JPWO2019157224A5

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Publication number: JPWO2019157224A5
Application number: JP2020542598A
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Publication date: 2022-02-16

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実施例１０：少なくとも二つの送達ドメインを含むマルチドメイン治療用タンパク質の発現
ＣＨＯ細胞を、図１Ｃ～図１Ｇに示す発現構築物でトランスフェクトし、各構築物の発現を確認した（データ非表示）。さらに、４Ｗ１および４Ｍ１（図１Ｆ）によってコードされるマルチドメイン治療用タンパク質の一部のＣＤ６３への結合は、ＥＬＩＳＡによって確認された（データ非表示）。
（項目１）
中枢神経系（ＣＮＳ）に治療有効量のマルチドメイン治療用タンパク質を提供するのに十分な肝臓標的送達方法を介して、前記マルチドメイン治療用タンパク質をコードするヌクレオチド組成物を対象に投与することを含み、前記マルチドメイン治療用タンパク質は、送達ドメインおよび酵素ドメインを含む、治療用タンパク質を前記対象のＣＮＳ中に送達する方法。
（項目２）
前記送達ドメインが、内部移行エフェクターに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片である、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記治療用タンパク質がリソソーム酵素である、項目１または項目２に記載の方法。
（項目４）
前記リソソーム酵素がＧＡＡである、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記ヌクレオチド組成物がウイルスベクターを介して投与される、項目１～４のいずれか一項に記載の方法。
（項目６）
前記ウイルスベクターが、ＡＡＶベクターであり、任意に前記ヌクレオチド組成物が、１キログラム当たり少なくとも２×１０^１２のウイルスゲノム（ｖｇ／ｋｇ）の用量で投与される、項目５に記載の方法。
（項目７）
前記内部移行エフェクターが、ＣＮＳ中の細胞、上皮細胞、および血液脳関門を通過する細胞からなる群から選択される細胞の表面上で発現する、項目１～６のいずれか一項に記載の方法。
（項目８）
前記送達ドメインが、
（ｉ）ＣＤ６３、インテグリンアルファ７（ＩＴＧＡ７）、ＭＨＣ－Ｉ、Ｋｒｅｍｅｎ－１、Ｋｒｅｍｅｎ－２、ＬＲＰ５、ＬＲＰ６、ＬＲＰ８、トランスフェリン受容体、ＬＤＬ受容体、ＬＤＬ関連タンパク質１受容体、ＡＳＧＲ１、ＡＳＧＲ２、アミロイド前駆体タンパク質様タンパク質２（ＡＰＬＰ２）、アペリン受容体（ＡＰＬＮＲ）、ミエリンおよびリンパ球タンパク質（ＭＡＬ）、ＩＧＦ２Ｒ、液胞型Ｈ＋ＡＴＰアーゼ、ジフテリア毒素受容体、葉酸受容体、グルタミン酸受容体、グルタチオン受容体、レプチン受容体、スカベンジャー受容体Ａ１－５（ＳＣＡＲＡ１－５）、ＳＣＡＲＢ１－３、およびＣＤ３６からなる群から選択され、
（ｉｉ）いくつかの組織タイプで発現し、
ＣＤ６３、ＭＨＣ－Ｉ、液胞型Ｈ＋ＡＴＰアーゼ、ＩＧＦ２Ｒ、インテグリンアルファ７（ＩＴＧＡ７）、ＬＲＰ５、ＬＲＰ６、ＬＲＰ８、Ｋｒｅｍｅｎ－２、ＬＤＬ受容体、ＬＤＬ関連タンパク質１受容体、アミロイド前駆体タンパク質様タンパク質２（ＡＰＬＰ２）、アペリン受容体（ＡＰＬＮＲ）、ＰＲＬＲ、ＭＡＬ（ミエリンおよびリンパ球タンパク質（ＭＡＬ）、ジフテリア毒素受容体、ＨＢＥＧＦ（ヘパリン結合ＥＧＦ様成長因子）、グルタチオン受容体、グルタミン酸受容体、レプチン受容体、および葉酸受容体からなる群から任意に選択され、
任意に前記対象は、ファブリー病、ゴーシェ病、ＭＰＳＩ、ＭＰＳＩＩ、ＭＰＳＩＩＩＡ、ＭＰＳＩＩＩＢ、ＭＰＳＩＩＩＤ、ＭＰＳＩＶＢ、ＭＰＳＶＩ、ＭＰＳＶＩＩ、ＭＰＳＩＸ、ポンペ病、リソソーム酸性リパーゼ欠損症、異染性白質ジストロフィー、ニーマン・ピック病Ａ型、Ｂ型、およびＣ２型、αマンノース症、ノイラミニダーゼ欠損症、シアリドーシス、アスパルチルグリコサミン尿症、混合性サポシン欠損症、異型ゴーシェ病、ファーバー脂肪性肉芽腫症、フコシドーシス、およびβマンノース症からなる群から選択される疾患の一つまたは複数の症状を示し、
（ｉｉｉ）骨および／または軟骨によって優先的に発現され、
コラーゲンＸ、インテグリンアルファ１０（ＩＴＧＡ１０）、線維芽細胞成長因子受容体３（ＦＧＦＲ３）、線維芽細胞成長因子受容体アイソフォームＣ（ＦＧＦＲ３Ｃ）、ヒアルロナンおよびプロテオグリカンリンクタンパク質１（ＣＲＴＬ１）、アグリカン、コラーゲンＩＩ、およびＫｒｅｍｅｎ－１からなる群から任意に選択され、
任意に前記対象は、ＭＰＳＩ、ＭＰＳＩＩ、ＭＰＳＩＩＩＡ、ＭＰＳＩＩＩＢ、ＭＰＳＩＩＩＤ、ＭＰＳＩＶＡ、ＭＰＳＩＶＢ、ＭＰＳＶＩ、ＭＰＳＶＩＩ、ＭＰＳＩＸ、βマンノース症、ゴーシェ病、異型ゴーシェ病、混合性サポシン欠損症、アスパルチルグリコサミン尿症、ファーバー脂肪性肉芽腫症、シアリドーシス、ノイラミニダーゼ欠損症、およびαマンノース症からなる群から選択される疾患の一つまたは複数の症状を示し、
（ｉｖ）単球、マクロファージ、またはマイクログリアによって優先的に発現され、
スカベンジャー受容体Ａ１－５（ＳＣＡＲＡ１－５）、ＳＣＡＲＢ１－３、ＣＤ３６、ＭＳＲ１（マクロファージスカベンジャー受容体１）、ＭＲＣ１（マクロファージマンノース受容体１）、ＶＳＩＧ４（Ｖセットおよびイムノグロブリンドメイン含有タンパク質４）、ＣＤ６８（マクロシアリン）、およびＣＳＦ１Ｒ（マクロファージコロニー刺激因子１受容体）からなる群から任意に選択され、
任意に前記対象は、リソソーム酸性リパーゼ欠損症、ゴーシェ病、異型ゴーシェ病、混合性サポシン欠損症、およびファーバー脂肪性肉芽腫症からなる群から選択される疾患の一つまたは複数の症状を示し、
（ｖ）腎細胞によって優先的に発現され、
ＣＤＨ１６（Ｃａｄｈｅｒｉ－１６）、ＣＬＤＮ１６（Ｃｌａｕｄｎ－１６）、ＫＬ（Ｋｌｏｔｈｏ）、ＰＴＨ１Ｒ（副甲状腺ホルモン受容体）、ＳＬＣ２２Ａ１３（溶質輸送体ファミリー２２メンバー１３）、ＳＬＣ５Ａ２（ナトリウム／グルコース共輸送体２）、およびＵＭＯＤ（ウロモジュリン）からなる群から任意に選択され、
任意に前記対象は、ファブリー病、アルポート症候群、多発性嚢胞腎疾患、および血栓性血小板減少性紫斑病からなる群から選択される疾患の一つまたは複数の症状を示すか、またはそのように診断され、
（ｖｉ）肝細胞によって優先的に発現され、
任意にＡＳＧＲ１またはＡＳＧＲ２、
任意に前記対象は、リソソーム酸性リパーゼ欠損症、ゴーシェ病、ＭＰＳＶＩ、ＭＰＳＶＩＩ、ＭＰＳＩＩ、ニーマン・ピック病Ａ型、Ｂ型、およびＣ２型、シアリドーシス、ノイラミニダーゼ欠損症、異型ゴーシェ病、混合性サポシン欠損症、ファーバー脂肪性肉芽腫症からなる群から選択される、疾患の一つまたは複数の症状を示すか、またはそのように診断され、
（ｖｉｉ）筋細胞によって優先的に発現され、
ＢＭＰＲ１Ａ（骨形態形成タンパク質受容体１Ａ）、ｍ－カドヘリン、ＣＤ９、ＭｕＳＫ（筋特異的キナーゼ）、ＬＧＲ４／ＧＰＲ４８（Ｇタンパク質共役受容体４８）、コリン作動性受容体（ニコチン性）アルファ１、ＣＤＨ１５（Ｃａｄｈｅｒｉ－１５）、ＩＴＧＡ７（インテグリンアルファ７）、ＣＡＣＮＧ１（Ｌ型カルシウムチャネルサブユニットガンマ１）、ＣＡＣＮＡｌＳ（Ｌ型カルシウムチャネルサブユニットアルファ１５）、ＣＡＣＮＧ６（Ｌ型カルシウムチャネルサブユニットガンマ６）、ＳＣＮ１Ｂ（ナトリウムチャネルサブユニットベータ１）、ＣＨＲＮＡ１（ＡＣｈ受容体サブユニットアルファ）、ＣＨＲＮＤ（ＡＣｈ受容体サブユニットデルタ）、ＬＲＲＣ１４Ｂ（ロイシンリッチリピート含有タンパク質１４Ｂ）、ジストログリカン（ＤＡＧ１）、およびＰＯＰＤＣ３（Ｐｏｐｅｙｅドメイン含有タンパク質３）からなる群から任意に選択され、
任意に前記対象は、ポンペ病の一つまたは複数の症状を示すか、またはそのように診断され、
（ｖｉｉｉ）ＩＴＧＡ７、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＡＬＰＬ２、ＭＳＲ１、ＡＳＧＲ１、ＡＳＧＲ２、またはＰＲＬＲからなる群から選択され、または
（ｉｘ）ＣＤ６３である、内部移行エフェクターに結合する、項目１～７のいずれか一項に記載の方法。
（項目９）
前記送達ドメインが単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、項目１～８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記細胞表面受容体（ＣＳＲ）結合タンパク質（ＣＳＲ－ＢＰ）が、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目１～９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記治療用タンパク質がヒドロラーゼを含む、項目１～１０のいずれか一項に記載の方法。
（項目１２）
前記治療用タンパク質がグリコシラーゼを含む、項目１～１１のいずれか一項に記載の方法。
（項目１３）
前記治療用タンパク質がグリコシダーゼを含む、項目１～１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記治療用タンパク質がアルファ－グルコシダーゼを含む、項目１～１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
前記治療用タンパク質が、配列番号１または配列番号１３のアミノ酸配列、またはその断片を含む、項目１～１４のいずれか一項に記載の方法。
（項目１６）
前記治療用タンパク質が、抗ＡＢｅｔａ、または抗タウ抗体を含む、項目１～１５のいずれか一項に記載の方法。
（項目１７）
前記ポリヌクレオチドが、配列番号１１の核酸配列を含む、項目１～１６のいずれか一項に記載の方法。
（項目１８）
前記酵素ドメインが、アルファ－グルコシダーゼを含み、前記対象の任意のＣＮＳ組織中のグリコーゲンレベルが、処置後少なくとも九か月間、低下する、項目１～１７のいずれか一項に記載の方法。
（項目１９）
前記対象がポンペ病を有する、項目１～１８のいずれか一項に記載の方法。
（項目２０）
前記投与されたヌクレオチド組成物が、少なくとも１μｇ／ｍＬのマルチドメイン治療用タンパク質血清レベルを提供する、項目１～１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
一つまたは複数の送達ドメインおよび酵素ドメインを含むマルチドメイン治療用タンパク質であって、前記一つまたは複数の送達ドメインが、ヒトトランスフェリン受容体（ｈＴｆＲ）に結合する、マルチドメイン治療用タンパク質。
（項目２２）
内部移行エフェクターに結合する第二の送達ドメインをさらに含む、項目２１に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目２３）
前記第二の送達ドメインが、
（ｉ）ＣＤ６３、インテグリンアルファ７（ＩＴＧＡ７）、ＭＨＣ－Ｉ、Ｋｒｅｍｅｎ－１、Ｋｒｅｍｅｎ－２、ＬＲＰ５、ＬＲＰ６、ＬＲＰ８、トランスフェリン受容体、ＬＤＬ受容体、ＬＤＬ関連タンパク質１受容体、ＡＳＧＲ１、ＡＳＧＲ２、アミロイド前駆体タンパク質様タンパク質２（ＡＰＬＰ２）、アペリン受容体（ＡＰＬＮＲ）、ミエリンおよびリンパ球タンパク質（ＭＡＬ）、ＩＧＦ２Ｒ、液胞型Ｈ＋ＡＴＰアーゼ、ジフテリア毒素受容体、葉酸受容体、グルタミン酸受容体、グルタチオン受容体、レプチン受容体、スカベンジャー受容体Ａ１－５（ＳＣＡＲＡ１－５）、ＳＣＡＲＢ１－３、およびＣＤ３６からなる群から選択される内部移行エフェクター、
（ｉｉ）ＣＤ６３、ＭＨＣ－Ｉ、液胞型Ｈ＋ＡＴＰアーゼ、ＩＧＦ２Ｒ、インテグリンアルファ７（ＩＴＧＡ７）、ＬＲＰ５、ＬＲＰ６、ＬＲＰ８、Ｋｒｅｍｅｎ－２、ＬＤＬ受容体、ＬＤＬ関連タンパク質１受容体、アミロイド前駆体タンパク質様タンパク質２（ＡＰＬＰ２）、アペリン受容体（ＡＰＬＮＲ）、ＰＲＬＲ、ＭＡＬ（ミエリンおよびリンパ球タンパク質（ＭＡＬ）、ジフテリア毒素受容体、ＨＢＥＧＦ（ヘパリン結合ＥＧＦ様成長因子）、グルタチオン受容体、グルタミン酸受容体、レプチン受容体、および葉酸受容体からなる群から任意に選択される、いくつかの組織タイプで発現する内部移行エフェクター、
（ｉｉｉ）コラーゲンＸ、インテグリンアルファ１０（ＩＴＧＡ１０）、線維芽細胞成長因子受容体３（ＦＧＦＲ３）、線維芽細胞成長因子受容体アイソフォームＣ（ＦＧＦＲ３Ｃ）、ヒアルロナンおよびプロテオグリカンリンクタンパク質１（ＣＲＴＬ１）、アグリカン、コラーゲンＩＩ、およびＫｒｅｍｅｎ－１からなる群から任意に選択される、骨および／または軟骨によって優先的に発現される内部移行エフェクター、
（ｉｖ）スカベンジャー受容体Ａ１－５（ＳＣＡＲＡ１－５）、ＳＣＡＲＢ１－３、ＣＤ３６、ＭＳＲ１（マクロファージスカベンジャー受容体１）、ＭＲＣ１（マクロファージマンノース受容体１）、ＶＳＩＧ４（Ｖセットおよびイムノグロブリンドメイン含有タンパク質４）、ＣＤ６８（マクロシアリン）、およびＣＳＦ１Ｒ（マクロファージコロニー刺激因子１受容体）からなる群から任意に選択される、単球、マクロファージ、またはマイクログリアによって優先的に発現される内部移行エフェクター、
（ｖ）ＣＤＨ１６（Ｃａｄｈｅｒｉ－１６）、ＣＬＤＮ１６（Ｃｌａｕｄｎ－１６）、ＫＬ（Ｋｌｏｔｈｏ）、ＰＴＨ１Ｒ（副甲状腺ホルモン受容体）、ＳＬＣ２２Ａ１３（溶質輸送体ファミリー２２メンバー１３）、ＳＬＣ５Ａ２（ナトリウム／グルコース共輸送体２）、およびＵＭＯＤ（ウロモジュリン）からなる群から任意に選択される、腎細胞によって優先的に発現される内部移行エフェクターであって、他のある特定の実施形態では、筋特異的インターナライザーであり、例えば、ＢＭＰＲ１Ａ（骨形態形成タンパク質受容体１Ａ）、ｍ－カドヘリン、ＣＤ９、ＭｕＳＫ（筋特異的キナーゼ）、ＬＧＲ４／ＧＰＲ４８（Ｇタンパク質共役受容体４８）、コリン作動性受容体（ニコチン性）アルファ１、ＣＤＨ１５（Ｃａｄｈｅｒｉ－１５）、ＩＴＧＡ７（インテグリンアルファ７）、ＣＡＣＮＧ１（Ｌ型カルシウムチャネルサブユニットガンマ１）、ＣＡＣＮＡｌＳ（Ｌ型カルシウムチャネルサブユニットアルファ１５）、ＣＡＣＮＧ６（Ｌ型カルシウムチャネルサブユニットガンマ６）、ＳＣＮ１Ｂ（ナトリウムチャネルサブユニットベータ１）、ＣＨＲＮＡ１（ＡＣｈ受容体サブユニットアルファ）、ＣＨＲＮＤ（ＡＣｈ受容体サブユニットデルタ）、ＬＲＲＣ１４Ｂ（ロイシンリッチリピート含有タンパク質１４Ｂ）、ジストログリカン（ＤＡＧ１）、およびＰＯＰＤＣ３（Ｐｏｐｅｙｅドメイン含有タンパク質３）などである、内部移行エフェクター、
（ｖｉ）任意にＡＳＧＲ１またはＡＳＧＲ２など、肝細胞によって優先的に発現される内部移行エフェクター、
（ｖｉｉ）ＢＭＰＲ１Ａ（骨形態形成タンパク質受容体１Ａ）、ｍ－カドヘリン、ＣＤ９、ＭｕＳＫ（筋特異的キナーゼ）、ＬＧＲ４／ＧＰＲ４８（Ｇタンパク質共役受容体４８）、コリン作動性受容体（ニコチン性）アルファ１、ＣＤＨ１５（Ｃａｄｈｅｒｉ－１５）、ＩＴＧＡ７（インテグリンアルファ７）、ＣＡＣＮＧ１（Ｌ型カルシウムチャネルサブユニットガンマ１）、ＣＡＣＮＡｌＳ（Ｌ型カルシウムチャネルサブユニットアルファ１５）、ＣＡＣＮＧ６（Ｌ型カルシウムチャネルサブユニットガンマ６）、ＳＣＮ１Ｂ（ナトリウムチャネルサブユニットベータ１）、ＣＨＲＮＡ１（ＡＣｈ受容体サブユニットアルファ）、ＣＨＲＮＤ（ＡＣｈ受容体サブユニットデルタ）、ＬＲＲＣ１４Ｂ（ロイシンリッチリピート含有タンパク質１４Ｂ）、ジストログリカン（ＤＡＧ１）、およびＰＯＰＤＣ３（Ｐｏｐｅｙｅドメイン含有タンパク質３）からなる群から任意に選択される、筋肉細胞によって優先的に発現される内部移行エフェクター、または
（ｖｉｉｉ）ＩＴＧＡ７、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＡＬＰＬ２、ＭＳＲ１、ＡＳＧＲ１、ＡＳＧＲ２、またはＰＲＬＲからなる群から選択される内部移行エフェクタータンパク質に結合する、項目２２に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目２４）
前記第二の送達ドメインが前記内部移行エフェクターＣＤ６３に結合する、項目２１～２３のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目２５）
前記一つまたは複数の送達ドメインのうち少なくとも一つが、抗原結合タンパク質を含む、項目２１～２４のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目２６）
前記一つまたは複数の送達ドメインのそれぞれが、抗原結合タンパク質を含む、項目２５に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目２７）
前記一つまたは複数の送達ドメインのうち少なくとも一つが、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、項目２１～２６のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目２８）
前記一つまたは複数の送達ドメインのうち少なくとも一つが、半抗体を含む、項目２１～２７のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目２９）
ｈＴｆＲに結合する前記送達ドメインはｓｃＦｖであり、前記半抗体はＣＤ６３に結合し、前記酵素ドメインはＧＡＡであり、ＧＡＡはＣＤ６３に結合する前記半抗体のカルボキシ末端にコンジュゲートされる、項目２８に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。（項目３０）
前記一つまたは複数の送達ドメインのそれぞれが、ｓｃＦｖを含む、項目２７に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目３１）
少なくとも一つのｓｃＦｖがＦｃに融合されている、項目２７～３０のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目３２）
前記Ｆｃが、野生型ヒトＩｇＧ４アイソタイプ、またはその誘導体を含む、項目３１に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目３３）
ＧＡＡが、Ｆｃのカルボキシ末端にコンジュゲートされている、項目３１～３２のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目３４）
抗ｈＴｆＲｓｃＦｖ、抗ｈＣＤ６３ｓｃＦｖを含む、項目３０に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目３５）
前記抗ｈＴｆＲｓｃＦｖおよび抗ｈＣＤ６３ｓｃＦｖが、両方ともそのカルボキシ末端で、単一のＧＡＡ酵素に連結されている、項目３４に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目３６）
前記送達ドメインが抗ｈＴｆＲｓｃＦｖであり、前記酵素ドメインが前記ｓｃＦｖのＶＬドメインのカルボキシ末端に連結されている、項目２１～２７のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目３７）
前記抗ｈＴｆＲｓｃＦｖのＶＨドメインのＮ末端に連結された第二の送達ドメインをさらに含む、項目３６に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目３８）
前記第二の送達ドメインが、抗ｈＣＤ６３ｓｃＦＶである、項目３７に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目３９）
前記酵素ドメインが、配列番号１として記載されるアミノ酸配列を含む、項目２１～３８のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目４０）
少なくとも二つの送達ドメインおよび少なくとも一つの酵素ドメインを含むマルチドメイン治療用タンパク質であって、前記二つの送達ドメインの各々は、抗体、半抗体、およびｓｃＦｖからなる群から独立して選択され、少なくとも一つまたは複数の前記送達ドメインは、前記少なくとも一つの酵素ドメインに関連付けられ、好ましくは、前記一つまたは複数の送達ドメインが、前記少なくとも一つの酵素ドメインに共有結合されている、マルチドメイン治療用タンパク質。
（項目４１）
二つ以下の送達ドメインを含む、項目４０に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。（項目４２）
前記送達ドメインのうちの一つのみが、前記少なくとも一つの酵素ドメインと関連付けられている、項目４０または項目４１に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目４３）
前記少なくとも二つの送達ドメインのそれぞれが、酵素ドメインに共有結合している、項目４０～４２のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目４４）
前記少なくとも二つの送達ドメインのそれぞれが、前記同じ酵素ドメインに共有結合している、項目４３に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目４５）
前記少なくとも二つの送達ドメインのそれぞれが、異なる酵素ドメインに共有結合している、項目４３に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目４６）
二つ以下の送達ドメインを含み、前記第一の送達ドメインは半抗体を含み、前記第二の送達ドメインはｓｃＦｖを含む、項目４０～４５のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目４７）
前記ｓｃＦｖがＦｃに融合されている、項目４６に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目４８）
前記半抗体が、そのカルボキシ末端で第一の酵素ドメインに共有結合され、および／または前記ｓｃＦｖは、そのカルボキシ末端でＦｃ、および任意で第二の酵素ドメインに共有結合される、項目４６または項目４７に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目４９）
二つ以下の送達ドメインを含み、前記第一の送達ドメインおよび第二の送達ドメインはそれぞれｓｃＦｖを含む、項目４０～４５のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目５０）
前記第一および第二のｓｃＦｖの両方が、酵素ドメインに共有結合している、項目４９に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目５１）
Ｎ末端からＣ末端まで：前記第一のｓｃＦｖ、前記第二のｓｃＦｖ、および前記酵素ドメインを含む、項目４９に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目５２）
少なくとも一つの送達ドメインがリソソーム輸送分子に結合し、少なくとも一つの送達ドメインがトランスサイトーシスエフェクターに結合する、項目４０～５１のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目５３）
前記リソソーム輸送分子が、ＣＤ６３、ＩＴＧＡ７、ＣＤ９、ＣＤ６３、ＣＤ８１、ＣＤ８２、またはＣＤ１５１からなる群から選択され、前記トランスサイトーシスエフェクターは、ＬＤＬ受容体、ＩｇＡ受容体、トランスフェリン受容体、新生児Ｆｃ受容体、インスリン受容体、ＣＤ９８、およびベイシジンからなる群から選択される、項目５２に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目５４）
図１Ｃ、図１Ｄ、図１Ｅ、または図１Ｆに示される構造を含む、項目４０～５３のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
（項目５５）
項目２１～５４のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
（項目５６）
ウイルス核酸配列および遺伝子座ターゲティング核酸配列をさらに含む、項目５５に記載のポリヌクレオチド。
（項目５７）
ウイルス核酸配列および遺伝子座ターゲティング核酸配列をさらに含み、前記ウイルス核酸配列が、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）核酸配列である、項目５５または項目５６に記載のポリヌクレオチド。
（項目５８）
ウイルス核酸配列および遺伝子座ターゲティング核酸配列をさらに含み、前記ウイルス核酸配列が、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）核酸配列であり、前記ＡＡＶ核酸配列が、内部末端反復配列を含み、任意選択的に、肝特異的プロモーターまたはニューロン特異的プロモーターなどの組織特異的調節因子を含む、項目５５～５７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
（項目５９）
ウイルス核酸配列および遺伝子座ターゲティング核酸配列をさらに含み、前記ウイルス核酸配列が、配列番号６、配列番号７、または両方と、任意選択的に、肝特異的プロモーターまたはニューロン特異的プロモーターなどの組織特異的調節因子とを含む内部末端反復配列を含むアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）核酸配列である、項目５５～５８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
（項目６０）
配列番号８および／または配列番号９として記載される配列を含む組織特異的調節因子をさらに含む、項目５５～５９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
（項目６１）
項目５５～６０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む遺伝子療法ベクター。（項目６２）
前記遺伝子療法ベクターが、
任意選択的に天然ウイルス、工学的に操作されたウイルス、またはキメラウイルスである、ウイルスベクター、
項目２０～２５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む裸のポリヌクレオチド、
任意選択的に項目２０～２５のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドおよび脂質を含む脂質ナノ粒子である、ポリヌクレオチド複合体、ならびに
それらの任意の組み合わせ、からなる群から選択される、項目６１に記載の遺伝子療法ベクター。
（項目６３）
前記遺伝子療法ベクターが、レトロウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、レンチウイルス、またはアデノ関連ウイルスからなる群から選択されるウイルスベクターである、項目６１または項目６２に記載の遺伝子療法ベクター。
（項目６４）
前記遺伝子療法ベクターが、ＡＡＶ９、Ａｎｃ８０、ＡＡＶ２／８キメラおよび／または特定の組織、例えば肝臓またはニューロン組織に対してＡＡＶシュードタイプである、項目６２または項目６３に記載の遺伝子療法ベクター。
（項目６５）
項目１～２０のいずれか一項に記載の方法における、項目２１～５４のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質をコードするヌクレオチド、項目５５～６０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、または項目６１～６４のいずれか一項に記載の遺伝子療法ベクターの使用。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目Ａ１)
患者の中枢神経系（ＣＮＳ）に治療用タンパク質を送達する方法であって、前記患者の肝臓にマルチドメイン治療用タンパク質をコードするヌクレオチド組成物を送達して、前記マルチドメイン治療薬を、送達後の連続する数日間、数週間、または数か月間にわたって少なくとも１μｇ／ｍＬの一貫した血清レベルで産生および分泌するための肝臓デポを形成し、前記ＣＮＳ中に前記マルチドメイン治療用タンパク質の治療有効量を提供することを含み、
前記マルチドメイン治療用タンパク質が、ＣＤ６３またはＩＴＧＡ７と酵素ドメインとを結合する抗体またはその抗原結合部分を含む、方法。
(項目Ａ２)
前記治療用タンパク質がリソソーム酵素である、項目Ａ１に記載の方法。
(項目Ａ３)
前記リソソーム酵素がＧＡＡである、項目Ａ２に記載の方法。
(項目Ａ４)
前記ヌクレオチド組成物がウイルスベクターを介して投与される、項目Ａ１～３のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ５)
前記ウイルスベクターが、ＡＡＶベクターであり、任意に前記ヌクレオチド組成物が、１キログラム当たり少なくとも２×１０ ^１２のウイルスゲノム（ｖｇ／ｋｇ）の用量で投与される、項目Ａ４に記載の方法。
(項目Ａ６)
前記抗体またはその抗原結合タンパク質が、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、項目Ａ１～５のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ７)
前記抗体またはその抗原結合タンパク質が、配列番号２のアミノ酸配列を含む、項目Ａ１～６のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ８)
前記治療用タンパク質がヒドロラーゼを含む、項目Ａ１～７のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ９)
前記治療用タンパク質がグリコシラーゼを含む、項目Ａ１～８のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ１０)
前記治療用タンパク質がグリコシダーゼを含む、項目Ａ１～９のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ１１)
前記治療用タンパク質がアルファ－グルコシダーゼを含む、項目Ａ１～１０のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ１２)
前記治療用タンパク質が、配列番号１または配列番号１３のアミノ酸配列、またはその断片を含む、項目Ａ１～１１のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ１３)
前記ポリヌクレオチドが、配列番号１１の核酸配列を含む、項目Ａ１～１２のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ１４)
前記酵素ドメインが、アルファ－グルコシダーゼを含み、前記対象の任意のＣＮＳ組織中のグリコーゲンレベルが、処置後少なくとも九か月間、低下する、項目Ａ１～１３のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ１５)
前記対象がポンペ病を有する、項目Ａ１～１４のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ１６)
前記血清レベルが少なくとも２μｇ／ｍＬである、項目Ａ１～１５のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ１７)
前記抗体またはその抗原結合部分が、ＣＤ６３またはＩＴＧＡ７の細胞外ドメインに結合する、項目Ａ１～１６のいずれか一項に記載の方法。
(項目Ａ１８)
一つまたは複数の送達ドメインおよび酵素ドメインを含むマルチドメイン治療用タンパク質であって、前記一つまたは複数の送達ドメインのうちの一つが、ヒトトランスフェリン受容体（ｈＴｆＲ）に結合し、前記一つまたは複数の送達ドメインのうちの他方が、ＣＤ６３またはＩＴＧＡ７に結合する抗体またはその抗原結合タンパク質を含む、マルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ１９)
前記一つまたは複数の送達ドメインのそれぞれが、抗原結合タンパク質を含む、項目Ａ１８に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ２０)
前記一つまたは複数の送達ドメインのうち少なくとも一つが、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、項目Ａ１８または項目Ａ１９に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ２１)
前記一つまたは複数の送達ドメインのうち少なくとも一つが、半抗体を含む、項目Ａ１８～２０のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ２２)
ｈＴｆＲに結合する前記送達ドメインはｓｃＦｖであり、前記半抗体はＣＤ６３に結合し、前記酵素ドメインはＧＡＡであり、ＧＡＡはＣＤ６３に結合する前記半抗体のカルボキシ末端にコンジュゲートされる、項目Ａ２１に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ２３)
前記一つまたは複数の送達ドメインのそれぞれが、ｓｃＦｖを含む、項目Ａ２２に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ２４)
少なくとも一つのｓｃＦｖがＦｃに融合されている、項目Ａ２０～２３のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ２５)
前記Ｆｃが、野生型ヒトＩｇＧ４アイソタイプ、またはその誘導体を含む、項目Ａ２４に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ２６)
ＧＡＡが、Ｆｃのカルボキシ末端にコンジュゲートされている、項目Ａ２４～２５のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ２７)
抗ｈＴｆＲｓｃＦｖ、抗ｈＣＤ６３ｓｃＦｖを含む、項目Ａ２３に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ２８)
前記抗ｈＴｆＲｓｃＦｖおよび抗ｈＣＤ６３ｓｃＦｖが、両方ともそのカルボキシ末端で、単一のＧＡＡ酵素に連結されている、項目Ａ２７に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ２９)
前記送達ドメインが抗ｈＴｆＲｓｃＦｖであり、前記酵素ドメインが前記ｓｃＦｖのＶＬドメインのカルボキシ末端に連結されている、項目Ａ１８～２８のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ３０)
前記抗ｈＴｆＲｓｃＦｖのＶＨドメインのＮ末端に連結された他方の送達ドメインを含む、項目Ａ２９に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ３１)
前記第二の送達ドメインが、抗ｈＣＤ６３ｓｃＦｖである、項目Ａ３０に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ３２)
前記酵素ドメインが、配列番号１として記載されるアミノ酸配列を含む、項目Ａ１８～３１のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ３３)
少なくとも二つの送達ドメインおよび少なくとも一つの酵素ドメインを含むマルチドメイン治療用タンパク質であって、前記二つの送達ドメインの各々は、抗体、半抗体、およびｓｃＦｖからなる群から独立して選択され、少なくとも一つまたは複数の前記送達ドメインは、前記少なくとも一つの酵素ドメインに関連付けられ、好ましくは、前記一つまたは複数の送達ドメインが、前記少なくとも一つの酵素ドメインに共有結合されている、マルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ３４)
図１Ｃ、図１Ｄ、図１Ｅ、または図１Ｆに示される構造を含む、項目Ａ３３に記載のマルチドメイン治療用タンパク質。
(項目Ａ３５)
項目Ａ１８～３４のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質をコードするポリヌクレオチド。
(項目Ａ３６)
ウイルス核酸配列および遺伝子座ターゲティング核酸配列をさらに含む、項目Ａ３５に記載のポリヌクレオチド。
(項目Ａ３７)
ウイルス核酸配列および遺伝子座ターゲティング核酸配列をさらに含み、前記ウイルス核酸配列が、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）核酸配列である、項目Ａ３５または項目Ａ３６に記載のポリヌクレオチド。
(項目Ａ３８)
ウイルス核酸配列および遺伝子座ターゲティング核酸配列をさらに含み、前記ウイルス核酸配列が、アデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）核酸配列であり、前記ＡＡＶ核酸配列が、内部末端反復配列を含み、任意選択的に、肝特異的プロモーターまたはニューロン特異的プロモーターなどの組織特異的調節因子を含む、項目Ａ３５～３７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
(項目Ａ３９)
ウイルス核酸配列および遺伝子座ターゲティング核酸配列をさらに含み、前記ウイルス核酸配列が、配列番号６、配列番号７、または両方と、任意選択的に、肝特異的プロモーターまたはニューロン特異的プロモーターなどの組織特異的調節因子とを含む内部末端反復配列を含むアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）核酸配列である、項目Ａ３５～３８のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
(項目Ａ４０)
配列番号８および／または配列番号９として記載される配列を含む組織特異的調節因子をさらに含む、項目Ａ３５～３９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
(項目Ａ４１)
項目Ａ３５～４０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む遺伝子療法ベクター。
(項目Ａ４２)
前記遺伝子療法ベクターが、
任意選択的に天然ウイルス、工学的に操作されたウイルス、またはキメラウイルスである、ウイルスベクター、
項目Ａ３５～４０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含む裸のポリヌクレオチド、
任意選択的に項目Ａ３４～３９のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドおよび脂質を含む脂質ナノ粒子である、ポリヌクレオチド複合体、ならびに
それらの任意の組み合わせ、からなる群から選択される、項目Ａ４１に記載の遺伝子療法ベクター。
(項目Ａ４３)
前記遺伝子療法ベクターが、レトロウイルス、アデノウイルス、単純ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、レンチウイルス、またはアデノ関連ウイルスからなる群から選択されるウイルスベクターである、項目Ａ４１または項目Ａ４２に記載の遺伝子療法ベクター。
(項目Ａ４４)
前記遺伝子療法ベクターが、ＡＡＶ９、Ａｎｃ８０、ＡＡＶ２／８キメラおよび／または特定の組織、例えば肝臓またはニューロン組織に対してＡＡＶシュードタイプである、項目Ａ４２または項目Ａ４３に記載の遺伝子療法ベクター。
(項目Ａ４５)
項目Ａ１～１７のいずれか一項に記載の方法における、項目Ａ１８～３４のいずれか一項に記載のマルチドメイン治療用タンパク質をコードするヌクレオチド、項目Ａ３５～４０のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド、または項目Ａ４１～４４のいずれか一項に記載の遺伝子療法ベクターの使用。 Example 10: Expression of a multidomain therapeutic protein containing at least two delivery domains CHO cells were transfected with the expression constructs shown in FIGS. 1C-1G to confirm expression of each construct (data not shown). In addition, binding of some of the multidomain therapeutic proteins encoded by 4W1 and 4M1 (FIG. 1F) to CD63 was confirmed by ELISA (data not shown).
(Item 1)
Administering a nucleotide composition encoding the multidomain therapeutic protein to a subject via a liver-targeted delivery method sufficient to provide a therapeutically effective amount of the multidomain therapeutic protein to the central nervous system (CNS). A method of delivering a Therapeutic protein into the subject's CNS, comprising the Multidomain Therapeutic Protein, comprising a delivery domain and an enzyme domain.
(Item 2)
The method according to item 1, wherein the delivery domain is an antibody that specifically binds to an internal transfer effector or an antigen-binding fragment thereof.
(Item 3)
The method according to item 1 or item 2, wherein the therapeutic protein is a lysosomal enzyme.
(Item 4)
The method according to item 3, wherein the lysosomal enzyme is GAA.
(Item 5)
The method according to any one of items 1 to 4, wherein the nucleotide composition is administered via a viral vector.
(Item 6)
5. The method of item 5, wherein the viral vector is an AAV vector, optionally the nucleotide composition is administered at a dose of at least 2 × 10 ¹² viral genomes (vg / kg) per kilogram.
(Item 7)
The method according to any one of items 1 to 6, wherein the internal translocation effector is expressed on the surface of a cell selected from the group consisting of cells in the CNS, epithelial cells, and cells that cross the blood-brain barrier. ..
(Item 8)
The delivery domain is
(I) CD63, Integulin Alpha 7 (ITGA7), MHC-I, Kremen-1, Kremen-2, LRP5, LRP6, LRP8, transferase receptor, LDL receptor, LDL-related protein 1 receptor, ASGR1, ASGR2, amyloid Precursor protein-like protein 2 (APLP2), aperin receptor (APLNR), myelin and lymphocyte protein (MAL), IGF2R, vacuolar H + ATPase, diphtheria toxin receptor, folic acid receptor, glutamate receptor, glutathione receptor , Leptin receptor, scavenger receptor A1-5 (SCARA1-5), SCARB1-3, and CD36.
(Ii) Expressed in several tissue types,
CD63, MHC-I, vacuolar H + ATPase, IGF2R, Integulin Alpha 7 (ITGA7), LRP5, LRP6, LRP8, Kremen-2, LDL receptor, LDL-related protein 1 receptor, amyloid precursor protein-like protein 2 (APLP2), Apelin Receptor (APLNR), PRLR, MAL (Myerin and Lymphatic Protein (MAL), Difteria Toxin Receptor, HBEGF (Heparin-Binding EGF-Like Growth Factor), Glutathion Receptor, Glutamic Acid Receptor, Leptin Receptor , And arbitrarily selected from the group consisting of folic acid receptors,
Optionally, the subject is Fabry's disease, Gaucher's disease, MPS I, MPS II, MPS IIIA, MPS IIIB, MPS IIID, MPS IVB, MPS VI, MPS VII, MPS IX, Pompe's disease, lysosome acidic lipase deficiency, heterogeneous staining. White leukodystrophy, Niemann-Pick disease types A, B, and C2, α-mannorosis, neurominidase deficiency, sialidosis, aspartylglycosamineuria, mixed saposin deficiency, atypical Gaucher's disease, Farber fatty granulomas Shows one or more symptoms of the disease selected from the group consisting of disease, fucosidosis, and β-Gaucher's disease.
(Iii) Preferredly expressed by bone and / or cartilage
Collagen X, Integrin Alpha 10 (ITGA10), Fibroblast Growth Factor Receptor 3 (FGFR3), Fibroblast Growth Factor Receptor Isoform C (FGFR3C), Hyaluronan and Proteoglycan Link Protein 1 (CRTL1), Aggrecan, Collagen II , And arbitrarily selected from the group consisting of Kremen-1
Optionally, the subject is MPS I, MPS II, MPS IIIA, MPS IIIB, MPS IIID, MPS IVA, MPS IVB, MPS VI, MPS VII, MPS IX, β-mannorosis, Gaucher's disease, atypical Gaucher's disease, mixed saposin. Shows one or more symptoms of the disease selected from the group consisting of deficiency, aspartyl glycosaccharinuria, Faber fatty granulomatosis, sialidosis, neurominidase deficiency, and α-mannorosis.
(Iv) preferentially expressed by monocytes, macrophages, or microglia,
Scavenger Receptor A1-5 (SCARA1-5), SCARB1-3, CD36, MSR1 (Macrophage Scavenger Receptor 1), MRC1 (Macrophage Mannose Receptor 1), VSIG4 (V Set and Immunoglobulin Domain Containing Protein 4), CD68 Arbitrarily selected from the group consisting of (macrociarin) and CSF1R (macrophage colony stimulating factor 1 receptor).
Optionally, the subject exhibits one or more symptoms of a disease selected from the group consisting of lysosomal acidic lipase deficiency, Gaucher's disease, atypical Gaucher's disease, mixed saposin deficiency, and Faber fatty granulomatosis.
(V) Priorityly expressed by renal cells
CDH16 (Cadheri-16), CLDN16 (Claudn-16), KL (Klotho), PTH1R (parathyroid hormone receptor), SLC22A13 (sodium transporter family 22 member 13), SLC5A2 (sodium / glucose cotransporter 2), And arbitrarily selected from the group consisting of UMOD (uromodulin),
Optionally, the subject exhibits or is diagnosed with one or more symptoms of a disease selected from the group consisting of Fabry disease, Alport syndrome, polycystic kidney disease, and thrombotic thrombocytopenic purpura. Being done
(Vi) Priorityly expressed by hepatocytes,
Optionally ASGR1 or ASGR2,
Optionally, the subject is lysosome acid lipase deficiency, Gaucher's disease, MPS VI, MPS VII, MPS II, Niemann-Pick's disease types A, B, and C2, sialidosis, Neuraminidase deficiency, atypical Gaucher's disease, mixed. Selected from the group consisting of Saposin deficiency, Ferber fatty granulomatosis, showing or being diagnosed with one or more symptoms of the disease,
(Vii) Priorityly expressed by muscle cells
BMPR1A (bone morphogenetic protein receptor 1A), m-cadherin, CD9, MuSK (muscle-specific kinase), LGR4 / GPR48 (G protein-conjugated receptor 48), cholinergic receptor (nicotinic) alpha 1, CDH15 (Cadheri-15), ITGA7 (Integran Alpha 7), CACNG1 (L-type calcium channel subunit gamma 1), CACNAlS (L-type calcium channel subunit alpha 15), CACNG6 (L-type calcium channel subunit gamma 6), SCN1B (Sodium channel subunit beta 1), CHRNA1 (ACh receptor subunit alpha), CHRND (ACh receptor subunit delta), LRRC14B (leucine-rich repeat-containing protein 14B), dystroglycan (DAG1), and POPDC3 (Popeye domain). Arbitrarily selected from the group consisting of contained proteins 3),
Optionally, the subject exhibits, or is diagnosed with, one or more symptoms of Pompe's disease.
(Viii) Selected from the group consisting of ITGA7, CD9, CD63, ALPL2, MSR1, ASGR1, ASGR2, or PRLR, or
(Ix) The method according to any one of items 1 to 7, which is CD63 and which is bound to an internal migration effector.
(Item 9)
The method according to any one of items 1 to 8, wherein the delivery domain is a single chain variable fragment (scFv).
(Item 10)
The method according to any one of items 1 to 9, wherein the cell surface receptor (CSR) -binding protein (CSR-BP) comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2.
(Item 11)
The method according to any one of items 1 to 10, wherein the therapeutic protein comprises a hydrolase.
(Item 12)
The method according to any one of items 1 to 11, wherein the therapeutic protein comprises glycosylase.
(Item 13)
The method according to any one of items 1 to 12, wherein the therapeutic protein comprises glycosidase.
(Item 14)
The method according to any one of items 1 to 13, wherein the therapeutic protein comprises alpha-glucosidase.
(Item 15)
The method according to any one of items 1 to 14, wherein the therapeutic protein comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 13, or a fragment thereof.
(Item 16)
The method according to any one of items 1 to 15, wherein the therapeutic protein comprises an anti-ABeta or an anti-tau antibody.
(Item 17)
The method according to any one of items 1 to 16, wherein the polynucleotide comprises the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 11.
(Item 18)
The method according to any one of items 1 to 17, wherein the enzyme domain comprises alpha-glucosidase and glycogen levels in any CNS tissue of the subject are reduced for at least 9 months after treatment.
(Item 19)
The method according to any one of items 1 to 18, wherein the subject has Pompe disease.
(Item 20)
The method of any one of items 1-19, wherein the administered nucleotide composition provides at least 1 μg / mL protein serum level for multidomain therapy.
(Item 21)
A multidomain therapeutic protein comprising one or more delivery domains and enzyme domains, wherein the one or more delivery domains bind to the human transferrin receptor (hTfR).
(Item 22)
21. The multidomain therapeutic protein according to item 21, further comprising a second delivery domain that binds to an internal translocation effector.
(Item 23)
The second delivery domain is
(I) CD63, Integulin Alpha 7 (ITGA7), MHC-I, Kremen-1, Kremen-2, LRP5, LRP6, LRP8, transferase receptor, LDL receptor, LDL-related protein 1 receptor, ASGR1, ASGR2, amyloid Precursor protein-like protein 2 (APLP2), aperin receptor (APLNR), myelin and lymphocyte protein (MAL), IGF2R, vacuolar H + ATPase, diphtheria toxin receptor, folic acid receptor, glutamate receptor, glutathione receptor , An internal translocation effector selected from the group consisting of Leptin receptor, scavenger receptor A1-5 (SCARA1-5), SCARB1-3, and CD36.
(Ii) CD63, MHC-I, vacuolar H + ATPase, IGF2R, Integulin Alpha 7 (ITGA7), LRP5, LRP6, LRP8, Kremen-2, LDL receptor, LDL-related protein 1 receptor, amyloid precursor protein Like protein 2 (APLP2), aperin receptor (APLNR), PRLR, MAL (myelin and lymphocyte protein (MAL), diphtheria toxin receptor, HBEGF (heparin-binding EGF-like growth factor), glutathione receptor, glutamate receptor, An internal translocation effector expressed in several tissue types, optionally selected from the group consisting of leptin and folic acid receptors.
(Iii) Collagen X, Integulin Alpha 10 (ITGA10), Fibroblast Growth Factor Receptor 3 (FGFR3), Fibroblast Growth Factor Receptor Isoform C (FGFR3C), Hyaluronan and Proteoglycan Link Protein 1 (CRTL1), Aglycan , Collagen II, and an internal migration effector preferentially expressed by bone and / or cartilage, optionally selected from the group consisting of Kremen-1.
(Iv) Scavenger Receptor A1-5 (SCARA1-5), SCARB1-3, CD36, MSR1 (Macrophage Scavenger Receptor 1), MRC1 (Macrophage Mannose Receptor 1), VSIG4 (V Set and Immunoglobulin Domain-Containing Protein 4) ), CD68 (macrosialin), and CSF1R (macrophage colony stimulating factor 1 receptor), an internal translocation effector preferentially expressed by monocytes, macrophages, or microglia, optionally selected from the group.
(V) CDH16 (Cadheri-16), CLDN16 (Claudn-16), KL (Klotho), PTH1R (parathyroid hormone receptor), SLC22A13 (solute transporter family 22 member 13), SLC5A2 (sodium / glucose cotransporter) 2), an internal translocation effector preferentially expressed by renal cells, optionally selected from the group consisting of UMOD (uromodulin), and in certain other embodiments, a muscle-specific internalizer. , For example, BMPR1A (bone morphogenetic protein receptor 1A), m-cadherin, CD9, MuSK (muscle-specific kinase), LGR4 / GPR48 (G protein conjugated receptor 48), cholinergic receptor (nicotinic) alpha. 1, CDH15 (Cadheri-15), ITGA7 (Integran Alpha 7), CACNG1 (L-type calcium channel subunit gamma 1), CACNAlS (L-type calcium channel subunit alpha 15), CACNG6 (L-type calcium channel subunit gamma 6) ), SCN1B (sodium channel subunit beta 1), CHRNA1 (ACh receptor subunit alpha), CHRND (ACh receptor subunit delta), LRRC14B (leucine-rich repeat-containing protein 14B), dystroglycan (DAG1), and POPDC3. (Popeye domain-containing protein 3), etc., an internal migration effector,
(Vi) An internal translocation effector, optionally expressed preferentially by hepatocytes, such as ASGR1 or ASGR2.
(Vii) BMPR1A (bone morphogenetic protein receptor 1A), m-cadherin, CD9, MuSK (muscle-specific kinase), LGR4 / GPR48 (G protein-conjugated receptor 48), cholinergic receptor (nicotinic) alpha 1, CDH15 (Cadheri-15), ITGA7 (Integran Alpha 7), CACNG1 (L-type calcium channel subunit gamma 1), CACNAlS (L-type calcium channel subunit alpha 15), CACNG6 (L-type calcium channel subunit gamma 6) ), SCN1B (sodium channel subunit beta 1), CHRNA1 (ACh receptor subunit alpha), CHRND (ACh receptor subunit delta), LRRC14B (leucine-rich repeat-containing protein 14B), dystroglycan (DAG1), and POPDC3. An internal translocation effector preferentially expressed by muscle cells, or an internal translocation effector, arbitrarily selected from the group consisting of (Popeye domain-containing protein 3).
(Viii) The multi-domain therapeutic protein according to item 22, which binds to an internal translocation effector protein selected from the group consisting of ITGA7, CD9, CD63, ALPL2, MSR1, ASGR1, ASGR2, or PRLR.
(Item 24)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items 21 to 23, wherein the second delivery domain binds to the internal transfer effector CD63.
(Item 25)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items 21 to 24, wherein at least one of the one or more delivery domains comprises an antigen binding protein.
(Item 26)
25. The multidomain therapeutic protein of item 25, wherein each of the one or more delivery domains comprises an antigen binding protein.
(Item 27)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items 21 to 26, wherein at least one of the one or more delivery domains comprises a single chain variable fragment (scFv).
(Item 28)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items 21 to 27, wherein at least one of the one or more delivery domains comprises a hapten antibody.
(Item 29)
Item 28, wherein the delivery domain that binds to hTfR is scFv, the half-antibody binds to CD63, the enzyme domain is GAA, and GAA is conjugated to the carboxy terminus of the half-antibody that binds to CD63. The described multi-domain therapeutic protein. (Item 30)
27. The multidomain therapeutic protein according to item 27, wherein each of the one or more delivery domains comprises scFv.
(Item 31)
The multi-domain therapeutic protein according to any one of items 27 to 30, wherein at least one scFv is fused to Fc.
(Item 32)
31. The multi-domain therapeutic protein according to item 31, wherein the Fc comprises a wild-type human IgG4 isotype or a derivative thereof.
(Item 33)
The multi-domain therapeutic protein according to any one of items 31 to 32, wherein GAA is conjugated to the carboxy terminus of Fc.
(Item 34)
30. The multi-domain therapeutic protein of item 30, comprising anti-hTfR scFv, anti-hCD63 scFv.
(Item 35)
34. The multi-domain therapeutic protein of item 34, wherein the anti-hTfR scFv and anti-hCD63 scFv are both linked to a single GAA enzyme at their carboxy terminus.
(Item 36)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items 21 to 27, wherein the delivery domain is an anti-hTfR scFv and the enzyme domain is linked to the carboxy terminus of the VL domain of the scFv.
(Item 37)
36. The multidomain therapeutic protein according to item 36, further comprising a second delivery domain linked to the N-terminus of the VH domain of the anti-hTfR scFv.
(Item 38)
37. The multidomain therapeutic protein according to item 37, wherein the second delivery domain is anti-hCD63 scFV.
(Item 39)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items 21 to 38, wherein the enzyme domain comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1.
(Item 40)
A multidomain therapeutic protein comprising at least two delivery domains and at least one enzyme domain, each of the two delivery domains being independently selected from the group consisting of antibodies, semi-antibodies, and scFv and at least one. The one or more delivery domains are associated with the at least one enzyme domain, preferably a multi-domain therapeutic protein in which the one or more delivery domains are co-linked to the at least one enzyme domain. ..
(Item 41)
40. The multidomain therapeutic protein according to item 40, which comprises no more than two delivery domains. (Item 42)
The multidomain therapeutic protein of item 40 or item 41, wherein only one of the delivery domains is associated with the at least one enzyme domain.
(Item 43)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items 40 to 42, wherein each of the at least two delivery domains is covalently bound to the enzyme domain.
(Item 44)
43. The multidomain therapeutic protein of item 43, wherein each of the at least two delivery domains is covalently attached to the same enzyme domain.
(Item 45)
43. The multidomain therapeutic protein of item 43, wherein each of the at least two delivery domains is covalently attached to a different enzyme domain.
(Item 46)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items 40 to 45, comprising no more than two delivery domains, said first delivery domain comprising a semi-antibody, said second delivery domain comprising scFv.
(Item 47)
46. The multi-domain therapeutic protein of item 46, wherein the scFv is fused to Fc.
(Item 48)
Item 46 or item, wherein the semi-antibody is covalently attached to the first enzyme domain at its carboxy terminus, and / or the scFv is covalently attached to Fc, and optionally a second enzyme domain, at its carboxy terminus. 47. The multidomain therapeutic protein.
(Item 49)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items 40 to 45, comprising two or less delivery domains, wherein the first delivery domain and the second delivery domain each contain scFv.
(Item 50)
49. The multidomain therapeutic protein of item 49, wherein both the first and second scFv are covalently attached to the enzyme domain.
(Item 51)
N-terminal to C-terminal: The multidomain therapeutic protein of item 49, comprising said first scFv, said second scFv, and said enzyme domain.
(Item 52)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items 40 to 51, wherein at least one delivery domain binds to a lysosomal transport molecule and at least one delivery domain binds to a transcytosis effector.
(Item 53)
The lysosome transport molecule is selected from the group consisting of CD63, ITGA7, CD9, CD63, CD81, CD82, or CD151, and the transcytosis effector is an LDL receptor, IgA receptor, transferrin receptor, neonatal Fc receptor. 52. The multidomain therapeutic protein of item 52, selected from the group consisting of, insulin receptor, CD98, and basidine.
(Item 54)
The multi-domain therapeutic protein according to any one of items 40-53, comprising the structure shown in FIGS. 1C, 1D, 1E, or 1F.
(Item 55)
The polynucleotide encoding the multi-domain therapeutic protein according to any one of items 21 to 54.
(Item 56)
55. The polynucleotide of item 55, further comprising a viral nucleic acid sequence and a locus targeting nucleic acid sequence.
(Item 57)
55. The polynucleotide of item 55 or 56, further comprising a viral nucleic acid sequence and a locus targeting nucleic acid sequence, wherein the viral nucleic acid sequence is an adeno-related virus (AAV) nucleic acid sequence.
(Item 58)
It further comprises a viral nucleic acid sequence and a locus targeting nucleic acid sequence, wherein the viral nucleic acid sequence is an adeno-related virus (AAV) nucleic acid sequence and the AAV nucleic acid sequence comprises an internal terminal repeat sequence, optionally liver-specific. 55. The polynucleotide according to any one of items 55-57, comprising a tissue-specific regulator such as a target promoter or a nucleic acid-specific promoter.
(Item 59)
Further comprising a viral nucleic acid sequence and a locus targeting nucleic acid sequence, said viral nucleic acid sequence may optionally be tissue-specific, such as liver-specific promoter or neuron-specific promoter, with SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, or both. The polynucleotide according to any one of items 55 to 58, which is an adeno-related virus (AAV) nucleic acid sequence comprising an internal terminal repeat sequence comprising a regulator.
(Item 60)
The polynucleotide according to any one of items 55 to 59, further comprising a tissue-specific regulator comprising the sequence set forth in SEQ ID NO: 8 and / or SEQ ID NO: 9.
(Item 61)
A gene therapy vector comprising the polynucleotide according to any one of items 55 to 60. (Item 62)
The gene therapy vector
A viral vector, which is optionally a natural virus, an engineered virus, or a chimeric virus.
A naked polynucleotide comprising the polynucleotide according to any one of items 20 to 25,
Item 61, optionally selected from the group consisting of polynucleotide complexes, which are lipid nanoparticles comprising the polynucleotide and lipid according to any one of items 20-25, and any combination thereof. The gene therapy vector described in.
(Item 63)
Item 61 or 62, wherein the gene therapy vector is a viral vector selected from the group consisting of retrovirus, adenovirus, simple herpesvirus, poxvirus, vaccinia virus, lentivirus, or adeno-related virus. Therapy vector.
(Item 64)
62 or 63. The gene therapy vector according to item 62 or item 63, wherein the gene therapy vector is an AAV9, Anc80, AAV2 / 8 chimera and / or AAV pseudotype for a particular tissue, eg liver or neuron tissue.
(Item 65)
The nucleotide encoding the multi-domain therapeutic protein according to any one of items 21 to 54 in the method according to any one of items 1 to 20, and the poly according to any one of items 55 to 60. Use of nucleotides or the gene therapy vector according to any one of items 61-64.
The present invention provides, for example, the following items.
(Item A1)
A method of delivering a Therapeutic protein to a patient's central nervous system (CNS), in which a nucleotide composition encoding a multidomain therapeutic protein is delivered to the patient's liver and the multidomain therapeutic agent is delivered. A therapeutically effective amount of the multidomain therapeutic protein in the CNS to form a liver depot for production and secretion at a consistent serum level of at least 1 μg / mL over consecutive days, weeks, or months. Including providing
A method, wherein the multidomain therapeutic protein comprises an antibody or antigen-binding portion thereof that binds CD63 or ITGA7 to an enzyme domain.
(Item A2)
The method of item A1, wherein the therapeutic protein is a lysosomal enzyme.
(Item A3)
The method according to item A2, wherein the lysosomal enzyme is GAA.
(Item A4)
The method according to any one of items A1 to 3, wherein the nucleotide composition is administered via a viral vector.
(Item A5)
The method of item A4, wherein the viral vector is an AAV vector and optionally the nucleotide composition is administered at a dose of at least 2 × 10 ¹² viral genomes (vg / kg) per kilogram.
(Item A6)
The method according to any one of items A1 to 5, wherein the antibody or its antigen-binding protein comprises a single chain variable fragment (scFv).
(Item A7)
The method according to any one of items A1 to 6, wherein the antibody or its antigen-binding protein comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2.
(Item A8)
The method according to any one of items A1 to 7, wherein the therapeutic protein comprises a hydrolase.
(Item A9)
The method according to any one of items A1 to 8, wherein the therapeutic protein comprises glycosylase.
(Item A10)
The method according to any one of items A1 to 9, wherein the therapeutic protein comprises glycosidase.
(Item A11)
The method according to any one of items A1 to 10, wherein the therapeutic protein comprises alpha-glucosidase.
(Item A12)
The method according to any one of items A1 to 11, wherein the therapeutic protein comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 13, or a fragment thereof.
(Item A13)
The method according to any one of items A1 to 12, wherein the polynucleotide comprises the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 11.
(Item A14)
The method according to any one of items A1 to 13, wherein the enzyme domain comprises alpha-glucosidase and glycogen levels in any CNS tissue of the subject are reduced for at least 9 months after treatment.
(Item A15)
The method according to any one of items A1 to 14, wherein the subject has Pompe disease.
(Item A16)
The method according to any one of items A1 to 15, wherein the serum level is at least 2 μg / mL.
(Item A17)
The method according to any one of items A1 to 16, wherein the antibody or an antigen-binding portion thereof binds to the extracellular domain of CD63 or ITGA7.
(Item A18)
A multi-domain therapeutic protein comprising one or more delivery domains and enzyme domains, wherein one of the one or more delivery domains binds to the human transferrin receptor (hTfR) and the one or more. A multi-domain therapeutic protein, wherein the other of the plurality of delivery domains comprises an antibody that binds to CD63 or ITGA7 or an antigen-binding protein thereof.
(Item A19)
The multidomain therapeutic protein of item A18, wherein each of the one or more delivery domains comprises an antigen binding protein.
(Item A20)
The multidomain therapeutic protein of item A18 or item A19, wherein at least one of the one or more delivery domains comprises a single chain variable fragment (scFv).
(Item A21)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items A18-20, wherein at least one of the one or more delivery domains comprises a semi-antibody.
(Item A22)
The delivery domain that binds to hTfR is scFv, the half-antibody binds to CD63, the enzyme domain is GAA, and GAA is conjugated to the carboxy terminus of the half-antibody that binds to CD63, in item A21. The described multi-domain therapeutic protein.
(Item A23)
The multidomain therapeutic protein according to item A22, wherein each of the one or more delivery domains comprises scFv.
(Item A24)
The multi-domain therapeutic protein according to any one of items A20 to 23, wherein at least one scFv is fused to Fc.
(Item A25)
The multi-domain therapeutic protein according to item A24, wherein the Fc comprises a wild-type human IgG4 isotype, or a derivative thereof.
(Item A26)
The multi-domain therapeutic protein according to any one of items A24 to 25, wherein GAA is conjugated to the carboxy terminus of Fc.
(Item A27)
The multi-domain therapeutic protein of item A23, comprising anti-hTfR scFv, anti-hCD63 scFv.
(Item A28)
The multi-domain therapeutic protein of item A27, wherein the anti-hTfR scFv and anti-hCD63 scFv are both linked to a single GAA enzyme at their carboxy terminus.
(Item A29)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items A18 to 28, wherein the delivery domain is an anti-hTfR scFv and the enzyme domain is linked to the carboxy terminus of the VL domain of the scFv.
(Item A30)
The multidomain therapeutic protein according to item A29, which comprises the other delivery domain linked to the N-terminus of the VH domain of the anti-hTfR scFv.
(Item A31)
The multidomain therapeutic protein according to item A30, wherein the second delivery domain is anti-hCD63 scFv.
(Item A32)
The multidomain therapeutic protein according to any one of items A18 to 31, wherein the enzyme domain comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1.
(Item A33)
A multidomain therapeutic protein comprising at least two delivery domains and at least one enzyme domain, each of the two delivery domains being independently selected from the group consisting of antibodies, semi-antibodies, and scFv and at least one. The one or more delivery domains are associated with the at least one enzyme domain, preferably a multi-domain therapeutic protein in which the one or more delivery domains are co-linked to the at least one enzyme domain. ..
(Item A34)
The multi-domain therapeutic protein of item A33, comprising the structures shown in FIGS. 1C, 1D, 1E, or 1F.
(Item A35)
The polynucleotide encoding the multi-domain therapeutic protein according to any one of items A18 to 34.
(Item A36)
The polynucleotide according to item A35, further comprising a viral nucleic acid sequence and a locus targeting nucleic acid sequence.
(Item A37)
The polynucleotide according to item A35 or item A36, further comprising a viral nucleic acid sequence and a locus targeting nucleic acid sequence, wherein the viral nucleic acid sequence is an adeno-related virus (AAV) nucleic acid sequence.
(Item A38)
It further comprises a viral nucleic acid sequence and a locus targeting nucleic acid sequence, wherein the viral nucleic acid sequence is an adeno-related virus (AAV) nucleic acid sequence and the AAV nucleic acid sequence comprises an internal terminal repeat sequence, optionally liver-specific. The polynucleotide according to any one of items A35 to 37, which comprises a tissue-specific regulator such as a target promoter or a nucleic acid-specific promoter.
(Item A39)
Further comprising a viral nucleic acid sequence and a locus targeting nucleic acid sequence, said viral nucleic acid sequence may optionally be tissue-specific, such as liver-specific promoter or neuron-specific promoter, with SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, or both. The polynucleotide according to any one of items A35 to 38, which is an adeno-related virus (AAV) nucleic acid sequence comprising an internal terminal repeat sequence comprising a regulator.
(Item A40)
The polynucleotide according to any one of items A35 to 39, further comprising a tissue-specific regulator comprising the sequence set forth in SEQ ID NO: 8 and / or SEQ ID NO: 9.
(Item A41)
A gene therapy vector comprising the polynucleotide according to any one of items A35 to 40.
(Item A42)
The gene therapy vector
A viral vector, which is optionally a natural virus, an engineered virus, or a chimeric virus.
A bare polynucleotide comprising the polynucleotide according to any one of items A35-40,
A polynucleotide complex, which is a lipid nanoparticle optionally comprising the polynucleotide and lipid according to any one of items A34-39, and
The gene therapy vector according to item A41, which is selected from the group consisting of any combination thereof.
(Item A43)
The gene according to item A41 or item A42, wherein the gene therapy vector is a viral vector selected from the group consisting of retrovirus, adenovirus, simple herpesvirus, poxvirus, vaccinia virus, lentivirus, or adeno-related virus. Therapy vector.
(Item A44)
The gene therapy vector according to item A42 or item A43, wherein the gene therapy vector is an AAV9, Anc80, AAV2 / 8 chimera and / or AAV pseudotype for a particular tissue, eg liver or neuron tissue.
(Item A45)
The nucleotide encoding the multi-domain therapeutic protein according to any one of items A18 to 34 in the method according to any one of items A1 to 17, and the poly according to any one of items A35 to 40. Use of nucleotides or the gene therapy vector according to any one of items A41-44.

Claims

A composition comprising a polynucleotide encoding a multi-domain therapeutic protein for delivering the therapeutic protein into the subject's central nervous system (CNS), providing the CNS with a therapeutically effective amount of the multi-domain therapeutic protein. The composition is characterized in that the composition is administered to a subject via a liver-targeted delivery method sufficient to the present, wherein the multidomain therapeutic protein comprises a delivery domain and an enzyme domain.

The composition according to claim 1, wherein the delivery domain is an antibody or an antigen-binding fragment thereof that specifically binds to an internal transfer effector.

The composition according to claim 1 or 2, wherein the therapeutic protein is a lysosomal enzyme.

The composition according to claim 3, wherein the lysosomal enzyme is GAA.

The composition according to any one of claims 1 to 4, wherein the polynucleotide is administered via a viral vector.

The viral vector is an AAV vector and optionally the nucleotide composition is at least 2 × 10 per kilogram. ^１２12 5. The composition of claim 5, which is administered at a dose of viral genome (vg / kg).

13. Composition.

The delivery domain is
(I) CD63, Integulin Alpha 7 (ITGA7), MHC-I, Kremen-1, Kremen-2, LRP5, LRP6, LRP8, transferase receptor, LDL receptor, LDL-related protein 1 receptor, ASGR1, ASGR2, amyloid Precursor protein-like protein 2 (APLP2), aperin receptor (APLNR), myelin and lymphocyte protein (MAL), IGF2R, vacuolar H + ATPase, diphtheria toxin receptor, folic acid receptor, glutamate receptor, glutathione receptor , Leptin receptor, scavenger receptor A1-5 (SCARA1-5), SCARB1-3, and CD36.
(Ii) Expressed in several tissue types,
CD63, MHC-I, vacuolar H + ATPase, IGF2R, Integulin Alpha 7 (ITGA7), LRP5, LRP6, LRP8, Kremen-2, LDL receptor, LDL-related protein 1 receptor, amyloid precursor protein-like protein 2 (APLP2), Apelin Receptor (APLNR), PRLR, MAL (Myerin and Lymphatic Protein (MAL), Difteria Toxin Receptor, HBEGF (Heparin-Binding EGF-Like Growth Factor), Glutathion Receptor, Glutamic Acid Receptor, Leptin Receptor , And arbitrarily selected from the group consisting of folic acid receptors,
Optionally, the subject is Fabry's disease, Gaucher's disease, MPS I, MPS II, MPS IIIA, MPS IIIB, MPS IIID, MPS IVB, MPS VI, MPS VII, MPS IX, Pompe's disease, lysosome acidic lipase deficiency, heterogeneous staining. White leukodystrophy, Niemann-Pick disease types A, B, and C2, α-mannorosis, neurominidase deficiency, sialidosis, aspartylglycosamineuria, mixed saposin deficiency, atypical Gaucher's disease, Farber fatty granulomas Shows one or more symptoms of the disease selected from the group consisting of disease, fucosidosis, and β-Gaucher's disease.
(Iii) Preferredly expressed by bone and / or cartilage
Collagen X, Integrin Alpha 10 (ITGA10), Fibroblast Growth Factor Receptor 3 (FGFR3), Fibroblast Growth Factor Receptor Isoform C (FGFR3C), Hyaluronan and Proteoglycan Link Protein 1 (CRTL1), Aggrecan, Collagen II , And arbitrarily selected from the group consisting of Kremen-1
Optionally, the subject is MPS I, MPS II, MPS IIIA, MPS IIIB, MPS IIID, MPS IVA, MPS IVB, MPS VI, MPS VII, MPS IX, β-mannorosis, Gaucher's disease, atypical Gaucher's disease, mixed saposin. Shows one or more symptoms of the disease selected from the group consisting of deficiency, aspartyl glycosaccharinuria, Faber fatty granulomatosis, sialidosis, neurominidase deficiency, and α-mannorosis.
(Iv) preferentially expressed by monocytes, macrophages, or microglia,
Scavenger Receptor A1-5 (SCARA1-5), SCARB1-3, CD36, MSR1 (Macrophage Scavenger Receptor 1), MRC1 (Macrophage Mannose Receptor 1), VSIG4 (V Set and Immunoglobulin Domain Containing Protein 4), CD68 Arbitrarily selected from the group consisting of (macrociarin) and CSF1R (macrophage colony stimulating factor 1 receptor).
Optionally, the subject exhibits one or more symptoms of a disease selected from the group consisting of lysosomal acidic lipase deficiency, Gaucher's disease, atypical Gaucher's disease, mixed saposin deficiency, and Faber fatty granulomatosis.
(V) Priorityly expressed by renal cells
CDH16 (Cadheri-16), CLDN16 (Claudn-16), KL (Klotho), PTH1R (parathyroid hormone receptor), SLC22A13 (sodium transporter family 22 member 13), SLC5A2 (sodium / glucose cotransporter 2), And arbitrarily selected from the group consisting of UMOD (uromodulin),
Optionally, the subject exhibits or is diagnosed with one or more symptoms of a disease selected from the group consisting of Fabry disease, Alport syndrome, polycystic kidney disease, and thrombotic thrombocytopenic purpura. Being done
(Vi) Priorityly expressed by hepatocytes,
Optionally ASGR1 or ASGR2,
Optionally, the subject is lysosome acid lipase deficiency, Gaucher's disease, MPS VI, MPS VII, MPS II, Niemann-Pick's disease types A, B, and C2, sialidosis, Neuraminidase deficiency, atypical Gaucher's disease, mixed. Selected from the group consisting of Saposin deficiency, Ferber fatty granulomatosis, showing or being diagnosed with one or more symptoms of the disease,
(Vii) Priorityly expressed by muscle cells
BMPR1A (bone morphogenetic protein receptor 1A), m-cadherin, CD9, MuSK (muscle-specific kinase), LGR4 / GPR48 (G protein-conjugated receptor 48), cholinergic receptor (nicotinic) alpha 1, CDH15 (Cadheri-15), ITGA7 (Integran Alpha 7), CACNG1 (L-type calcium channel subunit gamma 1), CACNAlS (L-type calcium channel subunit alpha 15), CACNG6 (L-type calcium channel subunit gamma 6), SCN1B (Sodium channel subunit beta 1), CHRNA1 (ACh receptor subunit alpha), CHRND (ACh receptor subunit delta), LRRC14B (leucine-rich repeat-containing protein 14B), dystroglycan (DAG1), and POPDC3 (Popeye domain). Arbitrarily selected from the group consisting of contained proteins 3),
Optionally, the subject exhibits, or is diagnosed with, one or more symptoms of Pompe's disease.
(Viii) Selected from the group consisting of ITGA7, CD9, CD63, ALPL2, MSR1, ASGR1, ASGR2, or PRLR, or
(Ix) The composition according to any one of claims 1 to 7, which is CD63 and which binds to an internal migration effector.

The composition according to any one of claims 1 to 8, wherein the delivery domain is a single chain variable fragment (scFv).

The composition according to any one of claims 1 to 9, wherein the cell surface receptor (CSR) -binding protein (CSR-BP) comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2.

The composition according to any one of claims 1 to 10, wherein the therapeutic protein comprises a hydrolase.

The composition according to any one of claims 1 to 11, wherein the therapeutic protein comprises glycosylase.

The composition according to any one of claims 1 to 12, wherein the therapeutic protein comprises glycosidase.

The composition according to any one of claims 1 to 13, wherein the therapeutic protein comprises alpha-glucosidase.

The composition according to any one of claims 1 to 14, wherein the therapeutic protein comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 13, or a fragment thereof.

The composition according to any one of claims 1 to 15, wherein the therapeutic protein comprises an anti-ABeta or an anti-tau antibody.

The composition according to any one of claims 1 to 16, wherein the polynucleotide comprises the nucleic acid sequence of SEQ ID NO: 11.

The composition according to any one of claims 1 to 17, wherein the enzyme domain comprises alpha-glucosidase and glycogen levels in any CNS tissue of the subject are reduced for at least nine months after treatment.

The composition according to any one of claims 1 to 18, wherein the subject has Pompe disease.

The composition according to any one of claims 1 to 19, wherein the administered nucleotide composition provides at least 1 μg / mL protein serum level for multidomain therapy.

A multidomain therapeutic protein comprising one or more delivery domains and enzyme domains, wherein the one or more delivery domains bind to the human transferrin receptor (hTfR).

21. The multidomain therapeutic protein of claim 21, further comprising a second delivery domain that binds to an internal translocation effector.

The second delivery domain is
(I) CD63, Integulin Alpha 7 (ITGA7), MHC-I, Kremen-1, Kremen-2, LRP5, LRP6, LRP8, transferase receptor, LDL receptor, LDL-related protein 1 receptor, ASGR1, ASGR2, amyloid Precursor protein-like protein 2 (APLP2), aperin receptor (APLNR), myelin and lymphocyte protein (MAL), IGF2R, vacuolar H + ATPase, diphtheria toxin receptor, folic acid receptor, glutamate receptor, glutathione receptor , An internal translocation effector selected from the group consisting of Leptin receptor, scavenger receptor A1-5 (SCARA1-5), SCARB1-3, and CD36.
(Ii) CD63, MHC-I, vacuolar H + ATPase, IGF2R, Integulin Alpha 7 (ITGA7), LRP5, LRP6, LRP8, Kremen-2, LDL receptor, LDL-related protein 1 receptor, amyloid precursor protein Like protein 2 (APLP2), aperin receptor (APLNR), PRLR, MAL (myelin and lymphocyte protein (MAL), diphtheria toxin receptor, HBEGF (heparin-binding EGF-like growth factor), glutathione receptor, glutamate receptor, An internal translocation effector expressed in several tissue types, optionally selected from the group consisting of leptin and folic acid receptors.
(Iii) Collagen X, Integulin Alpha 10 (ITGA10), Fibroblast Growth Factor Receptor 3 (FGFR3), Fibroblast Growth Factor Receptor Isoform C (FGFR3C), Hyaluronan and Proteoglycan Link Protein 1 (CRTL1), Aglycan , Collagen II, and an internal migration effector preferentially expressed by bone and / or cartilage, optionally selected from the group consisting of Kremen-1.
(Iv) Scavenger Receptor A1-5 (SCARA1-5), SCARB1-3, CD36, MSR1 (Macrophage Scavenger Receptor 1), MRC1 (Macrophage Mannose Receptor 1), VSIG4 (V Set and Immunoglobulin Domain-Containing Protein 4) ), CD68 (macrosialin), and CSF1R (macrophage colony stimulating factor 1 receptor), an internal translocation effector preferentially expressed by monocytes, macrophages, or microglia, optionally selected from the group.
(V) CDH16 (Cadheri-16), CLDN16 (Claudn-16), KL (Klotho), PTH1R (parathyroid hormone receptor), SLC22A13 (solute transporter family 22 member 13), SLC5A2 (sodium / glucose cotransporter) 2), an internal translocation effector preferentially expressed by renal cells, optionally selected from the group consisting of UMOD (uromodulin), and in certain other embodiments, a muscle-specific internalizer. , For example, BMPR1A (bone morphogenetic protein receptor 1A), m-cadherin, CD9, MuSK (muscle-specific kinase), LGR4 / GPR48 (G protein conjugated receptor 48), cholinergic receptor (nicotinic) alpha. 1, CDH15 (Cadheri-15), ITGA7 (Integran Alpha 7), CACNG1 (L-type calcium channel subunit gamma 1), CACNAlS (L-type calcium channel subunit alpha 15), CACNG6 (L-type calcium channel subunit gamma 6) ), SCN1B (sodium channel subunit beta 1), CHRNA1 (ACh receptor subunit alpha), CHRND (ACh receptor subunit delta), LRRC14B (leucine-rich repeat-containing protein 14B), dystroglycan (DAG1), and POPDC3. (Popeye domain-containing protein 3), etc., an internal migration effector,
(Vi) An internal translocation effector, optionally expressed preferentially by hepatocytes, such as ASGR1 or ASGR2.
(Vii) BMPR1A (bone morphogenetic protein receptor 1A), m-cadherin, CD9, MuSK (muscle-specific kinase), LGR4 / GPR48 (G protein-conjugated receptor 48), cholinergic receptor (nicotinic) alpha 1, CDH15 (Cadheri-15), ITGA7 (Integran Alpha 7), CACNG1 (L-type calcium channel subunit gamma 1), CACNAlS (L-type calcium channel subunit alpha 15), CACNG6 (L-type calcium channel subunit gamma 6) ), SCN1B (sodium channel subunit beta 1), CHRNA1 (ACh receptor subunit alpha), CHRND (ACh receptor subunit delta), LRRC14B (leucine-rich repeat-containing protein 14B), dystroglycan (DAG1), and POPDC3. An internal translocation effector preferentially expressed by muscle cells, or an internal translocation effector, arbitrarily selected from the group consisting of (Popeye domain-containing protein 3).
(Viii) The multi-domain therapeutic protein according to claim 22, which binds to an internal translocation effector protein selected from the group consisting of ITGA7, CD9, CD63, ALPL2, MSR1, ASGR1, ASGR2, or PRLR.

The multidomain therapeutic protein according to any one of claims 21 to 23, wherein the second delivery domain binds to the internal transfer effector CD63.

The multi-domain therapeutic protein according to any one of claims 21 to 24, wherein at least one of the one or more delivery domains comprises an antigen-binding protein.

25. The multidomain therapeutic protein of claim 25, wherein each of the one or more delivery domains comprises an antigen binding protein.

The multidomain therapeutic protein according to any one of claims 21 to 26, wherein at least one of the one or more delivery domains comprises a single chain variable fragment (scFv).

The multidomain therapeutic protein according to any one of claims 21 to 27, wherein at least one of the one or more delivery domains comprises a hapten antibody.

28. The delivery domain that binds to hTfR is scFv, the half-antibody binds to CD63, the enzyme domain is GAA, and GAA is conjugated to the carboxy terminus of the half-antibody that binds to CD63. The multi-domain therapeutic protein described in.

28. The multidomain therapeutic protein of claim 27, wherein each of the one or more delivery domains comprises scFv.

The multi-domain therapeutic protein according to any one of claims 27 to 30, wherein at least one scFv is fused to Fc.

31. The multi-domain therapeutic protein according to claim 31, wherein the Fc comprises a wild-type human IgG4 isotype or a derivative thereof.

The multi-domain therapeutic protein according to any one of claims 31 to 32, wherein GAA is conjugated to the carboxy terminus of Fc.

30. The multi-domain therapeutic protein of claim 30, comprising anti-hTfR scFv, anti-hCD63 scFv.

34. The multi-domain therapeutic protein of claim 34, wherein the anti-hTfR scFv and anti-hCD63 scFv are both linked to a single GAA enzyme at their carboxy terminus.

The multidomain therapeutic protein according to any one of claims 21 to 27, wherein the delivery domain is an anti-hTfR scFv and the enzyme domain is linked to the carboxy terminus of the VL domain of the scFv.

36. The multidomain therapeutic protein of claim 36, further comprising a second delivery domain linked to the N-terminus of the VH domain of the anti-hTfR scFv.

The multi-domain therapeutic protein of claim 37, wherein the second delivery domain is anti-hCD63 scFV.

The multidomain therapeutic protein according to any one of claims 21 to 38, wherein the enzyme domain comprises the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1.

A multidomain therapeutic protein comprising at least two delivery domains and at least one enzyme domain, each of the two delivery domains being independently selected from the group consisting of antibodies, semi-antibodies, and scFv and at least one. The one or more delivery domains are associated with the at least one enzyme domain, preferably a multi-domain therapeutic protein in which the one or more delivery domains are co-linked to the at least one enzyme domain. ..

The multidomain therapeutic protein of claim 40, comprising two or less delivery domains.

The multidomain therapeutic protein of claim 40 or 41, wherein only one of the delivery domains is associated with the at least one enzyme domain.

The multidomain therapeutic protein according to any one of claims 40 to 42, wherein each of the at least two delivery domains is covalently bound to the enzyme domain.

The multidomain therapeutic protein of claim 43, wherein each of the at least two delivery domains is covalently attached to the same enzyme domain.

The multidomain therapeutic protein of claim 43, wherein each of the at least two delivery domains is covalently attached to a different enzyme domain.

The multidomain therapeutic protein according to any one of claims 40 to 45, which comprises two or less delivery domains, the first delivery domain comprising a semi-antibody, and the second delivery domain comprising scFv. ..

The multi-domain therapeutic protein of claim 46, wherein the scFv is fused to Fc.

46. The multi-domain therapeutic protein according to claim 47.

The multidomain therapeutic protein according to any one of claims 40 to 45, which comprises two or less delivery domains, wherein the first delivery domain and the second delivery domain each contain scFv.

The multi-domain therapeutic protein according to claim 49, wherein both the first and second scFv are covalently bound to the enzyme domain.

N-terminal to C-terminal: The multidomain therapeutic protein of claim 49, comprising said first scFv, said second scFv, and said enzyme domain.

The multidomain therapeutic protein according to any one of claims 40 to 51, wherein at least one delivery domain binds to a lysosomal transport molecule and at least one delivery domain binds to a transcytosis effector.

The lysosome transport molecule is selected from the group consisting of CD63, ITGA7, CD9, CD63, CD81, CD82, or CD151, and the transcytosis effector is an LDL receptor, IgA receptor, transferrin receptor, neonatal Fc receptor. 52. The multidomain therapeutic protein of claim 52, selected from the group consisting of, insulin receptor, CD98, and basidine.

The multi-domain therapeutic protein according to any one of claims 40 to 53, comprising the structure shown in FIGS. 1C, 1D, 1E, or 1F.

The polynucleotide encoding the multi-domain therapeutic protein according to any one of claims 21 to 54.

The polynucleotide according to claim 55, further comprising a viral nucleic acid sequence and a locus targeting nucleic acid sequence.

The polynucleotide according to claim 55 or 56, further comprising a viral nucleic acid sequence and a locus targeting nucleic acid sequence, wherein the viral nucleic acid sequence is an adeno-related virus (AAV) nucleic acid sequence.

It further comprises a viral nucleic acid sequence and a locus targeting nucleic acid sequence, wherein the viral nucleic acid sequence is an adeno-related virus (AAV) nucleic acid sequence and the AAV nucleic acid sequence comprises an internal terminal repeat sequence, optionally liver-specific. The polynucleotide according to any one of claims 55 to 57, comprising a tissue-specific regulator such as a target promoter or a nucleic acid-specific promoter.

Further comprising a viral nucleic acid sequence and a locus targeting nucleic acid sequence, said viral nucleic acid sequence may optionally be tissue-specific, such as liver-specific promoter or neuron-specific promoter, with SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, or both. The polynucleotide according to any one of claims 55 to 58, which is an adeno-related virus (AAV) nucleic acid sequence comprising an internal terminal repeat sequence comprising a regulator.

The polynucleotide according to any one of claims 55 to 59, further comprising a tissue-specific regulator comprising the sequence set forth in SEQ ID NO: 8 and / or SEQ ID NO: 9.

A gene therapy vector comprising the polynucleotide according to any one of claims 55 to 60.

The gene therapy vector
A viral vector, which is optionally a natural virus, an engineered virus, or a chimeric virus.
A naked polynucleotide comprising the polynucleotide according to any one of claims 20 to 25.
A polynucleotide complex, which is a lipid nanoparticle optionally comprising the polynucleotide and lipid according to any one of claims 20-25, and
The gene therapy vector according to claim 61, which is selected from the group consisting of any combination thereof.

61 or 62, wherein the gene therapy vector is a viral vector selected from the group consisting of retrovirus, adenovirus, simple herpesvirus, poxvirus, vaccinia virus, lentivirus, or adeno-related virus. Gene therapy vector.

62 or 63. The gene therapy vector according to claim 62, wherein the gene therapy vector is an AAV pseudotype for AAV9, Anc80, AAV2 / 8 chimera and / or a particular tissue, eg liver or neuron tissue.

The nucleotide encoding the multidomain therapeutic protein according to any one of claims 21 to 54 for delivering the therapeutic protein into the central nervous system (CNS) of the subject, any of claims 55 to 60. A composition comprising the polynucleotide according to one item or the gene therapy vector according to any one of claims 61 to 64.