cells were washed with PBS to remove unreacted peptides, and the cells were treated with an antibody against HLA-A2.1, a type of human MHC class 1 molecule (anti-HLA-A2.1 antibody) BB7. 2 was added and then reacted at 4 ° C. for 1 hour. The cells were washed again with PBS, added with an anti-mouse immunoglobulin antibody attached to fluorescein isothiocyanate (FITC), and reacted at 4 ° C for 1 hour. The fluorescence intensities of these cells were measured using a spectrofluorometer, and the results are shown in FIG.

제1도에서 보듯이, X3, X4, X5, X6, X7 등 5종류의 펩타이드가 T2 세포 표면에 있는 MHC 제1군(Class Ⅰ) 분자와의 결합력이 양호한 것으로 나타났다. 또한, 본 실험에 사용된 펩타이드의 종류는 하기 표 2에 나타낸 바와 같다.As shown in FIG. 1, five peptides such as X3, X4, X5, X6, and X7 were found to have good binding ability with MHC class 1 molecules on the surface of T2 cells. In addition, the types of peptides used in this experiment are as shown in Table 2 below.

본 실시예에 사용한 T2 세포주는 세포내 펩타이드의 이동경로에 이상이 생겨 MHC 제1군(Class Ⅰ) 분자가 펩타이드와 적절히 결합할 수 없어 분자구조의 불안정화를 초래하게 되고, 결과적으로 정상 생육온도인 37℃에서 배양하면 MHC 분자의 발현정도가 낮은 상태를 유지하게 된다. 그러나, T2 세포의 배양시에 MHC 분자와 결합할 수 있는 펩타이드가 배양액 가운데 존재할 경우에는 그 펩타이드가 T2 세포표면의 MHC 분자와 결합하게 되고, 그 결과로 MHC 분자의 분자적 안정성이 증가함에 따라 MHC 분자의 발현이 증가하는 특성을 갖고 있어, 이를 이용하면 특정 펩타이드가 T2 세포 표면의 MHC 분자와 결합하는 정도는 BB7.2 항체가 세포표면에 결합되는 정도를 측정함으로써 정량할 수 있었다.The T2 cell line used in this example is abnormal in the migration pathway of intracellular peptides, and MHC class 1 molecules cannot properly bind to the peptides, resulting in destabilization of the molecular structure, resulting in normal growth temperature. Incubation at 37 ° C. maintains a low level of expression of MHC molecules. However, when a peptide capable of binding an MHC molecule in the culture of T2 cells is present in the culture medium, the peptide binds to the MHC molecule on the surface of the T2 cell. As a result, MHC molecules increase in molecular stability. Since the expression of molecules is increased, the degree of binding of specific peptides to MHC molecules on the surface of T2 cells can be quantified by measuring the degree of binding of BB7.2 antibodies to the cell surface.

[실시예 3]Example 3

[펩타이드와 CTL간의 인지도 측정][Measurement of Awareness Between Peptide and CTL]

어떤 특정 펩타이드가 MHC 분자와 결합한다는 사실이 곧 CTL에 의해 인지된다고 할 수 없으므로, 실시예 2에서 MHC 분자와의 결합도 측정에 사용된 7종의 펩타이드를 가지고 실제적으로 인체내에 존재하는 B형 간염 바이러스를 인지하는 CTL에 의해 인지되는지를 알아보기 위하여 다음의 실험을 수행하였다.Since the fact that a specific peptide binds to an MHC molecule cannot be recognized by CTL, hepatitis B actually exists in the human body with the seven peptides used for measuring the binding degree to the MHC molecule in Example 2. The following experiment was performed to see if the virus was recognized by CTL.

즉, 일반 헌혈자들로 부터 수집된 혈액중 B형 간염 바이러스 항체가 양성으로 판정된(ELISA값:1.0 이상) 혈액을 수집하고, 원심분리하여 세포들을 모아 혈액세포로 부터 적혈구를 제거하고 남은 백혈구에 상기의 펩타이드를 10μg/ml 농도가 되도록 넣어준 다음, 37℃에서 5%의 이산화탄소를 함유하고 있는 배양기(CO₂incubator)에서 배양하였다. 배양 시작 2일후 10단위(unit)의 인터루킨-2(interleukine-2)를 배양액에 첨가해주고 3일간 추가 배양한 다음, 자극세포로서 동일한 MHC의 혈구세포를 미토마이신 C(mitomycin C)로 불활성화시켜 넣어주고, 펩타이드와 인터루킨-2를 추가하였다. 이들을 7일간 더 배양한 다음, 이들 혈구세포가 특정 펩타이드를 표면에 결합시킨 T2 세포를 인지하여 파괴하는지를 측정하여, 그 결과를 하기 표 3과 제2도에 나타내었다.In other words, the blood collected from general blood donors was tested for hepatitis B virus positive (ELISA value: 1.0 or more), and the cells were collected by centrifugation to remove erythrocytes from the blood cells. The peptide was added to a concentration of 10 μg / ml, and then cultured in a CO ₂ incubator containing 5% carbon dioxide at 37 ° C. Two days after the start of the culture, 10 units of interleukin-2 was added to the culture medium, and further cultured for 3 days, and then the blood cells of the same MHC as stimulating cells were inactivated with mitomycin C. And add peptide and interleukin-2. After culturing them for 7 more days, it was determined whether these blood cells recognized and destroyed T2 cells bound to the surface of specific peptides, and the results are shown in Table 3 and FIG. 2.

배양된 혈구세포에 의한 T2 세포의 파괴를 측정하는 방법은 다음과 같다:T2 세포에 100μg/ml의 펩타이드를 가하여 3시간 동안 37℃에서 반응시킨 다음, 그 세포를 충분히 세척하며 미반응 펩타이드를 제거하고, 그 T2 세포에 방사능을 가진 소디움크로메이트(Cr⁵¹)를 가하여 37℃의 CO₂배양기에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응이 끝난 다음, RPMI 배양액으로 충분히 세척하여 미반응한 소디움크로메이트를 제거하고, PBS로 세척한 혈구세포를 일정한 비율로 섞어주어 37℃의 CO₂배양기에서 4시간 동안 반응시켰다. 반응한 배양액을 수거하여 감마선의 세기를 측정함으로써, 혈구세포가 표적 세포인 T2를 살해하는 능력을 측정할 수 있었다.The method for measuring the destruction of T2 cells by cultured blood cells is as follows: 100 μg / ml peptide is added to T2 cells and reacted at 37 ° C. for 3 hours, and then the cells are washed sufficiently to remove unreacted peptides. Sodium chromate (Cr ⁵¹ ) having radioactivity was added to the T2 cells, and reacted for 2 hours in a CO ₂ incubator at 37 ° C. After the reaction was completed, the reaction was sufficiently washed with RPMI culture to remove the unreacted sodium chromate, and the blood cells washed with PBS were mixed at a constant rate and reacted for 4 hours in a CO ₂ incubator at 37 ℃. By collecting the reaction medium and measuring the intensity of gamma rays, the ability of blood cells to kill T2, a target cell, was measured.

상기 표 3에서 보듯이, X3, X4, X5, X6, X7 및 P5의 경우는 배양한 혈구세포에 의해 인지됨을 알 수 있었는데, 이들 중 P5는 이미 공지된 펩타이드로서(참조:Nayersina, R. et al., J. Immunol., 150:4659-4671(1993)), 본 실시예에서 사용한 실험방법들이 적절하다는 것을 보여주는 양성 대조군의 역할을 하고 있음을 확인하였다.As shown in Table 3, X3, X4, X5, X6, X7 and P5 was found to be recognized by the cultured blood cells, of which P5 is a known peptide (Nayersina, R. et. al., J. Immunol., 150: 4659-4671 (1993)), and confirmed that the test method used in this example serves as a positive control showing that the appropriate.

이상에서 상세히 설명하고 입증하였듯이, 본 발명은 B형 간염 바이러스의 X 단백질중 바이러스에 대한 CTL을 유도하거나, 그 바이러스에 대해 면역관용을 유도하는 특정부위(epitope)에 해당하는 펩타이드군을 제공한다. 본 발명의 X 단백질 유래의 X3, X4, X5, X6, X7 등 5종의 펩타이드군은 인체내에 존재하는 B형 간염 바이러스의 항원을 인지하는 CTL을 활성화시키며, 그 CTL에 의해 다시 인지될 수 있는 펩타이드로서, B형 간염 바이러스 관련 질환의 예방과 치료에 사용될 수 있을 것이다.As described and demonstrated in detail above, the present invention provides a group of peptides corresponding to a specific site (epitope) that induces CTL for the virus or induces immune tolerance against the virus of the hepatitis B virus X protein. Groups of five peptides, such as X3, X4, X5, X6, and X7, derived from the X protein of the present invention, activate CTLs that recognize antigens of hepatitis B virus present in the human body, and can be recognizable by the CTLs. As a peptide, it may be used for the prevention and treatment of hepatitis B virus-related diseases.

Claims

A peptide comprising an amino acid sequence derived from hepatitis B virus X protein as described below that is recognized by cytotoxic T lymphocytes (CTL) and exhibits cell killing ability against hepatitis B virus;

(In the above, the amino acid sequence is described according to the nomenclature of IUPAC).

Cytotoxic T having specificity for electric viruses in mammals other than humans using peptides derived from Hepatitis B virus X protein that is recognized by cytotoxic T lymphocytes (CTL) and exhibits cell killing ability against hepatitis B virus. How to induce lymphocytes (CTL).

The method of claim 6, wherein the peptide is one or more selected from the group consisting of HLSLRGLFV, VLHKRTLGL, AMSTTDLEA, CLFKDWEEL, and EIRLKVFVL.