JPWO2020126593A5 - - Google Patents
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- 以下を含むポリヌクレオチドシーケンシング方法:
(a)ブロック化標識化ヌクレオチドを、テンプレートポリヌクレオチド鎖の少なくとも一部と相補的なコピーポリヌクレオチド鎖の中へ取り込むこと;
(b)前記ブロック化標識化ヌクレオチドを、第1のバッファー組成物の存在下で識別すること;(c)標識およびブロッキング部分を、コピー鎖の中へ取り込まれた前記ブロック化標識化ヌクレオチドから化学的に除去すること;および
(d)化学的に除去された標識およびブロッキング部分を、前記コピー鎖から、前記第1のバッファー組成物を含む洗浄溶液で洗い流すことであって、前記洗い流すことは、低減したエラー率またはフェージングの結果を生じる、洗い流すこと、 であって、前記第1のバッファー組成物は、酸化防止剤およびスカベンジャー化合物を含む、
ポリヌクレオチドシーケンシング方法。 - ステップ(a)~(d)を、前記テンプレートポリヌクレオチド鎖の前記一部の配列が決定されるまで繰り返すことをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記スカベンジャー化合物が、ジスルフィド部分またはアジド部分を含む、請求項1または2に記載の方法。
- 前記スカベンジャー化合物が、ジスルフィド部分を含む、請求項3に記載の方法。
- 前記スカベンジャー化合物が、リポ酸または3,3’-ジチオジプロピオン酸(DDPA)である、請求項3に記載の方法。
- 前記標識およびブロッキング部分をコピーポリヌクレオチド鎖の中へ取り込まれた前記ブロック化標識化ヌクレオチドから除去することが、前記コピー鎖をtris(ヒドロキシメチル)ホスフィンと接触させることを含む、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第1のバッファー組成物が、アスコルビン酸塩、アセトバニロン、および6-ヒドロキシ-2,5,7,8-テトラメチルクロマン-2-カルボン酸からなる群から選択される酸化防止剤を含む、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記テンプレートポリヌクレオチド鎖が、固体支持体と結合している、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。
- テンプレートポリヌクレオチドがフローセルと結合している、請求項8に記載の方法。
- 以下を含むポリヌクレオチドシーケンシング方法:
標識およびブロッキング部分を、テンプレートポリヌクレオチド鎖の少なくとも一部と相補的であるコピーポリヌクレオチド鎖の中へ取り込まれたブロック化標識化ヌクレオチドから除去すること;および
除去したラベルおよびブロッキング部分を、3,3’-ジチオジプロピオン酸(DDPA)を含む洗浄溶液でコピー鎖から洗い流すことであって、前記洗い流すことは、低減したエラー率またはフェージングの結果を生じる、洗い流すこと。 - 以下:
前記ブロック化標識化ヌクレオチドを化学的に除去する前に、コピー鎖の中へ取り込まれたブロック化標識化ヌクレオチドを識別すること、
をさらに含み、
前記ブロック化標識化ヌクレオチドの同一性を検出することが、DDPAを含むバッファー組成物の存在下で行われる、
請求項10に記載の方法。
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