本発明は、その趣旨または本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具体化され得る。それゆえ、上記の実施形態は、全ての点において、本明細書に記載される本発明を限定するものではなく、実例であると考えられるべきである。したがって、本発明の範囲は、上記の説明によってではなく、附属の特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等な意味および範囲内に入る全ての変更は、それに包含されることが意図される。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
(項目１)
（ａ）ＮＫＧ２Ｄに結合するＦａｂ断片を含む第１の抗原結合部位と；
（ｂ）ＨＥＲ２に結合する一本鎖可変領域断片（ｓｃＦｖ）を含む第２の抗原結合部位と；
（ｃ）ＣＤ１６に結合するのに十分な抗体Ｆｃドメインもしくはその部分、またはＣＤ１６に結合する第３の抗原結合部位と
を含むタンパク質。
(項目２)
前記ｓｃＦｖが、Ａｌａ－Ｓｅｒを含むヒンジを介して、ＣＤ１６に結合するのに十分な前記抗体Ｆｃドメインもしくはその部分、またはＣＤ１６に結合する前記第３の抗原結合部位に連結している、項目１に記載のタンパク質。
(項目３)
前記ｓｃＦｖが、前記抗体Ｆｃドメインに連結している、項目２に記載のタンパク質。
(項目４)
前記ｓｃＦｖが、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む、項目１から３のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目５)
前記ｓｃＦｖの前記重鎖可変ドメインが、前記ｓｃＦｖの前記軽鎖可変ドメインとジスルフィド架橋を形成する、項目４に記載のタンパク質。
(項目６)
前記ジスルフィド架橋が、前記重鎖可変ドメインのＣ４４と前記軽鎖可変ドメインのＣ１００との間に形成される、項目５に記載のタンパク質。
(項目７)
前記ｓｃＦｖの前記軽鎖可変ドメインが、フレキシブルリンカーを介して前記ｓｃＦｖの前記重鎖可変ドメインに連結している、項目４から６のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目８)
前記フレキシブルリンカーが、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む、項目７に記載のタンパク質。
(項目９)
前記フレキシブルリンカーが、配列番号１４３のアミノ酸配列からなる、項目８に記載のタンパク質。
(項目１０)
前記軽鎖可変ドメインが、前記重鎖可変ドメインのＮ末端またはＣ末端に位置する、項目４から９のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目１１)
前記軽鎖可変ドメインが、前記重鎖可変ドメインのＮ末端に位置する、項目１０に記載のタンパク質。
(項目１２)
前記Ｆａｂ断片が、ＣＤ１６に結合するのに十分な前記抗体Ｆｃドメインもしくはその部分、またはＣＤ１６に結合する前記第３の抗原結合部位に連結している、項目１から１１のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目１３)
ＮＫＧ２Ｄに結合する前記第１の抗原結合部位が、
（ａ）それぞれ、配列番号１６８、９６および１６９のアミノ酸配列によって表される相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、相補性決定領域２（ＣＤＲ２）および相補性決定領域３（ＣＤＲ３）配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号９９、１００および１０１のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｂ）それぞれ、配列番号１６８、９６および１７３のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号９９、１００および１０１のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｃ）それぞれ、配列番号９５、９６および９７のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号９９、１００および１０１のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｄ）それぞれ、配列番号１６６、８８および１６７のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号９１、９２および９３のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｅ）それぞれ、配列番号１６２、７２および１７０のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号１０７、１０８および１０９のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｆ）それぞれ、配列番号１６２、７２および１６３のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号７５、７６および７７のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｇ）それぞれ、配列番号１６４、８０および１６５のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号７５、７６および８５のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｈ）それぞれ、配列番号１６８、９６および１７６のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号９９、１００および１０１のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｉ）それぞれ、配列番号１６８、９６および１７９のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号９９、１００および１０１のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｊ）それぞれ、配列番号１６８、９６および１８２のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号９９、１００および１０１のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｋ）それぞれ、配列番号１６８、９６および１８５のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号９９、１００および１０１のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；または
（ｌ）それぞれ、配列番号１６８、９６および１８８のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号９９、１００および１０１のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、項目１から１２のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目１４)
ＮＫＧ２Ｄに結合する前記第１の抗原結合部位が、配列番号８６および配列番号９４から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％同一の重鎖可変ドメインを含む、項目１から１３のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目１５)
ＮＫＧ２Ｄに結合する前記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号９４と少なくとも９０％同一の重鎖可変ドメイン、および配列番号９８と少なくとも９０％同一の軽鎖可変ドメイン；
（ｂ）配列番号１４４と少なくとも９０％同一の重鎖可変ドメイン、および配列番号９８と少なくとも９０％同一の軽鎖可変ドメイン；または
（ｃ）配列番号８６と少なくとも９０％同一の重鎖可変ドメイン、および配列番号９０と少なくとも９０％同一の軽鎖可変ドメイン
を含む、項目１から１４のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目１６)
ＮＫＧ２Ｄに結合する前記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号９４と少なくとも９５％同一の重鎖可変ドメイン、および配列番号９８と少なくとも９５％同一の軽鎖可変ドメイン；
（ｂ）配列番号１４４と少なくとも９５％同一の重鎖可変ドメイン、および配列番号９８と少なくとも９５％同一の軽鎖可変ドメイン；または
（ｃ）配列番号８６と少なくとも９５％同一の重鎖可変ドメイン、および配列番号９０と少なくとも９５％同一の軽鎖可変ドメイン
を含む、項目１から１５のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目１７)
ＮＫＧ２Ｄに結合する前記第１の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号９４と同一の重鎖可変ドメイン、および配列番号９８と同一の軽鎖可変ドメイン；
（ｂ）配列番号１４４と同一の重鎖可変ドメイン、および配列番号９８と同一の軽鎖可変ドメイン；または
（ｃ）配列番号８６と同一の重鎖可変ドメイン、および配列番号９０と同一の軽鎖可変ドメイン
を含む、項目１から１６のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目１８)
表面プラズモン共鳴によって測定して、２ｎＭ～１２０ｎＭのＫ
Ｄ
でＮＫＧ２Ｄに結合する、項目１から１７のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目１９)
ＨＥＲ２に結合する前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）それぞれ、配列番号１１５、１１６および１１７のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号１１９、１２０および１２１のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｂ）それぞれ、配列番号１２３、１２４および１２５のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号１２７、１２８および１２９のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン；または
（ｃ）それぞれ、配列番号１３１、１３２および１３３のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびにそれぞれ、配列番号１３５、１３６および１３７のアミノ酸配列によって表されるＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、項目１から１８のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目２０)
ＨＥＲ２に結合する前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１９５と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号１９６と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｂ）配列番号１９７と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号１９８と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または
（ｃ）配列番号１９９と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号２００と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、項目１から１９のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目２１)
ＨＥＲ２に結合する前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１９５と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号１９６と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｂ）配列番号１９７と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号１９８と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または
（ｃ）配列番号１９９と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号２００と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む、項目１から２０のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目２２)
ＨＥＲ２に結合する前記第２の抗原結合部位が、
（ａ）配列番号１９５と同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号１９６と同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；
（ｂ）配列番号１９７と同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号１９８と同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン；または
（ｃ）配列番号１９９と同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン、および配列番号２００と同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む、項目１から２１のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目２３)
ＨＥＲ２に結合する前記第２の抗原結合部位が、配列番号１３９、配列番号１８９または配列番号１７１のアミノ酸配列を含む、項目１から２２のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目２４)
ＨＥＲ２に結合する前記第２の抗原結合部位が、配列番号１３９のアミノ酸配列を含む、項目２３に記載のタンパク質。
(項目２５)
前記抗体Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１抗体のヒンジおよびＣＨ２ドメインを含む、項目１から２４のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目２６)
前記抗体Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１抗体のアミノ酸２３４～３３２と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、項目２５に記載のタンパク質。
(項目２７)
前記抗体Ｆｃドメインが、ヒトＩｇＧ１のＦｃドメインと少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含み、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｔ３５０、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１、Ｋ４３９からなる群から選択される１つまたは複数の位置で異なる、項目２５または２６に記載のタンパク質。
(項目２８)
前記抗体Ｆｃドメインが、Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔ置換を含むヒトＩｇＧ１のＦｃドメインである、項目１から２７のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目２９)
前記置換を含む前記抗体Ｆｃドメインが、前記ｓｃＦｖに連結している、項目２８に記載のタンパク質。
(項目３０)
前記抗体Ｆｃドメインが、Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗ置換を含むヒトＩｇＧ１のＦｃドメインである、項目１から２９のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目３１)
前記置換を含む前記抗体Ｆｃドメインが、前記Ｆａｂ断片に連結している、項目３０に記載のタンパク質。
(項目３２)
前記抗体Ｆｃドメインが、Ｔ３６６Ｗ置換を含むヒトＩｇＧ１のＦｃドメインである、項目１から２７のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目３３)
前記置換を含む前記抗体Ｆｃドメインが、前記Ｆａｂ断片に連結している、項目３２に記載のタンパク質。
(項目３４)
前記抗体Ｆｃドメインが、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ置換を含むヒトＩｇＧ１のＦｃドメインである、項目１から２７および３２から３３のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目３５)
前記置換を含む前記抗体Ｆｃドメインが、前記ｓｃＦｖに連結している、項目３４に記載のタンパク質。
(項目３６)
配列番号１４１、配列番号１４５、配列番号１４７、配列番号１９４、配列番号１５５または配列番号１４８の配列を含む、項目１から３５のいずれかに記載のタンパク質。
(項目３７)
前記抗体Ｆｃドメインに連結した前記ｓｃＦｖが、配列番号１４０または配列番号１４６のアミノ酸配列によって表される、項目１から３６のいずれか一項に記載のタンパク質。
(項目３８)
（ａ）配列番号１４１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド；
（ｂ）配列番号１４０、配列番号１９０または配列番号１９２と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド；および
（ｃ）配列番号１４２と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む第３のポリペプチド
を含むタンパク質。
(項目３９)
前記第２のポリペプチドが、配列番号１４０と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含む、項目３８に記載のタンパク質。
(項目４０)
（ａ）配列番号１４１と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド；
（ｂ）配列番号１４０、配列番号１９０または配列番号１９２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド；および
（ｃ）配列番号１４２と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む第３のポリペプチド
を含むタンパク質。
(項目４１)
前記第２のポリペプチドが、配列番号１４０と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、項目４０に記載のタンパク質。
(項目４２)
（ａ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド；
（ｂ）配列番号１４０、配列番号１９０または配列番号１９２のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド；および
（ｃ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含む第３のポリペプチド
を含むタンパク質。
(項目４３)
前記第２のポリペプチドが、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む、項目４２に記載のタンパク質。
(項目４４)
前記項目のいずれか一項に記載のタンパク質と、薬学的に許容される担体とを含む製剤。
(項目４５)
項目１から４３のいずれか一項に記載のタンパク質を発現する１つまたは複数の核酸を含む細胞。
(項目４６)
腫瘍細胞死を直接的および／または間接的に増強する方法であって、腫瘍およびナチュラルキラー細胞を、項目１から４３のいずれか一項に記載のタンパク質に曝露するステップを含む方法。
(項目４７)
がんを処置する方法であって、項目１から４３のいずれか一項に記載のタンパク質または項目４４に記載の製剤を、患者に投与するステップを含む方法。
(項目４８)
前記がんが、乳がん、甲状腺がん、胃がん、腎細胞癌、肺の腺癌、前立腺がん、胆管癌、子宮がん、膵臓がん、結腸直腸がん、卵巣がん、子宮頸がん、頭頸部がん、肺扁平上皮がん、中皮腫、肝臓がん、中皮腫、肉腫および胆嚢がんからなる群から選択される、項目４７に記載の方法。
The present invention may be embodied in other specific forms without departing from its spirit or essential characteristics. Therefore, the above-described embodiments are to be considered in all respects as illustrative rather than limiting of the invention described herein. The scope of the invention is, therefore, indicated by the appended claims rather than by the foregoing description, and all changes that come within the meaning and range of equivalency of the claims are intended to be embraced therein. be done.
The present invention provides, for example, the following items.
(Item 1)
(a) a first antigen binding site comprising a Fab fragment that binds to NKG2D;
(b) a second antigen binding site comprising a single chain variable region fragment (scFv) that binds HER2;
(c) an antibody Fc domain or portion thereof sufficient to bind CD16, or a third antigen binding site that binds CD16;
protein containing.
(Item 2)
Item 1, wherein said scFv is linked via an Ala-Ser containing hinge to said antibody Fc domain or portion thereof sufficient to bind CD16, or to said third antigen binding site that binds CD16. Proteins as described in.
(Item 3)
3. The protein of item 2, wherein said scFv is linked to said antibody Fc domain.
(Item 4)
4. The protein of any one of items 1-3, wherein said scFv comprises a heavy chain variable domain and a light chain variable domain.
(Item 5)
5. The protein of item 4, wherein said heavy chain variable domain of said scFv forms a disulfide bridge with said light chain variable domain of said scFv.
(Item 6)
6. The protein of item 5, wherein said disulfide bridge is formed between C44 of said heavy chain variable domain and C100 of said light chain variable domain.
(Item 7)
7. The protein of any one of items 4-6, wherein said light chain variable domain of said scFv is linked to said heavy chain variable domain of said scFv via a flexible linker.
(Item 8)
8. The protein of item 7, wherein said flexible linker comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:143.
(Item 9)
9. The protein of item 8, wherein said flexible linker consists of the amino acid sequence of SEQ ID NO:143.
(Item 10)
10. A protein according to any one of items 4 to 9, wherein said light chain variable domain is located N-terminally or C-terminally to said heavy chain variable domain.
(Item 11)
11. The protein of item 10, wherein said light chain variable domain is located N-terminal to said heavy chain variable domain.
(Item 12)
12. Any one of items 1-11, wherein said Fab fragment is linked to said antibody Fc domain or portion thereof sufficient to bind CD16, or to said third antigen binding site that binds CD16. protein.
(Item 13)
The first antigen-binding site that binds to NKG2D is
(a) a heavy chain comprising complementarity determining region 1 (CDR1), complementarity determining region 2 (CDR2) and complementarity determining region 3 (CDR3) sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 168, 96 and 169, respectively a variable domain; and a light chain variable domain comprising the CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 99, 100 and 101, respectively;
(b) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 168, 96 and 173, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 99, 100 and 101, respectively; , a light chain variable domain comprising CDR2 and CDR3 sequences;
(c) a heavy chain variable domain comprising the CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs:95, 96 and 97, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs:99, 100 and 101, respectively; , a light chain variable domain comprising CDR2 and CDR3 sequences;
(d) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 166, 88 and 167, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 91, 92 and 93, respectively; , a light chain variable domain comprising CDR2 and CDR3 sequences;
(e) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 162, 72 and 170, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 107, 108 and 109, respectively; , a light chain variable domain comprising CDR2 and CDR3 sequences;
(f) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 162, 72 and 163, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 75, 76 and 77, respectively; , a light chain variable domain comprising CDR2 and CDR3 sequences;
(g) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 164, 80 and 165, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 75, 76 and 85, respectively; , a light chain variable domain comprising CDR2 and CDR3 sequences;
(h) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 168, 96 and 176, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 99, 100 and 101, respectively; , a light chain variable domain comprising CDR2 and CDR3 sequences;
(i) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 168, 96 and 179, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 99, 100 and 101, respectively; , a light chain variable domain comprising CDR2 and CDR3 sequences;
(j) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 168, 96 and 182, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 99, 100 and 101, respectively; , a light chain variable domain comprising CDR2 and CDR3 sequences;
(k) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 168, 96 and 185, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 99, 100 and 101, respectively; , a light chain variable domain comprising CDR2 and CDR3 sequences; or
(l) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 168, 96 and 188, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 99, 100 and 101, respectively; , a light chain variable domain comprising the CDR2 and CDR3 sequences
13. The protein of any one of items 1 to 12, comprising
(Item 14)
14. according to any one of items 1-13, wherein said first antigen binding site that binds NKG2D comprises a heavy chain variable domain that is at least 90% identical to an amino acid sequence selected from SEQ ID NO:86 and SEQ ID NO:94 protein.
(Item 15)
The first antigen-binding site that binds to NKG2D is
(a) a heavy chain variable domain at least 90% identical to SEQ ID NO:94 and a light chain variable domain at least 90% identical to SEQ ID NO:98;
(b) a heavy chain variable domain at least 90% identical to SEQ ID NO: 144 and a light chain variable domain at least 90% identical to SEQ ID NO: 98; or
(c) a heavy chain variable domain at least 90% identical to SEQ ID NO:86 and a light chain variable domain at least 90% identical to SEQ ID NO:90
15. The protein of any one of items 1 to 14, comprising
(Item 16)
The first antigen-binding site that binds to NKG2D is
(a) a heavy chain variable domain at least 95% identical to SEQ ID NO:94 and a light chain variable domain at least 95% identical to SEQ ID NO:98;
(b) a heavy chain variable domain at least 95% identical to SEQ ID NO: 144 and a light chain variable domain at least 95% identical to SEQ ID NO: 98; or
(c) a heavy chain variable domain at least 95% identical to SEQ ID NO:86 and a light chain variable domain at least 95% identical to SEQ ID NO:90
16. The protein of any one of items 1 to 15, comprising
(Item 17)
The first antigen-binding site that binds to NKG2D is
(a) a heavy chain variable domain identical to SEQ ID NO:94 and a light chain variable domain identical to SEQ ID NO:98;
(b) a heavy chain variable domain identical to SEQ ID NO: 144 and a light chain variable domain identical to SEQ ID NO: 98; or
(c) a heavy chain variable domain identical to SEQ ID NO:86 and a light chain variable domain identical to SEQ ID NO:90
17. The protein of any one of items 1 to 16, comprising
(Item 18)
18. A protein according to any one of items 1 to 17, which binds NKG2D with a K D between 2 nM and 120 nM as measured by surface plasmon resonance .
(Item 19)
wherein the second antigen-binding site that binds to HER2 is
(a) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 115, 116 and 117, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 119, 120 and 121, respectively; , a light chain variable domain comprising CDR2 and CDR3 sequences;
(b) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 123, 124 and 125, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 127, 128 and 129, respectively; , a light chain variable domain comprising CDR2 and CDR3 sequences; or
(c) a heavy chain variable domain comprising CDR1, CDR2 and CDR3 sequences represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 131, 132 and 133, respectively; and CDR1 represented by the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 135, 136 and 137, respectively; , a light chain variable domain comprising the CDR2 and CDR3 sequences
19. The protein of any one of items 1 to 18, comprising
(Item 20)
wherein the second antigen-binding site that binds to HER2 is
(a) a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO:195 and a light chain variable domain comprising an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO:196;
(b) a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 197 and a light chain variable domain comprising an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 198; or
(c) any one of items 1 to 19, comprising a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 199 and a light chain variable domain comprising an amino acid sequence at least 90% identical to SEQ ID NO: 200; The protein according to the paragraph.
(Item 21)
wherein the second antigen-binding site that binds to HER2 is
(a) a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence at least 95% identical to SEQ ID NO:195 and a light chain variable domain comprising an amino acid sequence at least 95% identical to SEQ ID NO:196;
(b) a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence at least 95% identical to SEQ ID NO: 197 and a light chain variable domain comprising an amino acid sequence at least 95% identical to SEQ ID NO: 198; or
(c) any one of items 1 to 20, comprising a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence at least 95% identical to SEQ ID NO: 199 and a light chain variable domain comprising an amino acid sequence at least 95% identical to SEQ ID NO: 200; The protein according to the paragraph.
(Item 22)
wherein the second antigen-binding site that binds to HER2 is
(a) a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence identical to SEQ ID NO:195 and a light chain variable domain comprising an amino acid sequence identical to SEQ ID NO:196;
(b) a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence identical to SEQ ID NO:197 and a light chain variable domain comprising an amino acid sequence identical to SEQ ID NO:198; or
(c) a heavy chain variable domain comprising an amino acid sequence identical to SEQ ID NO:199 and a light chain variable domain comprising an amino acid sequence identical to SEQ ID NO:200
22. The protein of any one of items 1 to 21, comprising
(Item 23)
23. The protein of any one of items 1-22, wherein said second antigen binding site that binds to HER2 comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:139, SEQ ID NO:189 or SEQ ID NO:171.
(Item 24)
24. The protein of item 23, wherein said second antigen binding site that binds to HER2 comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:139.
(Item 25)
25. The protein of any one of items 1-24, wherein said antibody Fc domain comprises the hinge and CH2 domains of a human IgG1 antibody.
(Item 26)
26. The protein of item 25, wherein said antibody Fc domain comprises an amino acid sequence that is at least 90% identical to amino acids 234-332 of a human IgG1 antibody.
(Item 27)
said antibody Fc domain comprises an amino acid sequence at least 90% identical to the Fc domain of human IgG1, Q347, Y349, T350, L351, S354, E356, E357, K360, Q362, S364, T366, L368, K370, N390, 27. The protein of item 25 or 26, differing at one or more positions selected from the group consisting of K392, T394, D399, S400, D401, F405, Y407, K409, T411, K439.
(Item 28)
28. The protein of any one of items 1-27, wherein said antibody Fc domain is a human IgGl Fc domain comprising Q347R, D399V and F405T substitutions.
(Item 29)
29. The protein of item 28, wherein said antibody Fc domain comprising said substitution is linked to said scFv.
(Item 30)
30. The protein of any one of items 1-29, wherein said antibody Fc domain is a human IgGl Fc domain comprising K360E and K409W substitutions.
(Item 31)
31. The protein of item 30, wherein said antibody Fc domain comprising said substitution is linked to said Fab fragment.
(Item 32)
28. The protein of any one of items 1-27, wherein said antibody Fc domain is a human IgGl Fc domain comprising a T366W substitution.
(Item 33)
33. The protein of item 32, wherein said antibody Fc domain comprising said substitution is linked to said Fab fragment.
(Item 34)
34. The protein of any one of items 1-27 and 32-33, wherein said antibody Fc domain is a human IgGl Fc domain comprising T366S, L368A and Y407V substitutions.
(Item 35)
35. The protein of item 34, wherein said antibody Fc domain comprising said substitution is linked to said scFv.
(Item 36)
36. The protein of any of items 1-35, comprising the sequence of SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 155 or SEQ ID NO: 148.
(Item 37)
37. The protein of any one of items 1-36, wherein said scFv linked to said antibody Fc domain is represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO:140 or SEQ ID NO:146.
(Item 38)
(a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 141;
(b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 190 or SEQ ID NO: 192; and
(c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO: 142;
protein containing.
(Item 39)
39. The protein of item 38, wherein said second polypeptide comprises an amino acid sequence that is at least 90% identical to SEQ ID NO:140.
(Item 40)
(a) a first polypeptide comprising an amino acid sequence that is at least 95% identical to SEQ ID NO: 141;
(b) a second polypeptide comprising an amino acid sequence that is at least 95% identical to SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 190 or SEQ ID NO: 192; and
(c) a third polypeptide comprising an amino acid sequence that is at least 95% identical to SEQ ID NO: 142;
protein containing.
(Item 41)
41. The protein of item 40, wherein said second polypeptide comprises an amino acid sequence that is at least 95% identical to SEQ ID NO:140.
(Item 42)
(a) a first polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 141;
(b) a second polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 190 or SEQ ID NO: 192; and
(c) a third polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 142
protein containing.
(Item 43)
43. The protein of item 42, wherein said second polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO:140.
(Item 44)
A formulation comprising the protein according to any one of the preceding items and a pharmaceutically acceptable carrier.
(Item 45)
44. A cell comprising one or more nucleic acids expressing a protein according to any one of items 1-43.
(Item 46)
44. A method of directly and/or indirectly enhancing tumor cell death, comprising exposing tumor and natural killer cells to a protein according to any one of items 1-43.
(Item 47)
A method of treating cancer comprising administering to a patient a protein according to any one of items 1 to 43 or a formulation according to item 44.
(Item 48)
The cancer is breast cancer, thyroid cancer, gastric cancer, renal cell carcinoma, lung adenocarcinoma, prostate cancer, bile duct cancer, uterine cancer, pancreatic cancer, colorectal cancer, ovarian cancer, cervical cancer 48. The method of item 47, wherein the method is selected from the group consisting of: , head and neck cancer, lung squamous cell carcinoma, mesothelioma, liver cancer, mesothelioma, sarcoma and gallbladder cancer.