JPWO2014119568A1 - Use of HMG-CoA reductase inhibitors for the treatment of cisplatin resistant cancer - Google Patents

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Abstract

本発明は、シスプラチン耐性がんの治療のための手段を提供する。具体的には、本発明は、HMG-CoA還元酵素阻害剤を含有してなる、シスプラチン耐性がん細胞傷害剤などを提供する。本発明によれば、シスプラチン耐性がん細胞を効果的に傷害することができるため、シスプラチン耐性がんを治療することが可能となる。The present invention provides a means for the treatment of cisplatin resistant cancer. Specifically, the present invention provides a cisplatin resistant cancer cytotoxic agent containing an HMG-CoA reductase inhibitor. According to the present invention, cisplatin-resistant cancer cells can be effectively damaged, so that cisplatin-resistant cancer can be treated.

Description

本発明は、シスプラチン耐性がん細胞傷害剤及びシスプラチン耐性がん治療剤に関する。   The present invention relates to a cisplatin-resistant cancer cytotoxic agent and a cisplatin-resistant cancer therapeutic agent.

HMG-CoA還元酵素の働きを阻害することによって血液中のコレステロール値を低下させる医薬（スタチン系阻害剤又はスタチンとも呼ばれる）には、プラバスタチン（商品名：メバロチン）やシンバスタチン（商品名：リポバス）など多くの製品がある。スタチンの抗がん作用については多数の大規模臨床試験が行われているが、スタチンの服用量が多いほど、また服用期間が長いほど、大腸がんの発生率が低いこと（非特許文献１）、スタチンを服用しているグループでは、特に血液腫瘍の発生率が低いこと（非特許文献２）が報告されている一方で、スタチンの服用にはがんの発生リスクを低下させる効果は無いこと（非特許文献３）も報告されており、スタチンのがん発生を抑制する効果について一貫した結論は出ていない。また、薬剤耐性がん細胞に対するスタチンの抗がん作用については、これまでいかなる報告もなされていない。   For drugs that lower the cholesterol level in blood by inhibiting the action of HMG-CoA reductase (also called statin inhibitors or statins), pravastatin (trade name: mevalotin), simvastatin (trade name: Lipovas), etc. There are many products. Numerous large-scale clinical trials have been conducted on the anticancer effects of statins, but the higher the dose of statins and the longer the period of administration, the lower the incidence of colorectal cancer (Non-patent Document 1). ) In the group taking statins, it has been reported that the incidence of blood tumors is particularly low (Non-patent Document 2), while taking statins has no effect on reducing the risk of developing cancer. (Non-patent Document 3) has also been reported, and no consistent conclusion has been made about the effect of statin inhibiting cancer development. In addition, no report has been made on the anticancer activity of statins against drug-resistant cancer cells.

シスプラチンは、多くの悪性腫瘍を治療する場合の第一選択薬であり、染色体DNAと特殊な化学反応をしてDNAに架橋を形成し、DNAの合成を阻害する抗がん剤である。しかしながらシスプラチンの継続的な投与により、がん細胞がシスプラチン耐性を獲得することが知られている。   Cisplatin is a first-line drug for the treatment of many malignant tumors, and is an anticancer agent that inhibits DNA synthesis by forming a cross-link in DNA through a special chemical reaction with chromosomal DNA. However, it is known that cancer cells acquire cisplatin resistance by continuous administration of cisplatin.

BMC Gastroenterol 2012 Apr 24; 12:36BMC Gastroenterol 2012 Apr 24; 12:36 Prev Chronic Dis 2012 Aug 9; E137, doi: 10.5888/pcd9.120005Prev Chronic Dis 2012 Aug 9; E137, doi: 10.5888 / pcd9.120005 PLoS ONE 2012 7(1): e29849PLoS ONE 2012 7 (1): e29849

がんの治療において、化学療法はその原因となるがん細胞そのものを排除する根治的な治療法として重要である。しかし、ある薬剤に対してがん細胞が耐性を獲得すると、その薬剤による治療はほとんど不可能になり、代替できる薬剤が存在しない場合、重症化や、場合によっては死亡に至る危険性が高くなる。このことから薬剤耐性腫瘍に対する新たな治療法の開発は非常に重要である。
そこで本発明は、シスプラチン耐性がんの治療のための手段を提供することを目的とする。In the treatment of cancer, chemotherapy is important as a radical treatment method that eliminates the cancer cells themselves. However, once cancer cells become resistant to a drug, treatment with that drug becomes almost impossible, and if there is no alternative available, there is an increased risk of becoming severe or even fatal. . Therefore, the development of new treatments for drug-resistant tumors is very important.
Then, an object of this invention is to provide the means for treatment of a cisplatin resistant cancer.

本発明者らは、上記課題に鑑み、血液中のコレステロール値を低下させるHMG-CoA還元酵素阻害剤のシスプラチン耐性がん細胞株に対する抗腫瘍効果を検討した結果、シンバスタチン、ロバスタチン、コンパクチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチン及びプラバスタチンのいずれも、シスプラチン感受性がん細胞株よりもシスプラチン耐性がん細胞株に対して、高い細胞傷害性を示すことを見出した。更にシスプラチンと同じ白金製剤であるオキサリプラチン耐性がん細胞株についてもHMG-CoA還元酵素阻害剤の抗腫瘍効果を検討した結果、オキサリプラチン耐性がん細胞株に対しては、シスプラチン耐性がん細胞株ほどの高い細胞傷害性は示さなかったことから、HMG-CoA還元酵素阻害剤の作用はシスプラチン耐性がん細胞に対して特異的なものであることを見出した。本発明者らは、これらの知見に基づいて更に研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。   In view of the above problems, the present inventors have studied the antitumor effect of a HMG-CoA reductase inhibitor that lowers blood cholesterol level on cisplatin-resistant cancer cell lines. As a result, simvastatin, lovastatin, compactin, fluvastatin It has been found that atorvastatin, pitavastatin and pravastatin all show higher cytotoxicity against cisplatin-resistant cancer cell lines than cisplatin-sensitive cancer cell lines. Furthermore, as a result of examining the antitumor effect of the HMG-CoA reductase inhibitor on the oxaliplatin resistant cancer cell line, which is the same platinum preparation as cisplatin, the oxaliplatin resistant cancer cell line Since the cytotoxicity was not as high as that of the strain, it was found that the action of the HMG-CoA reductase inhibitor was specific to cisplatin-resistant cancer cells. As a result of further studies based on these findings, the present inventors have completed the present invention.

即ち、本発明は、以下の通りである。
［１］ HMG-CoA還元酵素阻害剤を含有してなる、シスプラチン耐性がん細胞傷害剤。
［２］ 有効成分がHMG-CoA還元酵素阻害剤から成る、［１］に記載の剤。
［３］ HMG-CoA還元酵素阻害剤が、シンバスタチン、ロバスタチン、コンパクチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン及びセリバスタチン、並びにその医薬上許容される塩からなる群から選択される少なくとも１種である、［１］又は［２］に記載の剤。
［４］ HMG-CoA還元酵素阻害剤が、シンバスタチン、ロバスタチン、コンパクチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチン及びプラバスタチン、並びにその医薬上許容される塩からなる群から選択される少なくとも１種である、［３］に記載の剤。
［５］ がんが、前立腺がん又は子宮頸がんである、［１］〜［４］のいずれかに記載の剤。
［６］ HMG-CoA還元酵素阻害剤を含有してなる、シスプラチン耐性がん治療剤。
［７］ 有効成分がHMG-CoA還元酵素阻害剤から成る、［６］に記載の剤。
［８］ 被験者に有効量のHMG-CoA還元酵素阻害剤を投与することを含む、シスプラチン耐性がん細胞の傷害方法。
［９］ 被験者に有効量のHMG-CoA還元酵素阻害剤を投与することを含む、シスプラチン耐性がんの治療方法。
［１０］ HMG-CoA還元酵素阻害剤を含有してなる、シスプラチン耐性がん細胞の傷害において使用するための剤。
［１１］ HMG-CoA還元酵素阻害剤を含有してなる、シスプラチン耐性がんの治療において使用するための剤。That is, the present invention is as follows.
[1] A cisplatin-resistant cancer cytotoxic agent comprising an HMG-CoA reductase inhibitor.
[2] The agent according to [1], wherein the active ingredient comprises an HMG-CoA reductase inhibitor.
[3] The HMG-CoA reductase inhibitor is at least one selected from the group consisting of simvastatin, lovastatin, compactin, fluvastatin, atorvastatin, pitavastatin, pravastatin, rosuvastatin and cerivastatin, and a pharmaceutically acceptable salt thereof. The agent according to [1] or [2].
[4] The HMG-CoA reductase inhibitor is at least one selected from the group consisting of simvastatin, lovastatin, compactin, fluvastatin, atorvastatin, pitavastatin and pravastatin, and pharmaceutically acceptable salts thereof. [3 ].
[5] The agent according to any one of [1] to [4], wherein the cancer is prostate cancer or cervical cancer.
[6] A cisplatin-resistant cancer therapeutic agent comprising an HMG-CoA reductase inhibitor.
[7] The agent according to [6], wherein the active ingredient comprises an HMG-CoA reductase inhibitor.
[8] A method for damaging cisplatin-resistant cancer cells, comprising administering an effective amount of an HMG-CoA reductase inhibitor to a subject.
[9] A method for treating cisplatin-resistant cancer, comprising administering an effective amount of an HMG-CoA reductase inhibitor to a subject.
[10] An agent for use in injury of cisplatin-resistant cancer cells, comprising an HMG-CoA reductase inhibitor.
[11] An agent for use in the treatment of cisplatin-resistant cancer, comprising an HMG-CoA reductase inhibitor.

本発明によれば、シスプラチン耐性がん細胞を効果的に傷害することができるため、シスプラチン耐性がんを治療することが可能となる。   According to the present invention, cisplatin-resistant cancer cells can be effectively damaged, so that cisplatin-resistant cancer can be treated.

シスプラチン感受性及び耐性がん細胞株に対するシンバスタチンの細胞傷害性を示す。Figure 2 shows the cytotoxicity of simvastatin against cisplatin sensitive and resistant cancer cell lines. シスプラチン感受性及び耐性がん細胞株に対するロバスタチンの細胞傷害性を示す。2 shows the cytotoxicity of lovastatin against cisplatin sensitive and resistant cancer cell lines. シスプラチン感受性及び耐性がん細胞株に対するコンパクチンの細胞傷害性を示す。Figure 2 shows the cytotoxicity of compactin against cisplatin sensitive and resistant cancer cell lines. シスプラチン感受性及び耐性がん細胞株に対するフルバスタチンナトリウムの細胞傷害性を示す。Figure 5 shows cytotoxicity of fluvastatin sodium against cisplatin sensitive and resistant cancer cell lines. シスプラチン感受性及び耐性がん細胞株に対するアトルバスタチンカルシウムの細胞傷害性を示す。Figure 3 shows the cytotoxicity of atorvastatin calcium against cisplatin sensitive and resistant cancer cell lines. シスプラチン感受性及び耐性がん細胞株に対するピタバスタチンカルシウムの細胞傷害性を示す。Figure 3 shows the cytotoxicity of pitavastatin calcium against cisplatin sensitive and resistant cancer cell lines. シスプラチン感受性及び耐性がん細胞株に対するプラバスタチンナトリウムの細胞傷害性を示す。Figure 3 shows the cytotoxicity of pravastatin sodium against cisplatin sensitive and resistant cancer cell lines. シスプラチン感受性及び耐性がん細胞株に対するケルセチンの細胞傷害性を示す。Figure 5 shows the cytotoxicity of quercetin against cisplatin sensitive and resistant cancer cell lines. オキサリプラチン感受性及び耐性がん細胞株に対するシンバスタチンの細胞傷害性を示す。縦軸は細胞生存率を示し、横軸はシンバスタチンの濃度（μM）を示す。Figure 3 shows the cytotoxicity of simvastatin against oxaliplatin sensitive and resistant cancer cell lines. The vertical axis represents cell viability, and the horizontal axis represents simvastatin concentration (μM). オキサリプラチン感受性及び耐性がん細胞株に対するシンバスタチンの細胞傷害性を示す。縦軸は細胞生存率を示し、横軸はシンバスタチンの濃度（μM）を示す。Figure 3 shows the cytotoxicity of simvastatin against oxaliplatin sensitive and resistant cancer cell lines. The vertical axis represents cell viability, and the horizontal axis represents simvastatin concentration (μM).

本発明は、HMG-CoA還元酵素阻害剤を含有してなる、シスプラチン耐性がん細胞傷害剤（以下、本発明の剤とも称する）を提供する。   The present invention provides a cisplatin-resistant cancer cytotoxic agent (hereinafter also referred to as the agent of the present invention) comprising an HMG-CoA reductase inhibitor.

HMG-CoA還元酵素阻害剤は、上述のように、一部のがんの発生率を低下させる効果が示唆されていたものの、否定的な報告も存在し、そのがん発生抑制効果は現在のところ証明されていない。そのようなHMG-CoA還元酵素阻害剤が特定の薬剤耐性がん細胞株に対して顕著な細胞傷害性を示すことは全く予測不能であった。
本発明は、HMG-CoA還元酵素阻害剤が、意外にも、シスプラチン感受性がん細胞株よりもシスプラチン耐性がん細胞株に対して強い細胞傷害性を示すことを初めて見出したことに基づくものである。As mentioned above, HMG-CoA reductase inhibitors have been suggested to reduce the incidence of some cancers, but there are also negative reports, and their effects on inhibiting cancer However, it has not been proved. It was totally unpredictable that such HMG-CoA reductase inhibitors showed significant cytotoxicity against certain drug resistant cancer cell lines.
The present invention is based on the first discovery that an HMG-CoA reductase inhibitor unexpectedly shows stronger cytotoxicity against cisplatin-resistant cancer cell lines than cisplatin-sensitive cancer cell lines. is there.

本明細書中、HMG-CoA還元酵素阻害剤は、コレステロール生合成の律速酵素であるβ-ヒドロキシ-β-メチルグルタリル-CoA（HMG-CoA）還元酵素を阻害する活性を有する物質をいう。ここで、HMG-CoA還元酵素を阻害する活性は、特開平5-25190号公報などの記載に基づいて測定される活性であり、具体的には、以下の方法により測定される。まず、30μM [14C]HMG-CoA（0.05μCi）、HMG-CoA還元酵素の粗酵素5μl（7.5μg protein）、20 mM NADPH、被験物質に、100 mMリン酸バッファー（pH7.2）、10 mMイミダゾール、5 mMジチオスレイトール、10 mM EDTAを加え、試験溶液100μlとする。HMG-CoA還元酵素の粗酵素としては、ウィスターラット肝ミクロソームを用いる。次に、試験溶液を37℃で15分間インキュベートして、[14C]メバロン酸を合成する。続いて、1 Mの塩酸を25μl添加した後に37℃で60分間インキュベートして、[14C]メバノラクトンを合成する。続いて、内部標準物質として[4-14C]テストステロン（0.08 nCi）を10μl加えてから、酢酸エチル130μlで分配抽出する。この上清100μlをTLC板にスポットしてアセトン-ベンゼン（1:1）で展開し、イメージングプレートに15時間露出させ、イメージングアナライザーを用いて内部標準物質及び生成物の放射活性を測定する。ポジティブコントロールとして、公知のHMG-CoA還元酵素阻害剤であるロバスタチンを最終濃度100 nMとなるように添加し、阻害活性の指標とすることもできる。生成物の放射活性を内部標準物質の放射活性で補正した値が、被験物質を添加しないネガティブコントロールと比較して有意に低い場合、被験物質がHMG-CoA還元酵素を阻害する活性を有すると評価することができる。本発明は、後述のように、現在までに知られているHMG-CoA還元酵素阻害剤に共通するシスプラチン耐性がん細胞特異的な細胞傷害性を見出したことに基づくものであり、HMG-CoA還元酵素を阻害する活性を有する化合物であれば同様の細胞傷害性を有することが期待される。In the present specification, an HMG-CoA reductase inhibitor refers to a substance having an activity of inhibiting β-hydroxy-β-methylglutaryl-CoA (HMG-CoA) reductase, which is a rate-limiting enzyme for cholesterol biosynthesis. Here, the activity of inhibiting HMG-CoA reductase is an activity measured based on the description in JP-A-5-25190, and specifically, it is measured by the following method. First, 30 μM [ 14 C] HMG-CoA (0.05 μCi), crude HMG-CoA reductase enzyme 5 μl (7.5 μg protein), 20 mM NADPH, test substance, 100 mM phosphate buffer (pH 7.2), 10 Add mM imidazole, 5 mM dithiothreitol, and 10 mM EDTA to make 100 μl of the test solution. Wistar rat liver microsome is used as a crude enzyme of HMG-CoA reductase. The test solution is then incubated at 37 ° C. for 15 minutes to synthesize [ 14 C] mevalonic acid. Subsequently, 25 μl of 1 M hydrochloric acid is added and then incubated at 37 ° C. for 60 minutes to synthesize [ 14 C] mevanolactone. Subsequently, 10 μl of [4- 14 C] testosterone (0.08 nCi) is added as an internal standard substance, and then partitioned and extracted with 130 μl of ethyl acetate. 100 μl of this supernatant is spotted on a TLC plate, developed with acetone-benzene (1: 1), exposed to an imaging plate for 15 hours, and the radioactivity of the internal standard substance and the product is measured using an imaging analyzer. As a positive control, lovastatin, which is a known HMG-CoA reductase inhibitor, can be added to a final concentration of 100 nM to serve as an indicator of inhibitory activity. If the value obtained by correcting the radioactivity of the product with the radioactivity of the internal standard is significantly lower than that of the negative control without the addition of the test substance, the test substance is evaluated as having the activity of inhibiting HMG-CoA reductase can do. The present invention is based on the finding of cisplatin-resistant cancer cell-specific cytotoxicity common to HMG-CoA reductase inhibitors known to date, as described below, and HMG-CoA A compound having an activity of inhibiting a reductase is expected to have similar cytotoxicity.

現在までに知られているHMG-CoA還元酵素阻害剤は、いずれも一般名の語尾がスタチンであることから、総称としてスタチン又はスタチン系阻害剤などとも呼ばれる。本発明におけるHMG-CoA還元酵素阻害剤としては、微生物由来の天然物質、それから誘導される半合成物質、及び全合成化合物のすべてが含まれ、例えば、シンバスタチン、ロバスタチン、コンパクチン（メバスタチン）、フルバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、セリバスタチンなどが挙げられる。本発明におけるHMG-CoA還元酵素阻害剤は、好ましくは、シンバスタチン、ロバスタチン、コンパクチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチン及び／又はプラバスタチンである。   All of the HMG-CoA reductase inhibitors known to date are generically called statins or statin inhibitors because the endings of the generic names are statins. Examples of the HMG-CoA reductase inhibitor in the present invention include all natural substances derived from microorganisms, semi-synthetic substances derived therefrom, and total synthetic compounds. For example, simvastatin, lovastatin, compactin (mevastatin), fluvastatin Atorvastatin, pitavastatin, pravastatin, rosuvastatin, cerivastatin and the like. The HMG-CoA reductase inhibitor in the present invention is preferably simvastatin, lovastatin, compactin, fluvastatin, atorvastatin, pitavastatin and / or pravastatin.

HMG-CoA還元酵素阻害剤は、医薬上許容される塩の形態であってもよい。かかる医薬上許容される塩としては、ナトリウムやカリウムなどのアルカリ金属塩、カルシウムやマグネシウムなどのアルカリ土類金属塩、及びＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、及びプロカインなどのアミンを挙げることができる。好ましくはアルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩である。例えば、フルバスタチン及びプラバスタチンは、ナトリウム塩として使用することが好ましい。また例えば、アトルバスタチン及びピタバスタチンは、カルシウム塩として使用することが好ましい。   The HMG-CoA reductase inhibitor may be in the form of a pharmaceutically acceptable salt. Such pharmaceutically acceptable salts include alkali metal salts such as sodium and potassium, alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium, and N, N′-dibenzylethylenediamine, chloroprocaine, choline, diethanolamine, dicyclohexylamine, Mention may be made of amines such as ethylenediamine, N-methylglucamine and procaine. Alkali metal salts and alkaline earth metal salts are preferred. For example, fluvastatin and pravastatin are preferably used as sodium salts. For example, atorvastatin and pitavastatin are preferably used as calcium salts.

HMG-CoA還元酵素阻害剤は、非溶媒和形態であってもよく、また水和物形態を含む溶媒和形態であってもよい。   The HMG-CoA reductase inhibitor may be in an unsolvated form or a solvated form including a hydrate form.

本発明において用いられるHMG-CoA還元酵素阻害剤は、２種以上を適宜の割合で組み合わせて用いてもよい。   Two or more HMG-CoA reductase inhibitors used in the present invention may be used in combination at an appropriate ratio.

本発明において用いられるHMG-CoA還元酵素阻害剤は、自体公知の方法に従って製造することができる。また市販のHMG-CoA還元酵素阻害剤を用いてもよく、例えば、シンバスタチン（SIGMA S6196）、ロバスタチン（WAKO 125-04581）、コンパクチン（WAKO 033-17301）、フルバスタチンナトリウム（WAKO 069-05571）、アトルバスタチンカルシウム（WAKO 012-23901）、ピタバスタチンカルシウム（WAKO 012-23901）、プラバスタチンナトリウム（WAKO 163-24861）などを用いることができる。   The HMG-CoA reductase inhibitor used in the present invention can be produced according to a method known per se. Commercially available HMG-CoA reductase inhibitors may also be used, such as simvastatin (SIGMA S6196), lovastatin (WAKO 125-04581), compactin (WAKO 033-17301), fluvastatin sodium (WAKO 069-05571), Atorvastatin calcium (WAKO 012-23901), pitavastatin calcium (WAKO 012-23901), pravastatin sodium (WAKO 163-24861) and the like can be used.

本発明において、「シスプラチン耐性がん（細胞）」は、シスプラチンに対する獲得耐性のがん（細胞）である。獲得耐性のがん（細胞）とは、当初はシスプラチンに感受性であったがシスプラチン治療を継続した結果、感受性が低下したがん（細胞）のことをいう。感受性低下の程度は特に限定されない。一態様において、シスプラチンを用いた化学療法による治療が有効でない（例えば、腫瘍組織量の低下や、成長阻害がみられない）がんをシスプラチン耐性がんとして分類することができる。そのような獲得耐性のがん細胞としては、例えば、前立腺がん細胞株PC3細胞から誘導されたシスプラチン耐性がん細胞株PCDP5細胞、子宮頸がん細胞株HeLa細胞から誘導されたシスプラチン耐性がん細胞株HCP4細胞などが挙げられるがこれらに限定されない。   In the present invention, the “cisplatin resistant cancer (cell)” is a cancer (cell) acquired resistance to cisplatin. Acquired resistant cancer (cells) refers to cancer (cells) that was initially sensitive to cisplatin but decreased in sensitivity as a result of continuing cisplatin treatment. The degree of sensitivity reduction is not particularly limited. In one embodiment, cancers that are not effective for treatment with chemotherapy using cisplatin (eg, no decrease in tumor tissue volume or growth inhibition) can be classified as cisplatin resistant cancer. Examples of such acquired resistant cancer cells include cisplatin-resistant cancer cells derived from prostate cancer cell line PC3 cells, cisplatin-resistant cancer cell lines PCDP5 cells, and cervical cancer cell lines HeLa cells. Examples include cell line HCP4 cells, but are not limited thereto.

本発明において、がんは任意の種類のがんであってよく、固形がん［例えば、消化器がん（例えば、胃がん、食道がん、小腸がん、結腸がん、直腸がん、肛門がん、肝臓がん、胆道がん、膵臓がん等）、泌尿器または生殖器のがん（例えば、腎がん、腎細胞がん、膀胱がん、前立腺がん、腎盂および尿管がん、胆嚢がん、胆管がん、精巣がん、陰茎がん、子宮がん、子宮内膜がん、子宮肉腫、子宮頸がん、膣がん、外陰がん、卵巣がん、卵管がん等）、脳・神経系のがん（例えば、脳腫瘍（グリオブラストーマ等）、脊髄腫瘍等）、頭頸部がん（例えば、喉頭がん、口腔がん、唾液腺がん、副鼻腔がん、甲状腺がん等）、呼吸器系のがん（例えば、肺がん（小細胞肺がん、非小細胞肺がん、転移性肺がんを含む）、気管支がん等）、乳がん、皮膚がん（例えば、悪性黒色腫等）、骨のがん（例えば、骨肉腫等）、筋肉のがん（例えば、横紋筋肉腫等）等］、血液がん［例えば、骨髄腫、白血病、リンパ腫等］等を挙げることができるが、好ましくは、前立腺がん又は子宮頸がんである。   In the present invention, cancer may be any kind of cancer, and solid cancer [eg, gastrointestinal cancer (eg, stomach cancer, esophageal cancer, small intestine cancer, colon cancer, rectal cancer, anus Cancer, liver cancer, biliary tract cancer, pancreatic cancer, etc.), urological or genital cancer (eg, renal cancer, renal cell cancer, bladder cancer, prostate cancer, renal pelvis and ureteral cancer, gallbladder) Cancer, bile duct cancer, testicular cancer, penile cancer, uterine cancer, endometrial cancer, uterine sarcoma, cervical cancer, vaginal cancer, vulvar cancer, ovarian cancer, fallopian tube cancer, etc. ), Brain / nervous cancer (eg, brain tumor (glioblastoma, etc.), spinal cord tumor, etc.), head and neck cancer (eg, laryngeal cancer, oral cancer, salivary gland cancer, sinus cancer, thyroid gland) Cancer), respiratory cancer (eg, lung cancer (including small cell lung cancer, non-small cell lung cancer, metastatic lung cancer), bronchial cancer, etc.), breast cancer, Skin cancer (eg, malignant melanoma), bone cancer (eg, osteosarcoma, etc.), muscle cancer (eg, rhabdomyosarcoma, etc.)], blood cancer [eg, myeloma, leukemia, etc. , Lymphoma, etc.], etc., preferably prostate cancer or cervical cancer.

シスプラチン耐性がん細胞は、哺乳動物由来の細胞であれば特に限定されない。哺乳動物としては、例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモットなどのげっ歯類及びウサギなどの実験動物、イヌ及びネコなどのペット、ウシ、ブタ、ヤギ、ウマ及びヒツジなどの家畜、サル、オランウータン及びチンパンジーなどの霊長類並びにヒトなどが挙げられ、特にヒトが好ましい。   Cisplatin resistant cancer cells are not particularly limited as long as they are cells derived from mammals. Mammals include, for example, rodents such as mice, rats, hamsters, guinea pigs, laboratory animals such as rabbits, pets such as dogs and cats, domestic animals such as cows, pigs, goats, horses and sheep, monkeys, orangutans, and Examples include primates such as chimpanzees and humans, with humans being particularly preferred.

本発明の剤は、シスプラチン耐性がん細胞に対する細胞傷害性を有する。本明細書中、「細胞傷害性」とは、標的細胞の生存率を低下させる作用を意味する。生存率は、自体公知の方法により測定でき、例えば、後述の実施例に示すような、単離された細胞株を対象として、細胞内にあるミトコンドリアの脱水素酵素によって還元されて水溶性フォルマザン色素に変換されるWST-8を用いるアッセイにより測定することができる。   The agent of the present invention has cytotoxicity against cisplatin resistant cancer cells. In the present specification, “cytotoxicity” means an action of reducing the survival rate of a target cell. The survival rate can be measured by a method known per se. For example, in isolated cell lines, as shown in the examples described later, the water-soluble formazan dye is reduced by mitochondrial dehydrogenase. It can be measured by an assay using WST-8 converted to.

好ましい態様において、本発明の剤が有する細胞傷害性はシスプラチン耐性がん細胞特異的である。「シスプラチン耐性がん細胞特異的な細胞傷害性」とは、シスプラチン耐性がん細胞に対する細胞傷害性が、当該シスプラチン耐性がん細胞の親株であって、シスプラチン治療によりシスプラチン耐性を獲得する前の段階のシスプラチン感受性がん細胞に対する細胞傷害性よりも強いことをいう。   In a preferred embodiment, the cytotoxicity of the agent of the present invention is cisplatin resistant cancer cell specific. “Cisplatin-resistant cancer cell-specific cytotoxicity” is a stage in which cytotoxicity against cisplatin-resistant cancer cells is a parent strain of the cisplatin-resistant cancer cells, and is acquired before cisplatin resistance is obtained by cisplatin treatment. It is stronger than the cytotoxicity against cisplatin-sensitive cancer cells.

本発明の剤は、シスプラチン耐性がん細胞に対して強い細胞傷害性を有するため、シスプラチン耐性がんの治療に使用することができる。即ち、本発明の剤を、シスプラチン耐性がん治療剤とすることができる。   Since the agent of the present invention has strong cytotoxicity against cisplatin-resistant cancer cells, it can be used for the treatment of cisplatin-resistant cancer. That is, the agent of the present invention can be used as a cisplatin resistant cancer therapeutic agent.

本発明の剤を個体に投与する場合、その投与対象は、シスプラチン耐性がんを有する哺乳動物である。がんとしては、上述のがんが挙げられる。哺乳動物としては、例えば、マウス、ラット、ハムスター、モルモット等のげっ歯類やウサギ等の実験動物、ブタ、ウシ、ヤギ、ウマ、ヒツジ、ミンク等の家畜、イヌ、ネコ等のペット、ヒト、サル、アカゲザル、マーモセット、オランウータン、チンパンジー等の霊長類等を挙げることが出来る。哺乳動物は、好ましくは実験動物（例えば、マウス）又は霊長類（例えば、ヒト）であり、より好ましくはヒトである。   When the agent of the present invention is administered to an individual, the administration subject is a mammal having cisplatin resistant cancer. As cancer, the above-mentioned cancer is mentioned. Examples of mammals include, for example, laboratory animals such as rodents and rabbits such as mice, rats, hamsters, and guinea pigs, domestic animals such as pigs, cows, goats, horses, sheep and minks, pets such as dogs and cats, humans, Primates such as monkeys, rhesus monkeys, marmosets, orangutans and chimpanzees. The mammal is preferably a laboratory animal (eg mouse) or a primate (eg human), more preferably a human.

本発明の剤の投与量は、その有効成分であるHMG-CoA還元酵素阻害剤の種類、投与経路、投与対象となる動物種、投与対象の薬物受容性、体重、年齢等によって適宜設定することができる。   The dose of the agent of the present invention should be appropriately set according to the type of HMG-CoA reductase inhibitor that is the active ingredient, the route of administration, the animal species to be administered, the drug acceptability of the administration subject, body weight, age, etc. Can do.

本発明の剤は、HMG-CoA還元酵素阻害剤に加え、任意の担体、例えば医薬上許容される担体を含むことができる。   The agent of the present invention can contain any carrier such as a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the HMG-CoA reductase inhibitor.

医薬上許容され得る担体としては、例えば、ショ糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、ショ糖、デンプン等の結合剤、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ナトリウム−グリコール−スターチ、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑剤、クエン酸、メントール、グリチルリチン・アンモニウム塩、グリシン、オレンジ粉等の芳香剤、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン等の保存剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等の安定剤、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸濁剤、界面活性剤等の分散剤、水、生理食塩水、オレンジジュース等の希釈剤、カカオ脂、ポリエチレングリコール、白灯油等のベースワックスなどが挙げられるが、それらに限定されるものではない。   Examples of pharmaceutically acceptable carriers include sucrose, starch, mannitol, sorbit, lactose, glucose, cellulose, talc, calcium phosphate, calcium carbonate and other excipients, cellulose, methylcellulose, hydroxypropylcellulose, polypropylpyrrolidone. , Gelatin, gum arabic, polyethylene glycol, sucrose, starch and other binders, starch, carboxymethylcellulose, hydroxypropyl starch, sodium-glycol starch, sodium bicarbonate, calcium phosphate, calcium citrate and other disintegrants, magnesium stearate , Aerosil, Talc, Lubricant such as sodium lauryl sulfate, Citric acid, Menthol, Glycyrrhizin / Ammonium salt, Glycine, Orange powder and other fragrances, Sodium benzoate Preservatives such as lithium, sodium hydrogen sulfite, methyl paraben, propyl paraben, stabilizers such as citric acid, sodium citrate, acetic acid, suspensions such as methyl cellulose, polyvinyl pyrrolidone, aluminum stearate, dispersants such as surfactants, Examples include, but are not limited to, water, physiological saline, diluents such as orange juice, base waxes such as cacao butter, polyethylene glycol, and white kerosene.

本発明の剤の投与形態としては、液剤、錠剤、丸剤、飲用液剤、散剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、エキス剤、細粒剤、シロップ剤、浸剤、煎剤、点眼剤、トローチ剤、パップ剤、リニメント剤、ローション剤、眼軟膏剤、硬膏剤、カプセル剤、坐剤、浣腸剤、注射剤（液剤、懸濁剤など）、貼付剤、軟膏剤、ゼリー剤、パスタ剤、吸入剤、クリーム剤、スプレー剤、点鼻剤、エアゾール剤などが例示される。   Administration forms of the agent of the present invention include liquids, tablets, pills, drinking liquids, powders, suspensions, emulsions, granules, extracts, fine granules, syrups, soaking agents, decoctions, eye drops, and lozenges. , Patch, liniment, lotion, eye ointment, plaster, capsule, suppository, enema, injection (liquid, suspension, etc.), patch, ointment, jelly, pasta, inhalation Examples include agents, creams, sprays, nasal drops, aerosols and the like.

本発明の剤は、その使用に際し各種形態に応じた方法で投与される。例えば、外用剤の場合には、皮膚ないしは粘膜などの所要部位に直接噴霧、貼付または塗布され、錠剤、丸剤、飲用液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤およびカプセル剤の場合には経口投与され、注射剤の場合には静脈内、筋肉内、皮内、皮下、関節腔内、腹腔内もしくは腫瘍組織内に投与され、坐剤の場合には直腸内投与される。   The agent of this invention is administered by the method according to various forms in the case of the use. For example, in the case of an external preparation, it is sprayed, affixed or applied directly to the required site such as the skin or mucous membrane, and in the case of tablets, pills, drinking solutions, suspensions, emulsions, granules and capsules, it is administered orally. In the case of an injection, it is administered intravenously, intramuscularly, intradermally, subcutaneously, intraarticularly, intraperitoneally or intratumorally, and in the case of a suppository, it is administered intrarectally.

医薬組成物中のHMG-CoA還元酵素阻害剤の含有量は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、例えば、医薬組成物全体の約０．０１ないし１００重量％である。   The content of the HMG-CoA reductase inhibitor in the pharmaceutical composition is not particularly limited and is appropriately selected over a wide range, and is, for example, about 0.01 to 100% by weight of the whole pharmaceutical composition.

本発明の剤は、他の抗癌剤と併用してもよい。抗癌剤としては、例えば、白金製剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン等）、アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード、ナイトロジェンマスタードＮ−オキシド、クロラムブシル等のナイトロジェンマスタード系アルキル化剤；カルボコン、チオテパ等のエチレンイミン誘導体；ブスルファン、トシル酸インプロスルファン等のスルホン酸エステル類；塩酸ニムスチン等のニトロソウレア誘導体等）、抗癌性抗生物質（例えば、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ペプロマイシン、ダウノルビシン、アクラルビシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、ピラルビシン、ＴＨＰ−アドリアマイシン、４’−エピドキソルビシン、エピルビシン等のアントラサイクリン系抗生物質抗腫瘍剤；クロモマイシンＡ３、アクチノマイシンＤ等）、代謝拮抗剤（例えば、５−フルオロウラシル（５ＦＵ）、テガフール、カルモフール、ドキシフルリジン、ブロクスウリジン、シタラビン、エノシタビン、ヒドロキシフリジン、ヒドロキシカルバミド、メトトレキサート、リン酸フルダラビン等のピリミジン代謝拮抗剤；６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、チオイノシン、塩酸ゲムシタビン等のプリン代謝拮抗剤等）、植物アルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン等のビンアルカロイド類；エトポシド、テニポシド等のエピポドフィロトキシン類；パクリタキセル、ドタキセル等のタキサン系アルカロイド等）、分子標的治療剤（例えば、イマチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、バンデタニブ、スニチニブ、ソラフェニブ、リツキシマブ、セツキシマブ、インフリキシマブ、トラスツズマブ、ベバシツマブ等）等が挙げられる。本発明の剤は、これらの抗癌剤とは作用機序が異なる可能性が高いため、併用により、シスプラチン耐性がんに対してより高い治療効果が期待できる。The agent of the present invention may be used in combination with other anticancer agents. Examples of the anticancer agent include platinum preparations (eg, cisplatin, carboplatin, nedaplatin, oxaliplatin, etc.), alkylating agents (eg, nitrogen mustard, nitrogen mustard N-oxide, nitrogen mustard alkylating agents such as chlorambucil); Ethyleneimine derivatives such as carbocone and thiotepa; sulfonic acid esters such as busulfan and improsulfan tosylate; nitrosourea derivatives such as nimustine hydrochloride; and anticancer antibiotics (for example, mitomycin C, bleomycin, pepromycin, daunorubicin, Anthracycline antibiotic antitumor agents such as aclarubicin, adriamycin (doxorubicin), pirarubicin, THP-adriamycin, 4'-epidoxorubicin, epirubicin Chromomycin A 3 , actinomycin D etc.), antimetabolite (eg 5-fluorouracil (5FU), tegafur, carmofur, doxyfluridine, broxuridine, cytarabine, enocitabine, hydroxyfuridine, hydroxycarbamide, methotrexate, phosphoric acid Pyrimidine antimetabolites such as fludarabine; purine antimetabolites such as 6-mercaptopurine, 6-thioguanine, thioinosine, gemcitabine hydrochloride, etc., plant alkaloids (for example, vinalkaloids such as vinblastine, vincristine, vindesine; etoposide, teniposide, etc. Of epipodophyllotoxins; taxane alkaloids such as paclitaxel and dotaxel), molecular targeted therapeutic agents (eg imatinib, gefitinib, erlotinib, vandetanib) Sunitinib, sorafenib, rituximab, cetuximab, infliximab, trastuzumab, include bevacizumab, etc.) and the like. Since the agent of the present invention is likely to have a different mechanism of action from these anti-cancer agents, a higher therapeutic effect can be expected for cisplatin-resistant cancer when used in combination.

以下、実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下に示す実施例によって何ら限定されるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although an Example is shown and this invention is demonstrated more concretely, this invention is not limited at all by the Example shown below.

［方法及び材料］
使用細胞株
シスプラチン耐性がん細胞株及びその対照株として、前立腺がん細胞株PC3細胞とそのシスプラチン耐性株PCDP5細胞（鹿児島大学の中川昌之教授から譲り受けた（J Urol. 1993 Dec;150(6):1970-3.参照。））、並びに子宮頸がん細胞株HeLa細胞とそのシスプラチン耐性株HCP4細胞（鹿児島大学の秋山伸一教授から譲り受けた（Jpn J Cancer Res. 1994 Apr;85(4):426-33.参照。尚、前記文献中、HeLa細胞及びHCP4細胞は、それぞれKB細胞及びKCP4細胞と表記されている。））を使用した。
尚、PC3細胞、PCDP5細胞、HeLa細胞及びHCP4細胞の生存率に関するシスプラチンの５０％阻害濃度は（IC50）は以下の通りである。
PC3: 1.92 μM
PCDP5: 16.8 μM（8.8倍耐性）
HeLa: 0.46 μM
HCP4: 22.5 μM（49倍耐性）[Method and material]
Cell line cisplatin-resistant cancer cell line and its control cell line, prostate cancer cell line PC3 cell and its cisplatin-resistant cell line PCDP5 cell (acquired by Professor Masayuki Nakagawa, Kagoshima University (J Urol. 1993 Dec; 150 (6) : 1970-3.)), As well as the cervical cancer cell line HeLa cell and its cisplatin resistant HCP4 cell (from Jin J Cancer Res. 1994 Apr; 85 (4): 426-33. In the above document, HeLa cells and HCP4 cells are referred to as KB cells and KCP4 cells, respectively))).
In addition, the 50% inhibitory concentration (IC50) of cisplatin relating to the survival rate of PC3 cells, PCDP5 cells, HeLa cells and HCP4 cells is as follows.
PC3: 1.92 μM
PCDP5: 16.8 μM (8.8 times resistance)
HeLa: 0.46 μM
HCP4: 22.5 μM (49-fold resistance)

オキサリプラチン耐性がん細胞株及びその対照株として、結腸がん細胞株DLD1細胞とそのオキサリプラチン耐性株DLD1 OX1細胞、DLD1 OX2細胞、DLD1 OX3細胞及びDLD1 OX4細胞、並びに結腸がん細胞株Caco2細胞とそのオキサリプラチン耐性株Caco2 OX1細胞、Caco2 OX2細胞、Caco2 OX3細胞及びCaco2 OX4細胞を使用した。DLD1細胞及びCaco2細胞は、九州大学の桑野信彦教授（現在は九州大学薬学部の特任教授）から譲り受けた。オキサリプラチン耐性株は、Cancer Sci. 2011 Feb;102(2):382-6に記載の方法により作製した。   As an oxaliplatin resistant cancer cell line and its control line, colon cancer cell line DLD1 cell and its oxaliplatin resistant strain DLD1 OX1 cell, DLD1 OX2 cell, DLD1 OX3 cell and DLD1 OX4 cell, and colon cancer cell line Caco2 cell And its oxaliplatin resistant strain Caco2 OX1 cells, Caco2 OX2 cells, Caco2 OX3 cells and Caco2 OX4 cells were used. DLD1 cells and Caco2 cells were obtained from Professor Nobuhiko Kuwano of Kyushu University (currently a specially-appointed professor of the Faculty of Pharmaceutical Sciences of Kyushu University). The oxaliplatin resistant strain was prepared by the method described in Cancer Sci. 2011 Feb; 102 (2): 382-6.

細胞の準備
PC3細胞とHeLa細胞を96ウェルプレートに1ウェルあたり1,000細胞まき、PCDP5細胞とHCP4細胞を96ウェルプレートに1ウェルあたり2,000細胞まいた。培地としては、Minimum Essential Medium（MEM）を使用した。播種後、96ウェルプレートを５％ＣＯ２濃度、３７℃の湿潤雰囲気中でインキュベートした。
DLD1細胞とそのオキサリプラチン耐性株並びにCaco2細胞とそのオキサリプラチン耐性株は、培地としてRPMIを使用したこと以外は、上記と同様にして培養した。 Cell preparation
PC3 cells and HeLa cells were seeded in a 96-well plate at 1,000 cells per well, and PCDP5 cells and HCP4 cells were seeded in a 96-well plate at 2,000 cells per well. As the medium, Minimum Essential Medium (MEM) was used. After seeding, the 96-well plate was incubated in a humid atmosphere at 37 ° C. with 5% CO 2 concentration.
DLD1 cells and their oxaliplatin resistant strains, and Caco2 cells and their oxaliplatin resistant strains were cultured in the same manner as described above except that RPMI was used as a medium.

薬剤による処理
インキュベーション終了後、培養培地を、下記各薬剤を下記最大濃度となるように添加した培地、これを1〜9回3倍希釈することにより調製した培地、又は薬剤を含まない培地（各100μL）に交換し、更に72時間インキュベートした。
１）シンバスタチン（SIGMA S6196）、ロバスタチン（WAKO 125-04581）、コンパクチン（WAKO 033-17301）、フルバスタチンナトリウム（WAKO 069-05571）、アトルバスタチンカルシウム（WAKO 012-23901）及びピタバスタチンカルシウム（WAKO 012-23901）：最大濃度100μM。
２）プラバスタチンナトリウム（WAKO 163-24861）及びケルセチン（SIGMA Q4951）（コントロール）：最大濃度500μM。After treatment incubation with the drug , the culture medium is a medium in which each of the following drugs is added to the following maximum concentration, a medium prepared by diluting this 1 to 9 times three times, or a medium containing no drug (each 100 μL) and further incubated for 72 hours.
1) Simvastatin (SIGMA S6196), lovastatin (WAKO 125-04581), compactin (WAKO 033-17301), fluvastatin sodium (WAKO 069-05571), atorvastatin calcium (WAKO 012-23901) and pitavastatin calcium (WAKO 012-23901) ): Maximum concentration 100 μM.
2) Pravastatin sodium (WAKO 163-24861) and quercetin (SIGMA Q4951) (control): maximum concentration 500 μM.

細胞生存率の測定
72時間インキュベーションした後、以下の手順でWST-8アッセイを行った。
各ウェルの培地を吸引して除去した後、培地で10倍に希釈したTetraColor ONE（コード番号；800560、生化学バイオビジネス株式会社）を100μLずつ加えた。2〜4時間後にマイクロプレートリーダー（Bio-Radモデル550）で吸光度（450 nm）を測定した。細胞のないウェルにTetraColor ONEを加えたときの吸光度をバックグランドとした。 Cell viability measurement
After 72 hours of incubation, WST-8 assay was performed according to the following procedure.
After the medium in each well was removed by aspiration, 100 μL of TetraColor ONE (code number: 800560, Seikagaku Biobusiness Co., Ltd.) diluted 10-fold with the medium was added. After 2 to 4 hours, the absorbance (450 nm) was measured with a microplate reader (Bio-Rad model 550). Absorbance when TetraColor ONE was added to a well without cells was used as the background.

グラフの作成
薬剤を含まない培地中でインキュベートしたウェルの吸光度を1として、各ウェルの吸光度から細胞の生存率を算出した。各濃度におけるデータは、４ウェルの平均値±ＳＤを示す。 Graph Absorption Assuming that the absorbance of wells incubated in a medium not containing a drug was 1, the cell viability was calculated from the absorbance of each well. The data at each concentration shows the mean value ± SD of 4 wells.

［結果］
各種スタチン系阻害剤のシスプラチン耐性がん細胞株への細胞傷害性
シンバスタチン、ロバスタチン、コンパクチン、フルバスタチンナトリウム、アトルバスタチンカルシウム、ピタバスタチンカルシウム、プラバスタチンナトリウム及びケルセチンの結果を、それぞれ図１〜８に示す。
シンバスタチンの５０％阻害濃度は、前立腺がん細胞株については、シスプラチン耐性のPCDP5細胞においてシスプラチン感受性の親株PC3細胞に比較して約７分の１の濃度に低下し、また子宮頸がん細胞株については、シスプラチン耐性のHCP4細胞においてシスプラチン感受性の親株HeLa細胞に比較して約１５分の１の濃度に低下した。
ロバスタチンの５０％阻害濃度は、前立腺がん細胞株については、シスプラチン耐性のPCDP5細胞においてシスプラチン感受性の親株PC3細胞に比較して約５３０分の１の濃度に低下し、また子宮頸がん細胞株については、シスプラチン耐性のHCP4細胞においてシスプラチン感受性の親株HeLa細胞に比較して約２９分の１の濃度に低下した。
コンパクチンの５０％阻害濃度は、前立腺がん細胞株については、シスプラチン耐性のPCDP5細胞においてシスプラチン感受性の親株PC3細胞に比較して約９分の１の濃度に低下し、また子宮頸がん細胞株については、シスプラチン耐性のHCP4細胞においてシスプラチン感受性の親株HeLa細胞に比較して約４３分の１の濃度に低下した。
フルバスタチンナトリウムの５０％阻害濃度は、前立腺がん細胞株については、シスプラチン耐性のPCDP5細胞においてシスプラチン感受性の親株PC3細胞に比較して約１１分の１の濃度に低下し、また子宮頸がん細胞株については、シスプラチン耐性のHCP4細胞においてシスプラチン感受性の親株HeLa細胞に比較して約１３分の１の濃度に低下した。
アトルバスタチンカルシウムの５０％阻害濃度は、前立腺がん細胞株については、シスプラチン耐性のPCDP5細胞においてシスプラチン感受性の親株PC3細胞に比較して約３分の１の濃度に低下し、また子宮頸がん細胞株については、シスプラチン耐性のHCP4細胞においてシスプラチン感受性の親株HeLa細胞に比較して約９分の１の濃度に低下した。
ピタバスタチンカルシウムの５０％阻害濃度は、前立腺がん細胞株については、シスプラチン耐性のPCDP5細胞においてシスプラチン感受性の親株PC3細胞に比較して約２分の１の濃度に低下し、また子宮頸がん細胞株については、シスプラチン耐性のHCP4細胞においてシスプラチン感受性の親株HeLa細胞に比較して約２３分の１の濃度に低下した。
プラバスタチンナトリウムの５０％阻害濃度は、前立腺がん細胞株については、シスプラチン耐性のPCDP5細胞においてシスプラチン感受性の親株PC3細胞に比較して約３分の１の濃度に低下し、また子宮頸がん細胞株については、シスプラチン耐性のHCP4細胞においてシスプラチン感受性の親株HeLa細胞に比較して約５分の１の濃度に低下した。
一方、スタチン系阻害剤ではないケルセチンでは、シスプラチン耐性細胞株特異的な細胞傷害性は認められなかった。
以上の結果から、スタチンがシスプラチン感受性がん細胞株よりもシスプラチン耐性がん細胞株に対して高い抗がん作用（細胞傷害性）を有することが示された。[result]
The results of cytotoxic simvastatin, lovastatin, compactin, fluvastatin sodium, atorvastatin calcium, pitavastatin calcium, pravastatin sodium and quercetin for various statin inhibitors to cisplatin-resistant cancer cell lines are shown in FIGS.
The 50% inhibitory concentration of simvastatin is reduced to about one-seventh in cisplatin-resistant PCDP5 cells compared to cisplatin-sensitive parental PC3 cells for prostate cancer cell lines, and cervical cancer cell lines As for cisplatin-resistant HCP4 cells, the concentration was reduced to about 15 times that of cisplatin-sensitive parental HeLa cells.
The 50% inhibitory concentration of lovastatin is reduced to about 530 times lower in cisplatin-resistant PCDP5 cells than in cisplatin-sensitive parental PC3 cells for prostate cancer cell lines, and cervical cancer cell lines As for cisplatin-resistant HCP4 cells, the concentration was reduced to about 1/29 of the cisplatin-sensitive parental HeLa cells.
The 50% inhibitory concentration of compactin is reduced to about 9 times lower in cisplatin-resistant PCDP5 cells than in cisplatin-sensitive parental PC3 cells for prostate cancer cell lines, and cervical cancer cell lines In cisplatin-resistant HCP4 cells, the concentration was reduced to about 1/43 of the cisplatin-sensitive parental HeLa cells.
The 50% inhibitory concentration of fluvastatin sodium is reduced to about 11 times lower in cisplatin-resistant PCDP5 cells than in cisplatin-sensitive parental PC3 cells for prostate cancer cell lines, and cervical cancer As for the cell line, the concentration of cisplatin-resistant HCP4 cells was reduced to about 13 times that of the parent cisplatin-sensitive HeLa cell.
The 50% inhibitory concentration of atorvastatin calcium is reduced to about one-third for cisplatin-resistant PCDP5 cells compared to cisplatin-sensitive parental PC3 cells for prostate cancer cell lines, and cervical cancer cells As for the strain, the concentration of cisplatin-resistant HCP4 cells was reduced to about 1/9 compared with the parent strain HeLa cells sensitive to cisplatin.
The 50% inhibitory concentration of pitavastatin calcium is reduced by about one-half for cisplatin-resistant PCDP5 cells compared to the cisplatin-sensitive parent PC3 cells for prostate cancer cell lines, and cervical cancer cells With respect to the strain, the concentration of cisplatin-resistant HCP4 cells was reduced to about 23-fold compared to the cisplatin-sensitive parent strain HeLa cells.
The 50% inhibitory concentration of pravastatin sodium is reduced to about one third of the cisplatin-resistant PCDP5 cells compared to the cisplatin-sensitive parental PC3 cells for prostate cancer cell lines, and cervical cancer cells For the strain, the concentration of cisplatin-resistant HCP4 cells was reduced to about one-fifth compared to the parent strain HeLa cells sensitive to cisplatin.
On the other hand, quercetin, which is not a statin inhibitor, did not show cytotoxicity specific to cisplatin-resistant cell lines.
From the above results, it was shown that statins have a higher anticancer effect (cytotoxicity) on cisplatin-resistant cancer cell lines than on cisplatin-sensitive cancer cell lines.

シンバスタチンのオキサリプラチン耐性がん細胞株への細胞傷害性
シスプラチンと同じ白金製剤であるオキサリプラチンに対する耐性がん細胞株について、上記と同様にHMG-CoA還元酵素阻害剤の抗腫瘍効果を検討した。
シンバスタチンの結果を図９及び１０に示す。
DLD1細胞を親株とするオキサリプラチン耐性がん細胞株は、シンバスタチンに対する感受性を示さなかった（図９）。
またCaco2細胞を親株とするオキサリプラチン耐性がん細胞株については、Caco2 OX4細胞では５０％阻害濃度が親株の2.2分の１の濃度に低下したものの、他の耐性株のシンバスタチン感受性はそれ程高くなく、また株毎にばらつきが見られた（図１０）。
以上の結果から、スタチンの抗がん作用（細胞傷害性）は、オキサリプラチン耐性がん細胞株に対しては、シスプラチン耐性がん細胞株ほどには高くないことが示された。即ち、スタチンがシスプラチン耐性がん細胞に対して特異的に細胞傷害性を発揮することが示された。 Cytotoxicity of simvastatin to oxaliplatin-resistant cancer cell line The anti-tumor effect of an HMG-CoA reductase inhibitor was examined in the same manner as described above for a cancer cell line resistant to oxaliplatin, which is the same platinum preparation as cisplatin.
The results for simvastatin are shown in FIGS.
The oxaliplatin resistant cancer cell line whose parent strain is DLD1 cell did not show sensitivity to simvastatin (FIG. 9).
In addition, for the oxaliplatin resistant cancer cell line whose parent strain is Caco2 cells, the 50% inhibitory concentration of Caco2 OX4 cells was reduced to 1/2 of that of the parent strain, but the simvastatin sensitivity of other resistant strains was not so high. In addition, variation was observed for each strain (FIG. 10).
From the above results, it was shown that the anticancer activity (cytotoxicity) of statins is not as high as that of cisplatin-resistant cancer cell lines against oxaliplatin-resistant cancer cell lines. That is, it was shown that statins exhibit cytotoxicity specifically against cisplatin resistant cancer cells.

本発明によれば、シスプラチン耐性がんに対する新たな治療手段を提供することが可能となる。   ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, it becomes possible to provide the new treatment means with respect to a cisplatin resistant cancer.

本出願は、２０１３年１月２９日出願の日本国特許出願、特願２０１３-０１４４５９を基礎としており、その内容は全て本明細書に包含される。   This application is based on Japanese Patent Application No. 2013-01459 filed on Jan. 29, 2013, the contents of which are incorporated in full herein.

Claims (11)

HMG-CoA還元酵素阻害剤を含有してなる、シスプラチン耐性がん細胞傷害剤。   A cisplatin-resistant cancer cytotoxic agent comprising an HMG-CoA reductase inhibitor. 有効成分がHMG-CoA還元酵素阻害剤から成る、請求項１に記載の剤。   The agent according to claim 1, wherein the active ingredient comprises an HMG-CoA reductase inhibitor. HMG-CoA還元酵素阻害剤が、シンバスタチン、ロバスタチン、コンパクチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン及びセリバスタチン、並びにその医薬上許容される塩からなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１又は２に記載の剤。   The HMG-CoA reductase inhibitor is at least one selected from the group consisting of simvastatin, lovastatin, compactin, fluvastatin, atorvastatin, pitavastatin, pravastatin, rosuvastatin and cerivastatin, and a pharmaceutically acceptable salt thereof. Item 3. The agent according to Item 1 or 2. HMG-CoA還元酵素阻害剤が、シンバスタチン、ロバスタチン、コンパクチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ピタバスタチン及びプラバスタチン、並びにその医薬上許容される塩からなる群から選択される少なくとも１種である、請求項３に記載の剤。   The HMG-CoA reductase inhibitor is at least one selected from the group consisting of simvastatin, lovastatin, compactin, fluvastatin, atorvastatin, pitavastatin and pravastatin, and pharmaceutically acceptable salts thereof. Agent. がんが、前立腺がん又は子宮頸がんである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の剤。   The agent according to any one of claims 1 to 4, wherein the cancer is prostate cancer or cervical cancer. HMG-CoA還元酵素阻害剤を含有してなる、シスプラチン耐性がん治療剤。   A therapeutic agent for cisplatin-resistant cancer, comprising an HMG-CoA reductase inhibitor. 有効成分がHMG-CoA還元酵素阻害剤から成る、請求項６に記載の剤。   The agent according to claim 6, wherein the active ingredient comprises an HMG-CoA reductase inhibitor. 被験者に有効量のHMG-CoA還元酵素阻害剤を投与することを含む、シスプラチン耐性がん細胞の傷害方法。   A method for damaging cisplatin-resistant cancer cells, comprising administering an effective amount of an HMG-CoA reductase inhibitor to a subject. 被験者に有効量のHMG-CoA還元酵素阻害剤を投与することを含む、シスプラチン耐性がんの治療方法。   A method for treating cisplatin-resistant cancer, comprising administering an effective amount of an HMG-CoA reductase inhibitor to a subject. HMG-CoA還元酵素阻害剤を含有してなる、シスプラチン耐性がん細胞の傷害において使用するための剤。   An agent for use in injury of cisplatin-resistant cancer cells, comprising an HMG-CoA reductase inhibitor. HMG-CoA還元酵素阻害剤を含有してなる、シスプラチン耐性がんの治療において使用するための剤。   An agent for use in the treatment of cisplatin-resistant cancer, comprising an HMG-CoA reductase inhibitor.
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