JPWO2021178430A5 - - Google Patents
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Description
[本発明1001]
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含む抗CD20単鎖可変断片（scFv）を含むポリペプチドであって、
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:29、30、31、22、12、13、および14と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:26、27、28、18、9、10、および11と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
前記ポリペプチド。
[本発明1002]
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含む抗CD20単鎖可変断片（scFv）を含むポリペプチドであって、
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:5の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:6の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
前記ポリペプチド。
[本発明1003]
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3が、SEQ ID NO:5の可変領域に由来するLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3のアミノ酸配列を含み、かつ/またはHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3が、SEQ ID NO:5の可変領域に由来するHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3のアミノ酸配列を含む、本発明1001または1002のポリペプチド。
[本発明1004]
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/またはLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:29、30、31、22、12、13、および14のアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/またはHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:26、27、28、18、9、10、および11のアミノ酸配列を含む、本発明1001～1003のいずれかのポリペプチド。
[本発明1005]
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、LFR1、LCDR1、LFR2、LCDR2、LFR3、LCDR3、およびLFR4を含む軽鎖可変領域；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、HFR1、HCDR1、HFR2、HCDR2、HFR3、HCDR3、およびHFR4を含む重鎖可変領域
を含む抗CD20 scFvを含むポリペプチドであって、
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:19、20、21、22、24、13、および25と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:15、16、17、18、9、10、および23と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
前記ポリペプチド。
[本発明1006]
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含む抗CD20単鎖可変断片（scFv）を含むポリペプチドであって、
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:7の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:8の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
前記ポリペプチド。
[本発明1007]
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3が、SEQ ID NO:7の可変領域に由来するLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3のアミノ酸配列を含み、かつ/またはHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3が、SEQ ID NO:8の可変領域に由来するHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3のアミノ酸配列を含む、本発明1005または1006のポリペプチド。
[本発明1008]
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/またはLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:19、20、21、22、24、13、および25のアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/またはHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:15、16、17、18、9、10、および23のアミノ酸配列を含む、本発明1005～1007のいずれかのポリペプチド。
[本発明1009]
軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:5と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域が、SEQ ID NO:6と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1001～1004のいずれかのポリペプチド。
[本発明1010]
VLがSEQ ID NO:5のアミノ酸配列を含み、VHがSEQ ID NO:6のアミノ酸配列を含む、本発明1009のポリペプチド。
[本発明1011]
軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:7と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域が、SEQ ID NO:8と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1005～1008のいずれかのポリペプチド。
[本発明1012]
VLがSEQ ID NO:7のアミノ酸配列を含み、VHがSEQ ID NO:8のアミノ酸配列を含む、本発明1011のポリペプチド。
[本発明1013]
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含む抗GD2単鎖可変断片（scFv）を含むポリペプチドであって、
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:136、137、138、139、113、114、および115と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:132、133、134、135、110、111、および112と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
前記ポリペプチド。
[本発明1014]
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含む抗GD2単鎖可変断片（scFv）を含むポリペプチドであって、
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:141の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:140の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
前記ポリペプチド。
[本発明1015]
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3が、SEQ ID NO:141の可変領域に由来するLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3のアミノ酸配列を含み、かつ/またはHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3が、SEQ ID NO:140の可変領域に由来するHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3のアミノ酸配列を含む、本発明1013～1014のいずれかのポリペプチド。
[本発明1016]
軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:141と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域が、SEQ ID NO:140と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1013～1015のいずれかのポリペプチド。
[本発明1017]
VLがSEQ ID NO:140のアミノ酸配列を含み、VHがSEQ ID NO:141のアミノ酸配列を含む、本発明1016のポリペプチド。
[本発明1018]
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含む抗GD2単鎖可変断片（scFv）を含むポリペプチドであって、
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:120、121、122、123、129、130、および131と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:116、117、118、119、126、127、および128と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
前記ポリペプチド。
[本発明1019]
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含む抗GD2単鎖可変断片（scFv）を含むポリペプチドであって、
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:144の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:143の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
前記ポリペプチド。
[本発明1020]
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3が、SEQ ID NO:144の可変領域に由来するLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3のアミノ酸配列を含み、かつ/またはHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3が、SEQ ID NO:143の可変領域に由来するHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3のアミノ酸配列を含む、本発明1013～1014のいずれかのポリペプチド。
[本発明1021]
軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:144と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域が、SEQ ID NO:143と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1018～1020のいずれかのポリペプチド。
[本発明1022]
VLがSEQ ID NO:144のアミノ酸配列を含み、VHがSEQ ID NO:143のアミノ酸配列を含む、本発明1021のポリペプチド。
[本発明1023]
VHとVLとの間にリンカーを含む、本発明1001～1022のいずれかのポリペプチド。
[本発明1024]
リンカーが4～40アミノ酸長である、本発明1023のポリペプチド。
[本発明1025]
リンカーが少なくとも4個のグリシン残基および/またはセリン残基を含む、本発明1023のポリペプチド。
[本発明1026]
リンカーが(GGGGS) n を含み、ここで、nが1、2、3、4、5、または6である、本発明1023～1025のいずれかのポリペプチド。
[本発明1027]
リンカーがGSTSGGGSGGGSGGGGSS（SEQ ID NO:32）を含む、本発明1024～1026のいずれかのポリペプチド。
[本発明1028]
リンカーがアミノ酸配列(EAAAK) n を含むか、またはアミノ酸配列(EAAAK) n からなり、ここで、nが1、2、3、4、5、または6である、本発明1023または1024のポリペプチド。
[本発明1029]
リンカーがGGGGSを含む、本発明1024～1026のいずれかのポリペプチド。
[本発明1030]
リンカーが(GGGGS) 4 である、本発明1023～1026のいずれかのポリペプチド。
[本発明1031]
VHがVLに対してアミノ近位である、本発明1001～1030のいずれかのポリペプチド。
[本発明1032]
VHがVLに対してカルボキシ近位である、本発明1001～1030のいずれかのポリペプチド。
[本発明1033]
scFvと膜貫通ドメインと一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質領域とを含むキメラ抗原受容体（CAR）を含む、本発明1001～1032のいずれかのポリペプチド。
[本発明1034]
単一の膜貫通ドメイン、および/または一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む単一の細胞質領域を含む、本発明1001～1032のいずれかのポリペプチド。
[本発明1035]
アミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、scFvと膜貫通ドメインと一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質領域とを含む、本発明1033または1034のポリペプチド。
[本発明1036]
CARが単一特異性である、本発明1033または1034のポリペプチド。
[本発明1037]
CARが膜貫通ドメインとscFvとの間に細胞外スペーサーをさらに含む、本発明1033～1036のいずれかのポリペプチド。
[本発明1038]
細胞外スペーサーが8～1000アミノ酸長である、本発明1037のポリペプチド。
[本発明1039]
細胞外スペーサーが8～500アミノ酸長である、本発明1038のポリペプチド。
[本発明1040]
細胞外スペーサーが100～300アミノ酸長である、本発明1039のポリペプチド。
[本発明1041]
細胞外スペーサーが100個未満のアミノ酸を有する、本発明1039のポリペプチド。
[本発明1042]
細胞外スペーサーがIgG4ヒンジ、CD8αヒンジ、IgG1ヒンジ、CD34ヒンジ、またはそれらの断片である、本発明1037～1041のいずれかのポリペプチド。
[本発明1043]
細胞外スペーサーがIgG4ヒンジまたはその断片を含む、本発明1042のポリペプチド。
[本発明1044]
細胞外スペーサーがCH1領域、CH2領域、および/もしくはCH3領域を含むか、またはさらに含む、本発明1037～1043のいずれかのポリペプチド。
[本発明1045]
スペーサーがIgG4ヒンジポリペプチド、CH2領域、およびCH3領域を含むか、またはIgG4ヒンジポリペプチド、CH2領域、およびCH3領域からなる、本発明1044のポリペプチド。
[本発明1046]
CH2領域がL235E置換および/またはN297Q置換を含む、本発明1044または1045のポリペプチド。
[本発明1047]
スペーサーが、SEQ ID NO:36と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、本発明1042～1046のいずれかのポリペプチド。
[本発明1048]
膜貫通ドメインが、T細胞受容体のα鎖もしくはβ鎖、CD28、CD3ε（イプシロン）、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD123、CD134、CD137、またはCD154の膜貫通ドメインである、本発明1033～1047のいずれかのポリペプチド。
[本発明1049]
膜貫通ドメインがCD28膜貫通ドメインである、本発明1048のポリペプチド。
[本発明1050]
膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:37と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、本発明1048のポリペプチド。
[本発明1051]
一次細胞内シグナル伝達ドメインがCD3ζである、本発明1033～1050のいずれかのポリペプチド。
[本発明1052]
一次細胞内シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO:39と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、本発明1051のポリペプチド。
[本発明1053]
細胞質領域が、1つまたは複数の共刺激ドメインをさらに含む、本発明1033～1051のいずれかのポリペプチド。
[本発明1054]
細胞質領域が、2つの共刺激ドメインを含む、本発明1033～1053のいずれかのポリペプチド。
[本発明1055]
1つまたは複数の共刺激ドメインが、4-1BB（CD137）、CD28、IL-15Rα、OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1（CD11a/CD18）、および/またはICOS（CD278）のうちの1つまたは複数に由来する共刺激ドメインを含む、本発明1053または1054のポリペプチド。
[本発明1056]
1つまたは複数の共刺激ドメインが、CD28由来の共刺激ドメインを含む、本発明1055のポリペプチド。
[本発明1057]
共刺激ドメインが、SEQ ID NO:38と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、本発明1056のポリペプチド。
[本発明1058]
膜貫通ドメインと細胞質領域との間にねじれリンカーをさらに含む、本発明1033～1057のいずれかのポリペプチド。
[本発明1059]
ねじれリンカーが1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のアミノ酸残基を含む、本発明1058のポリペプチド。
[本発明1060]
アミノ酸残基がアラニン残基を含むかまたはアラニン残基からなる、本発明1059のポリペプチド。
[本発明1061]
ねじれリンカーが2個または4個のアラニン残基からなる、本発明1059のポリペプチド。
[本発明1062]
アミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、scFvと膜貫通ドメインとねじれリンカーと一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質領域とを含むCARを含むポリペプチドであって、ねじれリンカーが1～12個のアラニン残基を含む、前記ポリペプチド。
[本発明1063]
ねじれリンカーが、2個もしくは4個のアラニン残基を含むか、または2個もしくは4個のアラニン残基からなる、本発明1062のポリペプチド。
[本発明1064]
scFvがVHおよびVLを含み、該VHとVLとの間にリンカーが存在する、本発明1062または1063のポリペプチド。
[本発明1065]
リンカーが4～40アミノ酸長である、本発明1064のポリペプチド。
[本発明1066]
リンカーが少なくとも4個のグリシン残基および/またはセリン残基を含む、本発明1064のポリペプチド。
[本発明1067]
リンカーが(GGGGS) n を含み、ここで、nが1、2、3、4、5、または6である、本発明1064～1066のいずれかのポリペプチド。
[本発明1068]
リンカーがGSTSGGGSGGGSGGGGSS（SEQ ID NO:32）を含む、本発明1065～1066のいずれかのポリペプチド。
[本発明1069]
リンカーがアミノ酸配列(EAAAK) n を含むか、またはアミノ酸配列(EAAAK) n からなり、ここで、nが1、2、3、4、5、または6である、本発明1064または1065のポリペプチド。
[本発明1070]
リンカーがGGGGSを含む、本発明1065～1067のいずれかのポリペプチド。
[本発明1071]
リンカーが(GGGGS) 4 である、本発明1064～1067のいずれかのポリペプチド。
[本発明1072]
VHがVLに対してアミノ近位である、本発明1062～1071のいずれかのポリペプチド。
[本発明1073]
VHがVLに対してカルボキシ近位である、本発明1062～1071のいずれかのポリペプチド。
[本発明1074]
単一の膜貫通ドメイン、および/または一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む単一の細胞質領域を含む、本発明1062～1073のいずれかのポリペプチド。
[本発明1075]
CARが単一特異性である、本発明1062～1074のいずれかのポリペプチド。
[本発明1076]
CARが二重特異性である、本発明1062～1074のいずれかのポリペプチド。
[本発明1077]
CARが膜貫通ドメインとscFvとの間に細胞外スペーサーをさらに含む、本発明1062～1076のいずれかのポリペプチド。
[本発明1078]
細胞外スペーサーが8～1000アミノ酸長である、本発明1077のポリペプチド。
[本発明1079]
細胞外スペーサーが8～500アミノ酸長である、本発明1078のポリペプチド。
[本発明1080]
細胞外スペーサーが100～300アミノ酸長である、本発明1079のポリペプチド。
[本発明1081]
細胞外スペーサーが100個未満のアミノ酸を有する、本発明1079のポリペプチド。
[本発明1082]
細胞外スペーサーがIgG4ヒンジ、CD8αヒンジ、IgG1ヒンジ、CD34ヒンジ、またはそれらの断片である、本発明1077～1081のいずれかのポリペプチド。
[本発明1083]
細胞外スペーサーがIgG4ヒンジまたはその断片を含む、本発明1082のポリペプチド。
[本発明1084]
細胞外スペーサーがCH1領域、CH2領域、および/もしくはCH3領域を含むか、またはさらに含む、本発明1077～1083のいずれかのポリペプチド。
[本発明1085]
スペーサーがIgG4ヒンジポリペプチド、CH2領域、およびCH3領域を含むか、またはIgG4ヒンジポリペプチド、CH2領域、およびCH3領域からなる、本発明1084のポリペプチド。
[本発明1086]
CH2領域がL235E置換および/またはN297Q置換を含む、本発明1084または1085のポリペプチド。
[本発明1087]
スペーサーが、SEQ ID NO:36と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、本発明1082～1086のいずれかのポリペプチド。
[本発明1088]
膜貫通ドメインが、T細胞受容体のα鎖もしくはβ鎖、CD28、CD3ε（イプシロン）、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD123、CD134、CD137、またはCD154の膜貫通ドメインである、本発明1062～1087のいずれかのポリペプチド。
[本発明1089]
膜貫通ドメインがCD28膜貫通ドメインである、本発明1088のポリペプチド。
[本発明1090]
膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:37と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、本発明1089のポリペプチド。
[本発明1091]
一次細胞内シグナル伝達ドメインがCD3ζである、本発明1062～1090のいずれかのポリペプチド。
[本発明1092]
一次細胞内シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO:39と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、本発明1091のポリペプチド。
[本発明1093]
細胞質領域が、1つまたは複数の共刺激ドメインをさらに含む、本発明1062～1092のいずれかのポリペプチド。
[本発明1094]
細胞質領域が、2つの共刺激ドメインを含む、本発明1062～1093のいずれかのポリペプチド。
[本発明1095]
1つまたは複数の共刺激ドメインが、4-1BB（CD137）、CD28、IL-15Rα、OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1（CD11a/CD18）、および/またはICOS（CD278）のうちの1つまたは複数に由来する共刺激ドメインを含む、本発明1093または1094のポリペプチド。
[本発明1096]
1つまたは複数の共刺激ドメインが、CD28由来の共刺激ドメインを含む、本発明1095のポリペプチド。
[本発明1097]
共刺激ドメインが、SEQ ID NO:38と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、本発明1096のポリペプチド。
[本発明1098]
scFvが、同じ抗原に結合する異なる抗原結合領域または抗体に由来するフレームワーク領域（FR）および相補性決定領域（CDR）を含むハイブリッドscFvである、本発明1062～1097のいずれかのポリペプチド。
[本発明1099]
FRおよびCDRが、同じ種に由来する抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1098のポリペプチド。
[本発明1100]
FRおよびCDRが、ヒトの抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1098または1099のポリペプチド。
[本発明1101]
ハイブリッドscFvを含むポリペプチドの免疫原性が、非ハイブリッドscFvを含むポリペプチドの免疫原性と有意に異ならず、ここで、該非ハイブリッドscFvが、該ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来するか、または該非ハイブリッドscFvが、該ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、本発明1098～1100のいずれかのポリペプチド。
[本発明1102]
FRおよびCDRが、異なるトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1098～1101のいずれかのポリペプチド。
[本発明1103]
FRが、CDRが由来する抗原結合領域または抗体より高いトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1102のポリペプチド。
[本発明1104]
CDRが、FRが由来する抗原結合領域または抗体より高いトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1102のポリペプチド。
[本発明1105]
前記ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、かつ/または該ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、本発明1098～1104のいずれかのポリペプチド。
[本発明1106]
前記ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍細胞クリアランス活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、かつ/または該ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、本発明1098～1105のいずれかのポリペプチド。
[本発明1107]
scFvが抗CD20 scFvを含む、本発明1062～1106のいずれかのポリペプチド。
[本発明1108]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:29、30、31、22、12、13、および14と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:26、27、28、18、9、10、および11と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1107のポリペプチド。
[本発明1109]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:5の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:6の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1107のポリペプチド。
[本発明1110]
scFvが、それぞれ、SEQ ID NO:24、13、および25のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:9、10、および23のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1107のポリペプチド。
[本発明1111]
scFvが、SEQ ID NO:3の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:4の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1107のポリペプチド。
[本発明1112]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、LFR1、LCDR1、LFR2、LCDR2、LFR3、LCDR3、およびLFR4を含む軽鎖可変領域；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、HFR1、HCDR1、HFR2、HCDR2、HFR3、HCDR3、およびHFR4を含む重鎖可変領域
を含み、ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:19、20、21、22、24、13、および25と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:15、16、17、18、9、10、および23と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1107のポリペプチド。
[本発明1113]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:7の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:8の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1107のポリペプチド。
[本発明1114]
scFvが、それぞれ、SEQ ID NO:12、13、および14のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:9、10、および11のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1107のポリペプチド。
[本発明1115]
scFvが、SEQ ID NO:1の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:2の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1107のポリペプチド。
[本発明1116]
scFvが抗GD2 scFvを含む、本発明1062～1097のいずれかのポリペプチド。
[本発明1117]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:136、137、138、139、113、114、および115と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:132、133、134、135、110、111、および112と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1116のポリペプチド。
[本発明1118]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:141の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:140の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1116のポリペプチド。
[本発明1119]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:120、121、122、123、129、130、および131と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:116、117、118、119、126、127、および128と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1116のポリペプチド。
[本発明1120]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:144の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:143の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1116のポリペプチド。
[本発明1121]
scFvが、それぞれ、SEQ ID NO:129、130、および131のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:126、127、および128のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1116のポリペプチド。
[本発明1122]
scFvが、SEQ ID NO:125の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:124の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1116のポリペプチド。
[本発明1123]
scFvが、それぞれ、SEQ ID NO:113、114、および115のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:110、111、および112のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1116のポリペプチド。
[本発明1124]
scFvが、SEQ ID NO:109の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:108の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1116のポリペプチド。
[本発明1125]
アミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、可変重鎖（VH）領域および可変軽鎖（VL）領域を含むscFvと膜貫通ドメインと一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質領域とを含むCARを含むポリペプチドであって、該scFvが、同じ抗原に結合する異なる抗原結合領域または抗体に由来するフレームワーク領域（FR）および相補性決定領域（CDR）を含むハイブリッドscFvである、前記ポリペプチド。
[本発明1126]
FRおよびCDRが、同じ種に由来する抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1125のポリペプチド。
[本発明1127]
FRおよびCDRが、ヒトのまたはヒト化された抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1125または1126のポリペプチド。
[本発明1128]
ハイブリッドscFvを含む前記ポリペプチドの免疫原性が、非ハイブリッドscFvを含むポリペプチドの免疫原性と有意に異ならず、ここで、該非ハイブリッドscFvが、該ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来するか、または該非ハイブリッドscFvが、該ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、本発明1125～1127のいずれかのポリペプチド。
[本発明1129]
FRおよびCDRが、異なるトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1125～1128のいずれかのポリペプチド。
[本発明1130]
FRが、CDRが由来する抗原結合領域または抗体より高いトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1129のポリペプチド。
[本発明1131]
CDRが、FRが由来する抗原結合領域または抗体より高いトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1129のポリペプチド。
[本発明1132]
前記ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、かつ/または該ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、本発明1125～1131のいずれかのポリペプチド。
[本発明1133]
前記ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍細胞クリアランス活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、かつ/または該ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、本発明1125～1132のいずれかのポリペプチド。
[本発明1134]
前記ポリペプチドが膜貫通ドメインと細胞質領域との間にねじれリンカーを含み、該ねじれリンカーが1～12個のアラニン残基を含む、本発明1125～1133のいずれかのポリペプチド。
[本発明1135]
ねじれリンカーが、2個もしくは4個のアラニン残基を含むか、または2個もしくは4個のアラニン残基からなる、本発明1134のポリペプチド。
[本発明1136]
scFvがVHおよびVLを含み、該VHとVLとの間にリンカーが存在する、本発明1134または1135のポリペプチド。
[本発明1137]
リンカーが4～40アミノ酸長である、本発明1136のポリペプチド。
[本発明1138]
リンカーが少なくとも4個のグリシン残基および/またはセリン残基を含む、本発明1137のポリペプチド。
[本発明1139]
リンカーが(GGGGS) n を含み、ここで、nが1、2、3、4、5、または6である、本発明1136～1138のいずれかのポリペプチド。
[本発明1140]
リンカーがGSTSGGGSGGGSGGGGSS（SEQ ID NO:32）を含む、本発明1136～1139のいずれかのポリペプチド。
[本発明1141]
VHがVLに対してアミノ近位である、本発明1125～1140のいずれかのポリペプチド。
[本発明1142]
VHがVLに対してカルボキシ近位である、本発明1125～1140のいずれかのポリペプチド。
[本発明1143]
CARが単一特異性である、本発明1125～1142のいずれかのポリペプチド。
[本発明1144]
CARが二重特異性である、本発明1125～1142のいずれかのポリペプチド。
[本発明1145]
CARが膜貫通ドメインとscFvとの間に細胞外スペーサーをさらに含む、本発明1125～1144のいずれかのポリペプチド。
[本発明1146]
細胞外スペーサーが8～1000アミノ酸長である、本発明1145のポリペプチド。
[本発明1147]
細胞外スペーサーが8～500アミノ酸長である、本発明1145のポリペプチド。
[本発明1148]
細胞外スペーサーが100～300アミノ酸長である、本発明1145のポリペプチド。
[本発明1149]
細胞外スペーサーが100個未満のアミノ酸を有する、本発明1145のポリペプチド。
[本発明1150]
細胞外スペーサーが、IgG4ヒンジ、CD8αヒンジ、IgG1ヒンジ、CD34ヒンジ、またはそれらの断片である、本発明1145～1149のいずれかのポリペプチド。
[本発明1151]
細胞外スペーサーがIgG4ヒンジまたはその断片を含む、本発明1150のポリペプチド。
[本発明1152]
細胞外スペーサーがCH1領域、CH2領域、および/もしくはCH3領域を含むか、またはさらに含む、本発明1145～1152のいずれかのポリペプチド。
[本発明1153]
前記スペーサーがIgG4ヒンジポリペプチド、CH2領域、およびCH3領域を含むか、またはIgG4ヒンジポリペプチド、CH2領域、およびCH3領域からなる、本発明1152のポリペプチド。
[本発明1154]
CH2領域がL235E置換および/またはN297Q置換を含む、本発明1152または1153のポリペプチド。
[本発明1155]
前記スペーサーが、SEQ ID NO:36と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、本発明1154のいずれかのポリペプチド。
[本発明1156]
膜貫通ドメインがT細胞受容体のα鎖もしくはβ鎖、CD28、CD3ε（イプシロン）、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD123、CD134、CD137、またはCD154の膜貫通ドメインである、本発明1125～1155のいずれかのポリペプチド。
[本発明1157]
膜貫通ドメインがCD28膜貫通ドメインである、本発明1156のポリペプチド。
[本発明1158]
膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:37と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、本発明1157のポリペプチド。
[本発明1159]
一次細胞内シグナル伝達ドメインがCD3ζである、本発明1125～1158のいずれかのポリペプチド。
[本発明1160]
一次細胞内シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO:39と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、本発明1159のポリペプチド。
[本発明1161]
細胞質領域が、1つまたは複数の共刺激ドメインをさらに含む、本発明1125～1160のいずれかのポリペプチド。
[本発明1162]
細胞質領域が、2つの共刺激ドメインを含む、本発明1125～1161のいずれかのポリペプチド。
[本発明1163]
1つまたは複数の共刺激ドメインが、4-1BB（CD137）、CD28、IL-15Rα、OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1（CD11a/CD18）、および/またはICOS（CD278）のうちの1つまたは複数に由来する共刺激ドメインを含む、本発明1161または1162のポリペプチド。
[本発明1164]
1つまたは複数の共刺激ドメインがCD28由来の共刺激ドメインを含む、本発明1161～1163のいずれかのポリペプチド。
[本発明1165]
共刺激ドメインが、SEQ ID NO:38と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、本発明1164のポリペプチド。
[本発明1166]
scFvが抗CD20 scFvを含む、本発明1125～1165のいずれかのポリペプチド。
[本発明1167]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:29、30、31、22、12、13、および14と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:26、27、28、18、9、10、および11と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1166のポリペプチド。
[本発明1168]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:5の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:6の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1166のポリペプチド。
[本発明1169]
scFvが、それぞれ、SEQ ID NO:24、13、および25のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:9、10、および23のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1166のポリペプチド。
[本発明1170]
scFvが、SEQ ID NO:3の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:4の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1166のポリペプチド。
[本発明1171]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、LFR1、LCDR1、LFR2、LCDR2、LFR3、LCDR3、およびLFR4を含む軽鎖可変領域；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、HFR1、HCDR1、HFR2、HCDR2、HFR3、HCDR3、およびHFR4を含む重鎖可変領域
を含み；ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:19、20、21、22、24、13、および25と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:15、16、17、18、9、10、および23と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1166のポリペプチド。
[本発明1172]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:7の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:8の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1166のポリペプチド。
[本発明1173]
scFvが、それぞれ、SEQ ID NO:12、13、および14のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:9、10、および11のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1166のポリペプチド。
[本発明1174]
scFvが、SEQ ID NO:1の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:2の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1166のポリペプチド。
[本発明1175]
scFvが抗GD2 scFvを含む、本発明1125～1165のいずれかのポリペプチド。
[本発明1176]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:136、137、138、139、113、114、および115と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:132、133、134、135、110、111、および112と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1175のポリペプチド。
[本発明1177]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:141の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:140の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1175のポリペプチド。
[本発明1178]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:120、121、122、123、129、130、および131と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:116、117、118、119、126、127、および128と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1175のポリペプチド。
[本発明1179]
scFvが、
軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:144の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:143の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、本発明1175のポリペプチド。
[本発明1180]
scFvが、それぞれ、SEQ ID NO:129、130、および131のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:126、127、および128のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1175のポリペプチド。
[本発明1181]
scFvが、SEQ ID NO:125の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:124の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1107のポリペプチド。
[本発明1182]
scFvが、それぞれ、SEQ ID NO:113、114、および115のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:110、111、および112のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1175のポリペプチド。
[本発明1183]
scFvが、SEQ ID NO:109の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:108の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、本発明1175のポリペプチド。
[本発明1184]
本発明1001～1183のいずれかのポリペプチドをコードする配列を含む核酸。
[本発明1185]
発現構築物である、本発明1184の核酸。
[本発明1186]
発現構築物がウイルスベクターである、本発明1185の核酸。
[本発明1187]
ウイルスベクターがレトロウイルスベクター、レトロウイルス由来のベクターを含む、本発明1186の核酸。
[本発明1188]
ウイルスベクターがレンチウイルスベクターまたはレンチウイルス由来のベクターである、本発明1187の核酸。
[本発明1189]
本発明1001～1183のいずれかのポリペプチドをコードする配列を含むレンチウイルスベクター。
[本発明1190]
本発明1184～1189のいずれかの核酸を含む細胞。
[本発明1191]
ウイルスベクターが細胞のゲノムに組み込まれている、本発明1190の核酸を含む細胞。
[本発明1192]
本発明1001～1183のいずれかのポリペプチドを発現する細胞。
[本発明1193]
T細胞、ナチュラルキラー（NK）細胞、ナチュラルキラーT細胞（NKT）、インバリアントナチュラルキラーT細胞（iNKT）、幹細胞、リンパ球前駆細胞、末梢血単核細胞（PBMC）、骨髄細胞、胎児肝細胞、胚性幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞（HSPC）、臍帯血細胞、または誘導多能性幹細胞（iPS細胞）である、本発明1190～1192のいずれかの細胞。
[本発明1194]
T細胞またはNK細胞である、本発明1193の細胞。
[本発明1195]
T細胞がナイーブメモリーT細胞を含む、本発明1194の細胞。
[本発明1196]
ナイーブメモリーT細胞がCD4+ T細胞またはCD8+ T細胞を含む、本発明1195の細胞。
[本発明1197]
本発明1190～1196の細胞のいずれかを含む細胞集団。
[本発明1198]
10 3 ～10 8 個の細胞を含む、本発明1197の細胞集団。
[本発明1199]
本発明1001～1183のいずれかのポリペプチド、本発明1184～1189のいずれかの核酸、本発明1190～1196のいずれかの細胞、または本発明1197もしくは1198の細胞集団を含む、組成物。
[本発明1200]
本発明1184～1189のいずれかの核酸を細胞へ導入する工程を含む、ポリペプチドを発現する細胞を作製する方法。
[本発明1201]
CARの膜貫通ドメインと細胞質ドメインとの間にねじれリンカーを導入する工程を含む、CARを作製する方法であって、該ねじれリンカーが、1～12個のアラニン残基を含む、前記方法。
[本発明1202]
第1の抗原結合領域または抗体に由来するCDRを第2の抗原結合領域または抗体に由来するFRと組み合わせる工程を含む、ハイブリッドscFvと膜貫通ドメインと一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質領域とを有するCARを作製する方法であって、第1および第2の抗原結合領域または抗体が、同じ抗原に結合する、前記方法。
[本発明1203]
FRおよびCDRが、同じ種に由来する抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1202の方法。
[本発明1204]
FRおよびCDRが、ヒトの抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1202または1203の方法。
[本発明1205]
FRおよびCDRが、異なるトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1202～1204のいずれかの方法。
[本発明1206]
FRが、CDRが由来する抗原結合領域または抗体より高いトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1205の方法。
[本発明1207]
CDRが、FRが由来する抗原結合領域または抗体より高いトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、本発明1205の方法。
[本発明1208]
ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、かつ/または該ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、本発明1202～1207のいずれかの方法。
[本発明1209]
ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍細胞クリアランス活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、かつ/または該ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、本発明1202～1208のいずれかの方法。
[本発明1210]
前記ポリペプチドをコードするウイルスを細胞に感染させる、本発明1200～1209のいずれかの方法。
[本発明1211]
ウイルスが、レンチウイルス、またはレンチウイルス由来のウイルスもしくはベクターを含む、本発明1210の方法。
[本発明1212]
細胞が、T細胞、ナチュラルキラー（NK）細胞、ナチュラルキラーT細胞（NKT）、インバリアントナチュラルキラーT細胞（iNKT）、幹細胞、リンパ球前駆細胞、末梢血単核細胞（PBMC）、骨髄細胞、胎児肝細胞、胚性幹細胞、臍帯血細胞、誘導多能性幹細胞（iPS細胞）である、本発明1200～1211のいずれかの方法。
[本発明1213]
細胞がT細胞またはNK細胞である、本発明1212の方法。
[本発明1214]
T細胞がナイーブメモリーT細胞を含む、本発明1213の方法。
[本発明1215]
ナイーブメモリーT細胞がCD4+ T細胞またはCD8+ T細胞を含む、本発明1214の方法。
[本発明1216]
細胞が未だT細胞またはNK細胞ではなく、前記方法が、該細胞のT細胞またはNK細胞への分化を促進する条件下で該細胞を培養する工程をさらに含む、本発明1213～1215のいずれかの方法。
[本発明1217]
核酸の細胞への導入の前およびまたは後に、該細胞を増大させる条件下で該細胞を培養する工程をさらに含む、本発明1200～1216のいずれかの方法。
[本発明1218]
細胞が無血清培地によって培養される、本発明1217の方法。
[本発明1219]
本発明1200または1203～1218のいずれかの方法によって作製された細胞。
[本発明1220]
本発明1201～1218のいずれかの方法によって作製されたCAR。
[本発明1221]
第1の抗原結合領域または抗体に由来するCDRを第2の抗原結合領域または抗体に由来するFRと組み合わせることを含む、ハイブリッドscFvと膜貫通ドメインと一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質領域とを有するCARを提供する工程であって、第1および第2の抗原結合領域または抗体が、同じ抗原に結合する、工程；ならびに
該CARの機能を評価する工程
を含む、CARをスクリーニングする方法。
[本発明1222]
CARの機能を評価する工程が、該CARのトニックシグナル伝達強度の評価を含む、本発明1221の方法。
[本発明1223]
トニックシグナル伝達強度の評価が、CDV希釈アッセイおよび/または活性化マーカーについての抗体染色による発現評価を含む、本発明1222の方法。
[本発明1224]
CARの機能を評価する工程が、腫瘍死滅効力、腫瘍クリアランス効力、インビボ生存率、インビボ腫瘍クリアランス、インビボ腫瘍量低下のうちの1つまたは複数の決定を含む、本発明1221～1223のいずれかの方法。
[本発明1225]
前記方法が、第1の抗原結合領域もしくは抗体に由来するCDRを第2の抗原結合領域もしくは抗体に由来するFRと組み合わせることを含む、ハイブリッドscFvを含むCARを作製する工程を含むか、またはさらに含み、第1および第2の抗原結合領域または抗体が、同じ抗原に結合する、本発明1221～1224のいずれかの方法。
[本発明1226]
有効量の本発明1199の組成物を患者に投与する工程を含む、がんを有する患者を処置する方法。
[本発明1227]
がんを有する患者におけるがんを処置するためのものである、本発明1226の方法。
[本発明1228]
付加的な治療法を患者に施す工程をさらに含む、本発明1226または1227の方法。
[本発明1229]
付加的な治療法が免疫療法を含む、本発明1228の方法。
[本発明1230]
がんがリンパ腫または神経芽細胞腫を含む、本発明1226～1229のいずれかの方法。
本発明の他の目的、特色、および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるであろう。しかしながら、この詳細な説明から、本発明の本旨および範囲に含まれる様々な変化および修飾が、当業者に明らかになるため、詳細な説明および具体例は、本発明の具体的な態様を示すが、例示として与えられるに過ぎないことを理解されたい。
[Invention 1001]
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
A polypeptide comprising an anti-CD20 single chain variable fragment (scFv) comprising:
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 contain amino acid sequences that have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 29, 30, 31, 22, 12, 13, and 14, respectively. ; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have amino acid sequences having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 26, 27, 28, 18, 9, 10, and 11, respectively; include,
The polypeptide.
[Present invention 1002]
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
A polypeptide comprising an anti-CD20 single chain variable fragment (scFv) comprising:
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 share at least 90% sequence identity with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:5, respectively. HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are at least 90 times the same as HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:6. % sequence identity,
The polypeptide.
[Present invention 1003]
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 comprises the amino acid sequence of LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 derived from the variable region of SEQ ID NO:5. , and/or HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 is derived from the variable region of SEQ ID NO:5. A polypeptide of the invention 1001 or 1002 comprising an amino acid sequence.
[Present invention 1004]
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NO: 29, 30, 31, 22, 12, 13, and 14, respectively; HFR1, HFR2, HFR3; The polypeptide of any of the invention 1001-1003, wherein HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 26, 27, 28, 18, 9, 10, and 11, respectively.
[Present invention 1005]
A light chain variable region comprising, in order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region, LFR1, LCDR1, LFR2, LCDR2, LFR3, LCDR3, and LFR4;
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, the heavy chain variable region includes: HFR1, HCDR1, HFR2, HCDR2, HFR3, HCDR3, and HFR4.
A polypeptide comprising an anti-CD20 scFv comprising:
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 contain amino acid sequences that have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 19, 20, 21, 22, 24, 13, and 25, respectively. ; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have amino acid sequences having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, 9, 10, and 23, respectively; include,
The polypeptide.
[Present invention 1006]
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
A polypeptide comprising an anti-CD20 single chain variable fragment (scFv) comprising:
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:7, respectively. HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are at least 90 times the same as HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:8. % sequence identity,
The polypeptide.
[Present invention 1007]
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 comprises the amino acid sequence of LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 derived from the variable region of SEQ ID NO:7. , and/or HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 is derived from the variable region of SEQ ID NO:8. A polypeptide of the invention 1005 or 1006 comprising an amino acid sequence.
[Present invention 1008]
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NO: 19, 20, 21, 22, 24, 13, and 25, respectively; HFR1, HFR2, HFR3; The polypeptide of any of the invention 1005-1007, wherein HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, 9, 10, and 23, respectively.
[Present invention 1009]
The light chain variable region comprises an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:5, and the heavy chain variable region comprises an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:6. The polypeptide of any of the inventions 1001 to 1004, comprising:
[Present invention 1010]
The polypeptide of the invention 1009, wherein the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:5 and the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:6.
[Present invention 1011]
the light chain variable region comprises an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:7, and the heavy chain variable region comprises an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:8. any of the polypeptides of the invention 1005-1008, comprising:
[Invention 1012]
The polypeptide of the invention 1011, wherein the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:7 and the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:8.
[Present invention 1013]
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
A polypeptide comprising an anti-GD2 single chain variable fragment (scFv) comprising:
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 contain amino acid sequences that have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 136, 137, 138, 139, 113, 114, and 115, respectively. ; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have amino acid sequences having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 132, 133, 134, 135, 110, 111, and 112, respectively; include,
The polypeptide.
[Present invention 1014]
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
A polypeptide comprising an anti-GD2 single chain variable fragment (scFv) comprising:
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 share at least 90% sequence identity with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:141. HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are at least 90 times the same as HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:140; % sequence identity,
The polypeptide.
[Present invention 1015]
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 comprises the amino acid sequence of LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 derived from the variable region of SEQ ID NO:141. , and/or HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 is derived from the variable region of SEQ ID NO:140. A polypeptide according to any one of the invention 1013-1014, comprising an amino acid sequence.
[Invention 1016]
the light chain variable region comprises an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:141, and the heavy chain variable region comprises an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:140. any of the polypeptides of the invention 1013-1015, comprising:
[Invention 1017]
The polypeptide of the invention 1016, wherein the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:140 and the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:141.
[Invention 1018]
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
A polypeptide comprising an anti-GD2 single chain variable fragment (scFv) comprising:
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 contain amino acid sequences that have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 120, 121, 122, 123, 129, 130, and 131, respectively. ; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have amino acid sequences having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 126, 127, and 128, respectively; include,
The polypeptide.
[Invention 1019]
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
A polypeptide comprising an anti-GD2 single chain variable fragment (scFv) comprising:
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 share at least 90% sequence identity with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:144, respectively. HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are at least 90 times the same as HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:143; % sequence identity,
The polypeptide.
[Invention 1020]
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 comprises the amino acid sequence of LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 derived from the variable region of SEQ ID NO:144. , and/or HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 is derived from the variable region of SEQ ID NO:143. A polypeptide according to any one of the invention 1013-1014, comprising an amino acid sequence.
[Invention 1021]
The light chain variable region comprises an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:144, and the heavy chain variable region comprises an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:143. The polypeptide of any of the inventions 1018-1020, comprising:
[Invention 1022]
The polypeptide of the invention 1021, wherein the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:144 and the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:143.
[Invention 1023]
The polypeptide of any of the invention 1001-1022, comprising a linker between VH and VL.
[Invention 1024]
A polypeptide of the invention 1023, wherein the linker is 4-40 amino acids long.
[Invention 1025]
A polypeptide of the invention 1023, wherein the linker comprises at least 4 glycine and/or serine residues.
[Invention 1026]
The polypeptide of any of the inventions 1023-1025, wherein the linker comprises (GGGGS) n , where n is 1, 2, 3, 4, 5, or 6.
[Invention 1027]
The polypeptide of any of the invention 1024-1026, wherein the linker comprises GSTSGGGSGGGSGGGGSS (SEQ ID NO:32).
[Invention 1028]
Polypeptides of the invention 1023 or 1024, wherein the linker comprises or consists of the amino acid sequence ( EAAAK) n , where n is 1, 2, 3, 4, 5, or 6. .
[Invention 1029]
The polypeptide of any of the invention 1024-1026, wherein the linker comprises GGGGS.
[Invention 1030]
The polypeptide of any of the invention 1023-1026, wherein the linker is (GGGGS) 4 .
[Present invention 1031]
The polypeptide of any of the invention 1001-1030, wherein the VH is amino proximal to the VL.
[Invention 1032]
The polypeptide of any of the invention 1001-1030, wherein the VH is carboxy-proximal to the VL.
[Present invention 1033]
A polypeptide according to any of the invention 1001-1032, comprising an scFv and a chimeric antigen receptor (CAR) comprising a transmembrane domain and a cytoplasmic region comprising a primary intracellular signaling domain.
[Present invention 1034]
A polypeptide according to any of the invention 1001-1032, comprising a single transmembrane domain and/or a single cytoplasmic region comprising a primary intracellular signaling domain.
[Invention 1035]
A polypeptide of the invention 1033 or 1034, comprising, in order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end, an scFv, a transmembrane domain, and a cytoplasmic region comprising a primary intracellular signaling domain.
[Invention 1036]
A polypeptide of the invention 1033 or 1034, wherein the CAR is monospecific.
[Present invention 1037]
The polypeptide of any of the invention 1033-1036, wherein the CAR further comprises an extracellular spacer between the transmembrane domain and the scFv.
[Invention 1038]
The polypeptide of the invention 1037, wherein the extracellular spacer is 8 to 1000 amino acids long.
[Invention 1039]
A polypeptide of the invention 1038, wherein the extracellular spacer is 8 to 500 amino acids long.
[Invention 1040]
A polypeptide of the invention 1039, wherein the extracellular spacer is 100 to 300 amino acids long.
[Present invention 1041]
Polypeptides of the invention 1039, wherein the extracellular spacer has less than 100 amino acids.
[Present invention 1042]
The polypeptide of any of the invention 1037-1041, wherein the extracellular spacer is an IgG4 hinge, a CD8α hinge, an IgG1 hinge, a CD34 hinge, or a fragment thereof.
[Invention 1043]
A polypeptide of the invention 1042, wherein the extracellular spacer comprises an IgG4 hinge or a fragment thereof.
[Present invention 1044]
A polypeptide according to any of the invention 1037-1043, wherein the extracellular spacer comprises or further comprises a CH1 region, a CH2 region, and/or a CH3 region.
[Invention 1045]
A polypeptide of the invention 1044, wherein the spacer comprises or consists of an IgG4 hinge polypeptide, a CH2 region, and a CH3 region.
[Invention 1046]
Polypeptide of the invention 1044 or 1045, wherein the CH2 region comprises an L235E substitution and/or an N297Q substitution.
[Invention 1047]
The polypeptide of any of the invention 1042-1046, wherein the spacer comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity with SEQ ID NO:36.
[Invention 1048]
The transmembrane domain is the α chain or β chain of T cell receptor, CD28, CD3ε (epsilon), CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD123, CD134 , CD137, or CD154, the polypeptide of any one of the invention 1033-1047.
[Invention 1049]
The polypeptide of the invention 1048, wherein the transmembrane domain is a CD28 transmembrane domain.
[Invention 1050]
A polypeptide of the invention 1048, wherein the transmembrane domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity with SEQ ID NO:37.
[Present invention 1051]
The polypeptide of any of the invention 1033-1050, wherein the primary intracellular signaling domain is CD3ζ.
[Invention 1052]
A polypeptide of the invention 1051, wherein the primary intracellular signaling domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:39.
[Present invention 1053]
The polypeptide of any of the invention 1033-1051, wherein the cytoplasmic region further comprises one or more costimulatory domains.
[Present invention 1054]
The polypeptide of any of the invention 1033-1053, wherein the cytoplasmic region comprises two costimulatory domains.
[Invention 1055]
One or more costimulatory domains include 4-1BB (CD137), CD28, IL-15Rα, OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), and/or ICOS (CD278). ) of the present invention 1053 or 1054, comprising a co-stimulatory domain derived from one or more of the following.
[Present invention 1056]
A polypeptide of the invention 1055, wherein the one or more costimulatory domains comprise a CD28-derived costimulatory domain.
[Present invention 1057]
A polypeptide of the invention 1056, wherein the costimulatory domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:38.
[Invention 1058]
The polypeptide of any of the invention 1033-1057, further comprising a torsion linker between the transmembrane domain and the cytoplasmic region.
[Invention 1059]
A polypeptide of the invention 1058, wherein the twisted linker comprises 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid residues.
[Invention 1060]
A polypeptide of the invention 1059, wherein the amino acid residue comprises or consists of an alanine residue.
[Present invention 1061]
Polypeptides of the invention 1059, wherein the twisted linker consists of 2 or 4 alanine residues.
[Invention 1062]
A polypeptide comprising a CAR comprising, in order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end, an scFv, a transmembrane domain, a tortuous linker, and a cytoplasmic region containing a primary intracellular signaling domain, the polypeptide comprising 1 to 12 tortuous linkers. The polypeptide comprising an alanine residue of.
[Invention 1063]
A polypeptide of the invention 1062, wherein the torsion linker comprises or consists of 2 or 4 alanine residues.
[Invention 1064]
The polypeptide of the invention 1062 or 1063, wherein the scFv comprises a VH and a VL, and a linker is present between the VH and VL.
[Invention 1065]
A polypeptide of the invention 1064, wherein the linker is 4-40 amino acids long.
[Invention 1066]
A polypeptide of the invention 1064, wherein the linker comprises at least 4 glycine and/or serine residues.
[Invention 1067]
The polypeptide of any of the inventions 1064-1066, wherein the linker comprises (GGGGS) n , where n is 1, 2, 3, 4, 5, or 6.
[Invention 1068]
Any polypeptide of the invention 1065-1066, wherein the linker comprises GSTSGGGSGGGSGGGGSS (SEQ ID NO:32).
[Invention 1069]
Polypeptides of the invention 1064 or 1065, wherein the linker comprises or consists of the amino acid sequence ( EAAAK) n , where n is 1, 2, 3, 4, 5, or 6. .
[Invention 1070]
The polypeptide of any of the invention 1065-1067, wherein the linker comprises GGGGS.
[Present invention 1071]
The polypeptide of any of the invention 1064-1067, wherein the linker is (GGGGS) 4 .
[Invention 1072]
A polypeptide of any of the invention 1062-1071, wherein the VH is amino proximal to the VL.
[Invention 1073]
A polypeptide of any of the invention 1062-1071, wherein the VH is carboxy-proximal to the VL.
[Present invention 1074]
A polypeptide according to any of the invention 1062-1073, comprising a single transmembrane domain and/or a single cytoplasmic region comprising a primary intracellular signaling domain.
[Present invention 1075]
A polypeptide of any of the invention 1062-1074, wherein the CAR is monospecific.
[Invention 1076]
A polypeptide of any of the invention 1062-1074, wherein the CAR is bispecific.
[Invention 1077]
The polypeptide of any of the invention 1062-1076, wherein the CAR further comprises an extracellular spacer between the transmembrane domain and the scFv.
[Invention 1078]
The polypeptide of the invention 1077, wherein the extracellular spacer is 8 to 1000 amino acids long.
[Invention 1079]
A polypeptide of the invention 1078, wherein the extracellular spacer is 8 to 500 amino acids long.
[Invention 1080]
A polypeptide of the invention 1079, wherein the extracellular spacer is 100 to 300 amino acids long.
[Present invention 1081]
Polypeptides of the invention 1079, wherein the extracellular spacer has less than 100 amino acids.
[Present invention 1082]
The polypeptide of any of the invention 1077-1081, wherein the extracellular spacer is an IgG4 hinge, a CD8α hinge, an IgG1 hinge, a CD34 hinge, or a fragment thereof.
[Present invention 1083]
A polypeptide of the invention 1082, wherein the extracellular spacer comprises an IgG4 hinge or a fragment thereof.
[Present invention 1084]
A polypeptide according to any of the invention 1077-1083, wherein the extracellular spacer comprises or further comprises a CH1 region, a CH2 region, and/or a CH3 region.
[Invention 1085]
A polypeptide of the invention 1084, wherein the spacer comprises or consists of an IgG4 hinge polypeptide, a CH2 region, and a CH3 region.
[Invention 1086]
Polypeptide of the invention 1084 or 1085, wherein the CH2 region comprises an L235E substitution and/or an N297Q substitution.
[Invention 1087]
A polypeptide of any of the invention 1082-1086, wherein the spacer comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity with SEQ ID NO:36.
[Present invention 1088]
The transmembrane domain is the α chain or β chain of T cell receptor, CD28, CD3ε (epsilon), CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD123, CD134 , CD137, or CD154, the polypeptide of any of the invention 1062-1087.
[Invention 1089]
The polypeptide of the invention 1088, wherein the transmembrane domain is a CD28 transmembrane domain.
[Invention 1090]
A polypeptide of the invention 1089, wherein the transmembrane domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity with SEQ ID NO:37.
[Present invention 1091]
The polypeptide of any of the invention 1062-1090, wherein the primary intracellular signaling domain is CD3ζ.
[Invention 1092]
A polypeptide of the invention 1091, wherein the primary intracellular signaling domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:39.
[Present invention 1093]
The polypeptide of any of the invention 1062-1092, wherein the cytoplasmic region further comprises one or more costimulatory domains.
[Present invention 1094]
The polypeptide of any of the invention 1062-1093, wherein the cytoplasmic region comprises two costimulatory domains.
[Present invention 1095]
One or more costimulatory domains include 4-1BB (CD137), CD28, IL-15Rα, OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), and/or ICOS (CD278). ).
[Invention 1096]
A polypeptide of the invention 1095, wherein the one or more costimulatory domains comprise a CD28-derived costimulatory domain.
[Invention 1097]
A polypeptide of the invention 1096, wherein the costimulatory domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:38.
[Present invention 1098]
The polypeptide of any of the invention 1062-1097, wherein the scFv is a hybrid scFv comprising framework regions (FR) and complementarity determining regions (CDR) derived from different antigen binding regions or antibodies that bind the same antigen.
[Invention 1099]
A polypeptide of the invention 1098, wherein the FR and CDR are derived from antigen binding regions or antibodies derived from the same species.
[Invention 1100]
The polypeptide of the invention 1098 or 1099, wherein the FR and CDR are derived from a human antigen binding region or antibody.
[Present invention 1101]
The immunogenicity of a polypeptide comprising a hybrid scFv is not significantly different from the immunogenicity of a polypeptide comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is linked to the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv. or the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv.
[Present invention 1102]
A polypeptide of any of the invention 1098-1101, wherein the FR and CDR are derived from antigen binding regions or antibodies having different tonic signaling strengths.
[Present invention 1103]
A polypeptide of the invention 1102, wherein the FRs are derived from an antigen binding region or antibody that has higher tonic signaling strength than the antigen binding region or antibody from which the CDRs are derived.
[Present invention 1104]
A polypeptide of the invention 1102, wherein the CDRs are derived from an antigen binding region or antibody that has a higher tonic signaling strength than the antigen binding region or antibody from which the FRs are derived.
[Present invention 1105]
said polypeptide has increased tumor-killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein said non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv, and/or The invention 1098 wherein said polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein said non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv. ~1104 any polypeptide.
[Present invention 1106]
said polypeptide has increased tumor cell clearance activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein said non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv, and/or or the polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv. Any polypeptide from 1098 to 1105.
[Present invention 1107]
The polypeptide of any of the invention 1062-1106, wherein the scFv comprises an anti-CD20 scFv.
[Present invention 1108]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 29, 30, 31, 22, 12, 13, and 14, respectively; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are at least 90% sequence identical to SEQ ID NO: 26, 27, 28, 18, 9, 10, and 11, respectively; 1107. A polypeptide of the invention 1107, comprising an amino acid sequence with a
[Present invention 1109]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
comprising: % sequence identity; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are respectively HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2 of the variable region of SEQ ID NO:6. , and an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3.
[Present invention 1110]
VL in which the scFv comprises LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 24, 13, and 25, respectively; and VH comprising HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 9, 10, and 23, respectively. A polypeptide of the invention 1107 comprising.
[Present invention 1111]
The polypeptide of the invention 1107, wherein the scFv comprises a VL comprising variable regions LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO:3 and a VH comprising variable regions HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO:4 .
[Present invention 1112]
scFv is
A light chain variable region comprising, in order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region, LFR1, LCDR1, LFR2, LCDR2, LFR3, LCDR3, and LFR4;
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, the heavy chain variable region includes: HFR1, HCDR1, HFR2, HCDR2, HFR3, HCDR3, and HFR4.
, wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 19, 20, 21, 22, 24, 13, and 25, respectively. HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are at least 90% sequence identical to SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, 9, 10, and 23, respectively; 1107. A polypeptide of the invention 1107, comprising an amino acid sequence with a
[Present invention 1113]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
and wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are each at least 90 times larger than LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:7. % sequence identity; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are respectively HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2 of the variable region of SEQ ID NO:8. , and an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3.
[Present invention 1114]
VL in which the scFv comprises LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 12, 13, and 14, respectively; and VH, comprising HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 9, 10, and 11, respectively. A polypeptide of the invention 1107 comprising.
[Present invention 1115]
The polypeptide of the invention 1107, wherein the scFv comprises a VL comprising variable regions LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO:1, and a VH comprising variable regions HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO:2 .
[Present invention 1116]
The polypeptide of any of the invention 1062-1097, wherein the scFv comprises an anti-GD2 scFv.
[Present invention 1117]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
, wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 136, 137, 138, 139, 113, 114, and 115, respectively. HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are at least 90% sequence identical to SEQ ID NO: 132, 133, 134, 135, 110, 111, and 112, respectively; 1116. A polypeptide of the invention 1116, comprising an amino acid sequence having the following properties:
[Present invention 1118]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
, wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are each at least 90 times larger than LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:141. % sequence identity; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are respectively HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2 of the variable region of SEQ ID NO:140. , and an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3.
[Present invention 1119]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
, wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 120, 121, 122, 123, 129, 130, and 131, respectively. HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are at least 90% sequence identical to SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 126, 127, and 128, respectively; 1116. A polypeptide of the invention 1116, comprising an amino acid sequence having the following properties:
[Invention 1120]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
, wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are each at least 90 times larger than LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:144. % sequence identity; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are respectively HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2 of the variable region of SEQ ID NO:143. , and an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3.
[Present invention 1121]
VL in which the scFv comprises LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 129, 130, and 131, respectively; and VH that comprises HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 126, 127, and 128, respectively. A polypeptide of the invention 1116 comprising.
[Invention 1122]
The polypeptide of the invention 1116, wherein the scFv comprises a VL comprising variable regions LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO:125 and a VH comprising variable regions HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO:124 .
[Invention 1123]
VL in which the scFv comprises LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 113, 114, and 115, respectively; and VH, comprising HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 110, 111, and 112, respectively. A polypeptide of the invention 1116 comprising.
[Present invention 1124]
The polypeptide of the invention 1116, wherein the scFv comprises a VL comprising variable regions LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO:109 and a VH comprising variable regions HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO:108. .
[Invention 1125]
From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end, a scFv containing a variable heavy chain (VH) region and a variable light chain (VL) region, and a CAR containing a transmembrane domain and a cytoplasmic region containing a primary intracellular signaling domain. A polypeptide comprising: said scFv being a hybrid scFv comprising a framework region (FR) and a complementarity determining region (CDR) derived from different antigen binding regions or antibodies that bind to the same antigen.
[Present invention 1126]
A polypeptide of the invention 1125, wherein the FR and CDR are derived from antigen binding regions or antibodies derived from the same species.
[Present invention 1127]
A polypeptide of the invention 1125 or 1126, wherein the FRs and CDRs are derived from human or humanized antigen binding regions or antibodies.
[Present invention 1128]
The immunogenicity of said polypeptide comprising a hybrid scFv is not significantly different from the immunogenicity of a polypeptide comprising a non-hybrid scFv, wherein said non-hybrid scFv has the same antigen binding region or antibody as the FR of said hybrid scFv. or the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv.
[Present invention 1129]
A polypeptide of any of the invention 1125-1128, wherein the FRs and CDRs are derived from antigen binding regions or antibodies with different tonic signaling strengths.
[Present invention 1130]
A polypeptide of the invention 1129, wherein the FRs are derived from an antigen binding region or antibody that has higher tonic signaling strength than the antigen binding region or antibody from which the CDRs are derived.
[Present invention 1131]
A polypeptide of the invention 1129, wherein the CDRs are derived from an antigen binding region or antibody that has a higher tonic signaling strength than the antigen binding region or antibody from which the FRs are derived.
[Present invention 1132]
said polypeptide has increased tumor-killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein said non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv, and/or The invention 1125 wherein said polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein said non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv. ~1131 any polypeptide.
[Present invention 1133]
said polypeptide has increased tumor cell clearance activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein said non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv, and/or or the polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv. Any polypeptide from 1125 to 1132.
[Present invention 1134]
The polypeptide of any of the invention 1125-1133, wherein said polypeptide comprises a tortuous linker between the transmembrane domain and the cytoplasmic region, said tortuous linker comprising 1 to 12 alanine residues.
[Invention 1135]
A polypeptide of the invention 1134, wherein the torsion linker comprises or consists of 2 or 4 alanine residues.
[Present invention 1136]
The polypeptide of the invention 1134 or 1135, wherein the scFv comprises a VH and a VL, and a linker is present between the VH and VL.
[Present invention 1137]
A polypeptide of the invention 1136, wherein the linker is 4-40 amino acids long.
[Present invention 1138]
A polypeptide of the invention 1137, wherein the linker comprises at least 4 glycine and/or serine residues.
[Present invention 1139]
A polypeptide of any of the invention 1136-1138, wherein the linker comprises (GGGGS) n , where n is 1, 2, 3, 4, 5, or 6.
[Invention 1140]
A polypeptide of any of the invention 1136-1139, wherein the linker comprises GSTSGGGSGGGSGGGGSS (SEQ ID NO:32).
[Present invention 1141]
A polypeptide of any of the invention 1125-1140, wherein the VH is amino proximal to the VL.
[Present invention 1142]
A polypeptide of any of the invention 1125-1140, wherein the VH is carboxy-proximal to the VL.
[Present invention 1143]
A polypeptide of any of the invention 1125-1142, wherein the CAR is monospecific.
[Invention 1144]
A polypeptide of any of the invention 1125-1142, wherein the CAR is bispecific.
[Invention 1145]
The polypeptide of any of the invention 1125-1144, wherein the CAR further comprises an extracellular spacer between the transmembrane domain and the scFv.
[Present invention 1146]
Polypeptide of the invention 1145, wherein the extracellular spacer is 8 to 1000 amino acids long.
[Present invention 1147]
Polypeptides of the invention 1145, wherein the extracellular spacer is 8 to 500 amino acids long.
[Present invention 1148]
Polypeptide of the invention 1145, wherein the extracellular spacer is 100 to 300 amino acids long.
[Present invention 1149]
Polypeptides of the invention 1145, wherein the extracellular spacer has less than 100 amino acids.
[Invention 1150]
The polypeptide of any of the invention 1145-1149, wherein the extracellular spacer is an IgG4 hinge, a CD8α hinge, an IgG1 hinge, a CD34 hinge, or a fragment thereof.
[Present invention 1151]
A polypeptide of the invention 1150, wherein the extracellular spacer comprises an IgG4 hinge or a fragment thereof.
[Present invention 1152]
A polypeptide according to any of the invention 1145-1152, wherein the extracellular spacer comprises or further comprises a CH1 region, a CH2 region, and/or a CH3 region.
[Present invention 1153]
A polypeptide of the invention 1152, wherein said spacer comprises or consists of an IgG4 hinge polypeptide, a CH2 region, and a CH3 region.
[Present invention 1154]
A polypeptide of the invention 1152 or 1153, wherein the CH2 region comprises an L235E substitution and/or an N297Q substitution.
[Present invention 1155]
1154. Any polypeptide of the invention 1154, wherein said spacer comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity with SEQ ID NO:36.
[Present invention 1156]
The transmembrane domain is the α chain or β chain of the T cell receptor, CD28, CD3ε (epsilon), CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD123, CD134, The polypeptide of any of the invention 1125-1155, which is the transmembrane domain of CD137 or CD154.
[Present invention 1157]
A polypeptide of the invention 1156, wherein the transmembrane domain is a CD28 transmembrane domain.
[Present invention 1158]
A polypeptide of the invention 1157, wherein the transmembrane domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity with SEQ ID NO:37.
[Present invention 1159]
A polypeptide of any of the invention 1125-1158, wherein the primary intracellular signaling domain is CD3ζ.
[Invention 1160]
A polypeptide of the invention 1159, wherein the primary intracellular signaling domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:39.
[Present invention 1161]
A polypeptide of any of the invention 1125-1160, wherein the cytoplasmic region further comprises one or more costimulatory domains.
[Invention 1162]
A polypeptide of any of the invention 1125-1161, wherein the cytoplasmic region comprises two costimulatory domains.
[Present invention 1163]
One or more costimulatory domains include 4-1BB (CD137), CD28, IL-15Rα, OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), and/or ICOS (CD278). ) of the invention 1161 or 1162, comprising a co-stimulatory domain derived from one or more of the following.
[Present invention 1164]
A polypeptide of any of the invention 1161-1163, wherein the one or more costimulatory domains comprise a CD28-derived costimulatory domain.
[Present invention 1165]
A polypeptide of the invention 1164, wherein the costimulatory domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:38.
[Present invention 1166]
A polypeptide of any of the invention 1125-1165, wherein the scFv comprises an anti-CD20 scFv.
[Present invention 1167]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 29, 30, 31, 22, 12, 13, and 14, respectively; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are at least 90% sequence identical to SEQ ID NO: 26, 27, 28, 18, 9, 10, and 11, respectively; 1166. A polypeptide of the invention 1166, comprising an amino acid sequence having the following properties:
[Present invention 1168]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
comprising: % sequence identity; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are respectively HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2 of the variable region of SEQ ID NO:6. , and an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3.
[Present invention 1169]
VL in which the scFv comprises LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 24, 13, and 25, respectively; and VH comprising HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 9, 10, and 23, respectively. A polypeptide of the invention 1166 comprising.
[Invention 1170]
The polypeptide of the invention 1166, wherein the scFv comprises a VL comprising the variable regions LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO:3, and a VH comprising the variable regions HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO:4 .
[Present invention 1171]
scFv is
A light chain variable region comprising, in order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region, LFR1, LCDR1, LFR2, LCDR2, LFR3, LCDR3, and LFR4;
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, the heavy chain variable region includes: HFR1, HCDR1, HFR2, HCDR2, HFR3, HCDR3, and HFR4.
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 19, 20, 21, 22, 24, 13, and 25, respectively; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are at least 90% sequence identical to SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, 9, 10, and 23, respectively; 1166. A polypeptide of the invention 1166, comprising an amino acid sequence having the following properties:
[Invention 1172]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are at least 90 times larger than LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:7; % sequence identity; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are respectively HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2 of the variable region of SEQ ID NO:8. , and an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3.
[Present invention 1173]
VL in which the scFv comprises LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 12, 13, and 14, respectively; and VH, comprising HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 9, 10, and 11, respectively. A polypeptide of the invention 1166 comprising.
[Present invention 1174]
The polypeptide of the invention 1166, wherein the scFv comprises a VL comprising variable regions LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO:1 and a VH comprising variable regions HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO:2 .
[Present invention 1175]
A polypeptide of any of the invention 1125-1165, wherein the scFv comprises an anti-GD2 scFv.
[Present invention 1176]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 136, 137, 138, 139, 113, 114, and 115, respectively; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are at least 90% sequence identical to SEQ ID NO: 132, 133, 134, 135, 110, 111, and 112, respectively; 1175. A polypeptide of the invention 1175, comprising an amino acid sequence having a specific character.
[Invention 1177]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are at least 90 times larger than LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:141; % sequence identity; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are respectively HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2 of the variable region of SEQ ID NO:140. , and an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3.
[Invention 1178]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 120, 121, 122, 123, 129, 130, and 131, respectively; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are at least 90% sequence identical to SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 126, 127, and 128, respectively; 1175. A polypeptide of the invention 1175, comprising an amino acid sequence having a specific character.
[Present invention 1179]
scFv is
From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2), light chain the light chain variable region (VL), which includes complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4); as well as
From the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end, heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2), heavy chain Heavy chain variable region (VH), including complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4)
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are at least 90 times larger than LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:144; % sequence identity; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are respectively HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2 of the variable region of SEQ ID NO:143. , and an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3.
[Invention 1180]
VLs in which the scFvs include LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 129, 130, and 131, respectively; and VHs that include HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 126, 127, and 128, respectively. A polypeptide of the invention 1175 comprising.
[Present invention 1181]
The polypeptide of the invention 1107, wherein the scFv comprises a VL comprising variable regions LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO:125 and a VH comprising variable regions HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO:124 .
[Invention 1182]
VL in which the scFv comprises LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 113, 114, and 115, respectively; and VH, which comprises HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 110, 111, and 112, respectively. A polypeptide of the invention 1175 comprising.
[Present invention 1183]
The polypeptide of the invention 1175, wherein the scFv comprises a VL comprising variable regions LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO:109 and a VH comprising variable regions HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO:108 .
[Present invention 1184]
A nucleic acid comprising a sequence encoding any of the polypeptides of the present invention 1001 to 1183.
[Present invention 1185]
A nucleic acid of the invention 1184 that is an expression construct.
[Present invention 1186]
Nucleic acids of the invention 1185, wherein the expression construct is a viral vector.
[Present invention 1187]
The nucleic acid of the present invention 1186, wherein the viral vector comprises a retrovirus vector or a vector derived from a retrovirus.
[Present invention 1188]
The nucleic acid of the invention 1187, wherein the viral vector is a lentiviral vector or a vector derived from a lentivirus.
[Present invention 1189]
A lentiviral vector comprising a sequence encoding any of the polypeptides of the present invention 1001 to 1183.
[Present invention 1190]
A cell comprising any of the nucleic acids of the present invention 1184 to 1189.
[Present invention 1191]
A cell comprising a nucleic acid of the invention 1190, wherein the viral vector is integrated into the cell's genome.
[Present invention 1192]
A cell expressing any of the polypeptides of the present invention 1001 to 1183.
[Present invention 1193]
T cells, natural killer (NK) cells, natural killer T cells (NKT), invariant natural killer T cells (iNKT), stem cells, lymphoid progenitor cells, peripheral blood mononuclear cells (PBMC), bone marrow cells, fetal liver cells , an embryonic stem cell, a hematopoietic stem cell or hematopoietic progenitor cell (HSPC), an umbilical cord blood cell, or an induced pluripotent stem cell (iPS cell).
[Present invention 1194]
The cell of the present invention 1193, which is a T cell or NK cell.
[Present invention 1195]
The cell of the invention 1194, wherein the T cell comprises a naive memory T cell.
[Present invention 1196]
The cell of the invention 1195, wherein the naive memory T cell comprises a CD4+ T cell or a CD8+ T cell.
[Present invention 1197]
A cell population comprising any of the cells 1190 to 1196 of the present invention.
[Present invention 1198]
Cell population of the invention 1197 containing 10 3 to 10 8 cells.
[Present invention 1199]
A composition comprising a polypeptide of any of the inventions 1001 to 1183, a nucleic acid of any of the inventions 1184 to 1189, a cell of any of the inventions 1190 to 1196, or a cell population of the invention 1197 or 1198.
[Invention 1200]
A method for producing a cell expressing a polypeptide, the method comprising the step of introducing any of the nucleic acids of the present invention 1184 to 1189 into the cell.
[Invention 1201]
A method of making a CAR comprising introducing a tortuous linker between the transmembrane domain and the cytoplasmic domain of the CAR, said method comprising 1 to 12 alanine residues.
[Invention 1202]
combining CDRs derived from a first antigen-binding region or antibody with FRs derived from a second antigen-binding region or antibody; A method of producing a CAR having a CAR, wherein the first and second antigen binding regions or antibodies bind the same antigen.
[Invention 1203]
The method of the invention 1202, wherein the FR and CDR are derived from antigen binding regions or antibodies derived from the same species.
[Invention 1204]
The method of the invention 1202 or 1203, wherein the FRs and CDRs are derived from human antigen binding regions or antibodies.
[Invention 1205]
The method of any of the inventions 1202-1204, wherein the FRs and CDRs are derived from antigen binding regions or antibodies with different tonic signaling strengths.
[Invention 1206]
The method of the invention 1205, wherein the FR is derived from an antigen binding region or antibody that has higher tonic signaling strength than the antigen binding region or antibody from which the CDR is derived.
[Invention 1207]
1205. The method of the invention 1205, wherein the CDR is derived from an antigen binding region or antibody that has a higher tonic signaling strength than the antigen binding region or antibody from which the FR is derived.
[Invention 1208]
a polypeptide has increased tumor-killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv; The invention 1202--wherein the polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv. 1207 either way.
[Invention 1209]
the polypeptide has increased tumor cell clearance activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv, and/or The invention 1202, wherein the polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv. Any method from ~1208.
[Invention 1210]
The method according to any one of the present invention 1200 to 1209, which comprises infecting a cell with a virus encoding the polypeptide.
[Present invention 1211]
The method of the invention 1210, wherein the virus comprises a lentivirus, or a virus or vector derived from a lentivirus.
[Invention 1212]
Cells include T cells, natural killer (NK) cells, natural killer T cells (NKT), invariant natural killer T cells (iNKT), stem cells, lymphoid progenitor cells, peripheral blood mononuclear cells (PBMC), bone marrow cells, The method according to any one of the present invention 1200 to 1211, which is a fetal liver cell, an embryonic stem cell, an umbilical cord blood cell, or an induced pluripotent stem cell (iPS cell).
[Invention 1213]
1212. The method of the invention 1212, wherein the cells are T cells or NK cells.
[Invention 1214]
1213. The method of the invention 1213, wherein the T cell comprises a naive memory T cell.
[Present invention 1215]
1214. The method of the invention 1214, wherein the naive memory T cells comprise CD4+ T cells or CD8+ T cells.
[Invention 1216]
Any of the inventions 1213-1215, wherein the cell is not yet a T cell or NK cell, and the method further comprises culturing the cell under conditions that promote differentiation of the cell into a T cell or NK cell. the method of.
[Invention 1217]
The method of any of the inventions 1200-1216, further comprising the step of culturing the cells under conditions that expand the cells, before and/or after introducing the nucleic acid into the cells.
[Invention 1218]
The method of the invention 1217, wherein the cells are cultured in serum-free medium.
[Present invention 1219]
A cell produced by the method of any one of the present invention 1200 or 1203 to 1218.
[Invention 1220]
CAR produced by any of the methods of the present invention 1201 to 1218.
[Present invention 1221]
A hybrid scFv comprising combining CDRs derived from a first antigen binding region or antibody with FRs derived from a second antigen binding region or antibody and a cytoplasmic region comprising a transmembrane domain and a primary intracellular signaling domain. providing a CAR having a CAR, wherein the first and second antigen binding regions or antibodies bind the same antigen; and
Process of evaluating the function of the CAR
Methods of screening for CAR, including:
[Invention 1222]
1221. The method of the invention 1221, wherein the step of assessing the function of a CAR comprises assessing the tonic signaling strength of the CAR.
[Invention 1223]
1222. The method of the invention 1222, wherein assessing tonic signaling strength comprises expression assessment by CDV dilution assay and/or antibody staining for activation markers.
[Invention 1224]
Any of the inventions 1221-1223, wherein the step of evaluating the function of the CAR comprises determining one or more of tumor killing efficacy, tumor clearance efficacy, in vivo survival rate, in vivo tumor clearance, in vivo tumor burden reduction. Method.
[Invention 1225]
The method comprises creating a CAR comprising a hybrid scFv comprising combining CDRs derived from a first antigen binding region or antibody with FRs derived from a second antigen binding region or antibody, or further The method of any of the inventions 1221-1224, wherein the first and second antigen binding regions or antibodies bind the same antigen.
[Invention 1226]
A method of treating a patient with cancer comprising administering to the patient an effective amount of a composition of the invention 1199.
[Invention 1227]
1226. A method of the invention 1226 for treating cancer in a patient having cancer.
[Invention 1228]
1227. The method of the invention 1226 or 1227, further comprising administering an additional therapy to the patient.
[Invention 1229]
1228. The method of the invention 1228, wherein the additional treatment modality comprises immunotherapy.
[Invention 1230]
The method of any of the inventions 1226-1229, wherein the cancer comprises lymphoma or neuroblastoma.
Other objects, features, and advantages of the invention will become apparent from the detailed description below. However, from this detailed description, various changes and modifications that fall within the spirit and scope of the invention will become apparent to those skilled in the art, and the detailed description and specific examples indicate specific embodiments of the invention. , is given by way of example only.
Claims (15)
(A)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:29、30、31、22、12、13、および14と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:26、27、28、18、9、10、および11と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
または、
(B) 軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:5の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:6の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
任意で、
(a) LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3が、SEQ ID NO:5の可変領域に由来するLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3のアミノ酸配列を含み、かつ/またはHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3が、SEQ ID NO:6の可変領域に由来するHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3のアミノ酸配列を含む、
及び/または、
(b) LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/またはLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:29、30、31、22、12、13、および14のアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/またはHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:26、27、28、18、9、10、および11のアミノ酸配列を含む、
または、
(C) 軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、LFR1、LCDR1、LFR2、LCDR2、LFR3、LCDR3、およびLFR4を含む軽鎖可変領域；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、HFR1、HCDR1、HFR2、HCDR2、HFR3、HCDR3、およびHFR4を含む重鎖可変領域
を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:19、20、21、22、24、13、および25と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:15、16、17、18、9、10、および23と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
任意で、
(a)LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、SEQ ID NO:7の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3のアミノ酸配列を含み；及び/または、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、SEQ ID NO:8の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3のアミノ酸配列を含み、及び/または、
(b)LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/またはLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:19、20、21、22、24、13、および25のアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/またはHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:15、16、17、18、9、10、および23のアミノ酸配列を含む、または、
(c)軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:7と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖可変領域が、SEQ ID NO:8と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、さらに任意で、VLがSEQ ID NO:7のアミノ酸配列を含み、VHがSEQ ID NO:8のアミノ酸配列を含む、
または、
（D）軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:7の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:8の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
任意で、
(a) LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3が、SEQ ID NO:7の可変領域に由来するLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3のアミノ酸配列を含み、かつ/またはHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3が、SEQ ID NO:8の可変領域に由来するHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3のアミノ酸配列を含み、及び/または、
(b) LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/またはLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:19、20、21、22、24、13、および25のアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/またはHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:15、16、17、18、9、10、および23のアミノ酸配列を含み、及び/または、
(c) 軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:7と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域が、SEQ ID NO:8と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、さらに任意で、VLがSEQ ID NO:7のアミノ酸配列を含み、VHがSEQ ID NO:8のアミノ酸配列を含む、
前記ポリペプチド。 A polypeptide comprising an anti-CD20 single chain variable fragment (scFv),
(A) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 29, 30, 31, 22, 12, 13, and 14, respectively; and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:26, 27, 28, 18, 9, 10, and 11, respectively. comprising an amino acid sequence having
or
(B) Light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), and light chain framework region 2 (LFR2) in order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region. , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
where LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:5; and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2 of the variable region of SEQ ID NO:6, respectively; and an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3,
Optionally,
(a) Amino acids of LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 where LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 are derived from the variable region of SEQ ID NO:5. HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 are derived from the variable region of SEQ ID NO:6. or containing the amino acid sequence of HCDR3,
and/or
(b) LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 comprise the amino acid sequence of SEQ ID NO: 29, 30, 31, 22, 12, 13, and 14, respectively; and HFR1 , HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NO: 26, 27, 28, 18, 9, 10, and 11, respectively;
or
(C) A light chain variable region comprising, in order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region, LFR1, LCDR1, LFR2, LCDR2, LFR3, LCDR3, and LFR4; and the amino-proximal heavy chain variable region. a heavy chain variable region comprising, in order from the terminal end to the carboxy-proximal end, HFR1, HCDR1, HFR2, HCDR2, HFR3, HCDR3, and HFR4;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 19, 20, 21, 22, 24, 13, and 25, respectively; and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, 9, 10, and 23, respectively. comprising an amino acid sequence having
Optionally,
(a) LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 comprise the amino acid sequences of LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:7; and/ or HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 comprises the amino acid sequence of HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:8, and/or ,
(b) LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 comprise the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, 20, 21, 22, 24, 13, and 25, respectively; and HFR1 , HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, 9, 10, and 23, respectively, or
(c) the light chain variable region comprises an amino acid sequence that has at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:7, and the heavy chain variable region has at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:8; further optionally, the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:7 and the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:8.
or
(D) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), and light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are at least 90% in sequence with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:7; and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2 of the variable region of SEQ ID NO:8, respectively; and an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3,
Optionally,
(a) Amino acids of LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 where LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 are derived from the variable region of SEQ ID NO:7. and/or HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 are derived from the variable region of SEQ ID NO:8. or contains the amino acid sequence of HCDR3, and/or
(b) LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 comprise the amino acid sequence of SEQ ID NO: 19, 20, 21, 22, 24, 13, and 25, respectively; HFR1, HFR2 , HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 comprise the amino acid sequences of SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, 9, 10, and 23, respectively, and/or
(c) the light chain variable region comprises an amino acid sequence that has at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:7, and the heavy chain variable region has at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:8. and optionally, the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:7 and the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:8.
The polypeptide.
(A)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:136、137、138、139、113、114、および115と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:132、133、134、135、110、111、および112と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
任意で、
(a)LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3が、SEQ ID NO:141の可変領域に由来するLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3のアミノ酸配列を含み、かつ/またはHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3が、SEQ ID NO:140の可変領域に由来するHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3のアミノ酸配列を含み、及び/または、
(b) LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:141の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:140の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、さらに任意で、VLがSEQ ID NO:140のアミノ酸配列を含み、VHがSEQ ID NO:141のアミノ酸配列を含み、または、
(c) LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3が、SEQ ID NO:144の可変領域に由来するLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3のアミノ酸配列を含み、かつ/またはHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3が、SEQ ID NO:143の可変領域に由来するHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3のアミノ酸配列を含み、または、
(B) 軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、
LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:141の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:140の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
任意で、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3が、SEQ ID NO:144の可変領域に由来するLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3のアミノ酸配列を含み、かつ/またはHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3が、SEQ ID NO:143の可変領域に由来するHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3のアミノ酸配列を含み、
さらに任意で、
(a)LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3が、SEQ ID NO:141の可変領域に由来するLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、および/もしくはLCDR3のアミノ酸配列を含み、かつ/またはHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3が、SEQ ID NO:140の可変領域に由来するHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、および/もしくはHCDR3のアミノ酸配列を含み、及び/または、
(b) 軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:141と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域が、SEQ ID NO:140と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、さらに任意で、VLがSEQ ID NO:140のアミノ酸配列を含み、VHがSEQ ID NO:141のアミノ酸配列を含み、または、
(C) 軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:120、121、122、123、129、130、および131と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:116、117、118、119、126、127、および128と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
任意で、軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:144と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域が、SEQ ID NO:143と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、さらに任意で、VLがSEQ ID NO:144のアミノ酸配列を含み、VHがSEQ ID NO:143のアミノ酸配列を含み、または、
(D) 軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:144の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:143の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
任意で、軽鎖可変領域が、SEQ ID NO:144と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖可変領域が、SEQ ID NO:143と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、さらに任意で、VLがSEQ ID NO:144のアミノ酸配列を含み、VHがSEQ ID NO:143のアミノ酸配列を含む、
前記ポリペプチド。 A polypeptide comprising an anti-GD2 scFv,
(A) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 136, 137, 138, 139, 113, 114, and 115, respectively; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 132, 133, 134, 135, 110, 111, and 112, respectively. Contains an amino acid sequence,
Optionally,
(a) Amino acids of LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 where LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 are derived from the variable region of SEQ ID NO:141 HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 are derived from the variable region of SEQ ID NO:140. or contains the amino acid sequence of HCDR3, and/or
(b) LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are at least 90% in sequence with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:141; and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2 of the variable region of SEQ ID NO: 140, respectively; and an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3, and further optionally, the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:140, the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:141, or
(c) the amino acids of LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 where LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 are derived from the variable region of SEQ ID NO:144; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 are derived from the variable region of SEQ ID NO:143. or contains the amino acid sequence of HCDR3, or
(B) Light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), and light chain framework region 2 (LFR2) in order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region. , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 share at least 90% sequence identity with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:141. and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are the same as HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:140, respectively; comprising an amino acid sequence with at least 90% sequence identity;
Optionally, LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 are amino acids of LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 derived from the variable region of SEQ ID NO:144. HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 are derived from the variable region of SEQ ID NO:143. or contains the amino acid sequence of HCDR3,
Furthermore, optionally
(a) Amino acids of LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 where LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and/or LCDR3 are derived from the variable region of SEQ ID NO:141 HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and/or HCDR3 are derived from the variable region of SEQ ID NO:140. or contains the amino acid sequence of HCDR3, and/or
(b) the light chain variable region comprises an amino acid sequence that has at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:141, and the heavy chain variable region has at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:140; further optionally, the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:140, the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:141, or
(C) From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), and light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 120, 121, 122, 123, 129, 130, and 131, respectively; and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 126, 127, and 128, respectively. comprising an amino acid sequence having
Optionally, the light chain variable region comprises an amino acid sequence that has at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:144 and the heavy chain variable region has at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:143. further optionally, the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:144, the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:143, or
(D) From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), and light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and in order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the heavy chain variable region: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are at least 90% in sequence with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:144; Contains amino acid sequences with identity; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are the variable regions of SEQ ID NO:143, comprising an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with
Optionally, the light chain variable region comprises an amino acid sequence that has at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:144 and the heavy chain variable region has at least 90% sequence identity with SEQ ID NO:143. and optionally, the VL comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:144 and the VH comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:143.
The polypeptide.
任意で、
(i)リンカーが4～40アミノ酸長である、または、
(ii)リンカーが少なくとも4個のグリシン残基および/またはセリン残基を含む、または、
(iii)リンカーが(GGGGS)nを含み、ここで、nが1、2、3、4、5、または6である、または、
(iv)リンカーがアミノ酸配列(EAAAK)nを含むか、またはアミノ酸配列(EAAAK)nからなり、ここで、nが1、2、3、4、5、または6である、または、
(v)リンカーが(GGGGS)4である、及び/または、
(B)VHが
(i)VLに対してアミノ近位である、または、(ii)VLに対してカルボキシ近位である、
及び/または、
(C)前記ポリペプチドが、
(i)scFvと膜貫通ドメインと一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質領域とを含むキメラ抗原受容体（CAR）を含む、または、
(ii)単一の膜貫通ドメイン、および/または一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む単一の細胞質領域を含み、
任意で、
(a) 前記ポリペプチドが、アミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、scFvと膜貫通ドメインと一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質領域とを含み、
または、CARが単一特異性であり、
(b)CARが膜貫通ドメインとscFvとの間に細胞外スペーサーをさらに含み、
さらに任意で、
(I)細胞外スペーサーが8～1000アミノ酸長であり、
さらに任意で、細胞外スペーサーが8～500アミノ酸長であり、
さらに任意で、
(i)細胞外スペーサーが100～300アミノ酸長である、または、
(ii)細胞外スペーサーが100個未満のアミノ酸を有し、及び/または、
(II)細胞外スペーサーがIgG4ヒンジ、CD8αヒンジ、IgG1ヒンジ、CD34ヒンジ、またはそれらの断片であり、さらに任意で、細胞外スペーサーがIgG4ヒンジまたはその断片を含み、及び/または、
(III)細胞外スペーサーがCH1領域、CH2領域、および/もしくはCH3領域を含むか、またはさらに含み、
さらに任意で、
(i)スペーサーがIgG4ヒンジポリペプチド、CH2領域、およびCH3領域を含むか、またはIgG4ヒンジポリペプチド、CH2領域、およびCH3領域からなる、及び/または、
(ii)CH2領域がL235E置換および/またはN297Q置換を含む、及び/または、
(c)膜貫通ドメインが、T細胞受容体のα鎖もしくはβ鎖、CD28、CD3ε（イプシロン）、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD123、CD134、CD137、またはCD154の膜貫通ドメインであり、
任意で、
(i)膜貫通ドメインがCD28膜貫通ドメインであり、または、
(ii) 膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:37と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含み、及び/または、
(d)一次細胞内シグナル伝達ドメインがCD3ζであり、任意で、該一次細胞内シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO:39と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含み、及び/または、
(e)細胞質領域が、1つまたは複数の共刺激ドメインをさらに含み、及び/または、
(f)細胞質領域が、2つの共刺激ドメインを含み、及び/または、
(g)膜貫通ドメインと細胞質領域との間にねじれリンカーをさらに含み、
任意で、ねじれリンカーが1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のアミノ酸残基を含み、
さらに任意で、
(i)アミノ酸残基がアラニン残基を含むかまたはアラニン残基からなる、
(ii) ねじれリンカーが2個または4個のアラニン残基からなる、
請求項１または２に記載のポリペプチド。 (A) Contains a linker between VH and VL,
Optionally,
(i) the linker is 4 to 40 amino acids long, or
(ii) the linker comprises at least 4 glycine and/or serine residues, or
(iii) the linker comprises (GGGGS) n , where n is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; or
(iv) the linker comprises or consists of the amino acid sequence (EAAAK) n , where n is 1, 2 , 3, 4, 5, or 6; or
(v) the linker is (GGGGS) 4 , and/or
(B)VH
(i) amino-proximal to the VL; or (ii) carboxy-proximal to the VL;
and/or
(C) the polypeptide is
(i) comprises a chimeric antigen receptor (CAR) comprising an scFv and a transmembrane domain and a cytoplasmic region comprising a primary intracellular signaling domain, or
(ii) comprises a single transmembrane domain and/or a single cytoplasmic region containing a primary intracellular signaling domain;
Optionally,
(a) the polypeptide comprises, in order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end, a cytoplasmic region comprising an scFv, a transmembrane domain, and a primary intracellular signaling domain;
Alternatively, the CAR is monospecific and
(b) the CAR further comprises an extracellular spacer between the transmembrane domain and the scFv;
Furthermore, optionally
(I) the extracellular spacer is 8 to 1000 amino acids long,
further optionally, the extracellular spacer is between 8 and 500 amino acids in length;
Furthermore, optionally
(i) the extracellular spacer is 100 to 300 amino acids long, or
(ii) the extracellular spacer has less than 100 amino acids, and/or
(II) the extracellular spacer is an IgG4 hinge, a CD8α hinge, an IgG1 hinge, a CD34 hinge, or a fragment thereof; further optionally, the extracellular spacer comprises an IgG4 hinge or a fragment thereof; and/or
(III) the extracellular spacer comprises or further comprises a CH1 region, a CH2 region, and/or a CH3 region;
Furthermore, optionally
(i) the spacer comprises or consists of an IgG4 hinge polypeptide, a CH2 region, and a CH3 region; and/or
(ii) the CH2 region contains an L235E substitution and/or an N297Q substitution, and/or
(c) The transmembrane domain is the α chain or β chain of the T cell receptor, CD28, CD3ε (epsilon), CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, the transmembrane domain of CD123, CD134, CD137, or CD154;
Optionally,
(i) the transmembrane domain is a CD28 transmembrane domain, or
(ii) the transmembrane domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity with SEQ ID NO:37; and/or
(d) the primary intracellular signaling domain is CD3ζ, optionally the primary intracellular signaling domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:39, and /or,
(e) the cytoplasmic region further comprises one or more costimulatory domains, and/or
(f) the cytoplasmic region contains two costimulatory domains, and/or
(g) further comprising a torsion linker between the transmembrane domain and the cytoplasmic region;
Optionally, the twisted linker comprises 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, or 10 amino acid residues;
Furthermore, optionally
(i) the amino acid residue contains or consists of an alanine residue;
(ii) the twisted linker consists of two or four alanine residues;
The polypeptide according to claim 1 or 2.
任意で、
(a)ねじれリンカーが、2個もしくは4個のアラニン残基を含むか、または2個もしくは4個のアラニン残基からなる、及び/または、
(b) scFvがVHおよびVLを含み、該VHとVLとの間にリンカーが存在する、
さらに任意で、
(i)リンカーが4～40アミノ酸長である、または、
(ii) リンカーが少なくとも4個のグリシン残基および/またはセリン残基を含む、または、
(iii) リンカーが(GGGGS)nを含み、ここで、nが1、2、3、4、5、または6である、または、
(iv) リンカーがアミノ酸配列(EAAAK)nを含むか、またはアミノ酸配列(EAAAK)nからなり、ここで、nが1、2、3、4、5、または6である、または、
(v) リンカーが(GGGGS)4である、及び/または、
(c) VHがVLに対してアミノ近位である、または、VHがVLに対してカルボキシ近位である、及び/または、
(d) 該ポリペプチドが、単一の膜貫通ドメイン、および/または一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む単一の細胞質領域を含む、及び/または、
(e) CARが
(i)単一特異性である、または、(ii)二重特異性である、及び/または、
(f) CARが膜貫通ドメインとscFvとの間に細胞外スペーサーをさらに含み、さらに任意で、
(I)細胞外スペーサーが8～1000アミノ酸長であり、
さらに任意で、細胞外スペーサーが8～500アミノ酸長であり、
さらに任意で、細胞外スペーサーが(i)100～300アミノ酸長である、または、(ii)100個未満のアミノ酸を有し、及び/または、
(II) 細胞外スペーサーがIgG4ヒンジ、CD8αヒンジ、IgG1ヒンジ、CD34ヒンジ、またはそれらの断片であり、
さらに任意で、細胞外スペーサーがIgG4ヒンジまたはその断片を含み、及び/または、
(III) 細胞外スペーサーがCH1領域、CH2領域、および/もしくはCH3領域を含むか、またはさらに含み、
任意で、
(i)スペーサーがIgG4ヒンジポリペプチド、CH2領域、およびCH3領域を含むか、またはIgG4ヒンジポリペプチド、CH2領域、およびCH3領域からなる、及び/または、
(ii) CH2領域がL235E置換および/またはN297Q置換を含む、及び/または、
(g) 膜貫通ドメインが、T細胞受容体のα鎖もしくはβ鎖、CD28、CD3ε（イプシロン）、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD123、CD134、CD137、またはCD154の膜貫通ドメインであり、
任意で、膜貫通ドメインがCD28膜貫通ドメインであり、
さらに任意で、膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:37と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含み、及び/または、
(h) 一次細胞内シグナル伝達ドメインがCD3ゼータであり、任意で、該一次細胞内シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO:39と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含み、及び/または、
(i) 細胞質領域が、1つまたは複数の共刺激ドメインをさらに含み、及び/または、
(j) 細胞質領域が、2つの共刺激ドメインを含み、
任意で、1つまたは複数の共刺激ドメインが、4-1BB（CD137）、CD28、IL-15Rα、OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1（CD11a/CD18）、および/またはICOS（CD278）のうちの1つまたは複数に由来する共刺激ドメインを含み、
さらに任意で、1つまたは複数の共刺激ドメインが、CD28由来の共刺激ドメインを含み、
さらに任意で、該共刺激ドメインが、SEQ ID NO:38と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、及び/または、
(k) scFvが、同じ抗原に結合する異なる抗原結合領域または抗体に由来するフレームワーク領域（FR）および相補性決定領域（CDR）を含むハイブリッドscFvであり、
任意で、
(i)FRおよびCDRが、同じ種に由来する抗原結合領域または抗体に由来する、及び/または、
(ii) FRおよびCDRが、ヒトの抗原結合領域または抗体に由来する、及び/または、
(iii) ハイブリッドscFvを含むポリペプチドの免疫原性が、非ハイブリッドscFvを含むポリペプチドの免疫原性と有意に異ならず、ここで、該非ハイブリッドscFvが、該ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来するか、または該非ハイブリッドscFvが、該ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、及び/または、
(iv) FRおよびCDRが、異なるトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来し、
さらに任意で、
(I)FRが、CDRが由来する抗原結合領域または抗体より高いトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、または、
(II) CDRが、FRが由来する抗原結合領域または抗体より高いトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、及び/または、
(v) 前記ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、かつ/または該ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、及び/または、
(vi) 前記ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍細胞クリアランス活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、かつ/または該ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、及び/または、(l) scFvが抗CD20 scFvを含み、さらに任意で、該scFvが以下；
(A)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:29、30、31、22、12、13、および14と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:26、27、28、18、9、10、および11と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(B)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:5の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:6の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(C) それぞれ、SEQ ID NO:24、13、および25のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:9、10、および23のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、または、
(D) scFvが、SEQ ID NO:3の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:4の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含む、または、
(E)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、LFR1、LCDR1、LFR2、LCDR2、LFR3、LCDR3、およびLFR4を含む軽鎖可変領域；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、HFR1、HCDR1、HFR2、HCDR2、HFR3、HCDR3、およびHFR4を含む重鎖可変領域を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:19、20、21、22、24、13、および25と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:15、16、17、18、9、10、および23と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(F)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:7の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:8の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(G) scFvが、それぞれ、SEQ ID NO:12、13、および14のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:9、10、および11のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、または、
(H) scFvが、SEQ ID NO:1の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:2の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、
前記ポリペプチド。 In order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end, it contains a CAR containing an scFv, a transmembrane domain, a twisted linker, and a cytoplasmic region containing a primary intracellular signaling domain, with the twisted linker containing 1 to 12 alanine residues. A polypeptide comprising,
Optionally,
(a) the twisted linker comprises or consists of 2 or 4 alanine residues, and/or
(b) the scFv comprises a VH and a VL, and a linker is present between the VH and the VL;
Furthermore, optionally
(i) the linker is 4 to 40 amino acids long, or
(ii) the linker comprises at least 4 glycine and/or serine residues, or
(iii) the linker comprises (GGGGS) n , where n is 1, 2, 3, 4, 5, or 6; or
(iv) the linker comprises or consists of the amino acid sequence (EAAAK) n , where n is 1, 2 , 3, 4, 5, or 6; or
(v) the linker is (GGGGS) 4 , and/or
(c) VH is amino-proximal to VL, or VH is carboxy-proximal to VL, and/or
(d) the polypeptide comprises a single transmembrane domain and/or a single cytoplasmic region comprising a primary intracellular signaling domain; and/or
(e) CAR
(i) is monospecific, or (ii) is bispecific, and/or
(f) the CAR further comprises an extracellular spacer between the transmembrane domain and the scFv, and optionally,
(I) the extracellular spacer is 8 to 1000 amino acids long,
further optionally, the extracellular spacer is between 8 and 500 amino acids in length;
Further optionally, the extracellular spacer (i) is 100-300 amino acids long, or (ii) has less than 100 amino acids, and/or
(II) the extracellular spacer is an IgG4 hinge, a CD8α hinge, an IgG1 hinge, a CD34 hinge, or a fragment thereof;
Further optionally, the extracellular spacer comprises an IgG4 hinge or a fragment thereof, and/or
(III) the extracellular spacer comprises or further comprises a CH1 region, a CH2 region, and/or a CH3 region;
Optionally,
(i) the spacer comprises or consists of an IgG4 hinge polypeptide, a CH2 region, and a CH3 region; and/or
(ii) the CH2 region contains an L235E substitution and/or an N297Q substitution, and/or
(g) The transmembrane domain is the α chain or β chain of the T cell receptor, CD28, CD3ε (epsilon), CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, the transmembrane domain of CD123, CD134, CD137, or CD154;
Optionally, the transmembrane domain is a CD28 transmembrane domain;
Further optionally, the transmembrane domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:37, and/or
(h) the primary intracellular signaling domain is CD3 zeta, and optionally the primary intracellular signaling domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:39; and/or
(i) the cytoplasmic region further comprises one or more costimulatory domains; and/or
(j) the cytoplasmic region contains two costimulatory domains;
Optionally, one or more costimulatory domains are 4-1BB (CD137), CD28, IL-15Rα, OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), and/or comprising a costimulatory domain derived from one or more of ICOS (CD278);
Further optionally, the one or more costimulatory domains include a CD28-derived costimulatory domain;
Further optionally, the co-stimulatory domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:38, and/or
(k) the scFv is a hybrid scFv comprising a framework region (FR) and a complementarity determining region (CDR) derived from different antigen binding regions or antibodies that bind the same antigen;
Optionally,
(i) the FRs and CDRs are derived from antigen-binding regions or antibodies derived from the same species; and/or
(ii) the FRs and CDRs are derived from human antigen binding regions or antibodies; and/or
(iii) the immunogenicity of a polypeptide comprising a hybrid scFv is not significantly different from the immunogenicity of a polypeptide comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv has the same antigen binding region as the FR of the hybrid scFv; or from an antibody, or the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv, and/or
(iv) the FRs and CDRs are derived from antigen binding regions or antibodies with different tonic signaling strengths;
Furthermore, optionally
(I) The FR is derived from an antigen binding region or antibody that has a higher tonic signaling strength than the antigen binding region or antibody from which the CDR is derived, or
(II) the CDR is derived from an antigen binding region or antibody that has a higher tonic signaling strength than the antigen binding region or antibody from which the FR is derived; and/or
(v) said polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein said non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv; and/or the polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv. and/or
(vi) said polypeptide has increased tumor cell clearance activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein said non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv; , and/or the polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv. , and/or (l) the scFv comprises an anti-CD20 scFv, and further optionally, the scFv:
(A) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 29, 30, 31, 22, 12, 13, and 14, respectively; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 26, 27, 28, 18, 9, 10, and 11, respectively. contains an amino acid sequence, or
(B) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), and light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
where LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:5; Containing amino acid sequences with identity; contains an amino acid sequence that has at least 90% sequence identity with
(C) VL containing LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 24, 13, and 25, respectively; and VH containing HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 9, 10, and 23, respectively. including, or
(D) the scFv comprises a VL comprising LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:3 and HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:4, or
(E) Light chain variable regions including, in order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region, LFR1, LCDR1, LFR2, LCDR2, LFR3, LCDR3, and LFR4; and the amino-proximal end of the heavy chain variable region. a heavy chain variable region comprising, in order from the terminal end to the carboxy-proximal end, HFR1, HCDR1, HFR2, HCDR2, HFR3, HCDR3, and HFR4;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 19, 20, 21, 22, 24, 13, and 25, respectively; and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, 9, 10, and 23, respectively. comprising an amino acid sequence having, or
(F) From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are at least 90% in sequence with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:7; Containing amino acid sequences with identity; contains an amino acid sequence that has at least 90% sequence identity with
(G) VL in which the scFv comprises LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 12, 13, and 14, respectively; and HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 9, 10, and 11, respectively. Contains VH, or
(H) the scFv comprises a VL comprising LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:1, and a VH comprising HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:2;
The polypeptide.
任意で、前記scFvが、
(A)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:136、137、138、139、113、114、および115と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:132、133、134、135、110、111、および112と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(B)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:141の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:140の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(C)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:120、121、122、123、129、130、および131と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:116、117、118、119、126、127、および128と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(D)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み、
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:144の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:143の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(E)それぞれ、SEQ ID NO:129、130、および131のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:126、127、および128のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、または、
(F)SEQ ID NO:125の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:124の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、または、
(G)それぞれ、SEQ ID NO:113、114、および115のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:110、111、および112のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、または、
(H)SEQ ID NO:109の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:108の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、
前記ポリペプチド。 The polypeptide of any of claims 4(c) to (j), wherein the scFv comprises an anti-GD2 scFv,
Optionally, the scFv is
(A) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 136, 137, 138, 139, 113, 114, and 115, respectively; and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 132, 133, 134, 135, 110, 111, and 112, respectively. comprising an amino acid sequence having, or
(B) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), and light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are at least 90% in sequence with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:141; and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2 of the variable region of SEQ ID NO: 140, respectively; and comprises an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3, or
(C) From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), and light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 120, 121, 122, 123, 129, 130, and 131, respectively; and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 126, 127, and 128, respectively. comprising an amino acid sequence having, or
(D) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are at least 90% in sequence with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:144; and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the variable region of SEQ ID NO: 143, respectively; and comprises an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with HCDR3, or
(E) VL containing LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 129, 130, and 131, respectively; and VH containing HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 126, 127, and 128, respectively; including, or
(F) containing a VL comprising LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO: 125, and a VH comprising HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the variable region of SEQ ID NO: 124, or
(G) VL containing LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 113, 114, and 115, respectively; and VH containing HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 110, 111, and 112, respectively; including, or
(H) VL containing LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO: 109, and VH containing HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the variable region of SEQ ID NO: 108,
The polypeptide.
任意で、
(a) FRおよびCDRが、同じ種に由来する抗原結合領域または抗体に由来する、及び/または、
(b) FRおよびCDRが、ヒトのまたはヒト化された抗原結合領域または抗体に由来する、及び/または、
(c) ハイブリッドscFvを含む前記ポリペプチドの免疫原性が、非ハイブリッドscFvを含むポリペプチドの免疫原性と有意に異ならず、ここで、該非ハイブリッドscFvが、該ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来するか、または該非ハイブリッドscFvが、該ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、及び/または、
(d) FRおよびCDRが、異なるトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、
さらに任意で、
(I)FRが、CDRが由来する抗原結合領域または抗体より高いトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、または、
(II) CDRが、FRが由来する抗原結合領域または抗体より高いトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、及び/または、
(e) 前記ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、かつ/または該ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、及び/または、
(f) 前記ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍細胞クリアランス活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、かつ/または該ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、及び/または、
(g) 前記ポリペプチドが膜貫通ドメインと細胞質領域との間にねじれリンカーを含み、該ねじれリンカーが1～12個のアラニン残基を含む、
さらに任意で、
(I)ねじれリンカーが、2個もしくは4個のアラニン残基を含むか、または2個もしくは4個のアラニン残基からなる、及び/または、
(II) scFvがVHおよびVLを含み、該VHとVLとの間にリンカーが存在する、
さらに任意で、リンカーが4～40アミノ酸長である、
さらに任意で、リンカーが少なくとも4個のグリシン残基および/またはセリン残基を含む、及び/または、
(h) VHが
(I)VLに対してアミノ近位である、または、(II)VLに対してカルボキシ近位である、及び/または、
(i)CARが
(I)単一特異性である、または、(II)二重特異性である、及び/または、
(j) CARが膜貫通ドメインとscFvとの間に細胞外スペーサーをさらに含む、
さらに任意で、細胞外スペーサーが
(I)8～1000アミノ酸長である、
(II)8～500アミノ酸長である、
(III)100～300アミノ酸長である、
(IV)100個未満のアミノ酸を有する、及び/または、
(IV)IgG4ヒンジ、CD8αヒンジ、IgG1ヒンジ、CD34ヒンジ、またはそれらの断片である、さらに任意で、細胞外スペーサーがIgG4ヒンジまたはその断片を含む、及び/または、
(V)CH1領域、CH2領域、および/もしくはCH3領域を含むか、またはさらに含む、
さらに任意で、
(A)前記スペーサーがIgG4ヒンジポリペプチド、CH2領域、およびCH3領域を含むか、またはIgG4ヒンジポリペプチド、CH2領域、およびCH3領域からなる、及び/または、
(B) CH2領域がL235E置換および/またはN297Q置換を含む、
さらに任意で、前記スペーサーが、SEQ ID NO:36と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、及び/または、
(k) 膜貫通ドメインがT細胞受容体のα鎖もしくはβ鎖、CD28、CD3ε（イプシロン）、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD123、CD134、CD137、またはCD154の膜貫通ドメインである、
任意で、膜貫通ドメインがCD28膜貫通ドメインである、
さらに任意で、膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:37と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、及び/または、
(l) 一次細胞内シグナル伝達ドメインがCD3ζである、
さらに任意で、一次細胞内シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO:39と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、及び/または、
(m) 細胞質領域が、1つまたは複数の共刺激ドメインをさらに含む、及び/または、
(n) 細胞質領域が、2つの共刺激ドメインを含む、さらに任意で、
(i) 1つまたは複数の共刺激ドメインが、4-1BB（CD137）、CD28、IL-15Rα、OX40、CD2、CD27、CDS、ICAM-1、LFA-1（CD11a/CD18）、および/またはICOS（CD278）のうちの1つまたは複数に由来する共刺激ドメインを含む、及び/または、
(ii) 1つまたは複数の共刺激ドメインがCD28由来の共刺激ドメインを含む、
さらに任意で、共刺激ドメインが、SEQ ID NO:38と少なくとも80％の配列同一性を有するポリペプチドまたはその断片を含む、及び/または、
(o) scFvが抗CD20 scFvを含む、さらに任意で、scFvが、
(A)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:29、30、31、22、12、13、および14と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:26、27、28、18、9、10、および11と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(B)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:5の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:6の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(C)それぞれ、SEQ ID NO:24、13、および25のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:9、10、および23のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、または、
(D)SEQ ID NO:3の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:4の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、または、
(E)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、LFR1、LCDR1、LFR2、LCDR2、LFR3、LCDR3、およびLFR4を含む軽鎖可変領域；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、HFR1、HCDR1、HFR2、HCDR2、HFR3、HCDR3、およびHFR4を含む重鎖可変領域
を含み；ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:19、20、21、22、24、13、および25と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:15、16、17、18、9、10、および23と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(F)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:7の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:8の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(G)それぞれ、SEQ ID NO:12、13、および14のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:9、10、および11のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、または、
(H)SEQ ID NO:1の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:2の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、または、
(p)抗GD2 scFvを含む、任意で、scFvが、
(A)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:136、137、138、139、113、114、および115と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；かつ、HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:132、133、134、135、110、111、および112と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(B)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:141の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:140の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(C)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:120、121、122、123、129、130、および131と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:116、117、118、119、126、127、および128と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(D)軽鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、軽鎖フレームワーク領域1（LFR1）、軽鎖相補性決定領域1（LCDR1）、軽鎖フレームワーク領域2（LFR2）、軽鎖相補性決定領域2（LCDR2）、軽鎖フレームワーク領域3（LFR3）、軽鎖相補性決定領域3（LCDR3）、および軽鎖フレームワーク領域4（LFR4）を含む軽鎖可変領域（VL）；ならびに
重鎖可変領域のアミノ近位末端からカルボキシ近位末端へ順に、重鎖フレームワーク領域1（HFR1）、重鎖相補性決定領域1（HCDR1）、重鎖フレームワーク領域2（HFR2）、重鎖相補性決定領域2（HCDR2）、重鎖フレームワーク領域3（HFR3）、重鎖相補性決定領域3（HCDR3）、および重鎖フレームワーク領域4（HFR4）を含む重鎖可変領域（VH）
を含み；
ここで、LFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:144の可変領域のLFR1、LFR2、LFR3、LFR4、LCDR1、LCDR2、およびLCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み；HFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3が、それぞれ、SEQ ID NO:143の可変領域のHFR1、HFR2、HFR3、HFR4、HCDR1、HCDR2、およびHCDR3と少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、または、
(E)それぞれ、SEQ ID NO:129、130、および131のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:126、127、および128のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、または、
(F)SEQ ID NO:125の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:124の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、または、
(G)それぞれ、SEQ ID NO:113、114、および115のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL；ならびに、それぞれ、SEQ ID NO:110、111、および112のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、または、
(H)SEQ ID NO:109の可変領域のLCDR1、LCDR2、およびLCDR3を含むVL、ならびにSEQ ID NO:108の可変領域のHCDR1、HCDR2、およびHCDR3を含むVHを含む、
前記ポリペプチド。 From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end, a scFv containing a variable heavy chain (VH) region and a variable light chain (VL) region, and a CAR containing a transmembrane domain and a cytoplasmic region containing a primary intracellular signaling domain. a hybrid scFv comprising a framework region (FR) and a complementarity determining region (CDR) derived from different antigen-binding regions or antibodies that bind to the same antigen;
Optionally,
(a) the FRs and CDRs are derived from antigen binding regions or antibodies derived from the same species; and/or
(b) the FRs and CDRs are derived from human or humanized antigen binding regions or antibodies; and/or
(c) the immunogenicity of said polypeptide comprising a hybrid scFv is not significantly different from the immunogenicity of a polypeptide comprising a non-hybrid scFv, wherein said non-hybrid scFv has the same antigen-binding FR as said hybrid scFv; or the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv, and/or
(d) FRs and CDRs are derived from antigen binding regions or antibodies with different tonic signaling strengths;
Furthermore, optionally
(I) The FR is derived from an antigen binding region or antibody that has a higher tonic signaling strength than the antigen binding region or antibody from which the CDR is derived, or
(II) the CDR is derived from an antigen binding region or antibody that has a higher tonic signaling strength than the antigen binding region or antibody from which the FR is derived; and/or
(e) said polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein said non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv; and/or the polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv. and/or
(f) said polypeptide has increased tumor cell clearance activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein said non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv; , and/or the polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv. , and/or
(g) the polypeptide comprises a tortuous linker between the transmembrane domain and the cytoplasmic region, the tortuous linker comprising 1 to 12 alanine residues;
Furthermore, optionally
(I) the twisted linker comprises or consists of 2 or 4 alanine residues; and/or
(II) scFv contains VH and VL, and a linker is present between the VH and VL;
further optionally, the linker is 4 to 40 amino acids long;
Further optionally, the linker comprises at least 4 glycine and/or serine residues, and/or
(h) VH
(I) amino-proximal to the VL, or (II) carboxy-proximal to the VL, and/or
(i)CAR is
(I) is monospecific, or (II) is bispecific, and/or
(j) the CAR further comprises an extracellular spacer between the transmembrane domain and the scFv;
Optionally, an extracellular spacer is
(I) 8 to 1000 amino acids long;
(II) is 8 to 500 amino acids long;
(III) is 100 to 300 amino acids long;
(IV) has less than 100 amino acids, and/or
(IV) is an IgG4 hinge, a CD8α hinge, an IgG1 hinge, a CD34 hinge, or a fragment thereof; further optionally, the extracellular spacer comprises an IgG4 hinge or a fragment thereof; and/or
(V) comprising or further comprising a CH1 region, a CH2 region, and/or a CH3 region;
Furthermore, optionally
(A) the spacer comprises or consists of an IgG4 hinge polypeptide, a CH2 region, and a CH3 region; and/or
(B) CH2 region contains L235E substitution and/or N297Q substitution;
Further optionally, the spacer comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity with SEQ ID NO:36, and/or
(k) Transmembrane domain is α chain or β chain of T cell receptor, CD28, CD3ε (epsilon), CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD123 , the transmembrane domain of CD134, CD137, or CD154,
Optionally, the transmembrane domain is a CD28 transmembrane domain.
Further optionally, the transmembrane domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:37, and/or
(l) the primary intracellular signaling domain is CD3ζ;
Further optionally, the primary intracellular signaling domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:39, and/or
(m) the cytoplasmic region further comprises one or more costimulatory domains; and/or
(n) the cytoplasmic region comprises two costimulatory domains, further optionally;
(i) one or more costimulatory domains include 4-1BB (CD137), CD28, IL-15Rα, OX40, CD2, CD27, CDS, ICAM-1, LFA-1 (CD11a/CD18), and/or comprises a costimulatory domain derived from one or more of ICOS (CD278), and/or
(ii) the one or more costimulatory domains comprise a CD28-derived costimulatory domain;
Further optionally, the costimulatory domain comprises a polypeptide or fragment thereof having at least 80% sequence identity to SEQ ID NO:38, and/or
(o) the scFv comprises an anti-CD20 scFv; further optionally, the scFv
(A) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 29, 30, 31, 22, 12, 13, and 14, respectively; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 26, 27, 28, 18, 9, 10, and 11, respectively. contains an amino acid sequence, or
(B) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), and light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the heavy chain variable regions: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
where LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:5; Containing amino acid sequences with identity; contains an amino acid sequence that has at least 90% sequence identity with
(C) VL containing LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 24, 13, and 25, respectively; and VH containing HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 9, 10, and 23, respectively; including, or
(D) comprising a VL comprising LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:3, and a VH comprising HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:4, or
(E) Light chain variable regions including, in order from the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region, LFR1, LCDR1, LFR2, LCDR2, LFR3, LCDR3, and LFR4; and the amino-proximal end of the heavy chain variable region. The heavy chain variable regions include, in order from the terminal end to the carboxy-proximal end, HFR1, HCDR1, HFR2, HCDR2, HFR3, HCDR3, and HFR4; , each containing an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 19, 20, 21, 22, 24, 13, and 25; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3. comprises an amino acid sequence having at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, 9, 10, and 23, respectively, or
(F) From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are at least 90% in sequence with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:7; Containing amino acid sequences with identity; contains an amino acid sequence that has at least 90% sequence identity with
(G) VL containing LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 12, 13, and 14, respectively; and VH containing HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 9, 10, and 11, respectively; including, or
(H) A VL comprising LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:1, and a VH comprising HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the variable region of SEQ ID NO:2, or
(p) Optionally, the scFv comprises an anti-GD2 scFv,
(A) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 136, 137, 138, 139, 113, 114, and 115, respectively; and HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 132, 133, 134, 135, 110, 111, and 112, respectively. comprising an amino acid sequence having, or
(B) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), and light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are at least 90% in sequence with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:141; Containing amino acid sequences with identity; contains an amino acid sequence that has at least 90% sequence identity with
(C) From the amino-proximal end of the light chain variable region to the carboxy-proximal end: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), and light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 120, 121, 122, 123, 129, 130, and 131, respectively; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 have at least 90% sequence identity with SEQ ID NO: 116, 117, 118, 119, 126, 127, and 128, respectively. contains an amino acid sequence, or
(D) From the amino-proximal end to the carboxy-proximal end of the light chain variable region: light chain framework region 1 (LFR1), light chain complementarity determining region 1 (LCDR1), light chain framework region 2 (LFR2). , light chain complementarity determining region 2 (LCDR2), light chain framework region 3 (LFR3), light chain complementarity determining region 3 (LCDR3), and light chain framework region 4 (LFR4) ( VL); and from the amino-proximal end of the heavy chain variable region to the carboxy-proximal end: heavy chain framework region 1 (HFR1), heavy chain complementarity determining region 1 (HCDR1), heavy chain framework region 2 (HFR2); ), heavy chain variable region including heavy chain complementarity determining region 2 (HCDR2), heavy chain framework region 3 (HFR3), heavy chain complementarity determining region 3 (HCDR3), and heavy chain framework region 4 (HFR4) (VH)
including;
wherein LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3 are at least 90% in sequence with LFR1, LFR2, LFR3, LFR4, LCDR1, LCDR2, and LCDR3, respectively, of the variable region of SEQ ID NO:144; Contains amino acid sequences with identity; HFR1, HFR2, HFR3, HFR4, HCDR1, HCDR2, and HCDR3 are the variable regions of SEQ ID NO:143, contains an amino acid sequence that has at least 90% sequence identity with
(E) VL containing LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 129, 130, and 131, respectively; and VH containing HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 126, 127, and 128, respectively; including, or
(F) containing a VL comprising LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO: 125, and a VH comprising HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the variable region of SEQ ID NO: 124, or
(G) VL containing LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of SEQ ID NO: 113, 114, and 115, respectively; and VH containing HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of SEQ ID NO: 110, 111, and 112, respectively; including, or
(H) VL containing LCDR1, LCDR2, and LCDR3 of the variable region of SEQ ID NO: 109, and VH containing HCDR1, HCDR2, and HCDR3 of the variable region of SEQ ID NO: 108,
The polypeptide.
任意で発現構築物であり、
さらに任意で、発現構築物がウイルスベクターであり、
さらに任意で、ウイルスベクターがレトロウイルスベクター、レトロウイルス由来のベクターを含み、
さらに任意で、ウイルスベクターがレンチウイルスベクターまたはレンチウイルス由来のベクターである、前記核酸。 A nucleic acid comprising a sequence encoding a polypeptide according to any one of claims 1 to 6,
optionally an expression construct;
Further optionally, the expression construct is a viral vector;
Further optionally, the viral vector comprises a retroviral vector, a vector derived from a retrovirus,
Further optionally, said nucleic acid, wherein the viral vector is a lentiviral vector or a vector derived from a lentivirus.
T細胞、ナチュラルキラー（NK）細胞、ナチュラルキラーT細胞（NKT）、インバリアントナチュラルキラーT細胞（iNKT）、幹細胞、リンパ球前駆細胞、末梢血単核細胞（PBMC）、骨髄細胞、胎児肝細胞、胚性幹細胞、造血幹細胞もしくは造血前駆細胞（HSPC）、臍帯血細胞、または誘導多能性幹細胞（iPS細胞）であり、
任意で、T細胞またはNK細胞であり、
さらに任意で、T細胞がナイーブメモリーT細胞を含み、
さらに任意で、ナイーブメモリーT細胞がCD4+ T細胞またはCD8+ T細胞を含む、
前記細胞。 A cell expressing a polypeptide according to any one of claims 1 to 6, optionally comprising:
T cells, natural killer (NK) cells, natural killer T cells (NKT), invariant natural killer T cells (iNKT), stem cells, lymphoid progenitor cells, peripheral blood mononuclear cells (PBMC), bone marrow cells, fetal liver cells , embryonic stem cells, hematopoietic stem cells or hematopoietic progenitor cells (HSPCs), umbilical cord blood cells, or induced pluripotent stem cells (iPS cells),
optionally a T cell or NK cell;
Further optionally, the T cell comprises a naïve memory T cell;
Further optionally, the naive memory T cells comprise CD4+ T cells or CD8+ T cells.
Said cell.
任意で、103～108個の細胞を含む、前記細胞集団。 A cell population comprising any of the cells according to claim 8 or 9,
Optionally, said population of cells comprises 10 3 to 10 8 cells.
(A)CARの膜貫通ドメインと細胞質ドメインとの間にねじれリンカーを導入する工程を含み、該ねじれリンカーが、1～12個のアラニン残基を含む、または、
(B) 第1の抗原結合領域または抗体に由来するCDRを第2の抗原結合領域または抗体に由来するFRと組み合わせる工程を含む、ハイブリッドscFvと膜貫通ドメインと一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞質領域とを有するCARを作製する方法であって、第1および第2の抗原結合領域または抗体が、同じ抗原に結合する、
任意で、
(a)FRおよびCDRが、同じ種に由来する抗原結合領域または抗体に由来する、及び/または、
(b) FRおよびCDRが、ヒトの抗原結合領域または抗体に由来する、及び/または、
(c) FRおよびCDRが、異なるトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、
さらに任意で、
(i)FRが、CDRが由来する抗原結合領域または抗体より高いトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、または、
(ii) CDRが、FRが由来する抗原結合領域または抗体より高いトニックシグナル伝達強度を有する抗原結合領域または抗体に由来する、及び/または、
(d) ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、かつ/または該ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、及び/または、
(e) ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍細胞クリアランス活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのFRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来し、かつ/または該ポリペプチドが、非ハイブリッドscFvを含むCARと比較して増加した腫瘍死滅活性を有し、ここで、該非ハイブリッドscFvが、ハイブリッドscFvのCDRと同じ抗原結合領域もしくは抗体に由来する、
さらに任意で、
(I)前記ポリペプチドをコードするウイルスを細胞に感染させる、
さらに任意で、ウイルスが、レンチウイルス、またはレンチウイルス由来のウイルスもしくはベクターを含む、及び/または、
(II) 細胞が、T細胞、ナチュラルキラー（NK）細胞、ナチュラルキラーT細胞（NKT）、インバリアントナチュラルキラーT細胞（iNKT）、幹細胞、リンパ球前駆細胞、末梢血単核細胞（PBMC）、骨髄細胞、胎児肝細胞、胚性幹細胞、臍帯血細胞、誘導多能性幹細胞（iPS細胞）である、
さらに任意で、細胞がT細胞またはNK細胞である、
さらに任意で、
(i)T細胞がナイーブメモリーT細胞を含む、さらに任意で、ナイーブメモリーT細胞がCD4+ T細胞またはCD8+ T細胞を含む、及び/または、
(ii) 細胞が未だT細胞またはNK細胞ではなく、前記方法が、該細胞のT細胞またはNK細胞への分化を促進する条件下で該細胞を培養する工程をさらに含む、
(III) 核酸の細胞への導入の前およびまたは後に、該細胞を増大させる条件下で該細胞を培養する工程をさらに含む、任意で、細胞が無血清培地によって培養される、
前記方法。 A method for producing a CAR, the method comprising:
(A) introducing a tortuous linker between the transmembrane domain and the cytoplasmic domain of the CAR, the tortuous linker comprising 1 to 12 alanine residues, or
(B) A hybrid scFv comprising combining CDRs derived from a first antigen-binding region or antibody with FRs derived from a second antigen-binding region or antibody and a cytoplasm comprising a transmembrane domain and a primary intracellular signaling domain. 1. A method of producing a CAR having a region in which the first and second antigen-binding regions or antibodies bind to the same antigen.
Optionally,
(a) the FRs and CDRs are derived from antigen-binding regions or antibodies derived from the same species, and/or
(b) the FRs and CDRs are derived from human antigen binding regions or antibodies, and/or
(c) FRs and CDRs are derived from antigen binding regions or antibodies with different tonic signaling strengths;
Furthermore, optionally
(i) the FR is derived from an antigen binding region or antibody that has a higher tonic signaling strength than the antigen binding region or antibody from which the CDR is derived, or
(ii) the CDR is derived from an antigen binding region or antibody that has a higher tonic signaling strength than the antigen binding region or antibody from which the FR is derived; and/or
(d) the polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv; and and/or the polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv; and /or,
(e) the polypeptide has increased tumor cell clearance activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the FR of the hybrid scFv; and/or the polypeptide has increased tumor killing activity compared to a CAR comprising a non-hybrid scFv, wherein the non-hybrid scFv is derived from the same antigen binding region or antibody as the CDRs of the hybrid scFv.
Furthermore, optionally
(I) infecting cells with a virus encoding the polypeptide;
Further optionally, the virus comprises a lentivirus, or a lentivirus-derived virus or vector, and/or
(II) The cells are T cells, natural killer (NK) cells, natural killer T cells (NKT), invariant natural killer T cells (iNKT), stem cells, lymphoid progenitor cells, peripheral blood mononuclear cells (PBMC), Bone marrow cells, fetal liver cells, embryonic stem cells, umbilical cord blood cells, induced pluripotent stem cells (iPS cells),
Further optionally, the cell is a T cell or a NK cell.
Furthermore, optionally
(i) the T cell comprises a naive memory T cell; further optionally, the naive memory T cell comprises a CD4+ T cell or a CD8+ T cell; and/or
(ii) the cell is not yet a T cell or NK cell, and the method further comprises culturing the cell under conditions that promote differentiation of the cell into a T cell or NK cell;
(III) before and/or after introducing the nucleic acid into the cells, optionally the cells are cultured in a serum-free medium, further comprising the step of culturing the cells under conditions that expand the cells;
Said method.
該CARの機能を評価する工程
を含む、CARをスクリーニングする方法であって、
任意で、
(a)CARの機能を評価する工程が、該CARのトニックシグナル伝達強度の評価を含む、
さらに任意で、トニックシグナル伝達強度の評価が、CDV希釈アッセイおよび/または活性化マーカーについての抗体染色による発現評価を含む、
(b) CARの機能を評価する工程が、腫瘍死滅効力、腫瘍クリアランス効力、インビボ生存率、インビボ腫瘍クリアランス、インビボ腫瘍量低下のうちの1つまたは複数の決定を含む、及び/または、
(c) 前記方法が、第1の抗原結合領域もしくは抗体に由来するCDRを第2の抗原結合領域もしくは抗体に由来するFRと組み合わせることを含む、ハイブリッドscFvを含むCARを作製する工程を含むか、またはさらに含み、第1および第2の抗原結合領域または抗体が、同じ抗原に結合する、
前記方法。 A hybrid scFv comprising combining CDRs derived from a first antigen binding region or antibody with FRs derived from a second antigen binding region or antibody and a cytoplasmic region comprising a transmembrane domain and a primary intracellular signaling domain. 1. A method for screening a CAR, comprising: providing a CAR having a CAR, wherein the first and second antigen-binding regions or antibodies bind to the same antigen; and evaluating the function of the CAR. hand,
Optionally,
(a) the step of evaluating the function of the CAR comprises evaluating the tonic signaling strength of the CAR;
Further optionally, assessment of tonic signaling strength comprises expression assessment by CDV dilution assay and/or antibody staining for activation markers.
(b) evaluating the function of the CAR comprises determining one or more of tumor killing efficacy, tumor clearance efficacy, in vivo survival rate, in vivo tumor clearance, in vivo tumor burden reduction, and/or
(c) the method comprises the step of creating a CAR comprising a hybrid scFv comprising combining CDRs derived from a first antigen binding region or antibody with FRs derived from a second antigen binding region or antibody; , or further comprising, the first and second antigen binding regions or antibodies bind the same antigen.
Said method.
(a) 該方法が、がんを有する患者におけるがんを処置するためのものである、及び/または、
(b) 該方法が、付加的な治療法を患者に施す工程をさらに含む、さらに任意で、
付加的な治療法が免疫療法を含む、及び/または、
(c) がんがリンパ腫または神経芽細胞腫を含む、
前記組成物。 12. The composition of claim 11 for use in a method of treating a patient with cancer, the method comprising administering to the patient an effective amount of the composition, optionally comprising:
(a) the method is for treating cancer in a patient with cancer; and/or
(b) further optionally, the method further comprises administering an additional therapy to the patient;
the additional treatment includes immunotherapy, and/or
(c) the cancer includes lymphoma or neuroblastoma;
Said composition.
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