JPWO2012017891A1 - Pyridylbenzofuran derivative - Google Patents
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Abstract
本発明は、ピリジルベンゾフラン誘導体および前記誘導体を含むアミロイド関連疾患診断用組成物に関する。The present invention relates to a pyridylbenzofuran derivative and a composition for diagnosing amyloid-related diseases comprising the derivative.
Description
本発明は、ピリジルベンゾフラン誘導体および前記誘導体を含むアミロイド関連疾患診断用組成物に関する。 The present invention relates to a pyridylbenzofuran derivative and a composition for diagnosing amyloid-related diseases comprising the derivative.
アルツハイマー病(AD)は、認知低下、不可逆的な記憶喪失、見当識障害、および言語障害を特徴とする進行性の神経変性疾患である。脳におけるβ-アミロイド(Aβ)凝集体の存在が、ADの顕著な特徴として一般的に認められている(非特許文献1,2)。ADの確定診断は剖検脳組織の病理学的検査によるもののみであることから、インビボにおけるβ-アミロイドプラークの画像化を可能にする技術の開発が強く望まれている(非特許文献3−5)。
Alzheimer's disease (AD) is a progressive neurodegenerative disease characterized by cognitive decline, irreversible memory loss, disorientation, and speech impairment. The presence of β-amyloid (Aβ) aggregates in the brain is generally recognized as a prominent feature of AD (
陽電子断層撮影法(PET)における予備的な研究では、[11C]4−N−メチルアミノ−4’−ヒドロキシスチルベン(SB−13)(非特許文献6,7)、[11C]2−(4’−(メチルアミノフェニル)−6−ヒドロキシベンゾチアゾール(PIB)(非特許文献8,9)、[11C]2−(2−[2−ジメチルアミノチアゾール−5−イル]エテニル)−6−(2−[フルオロ]エトキシ)ベンゾオキサゾール(BF−227)(非特許文献10)、および[11C]−2−[6−(メチルアミノ)ピリジン−3−イル]−1,3−ベンゾチアゾール−6−オール(AZD2184)(非特許文献11)(図1)の脳における取り込みおよび保持が、AD患者と対照との間で異なることが示唆されている。ADが疑われる場合に11C標識トレーサーを用いて脳のβ−アミロイドプラークを画像化することに成功したことは、この技術のさらなる改良の大きな弾みとなった。しかしながら、11Cは半減期が短く(t1/2:20分)、診断ツールとしての可能性が制限される。この目的にはより長い半減期(t1/2:110分)を有する同位体である18Fがより有用であることから、最近は18Fで標識された類似薬の開発が集中的に試みられている。[18F]−2−(1−(2−(N−(2−フルオロエチル)−N−メチルアミノ)ナフタレン−6−イル)エチリデン)マロノニトリル(FDDNP)による予備的な研究(非特許文献12,13)において、AD患者の脳における取り込みおよび保持が異なることが初めて示された。より最近になって、スチルベン誘導体の(E)−4−(N−メチルアミノ)−4’−(2−(2−(2−[18F]−フルオロエトキシ)エトキシ)エトキシ)−スチルベン(BAY94−9172)(非特許文献14,15)、スチリルピリジン誘導体の(E)−4−(2−(6−(2−(2−(2−([18F]−フルオロエトキシ)エトキシ)エトキシ)ピリジン−3−イルビニル)−N−メチルベンゼンアミン(AV−45)(非特許文献16−18)、およびPIBアナログの2−(3−[18F]−フルオロ−4−メチルアミノ−フェニル)ベンゾチアゾール−6−オール(GE−067)(非特許文献19)(図1)が、第二相および第三相臨床試験において生体の脳組織中のβ−アミロイドプラークの画像化に有用であることが示された(非特許文献20)。Preliminary studies in positron emission tomography (PET) include [ 11 C] 4-N-methylamino-4′-hydroxystilbene (SB-13) (
本発明者らは、一連のフッ化ベンゾフラン誘導体を、PETによるβ−アミロイドプラークの画像化のための18F標識トレーサーの候補として評価した(非特許文献21)。これら誘導体は、Aβ凝集体に対してインビトロでもインビボでも優れた親和性を示した。特に、4−(5−(2−(2−(2−フルオロエトキシ)エトキシ)エトキシ)ベンゾフラン−2−イル)−N,N−ジメチルベンゼンアミン(FPHBF−1)(図2)による脳組織の透過性が有望であった。しかしながら、このプローブは正常マウスの脳からの排出が遅いため、インビボにおける画像化には適さなかった。それゆえ、ベンゾフラン誘導体の取り込みおよび排出の動態をきめ細かく調節することが臨床的に必要とされている。脳への取り込みと脳からのクリアランスに関する以前の結果では、脳からの排出が遅いことの理由の一つとして高い親油性が指摘されている(非特許文献8,22−24)。The present inventors evaluated a series of fluorinated benzofuran derivatives as candidates for 18 F-labeled tracers for imaging β-amyloid plaques with PET (Non-patent Document 21). These derivatives showed excellent affinity for Aβ aggregates both in vitro and in vivo. In particular, brain tissue by 4- (5- (2- (2- (2-fluoroethoxy) ethoxy) ethoxy) benzofuran-2-yl) -N, N-dimethylbenzenamine (FPHBF-1) (FIG. 2) Permeability was promising. However, this probe was not suitable for in vivo imaging because of slow drainage from normal mouse brain. Therefore, there is a clinical need to finely regulate the kinetics of uptake and excretion of benzofuran derivatives. In the previous results regarding brain uptake and clearance from the brain, high lipophilicity has been pointed out as one of the reasons for the slow discharge from the brain (Non-patent Documents 8 and 22-24).
最近、フッ化ピリジルベンゾフラン誘導体である2−(2−フルオロ−6−(メチルアミノ)ピリジン−3−イル)ベンゾフラン−5−オール(AZD4694)(図2)が、生体脳組織における皮質β−アミロイドプラークの画像化に有望であると報告された(非特許文献26)。しかしながら、本文献では、18F標識や[18F]AZD4694のインビボ特性は報告されていない。Recently, 2- (2-fluoro-6- (methylamino) pyridin-3-yl) benzofuran-5-ol (AZD4694) (FIG. 2), a fluorinated pyridylbenzofuran derivative, has been used as a cortical β-amyloid in living brain tissue. It was reported that it was promising for imaging plaque (Non-patent Document 26). However, in this document, the in vivo properties of 18 F labeling and [ 18 F] AZD4694 are not reported.
本発明は、インビボにおけるβ-アミロイドプラークの画像化に適する、ピリジルベンゾフラン誘導体を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a pyridylbenzofuran derivative suitable for imaging of β-amyloid plaques in vivo.
本発明者らは、フェニルベンゾフランのフェニル基をピリジル基と置換することにより、親油性の低い新規なフッ化ピリジルベンゾフラン誘導体を開発することを試みた。18Fにより誘導体を標識するためのコア構造のフルオロ−ペグ化(FPEG)という新しいアプローチが、Kungらにより開発されている(非特許文献25)。このアプローチは、親油性を大幅に増大させることなく標的に18Fを組み込む単純かつ簡便な方法を提供することから、本発明者らはピリジルベンゾフラン誘導体の標識のためにFPEGを選択した。本発明者らは、フルオロポリエチレングリコール側鎖とジメチルアミノピリジル基を有する新規なフッ化リガンドである5−(5−(2−(2−(2−フルオロエトキシ)エトキシ)エトキシ)ベンゾフラン−2−イル)−N,N−ジメチルピリジン−2−アミン(FPYBF−1)(図2)をはじめとして、数種のピリジルベンゾフラン誘導体を合成した。そして、初めてピリジルベンゾフラン誘導体の放射性標識に成功し、インビボでのβ−アミロイドプラークの画像化について評価を行い、本発明を完成した。The present inventors tried to develop a novel fluorinated pyridylbenzofuran derivative having low lipophilicity by replacing the phenyl group of phenylbenzofuran with a pyridyl group. A new approach called core structure fluoro-PEGylation (FPEG) for labeling derivatives with 18 F has been developed by Kung et al. Since this approach provides a simple and convenient way to incorporate 18 F into the target without significantly increasing lipophilicity, we chose FPEG for labeling of pyridylbenzofuran derivatives. The present inventors have developed a novel fluorinated ligand having a fluoropolyethylene glycol side chain and a dimethylaminopyridyl group, 5- (5- (2- (2- (2-fluoroethoxy) ethoxy) ethoxy) benzofuran-2- Yl) -N, N-dimethylpyridin-2-amine (FPYBF-1) (FIG. 2) and several pyridylbenzofuran derivatives were synthesized. For the first time, radiolabeling of a pyridylbenzofuran derivative was successful, and the in vivo imaging of β-amyloid plaques was evaluated to complete the present invention.
すなわち、本発明は、
一般式(I)
R1は、ヒドロキシ基、C1−10アルコキシ基および式:−(CH2CH2O)n−X(式中、nは1〜10の整数を表し、Xはハロゲン原子を表す。)からなる群から選択される、
R2は、式:−NRaRb(式中、RaおよびRbは、それぞれ独立して水素原子及びC1−3アルキル基のいずれかを表す。)で示される基である、
R3、R4、R5、R6、R7及びR8は、各々独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、C1−4アルキル基、およびC1−4アルコキシ基からなる群から選択される〕
で表される化合物またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。That is, the present invention
Formula (I)
R 1 is a hydroxy group, a C 1-10 alkoxy group and a formula: — (CH 2 CH 2 O) n —X (wherein n represents an integer of 1 to 10 and X represents a halogen atom). Selected from the group
R 2 is a group represented by the formula: —NRaRb (wherein Ra and Rb each independently represents a hydrogen atom or a C 1-3 alkyl group),
R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 and R 8 are each independently a group consisting of a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group, a C 1-4 alkyl group, and a C 1-4 alkoxy group. Selected from)
Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
本発明はまた、
一般式(II)
R2は、式:−NRaRb(式中、RaおよびRbは、それぞれ独立して水素原子及びC1−3アルキル基のいずれかを表す。)で示される基である〕
で表される前記化合物またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。The present invention also provides
Formula (II)
R 2 is a group represented by the formula: —NRaRb (wherein Ra and Rb each independently represents a hydrogen atom or a C 1-3 alkyl group)]
Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
本発明はまた、放射性核種で標識されている、前記いずれかの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を提供する。 The present invention also provides any of the aforementioned compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof, which is labeled with a radionuclide.
本発明はまた、放射性核種で標識されている前記いずれかの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含有する、アミロイド関連疾患診断用組成物を提供する。 The present invention also provides a composition for diagnosing amyloid-related diseases, comprising any one of the aforementioned compounds labeled with a radionuclide or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
本発明はまた、放射性核種で標識されている前記いずれかの化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、アミロイドプラークの画像化剤を提供する。 The present invention also provides an imaging agent for amyloid plaques, comprising any of the aforementioned compounds labeled with a radionuclide or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
本発明はまた、以下:
a.放射性核種で標識されている前記いずれかの化合物またはその薬学的に受容可能な塩の検出可能な量を哺乳動物に導入する工程;
b.該化合物がアミロイドプラークに結合するのに十分な時間放置する工程;および
c.1つ以上のアミロイドプラークに結合した化合物を検出する工程、を包含する、アミロイドプラークを画像化するための方法を提供する。The present invention also includes:
a. Introducing into the mammal a detectable amount of any of the aforementioned compounds labeled with a radionuclide or a pharmaceutically acceptable salt thereof;
b. Leaving the compound for a time sufficient to bind to the amyloid plaque; and c. Detecting a compound bound to one or more amyloid plaques, a method for imaging amyloid plaques is provided.
本発明により、脳組織中のアミロイドプラークを画像化すること、およびアルツハイマー病をはじめとするアミロイドタンパク質凝集体の存在を特徴とする疾患を診断することが可能となった。 The present invention makes it possible to image amyloid plaques in brain tissue and to diagnose diseases characterized by the presence of amyloid protein aggregates such as Alzheimer's disease.
本発明の化合物は、
一般式(I)
R1は、ヒドロキシ基、C1−10アルコキシ基および式:−(CH2CH2O)n−X(式中、nは1〜10の整数を表し、Xはハロゲン原子を表す。)からなる群から選択される、
R2は、式:−NRaRb(式中、RaおよびRbは、それぞれ独立して水素原子及びC1−3アルキル基のいずれかを表す。)で示される基である、
R3、R4、R5、R6、R7及びR8は、各々独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、C1−4アルキル基、およびC1−4アルコキシ基からなる群から選択される〕
で表される。The compounds of the present invention
Formula (I)
R 1 is a hydroxy group, a C 1-10 alkoxy group and a formula: — (CH 2 CH 2 O) n —X (wherein n represents an integer of 1 to 10 and X represents a halogen atom). Selected from the group
R 2 is a group represented by the formula: —NRaRb (wherein Ra and Rb each independently represents a hydrogen atom or a C 1-3 alkyl group),
R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 and R 8 are each independently a group consisting of a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group, a C 1-4 alkyl group, and a C 1-4 alkoxy group. Selected from)
It is represented by
好ましい態様において、本発明の化合物は
一般式(II)
R2は、式:−NRaRb(式中、RaおよびRbは、それぞれ独立して水素原子及びC1−3アルキル基のいずれかを表す。)で示される基である〕
である。In a preferred embodiment, the compounds of the invention have the general formula (II)
R 2 is a group represented by the formula: —NRaRb (wherein Ra and Rb each independently represents a hydrogen atom or a C 1-3 alkyl group)]
It is.
C1−10アルコキシ基としては、例えば、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、イソブトキシ基、sec−ブトキシ基、tert−ブトキシ基、ペンチル基などが挙げられる。Examples of the C 1-10 alkoxy group include a methoxy group, an ethoxy group, a propoxy group, an isopropoxy group, a butoxy group, an isobutoxy group, a sec-butoxy group, a tert-butoxy group, and a pentyl group.
C1−4アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec−ブチル基、tert−ブチル基が挙げられる。Examples of the C 1-4 alkyl group include a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a butyl group, an isobutyl group, a sec-butyl group, and a tert-butyl group.
ハロゲン原子としては、F、Cl、Br、Iが挙げられる。好ましい態様において、XはFである。 Examples of the halogen atom include F, Cl, Br, and I. In a preferred embodiment, X is F.
好ましい態様において、−NRaRbは、−NH2、−NHCH3または−N(CH3)2である。In preferred embodiments, —NRaRb is —NH 2 , —NHCH 3 or —N (CH 3 ) 2 .
ある態様において、R1は、−(CH2CH2O)n−X(式中、nは1〜10の整数を表し、Xはハロゲン原子を表す。)である。nは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、および10から選択される整数である。好ましい態様において、nは1〜3、1〜4、または1〜5の整数を表す。In one embodiment, R 1 is — (CH 2 CH 2 O) n —X (wherein n represents an integer of 1 to 10 and X represents a halogen atom). n is an integer selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, and 10. In a preferred embodiment, n represents an integer of 1 to 3, 1 to 4, or 1 to 5.
本発明の好ましい化合物は、下記式で表されるFPYBF−1またはFPYBF−2である。
FPYBF−1
FPYBF−2
FPYBF-1
FPYBF-2
別の態様において、R1は、C1−10アルコキシ基、好ましくはC1−5アルコキシ基である。この態様の別の局面において、R1は、C1−3アルコキシ基である。In another embodiment, R 1 is a C 1-10 alkoxy group, preferably a C 1-5 alkoxy group. In another aspect of this embodiment, R 1 is a C 1-3 alkoxy group.
本発明の化合物は、以下の実施例の記載、またはCheng et al., Bioorg Med Chem Lett, 20, 6141-44, 2010およびOno et al., J Med Chem, 54, 2971-2979, 2011の記載にしたがって合成することができる。 The compounds of the present invention are described in the following examples or as described in Cheng et al., Bioorg Med Chem Lett, 20, 6141-44, 2010 and Ono et al., J Med Chem, 54, 2971-2979, 2011. Can be synthesized according to
本発明において、化合物が「放射性核種で標識されている」とは、化合物中の1以上の原子が同じ原子番号を有するが質量数の異なるその放射性同位体と置換されているか、あるいは化合物に放射性核種が結合されていることを意味する。化合物中の原子の放射性同位体としては、H、C、N、O、F、Cl、Br、Iの放射性同位体である2H、3H、11C、13C、14C、15C、15O、18F、36Cl、75Br、76Br、77Br、123I、124I、125I、が挙げられ、中でも11Cおよび18Fが好ましい。本発明の化合物に結合される放射性核種としては、64Cu、67Ga、68Ga、又は99mTcが挙げられ、中でも99mTcが好ましい。これら放射性核種は、各放射性核種について一般的に用いられている方法により、本発明の化合物中の原子と置換することができ、また本発明の化合物に結合させることができる。In the present invention, a compound is “labeled with a radionuclide” when one or more atoms in the compound have the same atomic number but are substituted with radioactive isotopes having different mass numbers, or the compound is radioactive. It means that the nuclide is bound. As radioactive isotopes of atoms in the compound, H, C, N, O, F, Cl, Br, and the radioisotopes of I, 2 H, 3 H, 11 C, 13 C, 14 C, 15 C, 15 O, 18 F, 36 Cl, 75 Br, 76 Br, 77 Br, 123 I, 124 I, 125 I, and 11 C and 18 F are preferred. Examples of the radionuclide bonded to the compound of the present invention include 64 Cu, 67 Ga, 68 Ga, or 99m Tc, and 99m Tc is particularly preferable. These radionuclides can be substituted for the atoms in the compound of the present invention and bonded to the compound of the present invention by a method generally used for each radionuclide.
99mTcは通常、錯体の形で非標識化合物に結合される。99mTcを含む錯体としては、2−ヒドラジノピリジンを含む錯体(Liu S et al, Bioconjug Chem. 1996 Jan-Feb;7(1):63-71)、N−(2−メルカプトエチル)−2−〔(2−メルカプトエチル)アミノ〕−アセトアミドを含む錯体(Zhen W et al, J Med Chem. 1999 Jul 29;42(15):2805-15)、2,2’−(1,2−エタンジイルジイミノ)ビスエタンチオールを含む錯体(Oya S et al, Nucl Med Biol. 1998 Feb;25(2):135-40)、トリカルボニル錯体(Schibli R et al, Bioconjug Chem. 2000 May-Jun;11(3):345-51)などが挙げられる(これら文献は引用により本明細書に含まれる)。 99m Tc is usually bound to the unlabeled compound in the form of a complex. As a complex containing 99m Tc, a complex containing 2-hydrazinopyridine (Liu S et al, Bioconjug Chem. 1996 Jan-Feb; 7 (1): 63-71), N- (2-mercaptoethyl) -2 Complexes containing-[(2-mercaptoethyl) amino] -acetamide (Zhen W et al, J Med Chem. 1999 Jul 29; 42 (15): 2805-15), 2,2 '-(1,2-ethane Complex containing diyldiimino) bisethanethiol (Oya S et al, Nucl Med Biol. 1998 Feb; 25 (2): 135-40), tricarbonyl complex (Schibli R et al, Bioconjug Chem. 2000 May-Jun; 11 (3): 345-51) and the like (these documents are incorporated herein by reference).
本発明の好ましい標識化合物は、以下である。
[18F]FPYBF−1
[18F]FPYBF−2
[99mTc]BAT−Bp
[99mTc]BAT−Bp−5
[ 18 F] FPYBF-1
[ 18 F] FPYBF-2
[ 99m Tc] BAT-Bp
[ 99m Tc] BAT-Bp-5
「薬学的に受容可能な塩」としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、硫酸塩、塩酸塩、硝酸塩、リン酸塩などが挙げられるが、これらに限定されない。 Examples of the “pharmaceutically acceptable salt” include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt, alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt, sulfate, hydrochloride, nitrate, phosphate and the like. For example, but not limited to.
本発明はまた、放射性核種で標識されている本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、アミロイド関連疾患診断用組成物に関する。 The present invention also relates to a composition for diagnosing amyloid-related diseases, comprising the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof labeled with a radionuclide.
本発明における「アミロイド関連疾患」とは、アミロイドタンパク質凝集体の存在が観察される疾患を意味する。本発明の化合物はβシート構造をとるタンパク質に結合することから、本発明における「アミロイド関連疾患」には、β−アミロイドの他、タウ、αシヌクレイン、プリオンなどの、βシート構造をとるアミロイドタンパク質の凝集体の存在が観察される疾患が含まれる。具体的には、本発明における「アミロイド関連疾患」としては、アルツハイマー病、地中海熱、マックル−ウェルズ症候群、突発性骨髄腫、アミロイド多発性神経障害、アミロイド心筋症、全身性老年性アミロイドーシス、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血(オランダ型またはアイスランド型アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血を含む)、ダウン症候群、スクラピー、クロイツフェルト−ヤコプ病、クールー、ゲルストマン−シュトロイスラー−シャインカー症候群、甲状腺の髄様癌、孤立心房性アミロイド、透析患者におけるβ2−ミクログロブリンアミロイド、封入体筋炎、筋消耗病におけるβ2−アミロイド沈着、およびランゲルハンス島II型糖尿病インスリノーマが挙げられる。中でも、本発明の診断用組成物は、β−アミロイド(Aβ)凝集体の存在が観察される疾患、例えばアルツハイマー病、オランダ型アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血、およびダウン症候群に特に好適である。また、一般には「疾患」と認識されない疾患の前駆症状も、本発明における「アミロイド関連疾患」に含まれる。このような疾患の前駆症状としては、アルツハイマー病の発症前にみられる軽度認知障害(MCI)などを例示できる。The “amyloid-related disease” in the present invention means a disease in which the presence of amyloid protein aggregates is observed. Since the compound of the present invention binds to a protein having a β-sheet structure, the “amyloid-related diseases” in the present invention include amyloid proteins having a β-sheet structure such as tau, α-synuclein and prion in addition to β-amyloid. Diseases in which the presence of aggregates are observed. Specifically, the “amyloid-related disease” in the present invention includes Alzheimer's disease, Mediterranean fever, Maccle-Wells syndrome, idiopathic myeloma, amyloid polyneuropathy, amyloid cardiomyopathy, systemic senile amyloidosis, and amyloidosis. Hereditary cerebral hemorrhage (including hereditary cerebral hemorrhage with Dutch or Icelandic amyloidosis), Down syndrome, scrapie, Kreuzfeld-Jakob disease, Kuru, Gerstmann-Stroisler-Scheinker syndrome, medullary carcinoma of the thyroid, isolated Atrial amyloid, β 2 -microglobulin amyloid in dialysis patients, inclusion body myositis, β 2 -amyloid deposition in muscle wasting disease, and Langerhans type II diabetes insulinoma. Among these, the diagnostic composition of the present invention is particularly suitable for diseases in which the presence of β-amyloid (Aβ) aggregates is observed, such as Alzheimer's disease, hereditary cerebral hemorrhage with Dutch amyloidosis, and Down's syndrome. In addition, precursor symptoms of diseases that are generally not recognized as “diseases” are also included in “amyloid-related diseases” in the present invention. Examples of prodromal symptoms of such diseases include mild cognitive impairment (MCI) seen before the onset of Alzheimer's disease.
本発明の組成物によるアミロイド関連疾患の診断は、通常、本発明の組成物を診断対象者又は実験動物などに投与し、その後、脳の画像を撮影し、画像における本発明の化合物の状態(量、分布等)を観察することにより行う。本発明の組成物は、コンピューター断層撮影法(SPECT)により診断を行う場合、123I、67Ga、または99mTcなどのγ線放出核種で標識された化合物を含んでいればよく、また陽電子断層撮影法(PET)により診断を行う場合、11C、13N、15O、18F、62Cu、68Ga、または76Brなどの陽電子放出核種で標識された化合物を含んでいればよい。Diagnosis of amyloid-related diseases using the composition of the present invention is usually performed by administering the composition of the present invention to a subject to be diagnosed or a laboratory animal, and then taking a brain image, and the state of the compound of the present invention in the image ( Quantity, distribution, etc.). The composition of the present invention may contain a compound labeled with a γ-emitting nuclide such as 123 I, 67 Ga, or 99m Tc when diagnosing by computer tomography (SPECT). When a diagnosis is performed by an imaging method (PET), a compound labeled with a positron emitting nuclide such as 11 C, 13 N, 15 O, 18 F, 62 Cu, 68 Ga, or 76 Br may be included.
本発明の組成物の投与方法は特に限定されず、化合物および放射性核種の種類や、対象者の状態に応じて適宜決定されるが、通常、皮内、腹腔内、静脈、動脈、又は脊髄液への注射又は点滴によって投与する。本発明の組成物の投与量もまた、化合物および放射性核種の種類や対象者の状態に応じて適宜決定されるが、例えば成人の場合、本発明の化合物を1日当たり10−10〜10−3mg、好ましくは10−8〜10−5mg投与すればよい。The method of administration of the composition of the present invention is not particularly limited, and is appropriately determined according to the type of compound and radionuclide and the condition of the subject, but is usually intradermal, intraperitoneal, vein, artery, or spinal fluid. Administered by injection or infusion. The dose of the composition of the present invention is also appropriately determined according to the type of compound and radionuclide and the condition of the subject. For example, in the case of an adult, the dose of the compound of the present invention is 10 −10 to 10 −3 per day. mg, preferably 10 −8 to 10 −5 mg may be administered.
本発明の組成物は、通常注射又は点滴によって投与されるので、本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩に加えて、注射液や点滴液に通常含まれる成分を含んでいてもよい。このような成分としては、液体担体(例えば、リン酸カリウム緩衝液、生理食塩水、リンゲル液、蒸留水、ポリエチレングリコール、植物性油脂、エタノール、グリセリン、ジメチルスルホキサイド、プロピレングリコール)、抗菌剤、局所麻酔剤(例えば、塩酸プロカイン、塩酸ジブカイン)、緩衝液(例えば、トリス−塩酸緩衝液、ヘペス緩衝液)、浸透圧調節剤(例えば、グルコース、ソルビトール、塩化ナトリウム)を例示できる。 Since the composition of the present invention is usually administered by injection or infusion, the composition of the present invention may contain, in addition to the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof, components usually contained in injection solutions or infusion solutions. . Such components include liquid carriers (for example, potassium phosphate buffer, physiological saline, Ringer's solution, distilled water, polyethylene glycol, vegetable oils, ethanol, glycerin, dimethyl sulfoxide, propylene glycol), antibacterial agents, Examples include a local anesthetic (eg, procaine hydrochloride, dibucaine hydrochloride), a buffer solution (eg, Tris-HCl buffer solution, Hepes buffer solution), and an osmotic pressure regulator (eg, glucose, sorbitol, sodium chloride).
本発明はまた、放射性核種で標識されている本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩を含む、アミロイドプラークの画像化剤に関する。「アミロイドプラーク」は、βシート構造をとるアミロイドタンパク質が凝集して形成される。アミロイドタンパク質としては、β−アミロイド、タウ、αシヌクレイン、プリオンが挙げられるが、本発明の画像化剤はβ−アミロイドにより形成されるアミロイドプラークの画像化に特に好適である。本発明のアミロイドプラークの画像化剤は、アミロイド関連疾患診断用組成物と同様に調製し、使用することができる。 The present invention also relates to an imaging agent for amyloid plaques comprising a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof labeled with a radionuclide. “Amyloid plaques” are formed by aggregation of amyloid proteins having a β-sheet structure. Examples of amyloid protein include β-amyloid, tau, α-synuclein, and prion. The imaging agent of the present invention is particularly suitable for imaging amyloid plaques formed by β-amyloid. The amyloid plaque imaging agent of the present invention can be prepared and used in the same manner as the composition for diagnosing amyloid-related diseases.
本発明はまた、
a.放射性核種で標識されている本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩の検出可能な量を哺乳動物に導入する工程;
b.該化合物がアミロイドプラークに結合するのに十分な時間放置する工程;および
c.1つ以上のアミロイドプラークに結合した化合物を検出する工程、
を包含する、アミロイドプラークを画像化するための方法に関する。The present invention also provides
a. Introducing a detectable amount of a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof labeled with a radionuclide into a mammal;
b. Leaving the compound for a time sufficient to bind to the amyloid plaque; and c. Detecting a compound bound to one or more amyloid plaques;
A method for imaging amyloid plaques.
「哺乳動物」としては、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、サルが挙げられるが、これらに限定されない。好ましくは、「哺乳動物」はヒトである。 “Mammal” includes, but is not limited to, humans, mice, rats, rabbits, dogs, monkeys. Preferably, the “mammal” is a human.
放射性核種による標識および標識化合物の検出は、前述のとおり行えばよい。すなわち、検出にはSPECTおよびPETを利用することができ、放射性核種は検出方法に応じて選択すればよい。また、哺乳動物への導入も、アミロイド関連疾患診断用組成物について記載のとおり行えばよい。 The labeling with the radionuclide and the detection of the labeled compound may be performed as described above. That is, SPECT and PET can be used for detection, and the radionuclide may be selected according to the detection method. Moreover, introduction into mammals may be performed as described for the composition for diagnosing amyloid-related diseases.
「放射性核種で標識されている本発明の化合物またはその薬学的に受容可能な塩の検出可能な量」および「該化合物がアミロイドプラークに結合するのに十分な時間」は、対象とする哺乳動物、並びに使用する化合物および検出方法に応じて当業者が適宜決定可能である。例えば、対象とする哺乳動物に様々な濃度の標識化合物を導入し、導入後の様々な時点でこの標識化合物を選択した検出方法で検出することによって、これらの量および時間を決定することができる。 “A detectable amount of a compound of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof labeled with a radionuclide” and “a sufficient amount of time for the compound to bind to amyloid plaques” And a person skilled in the art can appropriately determine depending on the compound used and the detection method. For example, the amount and time of these can be determined by introducing various concentrations of the labeled compound into the mammal of interest, and detecting this labeled compound with the selected detection method at various times after introduction. .
以下、実施例により本発明をさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further, this invention is not limited to these.
[実施例1]
FPYBF-1
FPYBF-1
1.FPYBF-1の合成
FPYBF-1の合成をスキーム1に示す。
スキーム1
1. Synthesis of FPYBF-1
The synthesis of FPYBF-1 is shown in
5-(5-メトキシベンゾフラン-2-イル)ピリジン-2-アミン (1)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.85 (s, 3H), 4.67(s, 2H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J =2.4 Hz). MS: m/z 241 (M++H).5- (5-Methoxybenzofuran-2-yl) pyridin-2-amine (1)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 3.85 (s, 3H), 4.67 (s, 2H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H , J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m / z 241 (M + + H).
5-(5-メトキシベンゾフラン-2-イル)-N, N-ジメチルピリジン-2-アミン (2)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.15 (s, 6H), 3.85 (s, 3H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m/z 269 (M++H).5- (5-Methoxybenzofuran-2-yl) -N, N-dimethylpyridin-2-amine (2)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 3.15 (s, 6H), 3.85 (s, 3H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H , J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m / z 269 (M + + H).
2-(6-(ジメチルアミノ)ピリジン-3-イル)ベンゾフラン-5-オール (3)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.15 (s, 6H), 4.89 (s, 1H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m/z 255 (M++H).2- (6- (Dimethylamino) pyridin-3-yl) benzofuran-5-ol (3)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 3.15 (s, 6H), 4.89 (s, 1H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H , J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m / z 255 (M + + H).
2-(2-(2-(2-(6-(ジメチルアミノ)ピリジン-3-イル)ベンゾフラン-5-イルオキシ)エトキシ)エトキシ)エタノール (4)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.15 (s, 6H), 3.60-3.64 (m, 2H), 3.69-3.72 (m, 6H), 3.85-3.89 (m, 2H), 4.16-4.19 (m, 2H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m/z 387 (M++H).2- (2- (2- (2- (6- (dimethylamino) pyridin-3-yl) benzofuran-5-yloxy) ethoxy) ethoxy) ethanol (4)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 3.15 (s, 6H), 3.60-3.64 (m, 2H), 3.69-3.72 (m, 6H), 3.85-3.89 (m, 2H), 4.16-4.19 ( m, 2H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m / z 387 (M + + H).
5-(5-(2-(2-(2-フルオロエトキシ)エトキシ)エトキシ)ベンゾフラン-2-イル)-N,N-ジメチルピリジン-2-アミン (5)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.15 (s, 6H), 3.69-3.72 (m, 6H), 3.85-3.89 (m, 2H), 4.16-4.20 (m, 2H), 4.49-4.52 (m, 1H), 4.60-4.63 (m, 1H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). HRMS (EI): m/z calcd for C21H25FN2O4 (M+) 388.1798, found 387.1790.5- (5- (2- (2- (2-Fluoroethoxy) ethoxy) ethoxy) benzofuran-2-yl) -N, N-dimethylpyridin-2-amine (5)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 3.15 (s, 6H), 3.69-3.72 (m, 6H), 3.85-3.89 (m, 2H), 4.16-4.20 (m, 2H), 4.49-4.52 ( m, 1H), 4.60-4.63 (m, 1H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz ), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H HRJ (EI): m / z calcd for C 21 H 25 FN 2 O 4 (M + ) 388.1798, found 387.1790.
2-(2-(2-(2-(6-(ジメチルアミノ)ピリジン-3-イル)ベンゾフラン-5-イルオキシ)エトキシ)エトキシ)エチル 4-メチルベンゼンスルホナート (6)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.41(s, 3H), 3.15(s, 6H), 3.71 (m, 6H), 3.85-3.89 (m, 2H), 4.16-4.20 (m, 4H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). HRMS (EI): m/z calcd for C28H32N2O7S (M+) 540.1930, found 540.1927.2- (2- (2- (2- (2- (6- (dimethylamino) pyridin-3-yl) benzofuran-5-yloxy) ethoxy) ethoxy) ethyl 4-methylbenzenesulfonate (6)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 2.41 (s, 3H), 3.15 (s, 6H), 3.71 (m, 6H), 3.85-3.89 (m, 2H), 4.16-4.20 (m, 4H) , 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz) , 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz) .HRMS (EI): m / z calcd for C 28 H 32 N 2 O 7 S (M + ) 540.1930, found 540.1927.
2.インビトロにおけるAβ凝集体に対する結合試験
FPYBF-1のAβ凝集体に対する親和性を評価するため、常法にしたがい(非特許文献29,30)、[125I]IMPY をリガンドとして用いて溶液中で結合試験を行った。Aβ(1-42)は、株式会社ペプチド研究所 (大阪, 日本)から購入した。このペプチドを、10 mM リン酸ナトリウムおよび1 mM EDTAを含む緩衝液(pH 7.4)に穏やかに溶解することにより凝集させた。この溶液を、37℃で42時間穏やかに持続的に振盪しながらインキュベートした。50 μLのFPYBF-1 (0.008 pM-400 μM (10% EtOH中))、50 μLの0.02 nM [125I]IMPY、50 μLのAβ(1-42)凝集体、および850 μLの10% EtOHを含む混合物を室温で3時間インキュベートした。次いで、この混合物をWhatman GF/B 濾紙によりBrandel M-24 cell harvesterを用いて濾過し、結合した125Iリガンドを含む濾紙の放射能をγカウンターにより測定した。50%阻害濃度 (IC50)の値を、3つの独立した実験の置換曲線からGraphPad Prism 5.0を用いて決定し、阻害定数 (Ki)の値をCheng-Prusoff 式: Ki = IC50/(1 + [L]/Kd)(式中、[L]は試験に使用した[125I] IMPYの濃度であり、KdはIMPY (4.2 nM)の解離定数である)により計算した。FPYBF-1は[125I]IMPYの結合を用量依存的にKi 値0.9 nMにて阻害した(図3)。これは、FPYBF-1がAβ(1-42)凝集体に対して優れた親和性を有することを示唆する。2. In vitro binding test for Aβ aggregates
In order to evaluate the affinity of FPYBF-1 for Aβ aggregates, a binding test was performed in solution using [ 125 I] IMPY as a ligand according to a conventional method (Non-patent Documents 29 and 30). Aβ (1-42) was purchased from Peptide Institute, Inc. (Osaka, Japan). The peptide was aggregated by gentle dissolution in a buffer (pH 7.4) containing 10 mM sodium phosphate and 1 mM EDTA. This solution was incubated at 37 ° C. for 42 hours with gentle and continuous shaking. 50 μL FPYBF-1 (0.008 pM-400 μM in 10% EtOH), 50 μL 0.02 nM [ 125 I] IMPY, 50 μL Aβ (1-42) aggregates, and 850 μL 10% EtOH The mixture containing was incubated at room temperature for 3 hours. The mixture was then filtered through Whatman GF / B filter paper using a Brandel M-24 cell harvester and the radioactivity of the filter paper containing bound 125 I ligand was measured with a γ counter. The value of 50% inhibitory concentration (IC 50 ) was determined using GraphPad Prism 5.0 from the displacement curves of three independent experiments and the value of the inhibition constant (K i ) was determined using the Cheng-Prusoff equation: K i = IC 50 / (1 + [L] / K d ) where [L] is the concentration of [ 125 I] IMPY used in the test and K d is the dissociation constant of IMPY (4.2 nM). FPYBF-1 inhibited [ 125 I] IMPY binding in a dose-dependent manner with a K i value of 0.9 nM (FIG. 3). This suggests that FPYBF-1 has excellent affinity for Aβ (1-42) aggregates.
FPYBF-1のKi 値は、既報のフェニルベンゾフラン誘導体のKi 値 (Ki = 2.0 nM) (非特許文献21)と同様であり、ピリジルベンゾフラン誘導体のAβ凝集体に対する親和性はフェニル基をピリジル基で置換しても依然として高かった。この結果はまた、ベンゾフラン骨格が高度の構造改変に耐えうることを示す(非特許文献21,22,31)。K i values of FPYBF-1 is similar to the K i values reported previously phenyl benzofuran derivative (K i = 2.0 nM) (Non-Patent Document 21), the affinity phenyl against Aβ aggregates pyridyl benzofuran derivatives Even when substituted with a pyridyl group, it was still high. This result also shows that the benzofuran skeleton can withstand a high degree of structural modification (
3.18F標識FPYBF-1の製造
[18F]フッ化物は、サイクロトロン (CYPRIS HM-18、住友重機械工業株式会社、東京) により18O (p,n)18F 反応を介して製造し、18Oに富む水における水溶液としてSep-Pak Light QMA カートリッジ (Waters)に通した。このカートリッジをN2により乾燥させ、18F 活性を1.0 mL のKryptofix 222/K2CO3 溶液 (9.5 mgのKryptofix 222と1.7 mgのK2CO3とをアセトニトリル/水 (96/ 4)中に含む)により溶出した。溶媒を120℃でアルゴンガス流下除去した。残渣を、1 mLの無水アセトニトリルを用いて共沸により120℃において窒素ガス流下で2回乾燥させた。トシル前駆体6 (1.0 mg)(アセトニトリル (200 μL)中)の溶液を、18F 活性を含む反応容器に添加した。この混合物を120℃で10分間加熱した。水 (5 mL) を添加し、混合物を調整済みのOasis HLBカートリッジ (3 cm3) (Waters)に通した。このカートリッジを10 mLの水で洗浄し、標識化合物を2 mLのアセトニトリルで溶出した。溶出された化合物を予備的HPLC [YMC-Pack Pro C18 カラム (20 mm× 150 mm), アセトニトリル/水 (60/40), 流速 3.0mL/分]により精製した。所望の18F標識産物の保持時間は10.0 分である。放射化学的純度および特異的活性を、分析用HPLC [YMC-Pack Pro C18 カラム (4.6 mm × 150 mm), アセトニトリル/水 (60/40), 流速 1.0 mL/分]で測定し、[18F]FPYBF-1を放射化学的純度>99%、特異的活性242 GBq/μmolで得た。特異的活性は、精製18F標識化合物のUVピーク強度を既知の濃度の参照用非放射性化合物と比較することにより評価した。[ 18 F] Fluoride is produced by Cyclotron (CYPRIS HM-18, Sumitomo Heavy Industries, Ltd., Tokyo) via the 18 O (p, n) 18 F reaction, and as an aqueous solution in water rich in 18 O. -Passed through Pak Light QMA cartridge (Waters). The cartridge was dried with N 2 and 18 F activity was adjusted to 1.0 mL Kryptofix 222 / K 2 CO 3 solution (9.5 mg Kryptofix 222 and 1.7 mg K 2 CO 3 in acetonitrile / water (96/4). Elution). The solvent was removed at 120 ° C. under a stream of argon gas. The residue was dried twice under nitrogen gas flow at 120 ° C. azeotropically with 1 mL anhydrous acetonitrile. A solution of tosyl precursor 6 (1.0 mg) in acetonitrile (200 μL) was added to the reaction vessel containing 18 F activity. The mixture was heated at 120 ° C. for 10 minutes. Water (5 mL) was added and the mixture was passed through a conditioned Oasis HLB cartridge (3 cm 3 ) (Waters). The cartridge was washed with 10 mL water and the labeled compound was eluted with 2 mL acetonitrile. The eluted compound was purified by preparative HPLC [YMC-Pack Pro C18 column (20 mm × 150 mm), acetonitrile / water (60/40), flow rate 3.0 mL / min]. The retention time of the desired 18 F labeled product is 10.0 minutes. The radiochemical purity and specific activity, analytical HPLC [YMC-Pack Pro C18 column (4.6 mm × 0.99 mm), acetonitrile / water (60/40), flow rate 1.0 mL / min] measured by, [18 F FPYBF-1 was obtained with a radiochemical purity> 99% and a specific activity of 242 GBq / μmol. Specific activity was assessed by comparing the UV peak intensity of the purified 18 F labeled compound with a known concentration of a reference non-radioactive compound.
4.正常マウスにおける生体内分布
脳における[18F]FPYBF-1の取り込みを評価するため、正常マウスにおいて生体内分布実験を行った。動物実験は、施設ガイドラインに沿って実施し、京都大学動物実験委員会に許可された。イソフルレンでの麻酔下、ddY マウス (22-25 g, 雄) の尾静脈に直接、100 μLの[18F]FPYBF-1 (185-370 kBq)含有0.1% BSA 溶液を注射した。これらマウス(各時点につきn = 5)を、注射後2、10、30、および60分の時点で殺した。対象の臓器を取り出し、重量を計測し、放射能を自動ガンマカウンター (COBRAII, Packard)により測定した。サンプルの放射線量(%)/g は、サンプルのカウントを希釈した初期放射線量と比較することで計算した。結果を表1に示す。
[18F]FPYBF-1は、注射2分後にPETに十分な高い取り込み (5.16%ID/g) を示し、脳における放射能は時間とともに消失した (注射後60分の時点で2.44%ID/g)。正常な脳組織は[18F]FPYBF-1を捕捉するβ−アミロイドプラークを有さないことから、放射能は非常に迅速に排出されるべきである。それゆえ、正常な脳からの[18F]FPYBF-1の迅速なクリアランスは、FPYBF-1がAD脳におけるβ−アミロイドプラークの検出に適することを示している。[ 18 F] FPYBF-1 showed sufficiently high uptake (5.16% ID / g) in
インビボで適切な動態を有するリガンドを選択する一つの方法は、排出率の比較のため脳 2 分/脳 60 分 比(brain2 min/brain60 min ratio)を指標として使用することである(非特許文献32)。[18F]FPYBF-1の脳 2 分/脳 60 分 比 (2.1)は、[18F]BAY94-9172 (4.8) (非特許文献14)や[18F]AV-45 (3.8) (非特許文献16)よりも低いが、既報の[18F]FPHBF-1の値 (1.0) (非特許文献21)と比較して改善されていた。この[18F]FPYBF-1の好ましいインビボの薬物動態は、[18F]FPHBF-1のフェニル基をピリジル基に変更することにより達成された。HPLC解析において、[18F]FPYBF-1と[18F]FPHBF-1の保持時間はそれぞれ14.8分と36.5分であり、これは [18F]FPYBF-1の親油性が[18F]FPHBF-1よりも低いことを示唆する。親油性は化合物の脳内への取り込みに影響する因子の一つに過ぎないが(非特許文献4)、脳における[18F]FPYBF-1の好ましい薬物動態を説明しうる。60分の時点での骨への取り込みは減少しており (1.42%ID/g)、これはインビボでの脱フッ素化が殆どなく、画像化への干渉が比較的小さいと期待されることを示唆する。One way of selecting ligands having in vivo an appropriate kinetics is to use 2 min / brain 60 min ratios brain for the comparison of the discharge rate (brain 2 min / brain 60 min ratio) as an indicator (Non Patent Document 32). The ratio of [ 18 F] FPYBF-1 to the brain 2 min / 60 min brain (2.1) is [ 18 F] BAY94-9172 (4.8) (Non-Patent Document 14) and [ 18 F] AV-45 (3.8) (Non- Although lower than that of Patent Document 16), it was improved compared with the previously reported value of [ 18 F] FPHBF-1 (1.0) (Non-Patent Document 21). The [18 F] Preferred in vivo pharmacokinetic FPYBF-1 was achieved by changing the pyridyl group a [18 F] FPHBF-1 of the phenyl group. In HPLC analysis, the retention times of [ 18 F] FPYBF-1 and [ 18 F] FPHBF-1 are 14.8 minutes and 36.5 minutes, respectively, indicating that the lipophilicity of [ 18 F] FPYBF-1 is [ 18 F] FPHBF-1 Suggests lower than -1. Lipophilicity is only one of the factors affecting the brain's uptake of compounds (Non-patent Document 4), but may explain the preferable pharmacokinetics of [ 18 F] FPYBF-1 in the brain. Bone uptake at 60 minutes has decreased (1.42% ID / g), indicating that there is little in vivo defluorination and relatively little interference with imaging. Suggest.
5.インビトロオートラジオグラフィー
次に、ADおよび対照の被験者由来の脳組織切片を用いて、[18F]FPYBF-1のβ-アミロイドプラークへの特異的結合を確認した。AD患者および対照被験者の死後脳切片 (5 μm, 側頭葉)を[18F]FPYBF-1 (444 kBq/50 μL) と1時間室温でインキュベートした。次いで、切片を飽和Li2CO3 (40% EtOH中)に浸漬し(2分間の洗浄を2回)、40% EtOHで洗浄し (2分間の洗浄を1回)、そして水で30秒すすいだ。乾燥後、18F標識切片をBAS 画像化プレート (富士写真フィルム株式会社、東京、日本)に一晩暴露した。オートラジオグラフィーの画像をBAS5000 スキャナーシステム (富士写真フィルム株式会社)により得た。結果を図4に示す。5. In vitro autoradiography Next, specific binding of [ 18 F] FPYBF-1 to β-amyloid plaques was confirmed using brain tissue sections from AD and control subjects. Postmortem brain sections (5 μm, temporal lobe) of AD patients and control subjects were incubated with [ 18 F] FPYBF-1 (444 kBq / 50 μL) for 1 hour at room temperature. The sections are then immersed in saturated Li 2 CO 3 (in 40% EtOH) (2 x 2 minute washes), washed with 40% EtOH (1 x 2 min washes), and rinsed with water for 30 seconds. It is. After drying, 18 F-labeled sections were exposed to BAS imaging plates (Fuji Photo Film Co., Tokyo, Japan) overnight. Autoradiographic images were obtained with a BAS5000 scanner system (Fuji Photo Film Co., Ltd.). The results are shown in FIG.
オートラジオグラフィーの画像から、ADの脳ではβ−アミロイドプラークが広範囲にわたり標識される(図4A)が、対照の脳では標識されない(図4B)ことがわかった。この結果は、[18F]FPYBF-1が、合成のAβ凝集体に加えて、β−アミロイドプラークにも親和性を示すことを示唆する。Autoradiographic images showed that β-amyloid plaques were extensively labeled in the AD brain (FIG. 4A) but not in the control brain (FIG. 4B). This result suggests that [ 18 F] FPYBF-1 exhibits affinity for β-amyloid plaques in addition to synthetic Aβ aggregates.
6.[18F]FPYBF-1によるインビボプラーク標識
生体脳組織におけるβ−アミロイドプラークの画像化のためのプローブとしての[18F]FPYBF-1の可能性をさらに明らかにするため、Tg2576マウス (36月齢、雄)と年齢適合対照としての野生型マウス (36月齢、雄)とにおいて、エクスビボでオートラジオグラフィーを行った。Tg2576トランスジェニックマウスは、帯状皮質、歯状回、海馬CA1野に11-13月齢までに顕著なAβ沈着を示し(非特許文献33)、β−アミロイドプラークの特異的結合を評価するためにインビトロおよびインビボの実験で頻繁に使用されている(非特許文献28,34,35)。Tg2576トランスジェニックマウス (36月齢, 雄)と野生型マウス (36月齢, 雄) とをそれぞれアルツハイマー病モデルと年齢適合対照として使用した。1% イソフルレンで麻酔後、11.1 MBqの[18F]FPYBF-1 (200 μLの0.1% BSA溶液中)を尾静脈から注射した。これら動物を30分間回復させ、次いで断頭により殺した。脳を直ちに取り出し、ドライアイス/ヘキサン浴中で凍結した。20 μmの切片を切断し、BAS画像化プレート (富士写真フィルム株式会社、東京、日本) に一晩暴露した。このようにしてエクスビボのフィルムオートラジオグラムを得た。オートラジオグラフィー実験の後、同じ切片をチオフラビン-Sで染色し、β−アミロイドプラークの存在を確認した。チオフラビン-Sの染色のため、切片を0.125% チオフラビン-S溶液(50% EtOH 含有)に3分間浸漬し、50% EtOH中で洗浄した。乾燥後、次いでB-2A フィルターセット(励起, 450-490 nm; ジアクロニックミラー, 505 nm; ロングパスフィルター, 520 nm)を備える顕微鏡 (Nikon, Eclipse 80i) により切片を調べた。結果を図5に示す。6). [18 F] To further clarify the [18 F] potential FPYBF-1 as probes for imaging of β- amyloid plaques in vivo plaque labeling biological brain tissue by FPYBF-1, Tg2576 mice (36 months of age , Male) and wild type mice (36 months old, male) as age-matched controls were ex vivo autoradiographed. Tg2576 transgenic mice showed significant Aβ deposition in the cingulate cortex, dentate gyrus, hippocampal CA1 area by 11-13 months of age (Non-patent Document 33) and in vitro to evaluate the specific binding of β-amyloid plaques And frequently used in in vivo experiments (Non-Patent Documents 28, 34, 35). Tg2576 transgenic mice (36 months old, male) and wild type mice (36 months old, male) were used as Alzheimer's disease model and age-matched controls, respectively. After anesthesia with 1% isoflurane, 11.1 MBq [ 18 F] FPYBF-1 (in 200 μL of 0.1% BSA solution) was injected via the tail vein. The animals were allowed to recover for 30 minutes and then killed by decapitation. The brain was immediately removed and frozen in a dry ice / hexane bath. 20 μm sections were cut and exposed overnight to BAS imaging plates (Fuji Photo Film Co., Tokyo, Japan). In this way, an ex vivo film autoradiogram was obtained. After autoradiography experiments, the same sections were stained with thioflavin-S to confirm the presence of β-amyloid plaques. For staining of thioflavin-S, sections were immersed in 0.125% thioflavin-S solution (containing 50% EtOH) for 3 minutes and washed in 50% EtOH. After drying, the sections were then examined with a microscope (Nikon, Eclipse 80i) equipped with a B-2A filter set (excitation, 450-490 nm; diachronic mirror, 505 nm; long pass filter, 520 nm). The results are shown in FIG.
オートラジオグラフィーにより、Tg2576マウスの脳においてβ−アミロイドプラークの鮮明な標識が見られた(図5A)。野性型マウスの脳では、かかる標識は見られなかった(図5B)。β−アミロイドプラークの染色に一般的に使用される病理学的色素であるチオフラビン-Sにより切片を共染色することによって、β−アミロイドプラークが存在することを確認した(図5C)。この結果はインビトロの結果と一致し、[18F]FPYBF-1が脳内のβ−アミロイドに対する結合において非常に選択的であることを示す。By autoradiography, a clear labeling of β-amyloid plaques was seen in the brain of Tg2576 mice (FIG. 5A). Such labeling was not observed in the brains of wild type mice (FIG. 5B). The presence of β-amyloid plaques was confirmed by co-staining the sections with thioflavin-S, a pathological dye commonly used for staining β-amyloid plaques (FIG. 5C). This result is consistent with the in vitro results and indicates that [ 18 F] FPYBF-1 is very selective in binding to β-amyloid in the brain.
以上のとおり、FPYBF-1は、インビトロのAβ凝集体および剖検AD脳の切片におけるβ−アミロイドプラークに高い親和性を示した。また、FPYBF-1は脳における良好な取り込み (注射後2分の時点で5.16%ID/g)を示し、かつトランスジェニックマウスにおいてエクスビボでβ−アミロイドプラークに対して優れた結合を示した。 As described above, FPYBF-1 showed high affinity for in vitro Aβ aggregates and β-amyloid plaques in sections of autopsy AD brain. FPYBF-1 also showed good uptake in the brain (5.16% ID / g at 2 minutes after injection) and excellent binding to β-amyloid plaques ex vivo in transgenic mice.
[実施例2]
FPYBF-2
FPYBF-2
1.FPYBF-2の合成
FPYBF-2の合成をスキーム2に示す。
スキーム2
a試薬: (a) Pd(Ph3P)4, 2 M Na2CO3(水溶液)/ジオキサン; (b) 1)NaOMe, MeOH, (CHO)n; 2) NaBH4; (c) BBr3, CH2Cl2;
(d)
, K2CO3, DMF; (e) TBDMSCI, イミダゾール, DCM; (f) TBAF(1M), THF; (g) (BOC)2O, THF; (h) MsCI, Et3N, DCM; (i) TBAF(1M), THF; (j) TFA, DCM。
1. Synthesis of FPYBF-2
The synthesis of FPYBF-2 is shown in
a Reagent: (a) Pd (Ph 3 P) 4 , 2 M Na 2 CO 3 (aq) / dioxane; (b) 1) NaOMe, MeOH, (CHO) n ; 2) NaBH 4 ; (c) BBr 3 , CH 2 Cl 2 ;
(d)
, K 2 CO 3 , DMF; (e) TBDMSCI, imidazole, DCM; (f) TBAF (1M), THF; (g) (BOC) 2 O, THF; (h) MsCI, Et 3 N, DCM; ( i) TBAF (1M), THF; (j) TFA, DCM.
5-(5-メトキシベンゾフラン-2-イル)ピリジン-2-アミン (1)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) : δ 3.85 (s, 3H), 4.67(s, 2H), 6.59 (d, 1H, J=8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (d, d, 1H, J1=8.8 Hz, J2=2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J=2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J=8.8 Hz), 7.86 (d, d, 1H, J1=8.8 Hz, J2=2.4 Hz), 8.67(d, 1H, J=2.4 Hz). MS: m/z 241 (M++H).5- (5-Methoxybenzofuran-2-yl) pyridin-2-amine (1)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 3.85 (s, 3H), 4.67 (s, 2H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (d, d , 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (d, d, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m / z 241 (M + + H).
5-(5-メトキシベンゾフラン-2-イル)-N-メチルピリジン-2-アミン (2)
1H NMR (400 MHz, CDCl3) : δ 2.98 (d, 3H, J =5.2 Hz), 3.84 (s, 3H), 4.78 (s, 1H), 6.47 (d, 1H, J =8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.84 (dd, 1H, J1 =8.8 Hz, J2 =4.4 Hz), 7.00 (d, 1H, J =2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J =8.4 Hz), 7.87 (dd, 1H, J1 =8.8 Hz, J2 =2.4 Hz), 8.59 (d, 1H, J =2.8 Hz). MS: m/z 255 (M++H).5- (5-Methoxybenzofuran-2-yl) -N-methylpyridin-2-amine (2)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 2.98 (d, 3H, J = 5.2 Hz), 3.84 (s, 3H), 4.78 (s, 1H), 6.47 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.84 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 4.4 Hz), 7.00 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.87 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.59 (d, 1H, J = 2.8 Hz). MS: m / z 255 (M + + H).
2-(6-(メチルアミノ)ピリジン-3-イル)ベンゾフラン-5-オール (3)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.98 (d, 3H, J =5.2 Hz), 4.78 (s, 1H), 6.47 (d, 1H, J =8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.84 (dd, 1H, J1 =8.8 Hz, J2 =4.4 Hz), 7.00 (d, 1H, J =2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J =8.4 Hz), 7.87 (dd, 1H, J1 =8.8 Hz, J2 =2.4 Hz), 8.59 (d, 1H, J =2.8 Hz). MS: m/z 241 (M++H).2- (6- (Methylamino) pyridin-3-yl) benzofuran-5-ol (3)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 2.98 (d, 3H, J = 5.2 Hz), 4.78 (s, 1H), 6.47 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.84 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 4.4 Hz), 7.00 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.87 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.59 (d, 1H, J = 2.8 Hz). MS: m / z 241 (M + + H).
2-(2-(6-(メチルアミノ)ピリジン-3-イル)ベンゾフラン-5-イルオキシ)エタノール(4)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.98 (d, 3H, J =5.2 Hz), 3.62 (d, 2H, J =4.4 Hz), 3.70-3.74 (m, 6H), 3.84 (s, 2H), 4.11 (s, 2H), 5.18 (s, 1H), 6.47 (d, 1H, J =8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.84 (dd, 1H, J1 =8.8 Hz, J2 =4.4 Hz), 7.00 (d, 1H, J =2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J =8.4 Hz), 7.87 (dd, 1H, J1 =8.8 Hz, J2 =2.4 Hz), 8.59 (d, 1H, J =2.8 Hz). MS: m/z 373 (M++H).2- (2- (6- (methylamino) pyridin-3-yl) benzofuran-5-yloxy) ethanol (4)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 2.98 (d, 3H, J = 5.2 Hz), 3.62 (d, 2H, J = 4.4 Hz), 3.70-3.74 (m, 6H), 3.84 (s, 2H ), 4.11 (s, 2H), 5.18 (s, 1H), 6.47 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.84 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 4.4 Hz), 7.00 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.87 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.59 (d , 1H, J = 2.8 Hz) .MS: m / z 373 (M + + H).
5-(5-(2-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)エトキシ)ベンゾフラン-2-イル)-N-メチルピリジン-2-アミン (5)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 0.08 (s, 6H), 0.90 (s, 9H), 2.98 (d, 3H, J =5.2 Hz), 3.62 (d, 2H, J =4.4 Hz), 3.70-3.74 (m, 6H), 3.84 (s, 2H), 4.11 (s, 2H), 5.18 (s, 1H), 6.47 (d, 1H, J =8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.84 (dd, 1H, J1 =8.8 Hz, J2 =4.4 Hz), 7.00 (d, 1H, J =2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J =8.4 Hz), 7.87 (dd, 1H, J1 =8.8 Hz, J2 =2.4 Hz), 8.59 (d, 1H, J =2.8 Hz). MS: m/z 487 (M++H).5- (5- (2- (tert-butyldimethylsilyloxy) ethoxy) benzofuran-2-yl) -N-methylpyridin-2-amine (5)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 0.08 (s, 6H), 0.90 (s, 9H), 2.98 (d, 3H, J = 5.2 Hz), 3.62 (d, 2H, J = 4.4 Hz), 3.70-3.74 (m, 6H), 3.84 (s, 2H), 4.11 (s, 2H), 5.18 (s, 1H), 6.47 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.84 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 4.4 Hz), 7.00 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.4 Hz), 7.87 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.59 (d, 1H, J = 2.8 Hz). MS: m / z 487 (M + + H).
tert-ブチル5-(5-(2-(2-(2-(tert-ブチルジメチルシリルオキシ)エトキシ)エトキシ)エトキシ)ベンゾフラン-2-イル)ピリジン-2-イル(メチル)カルバメート (6)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 0.03 (s, 6H), 0.86 (s, 9H), 1.50 (s, 9H), 3.37 (s, 3H), 3.62-3.68 (m, 6H), 3.82-3.88 (m, 2H), 4.09-4.12 (m, 2H), 6.86 (d, 1H, J = 4.4 Hz), 6.88 (s, 1H), 6.98 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.33 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.76 (d, 1H, J = 10Hz), 7.95 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.75 (d, 1H, J = 1.6 Hz). MS: m/z 587 (M++H).tert-butyl 5- (5- (2- (2- (2- (tert-butyldimethylsilyloxy) ethoxy) ethoxy) ethoxy) benzofuran-2-yl) pyridin-2-yl (methyl) carbamate (6)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 0.03 (s, 6H), 0.86 (s, 9H), 1.50 (s, 9H), 3.37 (s, 3H), 3.62-3.68 (m, 6H), 3.82 -3.88 (m, 2H), 4.09-4.12 (m, 2H), 6.86 (d, 1H, J = 4.4 Hz), 6.88 (s, 1H), 6.98 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.33 ( d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.76 (d, 1H, J = 10 Hz), 7.95 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.75 (d, 1H, J = 1.6 Hz ) MS:. m / z 587 (M + + H).
tert-ブチル5-(5-(2-(2-(2-ヒドロキシエトキシ)エトキシ)エトキシ)ベンゾフラン-2-イル)ピリジン-2-イル(メチル)カルバメート (7)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.57 (s, 9H), 3.45 (s, 3H), 3.62-3.65 (m, 2H), 3.70-3.78 (m, 6H), 3.83-3.93 (m, 2H), 4.07-4.18 (m, 2H), 6.87(d, 1H, J = 6.8 Hz), 6.94 (s, 1H), 7.06 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.40 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 7.82 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 8.02 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2 Hz), 8.83 (d, 1H, J = 2.8 Hz). MS: m/z 473 (M++H).tert-Butyl 5- (5- (2- (2- (2-hydroxyethoxy) ethoxy) ethoxy) benzofuran-2-yl) pyridin-2-yl (methyl) carbamate (7)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 1.57 (s, 9H), 3.45 (s, 3H), 3.62-3.65 (m, 2H), 3.70-3.78 (m, 6H), 3.83-3.93 (m, 2H), 4.07-4.18 (m, 2H), 6.87 (d, 1H, J = 6.8 Hz), 6.94 (s, 1H), 7.06 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.40 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 7.82 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 8.02 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2 Hz), 8.83 (d, 1H, J = 2.8 Hz). MS: m / z 473 (M + + H).
2-(2-(2-(2-(6-(tert-ブトキシカルボニル)ピリジン-3-イル)ベンゾフラン-5-イルオキシ)エトキシ)エトキシ)エチルメタンスルホネート (8)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.54 (s, 9H), 3.06 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.69-3.72 (m, 6H), 3.79-3.88 (m, 2H), 4.11-4.17 (m, 2H), 4.37-4.39 (m, 2H), 6.90 (dd, 1H, J1 = 9.2 Hz, J2 = 2.8 Hz), 6.95 (s, 1H), 7.05 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.40 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.83 (d, 1H, J = 8.0Hz), 8.02 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.83 (d, 1H, J = 0.8 Hz). HRMS (EI: m/z calcd for C26H34N2O9S (M+) 550.1985, found 550.1989.2- (2- (2- (2- (6- (tert-butoxycarbonyl) pyridin-3-yl) benzofuran-5-yloxy) ethoxy) ethoxy) ethyl methanesulfonate (8)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 1.54 (s, 9H), 3.06 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 3.69-3.72 (m, 6H), 3.79-3.88 (m, 2H) , 4.11-4.17 (m, 2H), 4.37-4.39 (m, 2H), 6.90 (dd, 1H, J 1 = 9.2 Hz, J 2 = 2.8 Hz), 6.95 (s, 1H), 7.05 (d, 1H , J = 2.4 Hz), 7.40 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.83 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 8.02 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.83 (d, 1H, J = 0.8 Hz) .HRMS (EI: m / z calcd for C 26 H 34 N 2 O 9 S (M + ) 550.1985, found 550.1989.
tert-ブチル5-(5-(2-(2-(2-フルオロエトキシ)エトキシ)エトキシ)ベンゾフラン-2-イル)ピリジン-2-イル(メチル)カルバメート (9)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 1.57 (s, 9H), 3.44 (s, 3H), 3.71-3.83 (m, 6H), 3.88-3.91 (m, 2H), 4.22-4.51 (m, 1H), 4.61-4.63 (m, 1H), 6.91 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 6.94 (s, 1H), 7.05 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 7.38 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.81 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 8.02 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.82 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m/z 475 (M++H).tert-Butyl 5- (5- (2- (2- (2-fluoroethoxy) ethoxy) ethoxy) benzofuran-2-yl) pyridin-2-yl (methyl) carbamate (9)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 1.57 (s, 9H), 3.44 (s, 3H), 3.71-3.83 (m, 6H), 3.88-3.91 (m, 2H), 4.22-4.51 (m, 1H), 4.61-4.63 (m, 1H), 6.91 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 6.94 (s, 1H), 7.05 (d, 1H, J = 6.0 Hz), 7.38 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.81 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 8.02 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.82 (d, 1H, J = 2.4 Hz) .MS: m / z 475 (M + + H).
5-(5-(2-(2-(2-フルオロエトキシ)エトキシ)エトキシ)ベンゾフラン-2-イル)-N-メチルピリジン-2-アミン (10)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 2.98 (d, 3H, J = 5.2 Hz), 3.71-3.80 (m, 6H), 3.79-3.88 (m, 2H), 4.11- 4.18 (m, 2H), 4.49-4.51 (m, 1H), 4.61-4.63 (m, 1H), 4.80 (s, 1H), 6.45 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.75 (s, 1H), 6.85 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 7.01 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 7.86 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.59 (d, 1H, J = 2 Hz). HRMS (EI: m/z calcd for C20H23FN2O4 (M+) 374.1642, found 374.1650.5- (5- (2- (2- (2-fluoroethoxy) ethoxy) ethoxy) benzofuran-2-yl) -N-methylpyridin-2-amine (10)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 2.98 (d, 3H, J = 5.2 Hz), 3.71-3.80 (m, 6H), 3.79-3.88 (m, 2H), 4.11- 4.18 (m, 2H) , 4.49-4.51 (m, 1H), 4.61-4.63 (m, 1H), 4.80 (s, 1H), 6.45 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.75 (s, 1H), 6.85 (dd, 1H , J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 7.01 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 7.86 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.59 (d, 1H, J = 2 Hz). HRMS (EI: m / z calcd for C 20 H 23 FN 2 O 4 (M + ) 374.1642, found 374.1650.
2.インビトロにおけるAβ凝集体に対する結合試験
実施例1に記載ように、FPYBF-2のAβ凝集体に対する親和性を評価した。結果を図6に示す。FPYBY-2の阻害定数は、Ki=2.41±0.11 nMであった。2. In vitro binding test for Aβ aggregates As described in Example 1, the affinity of FPYBF-2 for Aβ aggregates was evaluated. The results are shown in FIG. The inhibition constant of FPYBY-2 was Ki = 2.41 ± 0.11 nM.
3.18F標識FPYBF-2の製造
[18F]フッ化物は、サイクロトロン (CYPRIS HM-18、住友重機械工業株式会社、東京) により18O (p,n)18F 反応を介して製造し、18Oに富む水における水溶液としてSep-Pak Light QMA カートリッジ (Waters)に通した。このカートリッジをN2により乾燥させ、18F 活性を1.0 mL のKryptofix 222/K2CO3 溶液 (9.5 mgのKryptofix 222と1.7 mgのK2CO3とをアセトニトリル/水 (96/ 4)中に含む)により溶出した。溶媒を120℃でアルゴンガス流下除去した。残渣を、1 mLの無水アセトニトリルを用いて共沸により120℃において窒素ガス流下で2回乾燥させた。メシラート前駆体8 (1.0 mg)(アセトニトリル (200 μL)中)の溶液を、18F 活性を含む反応容器に添加した。この混合物を120℃で5分間加熱し、1分間冷却した。次いで、HCl (10% 水溶液, 450μL) を添加し、混合物を再び120℃で5分間加熱した。NaOH水溶液を添加して、pHを塩基性 (pH 8-9)に調節した。混合物を酢酸エチル (1 mL×2) により抽出し、溶媒を窒素ガス下除去した。残渣を予備的HPLC [YMC-Pack Pro C18 カラム (20 mm× 150 mm), アセトニトリル/水 (70/30), 流速 4.0mL/分]により精製した。所望の18F標識産物の保持時間は13.3 分である。放射化学的純度および特異的活性を、分析用HPLC [YMC-Pack Pro C18 カラム (4.6 mm × 150 mm), アセトニトリル/水 (50/50), 流速 1.0 mL/分]で測定し、[18F]FPYBF-2を放射化学的純度>99%、特異的活性242 GBq/μmolで得た。特異的活性は、精製18F標識化合物のUVピーク強度を既知の濃度の参照用非放射性化合物と比較することにより評価した。[ 18 F] Fluoride is produced by Cyclotron (CYPRIS HM-18, Sumitomo Heavy Industries, Ltd., Tokyo) via the 18 O (p, n) 18 F reaction, and as an aqueous solution in water rich in 18 O. -Passed through Pak Light QMA cartridge (Waters). The cartridge was dried with N 2 and 18 F activity was adjusted to 1.0 mL Kryptofix 222 / K 2 CO 3 solution (9.5 mg Kryptofix 222 and 1.7 mg K 2 CO 3 in acetonitrile / water (96/4). Elution). The solvent was removed at 120 ° C. under a stream of argon gas. The residue was dried twice under nitrogen gas flow at 120 ° C. azeotropically with 1 mL anhydrous acetonitrile. A solution of mesylate precursor 8 (1.0 mg) in acetonitrile (200 μL) was added to the reaction vessel containing 18 F activity. The mixture was heated at 120 ° C. for 5 minutes and cooled for 1 minute. HCl (10% aqueous solution, 450 μL) was then added and the mixture was again heated at 120 ° C. for 5 minutes. Aqueous NaOH was added to adjust the pH to basic (pH 8-9). The mixture was extracted with ethyl acetate (1 mL × 2), and the solvent was removed under nitrogen gas. The residue was purified by preparative HPLC [YMC-Pack Pro C18 column (20 mm × 150 mm), acetonitrile / water (70/30), flow rate 4.0 mL / min]. The retention time of the desired 18 F labeled product is 13.3 minutes. The radiochemical purity and specific activity, analytical HPLC [YMC-Pack Pro C18 column (4.6 mm × 0.99 mm), acetonitrile / water (50/50), flow rate 1.0 mL / min] measured by, [18 F ] FPYBF-2 was obtained with a radiochemical purity> 99% and a specific activity of 242 GBq / μmol. Specific activity was assessed by comparing the UV peak intensity of the purified 18 F labeled compound with a known concentration of a reference non-radioactive compound.
4.正常マウスにおける生体内分布
実施例1に記載のように、[18F]FPYBF-2の生体内分布を評価した。胃および腸については、各臓器の放射線量の割合を、組織のカウントを適切に希釈した注射材料のアリコートと比較することで計算した。結果を表2に示す。
5.インビトロオートラジオグラフィー
実施例1に記載のように、[18F]FPYBF-2のβ-アミロイドプラークへの特異的結合を確認した。結果を図7に示す。5. In Vitro Autoradiography As described in Example 1, specific binding of [ 18 F] FPYBF-2 to β-amyloid plaques was confirmed. The results are shown in FIG.
6.[18F]FPYBF-2によるインビボプラーク標識
実施例1に記載のように、Tg2576トランスジェニックマウスにおいて[18F]FPYBF-2のβ−アミロイドプラークへの結合を確認した。結果を図8に示す。6). In vivo plaque labeling with [ 18 F] FPYBF-2 As described in Example 1, binding of [ 18 F] FPYBF-2 to β-amyloid plaques was confirmed in Tg2576 transgenic mice. The results are shown in FIG.
[実施例3]
99mTc/Re-BAT-Bp
99m Tc / Re-BAT-Bp
1.Re-BAT-Bpの合成
Re-BAT-Bpの合成をスキーム3に示す。
スキーム3
The synthesis of Re-BAT-Bp is shown in
5-(5-メトキシベンゾフラン-2-イル)ピリジン-2-アミン (1)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.85 (s, 3H), 4.67(s, 2H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J =2.4 Hz). MS: m/z 241 (M++H).5- (5-Methoxybenzofuran-2-yl) pyridin-2-amine (1)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 3.85 (s, 3H), 4.67 (s, 2H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H , J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m / z 241 (M + + H).
5-(5-メトキシベンゾフラン-2-イル)-N, N-ジメチルピリジン-2-アミン (2)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.15 (s, 6H), 3.85 (s, 3H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m/z 269 (M++H).5- (5-Methoxybenzofuran-2-yl) -N, N-dimethylpyridin-2-amine (2)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 3.15 (s, 6H), 3.85 (s, 3H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H , J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m / z 269 (M + + H).
2-(6-(ジメチルアミノ)ピリジン-3-イル)ベンゾフラン-5-オール (3)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.15 (s, 6H), 4.89 (s, 1H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m/z 255 (M++H).2- (6- (Dimethylamino) pyridin-3-yl) benzofuran-5-ol (3)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ 3.15 (s, 6H), 4.89 (s, 1H), 6.59 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.76 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H , J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 7.07 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.67 (d, 1H, J = 2.4 Hz). MS: m / z 255 (M + + H).
5-(5-(3-ブロモプロポキシ)ベンゾフラン-2-イル)-N,N-ジメチルピリジン-2-アミン (4)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ2.09 (t, 2H, J = 6.4 Hz), 3.09 (s, 6H), 3.60(t, 2H, J = 6.4 Hz), 4.08 (t, 2H, J = 5.8 Hz), 6.48 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.80 (d, 1H, J = 6.4 Hz), 6.96 (s, 1H), 7.33 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.79 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 8.64 (s, 1H). MS: m/z 375 (M++H).5- (5- (3-Bromopropoxy) benzofuran-2-yl) -N, N-dimethylpyridin-2-amine (4)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ2.09 (t, 2H, J = 6.4 Hz), 3.09 (s, 6H), 3.60 (t, 2H, J = 6.4 Hz), 4.08 (t, 2H, J = 5.8 Hz), 6.48 (s, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.80 (d, 1H, J = 6.4 Hz), 6.96 (s, 1H), 7.33 (d, 1H, J = 8.8 Hz) , 7.79 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 8.64 (s, 1H). MS: m / z 375 (M + + H).
tert-ブチル2-((3-(2-(6-(ジメチルアミノ)ピリジン-3-イル)ベンゾフラン-6-イルオキシ)プロピル)(2-(トリチルチオ)エチル)アミノ)エチル(2-(トリチルチオ)エチル)カルバメート (5)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ1.26 (s, 9H), 1.61 (s, 2H), 2.16-2.30 (m, 10H), 2.77-2.87 (m, 4H), 2.97 (s, 6H), 3.81 (s, 2H), 6.40 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 6.55 (s, 1H), 6.66 (d, 1H, J = 6.4 Hz), 6.84 (s, 1H), 7.03-7.20 (m, 19H), 7.21-7.31 (m, 12H), 7.71 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 8.55 (s, 1H). HRMS (FAB+): m/z calcd for C67H71N4O4S2 (MH+) 1059.4917, found 1059.4910.tert-Butyl 2-((3- (2- (6- (dimethylamino) pyridin-3-yl) benzofuran-6-yloxy) propyl) (2- (tritylthio) ethyl) amino) ethyl (2- (tritylthio) Ethyl) carbamate (5)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ1.26 (s, 9H), 1.61 (s, 2H), 2.16-2.30 (m, 10H), 2.77-2.87 (m, 4H), 2.97 (s, 6H ), 3.81 (s, 2H), 6.40 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 6.55 (s, 1H), 6.66 (d, 1H, J = 6.4 Hz), 6.84 (s, 1H), 7.03-7.20 (m, 19H), 7.21-7.31 (m, 12H), 7.71 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 8.55 (s, 1H) .HRMS (FAB +): m / z calcd for C 67 H 71 N 4 O 4 S 2 (MH + ) 1059.4917, found 1059.4910.
Re-BAT-Bp (6)
化合物5 (137.6 mg, 0.13 mmol) (TFA (6 mL)中)の溶液にトリエチルシラン (0.29 mL) を添加し、10 分間撹拌し、次いで溶媒を窒素ガス流下で除去した。残渣 を10 mL CH2Cl2に溶解し、(Ph3P)2ReOCl3 (217 mg, 0.26 mmol) および1 M 酢酸ナトリウム (メタノール (7 mL)中)を添加した。反応混合物を加熱して4時間還流し、次いで室温まで冷却した。酢酸エチル (60 mL) を添加し、混合物を濾過した。溶媒を蒸発させ残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー (CHCl3 : CH3OH = 10 : 1)により精製して、29 mgの化合物6 (収率33%)を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ2.27-2.34 (m, 2H), 2.98-3.06 (m, 2H), 3.16 (s, 6H), 3.28-3.47 (m, 2H), 3.78-3.93 (m, 2H), 4.07-4.33 (m, 6H), 6.56 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.75 (s, 1H), 6.80 (d, 1H, J = 6.4 Hz), 6.98 (s, 1H), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 8.65 (s, 1H). HRMS (FAB+): m/z calcd for C24H32N4O3ReS2 (MH+) 675.1471, found 675.1469.Re-BAT-Bp (6)
To a solution of compound 5 (137.6 mg, 0.13 mmol) in TFA (6 mL) was added triethylsilane (0.29 mL) and stirred for 10 minutes, then the solvent was removed under a stream of nitrogen gas. The residue was dissolved in 10 mL CH 2 Cl 2 and (Ph 3 P) 2 ReOCl 3 (217 mg, 0.26 mmol) and 1 M sodium acetate (in methanol (7 mL)) were added. The reaction mixture was heated to reflux for 4 hours and then cooled to room temperature. Ethyl acetate (60 mL) was added and the mixture was filtered. The solvent was evaporated to give a residue, which was purified by silica gel chromatography (CHCl 3 : CH 3 OH = 10: 1) to give 29 mg of compound 6 (33% yield).
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ2.27-2.34 (m, 2H), 2.98-3.06 (m, 2H), 3.16 (s, 6H), 3.28-3.47 (m, 2H), 3.78-3.93 (m, 2H), 4.07-4.33 (m, 6H), 6.56 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.75 (s, 1H), 6.80 (d, 1H, J = 6.4 Hz), 6.98 (s, 1H), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.86 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 8.65 (s, 1H) .HRMS (FAB +): m / z calcd for C 24 H 32 N 4 O 3 ReS 2 (MH + ) 675.1471, found 675.1469.
2.Re-BAT-Bpの精製
HPLCの結果を図9に示す。2. Purification of Re-BAT-Bp
The result of HPLC is shown in FIG.
3.インビトロにおけるAβ凝集体に対する結合試験
実施例1に記載のように、50 μLのRe-BAT-Bp (0.008 pM-400 μM (10% EtOH中))を用いて結合試験を行った。結果を図10に示す。Re-BAT-BpのIC50は13.6 ± 0.30 (nM)であった。3. In vitro binding test for Aβ aggregates As described in Example 1, binding tests were performed using 50 μL Re-BAT-Bp (0.008 pM-400 μM in 10% EtOH). The results are shown in FIG. The IC 50 of Re-BAT-Bp was 13.6 ± 0.30 (nM).
4.99mT標識反応およびRP-HPLCによる分析
ヘプタン酸ナトリウム二水和物 (2 g, 7.04 mmol) (ナノピュア水 (25 mL)中)の溶液に0.75 mLのSnCl2・2H2O溶液 [12 mgの塩化Tin (II) 二水和物 (53.2 mmol)を15 mLの0.1 M HClに溶解]を添加した。この溶液のpHを少量の0.1 M NaOH によりpH 8.5-9.0に調節し、次いで凍結乾燥してSnグルコヘプトン酸 (SnGH) を得た。SnGH (1 mg)をNa99mTcO4 溶液 (200 μL)に添加し、室温で10 分間反応させ、99mTcGH溶液を得た。化合物5 (0.5 mg) (TFA (200 μL)中)の溶液にトリエチルシラン (10 μL)を混和後、溶媒を窒素ガス流下で除去した。残渣をアセトニトリル (200 μL)に溶解し、0.1 M HCl (15 μL)および99mTcGH溶液 (200 μL)を添加した。反応混合物を80-90℃まで10分間加熱した。室温まで冷却した後、混合物をRP-HPLCで精製し、[99mTc]BAT-Bpを得た。[99mTc]BAT-Bp を、分析用RP-HPLCにより、Cosmosil C18 カラムを用いて、溶媒をH2O/アセトニトリル (0:00 (開始) 3/2 → 30:00 3/7)とし、流速 1.0 mL/分で分析した。複合体の吸収を254 nmにて測定し、99mTc標識型の放射能を60 分間記録した。To a solution of sodium heptanoate dihydrate (2 g, 7.04 mmol) (in nanopure water (25 mL)), add 0.75 mL of SnCl 2 · 2H 2 O solution [12 mg of Tin (II) chloride dihydrate ( 53.2 mmol) dissolved in 15 mL 0.1 M HCl] was added. The pH of this solution was adjusted to pH 8.5-9.0 with a small amount of 0.1 M NaOH and then lyophilized to obtain Sn glucoheptonic acid (SnGH). SnGH (1 mg) was added to Na 99m TcO 4 solution (200 μL) and reacted at room temperature for 10 minutes to obtain a 99m TcGH solution. Triethylsilane (10 μL) was mixed with a solution of compound 5 (0.5 mg) (in TFA (200 μL)), and then the solvent was removed under a stream of nitrogen gas. The residue was dissolved in acetonitrile (200 μL) and 0.1 M HCl (15 μL) and 99m TcGH solution (200 μL) were added. The reaction mixture was heated to 80-90 ° C. for 10 minutes. After cooling to room temperature, the mixture was purified by RP-HPLC to give [ 99m Tc] BAT-Bp. [ 99m Tc] BAT-Bp was analyzed by RP-HPLC for analysis using a Cosmosil C 18 column and the solvent was H 2 O / acetonitrile (0:00 (start) 3/2 → 30:00 3/7). And analyzed at a flow rate of 1.0 mL / min. Absorption of the complex was measured at 254 nm and 99m Tc-labeled radioactivity was recorded for 60 minutes.
5.正常マウスにおける生体内分布
実施例1に記載のように、ddY マウス (22-25 g, 雄) の尾静脈に100 μLの[99mTc]BAT-Bp (4 μCi)含有生理食塩水を注射した。結果を表3に示す。
6.インビトロオートラジオグラフィー
Tg2576マウスおよび対照の野生型マウスの脳切片 (10 μm)を、[99mTc]BAT-Bp (93 kBq/200 μL)と1時間室温でインキュベートした。次いで、切片を50% EtOHで洗浄し (2分間の洗浄を2回)、水で30秒間すすいだ。乾燥後、99mTc標識切片をBAS画像化プレート (富士写真フィルム株式会社、東京、日本)に一晩暴露した。オートラジオグラフィーの画像をBAS5000 スキャナーシステム (富士写真フィルム株式会社)により得た。結果を図11に示す。[99mTc]BAT-Bpにより、Tg2576マウス脳切片のβ−アミロイドプラークは標識されたが、野生型マウスの脳切片は標識されなかった。6). In vitro autoradiography
Brain sections (10 μm) of Tg2576 mice and control wild type mice were incubated with [ 99m Tc] BAT-Bp (93 kBq / 200 μL) for 1 hour at room temperature. The sections were then washed with 50% EtOH (twice for 2 minutes) and rinsed with water for 30 seconds. After drying, 99m Tc-labeled sections were exposed to BAS imaging plates (Fuji Photo Film Co., Tokyo, Japan) overnight. Autoradiographic images were obtained with a BAS5000 scanner system (Fuji Photo Film Co., Ltd.). The results are shown in FIG. [ 99m Tc] BAT-Bp labeled β-amyloid plaques in Tg2576 mouse brain sections, but not wild-type mouse brain sections.
[実施例4]
99mTc/Re-BAT-Bp-5
99m Tc / Re-BAT-Bp-5
1.Re-BAT-Bp-5の合成
Re-BAT-Bp-5の合成をスキーム4に示す。
スキーム4
The synthesis of Re-BAT-Bp-5 is shown in
5-(5-(5-ブロモペントキシ)ベンゾフラン-2-イル)-N,N-ジメチルピリジン-2-アミン (4)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ1.48-1.56 (m, 2H), 1.67-1.72 (m, 2H), 1.79-1.86 (m, 2H), 3.01 (s, 6H), 3.30-3.34 (m, 2H), 3.84-3.87 (m, 2H), 6.40 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6,61 (s, 1H), 6.70 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 6.85 (d, 1H, J = 2.8 Hz), 7.24 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.71 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.54 (d, 1H, J = 2.0 Hz). MS: m/z 404 (M++H).5- (5- (5-Bromopentoxy) benzofuran-2-yl) -N, N-dimethylpyridin-2-amine (4)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ1.48-1.56 (m, 2H), 1.67-1.72 (m, 2H), 1.79-1.86 (m, 2H), 3.01 (s, 6H), 3.30-3.34 (m, 2H), 3.84-3.87 (m, 2H), 6.40 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6,61 (s, 1H), 6.70 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 6.85 (d, 1H, J = 2.8 Hz), 7.24 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.71 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.54 ( d, 1H, J = 2.0 Hz ) MS:. m / z 404 (M + + H).
tert-ブチル2-((5-(2-(6-(ジメチルアミノ)ピリジン-3-イル)ベンゾフラン-5-イルオキシ)ペンチル)(2-(トリチルチオ)エチル)アミノ)エチル(2-(トリチルチオ)エチル)カルバメート (5)
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ1.28 (s, 13H), 1.65 (m, 2H), 2.17 (m, 10H), 2.88 (m, 4H), 3.03 (s, 6H), 3.85 (m, 2H), 6.45 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 6.62 (s, 1H), 6.72 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 6.88 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.10 (m, 19H), 7.15 (m, 12H), 7.75 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.56 (d, 1H, J = 2.4 Hz). HRMS (FAB+): m/z calcd for C69H74N4O4S2 (MH+) 1087.5230, found 1087.5238.tert-Butyl 2-((5- (2- (6- (dimethylamino) pyridin-3-yl) benzofuran-5-yloxy) pentyl) (2- (tritylthio) ethyl) amino) ethyl (2- (tritylthio) Ethyl) carbamate (5)
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ1.28 (s, 13H), 1.65 (m, 2H), 2.17 (m, 10H), 2.88 (m, 4H), 3.03 (s, 6H), 3.85 ( m, 2H), 6.45 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 6.62 (s, 1H), 6.72 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 6.88 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 7.10 (m, 19H), 7.15 (m, 12H), 7.75 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.56 (d, 1H, J = 2.4 Hz). HRMS (FAB +): m / z calcd for C 69 H 74 N 4 O 4 S 2 (MH + ) 1087.5230, found 1087.5238.
Re-BAT-Bp-5 (6)
化合物5 (86.2 mg, 0.079 mmol) (TFA (3 mL)中)の溶液にトリエチルシラン (0.29 mL) を添加し、10 分間撹拌し、次いで溶媒を窒素ガス流下で除去した。残渣 を10 mL CH2Cl2に溶解し、(Ph3P)2ReOCl3 (135 mg, 0.15 mmol) および1 M 酢酸ナトリウム (メタノール (5 mL)中)を添加した。反応混合物を加熱して4時間還流し、次いで室温まで冷却した。酢酸エチル (60 mL) を添加し、混合物を濾過した。溶媒を蒸発させ残渣を得て、これをシリカゲルクロマトグラフィー (CHCl3 : CH3OH = 10 : 1)により精製して、17 mgの化合物6 (収率30%)を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ1.56-1.63 (m, 6H), 1.75-1.94 (m, 4H), 2.96-3.03 (m, 2H), 3.16 (s, 6H), 3.22-3.39 (m, 4H), 3.76-3.86 (m, 2H), 4.01-4.04 (m, 2H), 4.09-4.15 (m, 2H), 6.58 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 6.75 (s, 1H), 6.82 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 6.99 (d, 1H, J = 2.8 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.99 (d, 1H, J = 2.8 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.88 (dd, 1H, J1 = 8.8 Hz, J2 = 2.4 Hz), 8.65 (d, 1H, J = 2.4 Hz). HRMS (FAB+): m/z calcd for C26H35N4O3ReS2 (MH+) 703.1784, found. 703.1781.Re-BAT-Bp-5 (6)
To a solution of compound 5 (86.2 mg, 0.079 mmol) in TFA (3 mL) was added triethylsilane (0.29 mL) and stirred for 10 minutes, then the solvent was removed under a stream of nitrogen gas. The residue was dissolved in 10 mL CH 2 Cl 2 and (Ph 3 P) 2 ReOCl 3 (135 mg, 0.15 mmol) and 1 M sodium acetate (in methanol (5 mL)) were added. The reaction mixture was heated to reflux for 4 hours and then cooled to room temperature. Ethyl acetate (60 mL) was added and the mixture was filtered. The solvent was evaporated to give a residue, which was purified by silica gel chromatography (CHCl 3 : CH 3 OH = 10: 1) to give 17 mg of compound 6 (yield 30%).
1 H NMR (400 MHz, CDCl 3 ): δ1.56-1.63 (m, 6H), 1.75-1.94 (m, 4H), 2.96-3.03 (m, 2H), 3.16 (s, 6H), 3.22-3.39 (m, 4H), 3.76-3.86 (m, 2H), 4.01-4.04 (m, 2H), 4.09-4.15 (m, 2H), 6.58 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 6.75 (s, 1H ), 6.82 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 6.99 (d, 1H, J = 2.8 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 6.99 (d, 1H , J = 2.8 Hz), 7.36 (d, 1H, J = 8.8 Hz), 7.88 (dd, 1H, J 1 = 8.8 Hz, J 2 = 2.4 Hz), 8.65 (d, 1H, J = 2.4 Hz). HRMS (FAB +): m / z calcd for C 26 H 35 N 4 O 3 ReS 2 (MH + ) 703.1784, found.703.1781.
2.Re-BAT-Bp-5の精製
HPLCの結果を図12に示す。2. Purification of Re-BAT-Bp-5
The result of HPLC is shown in FIG.
3.99mT標識反応およびRP-HPLCによる分析
実施例3に記載のようにして、[99mTc]BAT-Bp-5を得て、RP-HPLCにより分析した。[ 99m Tc] BAT-Bp-5 was obtained as described in Example 3 and analyzed by RP-HPLC.
4.正常マウスにおける生体内分布
実施例1に記載のように、ddY マウス (22-25 g, 雄) の尾静脈に100 μLの[99mTc]BAT-Bp-5 (4 μCi)含有生理食塩水を注射した。結果を表4に示す。
5.インビトロオートラジオグラフィー
実施例3に記載のように、[99mTc]BAT-Bp-5がTg2567トランスジェニックマウスのβ−アミロイドプラークに結合することを確認した(図13)。5. In vitro autoradiography [ 99m Tc] BAT-Bp-5 was confirmed to bind to β-amyloid plaques of Tg2567 transgenic mice as described in Example 3 (FIG. 13).
[先行技術文献]
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34. Ono, M .; Hayashi, S .; Kimura, H .; Kawashima, H .; Nakayama, M .; Saji, H.
35. Ono, M .; Watanabe, R .; Kawashima, H .; Kawai, T .; Watanabe, H .; Haratake, M .; Saji, H .; Nakayama, M.
Claims (22)
R1は、ヒドロキシ基、C1−10アルコキシ基および式:−(CH2CH2O)n−X(式中、nは1〜10の整数を表し、Xはハロゲン原子を表す。)からなる群から選択される、
R2は、式:−NRaRb(式中、RaおよびRbは、それぞれ独立して水素原子及びC1−3アルキル基のいずれかを表す。)で示される基である、
R3、R4、R5、R6、R7及びR8は、各々独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ基、C1−4アルキル基、およびC1−4アルコキシ基からなる群から選択される〕
で表される化合物またはその薬学的に受容可能な塩。Formula (I)
R 1 is a hydroxy group, a C 1-10 alkoxy group and a formula: — (CH 2 CH 2 O) n —X (wherein n represents an integer of 1 to 10 and X represents a halogen atom). Selected from the group
R 2 is a group represented by the formula: —NRaRb (wherein Ra and Rb each independently represents a hydrogen atom or a C 1-3 alkyl group),
R 3 , R 4 , R 5 , R 6 , R 7 and R 8 are each independently a group consisting of a hydrogen atom, a halogen atom, a hydroxy group, a C 1-4 alkyl group, and a C 1-4 alkoxy group. Selected from)
Or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
R2は、式:−NRaRb(式中、RaおよびRbは、それぞれ独立して水素原子及びC1−3アルキル基のいずれかを表す。)で示される基である〕
で表される、請求項1記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩。Formula (II)
R 2 is a group represented by the formula: —NRaRb (wherein Ra and Rb each independently represents a hydrogen atom or a C 1-3 alkyl group)]
The compound of Claim 1 represented by these, or its pharmaceutically acceptable salt.
からなる群から選択される、請求項2記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩。R 1 is a hydroxy group, a C 1-3 alkoxy group and a formula: — (CH 2 CH 2 O) n —X (wherein n represents an integer of 1 to 10 and X represents a halogen atom.)
The compound according to claim 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof selected from the group consisting of:
a.請求項11〜18のいずれかに記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩の検出可能な量を哺乳動物に導入する工程;
b.該化合物がアミロイドプラークに結合するのに十分な時間放置する工程;および
c.1つ以上のアミロイドプラークに結合した化合物を検出する工程、を包含する、アミロイドプラークを画像化するための方法。Less than:
a. Introducing a detectable amount of a compound according to any of claims 11 to 18 or a pharmaceutically acceptable salt thereof into a mammal;
b. Leaving the compound for a time sufficient to bind to the amyloid plaque; and c. Detecting a compound bound to one or more amyloid plaques, the method for imaging amyloid plaques.
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