JPWO2021009682A5 - - Google Patents
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Description
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるキットが更に、1つ以上の凝集阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、凝集阻害剤が、還元剤、免疫複合体、キレート剤、及びジアミノブタンからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、凝集阻害剤がキレート剤である。いくつかの実施形態では、キレート剤がEDTAである。還元剤は、メルカプトエタンスルホン酸であり得る。凝集阻害剤は、ウシ血清アルブミン(BSA)であり得る。
本発明は、例えば以下の実施形態を包含する：
［１］妊娠中の対象からの試料中の胎児細胞を検出する方法であって、
(a)複数の細胞を含む試料を、第1の抗体と接触させる工程、
(b)濃縮試料を生成するために、第1の抗体に結合した細胞を単離する工程、
(c)濃縮試料を、第2の抗体と接触させる工程、及び
(d)第2の抗体に結合した細胞を、胎児細胞と同定する工程を含み、
第1の抗体又は第2の抗体が、
(i)骨髄細胞上で発現するトリガー受容体様2(TREML2)タンパク質に結合する抗体である、又は
(ii)TREML2タンパク質に結合する抗原結合性フラグメントを含む、方法。
［２］胎児細胞が胎児有核赤血球(fnRBC)である、［1］に記載の方法。
［３］第1の抗体が、1つ以上の磁性粒子にコンジュゲートしている、［1］又は［2］に記載の方法。
［４］磁性粒子が磁性コロイド粒子である、［3］に記載の方法。
［５］磁性コロイド粒子が磁性流体磁性粒子である、［4］に記載の方法。
［６］工程(b)が、試料を磁場にさらす工程を含む、［3］から［5］のいずれかに記載の方法。
［７］磁性粒子が、ビオチン-ストレプトアビジン、抗原-抗体、受容体-ホルモン、受容体-リガンド、アゴニスト-アンタゴニスト、レクチン-炭水化物、プロテインA-抗体Fc、並びにアビジン-ビオチン、ビオチン類似体-アビジン、デスチオビオチン-ストレプトアビジン、デスチオビオチン-アビジン、イミノビオチン-ストレプトアビジン、及びイミノビオチン-アビジンを含む群から選択される特異的結合対の一員を1つ含む、第1の外因性凝集増強因子(EAEF)にカップリングしている、［6］に記載の方法。
［８］工程(a)が、磁性粒子の凝集を誘導するために、前記特異的結合対の他方の一員を含む第2のEAEFを添加する工程を含む、［7］に記載の方法。
［９］工程(b)が、濃縮試料中での磁性粒子の凝集を反転させるために、前記特異的結合対の一員を濃縮試料に添加する工程を含む、［8］に記載の方法。
［１０］工程(a)の前に更に、還元剤、免疫複合体、キレート剤、及びジアミノブタンからなる群から選択される少なくとも1つの凝集阻害剤を試料に添加する工程を含む、［1］から［9］のいずれかに記載の方法。
［１１］凝集阻害剤が、EDTAであるキレート剤である、［10］に記載の方法。
［１２］第2の抗体が、TREML2タンパク質に結合する抗体であるか、又はTREML2タンパク質に結合する抗原結合性フラグメントを含む、［1］から［11］のいずれかに記載の方法。
［１３］工程(d)の前に更に、単一胎児細胞を単離する工程を含む、［12］に記載の方法。
［１４］単一胎児細胞を単離する工程を、第2の抗体に結合した単一胎児細胞を単離することにより行う、［13］に記載の方法。
［１５］第2の抗体が標識にコンジュゲートしている、［14］に記載の方法。
［１６］標識が蛍光標識である、［15］に記載の方法。
［１７］単一胎児細胞を単離する工程が、免疫蛍光技術に基づく、［16］に記載の方法。
［１８］単一胎児細胞を単離する工程を、蛍光活性化セルソーティング(FACS)により行う、［17］に記載の方法。
［１９］単一胎児細胞を単離する工程を、DEPArrayにより行う、［17］に記載の方法。
［２０］工程(d)が、配列解析を行う工程を含む、［1］から［19］のいずれかに記載の方法。
［２１］配列解析が、ショートタンデムリピート(STR)解析を含む、［20］に記載の方法。
［２２］更に、胎児細胞を解析する工程を含む、［1］から［21］のいずれかに記載の方法。
［２３］胎児細胞の解析が、ゲノム解析又は遺伝的解析を行う工程を含む、［22］に記載の方法。
［２４］遺伝的解析を行う工程が、胎児細胞中の1つ以上の遺伝的異常の存在又は不存在を検出する工程を含む、［23］に記載の方法。
［２５］第1の抗体が、TREML2タンパク質に結合する抗体であるか、又はTREML2タンパク質に結合する抗原結合性フラグメントを含む、［1］から［24］のいずれかに記載の方法。
［２６］TREML2タンパク質に結合する抗体、又はTREML2タンパク質に結合する抗原結合性フラグメントが、
(i)配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(HCVR)相補性決定領域(CDR)1、
(ii)配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVR CDR2、
(iii)配列番号8のアミノ酸配列を含むHCVR CDR3、
(iv)配列番号9のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(LCVR)CDR1、
(v)配列番号10のアミノ酸配列を含むLCVR CDR2、及び
(vi)配列番号11のアミノ酸配列を含むLCVR CDR3
から選択される1つ以上のCDRを含む、［1］から［25］のいずれかに記載の方法。
［２７］妊娠中の対象からの試料中の胎児細胞を検出する方法であって、
(a)複数の細胞を含む試料を、EpCAM、CD105及びCD71から選択されるタンパク質に結合する第1の抗体にコンジュゲートした磁性粒子を含む磁性試薬と接触させる工程、
(b)試料を、抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントと接触させる工程、並びに
(c)抗TREML2抗体に結合した細胞を、胎児細胞と同定する工程
を含む方法。
［２８］工程(c)の前に更に、第1の抗体に結合した細胞を単離する工程を含む、［27］に記載の方法。
［２９］細胞を単離する工程が、第1の抗体に結合した細胞を含む試料を濃縮するために、試料を磁場にさらす工程を含む、［28］に記載の方法。
［３０］磁性粒子が磁性コロイド粒子である、［27］から［29］のいずれかに記載の方法。
［３１］磁性コロイド粒子が磁性流体磁性粒子である、［30］に記載の方法。
［３２］磁性粒子が更に、ビオチン-ストレプトアビジン、抗原-抗体、受容体-ホルモン、受容体-リガンド、アゴニスト-アンタゴニスト、レクチン-炭水化物、プロテインA-抗体Fc、並びにアビジン-ビオチン、ビオチン類似体-アビジン、デスチオビオチン-ストレプトアビジン、デスチオビオチン-アビジン、イミノビオチン-ストレプトアビジン、及びイミノビオチン-アビジンを含む群から選択される特異的結合対の一員を1つ含む、第1の外因性凝集増強因子(EAEF)にカップリングしている、［27］から［31］のいずれかに記載の方法。
［３３］工程(a)の最中に、粒子の凝集を誘導するために、前記特異的結合対の他方の一員を含む第2のEAEFを添加する工程を含む、［32］に記載の方法。
［３４］濃縮試料の凝集を反転させるために更に、特異的結合対の一員を前記試料に添加し、それによって細胞の同定を容易にする工程を含む、［33］に記載の方法。
［３５］工程(a)の前に更に、還元剤、免疫複合体、キレート剤、ジアミノブタンからなる群から選択される少なくとも1つの凝集阻害剤を試料に添加する工程を含む、［27］から［34］のいずれかに記載の方法。
［３６］凝集阻害剤がキレート剤である、［35］に記載の方法。
［３７］キレート剤がEDTAである、［36］に記載の方法。
［３８］工程(c)の前に更に、抗TREML2抗体又は第2の抗体を使用して細胞を単離する工程を含む、［27］から［37］のいずれかに記載の方法。
［３９］第2の抗体が、抗サイトケラチン抗体及び抗HLAG抗体から選択される、［38］に記載の方法。
［４０］抗TREML2抗体又は第2の抗体が標識にコンジュゲートしている、［38］又は［39］に記載の方法。
［４１］標識が蛍光標識である、［40］に記載の方法。
［４２］細胞を単離する工程が、免疫蛍光技術に基づく、［41］に記載の方法。
［４３］細胞を単離する工程を、蛍光活性化セルソーティング(FACS)により行う、［42］に記載の方法。
［４４］細胞を単離する工程を、DEPArrayにより行う、［41］に記載の方法。
［４５］細胞を同定する工程が、配列解析を行う工程を含む、［27］から［44］のいずれかに記載の方法。
［４６］配列解析が、ショートタンデムリピート(STR)解析を含む、［45］に記載の方法。
［４７］更に、胎児細胞を解析する工程を含む、［27］から［46］のいずれかに記載の方法。
［４８］胎児細胞を解析する工程が、ゲノム解析又は遺伝的解析を行う工程を含む、［47］に記載の方法。
［４９］遺伝的解析を行う工程が、胎児細胞中の1つ以上の遺伝的異常の存在又は不存在を検出する工程を含む、［48］に記載の方法。
［５０］胎児細胞が、胎児赤芽球又は胎児栄養膜細胞である、［27］から［49］のいずれかに記載の方法。
［５１］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、
(i)配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(HCVR)CDR1、
(ii)配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVR CDR2、
(iii)配列番号8のアミノ酸配列を含むHCVR CDR3、
(iv)配列番号9のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(LCVR)CDR1、
(v)配列番号10のアミノ酸配列を含むLCVR CDR2、及び
(vi)配列番号11のアミノ酸配列を含むLCVR CDR3
から選択される1つ以上の相補性決定領域(CDR)を含む、［27］から［50］のいずれかに記載の方法。
［５２］配列番号6～11のいずれか1つが独立に、1つ以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を含む、［51］に記載の方法。
［５３］抗TREML2抗体が、sc-109096、ARP49877#P050、OACA04996、AF3259、MA5-30973、PA5-47471、ABIN634968、ABIN928294、30-552、ABIN2463297、ABIN19999041、11655-r001、ABIN749888、bs-2737r、ABIN1999045、11655-rp02、ABIN293207、ABIN2387613、t8282-40、ABIN4249314、nbp1-70737-20ul及びBD563661から選択される、［27］から［50］のいずれかに記載の方法。
［５４］(a)骨髄細胞上で発現するトリガー受容体様2(TREML2)タンパク質に結合する抗体(抗TREML2抗体)又はその抗原結合性フラグメント、及び(b)磁性コロイド粒子を含む磁性試薬を含むキット。
［５５］抗TREML2抗体が、sc-109096、ARP49877#P050、OACA04996、AF3259、MA5-30973、PA5-47471、ABIN634968、ABIN928294、30-552、ABIN2463297、ABIN19999041、11655-r001、ABIN749888、bs-2737r、ABIN1999045、11655-rp02、ABIN293207、ABIN2387613、t8282-40、ABIN4249314、nbp1-70737-20ul及びBD563661から選択される、［54］に記載のキット。
［５６］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、
(a)配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(HCVR)CDR1、
(b)配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVR CDR2、
(c)配列番号8のアミノ酸配列を含むHCVR CDR3、
(d)配列番号9のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(LCVR)CDR1、
(e)配列番号10のアミノ酸配列を含むLCVR CDR2、及び
(f)配列番号11のアミノ酸配列を含むLCVR CDR3
から選択される1つ以上の相補性決定領域(CDR)を含む、［54］に記載のキット。
［５７］配列番号6～11のいずれか1つが独立に、1つ以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を含む、［56］に記載のキット。
［５８］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、結合型抗体を生成するために、標識にコンジュゲートしている、［54］から［57］のいずれかに記載のキット。
［５９］標識が、フィコエリトリン(PE)、アロフィコシアニン(APC)、西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)、及びビオチンから選択される、［58］に記載のキット。
［６０］磁性コロイド粒子の寸法が200nm未満である、［54］から［59］のいずれかに記載のキット。
［６１］磁性コロイド粒子が磁性流体粒子である、［54］から［60］に記載のキット。
［６２］磁性コロイド粒子が、抗体又はその抗原結合性フラグメントにコンジュゲートしている、［54］から［61］のいずれかに記載のキット。
［６３］抗体が抗TREML2抗体である、［62］に記載のキット。
［６４］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、
(a)配列番号6のアミノ酸配列を含むHCVR CDR1、
(b)配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVR CDR2、
(c)配列番号8のアミノ酸配列を含むHCVR CDR3、
(d)配列番号9のアミノ酸配列を含むLCVR CDR1、
(e)配列番号10のアミノ酸配列を含むLCVR CDR2、及び
(f)配列番号11のアミノ酸配列を含むLCVR CDR3
から選択される1つ以上のCDRを含む、［63］に記載のキット。
［６５］配列番号6～11のいずれか1つが独立に、1つ以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を含む、［65］に記載のキット。
［６６］更に、還元剤、免疫複合体、キレート剤、ジアミノブタンからなる群から選択される阻害剤を含む、［54］から［65］のいずれかに記載のキット。
［６７］キレート剤がEDTAである、［66］に記載のキット。
［６８］更に、ビオチン-ストレプトアビジン、抗原-抗体、受容体-ホルモン、受容体-リガンド、アゴニスト-アンタゴニスト、レクチン-炭水化物、プロテインA-抗体Fc、並びにアビジン-ビオチン、ビオチン類似体-アビジン、デスチオビオチン-ストレプトアビジン、デスチオビオチン-アビジン、イミノビオチン-ストレプトアビジン、及びイミノビオチン-アビジンを含む群から選択される特異的結合対の一員を1つ含む、外因性凝集増強因子(EAEF)を含む、［54］から［67］のいずれかに記載のキット。
［６９］(a)胎児細胞の表面上で発現するタンパク質に結合し得る、磁性コロイド粒子に結合した第1の抗体、及び(b)抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントを含むキット。
［７０］第1の抗体が、EpCAM、CD105及びCD71から選択されるタンパク質に結合する、［65］に記載のキット。
［７１］磁性コロイド粒子が磁性流体粒子である、［69］又は［27］に記載のキット。
［７２］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、
(a)配列番号6のアミノ酸配列を含むHCVR CDR1、
(b)配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVR CDR2、
(c)配列番号8のアミノ酸配列を含むHCVR CDR3、
(d)配列番号9のアミノ酸配列を含むLCVR CDR1、
(e)配列番号10のアミノ酸配列を含むLCVR CDR2、及び
(f)配列番号11のアミノ酸配列を含むLCVR CDR3
から選択される1つ以上のCDRを含む、［69］から［71］のいずれかに記載のキット。
［７３］配列番号6～11のいずれか1つが独立に、1つ以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を含む、［72］に記載のキット。
［７４］更に、還元剤、免疫複合体、キレート剤、ジアミノブタンからなる群から選択される阻害剤を含む、［69］から［73］のいずれかに記載のキット。
［７５］キレート剤がEDTAである、［74］に記載のキット。
［７６］更に、ビオチン-ストレプトアビジン、抗原-抗体、受容体-ホルモン、受容体-リガンド、アゴニスト-アンタゴニスト、レクチン-炭水化物、プロテインA-抗体Fc、並びにアビジン-ビオチン、ビオチン類似体-アビジン、デスチオビオチン-ストレプトアビジン、デスチオビオチン-アビジン、イミノビオチン-ストレプトアビジン、及びイミノビオチン-アビジンを含む群から選択される特異的結合対の一員を1つ含む、外因性凝集増強因子(EAEF)を含む、［69］から［75］のいずれかに記載のキット。
［７７］細胞ベースの胎児遺伝的検査方法であって、
(a)妊娠中の対象から得られた、複数の細胞を含む試料を、抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントと接触させる工程、
(b)抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞を単離する工程、
(c)抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞からの1つ以上の核酸分子を解析する工程、及び
(d)1つ以上の核酸分子の解析に基づいて報告を作成する工程であって、報告が1つ以上の遺伝的異常を有する胎児の可能性を提供する、工程
を含む方法。
［７８］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞が胎児細胞である、［77］に記載の方法。
［７９］胎児細胞が胎児赤芽球である、［78］に記載の方法。
［８０］胎児細胞が胎児栄養膜細胞である、［78］に記載の方法。
［８１］1つ以上の核酸分子を解析する工程が、核型分析を行う工程を含む、［77］から［80］のいずれかに記載の方法。
［８２］1つ以上の核酸分子を解析する工程が、配列解析を行う工程を含む、［77］から［80］のいずれかに記載の方法。
［８３］配列解析が、ショートタンデムリピート(STR)解析を含む、［82］に記載の方法。
［８４］1つ以上の遺伝的異常が、トリソミー、性染色体異常及び構造異常から選択される、［77］から［83］のいずれかに記載の方法。
［８５］トリソミーが、トリソミー3、トリソミー4、トリソミー6、トリソミー7、トリソミー8、トリソミー9、トリソミー10、トリソミー11、トリソミー12、トリソミー13、トリソミー16、トリソミー17、トリソミー18、トリソミー20、トリソミー21及びトリソミー22から選択される、［84］に記載の方法。
［８６］性染色体異常が、モノソミーX、トリプルX症候群及びクラインフェルター症候群から選択される、［85］に記載の方法。
［８７］構造異常がコピー数多型(CNV)である、［86］に記載の方法。
［８８］構造異常が、CNVの欠失又はCNVの重複である、［87］に記載の方法。
［８９］抗TREML2抗体が磁性粒子にコンジュゲートしている、［77］から［88］のいずれかに記載の方法。
［９０］磁性粒子が磁性コロイド粒子である、［89］に記載の方法。
［９１］磁性コロイド粒子が磁性流体磁性粒子である、［90］に記載の方法。
［９２］工程(b)が、試料を磁場にさらす工程を含む、［89］から［91］のいずれかに記載の方法。
［９３］工程(a)の前に更に、試料を、EpCAM、CD105及びCD71から選択されるタンパク質に結合する第1の抗体と接触させる工程を含む、［77］から［88］のいずれかに記載の方法。
［９４］工程(a)の前に更に、第1の抗体に結合した細胞を単離する工程を含む、［93］に記載の方法。
［９５］第1の抗体が磁性粒子にコンジュゲートしている、［93］又は［94］に記載の方法。
［９６］磁性粒子が磁性コロイド粒子である、［95］に記載の方法。
［９７］磁性コロイド粒子が磁性流体磁性粒子である、［96］に記載の方法。
［９８］第1の抗体に結合した細胞を単離する工程が、試料を磁場にさらす工程を含む、［95］から［97］のいずれかに記載の方法。
［９９］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、標識にコンジュゲートしている、［77］から［88］及び請求項93から98のいずれか一項に記載の方法。
［１００］標識が蛍光標識である、［99］に記載の方法。
［１０１］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞を単離する工程が、免疫蛍光技術に基づく、［100］に記載の方法。
［１０２］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞を単離する工程を、蛍光活性化セルソーティング(FACS)により行う、［101］に記載の方法。
［１０３］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞を単離する工程を、DEPArrayにより行う、［101］に記載の方法。
［１０４］更に、抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞を、第2の抗体又はその抗原結合性フラグメントと接触させる工程を含む、［77］から［92］のいずれかに記載の方法。
［１０５］第2の抗体が、抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントである、［104］に記載の方法。
［１０６］第2の抗体が標識にコンジュゲートしている、［104］又は［105］に記載の方法。
［１０７］標識が蛍光標識である、［106］に記載の方法。
［１０８］更に、第2の抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞を単離する工程を含む、［107］に記載の方法。
［１０９］第2の抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞を単離する工程が、免疫蛍光技術に基づく、［108］に記載の方法。
［１１０］第2の抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞を単離する工程を、蛍光活性化セルソーティング(FACS)により行う、［109］に記載の方法。
［１１１］第2の抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞を単離する工程を、DEPArrayにより行う、［109］に記載の方法。
［１１２］抗TREML2抗体が、sc-109096、ARP49877#P050、OACA04996、AF3259、MA5-30973、PA5-47471、ABIN634968、ABIN928294、30-552、ABIN2463297、ABIN19999041、11655-r001、ABIN749888、bs-2737r、ABIN1999045、11655-rp02、ABIN293207、ABIN2387613、t8282-40、ABIN4249314、nbp1-70737-20ul及びBD563661から選択される、［77］から［111］のいずれかに記載の方法。
［１１３］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、
(a)配列番号6のアミノ酸配列を含むHCVR CDR1、
(b)配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVR CDR2、
(c)配列番号8のアミノ酸配列を含むHCVR CDR3、
(d)配列番号9のアミノ酸配列を含むLCVR CDR1、
(e)配列番号10のアミノ酸配列を含むLCVR CDR2、及び
(f)配列番号11のアミノ酸配列を含むLCVR CDR3
から選択される1つ以上のCDRを含む、［77］から［111］のいずれかに記載の方法。
［１１４］配列番号6～11のいずれか1つが独立に、1つ以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を含む、［113］に記載の方法。
［１１５］妊娠中の対象からの試料中の胎児細胞を検出する方法であって、
(a)複数の細胞を含む試料を第1の抗体と接触させる工程であって、第1の抗体は骨髄細胞上で発現するトリガー受容体様2(TREML2)タンパク質に結合するか(抗TREML2抗体)、又はその抗原結合性フラグメントである、工程、及び
(b)第1の抗体に結合した細胞を、胎児細胞と同定する工程
を含む方法。
［１１６］胎児細胞が胎児有核赤血球(fnRBC)である、［115］に記載の方法。
［１１７］第1の抗体が、1つ以上の磁性粒子にコンジュゲートしている、［115］又は［116］に記載の方法。
［１１８］磁性粒子が磁性コロイド粒子である、［117］に記載の方法。
［１１９］磁性コロイド粒子が磁性流体磁性粒子である、［118］に記載の方法。
［１２０］更に、試料を磁場にさらす工程を含む、［117］から［119］のいずれかに記載の方法。
［１２１］磁性粒子が、ビオチン-ストレプトアビジン、抗原-抗体、受容体-ホルモン、受容体-リガンド、アゴニスト-アンタゴニスト、レクチン-炭水化物、プロテインA-抗体Fc、並びにアビジン-ビオチン、ビオチン類似体-アビジン、デスチオビオチン-ストレプトアビジン、デスチオビオチン-アビジン、イミノビオチン-ストレプトアビジン、及びイミノビオチン-アビジンを含む群から選択される特異的結合対の一員を1つ含む、第1の外因性凝集増強因子(EAEF)にカップリングしている、［117］から［120］のいずれかに記載の方法。
［１２２］工程(b)の前に更に、磁性粒子の凝集を誘導するために、前記特異的結合対の他方の一員を含む第2のEAEFを添加する工程を含む、［121］に記載の方法。
［１２３］濃縮試料を生成するために、更に、第1の抗体に結合した細胞を単離する工程を含む、［122］に記載の方法。
［１２４］濃縮試料中での磁性粒子の凝集を反転させるために、更に、第1のEAEF又は第2のEAEFに結合し得る第3のEAEFを濃縮試料に添加する工程を含む、［123］に記載の方法。
［１２５］第3のEAEFが、前記特異的結合対の一員である、［124］に記載の方法。
［１２６］工程(a)の前に更に、還元剤、免疫複合体、キレート剤、及びジアミノブタンからなる群から選択される少なくとも1つの凝集阻害剤を試料に添加する工程を含む、［115］から［125］のいずれかに記載の方法。
［１２７］凝集阻害剤がキレート剤である、［126］に記載の方法。
［１２８］キレート剤がEDTAである、［127］に記載の方法。
［１２９］第1の抗体が標識にコンジュゲートしている、［115］又は［116］に記載の方法。
［１３０］標識が蛍光標識である、［129］に記載の方法。
［１３１］工程(b)の前に更に、第1の抗体に結合した細胞を、免疫蛍光技術に基づいて単離する工程を含む、［130］に記載の方法。
［１３２］第1の抗体に結合した細胞を単離する工程を、蛍光活性化セルソーティング(FACS)により行う、［131］に記載の方法。
［１３３］第1の抗体に結合した細胞を単離する工程を、DEPArrayにより行う、［131］に記載の方法。
［１３４］工程(b)が、配列解析を行う工程を含む、［115］から［133］のいずれかに記載の方法。
［１３５］配列解析が、ショートタンデムリピート(STR)解析を含む、［134］に記載の方法。
［１３６］更に、胎児細胞を解析する工程を含む、［115］から［135］のいずれかに記載の方法。
［１３７］胎児細胞を解析する工程が、ゲノム解析又は遺伝的解析を行う工程を含む、［136］に記載の方法。
［１３８］遺伝的解析を行う工程が、胎児細胞中の1つ以上の遺伝的異常の存在又は不存在を検出する工程を含む、［137］に記載の方法。
［１３９］第1の抗体又はその抗原結合性フラグメントが、
(a)配列番号6のアミノ酸配列を含むHCVR CDR1、
(b)配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVR CDR2、
(c)配列番号8のアミノ酸配列を含むHCVR CDR3、
(d)配列番号9のアミノ酸配列を含むLCVR CDR1、
(e)配列番号10のアミノ酸配列を含むLCVR CDR2、及び
(f)配列番号11のアミノ酸配列を含むLCVR CDR3
から選択される1つ以上のCDRを含む、［115］から［138］のいずれかに記載の方法。
［１４０］配列番号6～11のいずれかが独立に、1つ以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を含む、［139］に記載の方法。
［１４１］第1の抗体が、sc-109096、ARP49877#P050、OACA04996、AF3259、MA5-30973、PA5-47471、ABIN634968、ABIN928294、30-552、ABIN2463297、ABIN19999041、11655-r001、ABIN749888、bs-2737r、ABIN1999045、11655-rp02、ABIN293207、ABIN2387613、t8282-40、ABIN4249314、nbp1-70737-20ul及びBD563661から選択される、［115］から［138］のいずれかに記載の方法。
［１４２］(a)配列番号6のアミノ酸配列を含むHCVR CDR1、
(b)配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVR CDR2、
(c)配列番号8のアミノ酸配列を含むHCVR CDR3、
(d)配列番号9のアミノ酸配列を含むLCVR CDR1、
(e)配列番号10のアミノ酸配列を含むLCVR CDR2、及び
(f)配列番号11のアミノ酸配列を含むLCVR CDR3
から選択される1つ以上のCDRを含む、抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメント。
［１４３］配列番号6～11のいずれかが独立に、1つ以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を含む、［142］に記載の抗TREML2抗体。
［１４４］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、(a)～(f)から選択される2つ以上のCDRを含む、［142］又は［143］に記載の抗TREML2抗体。
［１４５］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、(a)～(f)から選択される3つ以上のCDRを含む、［142］又は［143］に記載の抗TREML2抗体。
［１４６］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、(a)～(f)から選択される4つ以上のCDRを含む、［142］又は［143］に記載の抗TREML2抗体。
［１４７］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、(a)～(f)から選択される5つ以上のCDRを含む、［142］又は［143］に記載の抗TREML2抗体。
［１４８］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、(a)～(f)のCDRのすべてを含む、［142］又は［143］に記載の抗TREML2抗体。
［１４９］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが標識にコンジュゲートしている、［142］から［148］のいずれかに記載の抗TREML2抗体。
［１５０］標識が蛍光標識である、［149］に記載の抗TREML2抗体。
［１５１］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、磁性粒子にコンジュゲートしている、［142］から［148］のいずれかに記載の抗TREML2抗体。
［１５２］磁性粒子が磁性コロイド粒子である、［151］に記載の抗TREML2抗体。
［１５３］磁性コロイド粒子が磁性流体磁性粒子である、［152］に記載の抗TREML2抗体。
［１５４］磁性コロイド粒子が200nm未満である、［152］又は［153］に記載の抗TREML2抗体。
［１５５］磁性コロイド粒子が約80～200nmの間である、［152］又は［153］に記載の抗TREML2抗体。
［１５６］磁性コロイド粒子が約90～150nmの間である、［152］又は［153］に記載の抗TREML2抗体。
［１５７］磁性コロイド粒子が、少なくとも50%の磁気質量を有する、［152］から［156］のいずれかに記載の抗TREML2抗体。
［１５８］磁性コロイド粒子が、少なくとも60%の磁気質量を有する、［157］に記載の抗TREML2抗体。
［１５９］磁性コロイド粒子が、70%～90%の間の磁気質量を有する、［157］に記載の抗TREML2抗体。
［１６０］磁性コロイド粒子が、コーティング分子で囲まれた、超常磁性体の結晶コアを含む、［152］から［159］のいずれかに記載の抗TREML2抗体。
［１６１］磁性粒子が、ビオチン-ストレプトアビジン、抗原-抗体、受容体-ホルモン、受容体-リガンド、アゴニスト-アンタゴニスト、レクチン-炭水化物、プロテインA-抗体Fc、並びにアビジン-ビオチン、ビオチン類似体-アビジン、デスチオビオチン-ストレプトアビジン、デスチオビオチン-アビジン、イミノビオチン-ストレプトアビジン、及びイミノビオチン-アビジンを含む群から選択される特異的結合対の一員を1つ含む、第1の外因性凝集増強因子(EAEF)にカップリングしている、［151］から［160］のいずれかに記載の抗TREML2抗体。
［１６２］(a)抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメント、及び(b)抗TREML2抗体にコンジュゲートした磁性粒子を含む抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１６３］磁性粒子が磁性コロイド粒子である、［155］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１６４］磁性コロイド粒子が磁性流体磁性粒子である、［156］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１６５］磁性コロイド粒子が200nm未満である、［163］又は［164］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１６６］磁性コロイド粒子が約80～200nmの間である、［163］又は［164］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１６７］磁性コロイド粒子が約90～150nmの間である、［163］又は［164］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１６８］磁性コロイド粒子が、少なくとも50%の磁気質量を有する、［163］から［167］のいずれかに記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１６９］磁性コロイド粒子が、少なくとも60%の磁気質量を有する、［168］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１７０］磁性コロイド粒子が、70%～90%の間の磁気質量を有する、［169］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１７１］磁性コロイド粒子が、コーティング分子で囲まれた、超常磁性体の結晶コアを含む、［163］から［170］のいずれかに記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１７２］磁性粒子が、ビオチン-ストレプトアビジン、抗原-抗体、受容体-ホルモン、受容体-リガンド、アゴニスト-アンタゴニスト、レクチン-炭水化物、プロテインA-抗体Fc、並びにアビジン-ビオチン、ビオチン類似体-アビジン、デスチオビオチン-ストレプトアビジン、デスチオビオチン-アビジン、イミノビオチン-ストレプトアビジン、及びイミノビオチン-アビジンを含む群から選択される特異的結合対の一員を1つ含む、第1の外因性凝集増強因子(EAEF)にカップリングしている、［162］から［171］のいずれかに記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１７３］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、
(a)配列番号6のアミノ酸配列を含むHCVR CDR1、
(b)配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVR CDR2、
(c)配列番号8のアミノ酸配列を含むHCVR CDR3、
(d)配列番号9のアミノ酸配列を含むLCVR CDR1、
(e)配列番号10のアミノ酸配列を含むLCVR CDR2、及び
(f)配列番号11のアミノ酸配列を含むLCVR CDR3
から選択される1つ以上のCDRを含む、［162］から［171］のいずれかに記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１７４］配列番号6～11のいずれかが独立に、1つ以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を含む、［173］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１７５］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、(a)～(f)から選択される2つ以上のCDRを含む、［173］又は［174］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１７６］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、(a)～(f)から選択される3つ以上のCDRを含む、［173］又は［174］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１７７］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、(a)～(f)から選択される4つ以上のCDRを含む、［173］又は［174］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１７８］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、(a)～(f)から選択される5つ以上のCDRを含む、［173］又は［174］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１７９］抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントが、(a)～(f)のCDRのすべてを含む、［173］又は［174］に記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１８０］抗TREML2抗体が、sc-109096、ARP49877#P050、OACA04996、AF3259、MA5-30973、PA5-47471、ABIN634968、ABIN928294、30-552、ABIN2463297、ABIN19999041、11655-r001、ABIN749888、bs-2737r、ABIN1999045、11655-rp02、ABIN293207、ABIN2387613、t8282-40、ABIN4249314、nbp1-70737-20ul及びBD563661から選択される、［162］から［171］のいずれかに記載の抗TREML2抗体コンジュゲート。
［１８１］妊娠中の対象から得られた母体試料から胎児細胞試料を調製する方法であって、
(a)胎児細胞及び母体細胞を含む母体試料を、第1の抗体コンジュゲートと接触させる工程であって、第1の抗体コンジュゲートが(i)第1の抗体及び(ii)磁性コロイド粒子を含み、第1の抗体が磁性コロイド粒子にコンジュゲートしている、工程、並びに
(b)母体試料を磁場にさらすことにより、第1の抗体コンジュゲートに結合した細胞を単離し、それによって胎児細胞試料を調製する工程
を含む方法。
［１８２］磁性コロイド粒子が200nm未満である、［181］に記載の方法。
［１８３］磁性コロイド粒子が約80～200nmの間である、［181］に記載の方法
［１８４］磁性コロイド粒子が約90～150nmの間である、［181］に記載の方法。
［１８５］磁性コロイド粒子が、少なくとも50%の磁気質量を有する、［181］から［184］のいずれかに記載の方法。
［１８６］磁性コロイド粒子が、少なくとも60%の磁気質量を有する、［185］に記載の方法。
［１８７］磁性コロイド粒子が、70%～90%の間の磁気質量を有する、［185］に記載の方法。
［１８８］磁性コロイド粒子が、コーティング分子で囲まれた、超常磁性体の結晶コアを含む、［181］から［187］のいずれかに記載の方法。
［１８９］磁性コロイド粒子が磁性流体磁性粒子である、［181］から［188］のいずれかに記載の方法。
［１９０］磁性コロイド粒子が更に、ビオチン-ストレプトアビジン、抗原-抗体、受容体-ホルモン、受容体-リガンド、アゴニスト-アンタゴニスト、レクチン-炭水化物、プロテインA-抗体Fc、並びにアビジン-ビオチン、ビオチン類似体-アビジン、デスチオビオチン-ストレプトアビジン、デスチオビオチン-アビジン、イミノビオチン-ストレプトアビジン、及びイミノビオチン-アビジンを含む群から選択される特異的結合対の一員を1つ含む、第1の外因性凝集増強因子(EAEF)にコンジュゲートしている、［181］から［189］のいずれかに記載の方法。
［１９１］更に、母体試料に、前記特異的結合対の他方の一員を含む第2のEAEFを添加する工程を含む、［190］に記載の方法。
［１９２］第1の抗体が抗TREML2抗体である、［181］から［191］のいずれかに記載の方法。
［１９３］第1の抗体が抗CD71抗体である、［181］から［191］のいずれかに記載の方法。
［１９４］第1の抗体が、EpCAM及びCD105から選択されるタンパク質に結合する、［181］から［191］のいずれかに記載の方法。
［１９５］胎児細胞試料を調製する工程が更に、母体試料から単離された細胞を、第2の抗体と接触させる工程を含む、［194］に記載の方法。
［１９６］第2の抗体が標識にコンジュゲートしている、［195］に記載の方法。
［１９７］標識が蛍光標識である、［196］に記載の方法。
［１９８］胎児細胞試料を調製する工程が更に、第2の抗体に結合した細胞を単離する工程を含む、［197］に記載の方法。
［１９９］第2の抗体に結合した細胞を単離する工程が、免疫蛍光技術に基づく、［198］に記載の方法。
［２００］第2の抗体に結合した細胞を単離する工程を、蛍光活性化セルソーティング(FACS)により行う、［199］に記載の方法。
［２０１］第2の抗体に結合した細胞を単離する工程を、DEPArrayにより行う、［199］に記載の方法。
［２０２］TREML2タンパク質に結合する抗体、又はTREML2タンパク質に結合する抗原結合性フラグメントが、(i)～(vi)から選択されるCDRの2つ、3つ、4つ、5つ又は6つを含む、［26］に記載の方法。
［２０３］配列番号6～11のいずれかが独立に、1つ以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を含む、［26］に記載の方法。
［２０４］磁性コロイド粒子が200nm未満である、［4］、［5］、［30］、［31］、［90］、［91］、［96］、［97］、［118］及び［119］のいずれかに記載の方法。
［２０５］磁性コロイド粒子が約80～200nmの間である、［4］、［5］、［30］、［31］、［90］、［91］、［96］、［97］、［118］及び［119］のいずれかに記載の方法。
［２０６］磁性コロイド粒子が約90～150nmの間である、［4］、［5］、［30］、［31］、［90］、［91］、［96］、［97］、［118］及び［119］のいずれかに記載の方法。
［２０７］磁性コロイド粒子が、少なくとも50%の磁気質量を有する、［4］、［5］、［30］、［31］、［90］、［91］、［96］、［97］、［118］及び［119］のいずれかに記載の方法。
［２０８］磁性コロイド粒子が、少なくとも60%の磁気質量を有する、［4］、［5］、［30］、［31］、［90］、［91］、［96］、［97］、［118］及び［119］のいずれかに記載の方法。
［２０９］磁性コロイド粒子が、70%～90%の間の磁気質量を有する、［4］、［5］、［30］、［31］、［90］、［91］、［96］、［97］、［118］及び［119］のいずれかに記載の方法。
［２１０］磁性コロイド粒子が、コーティング分子で囲まれた、超常磁性体の結晶コアを含む、［4］、［5］、［30］、［31］、［90］、［91］、［96］、［97］、［118］及び［119］のいずれかに記載の方法。
［２１１］抗TREML2抗体が、sc-109096、ARP49877#P050、OACA04996、AF3259、MA5-30973、PA5-47471、ABIN634968、ABIN928294、30-552、ABIN2463297、ABIN19999041、11655-r001、ABIN749888、bs-2737r、ABIN1999045、11655-rp02、ABIN293207、ABIN2387613、t8282-40、ABIN4249314、nbp1-70737-20ul及びBD563661から選択される、［1］から［25］のいずれかに記載の方法。
［２１２］妊娠中の対象からの試料中の胎児細胞を検出する方法であって、
(a)複数の細胞を含む試料を、磁性コロイド粒子に結合した第1の抗体を含む第1の抗体コンジュゲートと接触させる工程、
(b)試料を磁場にさらすことにより、第1の抗体に結合した細胞を単離し、それによって濃縮試料を生成する工程、
(c)濃縮試料を、胎児細胞の表面上のマーカーに結合する第2の抗体と接触させる工程、及び
(d)第2の抗体に結合した細胞を、胎児細胞と同定する工程
を含む方法。
［２１３］胎児細胞が胎児有核赤血球(fnRBC)である、［212］に記載の方法。
［２１４］磁性コロイド粒子が磁性流体磁性粒子である、［212］又は［213］に記載の方法。
［２１５］磁性コロイド粒子が200nm未満である、［212］から［214］のいずれかに記載の方法。
［２１６］磁性コロイド粒子が約80～200nmの間である、［212］から［214］のいずれかに記載の方法。
［２１７］磁性コロイド粒子が約90～150nmの間である、［212］から［214］のいずれかに記載の方法。
［２１８］磁性コロイド粒子が、少なくとも50%の磁気質量を有する、［212］から［217］のいずれかに記載の方法。
［２１９］磁性コロイド粒子が、少なくとも60%の磁気質量を有する、［212］から［217］のいずれかに記載の方法。
［２２０］磁性コロイド粒子が、70%～90%の間の磁気質量を有する、［212］から［217］のいずれかに記載の方法。
［２２１］磁性コロイド粒子が、コーティング分子で囲まれた、超常磁性体の結晶コアを含む、［212］から［220］のいずれかに記載の方法。
［２２２］磁性粒子が、ビオチン-ストレプトアビジン、抗原-抗体、受容体-ホルモン、受容体-リガンド、アゴニスト-アンタゴニスト、レクチン-炭水化物、プロテインA-抗体Fc、並びにアビジン-ビオチン、ビオチン類似体-アビジン、デスチオビオチン-ストレプトアビジン、デスチオビオチン-アビジン、イミノビオチン-ストレプトアビジン、及びイミノビオチン-アビジンを含む群から選択される特異的結合対の一員を1つ含む、第1の外因性凝集増強因子(EAEF)にカップリングしている、［212］から［221］のいずれかに記載の方法。
［２２３］工程(a)が、磁性粒子の凝集を誘導するために、前記特異的結合対の他方の一員を含む第2のEAEFを添加する工程を含む、［222］に記載の方法。
［２２４］工程(b)が、濃縮試料中での磁性粒子の凝集を反転させるために、前記特異的結合対の一員を濃縮試料に添加する工程を含む、［223］に記載の方法。
［２２５］工程(a)の前に更に、還元剤、免疫複合体、キレート剤、及びジアミノブタンからなる群から選択される少なくとも1つの凝集阻害剤を試料に添加する工程を含む、［212］から［224］のいずれかに記載の方法。
［２２６］凝集阻害剤がキレート剤である、［225］に記載の方法。
［２２７］キレート剤がEDTAである、［226］に記載の方法。
［２２８］第2の抗体が、TREML2タンパク質に結合する抗体であるか、又はTREML2タンパク質に結合する抗原結合性フラグメントを含む、［212］から［227］のいずれかに記載の方法。
［２２９］工程(d)の前に更に、単一胎児細胞を単離する工程を含む、［228］に記載の方法。
［２３０］単一胎児細胞を単離する工程を、第2の抗体に結合した単一胎児細胞を単離する工程により行う、［229］に記載の方法。
［２３１］第2の抗体が標識にコンジュゲートしている、［230］に記載の方法。
［２３２］標識が蛍光標識である、［231］に記載の方法。
［２３３］単一胎児細胞を単離する工程が、免疫蛍光技術に基づく、［232］に記載の方法。
［２３４］単一胎児細胞を単離する工程を、蛍光活性化セルソーティング(FACS)により行う、［233］に記載の方法。
［２３５］単一胎児細胞を単離する工程を、DEPArrayにより行う、［233］に記載の方法。
［２３６］工程(d)が、配列解析を行う工程を含む、［212］から［233］のいずれかに記載の方法。
［２３７］配列解析が、ショートタンデムリピート(STR)解析を含む、［236］に記載の方法。
［２３８］更に、胎児細胞を解析する工程を含む、［212］から［237］のいずれかに記載の方法。
［２３９］胎児細胞を解析する工程が、ゲノム解析又は遺伝的解析を行う工程を含む、［238］に記載の方法。
［２４０］遺伝的解析を行う工程が、胎児細胞中の1つ以上の遺伝的異常の存在又は不存在を検出する工程を含む、［239］に記載の方法。
［２４１］第1の抗体が、TREML2タンパク質に結合する抗体であるか、又はTREML2タンパク質に結合する抗原結合性フラグメントを含む、［212］から［240］のいずれかに記載の方法。
［２４２］TREML2タンパク質に結合する抗体、又はTREML2タンパク質に結合する抗原結合性フラグメントが、
(i)配列番号6のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(HCVR)相補性決定領域(CDR)1、
(ii)配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVR CDR2、
(iii)配列番号8のアミノ酸配列を含むHCVR CDR3、
(iv)配列番号9のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(LCVR)CDR1、
(v)配列番号10のアミノ酸配列を含むLCVR CDR2、及び
(vi)配列番号11のアミノ酸配列を含むLCVR CDR3
から選択される1つ以上のCDRを含む、［228］から［235］及び請求項241のいずれか一項に記載の方法。
［２４３］TREML2タンパク質に結合する抗体、又はTREML2タンパク質に結合する抗原結合性フラグメントが、(i)～(vi)から選択されるCDRの2つ、3つ、4つ、5つ又は6つを含む、［242］に記載の方法。
［２４４］配列番号6～11のいずれかが独立に、1つ以上のアミノ酸の置換、付加又は欠失を含む、［242］又は［243］に記載の方法。
［２４５］TREML2タンパク質に結合する抗体が、sc-109096、ARP49877#P050、OACA04996、AF3259、MA5-30973、PA5-47471、ABIN634968、ABIN928294、30-552、ABIN2463297、ABIN19999041、11655-r001、ABIN749888、bs-2737r、ABIN1999045、11655-rp02、ABIN293207、ABIN2387613、t8282-40、ABIN4249314、nbp1-70737-20ul及びBD563661から選択される、請求228から235及び［241］のいずれかに記載の方法。
In some embodiments, kits disclosed herein further comprise one or more aggregation inhibitors. In some embodiments, the aggregation inhibitor is selected from the group consisting of reducing agents, immunoconjugates, chelating agents, and diaminobutanes. In some embodiments, the aggregation inhibitor is a chelating agent. In some embodiments, the chelating agent is EDTA. The reducing agent can be mercaptoethanesulfonic acid. The aggregation inhibitor can be bovine serum albumin (BSA).
The invention includes, for example, the following embodiments:
[1] A method of detecting fetal cells in a sample from a pregnant subject, comprising:
(a) contacting a sample comprising a plurality of cells with a first antibody;
(b) isolating cells that bind the first antibody to produce an enriched sample;
(c) contacting the concentrated sample with a second antibody; and
(d) identifying the cells bound to the second antibody as fetal cells;
the first antibody or the second antibody is
(i) an antibody that binds to trigger receptor-like 2 (TREML2) protein expressed on myeloid cells, or
(ii) a method comprising an antigen-binding fragment that binds to the TREML2 protein;
[2] The method of [1], wherein the fetal cells are fetal nucleated red blood cells (fnRBC).
[3] The method of [1] or [2], wherein the first antibody is conjugated to one or more magnetic particles.
[4] The method of [3], wherein the magnetic particles are magnetic colloid particles.
[5] The method of [4], wherein the magnetic colloidal particles are ferrofluid magnetic particles.
[6] The method according to any one of [3] to [5], wherein step (b) includes exposing the sample to a magnetic field.
[7] Magnetic particles are biotin-streptavidin, antigen-antibody, receptor-hormone, receptor-ligand, agonist-antagonist, lectin-carbohydrate, protein A-antibody Fc, and specific binding selected from the group comprising avidin-biotin, biotin analogue-avidin, desthiobiotin-streptavidin, desthiobiotin-avidin, iminobiotin-streptavidin, and iminobiotin-avidin The method of [6], coupled to a first exogenous aggregation enhancing factor (EAEF) comprising one member of the pair.
[8] The method of [7], wherein step (a) comprises adding a second EAEF containing the other member of the specific binding pair to induce aggregation of the magnetic particles.
[9] The method of [8], wherein step (b) comprises adding a member of said specific binding pair to the enriched sample to reverse aggregation of magnetic particles in the enriched sample.
[10] The method according to any one of [1] to [9], further comprising the step of adding at least one aggregation inhibitor selected from the group consisting of a reducing agent, an immunoconjugate, a chelating agent, and diaminobutane to the sample prior to step (a).
[11] The method of [10], wherein the aggregation inhibitor is a chelating agent that is EDTA.
[12] The method of any one of [1] to [11], wherein the second antibody is an antibody that binds to TREML2 protein or comprises an antigen-binding fragment that binds to TREML2 protein.
[13] The method of [12], further comprising the step of isolating a single fetal cell prior to step (d).
[14] The method of [13], wherein the step of isolating a single fetal cell is performed by isolating a single fetal cell bound to the second antibody.
[15] The method of [14], wherein the second antibody is conjugated to a label.
[16] The method of [15], wherein the label is a fluorescent label.
[17] The method of [16], wherein the step of isolating single fetal cells is based on immunofluorescence technology.
[18] The method of [17], wherein the step of isolating single fetal cells is performed by fluorescence-activated cell sorting (FACS).
[19] The method of [17], wherein the step of isolating a single fetal cell is performed by DEPArray.
[20] The method according to any one of [1] to [19], wherein step (d) comprises the step of performing sequence analysis.
[21] The method of [20], wherein the sequence analysis includes short tandem repeat (STR) analysis.
[22] The method according to any one of [1] to [21], further comprising the step of analyzing fetal cells.
[23] The method of [22], wherein the fetal cell analysis comprises the step of performing genomic analysis or genetic analysis.
[24] The method of [23], wherein conducting genetic analysis comprises detecting the presence or absence of one or more genetic abnormalities in fetal cells.
[25] The method of any one of [1] to [24], wherein the first antibody is an antibody that binds to TREML2 protein or comprises an antigen-binding fragment that binds to TREML2 protein.
[26] an antibody that binds to TREML2 protein or an antigen-binding fragment that binds to TREML2 protein,
(i) a heavy chain variable region (HCVR) complementarity determining region (CDR) 1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:6;
(ii) an HCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:7;
(iii) an HCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:8;
(iv) a light chain variable region (LCVR) CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:9;
(v) an LCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and
(vi) LCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
The method of any of [1] to [25], comprising one or more CDRs selected from.
[27] A method of detecting fetal cells in a sample from a pregnant subject, comprising:
(a) contacting a sample comprising a plurality of cells with a magnetic reagent comprising magnetic particles conjugated to a first antibody that binds to a protein selected from EpCAM, CD105 and CD71;
(b) contacting the sample with an anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof, and
(c) identifying the cells bound to the anti-TREML2 antibody as fetal cells
method including.
[28] The method of [27], further comprising, prior to step (c), isolating cells that bind to the first antibody.
[29] The method of [28], wherein isolating the cells comprises subjecting the sample to a magnetic field to enrich the sample containing cells that bound to the first antibody.
[30] The method according to any one of [27] to [29], wherein the magnetic particles are magnetic colloid particles.
[31] The method of [30], wherein the magnetic colloid particles are ferrofluid magnetic particles.
[32] Specific magnetic particles further selected from the group comprising biotin-streptavidin, antigen-antibody, receptor-hormone, receptor-ligand, agonist-antagonist, lectin-carbohydrate, protein A-antibody Fc, and avidin-biotin, biotin analog-avidin, desthiobiotin-streptavidin, desthiobiotin-avidin, iminobiotin-streptavidin, and iminobiotin-avidin The method of any of [27] to [31], wherein the method is coupled to a first exogenous aggregation enhancing factor (EAEF) comprising one member of a binding pair.
[33] The method of [32], comprising adding, during step (a), a second EAEF comprising the other member of the specific binding pair to induce aggregation of the particles.
[34] The method of [33], further comprising adding a member of a specific binding pair to said sample to reverse aggregation of the enriched sample, thereby facilitating cell identification.
[35] The method according to any one of [27] to [34], further comprising the step of adding at least one aggregation inhibitor selected from the group consisting of a reducing agent, an immunoconjugate, a chelating agent, and diaminobutane to the sample prior to step (a).
[36] The method of [35], wherein the aggregation inhibitor is a chelating agent.
[37] The method of [36], wherein the chelating agent is EDTA.
[38] The method of any one of [27] to [37], further comprising the step of isolating cells using an anti-TREML2 antibody or a second antibody prior to step (c).
[39] The method of [38], wherein the second antibody is selected from an anti-cytokeratin antibody and an anti-HLAG antibody.
[40] The method of [38] or [39], wherein the anti-TREML2 antibody or second antibody is conjugated to a label.
[41] The method of [40], wherein the label is a fluorescent label.
[42] The method of [41], wherein the step of isolating the cells is based on immunofluorescence technology.
[43] The method of [42], wherein the step of isolating cells is performed by fluorescence-activated cell sorting (FACS).
[44] The method of [41], wherein the step of isolating the cells is performed using DEPArray.
[45] The method of any one of [27] to [44], wherein the step of identifying cells comprises the step of performing sequence analysis.
[46] The method of [45], wherein the sequence analysis comprises short tandem repeat (STR) analysis.
[47] The method according to any one of [27] to [46], further comprising the step of analyzing fetal cells.
[48] The method of [47], wherein the step of analyzing fetal cells comprises the step of performing genomic analysis or genetic analysis.
[49] The method of [48], wherein conducting a genetic analysis comprises detecting the presence or absence of one or more genetic abnormalities in fetal cells.
[50] The method of any one of [27] to [49], wherein the fetal cells are fetal erythroblasts or fetal trophoblasts.
[51] an anti-TREML2 antibody or an antigen-binding fragment thereof,
(i) a heavy chain variable region (HCVR) CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:6;
(ii) an HCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:7;
(iii) an HCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:8;
(iv) a light chain variable region (LCVR) CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:9;
(v) an LCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and
(vi) LCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
The method of any of [27] to [50], comprising one or more complementarity determining regions (CDRs) selected from
[52] The method of [51], wherein any one of SEQ ID NOS: 6-11 independently comprises one or more amino acid substitutions, additions or deletions.
[53] The anti-TREML2 antibody is sc-109096, ARP49877#P050, OACA04996, AF3259, MA5-30973, PA5-47471, ABIN634968, ABIN928294, 30-552, ABIN2463297, ABIN19999041, 11655-r001, The method of any of [27] to [50], selected from ABIN749888, bs-2737r, ABIN1999045, 11655-rp02, ABIN293207, ABIN2387613, t8282-40, ABIN4249314, nbp1-70737-20ul and BD563661.
[54] A kit comprising (a) an antibody (anti-TREML2 antibody) that binds to trigger receptor-like 2 (TREML2) protein expressed on bone marrow cells or an antigen-binding fragment thereof, and (b) a magnetic reagent comprising magnetic colloid particles.
[55] The anti-TREML2 antibody is sc-109096, ARP49877#P050, OACA04996, AF3259, MA5-30973, PA5-47471, ABIN634968, ABIN928294, 30-552, ABIN2463297, ABIN19999041, 11655-r001, The kit of [54], selected from ABIN749888, bs-2737r, ABIN1999045, 11655-rp02, ABIN293207, ABIN2387613, t8282-40, ABIN4249314, nbp1-70737-20ul and BD563661.
[56] The anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof is
(a) a heavy chain variable region (HCVR) CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:6;
(b) an HCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:7;
(c) an HCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:8;
(d) a light chain variable region (LCVR) CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:9;
(e) an LCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and
(f) LCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
The kit of [54], comprising one or more complementarity determining regions (CDRs) selected from
[57] The kit of [56], wherein any one of SEQ ID NOS: 6-11 independently comprises one or more amino acid substitutions, additions or deletions.
[58] The kit of any one of [54] to [57], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof is conjugated to a label to generate a conjugated antibody.
[59] The kit of [58], wherein the label is selected from phycoerythrin (PE), allophycocyanin (APC), horseradish peroxidase (HRP), and biotin.
[60] The kit of any one of [54] to [59], wherein the size of the magnetic colloidal particles is less than 200 nm.
[61] The kit of [54] to [60], wherein the magnetic colloid particles are magnetic fluid particles.
[62] The kit of any one of [54] to [61], wherein the magnetic colloid particles are conjugated to antibodies or antigen-binding fragments thereof.
[63] The kit of [62], wherein the antibody is an anti-TREML2 antibody.
[64] an anti-TREML2 antibody or an antigen-binding fragment thereof,
(a) HCVR CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:6;
(b) an HCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:7;
(c) an HCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:8;
(d) a LCVR CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:9;
(e) an LCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and
(f) LCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
The kit of [63], comprising one or more CDRs selected from
[65] The kit of [65], wherein any one of SEQ ID NOs: 6-11 independently comprises one or more amino acid substitutions, additions or deletions.
[66] The kit of any one of [54] to [65], further comprising an inhibitor selected from the group consisting of reducing agents, immunoconjugates, chelating agents, and diaminobutane.
[67] The kit of [66], wherein the chelating agent is EDTA.
[68] Additionally, a specific binding pair selected from the group comprising biotin-streptavidin, antigen-antibody, receptor-hormone, receptor-ligand, agonist-antagonist, lectin-carbohydrate, protein A-antibody Fc, and avidin-biotin, biotin analogue-avidin, desthiobiotin-streptavidin, desthiobiotin-avidin, iminobiotin-streptavidin, and iminobiotin-avidin. The kit of any of [54] to [67], comprising an exogenous aggregation-enhancing factor (EAEF), which comprises one member of
[69] A kit comprising (a) a first antibody bound to magnetic colloid particles capable of binding to a protein expressed on the surface of fetal cells, and (b) an anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof.
[70] The kit of [65], wherein the first antibody binds to a protein selected from EpCAM, CD105 and CD71.
[71] The kit of [69] or [27], wherein the magnetic colloid particles are magnetic fluid particles.
[72] an anti-TREML2 antibody or an antigen-binding fragment thereof,
(a) HCVR CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:6;
(b) an HCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:7;
(c) an HCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:8;
(d) a LCVR CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:9;
(e) an LCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and
(f) LCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
The kit of any of [69] to [71], comprising one or more CDRs selected from
[73] The kit of [72], wherein any one of SEQ ID NOs: 6-11 independently comprises one or more amino acid substitutions, additions or deletions.
[74] The kit of any one of [69] to [73], further comprising an inhibitor selected from the group consisting of a reducing agent, an immunoconjugate, a chelating agent, and diaminobutane.
[75] The kit of [74], wherein the chelating agent is EDTA.
[76] Additionally, a specific binding pair selected from the group comprising biotin-streptavidin, antigen-antibody, receptor-hormone, receptor-ligand, agonist-antagonist, lectin-carbohydrate, protein A-antibody Fc, and avidin-biotin, biotin analogue-avidin, desthiobiotin-streptavidin, desthiobiotin-avidin, iminobiotin-streptavidin, and iminobiotin-avidin. The kit of any of [69] to [75], comprising an exogenous aggregation enhancing factor (EAEF) comprising one member of
[77] A cell-based fetal genetic testing method comprising:
(a) contacting a sample comprising a plurality of cells obtained from a pregnant subject with an anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof;
(b) isolating cells that bind to the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof;
(c) analyzing one or more nucleic acid molecules from the cell that bound to the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof; and
(d) generating a report based on the analysis of one or more nucleic acid molecules, wherein the report provides the likelihood of a fetus having one or more genetic abnormalities;
method including.
[78] The method of [77], wherein the cell bound to the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof is a fetal cell.
[79] The method of [78], wherein the fetal cells are fetal erythroblasts.
[80] The method of [78], wherein the fetal cells are fetal trophoblast cells.
[81] The method of any of [77] to [80], wherein analyzing the one or more nucleic acid molecules comprises performing karyotyping.
[82] The method of any of [77] to [80], wherein analyzing the one or more nucleic acid molecules comprises performing sequence analysis.
[83] The method of [82], wherein the sequence analysis comprises short tandem repeat (STR) analysis.
[84] The method of any of [77] to [83], wherein the one or more genetic abnormalities are selected from trisomies, sex chromosome abnormalities and structural abnormalities.
[85] The method of [84], wherein the trisomy is selected from trisomy 3, trisomy 4, trisomy 6, trisomy 7, trisomy 8, trisomy 9, trisomy 10, trisomy 11, trisomy 12, trisomy 13, trisomy 16, trisomy 17, trisomy 18, trisomy 20, trisomy 21 and trisomy 22.
[86] The method of [85], wherein the sex chromosome abnormality is selected from monosomy X, triple X syndrome and Klinefelter's syndrome.
[87] The method of [86], wherein the structural abnormality is copy number variation (CNV).
[88] The method of [87], wherein the structural abnormality is CNV deletion or CNV duplication.
[89] The method of any one of [77] to [88], wherein the anti-TREML2 antibody is conjugated to magnetic particles.
[90] The method of [89], wherein the magnetic particles are magnetic colloid particles.
[91] The method of [90], wherein the magnetic colloid particles are ferrofluid magnetic particles.
[92] The method of any of [89] to [91], wherein step (b) comprises exposing the sample to a magnetic field.
[93] The method of any of [77] to [88], further comprising, prior to step (a), contacting the sample with a first antibody that binds to a protein selected from EpCAM, CD105 and CD71.
[94] The method of [93], further comprising, prior to step (a), isolating cells that bind to the first antibody.
[95] The method of [93] or [94], wherein the first antibody is conjugated to a magnetic particle.
[96] The method of [95], wherein the magnetic particles are magnetic colloid particles.
[97] The method of [96], wherein the magnetic colloid particles are ferrofluid magnetic particles.
[98] The method of any of [95] to [97], wherein isolating cells that bind to the first antibody comprises exposing the sample to a magnetic field.
[99] The method of any one of [77]-[88] and claims 93-98, wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof is conjugated to a label.
[100] The method of [99], wherein the label is a fluorescent label.
[101] The method of [100], wherein the step of isolating cells that bind to the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof is based on immunofluorescence technology.
[102] The method of [101], wherein the step of isolating cells that bind to the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof is performed by fluorescence-activated cell sorting (FACS).
[103] The method of [101], wherein the step of isolating cells that bind to the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof is performed using DEPArray.
[104] The method of any one of [77] to [92], further comprising the step of contacting the cell bound to the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof with a second antibody or antigen-binding fragment thereof.
[105] The method of [104], wherein the second antibody is an anti-TREML2 antibody or an antigen-binding fragment thereof.
[106] The method of [104] or [105], wherein the second antibody is conjugated to a label.
[107] The method of [106], wherein the label is a fluorescent label.
[108] The method of [107], further comprising isolating cells that bind to the second antibody or antigen-binding fragment thereof.
[109] The method of [108], wherein isolating cells that bind to the second antibody or antigen-binding fragment thereof is based on immunofluorescence techniques.
[110] The method of [109], wherein the step of isolating cells that bind to the second antibody or antigen-binding fragment thereof is performed by fluorescence-activated cell sorting (FACS).
[111] The method of [109], wherein the step of isolating cells that bind to the second antibody or antigen-binding fragment thereof is performed by DEPArray.
[112] The anti-TREML2 antibody is , ABIN749888, bs-2737r, ABIN1999045, 11655-rp02, ABIN293207, ABIN2387613, t8282-40, ABIN4249314, nbp1-70737-20ul and BD563661.
[113] an anti-TREML2 antibody or an antigen-binding fragment thereof,
(a) HCVR CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:6;
(b) an HCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:7;
(c) an HCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:8;
(d) a LCVR CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:9;
(e) an LCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and
(f) LCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
The method of any of [77] to [111], comprising one or more CDRs selected from
[114] The method of [113], wherein any one of SEQ ID NOS: 6-11 independently comprises one or more amino acid substitutions, additions or deletions.
[115] A method of detecting fetal cells in a sample from a pregnant subject, comprising:
(a) contacting a sample comprising a plurality of cells with a first antibody, wherein the first antibody binds to trigger receptor-like 2 (TREML2) protein expressed on myeloid cells (anti-TREML2 antibody) or is an antigen-binding fragment thereof; and
(b) identifying the cells bound to the first antibody as fetal cells;
method including.
[116] The method of [115], wherein the fetal cells are fetal nucleated red blood cells (fnRBC).
[117] The method of [115] or [116], wherein the first antibody is conjugated to one or more magnetic particles.
[118] The method of [117], wherein the magnetic particles are magnetic colloid particles.
[119] The method of [118], wherein the magnetic colloid particles are ferrofluid magnetic particles.
[120] The method according to any one of [117] to [119], further comprising exposing the sample to a magnetic field.
[121] Specific magnetic particles selected from the group comprising biotin-streptavidin, antigen-antibody, receptor-hormone, receptor-ligand, agonist-antagonist, lectin-carbohydrate, protein A-antibody Fc, and avidin-biotin, biotin analog-avidin, desthiobiotin-streptavidin, desthiobiotin-avidin, iminobiotin-streptavidin, and iminobiotin-avidin The method of any of [117] to [120], wherein the method is coupled to a first exogenous aggregation enhancing factor (EAEF) comprising one member of a binding pair.
[122] The method of [121], further comprising, prior to step (b), adding a second EAEF containing the other member of the specific binding pair to induce aggregation of the magnetic particles.
[123] The method of [122], further comprising isolating cells that bind to the first antibody to generate an enriched sample.
[124] The method of [123], further comprising adding a third EAEF capable of binding to the first EAEF or the second EAEF to the enriched sample to reverse aggregation of the magnetic particles in the enriched sample.
[125] The method of [124], wherein the third EAEF is a member of said specific binding pair.
[126] The method of any one of [115] to [125], further comprising, before step (a), adding to the sample at least one aggregation inhibitor selected from the group consisting of a reducing agent, an immunoconjugate, a chelating agent, and diaminobutane.
[127] The method of [126], wherein the aggregation inhibitor is a chelating agent.
[128] The method of [127], wherein the chelating agent is EDTA.
[129] The method of [115] or [116], wherein the first antibody is conjugated to a label.
[130] The method of [129], wherein the label is a fluorescent label.
[131] The method of [130], further comprising, prior to step (b), isolating the cells bound to the first antibody based on an immunofluorescence technique.
[132] The method of [131], wherein the step of isolating cells that bind to the first antibody is performed by fluorescence-activated cell sorting (FACS).
[133] The method of [131], wherein the step of isolating cells that bind to the first antibody is performed by DEPArray.
[134] The method of any one of [115] to [133], wherein step (b) comprises performing sequence analysis.
[135] The method of [134], wherein the sequence analysis comprises short tandem repeat (STR) analysis.
[136] The method of any one of [115] to [135], further comprising the step of analyzing fetal cells.
[137] The method of [136], wherein analyzing the fetal cells comprises performing genomic analysis or genetic analysis.
[138] The method of [137], wherein conducting a genetic analysis comprises detecting the presence or absence of one or more genetic abnormalities in the fetal cells.
[139] The first antibody or antigen-binding fragment thereof is
(a) HCVR CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:6;
(b) an HCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:7;
(c) an HCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:8;
(d) a LCVR CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:9;
(e) an LCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and
(f) LCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
The method of any of [115] to [138], comprising one or more CDRs selected from
[140] The method of [139], wherein any of SEQ ID NOs: 6-11 independently comprises one or more amino acid substitutions, additions or deletions.
[141] The first antibody is sc-109096, ARP49877#P050, OACA04996, AF3259, MA5-30973, PA5-47471, ABIN634968, ABIN928294, 30-552, ABIN2463297, ABIN19999041, 11655-r001, AB The method of any of [115] to [138], selected from IN749888, bs-2737r, ABIN1999045, 11655-rp02, ABIN293207, ABIN2387613, t8282-40, ABIN4249314, nbp1-70737-20ul and BD563661.
[142] (a) a HCVR CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:6;
(b) an HCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:7;
(c) an HCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:8;
(d) a LCVR CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:9;
(e) an LCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and
(f) LCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
An anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof comprising one or more CDRs selected from
[143] The anti-TREML2 antibody of [142], wherein any of SEQ ID NOS: 6-11 independently comprises one or more amino acid substitutions, additions or deletions.
[144] The anti-TREML2 antibody of [142] or [143], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises two or more CDRs selected from (a) to (f).
[145] The anti-TREML2 antibody of [142] or [143], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises three or more CDRs selected from (a) to (f).
[146] The anti-TREML2 antibody of [142] or [143], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises four or more CDRs selected from (a) to (f).
[147] The anti-TREML2 antibody of [142] or [143], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises 5 or more CDRs selected from (a) to (f).
[148] The anti-TREML2 antibody of [142] or [143], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises all of the CDRs (a) to (f).
[149] The anti-TREML2 antibody of any one of [142] to [148], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof is conjugated to a label.
[150] The anti-TREML2 antibody of [149], wherein the label is a fluorescent label.
[151] The anti-TREML2 antibody of any one of [142] to [148], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof is conjugated to magnetic particles.
[152] The anti-TREML2 antibody of [151], wherein the magnetic particles are magnetic colloid particles.
[153] The anti-TREML2 antibody of [152], wherein the magnetic colloidal particles are ferrofluid magnetic particles.
[154] The anti-TREML2 antibody of [152] or [153], wherein the magnetic colloid particles are less than 200 nm.
[155] The anti-TREML2 antibody of [152] or [153], wherein the magnetic colloid particles are between about 80 and 200 nm.
[156] The anti-TREML2 antibody of [152] or [153], wherein the magnetic colloidal particles are between about 90 and 150 nm.
[157] The anti-TREML2 antibody of any one of [152] to [156], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass of at least 50%.
[158] The anti-TREML2 antibody of [157], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass of at least 60%.
[159] The anti-TREML2 antibody of [157], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass between 70% and 90%.
[160] The anti-TREML2 antibody of any one of [152] to [159], wherein the magnetic colloidal particles comprise a superparamagnetic crystalline core surrounded by coating molecules.
[161] Specific magnetic particles selected from the group comprising biotin-streptavidin, antigen-antibody, receptor-hormone, receptor-ligand, agonist-antagonist, lectin-carbohydrate, protein A-antibody Fc, and avidin-biotin, biotin analog-avidin, desthiobiotin-streptavidin, desthiobiotin-avidin, iminobiotin-streptavidin, and iminobiotin-avidin the anti-TREML2 antibody of any of [151] to [160], which is coupled to a first exogenous aggregation enhancing factor (EAEF) comprising one member of a binding pair.
[162] An anti-TREML2 antibody conjugate comprising (a) an anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof, and (b) magnetic particles conjugated to the anti-TREML2 antibody.
[163] The anti-TREML2 antibody conjugate of [155], wherein the magnetic particles are magnetic colloid particles.
[164] The anti-TREML2 antibody conjugate of [156], wherein the magnetic colloidal particles are ferrofluid magnetic particles.
[165] The anti-TREML2 antibody conjugate of [163] or [164], wherein the magnetic colloid particles are less than 200 nm.
[166] The anti-TREML2 antibody conjugate of [163] or [164], wherein the magnetic colloidal particles are between about 80-200 nm.
[167] The anti-TREML2 antibody conjugate of [163] or [164], wherein the magnetic colloidal particles are between about 90-150 nm.
[168] The anti-TREML2 antibody conjugate of any of [163] to [167], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass of at least 50%.
[169] The anti-TREML2 antibody conjugate of [168], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass of at least 60%.
[170] The anti-TREML2 antibody conjugate of [169], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass between 70% and 90%.
[171] The anti-TREML2 antibody conjugate of any of [163] to [170], wherein the magnetic colloidal particle comprises a superparamagnetic crystalline core surrounded by coating molecules.
[172] Specific magnetic particles selected from the group comprising biotin-streptavidin, antigen-antibody, receptor-hormone, receptor-ligand, agonist-antagonist, lectin-carbohydrate, protein A-antibody Fc, and avidin-biotin, biotin analog-avidin, desthiobiotin-streptavidin, desthiobiotin-avidin, iminobiotin-streptavidin, and iminobiotin-avidin The anti-TREML2 antibody conjugate of any of [162] to [171], which is coupled to a first exogenous aggregation enhancing factor (EAEF) comprising one member of a binding pair.
[173] The anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof is
(a) HCVR CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:6;
(b) an HCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:7;
(c) an HCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:8;
(d) a LCVR CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:9;
(e) an LCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and
(f) LCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
The anti-TREML2 antibody conjugate of any of [162] to [171], comprising one or more CDRs selected from
[174] The anti-TREML2 antibody conjugate of [173], wherein any of SEQ ID NOs: 6-11 independently comprises one or more amino acid substitutions, additions or deletions.
[175] The anti-TREML2 antibody conjugate of [173] or [174], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises two or more CDRs selected from (a) to (f).
[176] The anti-TREML2 antibody conjugate of [173] or [174], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises three or more CDRs selected from (a) to (f).
[177] The anti-TREML2 antibody conjugate of [173] or [174], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises four or more CDRs selected from (a) to (f).
[178] The anti-TREML2 antibody conjugate of [173] or [174], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises 5 or more CDRs selected from (a) to (f).
[179] The anti-TREML2 antibody conjugate of [173] or [174], wherein the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof comprises all of the CDRs (a) to (f).
[180] The anti-TREML2 antibody is , ABIN749888, bs-2737r, ABIN1999045, 11655-rp02, ABIN293207, ABIN2387613, t8282-40, ABIN4249314, nbp1-70737-20ul and BD563661, the anti-TREML2 of any one of [162] to [171] antibody conjugate.
[181] A method of preparing a fetal cell sample from a maternal sample obtained from a pregnant subject, comprising:
(a) contacting a maternal sample comprising fetal and maternal cells with a first antibody conjugate, wherein the first antibody conjugate comprises (i) a first antibody and (ii) magnetic colloid particles, wherein the first antibody is conjugated to the magnetic colloid particles;
(b) exposing the maternal sample to a magnetic field to isolate cells that bind the first antibody conjugate, thereby preparing a fetal cell sample;
method including.
[182] The method of [181], wherein the magnetic colloid particles are less than 200 nm.
[183] The method of [181], wherein the magnetic colloid particles are between about 80 and 200 nm
[184] The method of [181], wherein the magnetic colloid particles are between about 90 and 150 nm.
[185] The method of any of [181] to [184], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass of at least 50%.
[186] The method of [185], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass of at least 60%.
[187] The method of [185], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass between 70% and 90%.
[188] The method of any of [181] to [187], wherein the magnetic colloidal particles comprise a crystalline core of superparamagnetic material surrounded by coating molecules.
[189] The method of any of [181] to [188], wherein the magnetic colloid particles are ferrofluid magnetic particles.
[190] from the group wherein the magnetic colloidal particles further comprise biotin-streptavidin, antigen-antibody, receptor-hormone, receptor-ligand, agonist-antagonist, lectin-carbohydrate, protein A-antibody Fc, and avidin-biotin, biotin analogue-avidin, desthiobiotin-streptavidin, desthiobiotin-avidin, iminobiotin-streptavidin, and iminobiotin-avidin The method of any of [181] to [189], wherein the method is conjugated to a first exogenous aggregation enhancing factor (EAEF) comprising one member of the selected specific binding pair.
[191] The method of [190], further comprising adding to the maternal sample a second EAEF comprising the other member of the specific binding pair.
[192] The method of any one of [181] to [191], wherein the first antibody is an anti-TREML2 antibody.
[193] The method of any of [181] to [191], wherein the first antibody is an anti-CD71 antibody.
[194] The method of any of [181] to [191], wherein the first antibody binds to a protein selected from EpCAM and CD105.
[195] The method of [194], wherein preparing the fetal cell sample further comprises contacting cells isolated from the maternal sample with a second antibody.
[196] The method of [195], wherein the second antibody is conjugated to a label.
[197] The method of [196], wherein the label is a fluorescent label.
[198] The method of [197], wherein preparing the fetal cell sample further comprises isolating cells that bind to the second antibody.
[199] The method of [198], wherein isolating cells that bind the second antibody is based on immunofluorescence techniques.
[200] The method of [199], wherein the step of isolating cells that bind to the second antibody is performed by fluorescence-activated cell sorting (FACS).
[201] The method of [199], wherein the step of isolating cells that bind to the second antibody is performed by DEPArray.
[202] The method of [26], wherein the antibody that binds to the TREML2 protein or the antigen-binding fragment that binds to the TREML2 protein comprises 2, 3, 4, 5 or 6 CDRs selected from (i) to (vi).
[203] The method of [26], wherein any of SEQ ID NOS: 6-11 independently comprises one or more amino acid substitutions, additions or deletions.
[204] The method of any one of [4], [5], [30], [31], [90], [91], [96], [97], [118] and [119], wherein the magnetic colloid particles are less than 200 nm.
[205] The method of any of [4], [5], [30], [31], [90], [91], [96], [97], [118] and [119], wherein the magnetic colloid particles are between about 80 and 200 nm.
[206] The method of any of [4], [5], [30], [31], [90], [91], [96], [97], [118] and [119], wherein the magnetic colloid particles are between about 90 and 150 nm.
[207] The method of any of [4], [5], [30], [31], [90], [91], [96], [97], [118] and [119], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass of at least 50%.
[208] The method of any of [4], [5], [30], [31], [90], [91], [96], [97], [118] and [119], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass of at least 60%.
[209] The method of any of [4], [5], [30], [31], [90], [91], [96], [97], [118] and [119], wherein the magnetic colloid particles have a magnetic mass between 70% and 90%.
[210] The method of any of [4], [5], [30], [31], [90], [91], [96], [97], [118] and [119], wherein the magnetic colloidal particles comprise a crystalline core of superparamagnetic material surrounded by coating molecules.
[211] The anti-TREML2 antibody is , ABIN749888, bs-2737r, ABIN1999045, 11655-rp02, ABIN293207, ABIN2387613, t8282-40, ABIN4249314, nbp1-70737-20ul and BD563661.
[212] A method of detecting fetal cells in a sample from a pregnant subject, comprising:
(a) contacting a sample comprising a plurality of cells with a first antibody conjugate comprising a first antibody bound to magnetic colloid particles;
(b) isolating cells that bind the first antibody by exposing the sample to a magnetic field, thereby producing an enriched sample;
(c) contacting the enriched sample with a second antibody that binds to a marker on the surface of fetal cells; and
(d) identifying the cells bound to the second antibody as fetal cells
method including.
[213] The method of [212], wherein the fetal cells are fetal nucleated red blood cells (fnRBC).
[214] The method of [212] or [213], wherein the magnetic colloid particles are ferrofluid magnetic particles.
[215] The method of any one of [212] to [214], wherein the magnetic colloid particles are less than 200 nm.
[216] The method of any of [212] to [214], wherein the magnetic colloid particles are between about 80-200 nm.
[217] The method of any of [212] to [214], wherein the magnetic colloidal particles are between about 90-150 nm.
[218] The method of any of [212] to [217], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass of at least 50%.
[219] The method of any of [212] to [217], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass of at least 60%.
[220] The method of any of [212] to [217], wherein the magnetic colloidal particles have a magnetic mass between 70% and 90%.
[221] The method of any of [212] to [220], wherein the magnetic colloidal particles comprise a crystalline core of superparamagnetic material surrounded by coating molecules.
[222] Specific magnetic particles selected from the group comprising biotin-streptavidin, antigen-antibody, receptor-hormone, receptor-ligand, agonist-antagonist, lectin-carbohydrate, protein A-antibody Fc, and avidin-biotin, biotin analog-avidin, desthiobiotin-streptavidin, desthiobiotin-avidin, iminobiotin-streptavidin, and iminobiotin-avidin The method of any of [212] to [221], wherein the method is coupled to a first exogenous aggregation enhancing factor (EAEF) comprising one member of a binding pair.
[223] The method of [222], wherein step (a) comprises adding a second EAEF comprising the other member of said specific binding pair to induce aggregation of the magnetic particles.
[224] The method of [223], wherein step (b) comprises adding a member of said specific binding pair to the enriched sample to reverse aggregation of magnetic particles in the enriched sample.
[225] The method of any one of [212] to [224], further comprising, prior to step (a), adding to the sample at least one aggregation inhibitor selected from the group consisting of a reducing agent, an immunoconjugate, a chelating agent, and diaminobutane.
[226] The method of [225], wherein the aggregation inhibitor is a chelating agent.
[227] The method of [226], wherein the chelating agent is EDTA.
[228] The method of any of [212] to [227], wherein the second antibody is an antibody that binds to TREML2 protein or comprises an antigen-binding fragment that binds to TREML2 protein.
[229] The method of [228], further comprising isolating a single fetal cell prior to step (d).
[230] The method of [229], wherein isolating a single fetal cell is performed by isolating a single fetal cell that binds to the second antibody.
[231] The method of [230], wherein the second antibody is conjugated to a label.
[232] The method of [231], wherein the label is a fluorescent label.
[233] The method of [232], wherein isolating single fetal cells is based on immunofluorescence technology.
[234] The method of [233], wherein the step of isolating single fetal cells is performed by fluorescence activated cell sorting (FACS).
[235] The method of [233], wherein the step of isolating single fetal cells is performed by DEPArray.
[236] The method of any one of [212] to [233], wherein step (d) comprises conducting sequence analysis.
[237] The method of [236], wherein the sequence analysis comprises short tandem repeat (STR) analysis.
[238] The method of any one of [212] to [237], further comprising the step of analyzing fetal cells.
[239] The method of [238], wherein analyzing the fetal cells comprises performing genomic or genetic analysis.
[240] The method of [239], wherein conducting a genetic analysis comprises detecting the presence or absence of one or more genetic abnormalities in the fetal cells.
[241] The method of any of [212] to [240], wherein the first antibody is an antibody that binds to TREML2 protein or comprises an antigen-binding fragment that binds to TREML2 protein.
[242] An antibody that binds to a TREML2 protein, or an antigen-binding fragment that binds to a TREML2 protein,
(i) a heavy chain variable region (HCVR) complementarity determining region (CDR) 1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:6;
(ii) an HCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:7;
(iii) an HCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:8;
(iv) a light chain variable region (LCVR) CDR1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:9;
(v) an LCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and
(vi) LCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
The method of any one of [228] to [235] and claim 241, comprising one or more CDRs selected from
[243] The method of [242], wherein the antibody that binds to the TREML2 protein or the antigen-binding fragment that binds to the TREML2 protein comprises 2, 3, 4, 5 or 6 CDRs selected from (i) to (vi).
[244] The method of [242] or [243], wherein any of SEQ ID NOs: 6-11 independently comprises one or more amino acid substitutions, additions or deletions.
[245] An antibody that binds to the TREML2 protein is 001, ABIN749888, bs-2737r, ABIN1999045, 11655-rp02, ABIN293207, ABIN2387613, t8282-40, ABIN4249314, nbp1-70737-20ul and BD563661. method.
Claims (36)
(a)複数の細胞を含む試料を、第1の抗体と接触させる工程、
(b)濃縮試料を生成するために、第1の抗体に結合した細胞を単離する工程、
(c)濃縮試料を、第2の抗体と接触させる工程、及び
(d)第2の抗体に結合した細胞を、胎児細胞と同定する工程を含み、
第1の抗体又は第2の抗体が、
(i)骨髄細胞上で発現するトリガー受容体様2(TREML2)タンパク質に結合する抗体である、又は
(ii)TREML2タンパク質に結合する抗原結合性フラグメントを含む、方法。 A method of detecting fetal cells in a sample from a pregnant subject, comprising:
(a) contacting a sample comprising a plurality of cells with a first antibody;
(b) isolating cells that bind the first antibody to produce an enriched sample;
(c) contacting the concentrated sample with a second antibody; and
(d) identifying the cells bound to the second antibody as fetal cells;
the first antibody or the second antibody is
(i) an antibody that binds to trigger receptor-like 2 (TREML2) protein expressed on myeloid cells, or
(ii) a method comprising an antigen-binding fragment that binds to the TREML2 protein;
以下を含む重鎖可変領域(HCVR)：
(i)配列番号6のアミノ酸配列を含むHCVR相補性決定領域(CDR)1、
(ii)配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVR CDR2、
(iii)配列番号8のアミノ酸配列を含むHCVR CDR3、及び／又は
以下を含む軽鎖可変領域(LCVR)：
(iv)配列番号9のアミノ酸配列を含むLCVR CDR1、
(v)配列番号10のアミノ酸配列を含むLCVR CDR2、及び
(vi)配列番号11のアミノ酸配列を含むLCVR CDR3
を含む、請求項1から26のいずれか一項に記載の方法。 An antibody that binds to TREML2 protein or an antigen-binding fragment that binds to TREML2 protein,
A heavy chain variable region (HCVR) containing:
(i) H CVR Complementarity Determining Region (CDR) 1 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:6,
(ii) an HCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:7;
(iii) HCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:8, and/or
A light chain variable region (LCVR) containing:
(iv) L CVR comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:9 CDR1,
(v) an LCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and
(vi) LCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
27. The method of any one of claims 1-26, comprising
(a)複数の細胞を含む試料を、EpCAM、CD105及びCD71から選択されるタンパク質に結合する第1の抗体にコンジュゲートした磁性粒子を含む磁性試薬と接触させる工程、
(b)試料を、抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントと接触させる工程、並びに
(c)抗TREML2抗体に結合した細胞を、胎児細胞と同定し、それにより胎児細胞を単離する工程
を含む方法。 A method of isolating fetal cells in a sample from a pregnant subject, comprising:
(a) contacting a sample comprising a plurality of cells with a magnetic reagent comprising magnetic particles conjugated to a first antibody that binds to a protein selected from EpCAM, CD105 and CD71;
(b) contacting the sample with an anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof, and
(c) identifying cells that bind to the anti-TREML2 antibody as fetal cells , thereby isolating the fetal cells .
(a)配列番号6のアミノ酸配列を含むHCVR CDR1、
(b)配列番号7のアミノ酸配列を含むHCVR CDR2、
(c)配列番号8のアミノ酸配列を含むHCVR CDR3、及び／又は
以下を含む軽鎖可変領域(LCVR)：
(d)配列番号9のアミノ酸配列を含むLCVR CDR1、
(e)配列番号10のアミノ酸配列を含むLCVR CDR2、及び
(f)配列番号11のアミノ酸配列を含むLCVR CDR3
を含む、抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメント。 A heavy chain variable region (HCVR) containing:
(a) H CVR comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:6 CDR1,
(b) an HCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:7;
(c) HCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:8, and/or
A light chain variable region (LCVR) containing:
(d) L CVR comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO:9 CDR1,
(e) an LCVR CDR2 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10, and
(f) LCVR CDR3 comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11
An anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof , comprising :
(a)胎児細胞及び母体細胞を含む母体試料を、第1の抗体コンジュゲートと接触させる工程であって、第1の抗体コンジュゲートが(i)第1の抗体及び(ii)磁性コロイド粒子を含み、第1の抗体が磁性コロイド粒子にコンジュゲートしている、工程、並びに
(b)母体試料を磁場にさらすことにより、第1の抗体コンジュゲートに結合した細胞を単離し、それによって胎児細胞試料を調製する工程
を含む方法。 A method of preparing a fetal cell sample from a maternal sample obtained from a pregnant subject, comprising:
(a) contacting a maternal sample comprising fetal and maternal cells with a first antibody conjugate, wherein the first antibody conjugate comprises (i) a first antibody and (ii) magnetic colloid particles, wherein the first antibody is conjugated to the magnetic colloid particles;
(b) exposing the maternal sample to a magnetic field to isolate cells that bind the first antibody conjugate, thereby preparing a fetal cell sample.
(a)妊娠中の対象から得られた、複数の細胞を含む試料を、抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントと接触させる工程、
(b)抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞を単離する工程、
(c)抗TREML2抗体又はその抗原結合性フラグメントに結合した細胞からの1つ以上の核酸分子を解析する工程、及び
(d)1つ以上の核酸分子の解析に基づいて報告を作成する工程であって、報告が1つ以上の遺伝的異常を有する胎児の可能性を提供する、工程
を含む方法。 A cell-based fetal genetic testing method comprising:
(a) contacting a sample comprising a plurality of cells obtained from a pregnant subject with an anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof;
(b) isolating cells that bind to the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof;
(c) analyzing one or more nucleic acid molecules from the cell that bound to the anti-TREML2 antibody or antigen-binding fragment thereof; and
(d) generating a report based on the analysis of the one or more nucleic acid molecules, wherein the report provides the likelihood of a fetus having one or more genetic abnormalities.
(a) 複数の細胞を含む試料を、骨髄細胞上で発現するトリガー受容体様2(TREML2)タンパク質に結合する第1の抗体(抗TREML2抗体)又はその抗原結合性フラグメントと接触させる工程、及び(a) contacting a sample comprising a plurality of cells with a first antibody (anti-TREML2 antibody) that binds to trigger receptor-like 2 (TREML2) protein expressed on myeloid cells, or an antigen-binding fragment thereof; and
(b)第1の抗体に結合した細胞を、胎児細胞と同定する工程(b) identifying the cells bound to the first antibody as fetal cells;
を含む方法。method including.
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