JPWO2019169228A5

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Publication number: JPWO2019169228A5
Application number: JP2020568940A
Authority: JP
Publication date: 2022-03-04

Claims

分化因子、転写因子、および表現型センサーからなる群から選択されるたんぱく質をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）と、
前記ｍＲＮＡを標的細胞に送達する送達媒体と、
を含む、組成物。
前記ｍＲＮＡは、Ｔｂｘ１８、Ｔｂｘ３、Ｔｂｘ５、ＳＨＯＸ２、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される分化因子をコードする、請求項１に記載の組成物。
前記ｍＲＮＡは、オプシン、細胞の電気生理現象を感知できるタンパク質、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される表現型センサーをコードする、請求項１に記載の組成物。
前記ｍＲＮＡは、修飾ヌクレオチド、キャップ、非翻訳領域、ポリアデニンテール、およびコドン最適化をもたらす変異のうちの少なくとも１つを含む、請求項１に記載の組成物。
前記送達媒体は、カチオン性脂質、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）誘導体、ポリマー、ポリペプチドもしくはペプチド、ナノ粒子、または脂質系粒子を含む、請求項１から請求項４のいずれかに記載の組成物。
前記送達媒体は、直鎖ＰＥＩ誘導体からなる群から選択されるポリエチレンイミン誘導体、リポフェクタミンを含むカチオン性脂質、ウイルス様ポリマーからなる群から選択されるポリマー、ウイルスおよびウイルス様粒子からなる群から選択されるナノ粒子、または、リポソームおよびナノリポソームからなる群から選択される脂質系粒子を含む、請求項１から請求項４のいずれかに記載の組成物。
前記ｍＲＮＡに結合する小分子をさらに含む、請求項１から請求項６のいずれかに記載の組成物。
前記小分子は、先天性免疫センサーの阻害剤からなる群から選択される、請求項７に記載の組成物。
標的細胞に、請求項１から請求項８のいずれかに記載の前記組成物を投与するステップと、
場合によっては、前記標的細胞の表現型を検出するステップと、
を含む、方法。
前記方法は、細胞表現型を調節するものであり、
前記ｍＲＮＡは、Ｔｂｘ１８、Ｔｂｘ３、Ｔｂｘ５、ＳＨＯＸ２、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される分化因子をコードする、請求項９に記載の方法。
前記ｍＲＮＡは、オプシン、細胞の電気生理現象を感知できるタンパク質、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される表現型センサーをコードする、請求項９に記載の方法。
前記表現型センサーは、Ｑｕａｓａｒ、Ｊａｗｓ、Ｃａｔｃｈ－Ｖ５、ＣｈＲ２、Ａｒｃｈｅｒ１、ＦｌｉｃＲ１、ＡｒｃＤ９５Ｈ、ＧＣａＭＰ６ｆ、ｃＴＮＴ－Ｅ２Ｃｒｉｍｓｏｎ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１１に記載の方法。
前記ｍＲＮＡは、修飾ヌクレオチド、キャップ、非翻訳領域、ポリアデニンテール、およびコドン最適化をもたらすヌクレオチド変異のうちの少なくとも１つを含む、請求項９に記載の方法。
前記送達媒体は、リポフェクタミンを含むカチオン性脂質を含む、請求項１２に記載の方法。
前記送達媒体は、直鎖ＰＥＩ誘導体からなる群から選択されるポリエチレンイミン誘導体を含む、請求項１２に記載の方法。
前記送達媒体は、ウイルス様ポリマーからなる群から選択されるポリマーを含む、請求項１２に記載の方法。
前記送達媒体は、ウイルスおよびウイルス様粒子からなる群から選択されるナノ粒子を含む、請求項１２に記載の方法。
前記送達媒体は、リポソームおよびナノリポソームからなる群から選択される脂質系粒子を含む、請求項１２に記載の方法。
前記少なくとも１つのｍＲＮＡに結合する小分子をさらに含む、請求項１２に記載の方法。
前記小分子は、先天性免疫センサーの阻害剤からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
前記標的細胞は、心臓細胞、心筋細胞、ニューロン細胞、眼内に位置する細胞、膵臓細胞、ＰＳＣ、ＩＰＳＣ、ＥＳＣ、およびＰＳＣ心筋細胞からなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
前記標的細胞は、心臓細胞、心筋細胞、ＰＳＣ、ＩＰＳＣ、ＥＳＣ、またはＰＳＣ心筋細胞であり、
前記標的細胞の表現型は、前記標的細胞を心房筋細胞、心室筋細胞、および心臓ペースメーカー細胞のうちの１つ以上へと分化させるように変更されている、請求項１２に記載の方法。
前記標的細胞の表現型は、前記標的細胞を心臓ペースメーカー細胞へと分化させるように変更されており、
分化済心臓ペースメーカー細胞を、それを必要とする被験体に提供するステップをさらに含む、請求項９に記載の方法。
前記方法は、心臓障害の治療および／または予防を必要とする被験体において心臓障害を治療および／または予防するものであり、
前記ｍＲＮＡは、表現型センサーをコードし、
前記送達媒体は、カチオン性脂質、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）誘導体、ポリマー、ポリペプチドもしくはペプチド、ナノ粒子、または脂質系粒子を含み、
投与するステップは、前記組成物を形質移入によって標的細胞に投与することを含み、
前記標的細胞は、心臓細胞、心筋細胞、ＰＳＣ、ＩＰＳＣ、ＥＳＣ、およびＰＳＣ心筋細胞からなる群から選択され、
前記表現型センサーの活性を検出することで、前記形質移入を行った標的細胞の表現型を検出するステップと、
前記被験体に、前記形質移入を行った標的細胞を再移植するステップと、
をさらに含む、請求項９に記載の方法。
前記心臓障害は、房室ブロック、洞不全症候群、および典型的にはペースメーカー装置の埋め込みを必要とするその他の不整脈からなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
前記形質移入を行った標的細胞の表現型を検出するステップは、
前記標的細胞に対して多電極アレイ（ＭＥＡ）解析を行うこと、
活動電位プロファイルを測定すること、
Ｃａ２＋の一過性動態を測定すること、
蛍光ｃＴＮＴを測定すること、のうちの１つ以上を含む、請求項２５に記載の方法。
前記方法は、細胞表現型を決定するためのものであり、
前記ｍＲＮＡは、表現型センサーをコードするｍＲＮＡを発現するベクターであり、
前記送達媒体は、カチオン性脂質、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）誘導体、ポリマー、ポリペプチドもしくはペプチド、ナノ粒子、または脂質系粒子を含み、
投与するステップは、前記組成物を形質移入によって前記標的細胞に投与することを含み、
前記標的細胞の表現型を検出するステップを含む、請求項９に記載の方法。
前記形質移入を行った標的細胞の表現型を検出するステップは、
前記標的細胞に対して多電極アレイ（ＭＥＡ）解析を行うこと、
活動電位プロファイルを測定すること、
Ｃａ２＋の一過性動態を測定すること、
蛍光ｃＴＮＴを測定すること、のうちの１つ以上を含み、
前記表現型センサーは、オプシン、細胞の電気生理現象を感知できるタンパク質、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
前記表現型センサーは、Ｑｕａｓａｒ、Ｊａｗｓ、Ｃａｔｃｈ－Ｖ５、ＣｈＲ２、Ａｒｃｈｅｒ１、ＦｌｉｃＲ１、ＡｒｃＤ９５Ｈ、ＧＣａＭＰ６ｆ、ｃＴＮＴ－Ｅ２Ｃｒｉｍｓｏｎ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
前記ｍＲＮＡに結合する小分子をさらに含み、
前記ｍＲＮＡは、オプシン、細胞の電気生理現象を感知できるタンパク質、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される表現型センサーをコードし、
前記送達媒体は、
直鎖ＰＥＩ誘導体からなる群から選択されるポリエチレンイミン誘導体、
ウイルス様ポリマーからなる群から選択されるポリマー、または、
リポソームおよびナノリポソームからなる群から選択される脂質系粒子を含む、請求項１に記載の組成物。
前記表現型センサーは、Ｑｕａｓａｒ、Ｊａｗｓ、Ｃａｔｃｈ－Ｖ５、ＣｈＲ２、Ａｒｃｈｅｒ１、ＦｌｉｃＲ１、ＡｒｃＤ９５Ｈ、ＧＣａＭＰ６ｆ、ｃＴＮＴ－Ｅ２Ｃｒｉｍｓｏｎ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択され、
前記小分子は、先天性免疫センサーの阻害剤からなる群から選択される、請求項３０に記載の組成物。