JPWO2019026230A1 - Manufacturing method of ceramide - Google Patents
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Abstract
魚肉から有機溶媒により抽出される抽出物から、セラミドを選択的に分離することができるセラミドの製造方法を提供する。魚肉１を第１の混合溶媒２中で撹拌し、セラミドとセラミドシリアチンとを混合溶媒２中に抽出し、混合溶媒２を濾過して得られた濾液５を減圧蒸留により乾固して混合物６を得て、混合物６に第２の混合溶媒１１を加え、撹拌した後、静置することにより、ヘキサン相１３とエタノール−水相１４とに分離し、ヘキサン相１３からセラミド１５を得る。Provided is a method for producing ceramide capable of selectively separating ceramide from an extract extracted from fish meat with an organic solvent. The fish meat 1 is stirred in the first mixed solvent 2, ceramide and ceramide silitine are extracted into the mixed solvent 2, the mixed solvent 2 is filtered, and the obtained filtrate 5 is dried by vacuum distillation to dry the mixture. 6 is obtained, the second mixed solvent 11 is added to the mixture 6, and the mixture is stirred and then allowed to stand to separate the hexane phase 13 and the ethanol-aqueous phase 14, and the ceramide 15 is obtained from the hexane phase 13.
Description
本発明は、セラミドの製造方法に関する。 The present invention relates to a method for producing ceramide.
セラミド等のスフィンゴ脂質は、皮膚の保湿効果を高めることが知られており、化粧品原料等の用途に用いられている。 Sphingolipids such as ceramide are known to enhance the moisturizing effect of the skin, and are used as raw materials for cosmetics.
セラミドは、次式（１）で示される化合物である。一方、魚肉の場合には、次式（２）で示されるセラミドシリアチンとして存在しており、セラミドシリアチンの一部がその遊離体としてのセラミドに変化していると考えられる。 Ceramide is a compound represented by the following formula (1). On the other hand, in the case of fish meat, it exists as ceramide silitin represented by the following formula (2), and it is considered that a part of ceramide silitin is changed to ceramide as its free form.
（１）
(1)
尚、式（１）、式（２）において、---は−(ＣＨ)ｎ−（ｎは整数）を示す。
In the equations (1) and (2), --- indicates − (CH) n − (n is an integer).
従来、セラミドの製造方法として、動植物から有機溶剤によりセラミドを抽出する方法が知られており、前記有機溶媒としてメタノール、エタノール、ヘキサン、アセトン等の溶媒を混合して用いることが知られている（例えば、特許文献１参照）。 Conventionally, as a method for producing ceramide, a method of extracting ceramide from animals and plants with an organic solvent has been known, and it is known that a solvent such as methanol, ethanol, hexane, or acetone is mixed and used as the organic solvent (as the organic solvent). For example, see Patent Document 1).
また、米糠からセラミドを抽出する場合には、水、エタノール、ヘキサン、アセトンから選択される２種以上の溶媒を混合して用いることが知られている（例えば、特許文献２参照）。 Further, when ceramide is extracted from rice bran, it is known that two or more kinds of solvents selected from water, ethanol, hexane and acetone are mixed and used (see, for example, Patent Document 2).
しかしながら、前記従来の製造方法により魚肉から抽出される抽出物は、前記式（１）で示されるセラミドと、前記式（２）で示されるセラミドシリアチンとの混合物であり、セラミドとセラミドシリアチンとでは作用が異なるため、セラミドを選択的に分離することが望まれる。 However, the extract extracted from fish meat by the conventional production method is a mixture of the ceramide represented by the formula (1) and the ceramide syratin represented by the formula (2), and is a mixture of ceramide and ceramide syratin. Since the action is different from that of ceramide, it is desirable to selectively separate ceramide.
本発明は、かかる事情に鑑み、魚肉から有機溶媒により抽出される抽出物から、セラミドを選択的に分離することができるセラミドの製造方法を提供することを目的とする。 In view of such circumstances, an object of the present invention is to provide a method for producing ceramide, which can selectively separate ceramide from an extract extracted from fish meat with an organic solvent.
かかる目的を達成するために、本発明のセラミドの製造方法は、原料となる魚肉を、ヘキサンとエタノールとからなる第１の混合溶媒中で撹拌し、セラミドとセラミドシリアチンとを該第１の混合溶媒中に抽出する工程と、該第１の混合溶媒を濾過して濾液を得る工程と、得られた濾液を減圧蒸留により乾固して、セラミドとセラミドシリアチンとの混合物を得る工程と、該乾固により得られたセラミドとセラミドシリアチンとの混合物に、ヘキサンとエタノールと水とからなる第２の混合溶媒を加え、撹拌した後、静置することにより、該第２の混合溶媒をヘキサン相とエタノール−水相とに分離する工程と、該ヘキサン相を乾固してセラミドを得る工程とを備えることを特徴とする。 In order to achieve such an object, in the method for producing ceramide of the present invention, fish meat as a raw material is stirred in a first mixed solvent consisting of hexane and ethanol, and ceramide and ceramide silitine are mixed with the first mixture. A step of extracting into a mixed solvent, a step of filtering the first mixed solvent to obtain a filtrate, and a step of drying the obtained filtrate by vacuum distillation to obtain a mixture of ceramide and ceramide silitane. A second mixed solvent consisting of hexane, ethanol, and water is added to the mixture of ceramide and ceramide silitine obtained by the dry solidification, stirred, and then allowed to stand to allow the second mixed solvent. It is characterized by comprising a step of separating the hexane phase into an ethanol-aqueous phase and a step of drying the hexane phase to obtain ceramide.
本発明のセラミドの製造方法では、まず、原料となる魚肉を、ヘキサンとエタノールとからなる第１の混合溶媒中で撹拌し、セラミドとセラミドシリアチンとを該第１の混合溶媒中に抽出する。次に、第１の混合溶媒を濾過して濾液を得る。前記濾過により、前記第１の混合溶媒に含まれる魚肉の残渣を除去し、セラミドとセラミドシリアチンとを含む濾液を得ることができる。 In the method for producing ceramide of the present invention, first, fish meat as a raw material is stirred in a first mixed solvent consisting of hexane and ethanol, and ceramide and ceramide silitine are extracted into the first mixed solvent. .. Next, the first mixed solvent is filtered to obtain a filtrate. By the filtration, the residue of fish meat contained in the first mixed solvent can be removed, and a filtrate containing ceramide and ceramide silitin can be obtained.
次に、得られた濾液を減圧蒸留により乾固して、セラミドとセラミドシリアチンとの混合物を得る。前記濾液は、減圧蒸留することにより、セラミド又はセラミドシリアチンが分解されることなく、前記第１の混合溶媒を留去することができる。 Next, the obtained filtrate is dried by vacuum distillation to obtain a mixture of ceramide and ceramide silitine. By distilling the filtrate under reduced pressure, the first mixed solvent can be distilled off without decomposing ceramide or ceramide silitin.
次に、前記乾固により得られたセラミドとセラミドシリアチンとの混合物に、ヘキサンとエタノールと水とからなる第２の混合溶媒を加え、撹拌した後、静置することにより、該第２の混合溶媒をヘキサン相とエタノール−水相とに分離する。このとき、セラミドシリアチンが実質的にエタノール−水相に溶解しているのに対し、セラミドはヘキサン相とエタノール−水相とに対する分配係数に従って、ヘキサン相とエタノール−水相との両方に溶解している。 Next, a second mixed solvent consisting of hexane, ethanol, and water was added to the mixture of ceramide and ceramide silitin obtained by the dry solidification, stirred, and then allowed to stand. The mixed solvent is separated into a hexane phase and an ethanol-aqueous phase. At this time, ceramide silitin is substantially dissolved in the ethanol-aqueous phase, whereas ceramide is dissolved in both the hexane phase and the ethanol-aqueous phase according to the partition coefficient for the hexane phase and the ethanol-aqueous phase. are doing.
そこで、実質的にセラミドのみを選択的に含有している前記ヘキサン相を乾固することによりセラミドを得ることができる。 Therefore, ceramide can be obtained by drying the hexane phase, which substantially selectively contains only ceramide.
上述のように、本発明のセラミドの製造方法によれば、魚肉から前記第１の混合溶媒により抽出されたセラミドとセラミドシリアチンとの混合物を、ヘキサンとエタノールと水とからなる前記第２の混合溶媒に溶解し、ヘキサン相とエタノール−水相とに分離することにより、該ヘキサン相から容易且つ選択的にセラミドを得ることができる。 As described above, according to the method for producing ceramide of the present invention, the mixture of ceramide and ceramide silitin extracted from fish meat by the first mixed solvent is composed of hexane, ethanol and water. By dissolving in a mixed solvent and separating into a hexane phase and an ethanol-aqueous phase, ceramide can be easily and selectively obtained from the hexane phase.
前記第２の混合溶媒は、例えば、エタノール１００質量部に対し、ヘキサンを１００〜２００質量部の範囲、水を３〜５０質量％の範囲で含む組成とすることができる。 The second mixed solvent may have a composition containing, for example, 100 parts by mass of hexane and 3 to 50% by mass of water with respect to 100 parts by mass of ethanol.
また、本発明のセラミドの製造方法では、前記減圧蒸留により乾固して得られたセラミドとセラミドシリアチンとの混合物に、ヘキサンを加え、撹拌した後、濾過して得られた濾液を減圧蒸留により乾固する操作を所定回数行うことが好ましい。 Further, in the method for producing ceramide of the present invention, hexane is added to a mixture of ceramide and ceramide cyanitin obtained by drying under reduced pressure distillation, stirring is performed, and the filtrate obtained by filtration is distilled under reduced pressure. It is preferable to perform the operation of drying by a predetermined number of times.
このようにすると、セラミドとセラミドシリアチンとはヘキサンに溶解されるので、ヘキサンに溶解しない夾雑物を濾別することができ、前記セラミドとセラミドシリアチンとの混合物を精製することができる。前記操作は、例えば、１〜５回行うことが好ましい。 In this way, since ceramide and ceramide silitin are dissolved in hexane, impurities that are not soluble in hexane can be filtered off, and a mixture of the ceramide and ceramide silitin can be purified. The operation is preferably performed 1 to 5 times, for example.
また、本発明のセラミドの製造方法では、セラミドは、ヘキサン相とエタノール−水相との両方に分配されて溶解しているので、該エタノール−水相にはセラミドシリアチンとともに該ヘキサン相に抽出されなかった残余のセラミドが含まれている。 Further, in the method for producing ceramide of the present invention, since ceramide is distributed and dissolved in both the hexane phase and the ethanol-aqueous phase, it is extracted into the hexane phase together with ceramide cyanitin in the ethanol-aqueous phase. Contains residual ceramide that was not used.
そこで、本発明のセラミドの製造方法では、前記エタノール−水相にヘキサンを加え、撹拌した後、静置することにより、ヘキサン相とエタノール−水相とに分離し、該ヘキサン相を乾固してセラミドを得る操作を少なくとも１回行うことが好ましい。このようにすることにより、前記エタノール−水相に含まれるセラミドをヘキサンにより抽出して回収することができ、セラミドの収率を向上させることができる。 Therefore, in the method for producing ceramide of the present invention, hexane is added to the ethanol-aqueous phase, stirred, and then allowed to stand to separate the hexane phase from the ethanol-aqueous phase, and the hexane phase is dried. It is preferable to perform the operation of obtaining ceramide at least once. By doing so, the ceramide contained in the ethanol-aqueous phase can be extracted with hexane and recovered, and the yield of ceramide can be improved.
また、本発明のセラミドの製造方法では、前記魚肉は、例えば、イカの魚肉を乾燥後、粉砕して得られた粉末を用いることができる。 Further, in the method for producing ceramide of the present invention, as the fish meat, for example, powder obtained by drying squid fish meat and then pulverizing it can be used.
次に、添付の図面を参照しながら本発明の実施の形態についてさらに詳しく説明する。 Next, embodiments of the present invention will be described in more detail with reference to the accompanying drawings.
図１に示すように、本実施形態のセラミドの製造方法では、まず、反応容器に収容された原料の魚肉１に、第１の混合溶媒２を添加して、撹拌、混合することにより、第１の混合液３を得る。 As shown in FIG. 1, in the method for producing ceramide of the present embodiment, first, the first mixed solvent 2 is added to the raw material fish meat 1 contained in the reaction vessel, and the mixture is stirred and mixed. Obtain the mixed solution 3 of 1.
魚肉１としては、例えば、真イカ、ヤリイカ、剣先イカ等を２日間天日乾燥し、さらに温風乾燥機により４０℃で４８時間乾燥した乾燥品を裁断し、さらに粉砕した粉末を用いることができる。前記粉末は、例えば、約１０質量％の水分を含み、５００μｍ以下の粒子径を備えている。また、第１の混合溶媒２は、ヘキサンとエタノールからなり、例えば、エタノール１００質量部に対し、ヘキサンを５５〜６５質量部の範囲で含んでいる。 As the fish meat 1, for example, true squid, squid, swordtip squid, etc. may be dried in the sun for 2 days, and a dried product dried at 40 ° C. for 48 hours may be cut with a warm air dryer, and further crushed powder may be used. it can. The powder contains, for example, about 10% by mass of water and has a particle size of 500 μm or less. The first mixed solvent 2 is composed of hexane and ethanol, and contains, for example, hexane in the range of 55 to 65 parts by mass with respect to 100 parts by mass of ethanol.
次に、反応容器中で、１０ｇの魚肉１に対し、第１の混合溶媒２を例えば６０〜１２０ｍｌ添加し、１〜４時間撹拌、混合する。このようにすることにより、魚肉１に含まれるセラミドとセラミドシリアチンとが、第１の混合溶媒２に抽出された第１の混合液３が得られる。 Next, in a reaction vessel, for example, 60 to 120 ml of the first mixed solvent 2 is added to 10 g of fish meat 1, and the mixture is stirred and mixed for 1 to 4 hours. By doing so, the first mixed solution 3 in which the ceramide and the ceramide silitin contained in the fish meat 1 are extracted into the first mixed solvent 2 is obtained.
本実施形態では、次に、第１の混合液３を濾過し、第１の混合液３に含まれる魚肉の残渣４を除去し、セラミドとセラミドシリアチンとを含む濾液５を得る。そして、濾液５を蒸発乾固させることにより、セラミドとセラミドシリアチンとを含む混合物６を得る。前記蒸発乾固は、例えば、ロータリーエバポレーター等を用いて濾液５を減圧蒸留し、第１の混合溶媒２を留去することにより行うことができる。 In the present embodiment, the first mixed solution 3 is then filtered to remove the fish meat residue 4 contained in the first mixed solution 3 to obtain a filtrate 5 containing ceramide and ceramide silitine. Then, the filtrate 5 is evaporated to dryness to obtain a mixture 6 containing ceramide and ceramide silitine. The evaporation to dryness can be carried out by, for example, distilling the filtrate 5 under reduced pressure using a rotary evaporator or the like and distilling off the first mixed solvent 2.
本実施形態では、次に、反応容器中で、例えば、１．０ｇの混合物６に対し、２０〜５０ｍｌのヘキサンを添加する。混合物６は、セラミドとセラミドシリアチンとの他に、ヘキサンに溶解しにくい夾雑物を含んでいる。そこで、混合物６にヘキサンを添加することにより、主としてセラミドとセラミドシリアチンとが溶解している混合物溶液７を得ることができる。 In this embodiment, then, in the reaction vessel, for example, 20 to 50 ml of hexane is added to 1.0 g of the mixture 6. Mixture 6 contains impurities that are difficult to dissolve in hexane, in addition to ceramide and ceramide silitine. Therefore, by adding hexane to the mixture 6, it is possible to obtain a mixture solution 7 in which ceramide and ceramide silitine are mainly dissolved.
次いで、混合物溶液７を濾過することにより前記夾雑物を濾別して残渣８として除去することができ、得られた濾液９を蒸発乾固することにより、精製されたセラミドとセラミドシリアチンとの混合物（精製混合物１０）を得ることができる。濾液９の蒸発乾固は、濾液５の蒸発乾固と同様にして行うことができる。 Next, the contaminants can be filtered off and removed as the residue 8 by filtering the mixture solution 7, and the obtained filtrate 9 is evaporated to dryness to obtain a mixture of purified ceramide and ceramide silitine ( A purified mixture 10) can be obtained. The evaporative dryness of the filtrate 9 can be carried out in the same manner as the evaporative dryness of the filtrate 5.
混合物６にヘキサンを添加して、混合物溶液７を濾過し、濾液９を蒸発乾固する操作は行わなくてもよいが、１〜１０回繰り返すことにより、精製混合物１０としてより純度の高いセラミドとセラミドシリアチンとを得ることができる。ただし、前記操作が５回を超えると、セラミドの収率が低下することがある。 It is not necessary to add hexane to the mixture 6, filter the mixture solution 7, and evaporate to dryness the filtrate 9, but by repeating the process 1 to 10 times, the purified mixture 10 can be obtained with a higher purity ceramide. Ceramide silitin and can be obtained. However, if the operation is performed more than 5 times, the yield of ceramide may decrease.
本実施形態では、次に、精製混合物１０を分液ロートに収容し、第２の混合溶媒１１を添加して、第２の混合液１２を得る。第２の混合溶媒１１は、ヘキサンとエタノールと水とからなり、例えば、エタノール１００質量部に対し、ヘキサンを１００〜２００質量部、水を３〜５０質量部の範囲で含んでいる。 In the present embodiment, the purified mixture 10 is then placed in a separatory funnel and the second mixed solvent 11 is added to obtain a second mixed solution 12. The second mixed solvent 11 is composed of hexane, ethanol and water, and contains, for example, 100 to 200 parts by mass of hexane and 3 to 50 parts by mass of water with respect to 100 parts by mass of ethanol.
第２の混合液１２は、分液ロート中で、１．０ｇの精製混合物１０に対し、第２の混合溶媒１１を例えば３０〜１５０ｍｌ添加することにより得られる。次いで、第２の混合液１２を、例えば、０．５〜１．５時間撹拌した後、静置する。このようにすると、第２の混合液１２は分液ロート中でヘキサン相１３と、エタノール−水相１４とに分離する。 The second mixed solution 12 is obtained by adding, for example, 30 to 150 ml of the second mixed solvent 11 to 1.0 g of the purified mixture 10 in a separating funnel. Next, the second mixed solution 12 is stirred for, for example, 0.5 to 1.5 hours, and then allowed to stand. In this way, the second mixed solution 12 is separated into a hexane phase 13 and an ethanol-aqueous phase 14 in the separating funnel.
ここで、ヘキサン相１３にはセラミドが含まれており、エタノール−水相１４にはセラミドとセラミドシリアチンとが含まれている。そこで、ヘキサン相１３とエタノール−水相１４とを分離し、ヘキサン相１３を蒸発乾固することによりセラミド１５を得ることができる。ヘキサン相１３の蒸発乾固は、濾液５又は濾液９の蒸発乾固と同様にして行うことができる。 Here, the hexane phase 13 contains ceramide, and the ethanol-aqueous phase 14 contains ceramide and ceramide silitine. Therefore, the ceramide 15 can be obtained by separating the hexane phase 13 and the ethanol-aqueous phase 14 and evaporating and drying the hexane phase 13. The evaporative dryness of the hexane phase 13 can be carried out in the same manner as the evaporative dryness of the filtrate 5 or the filtrate 9.
一方、エタノール−水相１４には、セラミドとセラミドシリアチンとが含まれているので、エタノール−水相１４にヘキサンを加え、撹拌した後、静置し、再びヘキサン相１３とエタノール−水相１４とに分離し、ヘキサン相１３を蒸発乾固する操作を少なくとも１回行うことが好ましい。このようにすることにより、エタノール−水相１４中に含まれるセラミドを回収することができ、全体としてのヘキサンの収率を向上させることができる。 On the other hand, since the ethanol-aqueous phase 14 contains ceramide and ceramide silitane, hexane is added to the ethanol-aqueous phase 14, stirred, allowed to stand, and again the hexane phase 13 and the ethanol-aqueous phase. It is preferable to carry out the operation of separating into 14 and evaporating and drying the hexane phase 13 at least once. By doing so, the ceramide contained in the ethanol-aqueous phase 14 can be recovered, and the yield of hexane as a whole can be improved.
尚、本実施形態では、ヘキサン相１３とエタノール−水相１４との分離を分液ロートにより行っているが、工業的に行う場合には、例えば、向流多段抽出法等の方法により行うことができる。 In the present embodiment, the hexane phase 13 and the ethanol-aqueous phase 14 are separated by a separatory funnel, but when industrially performed, for example, a countercurrent multistage sampling method or the like is used. Can be done.
次に、実施例を示す。 Next, an example will be shown.
本実施例では、まず、魚肉１として、例えば、真イカ、ヤリイカ、剣先イカ等を２日間天日乾燥し、さらに温風乾燥機により４０℃で４８時間乾燥した乾燥品を裁断し、さらに粉砕したイカ粉末１０ｇを用意した。次に、反応容器中で、１０ｇの魚肉１に対し、エタノール５０ｍｌとヘキサン３０ｍｌとからなる第１の混合溶媒２を添加し、２時間撹拌、混合して、第１の混合液３を得た。 In this embodiment, first, as fish meat 1, for example, true squid, squid, swordtip squid, etc. are dried in the sun for 2 days, and then a dried product dried at 40 ° C. for 48 hours is cut by a warm air dryer and further crushed. 10 g of the squid powder was prepared. Next, in a reaction vessel, to 10 g of fish meat 1, a first mixed solvent 2 composed of 50 ml of ethanol and 30 ml of hexane was added, and the mixture was stirred and mixed for 2 hours to obtain a first mixed solution 3. ..
次に、第１の混合液３を濾過して、第１の混合液３に含まれる魚肉の残渣４を除去し、得られた濾液５を蒸発乾固させることにより、混合物６を得た。次に、反応容器中で、１．０ｇの混合物６に、ヘキサン３０ｍｌを添加して混合物溶液７とし、生じた白色沈殿を夾雑物（残渣８）として濾別して、濾液９を得た。次に、得られた濾液９を蒸発乾固することにより、精製されたセラミドとセラミドシリアチンとの混合物（精製混合物１０）を得た。 Next, the first mixture 3 was filtered to remove the fish meat residue 4 contained in the first mixture 3, and the obtained filtrate 5 was evaporated to dryness to obtain a mixture 6. Next, in a reaction vessel, 30 ml of hexane was added to 1.0 g of the mixture 6 to prepare a mixture solution 7, and the resulting white precipitate was filtered off as a contaminant (residue 8) to obtain a filtrate 9. Next, the obtained filtrate 9 was evaporated to dryness to obtain a mixture of purified ceramide and ceramide syratin (purified mixture 10).
次に、１．０ｇの精製混合物１０を分液ロートに収容し、エタノール２０ｍｌとヘキサン３０ｍｌと水３．５ｍｌからなる第２の混合溶媒１１を添加し、混合して、第２の混合液１２を得た。次いで、第２の混合液１２を、１昼夜静置して、分液ロート中で分離したヘキサン相１３と、エタノール−水相１４とをそれぞれ分取し、ヘキサン相１３を蒸発乾固することにより、セラミドを得た。 Next, 1.0 g of the purified mixture 10 is placed in a separatory funnel, and a second mixed solvent 11 composed of 20 ml of ethanol, 30 ml of hexane and 3.5 ml of water is added and mixed, and the second mixed solution 12 is added. Got Next, the second mixed solution 12 is allowed to stand for one day and night, the hexane phase 13 separated in the separating funnel and the ethanol-aqueous phase 14 are separated from each other, and the hexane phase 13 is evaporated to dryness. Obtained ceramide.
次に、濾液９を試料１、ヘキサン相１３を試料２、エタノール−水相１４を試料３として、高速液体クロマトグラフ質量分析（ＬＣ／ＭＳ）により分析した。 Next, the filtrate 9 was used as sample 1, the hexane phase 13 was used as sample 2, and the ethanol-aqueous phase 14 was used as sample 3, and analyzed by high performance liquid chromatography mass spectrometry (LC / MS).
高速液体クロマトグラフとしては、株式会社島津製作所製クロマトグラフを用い、質量分析計としてはWaters社製四重極−飛行時間型質量分析計（商品名：Xevo G2S QTof）を用いた。カラムは、株式会社ワイエムシィ製J'sphere ODS-M80（商品名）、内径３．０ｍｍ、長さ１５０ｍｍを用い、０．１％−酢酸アンモニウム：メタノール＝２：９８の溶媒を０．４ｍｌ／分の流速（設定値）で、４０℃の温度下に流通させた。 A chromatograph manufactured by Shimadzu Corporation was used as a high-performance liquid chromatograph, and a quadrupole-time-of-flight mass spectrometer (trade name: Xevo G2S QTof) manufactured by Waters was used as a mass spectrometer. The column used was J'sphere ODS-M80 (trade name) manufactured by YMC Co., Ltd., with an inner diameter of 3.0 mm and a length of 150 mm, and a solvent of 0.1% -ammonium acetate: methanol = 2: 98 was added at 0.4 ml / min. It was circulated at a flow rate (set value) of 40 ° C.
得られたクロマトグラムの各ピークの保持時間を、予め設定されたセラミド及びセラミドシリアチンの各分子種の保持時間と比較することにより、各ピークの化合物を同定した。予め設定されたセラミドの各分子種の保持時間を表１に、セラミドシリアチンの各分子種の保持時間を表２にそれぞれ示す。 The compound of each peak was identified by comparing the retention time of each peak of the obtained chromatogram with the retention time of each of the preset molecular species of ceramide and ceramide silitane. Table 1 shows the retention time of each of the preset molecular species of ceramide, and Table 2 shows the retention time of each molecular species of ceramide cyanidin.
尚、表１、表２において、セラミド及びセラミドシリアチンの各分子種は、次の一般式（３）で表され、長鎖塩基（ＬＣＢ）の炭素数をＡ、炭素−炭素二重結合数をＢ、不飽和脂肪酸（ＦＡ）の炭素数をＣ、炭素−炭素二重結合数をＤとして、ｄＡ：Ｂ／Ｃ：Ｄ（Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄは０以上の整数）と記載する。 In Tables 1 and 2, each molecular species of ceramide and ceramide silitin is represented by the following general formula (3), and the carbon number of the long chain base (LCB) is A, and the carbon-carbon double bond number is A. Is B, the number of carbon atoms of the unsaturated fatty acid (FA) is C, the number of carbon-carbon double bonds is D, and dA: B / C: D (A, B, C, D are integers of 0 or more). ..
（３）
一般式（３）において、Ｒ１、Ｒ２は不飽和であってもよい炭化水素基を示し、Ｘ−はセラミドの場合にはＨ−であり、セラミドシリアチンの場合にはＮＨ２Ｃ２Ｈ４ＰＯ（ＯＨ）−である。
(3)
In the general formula (3), R 1 and R 2 represent hydrocarbon groups that may be unsaturated, X- is H- in the case of ceramide, and NH 2 C 2 in the case of ceramide cyanitin. H 4 PO (OH)-.
また、一般式（３）の構造をＭとするときに、前記質量分析計において、セラミドの各分子種は、Ｍに対して水１分子が脱水され、プロトン化された構造［Ｍ＋Ｈ−Ｈ２Ｏ］＋として検出され、セラミドシリアチンの各分子種は、Ｍに対してプロトン化された構造［Ｍ＋Ｈ］として検出される。Further, when the structure of the general formula (3) is M, in the mass spectrometer, each molecular species of ceramide has a structure in which one molecule of water is dehydrated with respect to M and protonated [M + H-H 2]. Detected as O] + , each molecular species of ceramide silitin is detected as a structure [M + H] protonated to M.
また、和幸純薬工業株式会社から入手した炭素数１８のセラミドの標準品（Toronto Research Chemicals Inc.製）の０．１〜２０μｇ／ｍｌの各メタノール溶液を試料として、上述と同一条件で高速液体クロマトグラフ質量分析を行ったときの各濃度に対するクロマトグラムの各ピーク面積をプロットして検量線を作成した。そして、前記検量線を用いて、本実施例で得られたクロマトグラムの各ピーク面積から、セラミド及びセラミドシリアチンの各分子種の濃度を定量した。
In addition, each methanol solution of 0.1 to 20 μg / ml of a standard product of ceramide having 18 carbon atoms (manufactured by Toronto Research Chemicals Inc.) obtained from Wako Pure Chemical Industries, Ltd. was used as a sample, and a high-speed liquid was used under the same conditions as described above. A calibration line was created by plotting the peak area of the chromatogram for each concentration when chromatograph mass analysis was performed. Then, using the calibration curve, the concentrations of each molecular species of ceramide and ceramide silitin were quantified from each peak area of the chromatogram obtained in this example.
試料１〜３について、得られたクロマトグラムから同定されたセラミド及びセラミドシリアチンの各分子種と、その濃度とを、表３〜５にそれぞれ示す。 Tables 3 to 5 show the respective molecular species of ceramide and ceramide silitin identified from the obtained chromatograms and their concentrations for Samples 1 to 3, respectively.
表３から、第２の混合溶媒１１による抽出前の濾液９には、セラミドとセラミドシリアチンとの混合物が含まれていることがわかる。
From Table 3, it can be seen that the filtrate 9 before extraction with the second mixed solvent 11 contains a mixture of ceramide and ceramide silitin.
これに対し、表４から、第２の混合溶媒１１による抽出後、１昼夜静置することにより第２の混合液１２から分離したヘキサン相１３にはセラミドのみが含まれていることがわかる。従って、ヘキサン相１３を蒸発乾固させることにより、セラミドを得ることができることが明らかである。 On the other hand, from Table 4, it can be seen that the hexane phase 13 separated from the second mixed solution 12 by allowing it to stand for one day and night after extraction with the second mixed solvent 11 contains only ceramide. Therefore, it is clear that ceramide can be obtained by evaporating and drying the hexane phase 13.
また、表５から、第２の混合溶媒１１による抽出後、１昼夜静置することにより第２の混合液１２から分離したエタノール−水相１４にはセラミドとセラミドシリアチンとの混合物が含まれていることがわかる。これは、セラミドが、ヘキサン相１３とエタノール−水相１４とに分配された結果と考えることができる。従って、エタノール−水相１４にヘキサンを加え、撹拌した後、静置し、分離したヘキサン相１３を蒸発乾固する操作を繰り返すことにより、エタノール−水相１４中に含まれるセラミドを回収することができ、全体としてのセラミドの収率を向上させることができることが明らかである。 Further, from Table 5, the ethanol-aqueous phase 14 separated from the second mixed solution 12 by allowing it to stand for one day and night after extraction with the second mixed solvent 11 contains a mixture of ceramide and ceramide silitin. You can see that. This can be considered as a result of the ceramide being distributed into the hexane phase 13 and the ethanol-aqueous phase 14. Therefore, the ceramide contained in the ethanol-aqueous phase 14 is recovered by repeating the operation of adding hexane to the ethanol-aqueous phase 14, stirring, allowing the separated hexane phase 13 to evaporate and dry. It is clear that the yield of ceramide as a whole can be improved.
また、この結果、エタノール−水相１４には相対的にセラミドの含有量が低減されたセラミドシリアチンが残る。従って、エタノール−水相１４から実質的にセラミドシリアチンのみを得ることができる。 As a result, ceramide silitin having a relatively reduced ceramide content remains in the ethanol-aqueous phase 14. Therefore, substantially only ceramide silitin can be obtained from the ethanol-aqueous phase 14.
そこで、本発明のセラミドの製造方法においては、前記エタノール−水相にヘキサンを加え、撹拌した後、静置することにより、ヘキサン相とエタノール−水相とに分離し、該ヘキサン相を乾固してセラミドを得る操作を少なくとも１回行った後のエタノール−水相からセラミドシリアチンを得ることが好ましい。 Therefore, in the method for producing ceramide of the present invention, hexane is added to the ethanol-aqueous phase, stirred, and then allowed to stand to separate the hexane phase into an ethanol-aqueous phase, and the hexane phase is dried. It is preferable to obtain ceramide cyanidin from the ethanol-aqueous phase after performing the operation for obtaining ceramide at least once.
１…魚肉、 ２…第１の混合溶媒、 ５…濾液、 ６…混合物、 １１…第２の混合溶媒、 １３…ヘキサン相、 １４…エタノール−水相、 １５…セラミド。 1 ... fish meat, 2 ... first mixed solvent, 5 ... filtrate, 6 ... mixture, 11 ... second mixed solvent, 13 ... hexane phase, 14 ... ethanol-aqueous phase, 15 ... ceramide.
Claims (5)
該第１の混合溶媒を濾過して濾液を得る工程と、
得られた濾液を減圧蒸留により乾固して、セラミドとセラミドシリアチンとの混合物を得る工程と、
該乾固により得られたセラミドとセラミドシリアチンとの混合物に、ヘキサンとエタノールと水とからなる第２の混合溶媒を加え、撹拌した後、静置することにより、該第２の混合溶媒をヘキサン相とエタノール−水相とに分離する工程と、
該ヘキサン相を乾固してセラミドを得る工程とを備えることを特徴とするセラミドの製造方法。A step of stirring the fish meat as a raw material in a first mixed solvent consisting of hexane and ethanol, and extracting ceramide and ceramide silitin into the first mixed solvent.
The step of filtering the first mixed solvent to obtain a filtrate, and
A step of drying the obtained filtrate by vacuum distillation to obtain a mixture of ceramide and ceramide silitane, and
A second mixed solvent consisting of hexane, ethanol, and water is added to the mixture of ceramide and ceramide silitine obtained by the dry matter, and the mixture is stirred and then allowed to stand to obtain the second mixed solvent. The process of separating the hexane phase and the ethanol-aqueous phase,
A method for producing ceramide, which comprises a step of drying the hexane phase to obtain ceramide.
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