JPWO2020080482A1 - A method for validating renal function test results based on the amount of cystatin C in blood - Google Patents

A method for validating renal function test results based on the amount of cystatin C in blood Download PDF

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真史 三田
真史 三田
池田 達彦
達彦 池田
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Abstract

本発明は、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法であって、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査を受けた対象の血液中のD−セリン量を測定する工程、D−セリン量と、所定の閾値とを比較する工程、及び、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定する工程、を含む、前記方法、並びに当該方法を実施する試料分析システム、及びプログラムを提供する。The present invention is a method for verifying the validity of renal function test results based on the amount of cystatin C in blood, and the amount of D-serine in the blood of a subject who has undergone a renal function test based on the amount of cystatin C in blood. The method, which comprises the step of measuring the amount of D-serine, the step of comparing the amount of D-serine with a predetermined threshold, and the step of determining the validity of the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in blood. Provided are a sample analysis system and a program for carrying out the method.

Description

本発明は、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法、当該方法を実施する試料分析システム、及びプログラムに関する。 The present invention relates to a method for validating renal function test results based on the amount of cystatin C in blood, a sample analysis system for carrying out the method, and a program.

腎機能を表す指標として糸球体濾過量(GFR)が用いられている。糸球体濾過量は、糸球体で血液から1分間に濾過される液量を表し、その国際標準測定法はイヌリンクリアランスである。しかしながら、イヌリンクリアランスは、2時間にわたるイヌリンの持続点滴、及び複数回にわたる採尿及び採血と、正確な測定が必要であり、被験者及び実施者の負担が大きい。このようなことから、国際標準測定法としては確立されているものの、各国における医療の諸事情から、実地診療が導入されず、代替マーカーによる糸球体濾過量の決定が行われていることもある。日本では、イヌリンクリアランスによるGFRの測定は2006年に検査として保険適用されたものの、限定された状況でのみ行われるにとどまっており、日常の臨床現場では、他の腎機能マーカーを用いた推算式が用いられている。このように、糸球体濾過量のゴールドスタンダードであるイヌリンクリアランスが使用されない弊害として、腎機能の正確な判定や、それにともなう腎臓病の早期発見が難しくなっているという問題がある。 Glomerular filtration rate (GFR) is used as an index representing renal function. The glomerular filtration rate represents the amount of fluid that is filtered from the blood by the glomerulus in one minute, and its international standard measurement method is inulin clearance. However, inulin clearance requires continuous infusion of inulin for 2 hours, multiple times of urine collection and blood collection, and accurate measurement, which imposes a heavy burden on the subject and the practitioner. For this reason, although it has been established as an international standard measurement method, due to various medical circumstances in each country, on-the-job medical care may not be introduced and the glomerular filtration rate may be determined using an alternative marker. .. In Japan, the measurement of GFR by inulin clearance was covered by insurance as a test in 2006, but it is only performed in limited situations, and in daily clinical practice, it is an estimation formula using other renal function markers. Is used. As described above, as an adverse effect of not using inulin clearance, which is the gold standard for glomerular filtration rate, there is a problem that it is difficult to accurately determine renal function and to detect renal disease at an early stage.

イヌリンクリアランスに代わる糸球体濾過量の決定方法として、イヌリン以外の物質のクリアランスに基づく方法、さらには血液中の腎機能マーカー値に基づく方法が開発されている。これらは、国際標準測定法であるイヌリンクリアランスに対する相関を調べることで、GFRの決定に用いられている。現在汎用されている腎機能マーカーであるシスタチンCは、体外からの物質の投与を必要としない点で優れており、年齢と性別情報を組み合わせた式により、推算糸球体濾過量(eGFR)が決定されている。 As a method for determining the glomerular filtration rate instead of inulin clearance, a method based on the clearance of substances other than inulin and a method based on the renal function marker value in blood have been developed. These are used to determine GFR by examining the correlation with inulin clearance, which is an international standard measurement method. Cystatin C, a currently widely used renal function marker, is excellent in that it does not require administration of substances from outside the body, and the estimated glomerular filtration rate (eGFR) is determined by a formula that combines age and gender information. Has been done.

このように決定されたeGFRは、健康診断や医療現場で広く使用されている。しかしながら、eGFRは、腎機能の悪化についてのスクリーニングに用いることや、多数の対象者を比較するような疫学研究における簡便かつ客観的な評価を主眼として作成された指標であり、個別の患者の腎機能評価には、依然としてイヌリンを用いたイヌリンクリアランスを用いることが日本腎臓学会により推奨されている。 The eGFR determined in this way is widely used in health examinations and medical settings. However, eGFR is an index created mainly for screening for deterioration of renal function and for simple and objective evaluation in epidemiological studies comparing a large number of subjects, and is an index created for the kidney of an individual patient. It is still recommended by the Japanese Society of Nephrology to use inulin clearance with inulin for functional evaluation.

その理由として、そもそもシスタチンCの測定レンジの狭さが挙げられる。腎機能が高度に低下した状況では(たとえばGFR30以下)、血液中のシスタチンC量の上昇は鈍化し、本来のGFRからの乖離が大きくなるため、末期腎臓病では正確な腎機能評価が困難である。また、体格やステロイド、シクロスポリン等免疫系の薬剤の使用や、糖尿病、甲状腺機能亢進症、炎症、高ビリルビン血症、高トリグリセリド血症等の患者の状態によって精度が低下することが知られている。このように、シスタチン量やeGFRにより、腎機能についてスクリーニングを行うと、偽陽性と偽陰性の判定がされる恐れがある。 The reason is that the measurement range of cystatin C is narrow in the first place. In situations where renal function is highly impaired (for example, GFR30 or less), the increase in the amount of cystatin C in the blood slows down and the deviation from the original GFR increases, making accurate renal function evaluation difficult in end-stage renal disease. be. In addition, it is known that the accuracy decreases depending on the physique, the use of immune system drugs such as steroids and cyclosporine, and the patient's condition such as diabetes, hyperthyroidism, inflammation, hyperbilirubinemia, and hypertriglyceridemia. .. As described above, when screening for renal function based on the amount of cystatin or eGFR, false positives and false negatives may be determined.

従来、哺乳類の生体には存在しないと考えられていたD−アミノ酸が、様々な組織に存在し、生理機能を担うことが明らかにされてきている。また、血液中のD−アミノ酸のうち、D−セリン、D−アラニン、D−プロリン、D−グルタミン酸、D−アスパラギン酸の濃度が、腎不全患者で変動し、シスタチンCと相関することから、腎不全の診断マーカーになり得ることが示されている(非特許文献1、非特許文献2、非特許文献3、非特許文献4)。さらに、D−セリン、D−スレオニン、D−アラニン、D−アスパラギン、D−アロスレオニン、D−グルタミン、D−プロリン及びD−フェニルアラニンからなるグループから選択されるアミノ酸が、腎臓病の病態指標値とすることについて開示されている(特許文献1)。これらの文献では、健常者と比較して、腎臓病を患う患者の血液中のD−アミノ酸が変動していることから、これらの変動を指標にして腎臓病の診断が可能になる旨が開示されている。
その一方で、血液中のD−アミノ酸量によって、イヌリンクリアランスを基準とした糸球体濾過能力が決定できることについては何ら記載も示唆もされていない。なお、近年、腎臓病のマーカーとして、尿中L−FABP、血液中NGAL、尿中KIM−1等が開発されてきているが、腎臓病のマーカーであったとしても、必ずしも糸球体濾過能力の決定・推定できるものではない。
It has been clarified that D-amino acids, which were conventionally considered not to exist in the living body of mammals, are present in various tissues and play a physiological function. In addition, among the D-amino acids in the blood, the concentrations of D-serine, D-alanine, D-proline, D-glutamic acid, and D-aspartic acid fluctuate in patients with renal failure and correlate with cystatin C. It has been shown that it can be a diagnostic marker for renal failure (Non-Patent Document 1, Non-Patent Document 2, Non-Patent Document 3, Non-Patent Document 4). Furthermore, amino acids selected from the group consisting of D-serine, D-threonine, D-alanine, D-asparagine, D-alosleonine, D-glutamine, D-proline and D-phenylalanine are the pathological index values of kidney disease. (Patent Document 1). These documents disclose that since D-amino acids in the blood of patients suffering from kidney disease fluctuate as compared with healthy subjects, it is possible to diagnose kidney disease using these fluctuations as an index. Has been done.
On the other hand, there is no description or suggestion that the glomerular filtration capacity based on inulin clearance can be determined by the amount of D-amino acid in blood. In recent years, urinary L-FABP, blood NGAL, urinary KIM-1, and the like have been developed as markers for kidney disease, but even if they are markers for kidney disease, they do not necessarily have glomerular filtration capacity. It cannot be determined or estimated.

国際公開第2013/140785号International Publication No. 2013/140785

Fukushima,T.ら、Biol. Pharm. Bull. 18: 1130(1995)Fukushima, T.K. Et al., Biol. Pharm. Bull. 18: 1130 (1995) Nagata.Y Viva Origino Vol.18(No.2) (1990)第15回学術講演会講演要旨集Nagata. Y Viva Origino Vol. 18 (No. 2) (1990) Abstracts of the 15th Academic Lecture Ishidaら、北里医学 23:51〜62 (1993)Ishida et al., Kitasato Medicine 23: 51-62 (1993) Yong Huangら、Biol. Pharm. Bull. 21:(2)156-162(1998)Young Hung et al., Biol. Pharm. Bull. 21: (2) 156-162 (1998)

健康診断において、腎機能検査を目的として血液中のシスタチンC量や、血液中のシスタチンC量に基づく推算糸球体濾過量が算出されるが、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査では、体格の影響や、測定レンジの狭さに起因する精度の低下により、結果の判定において偽陽性及び偽陰性が含まれうる。本発明ではこうした偽陽性及び偽陰性を検定することを目的とする。 In the health examination, the amount of cystatin C in blood and the estimated glomerular filtration rate based on the amount of cystatin C in blood are calculated for the purpose of renal function test, but in the renal function test based on the amount of cystatin C in blood, False positives and false negatives can be included in the determination of results due to the influence of physique and the decrease in accuracy due to the narrow measurement range. An object of the present invention is to test such false positives and false negatives.

本発明者らは、血液中のD−セリンに着目し、GFR(イヌリンクリアランス)との相関を調べていたところ、驚くべきことに、現在汎用されている血液中のシスタチンC量よりも、血液中のD−セリン量が、GFR(イヌリンクリアランス)に相関が高いことを見出し、本発明に至った。 When the present inventors focused on D-serine in blood and investigated the correlation with GFR (inulin clearance), surprisingly, the amount of cystatin C in blood, which is currently widely used, is higher than that in blood. We have found that the amount of D-serine in the blood has a high correlation with GFR (inulin clearance), leading to the present invention.

そこで、本発明は下記に関する:
[1] 血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法であって、
血液中シスタチンC量に基づく腎機能検査を受けた対象の血液中のD−セリン量を測定する工程、
D−セリン量と、所定の閾値とを比較する工程、
血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定する工程
を含む、前記方法。
[2] 腎機能検査結果の妥当性を検定する方法が、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の偽陽性及び/又は偽陰性を判定する、項目1に記載の方法。
[3] 前記決定工程が、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値を超えた場合に、偽陽性と決定する、項目2に記載の方法。
[4] 前記決定工程が、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陰性と決定する、項目2に記載の方法。
[5] 同一サンプルにおいて、D−セリン量及び血液中シスタチンC量が測定される、項目1〜4のいずれか一項に記載の方法。
[6] 前記対象が、免疫系の薬剤(ステロイド類、タクロリムス、抗CD20抗体、シクロヘキサミド、MMF、シクロスポリン等)を投与された対象である、項目1〜5のいずれか一項に記載の方法。
[7] 偽陰性又は真陰性と判定された対象に対し、治療介入が行われる、項目1〜6のいずれか一項に記載の方法。
[8] 前記治療介入が、生活習慣改善、食事指導、血圧管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、血糖値管理、免疫管理及び脂質管理からなる群から選ばれる、項目7に記載の方法。
[9] 前記治療介入として、利尿薬、カルシウム拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬、アンジオテンシン受容体拮抗薬、交感神経遮断薬、SGLT2阻害薬、スルホニル尿素薬、チアゾリジン薬、ビグアナイド薬、α―グルコシダーゼ阻害薬、グリニド薬、インスリン製剤、NRF2活性化剤、免疫抑制剤、スタチン系薬剤、フィブラート系薬剤、貧血治療薬、エリスロポエチン製剤、HIF−1阻害剤、鉄剤、電解質調整薬、カルシウム受容体作動薬、リン吸着剤、尿毒素吸着剤、DPP4阻害薬、EPA製剤、ニコチン酸誘導体、コレステロールトランスポーター阻害剤、およびPCSK9阻害剤からなる群から選ばれる少なくとも1の薬剤を前記対象に投与することを含む、項目7又は8に記載の方法。
[10] 記憶部と、入力部、分析測定部と、データ処理部と、出力部とを含み、シスタチンC量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する試料分析システムであって、
記憶部は、入力部から入力されたD−セリン量の閾値を記憶し、
記憶部は、入力部から入力された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を記憶し、
分析測定部は、血液試料中のD−セリンを分離定量し、
データ処理部は、D−セリン量を、記憶部に記憶されたD−セリン量の閾値と比較し、記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定し、
出力部が血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を出力する
を含む、前記試料分析システム。
[11] 記憶部と、入力部、分析測定部と、データ処理部と、出力部とを含み、シスタチンC量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する試料分析システムであって、
記憶部は、入力部から入力されたD−セリン量の閾値を記憶し、
記憶部は、入力部から入力された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を記憶し、
分析測定部は、血液試料中のD−セリンを分離定量し、
データ処理部は、D−セリン量を、記憶部に記憶されたD−セリン量の閾値と比較し、記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定し、
出力部が血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を出力する
を含む、前記試料分析システム。
[12] 腎機能検査結果の妥当性の判定が、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の偽陽性及び/又は偽陰性を判定する、項目11に記載の試料分析システム。
[13] 前記判定が、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と判定する、項目12に記載の試料分析システム。
[14] 前記判定が、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、D-セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定する、項目12に記載の試料分析システム。
[15] 同一サンプルにおいて、D−セリン量及び血液中のシスタチンC量が測定される、項目10〜14のいずれか一項に記載の試料分析システム。
[16] 入力部、出力部、データ処理部、記憶部とを含む情報処理装置に血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定させるプログラムであって、以下の:
入力部から入力されたD-セリン量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のD−セリン量を記憶させ、
記憶部に記憶されたD−セリン量と、D−セリン量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、閾値を上回るか下回るかについて比較の結果を記憶部に記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果と、比較の結果を読み出し、腎機能検査の結果の妥当性を判定して、記憶部に記憶させ、
記憶された妥当性を出力部に出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む、前記プログラム。
[17] 入力部、出力部、データ処理部、記憶部とを含む情報処理装置に血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定させるプログラムであって、以下の:
入力部から入力された血液中のシスタチンC量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のシスタチンC量を記憶させ、
入力部から入力されたD-セリン量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のD−セリン量を記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量と、血液中のシスタチンC量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、シスタチンC量に基づく腎機能検査結果を記憶部に記憶させ、
記憶部に記憶されたD−セリン量と、D−セリン量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、比較の結果を記憶部に記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果と、比較の結果を読み出し、腎機能検査の結果の妥当性を判定して、記憶部に記憶させ、
記憶された妥当性を出力部に出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む、前記プログラム。
Therefore, the present invention relates to the following:
[1] A method for testing the validity of renal function test results based on the amount of cystatin C in blood.
A step of measuring the amount of D-serine in the blood of a subject who has undergone a renal function test based on the amount of cystatin C in the blood,
A step of comparing the amount of D-serine with a predetermined threshold value,
The method comprising determining the validity of the results of a renal function test based on the amount of cystatin C in blood.
[2] The method according to item 1, wherein the method for verifying the validity of the renal function test result determines a false positive and / or a false negative of the renal function test result based on the amount of cystatin C in blood.
[3] While the determination step is determined to be decreased renal function by a renal function test based on the amount of cystatin C in blood, a false positive is determined when the amount of D-serine exceeds the threshold value. The method according to item 2.
[4] Item 2 in which the determination step is determined to be normal by a renal function test based on the amount of cystatin C in blood, while it is determined to be false negative when the amount of D-serine is lower than the threshold value. The method described.
[5] The method according to any one of items 1 to 4, wherein the amount of D-serine and the amount of cystatin C in blood are measured in the same sample.
[6] The item according to any one of items 1 to 5, wherein the subject is a subject to which an immune system drug (steroids, tacrolimus, anti-CD20 antibody, cyclohexamide, MMF, cyclosporine, etc.) has been administered. Method.
[7] The method according to any one of items 1 to 6, wherein a therapeutic intervention is performed on a subject determined to be false negative or true negative.
[8] The method according to item 7, wherein the therapeutic intervention is selected from the group consisting of lifestyle improvement, dietary guidance, blood pressure control, anemia control, electrolyte control, uremic toxin control, blood glucose level control, immune control and lipid control. ..
[9] As the therapeutic intervention, diuretics, calcium antagonists, angiotensin converting enzyme inhibitors, angiotensin receptor antagonists, sympathetic blockers, SGLT2 inhibitors, sulfonylurea drugs, thiazolidine drugs, biguanide drugs, α-glucosidase inhibition Drugs, glinide drugs, insulin preparations, NRF2 activators, immunosuppressants, statins, fibrates, anemia treatments, erythropoietin preparations, HIF-1 inhibitors, irons, electrolyte regulators, calcium receptor agonists, It comprises administering to the subject at least one agent selected from the group consisting of phosphorus adsorbents, urinary toxin adsorbents, DPP4 inhibitors, EPA preparations, nicotinic acid derivatives, cholesterol transporter inhibitors, and PCSK9 inhibitors. The method according to item 7 or 8.
[10] A sample analysis system that includes a storage unit, an input unit, an analysis measurement unit, a data processing unit, and an output unit, and verifies the validity of renal function test results based on the amount of cystatin C.
The storage unit stores the threshold value of the amount of D-serine input from the input unit, and stores the threshold value.
The memory unit stores the results of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit.
The analysis and measurement unit separates and quantifies D-serine in the blood sample.
The data processing unit compares the amount of D-serine with the threshold of the amount of D-serine stored in the memory, and validates the results of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood stored in the memory. Judge,
The sample analysis system, wherein the output unit outputs the validity of the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in blood.
[11] A sample analysis system that includes a storage unit, an input unit, an analysis measurement unit, a data processing unit, and an output unit, and verifies the validity of renal function test results based on the amount of cystatin C.
The storage unit stores the threshold value of the amount of D-serine input from the input unit, and stores the threshold value.
The memory unit stores the results of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit.
The analysis and measurement unit separates and quantifies D-serine in the blood sample.
The data processing unit compares the amount of D-serine with the threshold of the amount of D-serine stored in the memory, and validates the results of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood stored in the memory. Judge,
The sample analysis system, wherein the output unit outputs the validity of the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in blood.
[12] The sample analysis system according to item 11, wherein the validity of the renal function test result is determined to be a false positive and / or a false negative of the renal function test result based on the amount of cystatin C in blood.
[13] Item 12 in which the determination is determined to be a false positive when the amount of D-serine is lower than the threshold value, while the determination is determined to be a decrease in renal function by a renal function test based on the amount of cystatin C in blood. The sample analysis system described in.
[14] Item 12, wherein the determination is determined to be normal by a renal function test based on the amount of cystatin C in blood, while a false negative is determined when the amount of D-serine is higher than the threshold value. Sample analysis system.
[15] The sample analysis system according to any one of items 10 to 14, wherein the amount of D-serine and the amount of cystatin C in blood are measured in the same sample.
[16] A program that causes an information processing device including an input unit, an output unit, a data processing unit, and a storage unit to determine the validity of the result of a renal function test based on the amount of cystatin C in blood.
The threshold value of the amount of D-serine input from the input unit is stored in the storage unit, and the threshold value is stored in the storage unit.
The result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit is stored in the memory unit.
The amount of D-serine in the blood sample input from the input unit is memorized and stored.
The amount of D-serine stored in the storage unit and the threshold value of the amount of D-serine are read out, compared by the data processing unit, and the result of the comparison is stored in the storage unit as to whether the threshold value is exceeded or decreased.
The result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood stored in the memory and the result of the comparison are read out, the validity of the result of the renal function test is judged, and the result is stored in the memory.
The program including a command for causing the information processing apparatus to output the stored validity to the output unit.
[17] A program that causes an information processing device including an input unit, an output unit, a data processing unit, and a storage unit to determine the validity of the result of a renal function test based on the amount of cystatin C in blood.
The threshold value of the amount of cystatin C in the blood input from the input unit is stored in the storage unit, and the threshold value is stored in the storage unit.
The amount of cystatin C in the blood sample input from the input unit is memorized and stored.
The threshold value of the amount of D-serine input from the input unit is stored in the storage unit, and the threshold value is stored in the storage unit.
The amount of D-serine in the blood sample input from the input unit is memorized and stored.
The amount of cystatin C in blood stored in the storage unit and the threshold value of the amount of cystatin C in blood are read out, compared in the data processing unit, and the renal function test result based on the amount of cystatin C is stored in the storage unit.
The amount of D-serine stored in the storage unit and the threshold value of the amount of D-serine are read out, compared in the data processing unit, and the comparison result is stored in the storage unit.
The result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood stored in the memory and the result of the comparison are read out, the validity of the result of the renal function test is judged, and the result is stored in the memory.
The program including a command for causing the information processing apparatus to output the stored validity to the output unit.

本発明は、血液中のシスタチンC量による腎機能判定にあわせて、よりGFR(イヌリンクリアランス)に対し相関の高いD−セリン量を用いることにより、血液中のシスタチンC量による腎機能判定の妥当性を判定することが可能になる。 The present invention is appropriate for determining renal function based on the amount of cystatin C in blood by using the amount of D-serine, which has a higher correlation with GFR (inulin clearance), in addition to determining renal function based on the amount of cystatin C in blood. It becomes possible to judge the sex.

図1は、血液中のD−セリン量(A)及びシスタチンC量(B)と、GFR(イヌリンクリアランス)(体表面積補正済み)との散布図を示したグラフである。FIG. 1 is a graph showing a scatter plot of the amount of D-serine (A) and cystatin C (B) in blood and GFR (inulin clearance) (body surface area corrected). 図2は、血液中のD−セリン量(A)及びシスタチンC量(B)と、GFR(イヌリンクリアランス)(体表面積補正無し)との散布図を示したグラフである。FIG. 2 is a graph showing a scatter plot of the amount of D-serine (A) and cystatin C (B) in blood and GFR (inulin clearance) (without body surface area correction). 図3は、血液中のD−セリン量(A)及びシスタチンC量(B)と、体表面積(BSA)との散布図を示したグラフである。FIG. 3 is a graph showing a scatter plot of the amount of D-serine (A) and cystatin C (B) in blood and the body surface area (BSA). 図4は、本発明の試料分析システムの構成図を示す。FIG. 4 shows a block diagram of the sample analysis system of the present invention. 図5は本発明のプログラムによる腎機能検査結果の妥当性を検定するための動作の例を示すフローチャートである。FIG. 5 is a flowchart showing an example of an operation for verifying the validity of the renal function test result by the program of the present invention.

本発明は、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法に関する。より具体的に、本発明の検定方法は、以下の:
血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査を受けた対象の血液中のD−セリン量を測定する工程、
D−セリン量と、所定の閾値とを比較する工程、
血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定する工程
を含む。
The present invention relates to a method for validating renal function test results based on the amount of cystatin C in blood. More specifically, the assay method of the present invention is as follows:
A step of measuring the amount of D-serine in the blood of a subject who has undergone a renal function test based on the amount of cystatin C in the blood,
A step of comparing the amount of D-serine with a predetermined threshold value,
Includes the step of determining the validity of the results of renal function tests based on the amount of cystatin C in the blood.

一の態様では、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法とは、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の偽陰性又は偽陽性を決定する方法に関する。偽陰性又は偽陽性を決定する工程は、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と決定し、又は血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定することができる。 In one aspect, the method of validating a renal function test result based on the amount of cystatin C in blood relates to a method of determining a false negative or false positive of a renal function test result based on the amount of cystatin C in blood. .. The step of determining a false negative or a false positive is determined to be a false positive when the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood determines that the renal function is decreased, while the amount of D-serine is lower than the above threshold. Or, if the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood determines that it is normal, but the amount of D-serine is higher than the above threshold, it can be determined as a false negative.

本発明の別の態様では、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法とは、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の真陰性又は真陽性を決定する方法であってもよい。真陰性又は真陽性を決定する工程は、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より高い場合に、真陽性と決定し、又は血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より低い場合に、真陰性と決定することができる。 In another aspect of the invention, the method of validating a renal function test result based on the amount of cystatin C in blood determines whether the renal function test result is true negative or true positive based on the amount of cystatin C in blood. It may be a method of doing. The step of determining a true negative or a true positive is determined to be a true positive when the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood determines that the renal function is decreased, while the amount of D-serine is higher than the above threshold. Or, if the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood determines that it is normal, but the amount of D-serine is lower than the above threshold, it can be determined to be true negative.

本発明において、指標として用いられるD−セリンは、タンパク質を構成するアミノ酸であるL−セリンの光学異性体である。D−セリン量は、主にセリンラセマーゼやD−アミノ酸オキシダーゼ等の代謝酵素によって、各組織や血液中で厳密に制御されている一方で、腎障害が生じた場合には血液中のD−セリン量が変動する。 In the present invention, D-serine used as an index is an optical isomer of L-serine, which is an amino acid constituting a protein. The amount of D-serine is strictly controlled in each tissue and blood mainly by metabolic enzymes such as serine racemase and D-amino acid oxidase, while D-serine in blood occurs when renal damage occurs. The amount fluctuates.

本発明において「血液中のD−セリン量」とは、特定の血液量中のD−セリン量のことを指してもよく、濃度で表されてもよい。血液中のD−セリン量は、採取された血液において、遠心分離、沈降分離、あるいは分析のための前処理が行われた試料における量として測定される。したがって、血液中のD−セリン量は、採取された全血、血清、血漿等の血液に由来する血液試料における量として測定されうる。一例として、HPLCを用いた分析の場合、所定量の血液に含まれるD−セリン量は、クロマトグラムで表され、ピークの高さ・面積・形状について標準品との比較やキャリブレーションによる解析によって定量されうる。D−セリン濃度が既知のサンプルとの比較により、血液中のD−セリン量を測定することが可能であり、血液中のD−セリン量として、血液中のD−セリン濃度を用いることができる。また、酵素法では、標準品の検量線を用いた定量解析により、アミノ酸濃度を算出可能である。 In the present invention, the "amount of D-serine in blood" may refer to the amount of D-serine in a specific blood volume, or may be expressed as a concentration. The amount of D-serine in blood is measured in the collected blood as the amount in a sample that has been centrifuged, precipitated, or pretreated for analysis. Therefore, the amount of D-serine in blood can be measured as the amount in a blood sample derived from blood such as collected whole blood, serum, and plasma. As an example, in the case of analysis using HPLC, the amount of D-serine contained in a predetermined amount of blood is represented by a chromatogram, and the peak height, area, and shape are compared with standard products and analyzed by calibration. Can be quantified. The amount of D-serine in blood can be measured by comparison with a sample having a known D-serine concentration, and the concentration of D-serine in blood can be used as the amount of D-serine in blood. .. In addition, in the enzyme method, the amino acid concentration can be calculated by quantitative analysis using a standard calibration curve.

補正のための式は、一例として、GFR(イヌリンクリアランス)への相関から決定しうる。イヌリンクリアランスと、血液中のD−セリン量との相関から算出された式又はグラフに、被験者のD−セリン量を代入することで決定することができる。イヌリンクリアランスは、体表面積補正済みのイヌリンクリアランスであってもよいし、体表面積補正前のイヌリンクリアランスであってもよい。体表面積補正前と補正後の糸球体濾過能力のどちらが必要かに応じて、選択することができる。 The formula for correction can be determined, for example, from the correlation with GFR (inulin clearance). It can be determined by substituting the amount of D-serine of the subject into the formula or graph calculated from the correlation between the inulin clearance and the amount of D-serine in the blood. The inulin clearance may be the inulin clearance with the body surface area corrected, or the inulin clearance before the body surface area correction. It can be selected according to whether the glomerular filtration capacity before or after the body surface area correction is required.

D−セリン量は、任意の方法によって測定することができ、例えばキラルカラムクロマトグラフィーを用いた測定や、酵素法を用いた測定、さらにはアミノ酸の光学異性体を識別するモノクローナル抗体を用いる免疫学的手法によって定量することができる。本発明における試料中のD−セリン量の測定は、当業者に周知ないかなる方法を用いて実施しても構わない。例えば、クロマトグラフィー法や酵素法(Y. Nagata et al., Clinical Science, 73 (1987), 105. Analytical Biochemistry, 150 (1985), 238., A. D'Aniello et al., Comparative Biochemistry and Physiology Part B, 66 (1980), 319. Journal of Neurochemistry, 29 (1977), 1053., A. Berneman et al., Journal of Microbial & Biochemical Technology, 2 (2010), 139., W. G. Gutheil et al., Analytical Biochemistry, 287 (2000), 196., G. Molla et al., Methods in Molecular Biology, 794 (2012), 273., T. Ito et al., Analytical Biochemistry, 371 (2007), 167. 等)、抗体法(T. Ohgusu et al., Analytical Biochemistry, 357 (2006), 15.,等 )、ガスクロマトグラフィー(GC)(H. Hasegawa et al., Journal of Mass Spectrometry, 46 (2011), 502., M. C. Waldhier et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 394 (2009), 695., A. Hashimoto, T. Nishikawa et al., FEBS Letters, 296 (1992), 33., H. Bruckner and A. Schieber, Biomedical Chromatography, 15 (2001), 166. , M. Junge et al., Chirality, 19 (2007), 228., M. C. Waldhier et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 4537. 等)、キャピラリー電気泳動法(CE)(H. Miao et al., Analytical Chemistry, 77 (2005), 7190., D. L. Kirschner et al., Analytical Chemistry, 79 (2007), 736., F. Kitagawa, K. Otsuka, Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3078., G. Thorsen and J. Bergquist, Journal of Chromatography B, 745 (2000), 389. 等)、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)(N. Nimura and T. Kinoshita, Journal of Chromatography, 352 (1986), 169., A. Hashimoto et al., Journal of Chromatography, 582 (1992), 41., H. Bruckner et al., Journal of Chromatography A, 666 (1994), 259., N. Nimura et al., Analytical Biochemistry, 315 (2003), 262., C. Muller et al., Journal of Chromatography A, 1324 (2014), 109., S. Einarsson et al., Analytical Chemistry, 59 (1987), 1191., E. Okuma and H. Abe, Journal of Chromatography B, 660 (1994), 243., Y. Gogami et al., Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3259., Y. Nagata et al., Journal of Chromatography, 575 (1992), 147., S. A. Fuchs et al., Clinical Chemistry, 54 (2008), 1443., D. Gordes et al., Amino Acids, 40 (2011), 553., D. Jin et al., Analytical Biochemistry, 269 (1999), 124., J. Z. Min et al., Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3220., T. Sakamoto et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408 (2016), 517., W. F. Visser et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 7130., Y. Xing et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408 (2016), 141., K. Imai et al., Biomedical Chromatography, 9 (1995), 106., T. Fukushima et al., Biomedical Chromatography, 9 (1995), 10., R. J. Reischl et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 8379., R. J. Reischl and W. Lindner, Journal of Chromatography A, 1269 (2012), 262., S. Karakawa et al., Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 115 (2015), 123., 等)がある。 The amount of D-serine can be measured by any method, for example, measurement using chiral column chromatography, measurement using an enzymatic method, and immunology using a monoclonal antibody that identifies an optical isomer of an amino acid. It can be quantified by the method. The measurement of the amount of D-serine in the sample in the present invention may be carried out by any method well known to those skilled in the art. For example, chromatographic and enzymatic methods (Y. Nagata et al., Clinical Science, 73 (1987), 105. Analytical Biochemistry, 150 (1985), 238., A. D'Aniello et al., Comparative Biochemistry and Physiology. Part B, 66 (1980), 319. Journal of Neurochemistry, 29 (1977), 1053., A. Berneman et al., Journal of Microbial & Biochemical Technology, 2 (2010), 139., WG Gutheil et al., Analytical Biochemistry, 287 (2000), 196., G. Molla et al., Methods in Molecular Biology, 794 (2012), 273., T. Ito et al., Analytical Biochemistry, 371 (2007), 167. Etc.) , Antibody method (T. Ohgusu et al., Analytical Biochemistry, 357 (2006), 15., etc.), Gas chromatography (GC) (H. Hasegawa et al., Journal of Mass Spectrometry, 46 (2011), 502 ., MC Waldhier et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 394 (2009), 695., A. Hashimoto, T. Nishikawa et al., FEBS Letters, 296 (1992), 33., H. Bruckner and A. Schieber , Biomedical Chromatography, 15 (2001), 166., M. Junge et al., Chirality, 19 (2007), 228., MC Waldhier et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 45 37. etc.), Capillary Electrophoresis (CE) (H. Miao et al., Analytical Chemistry, 77 (2005), 7190., DL Kirschner et al., Analytical Chemistry, 79 (2007), 736., F. Kitagawa, K. Otsuka, Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3078., G. Thorsen and J. Bergquist, Journal of Chromatography B, 745 (2000), 389. Et al.), Fast Liquid Chromatography (HPLC) ( N. Nimura and T. Kinoshita, Journal of Chromatography, 352 (1986), 169., A. Hashimoto et al., Journal of Chromatography, 582 (1992), 41., H. Bruckner et al., Journal of Chromatography A , 666 (1994), 259., N. Nimura et al., Analytical Biochemistry, 315 (2003), 262., C. Muller et al., Journal of Chromatography A, 1324 (2014), 109., S. Einarsson et al., Analytical Chemistry, 59 (1987), 1191., E. Okuma and H. Abe, Journal of Chromatography B, 660 (1994), 243., Y. Gogami et al., Journal of Chromatography B, 879 ( 2011), 3259., Y. Nagata et al., Journal of Chromatography, 575 (1992), 147., SA Fuchs et al., Clinical Chemistry, 54 (2008), 1443., D. Gordes et al., Amino Acids, 40 (2011) , 553., D. Jin et al., Analytical Biochemistry, 269 (1999), 124., JZ Min et al., Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3220., T. Sakamoto et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408 (2016), 517., WF Visser et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 7130., Y. Xing et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408 (2016), 141., K. Imai et al., Biomedical Chromatography, 9 (1995), 106., T. Fukushima et al., Biomedical Chromatography, 9 (1995), 10., RJ Reischl et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011) ), 8379., RJ Reischl and W. Lindner, Journal of Chromatography A, 1269 (2012), 262., S. Karakawa et al., Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 115 (2015), 123., etc.) be.

本発明における光学異性体の分離分析系は、複数の分離分析を組み合わせてもよい。より具体的に、光学異性体を有する成分を含む試料を、移動相としての第一の液体と共に、固定相としての第一のカラム充填剤に通じて、前記試料の前記成分を分離するステップ、前記試料の前記成分の各々をマルチループユニットにおいて個別に保持するステップ、前記マルチループユニットにおいて個別に保持された前記試料の前記成分の各々を、移動相としての第二の液体と共に、固定相としての光学活性中心を有する第二のカラム充填剤に流路を通じて供給し、前記試料の成分の各々に含まれる前記光学異性体を分割するステップ、及び前記試料の成分の各々に含まれる前記光学異性体を検出するステップを含むことを特徴とする光学異性体の分析方法を用いることにより、試料中のD-/L-アミノ酸量を測定することができる(特許第4291628号)。HPLC分析では、予めo−フタルアルデヒド(OPA)や4−フルオロ−7−ニトロ−2,1,3−ベンゾキサジアゾール(NBD−F)のような蛍光試薬でD−及びL−アミノ酸を誘導体化したり、N−tert−ブチルオキシカルボニル−L−システイン(Boc−L−Cys)等を用いてジアステレオマー化する場合がある(浜瀬健司及び財津潔、分析化学、53巻、677−690(2004))。代替的には、アミノ酸の光学異性体を識別するモノクローナル抗体、例えばD−セリン、L−セリン等に特異的に結合するモノクローナル抗体を用いる免疫学的手法によってD−アミノ酸を測定することができる。また、D体及びL体の合計量を指標とする場合、D体及びL体を分離して分析する必要はなく、D体及びL体を区別せずにアミノ酸を分析することもできる。その場合も酵素法、抗体法、GC、CE、HPLCで分離及び定量することができる。 The separation analysis system for optical isomers in the present invention may combine a plurality of separation analyzes. More specifically, a step of separating a sample containing a component having an optical isomer through a first column packing material as a stationary phase together with a first liquid as a mobile phase to separate the component of the sample. A step of individually holding each of the components of the sample in the multi-loop unit, each of the components of the sample individually held in the multi-loop unit as a stationary phase together with a second liquid as a mobile phase. A step of supplying the optical isomer having the optically active center of the sample through a flow path to divide the optical isomer contained in each of the components of the sample, and the optical isomer contained in each of the components of the sample. The amount of D- / L-amino acids in a sample can be measured by using a method for analyzing optical isomers, which comprises a step of detecting a body (Patent No. 4291628). In HPLC analysis, D- and L-amino acids are previously derived with fluorescent reagents such as o-phthalaldehyde (OPA) and 4-fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxaziazole (NBD-F). It may be converted or diasteremericized using N-tert-butyloxycarbonyl-L-cysteine (Boc-L-Cys), etc. (Kenji Hamase and Kiyoshi Zaitsu, Analytical Chemistry, Vol. 53, 677-690 ( 2004)). Alternatively, D-amino acids can be measured by immunological techniques using monoclonal antibodies that identify the optical isomers of the amino acids, such as monoclonal antibodies that specifically bind to D-serine, L-serine, and the like. Further, when the total amount of D-form and L-form is used as an index, it is not necessary to analyze D-form and L-form separately, and amino acids can be analyzed without distinguishing between D-form and L-form. In that case as well, it can be separated and quantified by an enzyme method, an antibody method, GC, CE, or HPLC.

本発明において検定対象であるシスタチンCは、全身の有核細胞から一定の割合で産生される分子量13kDaのタンパク質で、すべて糸球体で濾過された後に尿細管での再吸収を経て腎臓で分解される。濾過量に応じて血液から除去されることから腎機能の指標として、血液中のシスタチンC量、又は血液中のシスタチンC量から推算される糸球体濾過量が用いられる。日本では、イヌリンクリアランスを標準とした推算式が開発されている。しかしながら、体格の影響や、疾患や薬剤投与の有無により血液中シスタチンC量が変動することが知られている。また、血液中シスタチンC量は、高度に腎機能が低下した場合には上昇が頭打ちとなり、標準的な対象であっても、30mL/分/1.73m2以下の値では、正しい評価ができないことも知られている。Cystatin C, which is the subject of the test in the present invention, is a protein having a molecular weight of 13 kDa produced from nucleated cells throughout the body at a constant rate. NS. Since it is removed from blood according to the amount of filtration, the amount of cystatin C in blood or the amount of glomerular filtration estimated from the amount of cystatin C in blood is used as an index of renal function. In Japan, an estimation formula based on inulin clearance has been developed. However, it is known that the amount of cystatin C in blood varies depending on the influence of physical constitution, disease, and the presence or absence of drug administration. In addition, the amount of cystatin C in blood peaks when renal function declines severely, and even for standard subjects, a value of 30 mL / min / 1.73 m 2 or less cannot be evaluated correctly. It is also known.

上述のように、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査について問題が報告されているものの、これまで汎用されてきた実績から、健康診断において腎機能検査として血液中のシスタチンC量及び/又は血液中のシスタチンC量に基づく推算糸球体濾過量が多く採用されている。例えば血液中のシスタチンC量の場合、男性であれば0.95mg/Lを閾値とし、女性であれば0.87mg/Lを閾値とされ、それを上回ると、腎機能が低下していると判定され、下回っていれば正常であると判定される。また、推算糸球体濾過量を用いる場合、日本では、イヌリンクリアランスを標準とした推算式に基づいて推算糸球体濾過量が計算され、閾値として60.0mL/分/1.73m2が用いられ、この閾値を下回ると腎機能が低下していると判定され、上回っていれば正常であると判定される。血液中のシスタチンC量及び推算糸球体濾過量において、腎機能の低下を示す閾値は、学会主導の調査等で変更されることがあり、上述の数値に捕らわれることを意図するものではない。体格の影響を直接受ける血液中のシスタチンC量はもちろんのこと、年齢と性別で補正された推算糸球体濾過量の場合であっても、疾病に罹患したり、薬剤を投与された特殊な被験者では、偽陽性の問題及び偽陰性の問題が生じることになる。健康診断等の一次スクリーニングの結果に、偽陰性の結果が含まれることにより、初期の腎臓病を見逃しているという実態がある。腎機能は基本的に一度失われると回復が見込めないことから、初期の腎臓病について、偽陰性を見逃さずに腎機能を判定することが好ましい。また、偽陽性が含まれていた場合、対象は通常2次検査を受診することになり、そこでほかの症候やマーカー等の値から総合的に腎臓病が判断されるが、個別の腎機能の確定にはイヌリンクリアランスの測定が推奨されており、対象のみならず、医療関係者への負担が大きい。上述の通りシスタチンCは、測定レンジが狭いことから、腎機能低下を示す対象において、陰性と判定してしまう可能性が高い。その一方で、血液中のD−セリン量は、腎機能低下についても、イヌリンクリアランスに対して軽度〜高度の広いレンジにおいて相関が高く、シスタチンC検査の偽陰性を判定できる。また、シスタチンC量は、体格による影響が大きいことも偽陰性・偽陽性を招く原因である一方で、血液中のD−セリンは、体表面積(BSA)への相関を示さず、どのような体格の対象においても偽陰性・偽陽性を招く可能性が低い。As mentioned above, although problems have been reported regarding renal function tests based on the amount of cystatin C in blood, based on the results that have been widely used so far, the amount of cystatin C in blood and / or as a renal function test in health examinations. Estimated glomerular filtration rate based on the amount of cystatin C in blood is widely used. For example, in the case of the amount of cystatin C in blood, 0.95 mg / L is set as the threshold for men and 0.87 mg / L is set as the threshold for women, and if it exceeds that, renal function is impaired. It is judged, and if it is lower than that, it is judged to be normal. When using the estimated glomerular filtration rate, in Japan, the estimated glomerular filtration rate is calculated based on the estimation formula with inulin clearance as the standard, and 60.0 mL / min / 1.73 m 2 is used as the threshold value. If it falls below this threshold, it is determined that renal function is deteriorated, and if it exceeds this threshold, it is judged to be normal. In terms of the amount of cystatin C in blood and the estimated glomerular filtration rate, the threshold value indicating a decrease in renal function may be changed by a survey led by an academic society, and is not intended to be caught by the above-mentioned values. Special subjects suffering from illness or receiving drugs, not only in the amount of cystatin C in the blood, which is directly affected by body size, but also in the case of age- and gender-corrected estimated glomerular filtration rate. Then, the problem of false positives and the problem of false negatives will arise. The fact is that early kidney disease is overlooked because false negative results are included in the results of primary screening such as health examinations. Since renal function is basically not expected to recover once it is lost, it is preferable to judge renal function without overlooking false negatives for early-stage renal disease. In addition, if false positives are included, the subject will usually undergo a secondary test, where kidney disease is comprehensively judged from the values of other symptoms and markers, but of individual renal function. Measurement of inulin clearance is recommended for confirmation, which imposes a heavy burden not only on the subject but also on medical personnel. As described above, since cystatin C has a narrow measurement range, it is highly likely that it will be judged as negative in a subject showing decreased renal function. On the other hand, the amount of D-serine in blood has a high correlation with inulin clearance in a wide range from mild to high with respect to renal dysfunction, and a false negative of cystatin C test can be determined. In addition, while the amount of cystatin C is greatly affected by physique, which is also a cause of false negatives and false positives, D-serine in blood does not show a correlation with body surface area (BSA). It is unlikely that false negatives and false positives will occur even in subjects of physique.

本発明において、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査とは、血液中のシスタチンC量を用いた検査であってもよいし、血液中のシスタチンC量から導かれた数値を利用する検査であってもよい。血液中のシスタチンC量から導かれた数値としては、一例として推算糸球体濾過量であるが、これに限定されることを意図するものではない。血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査を受けた対象とは、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査を予め受けていてもよいし、同時に受けてもよい。腎機能検査を同時に受けるとは、同日に採取された同一血液試料又は異なる血液試料を用いて検査されてもよいし、異日に採取された血液試料を用いて検査されてもよい。 In the present invention, the renal function test based on the amount of cystatin C in blood may be a test using the amount of cystatin C in blood, or a test using a numerical value derived from the amount of cystatin C in blood. May be. The numerical value derived from the amount of cystatin C in blood is, for example, the estimated glomerular filtration rate, but it is not intended to be limited to this. A subject who has undergone a renal function test based on the amount of cystatin C in blood may or may not have undergone a renal function test based on the amount of cystatin C in blood in advance or at the same time. To undergo a renal function test at the same time may be tested using the same blood sample or different blood samples collected on the same day, or may be tested using blood samples collected on different days.

血液中のD−セリン量は、理論に限定されることを意図するものではないが、血液中シスタチンC量とは異なり体格による影響は少ないことに加えて、血液中のシスタチンC量に比較して、イヌリンクリアランスへの相関が高いことが利点である。したがって、血液中のD−セリン量を、従来の健康診断等で測定された血液中のシスタチンC量や、血液の中シスタチンC量に基づく推算糸球体濾過量に付随する偽陽性又は偽陰性の問題を解決することができる。 The amount of D-serine in blood is not intended to be limited to theory, but unlike the amount of cystatin C in blood, it is less affected by physique and compared to the amount of cystatin C in blood. The advantage is that it has a high correlation with inulin clearance. Therefore, the amount of D-serine in blood is false positive or false negative associated with the amount of cystatin C in blood measured by conventional medical examinations and the estimated amount of glomerular filtration based on the amount of cystatin C in blood. You can solve the problem.

本発明において、偽陽性とは、第一種過誤のことを指す。具体的に、血液中のシスタチンC量及び/又は血液中のシスタチンC量に基づく推算糸球体濾過量による検査では陽性(すなわち、腎機能低下)と判定された一方で、実際は腎機能低下を患っていないことをいう。偽陰性とは、第二種過誤のことを指す。具体的に血液中のシスタチンC量及び/又は血液中のシスタチンC量に基づく推算糸球体濾過量による検査では陰性(すなわち、腎機能正常)と判定された一方で、実際は腎機能低下を患っているこということをいう。理論に限定されることを意図するものではないが、ステロイドやシクロスポリンのような免疫に作用する薬剤を投与された対象では、血液中のシスタチンC量及び/又は血液中シスタチンC量に基づく推算糸球体濾過量による検査において、偽陽性の可能性が増加する。偽陽性及び偽陰性、さらには真陽性及び真陰性については下記の表を参照することで容易に理解することができる。

Figure 2020080482
In the present invention, the false positive refers to a type I error. Specifically, while the test by the estimated glomerular filtration rate based on the amount of cystatin C in blood and / or the amount of cystatin C in blood was positive (that is, decreased renal function), it actually suffered from decreased renal function. It means that it is not. False negatives refer to type II errors. Specifically, while the test by the estimated glomerular filtration rate based on the amount of cystatin C in blood and / or the amount of cystatin C in blood was negative (that is, normal renal function), it actually suffered from decreased renal function. It means to be. Although not intended to be limited to theory, in subjects treated with immune-acting agents such as steroids and cyclosporine, estimates based on the amount of cystatin C in the blood and / or the amount of cystatin C in the blood. Increased likelihood of false positives in sphere filtration tests. False positives and false negatives, as well as true positives and true negatives, can be easily understood by referring to the table below.
Figure 2020080482

偽陽性の決定は、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と決定することにより行われる。偽陰性の決定は、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定することにより行われる。これらの閾値は、対象の要素、例えば性別、年齢、体重等の区分によらず1の値を用いてもよいし、区分にしたがってそれぞれ決定されてもよい。 False positive determination is made by determining renal function decline by renal function test based on the amount of cystatin C in blood, while determining false positive when the amount of D-serine is lower than the threshold value. .. A false negative determination is made by determining a false negative when the amount of D-serine is higher than the threshold value, while it is determined to be normal by a renal function test based on the amount of cystatin C in the blood. For these threshold values, a value of 1 may be used regardless of the classification of the target element, for example, gender, age, body weight, etc., or each of them may be determined according to the classification.

本発明において、偽陽性又は偽陰性を検定する方法は、真陽性又は真陰性を検定する方法と換言することもできる。具体的に、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値を超えた場合に、真陽性と決定することにより行われる。真陰性の決定は、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より高いい場合に、真陰性と決定することにより行われる。 In the present invention, the method for testing false positives or false negatives can be paraphrased as the method for testing true positives or true negatives. Specifically, it is performed by determining that renal function is decreased by a renal function test based on the amount of cystatin C in blood, while it is determined to be true positive when the amount of D-serine exceeds the threshold value. A true negative determination is made by determining a true negative when the amount of D-serine is higher than the threshold value, while it is determined to be normal by a renal function test based on the amount of cystatin C in the blood.

本発明の検定方法は、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査を受けた対象の血液試料について行われるが、かかる血液試料は、血液中のシスタチンC量を測定するために用いた血液試料と同一試料であってもよいし、血液中のシスタチンC量を測定するために用いた血液試料とは、異なる時点で採取された試料であってもよい。 The assay method of the present invention is performed on a blood sample of a subject who has undergone a renal function test based on the amount of cystatin C in blood, and the blood sample is a blood sample used for measuring the amount of cystatin C in blood. It may be the same sample as the above, or it may be a sample collected at a different time point from the blood sample used for measuring the amount of cystatin C in the blood.

本発明の妥当性の検定方法は、閾値との比較により行われることから医師による判断を含まない。本発明の検定方法の結果に基づくことで、医師は腎臓病をより正確に診断することができる。したがって、本発明の検定方法は、診断の予備的方法又は診断の補助方法である。本発明の方法は、医師以外の者、例えば血液の分析業者、健康診断業者、データ処理会社、分析システム、及び分析プログラム等により実施されうる。本発明のさらに別の態様では、本発明の妥当性の検討方法を利用し、腎機能又は腎臓病を診断する方法に関してもよい。 The validation method of the present invention does not include a judgment by a doctor because it is performed by comparison with a threshold value. Based on the results of the assay method of the present invention, doctors can more accurately diagnose kidney disease. Therefore, the assay method of the present invention is a preliminary method for diagnosis or an auxiliary method for diagnosis. The method of the present invention can be carried out by a person other than a doctor, for example, a blood analyzer, a health checker, a data processing company, an analysis system, an analysis program, or the like. In yet another aspect of the present invention, the method for examining the validity of the present invention may be utilized to relate to a method for diagnosing renal function or renal disease.

本発明の、偽陽性及び偽陰性の検定により、腎機能の低下と判定された場合、腎機能のさらなる悪化を防ぐために早期治療又は保健指導が特に有効である。保健指導は、主に、生活習慣改善、食事指導、血圧管理、血糖値管理、及び脂質管理等が、独立に又は組み合わせて指導される。食事指導としては、減塩及びタンパク質制限が行われる。血圧管理としては、130/80mmHg以下となるように、管理が行われうる。血糖値は、Hba1c6.9%未満に管理が行われる。脂質管理では、LDL−C120mg/dL未満となるよう管理される。生活習慣改善としては、禁煙及びBMI値の25未満への減量等が推奨される。 When it is determined by the false positive and false negative tests of the present invention that renal function is deteriorated, early treatment or health guidance is particularly effective for preventing further deterioration of renal function. Health guidance mainly includes lifestyle-related improvement, dietary guidance, blood pressure control, blood glucose level control, lipid control, etc., independently or in combination. Dietary guidance includes salt reduction and protein restriction. Blood pressure can be controlled so as to be 130/80 mmHg or less. Blood glucose levels are controlled below Hba1c 6.9%. In lipid management, LDL-C is controlled to be less than 120 mg / dL. As lifestyle-related improvements, smoking cessation and weight reduction to a BMI value of less than 25 are recommended.

腎機能の低下が判定された場合、治療介入がされてもよい。治療介入としては、血圧管理、血糖値管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、免疫管理及び脂質管理等が、独立に又は組み合わせて行われる。この中でも特に、血圧管理、血糖値管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、免疫管理、脂質管理については、投薬による治療が行われうる。血圧管理としては、130/80mmHg以下となるように、管理され、場合により高血圧治療薬が投与されうる。高血圧治療薬としては、利尿薬(サイアザイド系利尿薬、例えばトリクロルメチアジド、ベンチルヒドロクロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、サイアザイド系類似利尿薬、例えばメチクラン、インダバミド、トリバミド、メフルシド、ループ利尿薬、例えばフロセミド、カリウム保持性利尿薬・アルドステロン拮抗薬、例えばトリアムテレン、スピロノラクトン、エプレレノン)、カルシウム拮抗薬(ジヒドロピリジン系、例えばニフェジピン、アムロジピン、エホニジピン、シルニジピン、ニカルジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、ニルバジピン、バルニジピン、フェロジピン、ベニジピン、マニジピン、アゼルニジピン、アラニジピン、ベンゾチアゼピン系、ジルチアゼム)、アンジオテンシン変換酵素阻害薬(カプトプリル、エナラプリル、アセラプリル、デラプリル、シラザプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、イミダプリル、テモカプリル、キナプリル、トランドラプリル、ベリンドプリルエルブミン)、アンジオテンシン受容体拮抗薬(アンジオテンシンII受容体拮抗薬、例えばロサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、オルメサルタン、イルベサルタン、アジルサルタン)、交感神経遮断薬(β遮断薬、例えばアテノロール、ビソプロロール、ベタキソロール、メトプロロール、アセプトロール、セリプロロール、プロプラノロール、ナドロール、カルテオロール、ピンドロール、ニプラジロール、アモスラロール、アロチノロール、カルベジロール、ラベタロール、ベバントロール、ウラピジル、テラゾシン、ブラゾシン、ドキサゾシン、ブナゾシン)等が用いられうる。貧血治療薬としてはエリスロポエチン製剤、鉄剤、HIF−1阻害剤等が用いられる。電解質調整薬としてカルシウム受容体作動薬(シナカルセト、エテルカルセチド等)、リン吸着剤が用いられる。尿毒素吸着剤として活性炭等が用いられる。血糖値は、Hba1c6.9%未満になるように管理され、場合により血糖降下薬が投与される。血糖降下薬として、SGLT2阻害薬(イプラグリフロジン、ダパグリフロジン、ルセオグリフロジン、トホグリフロジン、カナグリフロジン、エンパグリフロジン等)、DPP4阻害薬(シタグリプチンリン酸、ビルダグリプチン、サキサグリプチン、アログリプチン、リナグリプチン、テネリグリプチン、トレラグリプチン、アナグリプチン、オマリグリプチン)、スルホニル尿素薬(トルブタミド、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、グリクロピラミド、グリベンクラミド、グリクラジド、グリメピリド等)、チアゾリジン薬(ピオグリタゾン等)、ビグアナイド薬(メトホルミン、ブホルミン等)、α―グルコシダーゼ阻害薬(アカルボース、ボグリボース、ミグリトール等)、グリニド薬(ナテグリニド、ミチグリニド、レパグリニド)インスリン製剤、NRF2活性化剤(バルドキソロンメチル等)等が用いられる。免疫管理としては、免疫抑制剤(ステロイド類、タクロリムス、抗CD20抗体、シクロヘキサミド、ミコフェノール酸モフェチル(MMF)等)が用いられる。脂質管理では、LDL−C120mg/dL未満となるよう管理され、場合により脂質異常症治療薬、例えばスタチン系薬剤(ロスバスタチン、ピタバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン等)、フィブラート系薬剤(クロフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラート、クリノフィブラート)、ニコチン酸誘導体(ニコチン酸トコレロール、ニコモール、ニセリトロール)、コレステロールトランスポーター阻害剤(エゼチミブ)、PCSK9阻害剤(エボロクマブ等)、EPA製剤等が用いられる。いずれの薬剤も剤形は単剤でも合剤でもよい。腎機能の低下が著しく生命予後に危険が及ぶ場合は、腹膜透析、血液透析、持続的血液濾過透析、血液アフェレーシス(血漿交換、血漿吸着等)や腎移植のような腎代替療法が施される。 If a decrease in renal function is determined, therapeutic intervention may be given. As the therapeutic intervention, blood pressure control, blood glucose level control, anemia control, electrolyte control, uremic toxin control, immune control, lipid control and the like are performed independently or in combination. Among these, in particular, blood pressure control, blood glucose level control, anemia control, electrolyte control, uremic toxin control, immune control, and lipid control can be treated by medication. Blood pressure is controlled so as to be 130/80 mmHg or less, and an antihypertensive drug can be administered in some cases. Antihypertensive agents include diuretics (siazide diuretics such as trichloromethiazide, ventilhydrochlorothiazide, hydrochlorothiazide, siazide-like diuretics such as methiclan, indabamid, tribamide, mefluside, loop diuretics such as frosemid and potassium retention. Diuretics / aldosterone antagonists such as triamterene, spironolactone, eprelenone), calcium antagonists (dihydropyridines such as nifedipine, amlogipin, ehonidipine, silnidipine, nicardipine, nisoldipine, nitrenizedin, nilvadipine, balnidipine, ferrodipine, benidipine, manidipine , Benzothiazepines, diuretics), angiotensin converting enzyme inhibitors (captopril, enalapril, acerapril, derapril, silazapril, diuretic, benazepril, imidapril, temocapril, quinapril, trandrapril, verindopril antene), angiotensin Drugs (angiotensin II receptor blockers such as rosartan, candesartan, balsartan, thermisartan, olmesartan, ilbesartan, azilsartan), sympathetic blockers (β-blockers such as atenolol, bisoprol, betaxolol, metprolol, aseptrol, diuretic) , Proplanolol, nadrol, carteolol, pindrol, nipradilol, amosulalol, arotinolol, carvegilol, labetarol, bevantrol, urapidil, terrazosin, brazosin, doxazosin, benazosin) and the like can be used. As the anemia therapeutic agent, an erythropoietin preparation, an iron preparation, a HIF-1 inhibitor and the like are used. Calcium receptor agonists (cinacalcet, etelcalcetide, etc.) and phosphorus adsorbents are used as electrolyte regulators. Activated carbon or the like is used as a uremic toxin adsorbent. Blood glucose levels are controlled to be less than Hba1c 6.9%, and hypoglycemic agents are optionally administered. As hypoglycemic agents, SGLT2 inhibitors (ipragliflozin, dapagliflozin, luseogliflozin, tohogliflozin, canagliflozin, empagliflozin, etc.), DPP4 inhibitors (citagliptin phosphate, bildagliptin, saxagliptin, allogliptin, linagliptin, tenerigliptin , Anagliptin, Omarigliptin), Sulfonylurea drugs (tolbutamide, acethexamide, chlorpropamide, glycopyramide, glibenclamide, glycladide, glymepyride, etc.), thiazolidine drugs (pioglycazone, etc.), biguanide drugs (metformin, buformin, etc.), α- Glucosidase inhibitors (acarbose, boglibose, miglycol, etc.), glinide drugs (nateglinide, mitiglunide, repaglinide) insulin preparations, NRF2 activators (baldoxolone methyl, etc.) and the like are used. For immunosuppression, immunosuppressive agents (steroids, tacrolimus, anti-CD20 antibody, cyclohexamide, mycophenolate mofetil (MMF), etc.) are used. In lipid management, LDL-C is controlled to be less than 120 mg / dL, and in some cases, dyslipidemia therapeutic agents, for example, statins (rosvasstatin, pitavastatin, atorvastatin, serivastatin, fluvasstatin, simvastatin, pravastatin, lovastatin, mevasstatin, etc.), Fibrates (clofibrates, bezafibrates, phenofibrate, clinofibrate), nicotinic acid derivatives (tocholerol nicotinate, nicomol, fisseritrol), cholesterol transporter inhibitors (ezetimib), PCSK9 inhibitors (evolocumab, etc.), EPA preparations, etc. Is used. The dosage form of each drug may be a single agent or a combination agent. Renal replacement therapy such as peritoneal dialysis, hemodialysis, continuous hemodiafiltration, blood apheresis (plasma exchange, plasma adsorption, etc.) and kidney transplantation are given when renal function declines significantly and the prognosis of life is at risk. ..

本発明の別の態様では、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法を実行する試料分析システム又はプログラムに関していてもよい。図4は、本発明の試料分析システムの構成図である。図4に示す試料分析システム10は、本発明の血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の偽陰性及び偽陽性を検定する方法を実施することができるように構成される。このような試料分析システム10は、記憶部11と、入力部12、分析測定部13と、データ処理部14と、出力部15とを含んでおり、血液試料を分析し、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果について、妥当性、すなわち真陰性、真陽性、偽陰性、又は偽陽性を出力することができる。 In another aspect of the invention, it may relate to a sample analysis system or program that implements a method of validating renal function test results based on the amount of cystatin C in blood. FIG. 4 is a block diagram of the sample analysis system of the present invention. The sample analysis system 10 shown in FIG. 4 is configured to be able to carry out a method for testing false negatives and false positives of renal function test results based on the amount of cystatin C in blood of the present invention. Such a sample analysis system 10 includes a storage unit 11, an input unit 12, an analysis measurement unit 13, a data processing unit 14, and an output unit 15, analyzes a blood sample, and cystatin C in the blood. For the amount-based renal function test results, the validity, that is, true negative, true positive, false negative, or false positive can be output.

より具体的に、本発明の試料分析システム10において、
記憶部11は、入力部12から入力されたD−セリン量の閾値を記憶し、
記憶部11は、入力部12から入力された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を記憶し、
分析測定部13は、血液試料中のD−セリンを分離定量し、
データ処理部14は、D−セリン量を、記憶部に記憶されたD−セリン量の閾値と比較し、記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定し、
出力部15が血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を出力することができる。
More specifically, in the sample analysis system 10 of the present invention,
The storage unit 11 stores the threshold value of the amount of D-serine input from the input unit 12 and stores the threshold value.
The storage unit 11 stores the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit 12 and stores the result.
The analysis / measurement unit 13 separates and quantifies D-serine in the blood sample, and then separates and quantifies it.
The data processing unit 14 compares the amount of D-serine with the threshold of the amount of D-serine stored in the storage unit, and validates the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood stored in the storage unit. Judging,
The output unit 15 can output the validity of the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood.

さらに好ましい態様では、本発明の試料分析システムは、記憶部11が、入力部12から入力された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を記憶する工程に代えて、分析測定部13が、血液試料中のシスタチンC量を決定する工程を含んでもよい。この場合、さらにデータ処理部14が、血液試料中のシスタチンC量に基づいて、腎機能検査の結果を判定し、判定された結果を記憶部が記憶する工程を含んでもよい。この場合、記憶部11が入力部12から入力された血液中のシスタチンC量についての閾値を予め記憶し、データ処理部14が血液中のシスタチンC量と、記憶された血液中のシスタチンC量についての閾値とを比較することで腎機能検査の結果が判定される。 In a more preferred embodiment, in the sample analysis system of the present invention, instead of the step in which the storage unit 11 stores the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit 12, the analysis measurement unit 13 However, it may include a step of determining the amount of cystatin C in the blood sample. In this case, the data processing unit 14 may further determine the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood sample, and the storage unit may store the determined result. In this case, the storage unit 11 stores in advance the threshold value for the amount of cystatin C in the blood input from the input unit 12, and the data processing unit 14 stores the amount of cystatin C in the blood and the stored amount of cystatin C in the blood. The result of the renal function test is determined by comparing with the threshold value of.

より具体的に、ある態様の本発明の試料分析システム10において、
記憶部11は、入力部12から入力された血液中のシスタチンC量の閾値を記憶し、
記憶部11は、入力部12から入力されたD−セリン量の閾値を記憶し、
分析測定部13は、血液試料中のシスタチンC量を測定し、
データ処理部14は、記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量の閾値と血液試料中のシスタチンC量とを比較し、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を判定し
分析測定部13は、血液試料中のD−セリンを分離定量し、
データ処理部14は、血液中のD−セリン量を、記憶部に記憶されたD−セリン量の閾値と比較し、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定し、
出力部15が血液中シスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を出力することができる。
More specifically, in the sample analysis system 10 of the present invention in a certain aspect,
The storage unit 11 stores the threshold value of the amount of cystatin C in the blood input from the input unit 12 and stores the threshold value.
The storage unit 11 stores the threshold value of the amount of D-serine input from the input unit 12 and stores the threshold value.
The analysis / measurement unit 13 measures the amount of cystatin C in the blood sample and determines the amount of cystatin C.
The data processing unit 14 compares the threshold value of the amount of cystatin C in the blood stored in the storage unit with the amount of cystatin C in the blood sample, and determines and analyzes the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood. The measuring unit 13 separates and quantifies D-serine in the blood sample and determines it.
The data processing unit 14 compares the amount of D-serine in the blood with the threshold of the amount of D-serine stored in the storage unit, and determines the validity of the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood. ,
The output unit 15 can output the validity of the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in blood.

血液中のシスタチンC量として、血液中のシスタチンC量から導かれた数値(例えば推算糸球体濾過量)を使用することもできる。一例として、血液中のシスタチンC量から導かれた数値を用いる場合、記憶部11は入力部12から入力された対象の年齢及び性別等のその他の要素を記憶し、さらに血液中のシスタチンC量から導かれた数値を算出する式又はグラフを記憶し、データ処理部14が、測定された血液中のシスタチンC量と、記憶部11に記憶された対象の年齢及び性別等のその他の要素と、血液中のシスタチンC量から導かれた数値を算出する式又はグラフとから数値を算出する工程を含んでもよい。推算糸球体濾過量の閾値としては、一例として60mL/分/1.73m2を用いることができる。As the amount of cystatin C in blood, a numerical value derived from the amount of cystatin C in blood (for example, estimated glomerular filtration rate) can also be used. As an example, when a numerical value derived from the amount of cystatin C in blood is used, the storage unit 11 stores other factors such as the age and sex of the subject input from the input unit 12, and further, the amount of cystatin C in blood. The formula or graph for calculating the numerical value derived from is stored, and the data processing unit 14 stores the measured amount of cystatin C in the blood and other factors such as the age and sex of the subject stored in the storage unit 11. , The step of calculating the numerical value from the formula or the graph for calculating the numerical value derived from the amount of cystatin C in the blood may be included. As an example, 60 mL / min / 1.73 m 2 can be used as the threshold value of the estimated glomerular filtration rate.

より具体的に、推算糸球体濾過量を用いる場合、本発明の試料分析システム10において、
記憶部11は、入力部12から入力された血液中のシスタチンC量に基づく推算糸球体濾過量の算出式を記憶し、
記憶部11は、入力部12から入力された被験者の年齢及び性別を記憶し、
記憶部11は、入力部12から入力された血液中のシスタチンC量に基づく推糸球体濾過量の閾値を記憶し、
記憶部11は、入力部12から入力されたD−セリン量の閾値を記憶し、
分析測定部13は、血液試料中のシスタチンC量を測定し、
データ処理部14は、血液中のシスタチンC量と、記憶部に記憶された被験者の年齢、性別と、推算糸球体濾過量の算出式から、推算糸球体濾過量を算出し、
データ処理部14は、記憶部に記憶された推算糸球体濾過量の閾値と算出された推算糸球体濾過量とを比較し、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を判定し、
分析測定部13は、血液試料中のD−セリンを分離定量し、
データ処理部14は、血液中のD−セリン量を、記憶部に記憶されたD−セリン量の閾値と比較し、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定し、
出力部15が血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を出力することができる。
More specifically, when the estimated glomerular filtration rate is used, in the sample analysis system 10 of the present invention,
The storage unit 11 stores a formula for calculating the estimated glomerular filtration rate based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit 12.
The storage unit 11 stores the age and gender of the subject input from the input unit 12 and stores the subject.
The storage unit 11 stores the threshold value of the glomerular filtration rate based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit 12.
The storage unit 11 stores the threshold value of the amount of D-serine input from the input unit 12 and stores the threshold value.
The analysis / measurement unit 13 measures the amount of cystatin C in the blood sample and determines the amount of cystatin C.
The data processing unit 14 calculates the estimated glomerular filtration rate from the amount of cystatin C in the blood, the age and sex of the subject stored in the storage unit, and the calculation formula of the estimated glomerular filtration amount.
The data processing unit 14 compares the threshold value of the estimated glomerular filtration rate stored in the storage unit with the calculated estimated glomerular filtration rate, determines the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood, and determines the result of the renal function test.
The analysis / measurement unit 13 separates and quantifies D-serine in the blood sample, and then separates and quantifies it.
The data processing unit 14 compares the amount of D-serine in the blood with the threshold of the amount of D-serine stored in the storage unit, and determines the validity of the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood. ,
The output unit 15 can output the validity of the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood.

データ処理部14において腎機能検査の結果の妥当性は、D−セリン量とその閾値との比較により、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性が決定される。具体的には、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と決定し、D−セリン量が前記閾値より高い場合に、真陽性と決定することができる。一方で、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定し、D−セリン量が前記閾値より低い場合に、真陰性と決定することができる。 The validity of the result of the renal function test in the data processing unit 14 is determined by comparing the amount of D-serine with the threshold value thereof, and the validity of the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in blood. Specifically, a renal function test based on the amount of cystatin C in the blood determined that renal function was decreased, but when the amount of D-serine was lower than the threshold value, it was determined to be false positive and the amount of D-serine was determined. Is higher than the threshold value, it can be determined to be true positive. On the other hand, while the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood was determined to be normal, when the amount of D-serine was higher than the threshold value, it was determined to be false negative, and the amount of D-serine was higher than the threshold value. If it is low, it can be determined to be true negative.

記憶部11は、RAM、ROM、フラッシュメモリ等のメモリ装置、ハードディスクドライブ等の固定ディスク装置、又はフレキシブルディスク、光ディスク等の可搬用の記憶装置等を有する。記憶部は、分析測定部で測定したデータ、入力部から入力されたデータ及び指示、データ処理部で行った演算処理結果等の他、情報処理装置の各種処理に用いられるコンピュータプログラム、データベース等を記憶する。コンピュータプログラムは、例えばCD−ROM、DVD−ROM等のコンピュータ読み取り可能な記録媒体や、インターネットを介してインストールされてもよい。コンピュータプログラムは、公知のセットアッププログラム等を用いて記憶部にインストールされる。記憶部は、予め入力部12から入力されたD−セリン量の閾値、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を記憶することができる。さらには、腎機能検査のための血液中のシスタチンC量の閾値を記憶することができる。また、血液中のシスタチンC量の代わりに推算糸球体濾過量を用いる場合には、推算糸球体濾過量の閾値を記憶してもよく、さらには血液中のシスタチンC量に基づく推算糸球体濾過量の算出式を記憶し、また被験者の年齢、性別を記憶することができる。また、分析測定部13が測定した結果や、データ処理部14が行った処理の結果も記憶する。 The storage unit 11 includes a memory device such as a RAM, ROM, and a flash memory, a fixed disk device such as a hard disk drive, or a portable storage device such as a flexible disk and an optical disk. The storage unit stores data measured by the analysis and measurement unit, data and instructions input from the input unit, calculation processing results performed by the data processing unit, computer programs used for various processing of the information processing device, databases, etc. Remember. The computer program may be installed via a computer-readable recording medium such as a CD-ROM or a DVD-ROM, or via the Internet. The computer program is installed in the storage unit using a known setup program or the like. The storage unit can store the result of the renal function test based on the threshold value of the amount of D-serine and the amount of cystatin C in the blood input in advance from the input unit 12. Furthermore, the threshold value of the amount of cystatin C in blood for renal function test can be memorized. When the estimated glomerular filtration rate is used instead of the amount of cystatin C in the blood, the threshold value of the estimated glomerular filtration rate may be stored, and further, the estimated glomerular filtration based on the amount of cystatin C in the blood. The formula for calculating the amount can be memorized, and the age and gender of the subject can be memorized. In addition, the result of measurement by the analysis and measurement unit 13 and the result of processing performed by the data processing unit 14 are also stored.

入力部12は、インターフェイス等であり、キーボード、マウス等の操作部も含む。これにより、入力部は、分析測定部13で測定したデータ、データ処理部14で行う演算処理の指示等を入力することができる。また、入力部12は、例えば分析測定部13が外部にある場合は、操作部とは別に、測定したデータ等をネットワークや記憶媒体を介して入力することができるインターフェイス部を含んでもよい。 The input unit 12 is an interface or the like, and includes an operation unit such as a keyboard and a mouse. As a result, the input unit can input the data measured by the analysis measurement unit 13, the instruction of the arithmetic processing performed by the data processing unit 14, and the like. Further, for example, when the analysis measurement unit 13 is outside, the input unit 12 may include an interface unit capable of inputting measured data or the like via a network or a storage medium, in addition to the operation unit.

分析測定部13は、血液試料におけるD−セリンの測定工程を行う。したがって、分析測定部13は、アミノ酸のD体及びL体の分離及び測定を可能にする構成を有する。アミノ酸は、1つずつ分析されてもよいが、一部又は全ての種類のアミノ酸についてまとめて分析することができる。分析測定部13は、以下のものに限定されることを意図するものではないが、例えば試料導入部、光学分割カラム、検出部を備えたキラルクロマトグラフィーシステム、好ましくは高速液体クロマトグラフィーシステムであってもよい。特定のアミノ酸量のみを検出する観点では、酵素法や免疫学的手法による実施してもよい。分析測定部13は、試料分析システムとは別に構成されていてもよく、測定したデータ等をネットワークや記憶媒体を用いて入力部12を介して入力してもよい。さらに、別の態様では、分析測定部13は、血液中のシスタチンC量を測定することもできる。 The analysis and measurement unit 13 performs a step of measuring D-serine in a blood sample. Therefore, the analysis / measurement unit 13 has a configuration that enables the separation and measurement of the D-form and the L-form of amino acids. Amino acids may be analyzed one by one, but some or all types of amino acids can be analyzed together. The analytical measurement unit 13 is not intended to be limited to the following, but is, for example, a chiral chromatography system including a sample introduction unit, an optical resolution column, and a detection unit, preferably a high performance liquid chromatography system. You may. From the viewpoint of detecting only a specific amount of amino acids, it may be carried out by an enzymatic method or an immunological method. The analysis / measurement unit 13 may be configured separately from the sample analysis system, and the measured data or the like may be input via the input unit 12 using a network or a storage medium. Furthermore, in another aspect, the analytical measurement unit 13 can also measure the amount of cystatin C in the blood.

データ処理部14は、記憶部に記憶しているプログラムに従って、分析測定部13で測定され記憶部11に記憶されたデータに対して、各種の演算処理を実行する。演算処理は、データ処理部に含まれるプロセッサ又はCPUによりおこなわれる。このプロセッサ又はCPUは、分析測定部13、入力部12、記憶部11、及び出力部15を制御する機能モジュールを含み、各種の制御を行うことができる。これらの各部は、それぞれ独立した集積回路、マイクロプロセッサ、ファームウェア等で構成されてもよい。データ処理部14は、D−セリン量を、記憶部に記憶されたD−セリン量の閾値と比較し、記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定する。別の態様では、データ処理部14は、血液中のシスタチンC量と、記憶部に記憶された被験者の年齢、性別と、推算糸球体濾過量の算出式から、推算糸球体濾過量を算出することができる。この場合、データ処理部14は、さらに、記憶部に記憶された推算糸球体濾過量の閾値と算出された推算糸球体濾過量とを比較し、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の判定も行うことができる。 The data processing unit 14 executes various arithmetic processes on the data measured by the analysis and measurement unit 13 and stored in the storage unit 11 according to the program stored in the storage unit. The arithmetic processing is performed by the processor or CPU included in the data processing unit. This processor or CPU includes a functional module that controls an analysis measurement unit 13, an input unit 12, a storage unit 11, and an output unit 15, and can perform various controls. Each of these parts may be composed of independent integrated circuits, microprocessors, firmware, and the like. The data processing unit 14 compares the amount of D-serine with the threshold of the amount of D-serine stored in the storage unit, and validates the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood stored in the storage unit. To judge. In another aspect, the data processing unit 14 calculates the estimated glomerular filtration amount from the amount of cystatin C in the blood, the age and sex of the subject stored in the storage unit, and the calculation formula of the estimated glomerular filtration amount. be able to. In this case, the data processing unit 14 further compares the threshold value of the estimated glomerular filtration rate stored in the storage unit with the calculated estimated glomerular filtration rate, and performs a renal function test based on the amount of cystatin C in the blood. The result can also be determined.

出力部15は、データ処理部で判定された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性、すなわち真陰性、真陽性、偽陰性、又は偽陽性を出力するように構成される。さらに出力部15は、分析測定部13で測定されたD−セリン量、血液中のシスタチンC量、又はデータ処理部14で算出された推算糸球体濾過量を、上述の妥当性と併せて出力してもよい。出力部15は、演算処理の結果を直接表示する液晶ディスプレイ等の表示装置、プリンタ等の出力手段であってもよいし、外部記憶装置への出力又はネットワークを介して出力するためのインターフェイス部であってもよい。 The output unit 15 is configured to output the validity of the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood determined by the data processing unit, that is, true negative, true positive, false negative, or false positive. .. Further, the output unit 15 outputs the amount of D-serine measured by the analysis measurement unit 13, the amount of cystatin C in blood, or the estimated glomerular filtration amount calculated by the data processing unit 14, together with the above-mentioned validity. You may. The output unit 15 may be a display device such as a liquid crystal display that directly displays the result of arithmetic processing, an output means such as a printer, or an interface unit for outputting to an external storage device or outputting via a network. There may be.

図5は、本発明のプログラムによる糸球体濾過量を決定するための動作の例を示すフローチャートである。具体的に、本発明のプログラムは、入力部、出力部、データ処理部、記憶部とを含む情報処理装置に血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定させるプログラムである。本発明のプログラムは、以下の:
入力部から入力されたD−セリン量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のD−セリン量を記憶させ、
記憶部に記憶されたD−セリン量と、D−セリン量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、閾値を上回るか下回るかについて比較の結果を記憶部に記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果と、比較の結果を読み出し、腎機能検査の結果の妥当性を判定して、記憶部に記憶させ、
記憶された妥当性を出力部に出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む。本発明のプログラムは、記憶媒体に格納されてもよいし、インターネット又はLAN等の電気通信回線を介して提供されてもよい。
FIG. 5 is a flowchart showing an example of an operation for determining the glomerular filtration rate according to the program of the present invention. Specifically, the program of the present invention is a program that causes an information processing apparatus including an input unit, an output unit, a data processing unit, and a storage unit to determine the validity of the result of a renal function test based on the amount of cystatin C in blood. be. The program of the present invention is as follows:
The threshold value of the amount of D-serine input from the input unit is stored in the storage unit, and the threshold value is stored in the storage unit.
The result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit is stored in the memory unit.
The amount of D-serine in the blood sample input from the input unit is memorized and stored.
The amount of D-serine stored in the storage unit and the threshold value of the amount of D-serine are read out, compared by the data processing unit, and the result of the comparison is stored in the storage unit as to whether the threshold value is exceeded or decreased.
The result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood stored in the memory and the result of the comparison are read out, the validity of the result of the renal function test is judged, and the result is stored in the memory.
It includes a command for causing the information processing apparatus to output the stored validity to the output unit. The program of the present invention may be stored in a storage medium or may be provided via a telecommunication line such as the Internet or LAN.

腎機能検査の結果の妥当性は、腎機能検査の結果と、比較の結果に基づいて決定される。具体的には、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と決定し、D−セリン量が前記閾値より高い場合に、真陽性と決定することができる。一方で、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定し、D−セリン量が前記閾値より低い場合に、真陰性と決定することができる。 The validity of the results of the renal function test is determined based on the results of the renal function test and the results of comparison. Specifically, a renal function test based on the amount of cystatin C in the blood determined that renal function was decreased, but when the amount of D-serine was lower than the threshold value, it was determined to be false positive and the amount of D-serine was determined. Is higher than the threshold value, it can be determined to be true positive. On the other hand, while the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood was determined to be normal, when the amount of D-serine was higher than the threshold value, it was determined to be false negative, and the amount of D-serine was higher than the threshold value. If it is low, it can be determined to be true negative.

本発明のプログラムは、入力部12から血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を入力する代わりに、入力部12から血液中のシスタチンC量を入力することで、データ処理部14が、記憶部11に記憶された血液中のシスタチンC量の閾値と比較して、腎機能検査の結果を判定させる指令を含んでもよい。 In the program of the present invention, instead of inputting the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in blood from the input unit 12, the data processing unit 14 inputs the amount of cystatin C in blood from the input unit 12. , The command to determine the result of the renal function test by comparing with the threshold of the amount of cystatin C in the blood stored in the storage unit 11 may be included.

より具体的に、本発明のプログラムは、入力部12から入力された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を記憶部11に記憶させる指令に代えて、以下の:
入力部12から入力された血液中のシスタチンC量の閾値を記憶部11に記憶させ、
入力部12から入力された血液中のシスタチンC量を記憶部11に記憶させ、
記憶部11に記憶された血液中のシスタチンC量と、血液中シスタチンC量の閾値とを読み出し、データ処理部14で比較して、閾値を上回るか下回るかにより、腎機能検査の結果を判定して、腎機能検査の結果を記憶部11に記憶させる
指令を含むプログラムであってもよい。
More specifically, in the program of the present invention, instead of the command to store the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit 12 in the storage unit 11, the following:
The threshold value of the amount of cystatin C in the blood input from the input unit 12 is stored in the storage unit 11, and the storage unit 11 is used to store the threshold value.
The amount of cystatin C in the blood input from the input unit 12 is stored in the storage unit 11, and the storage unit 11 is used to store the amount of cystatin C in the blood.
The amount of cystatin C in blood stored in the storage unit 11 and the threshold value of the amount of cystatin C in blood are read out, compared by the data processing unit 14, and the result of the renal function test is determined based on whether the threshold is exceeded or decreased. Then, the program may include a command to store the result of the renal function test in the storage unit 11.

情報処理装置が、分析測定部13を備える場合に、入力部12から血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を入力する代わりに、分析測定部13に血液試料中のD−セリン量を分離定量させ、データ処理部14が、記憶部11に記憶された血液中のシスタチンC量の閾値と比較することで、腎機能検査の結果を判定する指令を含んでもよい。 When the information processing apparatus includes the analysis measurement unit 13, instead of inputting the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood from the input unit 12, the amount of D-serine in the blood sample is input to the analysis measurement unit 13. The data processing unit 14 may include a command to determine the result of the renal function test by separating and quantifying the blood and comparing it with the threshold value of the amount of cystatin C in the blood stored in the storage unit 11.

より具体的に、本発明のプログラムは、入力部12から入力された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を記憶部11に記憶させる指令に代えて、以下の:
入力部12から入力された血液中のシスタチンC量の閾値を記憶部11に記憶させ、
分析測定部13を作動させて血液中シスタチンC量を測定し、記憶部11に記憶させ、
記憶部11に記憶された血液中のシスタチンC量と、血液中のシスタチンC量の閾値とを読み出し、データ処理部14で比較して、腎機能検査の結果を判定して、腎機能検査の結果を記憶部11に記憶させる
指令を含むプログラムであってもよい。
More specifically, in the program of the present invention, instead of the command to store the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit 12 in the storage unit 11, the following:
The threshold value of the amount of cystatin C in the blood input from the input unit 12 is stored in the storage unit 11, and the storage unit 11 is used to store the threshold value.
The analysis and measurement unit 13 was operated to measure the amount of cystatin C in the blood and stored in the storage unit 11.
The amount of cystatin C in blood stored in the storage unit 11 and the threshold value of the amount of cystatin C in blood are read out, compared by the data processing unit 14, the result of the renal function test is determined, and the renal function test is performed. The program may include a command to store the result in the storage unit 11.

血液中のシスタチンC量に代えて、血液中のシスタチンC量から算出した推算糸球体濾過量を用いるプログラムを用いてもよい。この場合、さらに入力部から入力された推算糸球体濾過量を記憶部に記憶させる指令に代えて、
入力部12から入力された被験者の年齢、性別を記憶部11に記憶させ、
入力部12から入力された、血液中のシスタチンC量に基づく推算糸球体濾過量の算出式を記憶部11に記憶させ、
分析測定部13に血液試料中のシスタチンC量を測定させて、記憶部11に記憶させ、
データ処理部に、記憶部に記憶された年齢、性別、及び血液中のシスタチンC量を算出式に代入させて、推算糸球体濾過量を算出して、記憶部11に記憶させる
指令を含んでもよい。
Instead of the amount of cystatin C in the blood, a program using the estimated glomerular filtration rate calculated from the amount of cystatin C in the blood may be used. In this case, instead of the command to store the estimated glomerular filtration amount input from the input unit in the storage unit,
The age and gender of the subject input from the input unit 12 are stored in the storage unit 11, and the subject is stored in the storage unit 11.
The storage unit 11 stores the calculation formula of the estimated glomerular filtration rate based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit 12.
The analysis and measurement unit 13 was made to measure the amount of cystatin C in the blood sample, and the storage unit 11 was made to store the amount of cystatin C.
Even if the data processing unit includes a command to substitute the age, gender, and the amount of cystatin C in the blood stored in the storage unit into the calculation formula, calculate the estimated glomerular filtration rate, and store it in the storage unit 11. good.

本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。 All references referred to herein are incorporated herein by reference in their entirety.

以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。 The examples of the present invention described below are for purposes of illustration only and do not limit the technical scope of the present invention. The technical scope of the present invention is limited only by the description of the claims. Modifications of the present invention, for example, addition, deletion and replacement of the constituent elements of the present invention, can be made on condition that the gist of the present invention is not deviated.

被験者集合
診断及び/又は治療目的のために大阪大学医学部付属病院腎臓内科((Department of Nephrology,Osaka University Hospital))に、2016年〜2017年の間に入院した慢性腎臓病(CKD)患者からなるコホートから、11人の患者について、後ろ向き研究に用いた。それとは別に、国立医薬基盤・健康・栄養研究所で15名の20歳以上の健常ボランティアを採用した。試験プロトコルは、各施設における倫理委員会により承認され、かつすべての被験者から書類によるインフォームドコンセントを取得した。
Subject group Consists of patients with chronic kidney disease (CKD) who were admitted to the Department of Nephrology (Department of Nephrology, Osaka University Hospital), Osaka University Hospital for diagnosis and / or treatment purposes between 2016 and 2017. From the cohort, 11 patients were used in a retrospective study. Separately, the National Institutes of Biomedical Innovation, Health and Nutrition hired 15 healthy volunteers over the age of 20. The test protocol was approved by the institutional review board and obtained informed consent in writing from all subjects.

健常者及び慢性腎臓病患者の情報は下記の通りである:

Figure 2020080482
Information on healthy individuals and patients with chronic kidney disease is as follows:
Figure 2020080482

イヌリン腎臓クリアランスの計測方法
被験者のイヌリンクリアランス(Cin)を、Clin Exp Nephrol 13,50−54(2009)に記載された標準方法に従い、血漿及び尿のイヌリン濃度、並びに尿体積から計算した。簡潔に記載すると、絶食、服薬延期、及び水負荷環境下で、1%のイヌリン(イヌリード注:株式会社富士薬品)を2時間の持続静脈内点滴の間に、血液及び尿サンプルを異なる3時点で採取した。被験者は、点滴の30分前に、経口で500mLの水を飲水した。水負荷を維持するために、イヌリン点滴の開始後、60mLの水を40、60、90分で飲水した。点滴の初期速度は、最初の30分間について、300mL/hであり、続いて90分について100mL/hとした。イヌリン点滴の開始後、45、75、及び105分において血液試料を採取した。被験者は、点滴開始後、30分で完全に膀胱を空にするように排尿した。次に、尿サンプルを、30分〜60分の間、60分〜90分の間、及び90〜120分の間で採取した。イヌリンは、酵素法を用いて計測した。3つのCin値の平均を、標準方法によるCin(Cin−ST)として用いた。
Method for Measuring Inulin Kidney Clearance The subject's inulin clearance (Cin) was calculated from plasma and urine inulin concentrations and urine volume according to the standard method described in Clin Exp Nephrol 13, 50-54 (2009). Briefly, blood and urine samples at 3 different time points during a 2-hour continuous intravenous infusion of 1% inulin (Inulin Lead Note: Fuji Yakuhin Co., Ltd.) under fasting, postponement of medication, and water-loaded environments. Collected in. The subject drank 500 mL of water orally 30 minutes before the infusion. To maintain the water load, 60 mL of water was drunk at 40, 60 and 90 minutes after the start of inulin infusion. The initial rate of infusion was 300 mL / h for the first 30 minutes, followed by 100 mL / h for 90 minutes. Blood samples were taken 45, 75, and 105 minutes after the start of inulin infusion. The subject urinates to completely empty the bladder 30 minutes after the start of the infusion. Urine samples were then taken between 30-60 minutes, 60-90 minutes, and 90-120 minutes. Inulin was measured using the enzymatic method. The average of the three Cin values was used as Cin (Cin-ST) by the standard method.

血液中D−アミノ酸の測定
サンプル調整
ヒト血漿からのサンプル調整を、下記のとおり行った:
20倍体積のメタノールを血漿に添加し、完全に混合した。遠心後、メタノールホモジェネートから得られた上清の10μLを褐色チューブに移し、減圧乾燥させた。残渣に対し、20μLの200mMホウ酸ナトリウム緩衝液(pH8.0)及び5μLの蛍光標識試薬(無水MeCN中に40mMの4−フルオロ―7−ニトロ−2,1,3−ベンゾオキサジアゾール(NBD−F))を添加し、次いで60℃で2分加熱した。75μlの0.1%TFA水溶液(v/v)を加えて反応を止め、そして2μLの反応混合液を2次元HPLCに供した。
Measurement of blood D-amino acid Sample preparation Sample preparation from human plasma was performed as follows:
Twenty-fold volume of methanol was added to the plasma and mixed thoroughly. After centrifugation, 10 μL of the supernatant obtained from methanol homogenate was transferred to a brown tube and dried under reduced pressure. For the residue, 20 μL of 200 mM sodium borate buffer (pH 8.0) and 5 μL of fluorescent labeling reagent (40 mM 4-fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole (NBD) in anhydrous MeCN). -F)) was added and then heated at 60 ° C. for 2 minutes. The reaction was stopped by adding 75 μl of 0.1% TFA aqueous solution (v / v), and 2 μL of the reaction mixture was subjected to two-dimensional HPLC.

2次元HPLCによるアミノ酸光学異性体の定量
アミノ酸光学異性体を、以下の2次元HPLCシステムを用いて定量した。アミノ酸のNBD誘導体を、逆相カラム(KSAA RP、1.0mmi.d. ×400mm;株式会社資生堂)を用い移動相(5〜35%MeCN、0〜20%THF、及び0.05%TFA)で分離、溶出した。カラム温度は45℃、移動相の流速は25μL/分に設定した。分離したアミノ酸の画分を、マルチループバルブを用いて分取し、連続的にキラルカラム(KSAACSP−001S,1.5mmi.d.×250mm;資生堂)で光学分割した。移動相として、アミノ酸の保持に応じて、クエン酸(0〜10mM)又はギ酸(0〜4%)含むMeOH− MeCNの混合用液を用いた。NBD−アミノ酸は、470nmの励起光を用い、530nmで蛍光検出した。NBD−アミノ酸の保持時間は、アミノ酸光学異性体の標準品により同定し、検量線により定量した。
Quantification of amino acid optical isomers by two-dimensional HPLC Amino acid optical isomers were quantified using the following two-dimensional HPLC system. NBD derivatives of amino acids were subjected to mobile phase (5-35% MeCN, 0-20% THF, and 0.05% TFA) using a reverse phase column (KSAA RP, 1.0 mmid × 400 mm; Shiseido Co., Ltd.). Separated and eluted with. The column temperature was set to 45 ° C. and the flow rate of the mobile phase was set to 25 μL / min. The separated amino acid fractions were fractionated using a multi-loop valve and continuously optically resolved by a chiral column (KSAACSP-001S, 1.5 mmid × 250 mm; Shiseido). As the mobile phase, a MeOH-MeCN mixing solution containing citric acid (0 to 10 mM) or formic acid (0 to 4%) was used, depending on the retention of amino acids. The NBD-amino acid was fluorescently detected at 530 nm using excitation light at 470 nm. The retention time of NBD-amino acid was identified by a standard product of amino acid optical isomers and quantified by a calibration curve.

GFR(イヌリンクリアランス)との相関解析
(1)体表面積補正有
26名の被験者について、体表面積補正を行ったGFR(イヌリンクリアランス)と、血液中のD−セリン量(A)、シスタチンC量(B)とを散布図にプロットし、相関係数rとp値を算出した。結果を図1に示す。血液中のD−セリン量がGFR(イヌリンクリアランス)に対して、血液中のシスタチンC量と同等であることが示された。また、GFR(イヌリンクリアランス)100以下(n=21)のデータ解析において、血液中のD−セリン量と体表面積補正を行ったGFR(イヌリンクリアランス)との相関と、血液中のシスタチンC量と体表面積補正を行ったGFR(イヌリンクリアランス)との相関を解析した。GFR100以下においては血液中のD−セリン量とGFR(イヌリンクリアランス)との相関係数r値及びp値はそれぞれ−0.713及び0.00042であり、血液中のシスタチンC量とGFR(イヌリンクリアランス)との相関係数r値及びp値はそれぞれ−0.656及び0.0013であった。GFR100以下においては血液中のD−セリン量とGFR(イヌリンクリアランス)との相関は、血液中のシスタチンC量とGFR(イヌリンクリアランス)との相関よりも高いことが示された。
Correlation analysis with GFR (inulin clearance) (1) Body surface area correction Yes For 26 subjects, GFR (inulin clearance) with body surface area correction, D-serine amount (A) in blood, and cystatin C amount ( B) and were plotted on a scatter diagram, and the correlation coefficients r and p values were calculated. The results are shown in FIG. It was shown that the amount of D-serine in blood was equivalent to the amount of cystatin C in blood with respect to GFR (inulin clearance). In addition, in the data analysis of GFR (inulin clearance) 100 or less (n = 21), the correlation between the amount of D-serine in blood and GFR (inulin clearance) corrected for body surface area, and the amount of cystatin C in blood. The correlation with GFR (inulin clearance) corrected for body surface area was analyzed. Below GFR100, the correlation coefficients r and p values between the amount of D-serine in blood and GFR (inulin clearance) are -0.713 and 0.00042, respectively, and the amount of cystatin C in blood and GFR (inulin). The correlation coefficient r value and p value with (clearance) were −0.656 and 0.0013, respectively. It was shown that below GFR 100, the correlation between the amount of D-serine in blood and GFR (inulin clearance) is higher than the correlation between the amount of cystatin C in blood and GFR (inulin clearance).

(2)体表面積補正無
26名の被験者について、体表面積補正を行っていないGFR(イヌリンクリアランス)と、血液中のD−セリン量(A)、シスタチンC量(B)とを散布図にプロットし相関係数rとp値を算出した。結果を図2に示す。血液中のD−セリン量が体表面積補正無しGFR(イヌリンクリアランス)に対して、血液中のシスタチンC量よりも相関が高いことが示された。
(2) Body surface area correction No GFR (inulin clearance) without body surface area correction, D-serine amount (A), and cystatin C amount (B) in blood are plotted on a scatter plot for 26 subjects. The correlation coefficients r and p values were calculated. The results are shown in FIG. It was shown that the amount of D-serine in blood correlates more with GFR (inulin clearance) without body surface area correction than the amount of cystatin C in blood.

体表面積(BSA)との相関
健常者(GFR>70)のデータについて、体表面積(BSA)と、測定した血液中のD−セリン量及びシスタチンC量とを散布図に表し、相関係数r値及びp値を算出した。結果を図3に示す。シスタチンC量が、体表面積に相関するのに対し、血液中のD−セリン量は体表面積とは相関しなかった。
Correlation with body surface area (BSA) For the data of healthy subjects (GFR> 70), the body surface area (BSA) and the measured amount of D-serine and cystatin C in the blood are shown in a scatter plot, and the correlation coefficient r The value and p value were calculated. The results are shown in FIG. The amount of cystatin C correlated with body surface area, whereas the amount of D-serine in blood did not correlate with body surface area.

Claims (13)

血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法であって、
血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査を受けた対象の血液中のD−セリン量を測定する工程、
D−セリン量と、所定の閾値とを比較する工程、及び
血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定する工程
を含む、前記方法。
It is a method to test the validity of renal function test results based on the amount of cystatin C in blood.
A step of measuring the amount of D-serine in the blood of a subject who has undergone a renal function test based on the amount of cystatin C in the blood,
The method comprising a step of comparing the amount of D-serine with a predetermined threshold and a step of determining the validity of the result of a renal function test based on the amount of cystatin C in blood.
腎機能検査結果の妥当性を検定する方法が、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の偽陽性及び/又は偽陰性を判定する、請求項1に記載の方法。 The method according to claim 1, wherein the method for validating the renal function test result determines a false positive and / or a false negative of the renal function test result based on the amount of cystatin C in blood. 前記決定工程が、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と決定する、請求項2に記載の方法。 According to claim 2, the determination step is determined to be a false positive when the amount of D-serine is lower than the threshold value, while the renal function test based on the amount of cystatin C in blood determines that the renal function is decreased. The method described. 前記決定工程が、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定する、請求項2に記載の方法。 The second aspect of the present invention, wherein the determination step is determined to be normal by a renal function test based on the amount of cystatin C in blood, while it is determined to be false negative when the amount of D-serine is higher than the threshold value. Method. 同一サンプルにおいて、D−セリン量及び血液中のシスタチンC量が測定される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 4, wherein the amount of D-serine and the amount of cystatin C in blood are measured in the same sample. 前記対象が、免疫系に作用する薬剤を投与された対象である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。 The method according to any one of claims 1 to 5, wherein the subject is a subject to which a drug that acts on the immune system has been administered. 記憶部と、入力部、分析測定部と、データ処理部と、出力部とを含み、シスタチンC量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する試料分析システムであって、
記憶部は、入力部から入力されたD−セリン量の閾値を記憶し、
記憶部は、入力部から入力された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を記憶し、
分析測定部は、血液試料中のD−セリンを分離定量し、
データ処理部は、D−セリン量を、記憶部に記憶されたD−セリン量の閾値と比較し、記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を判定し、
出力部が血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を出力する
を含む、前記試料分析システム。
A sample analysis system that includes a storage unit, an input unit, an analysis measurement unit, a data processing unit, and an output unit to test the validity of renal function test results based on the amount of cystatin C.
The storage unit stores the threshold value of the amount of D-serine input from the input unit, and stores the threshold value.
The memory unit stores the results of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit.
The analysis and measurement unit separates and quantifies D-serine in the blood sample.
The data processing unit compares the amount of D-serine with the threshold of the amount of D-serine stored in the memory, and validates the results of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood stored in the memory. Judge,
The sample analysis system, wherein the output unit outputs the validity of the result of the renal function test based on the amount of cystatin C in blood.
腎機能検査結果の妥当性の判定が、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査結果の偽陽性及び/又は偽陰性を判定する、請求項7に記載の試料分析システム。 The sample analysis system according to claim 7, wherein the validity of the renal function test result is determined to be a false positive and / or a false negative of the renal function test result based on the amount of cystatin C in blood. 前記判定が、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、腎機能低下と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より低い場合に、偽陽性と判定する、請求項8に記載の試料分析システム。 The eighth aspect of the present invention, wherein the determination is determined to be a decrease in renal function by a renal function test based on the amount of cystatin C in blood, while a false positive is determined when the amount of D-serine is lower than the threshold value. Sample analysis system. 前記判定が、血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査により、正常と判定された一方で、D−セリン量が前記閾値より高い場合に、偽陰性と決定する、請求項8に記載の試料分析システム。 The sample according to claim 8, wherein the determination is determined to be normal by a renal function test based on the amount of cystatin C in blood, while a false negative is determined when the amount of D-serine is higher than the threshold value. Analysis system. 同一サンプルにおいて、D−セリン量及び血液中のシスタチンC量が測定される、請求項7〜10のいずれか一項に記載の試料分析システム。 The sample analysis system according to any one of claims 7 to 10, wherein the amount of D-serine and the amount of cystatin C in blood are measured in the same sample. 入力部、出力部、データ処理部、記憶部とを含む情報処理装置に血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定させるプログラムであって、以下の:
入力部から入力されたD−セリン量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のD−セリン量を記憶させ、
記憶部に記憶されたD−セリン量と、D−セリン量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、閾値を上回るか下回るかについて比較の結果を記憶部に記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果と、比較の結果を読み出し、腎機能検査の結果の妥当性を判定して、記憶部に記憶させ、
記憶された妥当性を出力部に出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む、前記プログラム。
A program that allows an information processing device including an input unit, an output unit, a data processing unit, and a storage unit to determine the validity of the result of a renal function test based on the amount of cystatin C in blood.
The threshold value of the amount of D-serine input from the input unit is stored in the storage unit, and the threshold value is stored in the storage unit.
The result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood input from the input unit is stored in the memory unit.
The amount of D-serine in the blood sample input from the input unit is memorized and stored.
The amount of D-serine stored in the storage unit and the threshold value of the amount of D-serine are read out, compared by the data processing unit, and the result of the comparison is stored in the storage unit as to whether the threshold value is exceeded or decreased.
The result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood stored in the memory and the result of the comparison are read out, the validity of the result of the renal function test is judged, and the result is stored in the memory.
The program including a command for causing the information processing apparatus to output the stored validity to the output unit.
入力部、出力部、データ処理部、記憶部とを含む情報処理装置に血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果の妥当性を決定させるプログラムであって、以下の:
入力部から入力された血液中のシスタチンC量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のシスタチンC量を記憶させ、
入力部から入力されたD-セリン量の閾値を記憶部に記憶させ、
入力部から入力された血液試料中のD−セリン量を記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量と、血液中のシスタチンC量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、シスタチンC量に基づく腎機能検査結果を記憶部に記憶させ、
記憶部に記憶されたD−セリン量と、D−セリン量の閾値とを読み出し、データ処理部で比較して、比較の結果を記憶部に記憶させ、
記憶部に記憶された血液中のシスタチンC量に基づく腎機能検査の結果と、比較の結果を読み出し、腎機能検査の結果の妥当性を判定して、記憶部に記憶させ、
記憶された妥当性を出力部に出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む、前記プログラム。
A program that allows an information processing device including an input unit, an output unit, a data processing unit, and a storage unit to determine the validity of the result of a renal function test based on the amount of cystatin C in blood.
The threshold value of the amount of cystatin C in the blood input from the input unit is stored in the storage unit, and the threshold value is stored in the storage unit.
The amount of cystatin C in the blood sample input from the input unit is memorized and stored.
The threshold value of the amount of D-serine input from the input unit is stored in the storage unit, and the threshold value is stored in the storage unit.
The amount of D-serine in the blood sample input from the input unit is memorized and stored.
The amount of cystatin C in blood stored in the storage unit and the threshold value of the amount of cystatin C in blood are read out, compared in the data processing unit, and the renal function test result based on the amount of cystatin C is stored in the storage unit.
The amount of D-serine stored in the storage unit and the threshold value of the amount of D-serine are read out, compared in the data processing unit, and the comparison result is stored in the storage unit.
The result of the renal function test based on the amount of cystatin C in the blood stored in the memory and the result of the comparison are read out, the validity of the result of the renal function test is judged, and the result is stored in the memory.
The program including a command for causing the information processing apparatus to output the stored validity to the output unit.
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