JPWO2006043387A1

JPWO2006043387A1 - Method of immunological examination of specimen and examination instrument used for the method

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Publication number: JPWO2006043387A1
Application number: JP2006542288A
Authority: JP
Inventors: 樹一郎小堀; 道子川本; 牛澤　幸司; 幸司牛澤; 勝弘上田
Original assignee: 第一化学薬品株式会社
Priority date: 2004-09-28
Filing date: 2005-09-20
Publication date: 2008-05-22
Also published as: WO2006043387A1

Abstract

検体液又はその希釈液を用いる臨床検査において、希釈検体液や検体濾過液が手に触れる危険性を回避すると共に、フィルターに必要以上の圧力がかからないようにし、濾過所要時間を短縮した検査方法と検査器具の提供する。一方の先端部の内方にフィルターを装着できる中空の筒状であって、フィルターを装着する方の先端部から有底筒状の検体収容容器に挿入したとき、その先端部の外壁を検体収容容器の底部近くの内壁に密着できるようにしてある検体の免疫学的検査方法に用いるカラム。少なくとも、このカラムと、カラムのフィルターを装着する方の先端部を底部近くの内壁に密着可能である有底筒状の検体収容容器と、カラムの先端部の内方に装着可能なフィルターと、検体収容容器内に挿入可能な検査用ディップスティックとの４部材で構成する診断用キット。希釈検体液を収容してある有底筒状の検体収容容器に、このカラムをフィルターを装着した方の先端部から挿入して検体収容容器の底部近くの内壁に先端部を密着させ、フィルターの挿入によって濾過された希釈検体液を検体収容容器外へ取り出すことなく、検体収容容器内方のカラム内へ検査用ディップスティックを挿入してその反応を観察する方法。インフルエンザウイルスの検査・診断に好適に用いることができる。In a clinical test using the sample liquid or its diluted solution, a test method that avoids the risk of touching the diluted sample solution or the sample filtrate and that the filter is not subjected to excessive pressure and the filtration time is shortened. Provide inspection equipment. A hollow cylinder that can be fitted with a filter on the inside of one tip, and the outer wall of the tip when the filter is inserted into the bottomed tubular specimen storage container A column used in the immunological test method for specimens that can adhere to the inner wall near the bottom of the container. At least, this column, a bottomed cylindrical sample container that can be attached to the inner wall near the bottom of the column to which the filter is mounted, and a filter that can be mounted on the inner side of the column, A diagnostic kit comprising four members including a test dipstick that can be inserted into a specimen storage container. Insert this column into the bottomed cylindrical sample container containing the diluted sample solution from the tip of the filter-mounted one, and attach the tip to the inner wall near the bottom of the sample container. A method of observing the reaction by inserting a test dipstick into a column inside the specimen storage container without taking out the diluted specimen liquid filtered by the insertion out of the specimen storage container. It can be suitably used for inspection and diagnosis of influenza virus.

Description

本発明は検体の免疫学的検査方法及びその方法に用いる検査器具に関する。詳しくは、本発明は、ディップスティック式検査方法によって検体中の抗原を検査する免疫学的な方法であり、また、その方法に用いるカラムとそのカラムを構成部材に含む診断用キットに関する。 The present invention relates to an immunological test method for a specimen and a test instrument used for the method. Specifically, the present invention relates to an immunological method for examining an antigen in a specimen by a dipstick type examination method, and also relates to a column used for the method and a diagnostic kit including the column as a constituent member.

臨床検査では、血液、尿、便、鼻汁液、痰或いはスワブ検体として収集された分泌液などの検体について、これら検体に含まれる特定の抗原を抗原抗体反応を利用して検出する免疫学的な検査方法が広く用いられている。その一般的な方法は、およそ以下のとおりである。
（１）上記のような検体液又はその希釈液（以下、これらを併せて「希釈検体液」と称することがある。）を、酵素、金属コロイド、着色ラテックス、色素などの呈色識別物質で抗体を標識した標識抗体と接触させる。
（２）この希釈検体液と標識抗体の接触により、検体中の抗原と標識抗体とを特異的に反応させて、抗原抗体の免疫複合体を形成させる。
（３）その免疫複合体の量を、目視によるか又は光学的な変化として測定し、検体中の抗原の定性測定又は定量測定を行なう。In clinical tests, immunological tests that detect specific antigens contained in these samples, such as blood, urine, feces, nasal secretions, sputum, or secretions collected as swab samples, using an antigen-antibody reaction. Inspection methods are widely used. The general method is as follows.
(1) A sample liquid as described above or a diluted liquid thereof (hereinafter, these may be collectively referred to as “diluted sample liquid”) with a color discriminating substance such as an enzyme, a metal colloid, a colored latex, or a dye. The antibody is contacted with a labeled antibody labeled.
(2) By contacting the diluted specimen solution with the labeled antibody, the antigen in the specimen and the labeled antibody are reacted specifically to form an antigen-antibody immune complex.
(3) The amount of the immune complex is measured visually or as an optical change, and qualitative measurement or quantitative measurement of the antigen in the specimen is performed.

上記の検査方法を応用して、心疾患マーカーの定量、ウイルス感染の有無の確認、妊娠判定、ガン疾患の罹病確認などを、簡便かつ迅速に検査・診断するための種々の簡易診断キットが開発され、市販されている。その一例として、インフルエンザウイルスの感染の有無の診断用キットの状況について説明する。 Developed various simple diagnostic kits for simple and rapid examination and diagnosis of quantification of heart disease markers, confirmation of the presence or absence of viral infection, pregnancy determination, confirmation of morbidity of cancer diseases, etc. by applying the above examination methods And are commercially available. As an example, the situation of a diagnostic kit for the presence or absence of influenza virus infection will be described.

インフルエンザウイルスは、オルソミクソウイルス科に属する直径８０〜１２０ｎｍの球状ウイルスであり、血清学的にはＡ型・Ｂ型・Ｃ型の３つの型に分類される。日本において冬季にインフルエンザが流行する原因となっているのは、主にＡ型とＢ型のインフルエンザウイルスである。 Influenza viruses are spherical viruses with a diameter of 80 to 120 nm belonging to the Orthomyxoviridae family, and are serologically classified into three types: A type, B type, and C type. In Japan, influenza A virus is mainly caused by influenza viruses of type A and B.

インフルエンザに対して、従来は、抗生物質や抗炎症剤などを用いた対症療法が行なわれてきた。しかし、近年、抗ウイルス性の医薬品が適用可能となったことから、その治療や感染防止の観点上、できる限り早期に適切な治療薬を選択し、患者に投与することが必要となっている。こうした背景により、インフルエンザウイルスの感染の有無を検査できる診断用キットの実用化が急速に進み、各社によりＥＬＩＳＡ（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ）をベースにした簡易型の診断用キットが開発され、市販されている。特許文献１や特許文献２には、これら診断用キットの一例が紹介されている。 Conventionally, symptomatic treatment using antibiotics or anti-inflammatory agents has been performed against influenza. However, since antiviral drugs have become applicable in recent years, it is necessary to select and administer appropriate therapeutic agents as early as possible from the viewpoint of treatment and infection prevention. . With this background, the practical use of diagnostic kits capable of examining the presence or absence of influenza virus infection has rapidly progressed, and simple diagnostic kits based on ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) have been developed and marketed by various companies. ing. Patent Document 1 and Patent Document 2 introduce examples of these diagnostic kits.

このような診断用キットを用いてインフルエンザウイルスの型を鑑別・診断する際に、測定対象となる検体としては、鼻汁、鼻腔拭い液、咽頭拭い液、痰などがある。これらの検体中には、目的とするウイルスの他に、鼻汁・鼻腔・咽頭に存在するムコ多糖類や糖タンパク質などが含有されており、ウイルスの測定を直接的又は間接的に妨害することがある。そのため、希釈検体液は、標識抗体と反応させる前にフィルターを通して濾過したものを使用することが好ましい。（以下、濾過済みの希釈検体液を「検体濾過液」と称することがある。） When differentiating and diagnosing the type of influenza virus using such a diagnostic kit, samples to be measured include nasal discharge, nasal wipe, pharyngeal wipe, sputum and the like. These specimens contain mucopolysaccharides and glycoproteins present in the nasal discharge, nasal cavity, and pharynx in addition to the target virus, which may directly or indirectly interfere with virus measurement. is there. Therefore, it is preferable to use a diluted sample solution that has been filtered through a filter before reacting with the labeled antibody. (Hereinafter, the filtered diluted sample liquid may be referred to as “sample filtrate”.)

また、これら診断用キットには、ディップスティック式やイムノクロマトラテラルフロー式などがあるが、検体の濾過操作など前処理の作業ステップが複数あり、そのため、例えば、開業医が患者から検体を採取して市販の診断用キットを用いて検査するとき、その結果が得られるまでにはかなりの時間（１０分以上）を要している。それ故、できる限り早期に検査・診断結果が得られるように、操作ステップの簡素化や測定時間の短縮が強く望まれている。さらに、従来の検査方法では、標識抗体液と希釈検体液を接触させるとき又は希釈検体液を検体収容容器外へ吐出するときなどに、希釈検体液が検査者の手に触れるおそれがあり、検査器具の操作性に加えて、バイオハザードの面から問題があった。
特開２００１−１２４７７５号公報特開２０００−２３０９３１号公報金澤実・菅谷憲夫「インフルエンザ診療マニュアル」株式会社南江堂２００１年２月２０日第１刷発行の１１０〜１１５頁「臨床化学」３０号の６８〜７１頁（２００１年） These diagnostic kits include dipstick type and immunochromatographic flow type, etc., but there are multiple pre-processing work steps such as sample filtration operation. For this reason, for example, a practitioner collects a sample from a patient and puts it on the market. When the test is performed using the diagnostic kit, it takes a considerable time (10 minutes or more) until the result is obtained. Therefore, simplification of operation steps and shortening of measurement time are strongly desired so that test / diagnosis results can be obtained as early as possible. Further, in the conventional testing method, there is a risk that the diluted sample solution may touch the examiner's hand when the labeled antibody solution and the diluted sample solution are brought into contact or when the diluted sample solution is discharged out of the sample storage container. In addition to the operability of the instrument, there was a problem from the aspect of biohazard.
JP 2001-124775 A JP 2000-230931 A Minoru Kanazawa and Norio Sugaya “Influenza Medical Treatment Manual” Nanedo Co., Ltd. February 20, 2001, first print, pages 110-115 “Clinical Chemistry” No. 30, pages 68-71 (2001)

このような状況の下、本発明者らは、希釈検体液と標識抗体を混和させる際の個人差を少なくすると共に、希釈検体液の濾過操作を改善することを志向し、標識抗体を含浸させたフィルターを内蔵しているキャップを希釈検体液を収容した検体収容容器本体に装着してその検体収容容器から標識抗体を含む検体濾過液をテストデバイスに注入し、所定の操作を行なって反応を観察し、検体中の抗原の有無や種別を検査する方法を開発して特許出願をしている（特願２００３−６３８３２）。この検査方法は、濾過操作が簡便であり、かつ、検査者の個人差による影響を少なくするという効果や保存中に標識抗体の凝集が生じにくいという画期的な利点を有するが、標識抗体を含む検体濾過液をテストデバイスに注入するとき、高濃度の標識抗体を含む液が先に出てくることがある。 Under such circumstances, the present inventors aimed to reduce the individual difference when mixing the diluted specimen liquid and the labeled antibody, and to improve the filtration operation of the diluted specimen liquid, and to impregnate the labeled antibody. A cap containing a filter is attached to the sample container main body containing the diluted sample solution, and the sample filtrate containing the labeled antibody is injected from the sample container into the test device, and a predetermined operation is performed to react. A patent application has been filed by developing a method for observing and examining the presence and type of an antigen in a specimen (Japanese Patent Application No. 2003-63832). This test method has the advantage that the filtration operation is simple and reduces the influence of individual differences among examiners, and that the labeled antibody is less likely to aggregate during storage. When injecting the specimen filtrate containing the liquid into the test device, a liquid containing a high concentration of labeled antibody may come out first.

そこで、本発明者らは、標識抗体を含浸させたフィルターを内蔵しているキャップを装着した検体収容容器を注入用容器に嵌合し、フィルターを通った検体濾過液を検体収容容器から一旦注入用容器内へ吐出し、吐出した検体濾過液を注入用容器内で攪拌・混合した後注入用容器からテストデバイスへ吐出・注入し、所定の操作を行なって反応を観察し、検体中の抗原の有無や種別を検査する方法を開発して特許出願している（特願２００４−５５７１０）。この検査方法は、検体濾過液の均一化が図られるため、より正確な診断を行なえる画期的な方法であるが、操作ステップが多くなると共に、必要な容器の数が増えるという問題がある。また、そのような問題の有無に関わらず、抗原抗体反応を応用した免疫学的な検査方法とその方法に用いる器具については、つねに、一層の正確化・簡便化・安全性が求められている。 Therefore, the present inventors fitted a sample storage container equipped with a cap containing a filter impregnated with a labeled antibody into the injection container, and once injected the sample filtrate through the filter from the sample storage container. The sample filtrate is discharged into the container for injection, stirred and mixed in the container for injection, then discharged and injected from the container for injection into the test device, and the reaction is observed by performing a predetermined operation. A patent application has been filed for the development of a method for inspecting the presence or absence and type (Japanese Patent Application 2004-55710). This test method is an epoch-making method capable of making a more accurate diagnosis because the specimen filtrate is made uniform, but there is a problem that the number of necessary containers increases as the number of operation steps increases. . Regardless of the presence or absence of such problems, immunological testing methods using antigen-antibody reactions and instruments used in such methods are always required to be more accurate, simplified, and safe. .

以上の状況に鑑み、本発明は、抗原抗体反応を応用した検体の免疫学的な検査方法とその方法に用いる検査器具について、さらに正確化、簡便化を図ると共に安全性を向上させた検体の検査方法とその方法に用いる検査器具を提供することを第１の課題とする。具体的には、本発明は、希釈検体液を用いる臨床検査において、希釈検体液や検体濾過液に手を触れる危険性を回避し、安全衛生の面から改善した検体の検査方法とその検査方法に用いる検査器具を提供することを第２の課題とする。さらに、本発明は、フィルターに必要以上の圧力がかからないようにし、濾過に要する操作時間を短縮できる検体の検査方法とその検査方法に用いる検査器具を提供することを第３の課題とするものである。 In view of the above situation, the present invention relates to a method for immunological examination of a specimen to which an antigen-antibody reaction is applied and a test instrument used for the method, and further improves the accuracy and simplification and improves the safety of the specimen. It is a first object to provide an inspection method and an inspection instrument used in the method. Specifically, the present invention relates to a test method and a test method for a sample that are improved in terms of safety and health by avoiding the risk of touching the diluted sample solution or the sample filtrate in a clinical test using a diluted sample solution. It is a second object to provide an inspection instrument used for the above. Furthermore, a third object of the present invention is to provide a specimen testing method and a testing instrument used in the testing method, which can prevent an excessive pressure from being applied to the filter and reduce the operation time required for filtration. is there.

本発明者らは、上記の課題を、基本的には、希釈検体液を検体収容容器から吐出しないで濾過する方法を採ることによって解決できることを見いだし、さらに研究の結果、その方法に適応できる構造のカラムを開発することによって、解決した。 The present inventors have found that the above problem can be basically solved by adopting a method of filtering diluted sample liquid without discharging from the sample storage container, and further, as a result of research, a structure that can be applied to the method. Solved by developing a column.

すなわち、上記の課題を解決するための本発明のうち、請求の範囲・請求項１に記載する発明は、一方の先端部の内方にフィルターを装着できる中空の筒状であって、フィルターを装着する方の先端部から有底筒状の検体収容容器に挿入したとき、その先端部の外壁を検体収容容器の底部近くの内壁に密着できるようにしてある検体の免疫学的検査方法に用いるためのカラムである。 That is, among the present invention for solving the above-mentioned problems, the invention described in claim 1 is a hollow cylindrical shape in which a filter can be attached to the inside of one tip portion, and the filter is When inserted into the bottomed cylindrical specimen storage container from the tip of the attached one, it is used in an immunological test method for a specimen that allows the outer wall of the tip to be in close contact with the inner wall near the bottom of the specimen storage container It is a column for.

請求項１に記載するように、本発明のカラム（セパレートカラムとも称される。）は、一方の先端部の内方にフィルターを装着できる中空筒状のものである。カラムは円筒状であることが好ましいが、必ずしもこれに限るものではない。また、本発明のカラムは、フィルターを装着する方の先端部から有底筒状の検体収容容器に挿入したとき、その先端部の外壁を検体収容容器の底部近くの内壁に密着できるようにしてある。このような構成にすることによって、本発明のカラムは、これを検体収容容器に挿入すると、同時に、カラムに装着してあるフィルターが希釈検体液の中を移動することになるので、カラムを検体収容容器内へ挿入するだけで希釈検体液を濾過することができる。そして、上記のようにカラムの外壁を検体収容容器の内壁に密着することで、カラムが検体収容容器との間に隙き間を生ずることなく固定されるので、漏れのない濾過を行なうことができ、かつ、検体収容容器を傾けたときのカラムの脱落を防止できる。 As described in claim 1, the column of the present invention (also referred to as a separate column) has a hollow cylindrical shape in which a filter can be attached to the inside of one end portion. The column is preferably cylindrical, but is not necessarily limited thereto. In addition, the column of the present invention is designed so that the outer wall of the tip end can be brought into close contact with the inner wall near the bottom of the sample container when the filter is inserted into the bottomed cylindrical sample container. is there. By adopting such a configuration, when the column of the present invention is inserted into the sample storage container, the filter attached to the column moves through the diluted sample solution at the same time. The diluted specimen solution can be filtered simply by inserting it into the container. The column is fixed without causing any gap between the outer wall of the column and the inner wall of the sample storage container as described above, so that filtration without leakage can be performed. The column can be prevented from falling off when the specimen storage container is tilted.

また、同請求項２に記載する発明は、フィルターを装着する方の先端部の外壁に検体収容容器の底部近くの内壁に密着するためのリブを備えてある請求項１に記載のカラムである。 The invention according to claim 2 is the column according to claim 1, wherein a rib for closely contacting the inner wall near the bottom of the specimen storage container is provided on the outer wall of the tip portion on which the filter is mounted. .

請求項２に記載するように、本発明のカラムは、フィルターを装着する方の先端部の外壁に検体収容容器の底部近くの内壁に密着するためのリブを備えていることが好ましい。このような構成にすることによって、本発明のカラムは、検体収容容器の内壁への密着・固定が容易となり、カラムの脱落防止も容易となる。そのため、希釈検体液を漏らすおそれがない状態で濾過が可能となる。このリブは、カラムの外壁に鍔状に出っ張らせた形状にするのが好ましい。また、このリブは、カラム本体と一体成型にすることが好ましい。 According to a second aspect of the present invention, it is preferable that the column of the present invention is provided with a rib on the outer wall of the distal end portion to which the filter is attached to adhere to the inner wall near the bottom of the specimen storage container. By adopting such a configuration, the column of the present invention can be easily adhered and fixed to the inner wall of the specimen storage container, and can be easily prevented from falling off. Therefore, it is possible to perform filtration in a state where there is no risk of leaking the diluted sample liquid. It is preferable that the rib has a shape protruding in a bowl shape on the outer wall of the column. Moreover, it is preferable that this rib is integrally formed with the column main body.

また、同請求項３に記載する発明は、少なくとも、以下の（１）〜（４）の部材からなり、検体の免疫学的検査方法に用いる診断用キットである。
（１）請求項１又は２に記載のカラム
（２）上記カラムのフィルターを装着する方の先端部を、底部近くの内壁に密着可能である有底筒状の検体収容容器
（３）上記カラムの先端部の内方に装着可能なフィルター
（４）検体収容容器内に挿入可能な検査用ディップスティックThe invention described in claim 3 is a diagnostic kit which comprises at least the following members (1) to (4) and is used in an immunological test method for a specimen.
(1) The column according to claim 1 or 2 (2) A bottomed cylindrical specimen storage container (3), wherein the tip of the column to which the filter is attached can be closely attached to the inner wall near the bottom. (4) Dipstick for examination that can be inserted into the specimen container

請求項３の診断用キットでは、カラムと検体収容容器とは、ほとんど同じ形状で同じ大きさのものを組み合わせることが好ましい。すなわち、カラムの外径寸法を検体収容容器の内径寸法とをほとんど同じ大きさにすると共に、カラムの長さは検体収容容器の内法の長さに一致させ、検体収容容器へカラムを挿入したとき、カラムの先端が検体収容容器の底面まで挿入され、カラムの先端部の外壁と検体収容容器の底面近傍の内壁が密着すると共に、カラムの全体が検体収容容器の内壁にすっぽり嵌合するような状態になることが好ましい。 In the diagnostic kit according to the third aspect, it is preferable that the column and the specimen storage container are combined in almost the same shape and the same size. That is, the outer diameter of the column is made almost the same as the inner diameter of the sample container, the length of the column is made to match the length of the inner method of the sample container, and the column is inserted into the sample container When the tip of the column is inserted to the bottom surface of the sample container, the outer wall of the tip of the column and the inner wall near the bottom surface of the sample container are in close contact, and the entire column fits perfectly with the inner wall of the sample container. It is preferable that it becomes a state.

次に、請求項３の診断用キットに用いるフィルターについて説明する。
本発明において、フィルターは、カラムの内径とぴったり一致するような形状・寸法にすることが好ましい。また、フィルターには、ポリエチレン重合体濾布、ガラス繊維系濾紙、セルロース系濾紙などの一般の濾布又は濾紙として使用されている素材を単独で又は複数枚を重ね合わせて用いることが好ましい。例えば、カラムの頂部の方から見て、ポリエチレン重合体濾布からなるフィルター、ガラス繊維系濾紙からなるフィルター、ポリエチレン重合体濾布からなるフィルターというように、異なる種類の複数のフィルターを適宜組み合わせて多層構造にして装着しても差し支えない。Next, the filter used in the diagnostic kit of claim 3 will be described.
In the present invention, the filter is preferably shaped and dimensioned so as to exactly match the inner diameter of the column. In addition, it is preferable to use a material used as a general filter cloth or filter paper such as polyethylene polymer filter cloth, glass fiber filter paper, or cellulose filter paper, alone or in a plurality of layers. For example, when viewed from the top of the column, a filter made of polyethylene polymer filter cloth, a filter made of glass fiber filter paper, a filter made of polyethylene polymer filter cloth, and a plurality of different types of filters are appropriately combined. A multi-layer structure may be used.

本発明のカラムにフィルターを装着する方法は任意であるが、ずれや脱落が生じないように固定する必要がある。そのため、例えば、カラムの一方の先端からフィルターの厚み分よりやや大きい間隔を空けて、その先端部の内壁に数本の小突起を形成し、カラムの内径・形状にぴったり合わせて成形したフィルターをカラムの底面に嵌め込んで、その小突起に担持させるようにしてもよい。 Although the method of attaching the filter to the column of the present invention is arbitrary, it is necessary to fix the column so as not to be displaced or dropped. For this reason, for example, a filter is formed by forming a few small protrusions on the inner wall of the tip of the column at a distance slightly larger than the thickness of the filter from one end of the column, and precisely matching the inner diameter and shape of the column You may make it fit in the bottom face of a column, and make it carry | support to the small protrusion.

また、同請求項４に記載する発明は、インフルエンザウイルスの検査・診断に用いるための請求項３に記載の診断用キットである。 The invention described in claim 4 is the diagnostic kit according to claim 3 for use in the inspection and diagnosis of influenza virus.

さらに、同請求項５に記載する発明は、検体液又はその希釈液を収容してある有底筒状の検体収容容器に、一方の先端部にフィルターを装着した請求項１又は２に記載のカラムを、フィルターを装着した方の先端部から挿入して検体収容容器の底部近くの内壁にその先端部の外壁を密着させ、フィルターの挿入によって濾過された検体液又はその希釈液を検体収容容器外へ取り出すことなく、検体収容容器内方のカラム内へ検査用ディップスティックを挿入してその反応を観察し、検体中の抗原の有無や種別を検査・診断することを特徴とする検体の免疫学的検査方法である。 Furthermore, the invention described in claim 5 is the one described in claim 1 or 2, wherein a filter is attached to one end of the bottomed cylindrical sample storage container that stores the sample liquid or a diluted solution thereof. Insert the column from the tip of the filter-attached side, close the outer wall of the tip to the inner wall near the bottom of the sample storage container, and apply the sample liquid filtered by inserting the filter or its diluted solution to the sample storage container Immunity of a specimen characterized by inserting a test dipstick into the column inside the specimen storage container and observing the reaction without examining the presence or type of the antigen in the specimen. It is a physical examination method.

請求項５に記載するように、請求項１又は２に記載のカラムを、希釈検体液を収容してある有底筒状の検体収容容器に、そのカラムの、フィルターを装着した方の先端部から挿入して検体収容容器の底部近くの内壁にその先端部の外壁を密着させ、フィルターの挿入によって濾過された希釈検体液（すなわち、検体濾過液）を検体収容容器外へ取り出すことなく、検体収容容器内（カラム内）へ検査用ディップスティックを挿入してその反応を観察する方法を採ると、希釈検体液や検体濾過液に手を触れる危険性が回避される上、フィルターに必要以上の圧力がかからないので、従来法に比べて濾過に要する時間を短縮でき、ひいては、検査所要時間を短縮することができる。 As described in claim 5, the column of claim 1 or 2 is attached to a bottomed cylindrical sample storage container containing a diluted sample solution, and the tip of the column mounted with a filter. Without removing the diluted sample liquid (that is, the sample filtrate) filtered out by inserting the filter out of the sample storage container. The method of observing the reaction by inserting a test dipstick into the storage container (inside the column) avoids the risk of touching the diluted sample liquid or sample filtrate, and the filter is more than necessary. Since no pressure is applied, the time required for filtration can be shortened as compared with the conventional method, and thus the time required for inspection can be shortened.

請求項５に記載する検査方法は、本発明のカラムを構成部材に含む検査器具一式を用いて、ディップスティック式により検体の免疫学的な検査を行なう方法である。なお、ここで用いるディップスティックは、通常、検体の免疫学的検査ないし臨床検査に用いられるものでよく、その検査・診断方法も通常の検体の検査における検査・診断方法と異なるところはない。 The test method described in claim 5 is a method of performing an immunological test of a specimen by a dipstick method using a test tool set including the column of the present invention as a constituent member. Note that the dipstick used here may be normally used for immunological examinations or clinical examinations of specimens, and the examination / diagnosis method is not different from the examination / diagnosis methods used in normal specimen examinations.

さらに、同請求項６に記載する発明は、検体中の抗原がインフルエンザウイルスである請求項５に記載の検体の免疫学的検査方法である。 Furthermore, the invention described in claim 6 is the immunological test method for a specimen according to claim 5, wherein the antigen in the specimen is an influenza virus.

本発明の方法は、上記の構成であるから、希釈検体液を収容した検体収容容器内に本発明のカラムを挿入するだけで希釈検体液を濾過することができる。そのため、希釈検体液を収容した検体収容容器を希釈検体液の濾過のために押圧する必要がなく、濾過操作を楽に行なうことができる。その上、フィルターに余分な圧力がかからないので、濾過所要時間を短縮することができ、ひいては、検査に要する時間を短縮できる。また、本発明の検査方法は、希釈検体液を検体収容容器の外へ出さないで濾過できるので、希釈検体液や検体濾過液が検査者の手などに触れるおそれがなく、安全衛生面で不安のない検査を行なうことができる。さらに、本発明に係るカラムと検体収容容器の組み合わせは、ディップスティック式によるあらゆる検査方法に適用できるので、きわめて便利である。そのため、本発明の検査方法は、インフルエンザ感染の有無の検査・診断をはじめ、多くの臨床検査に応用することができ、検査方法のさらなる正確化、簡便化を図ることができると共に検査手法の安全性と衛生面をさらに向上させることができる。 Since the method of the present invention has the above-described configuration, the diluted sample liquid can be filtered simply by inserting the column of the present invention into the sample storage container containing the diluted sample liquid. For this reason, it is not necessary to press the specimen storage container containing the diluted specimen liquid for filtering the diluted specimen liquid, and the filtration operation can be performed easily. In addition, since no extra pressure is applied to the filter, the time required for filtration can be shortened, and thus the time required for inspection can be shortened. In addition, the test method of the present invention can filter the diluted sample solution without taking it out of the sample container, so there is no risk of the diluted sample solution or sample filtrate coming into contact with the hands of the examiner, which is unsafe for health and safety. It is possible to perform an inspection without any problems. Furthermore, the combination of the column and the specimen storage container according to the present invention is very convenient because it can be applied to all inspection methods using the dipstick method. Therefore, the test method of the present invention can be applied to many clinical tests including the test / diagnosis of the presence or absence of influenza infection, and the test method can be further refined and simplified, and the safety of the test method can be improved. It is possible to further improve sex and hygiene.

本発明のカラムは、上記の構成であるから、使用方法が簡便であり、各種のウイルス感染の有無を検査・診断する診断用キットに組み込んで用いるのに最適である。すなわち、本発明に係る検体の検査方法とその検査方法に用いる本発明のカラムを組み込んだ検査器具は、臨床検体、例えば、血液、尿、便、鼻孔・鼻腔・咽頭・鼻咽頭などを由来とする鼻汁液や鼻汁吸引液、痰或いはスワブ検体として収集された分泌液などの各種の検体を免疫学的に検査するのに有用であり、インフルエンザウイルスなどの感染症の検査や緊急簡易検査などに好適に用いることができる。特に、ヒトインフルエンザＡ型ウイルス又はヒトインフルエンザＢ型ウイルスの存在を短時間のうちに検出し、かつ、鑑別するための検査方法及びそのための検査器具として大いに有用である。 Since the column of the present invention has the above-described configuration, the method of use is simple, and it is optimal for use in a diagnostic kit for examining and diagnosing the presence or absence of various virus infections. That is, the test method of the sample according to the present invention and the test instrument incorporating the column of the present invention used in the test method are derived from clinical samples such as blood, urine, stool, nostril / nasal cavity / pharynx / nasopharynx, etc. It is useful for immunological examination of various specimens such as nasal discharge, nasal discharge, secretions collected as sputum or swab specimens, and for infectious diseases such as influenza virus and simple emergency tests It can be used suitably. In particular, the present invention is very useful as an inspection method and an inspection instrument for detecting and distinguishing the presence of human influenza A virus or human influenza B virus in a short time.

図１は本発明のカラムの一例の説明図である。（実施例１）FIG. 1 is an explanatory diagram of an example of the column of the present invention. Example 1 図２は本発明のカラムを検体収容容器に挿入する方法の説明図である。（実施例１・実施例２）FIG. 2 is an explanatory diagram of a method for inserting the column of the present invention into the specimen storage container. (Example 1 and Example 2) 図３は、本発明のカラムを用いた本発明の検査方法（ディップスティック式検査方法）の一例の説明図である。（実施例２）FIG. 3 is an explanatory diagram of an example of the inspection method (dipstick type inspection method) of the present invention using the column of the present invention. (Example 2) 図４は、イムノクロマトラテラルフロー式検査方法の一例の説明図である。（参考例１）FIG. 4 is an explanatory diagram of an example of an immunochromatographic lateral inspection method. (Reference Example 1)

Explanation of symbols

１：カラム、１１：その底側の先端、１２：その頂側の先端、１３：小孔
１４：その外壁に設けた鍔状のリブ
２：フィルター
３：検体収容容器、３１：そのキャップ装着部、３２：その鍔部
３３：その検体収容部
４：検体液を含ませた綿棒
５：先端部突出型のキャップ、５１：その小孔、５２：そのノズル
ａ：希釈検体液、ａ’：その検体濾過液
Ｘ：ディップスティック、
Ｙ：ラテラルフロー式テストデバイスDESCRIPTION OF SYMBOLS 1: Column, 11: The tip of the bottom side, 12: The tip of the top side, 13: Small hole 14: The rib-shaped rib provided in the outer wall 2: Filter 3: Sample storage container, 31: The cap mounting part 32: Its buttock 33: Its specimen storage part 4: Cotton swab containing the specimen liquid 5: Cap protruding tip 51: Its small hole 52: Its nozzle a: Diluted specimen liquid, a ′: Its Sample filtrate X: Dipstick,
Y: Lateral flow test device

以下、本発明を実施するための最良の形態を実施例と図面に基づいて説明する。
図１は本発明のカラムの一例の説明図、図２は本発明のカラムを検体収容容器に挿入する方法の説明図である。また、図３は、本発明のカラムを用いたを用いた本発明の検査方法（ディップスティック式検査方法）の一例の説明図である。さらに、図４は、参考例として、イムノクロマトラテラルフロー式によるときの検査方法の説明図である。Hereinafter, the best mode for carrying out the present invention will be described based on examples and drawings.
FIG. 1 is an explanatory diagram of an example of the column of the present invention, and FIG. 2 is an explanatory diagram of a method for inserting the column of the present invention into a specimen storage container. Moreover, FIG. 3 is explanatory drawing of an example of the inspection method (dipstick type | mold inspection method) of this invention using the column using this invention. Furthermore, FIG. 4 is explanatory drawing of the test | inspection method when based on an immunochromatographic flow type as a reference example.

＜本発明のカラムとその使用方法の一例＞
図１〜図３に基づいて、本発明のカラムとそれを用いた検体の検査方法の一例を説明する。図１において、１は、ポリエチレンからなる中空円筒状のカラムであり、１１はその底側の先端、１２は頂側の先端である。本実施例のカラム１は、図示のように、頂側の先端１２から底側の先端１１に向かってやや先細り状に成形してあるが、先端１１の外径は検体収容容器３の底面の内径とほとんど同じ大きさで、かつ、カラム１全体の長さも検体収容容器３の内法の長さと同じにしてある。また、カラム１には、先端１１の外壁に鍔状のリブ１４を一体成型的に設けてある。そのため、カラム１は、このリブ１４によって検体収容容器３の底部近くの内壁に容易に密着できる。また、カラム１は、先端１１の近傍の内壁にフィルター２（２枚のポリエチレン重合体濾布の間にガラス繊維系濾紙を挟んだもの）を嵌合してある。なお、１３はカラム１の上方に設けた空気抜きのための小孔である。このように、カラム１の上方に小孔１３を設けておくと、カラム１を検体収容容器３内に挿入するとき、カラム１の頂部１２を覆った状態で挿入することができるので便利である。<An example of the column of the present invention and its usage>
An example of the column of the present invention and a specimen inspection method using the column will be described with reference to FIGS. In FIG. 1, 1 is a hollow cylindrical column made of polyethylene, 11 is the bottom tip, and 12 is the top tip. The column 1 of this embodiment is formed in a slightly tapered shape from the top tip 12 to the bottom tip 11 as shown in the figure, but the outer diameter of the tip 11 is the bottom surface of the specimen container 3. The column 1 is almost the same size as the inner diameter, and the entire length of the column 1 is the same as the length of the internal method of the specimen container 3. Further, the column 1 is provided with a flange-like rib 14 on the outer wall of the tip 11 so as to be integrally formed. Therefore, the column 1 can be easily attached to the inner wall near the bottom of the specimen container 3 by the rib 14. The column 1 has a filter 2 (a glass fiber filter paper sandwiched between two polyethylene polymer filter cloths) fitted to the inner wall near the tip 11. Reference numeral 13 denotes a small hole provided above the column 1 for venting air. Thus, if the small hole 13 is provided above the column 1, it is convenient because the column 1 can be inserted into the sample storage container 3 while covering the top 12 of the column 1. .

図２の（イ）において、３は希釈検体液ａを収容してあるポリエチレン製の有底円筒状の検体収容容器であり、３１はそのキャップ装着部、３２は鍔部、３３は希釈検体液の収容部である。本実施例では、まず、あらかじめ希釈用の抽出液を入れてある検体収容容器３の検体収容部３３に検体液を含ませた綿棒４を挿入して検体液を抽出した後、検体収容容器３を指で押して綿球をしごきながら綿棒４を引き抜き、攪拌して検体液と抽出液が混和した希釈検体液ａを作る。 In FIG. 2 (a), 3 is a polyethylene bottomed cylindrical specimen storage container containing a diluted specimen liquid a, 31 is a cap mounting part, 32 is a collar part, and 33 is a diluted specimen liquid. It is a housing part. In the present embodiment, first, the sample liquid is extracted by inserting the cotton swab 4 containing the sample liquid into the sample container 33 of the sample container 3 in which the extraction liquid for dilution has been put in advance, and then the sample container 3 With a finger, the cotton swab 4 is pulled out while squeezing the cotton ball, and stirred to prepare a diluted sample solution a in which the sample solution and the extract are mixed.

次いで、図２の（ロ）（ハ）に示すように、カラム１を、フィルター２を装着した方の先端部から検体収容容器３内へ挿入して、カラム１の先端１１を検体収容容器３の底面まで下ろし、検体収容容器３の内壁にカラム１の外壁に設けたリブ１４を密着させる。このように、カラム１を検体収容容器３へ挿入すると、検体収容容器３内の希釈検体液ａはカラム１に装着されたフィルター２によって自然に濾過される。したがって、カラム１を検体収容容器３の底面まで挿入するだけで、検体収容容器３を押圧することなく、また、希釈検体液ａを検体収容容器３の外へ出さないままで、希釈検体液ａを濾過できる。そのため、希釈検体液ａや検体濾過液ａ’が検査者の手などに触れるおそれがなく、安全衛生面の不安がない検査を行なうことができる。なお、図２の（ハ）は、検体収容容器３内へカラム１を挿入した後の検体収容容器３の状態を示す。 Next, as shown in FIGS. 2B and 2C, the column 1 is inserted into the sample storage container 3 from the tip of the side where the filter 2 is attached, and the tip 11 of the column 1 is inserted into the sample storage container 3. The ribs 14 provided on the outer wall of the column 1 are brought into close contact with the inner wall of the specimen storage container 3. Thus, when the column 1 is inserted into the sample storage container 3, the diluted sample liquid a in the sample storage container 3 is naturally filtered by the filter 2 attached to the column 1. Therefore, only by inserting the column 1 to the bottom surface of the sample storage container 3, the diluted sample liquid a can be obtained without pressing the sample storage container 3 and without leaving the diluted sample liquid a outside the sample storage container 3. Can be filtered. Therefore, the diluted specimen liquid a and the specimen filtrate a 'can be inspected with no fear of touching the examiner's hand, etc., and there is no safety and health concern. 2C shows the state of the sample container 3 after the column 1 has been inserted into the sample container 3. FIG.

本実施例において、カラム１と検体収容容器３は、どちらもポリエチレン製のものを用いたが、本発明のカラムと検体収容容器は、ポリエチレン製に限るものでないことは勿論である。すなわち、本発明のカラムないし診断用キットは、カラムの先端を検体収容容器の底面まで下ろすことにより検体収容容器内の希釈検体液を濾過するためのものであるから、この目的に合うことを限度として、カラムと検体収容容器の材質は適宜選択が可能である。例えば、カラムが非可撓性の材質であっても、検体収容容器の材質が前記態様の濾過を実施できるものであればよい。それぞれの材質の選択の際の具体的な例を挙げると、次のとおりである。カラムについては可撓性の素材が好ましく、例えば、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリプロピレン、ＰＥＴ、ＡＢＳなどのプラスティック系の樹脂素材から適宜選択すればよい。他方、検体収容容器については、綿棒などから検体液をしぼり出す必要があるため、スクイズ性を有すると共に、加圧によって適度に変形させることができるような素材、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、シリコンゴム、熱可塑性エラストマー、塩化ビニルなどの樹脂素材が好ましく用いられる。また、プラスティック材の弾性率は、公知の方法で適宜調整して差し支えない。 In this embodiment, both the column 1 and the specimen storage container 3 are made of polyethylene, but it is needless to say that the column and specimen storage container of the present invention are not limited to those made of polyethylene. That is, the column or the diagnostic kit of the present invention is for filtering the diluted sample liquid in the sample storage container by lowering the tip of the column to the bottom surface of the sample storage container, and is limited to meet this purpose. As described above, the material of the column and the specimen storage container can be appropriately selected. For example, even if the column is made of an inflexible material, any material may be used as long as the material of the specimen storage container can perform the filtration in the above-described mode. Specific examples of the selection of each material are as follows. The column is preferably a flexible material, and may be appropriately selected from plastic resin materials such as polyethylene, polystyrene, polypropylene, PET, and ABS. On the other hand, for the specimen storage container, it is necessary to squeeze the specimen liquid from a cotton swab or the like, so that it has a squeeze property and can be appropriately deformed by pressurization, such as polyethylene, polypropylene, silicone rubber, Resin materials such as thermoplastic elastomer and vinyl chloride are preferably used. Further, the elastic modulus of the plastic material may be appropriately adjusted by a known method.

本実施例のカラム１には、その上方に小孔１３を設けたが、小孔１３は設けてあれば便利であるが、空気抜きとカラム挿入速度の調節が目的で設けるものであるから、必ず必要ということではない。また、検体収容容器３の鍔部３２も、必ず必要なものではない。 The column 1 of this embodiment has a small hole 13 above it, but it is convenient if the small hole 13 is provided, but it is provided for the purpose of venting and adjusting the column insertion speed. It is not necessary. Further, the collar portion 32 of the sample storage container 3 is not necessarily required.

本実施例のカラム１は、その頂側の先端１２から底側の先端１１に向かってやや先細り状に成形してあり、先端１１の外壁には鍔状のリブ１４をカラム１の本体と一体成型的に設けたものを用いたが、本発明のカラムは、このような形状に限るものではなく、カラムの先端部（フィルターを装着する方）の外壁を任意の手段によって検体収容容器の内壁に密着できるものであればよい。さらに、本実施例では、カラムと検体収容容器は円筒状のものを用いたが、カラムの外壁と検体収容容器の内壁とを密着できる形状であればよく、必ずしも円筒状である必要はない。例えば、カラムと検体収容容器は、角筒状でも半円筒状でも差し支えない。 The column 1 of this embodiment is formed in a slightly tapered shape from the top end 12 to the bottom end 11, and a hook-like rib 14 is integrated with the main body of the column 1 on the outer wall of the end 11. The column provided according to the present invention is used. However, the column of the present invention is not limited to such a shape. What is necessary is just to be able to adhere to. Further, in this embodiment, the column and the sample storage container are cylindrical, but any shape that allows the outer wall of the column and the inner wall of the sample storage container to be in close contact with each other is not necessary. For example, the column and the specimen storage container may have a rectangular tube shape or a semicylindrical shape.

＜本発明のカラムを用いたディップスティック式検査方法の一例＞
実施例１のカラム１（実施例１のフィルター２を装着したもの）を用いて、実施例１と同じ方法で検体収容容器３内に挿入し、希釈検体液ａを濾過して検体濾過液ａ’を得た。この検体濾過液ａ’を外方へ取り出すことなく、図３に示すように、検体収容容器３に挿入したカラム１内へディップスティックＸを挿入し、その反応を観察した。
図３の（イ）は、検体濾過液ａ’を収容してある検体収容容器３内方のカラム１内へディップスティックＸを挿入しようとしている状態を示し、図３の（ロ）は、その挿入後の状態を示す。図３の（ロ）に示すように、検体濾過液ａ’は、ディップスティックＸの先端から次第に浸透して、所要のデータを表示することとなる。この操作は、通常のディップスティック式検査方法と異なるところはないが、インフルエンザウイルスの検査方法を例にして、一応以下に説明する。<An example of a dipstick type inspection method using the column of the present invention>
Using the column 1 of Example 1 (with the filter 2 of Example 1 attached), the sample is inserted into the sample storage container 3 in the same manner as in Example 1, and the diluted sample solution a is filtered and the sample filtrate a 'I got. Without taking out the sample filtrate a ′ to the outside, as shown in FIG. 3, the dipstick X was inserted into the column 1 inserted into the sample container 3 and the reaction was observed.
FIG. 3 (a) shows a state where the dipstick X is about to be inserted into the column 1 inside the specimen storage container 3 that contains the specimen filtrate a ′. Shows the state after insertion. As shown in FIG. 3B, the specimen filtrate a ′ gradually permeates from the tip of the dipstick X and displays necessary data. This operation is not different from a normal dipstick type inspection method, but will be described below by taking an inspection method for influenza virus as an example.

検体収容容器３に収容してある検体濾過液ａ’に検査用ディップスティックＸ（参考例２で作製したもの）を挿入すると、検体濾過液ａ’中の抗原はディップスティックＸのサンプルパッドを通ってコンジュゲートパッドにて金コロイド標識抗体と複合体を形成し、メンブレンに移動して、メンブレン上に固定した抗インフルエンザＡ型抗体、抗インフルエンザＢ型抗体或いは抗マウスＩｇＧに対する抗体に特異的に結合する。余剰の液は、エンドパッドにて吸収される。インフルエンザ抗原があるとディップスティックの所定の部位に赤紫色のラインが観察されるので、抗原の有無や種別を鑑別、診断できる。 When the test dipstick X (prepared in Reference Example 2) is inserted into the sample filtrate a ′ stored in the sample storage container 3, the antigen in the sample filtrate a ′ passes through the sample pad of the dipstick X. The conjugate pad forms a complex with colloidal gold-labeled antibody, moves to the membrane, and specifically binds to anti-influenza A antibody, anti-influenza B antibody or anti-mouse IgG antibody immobilized on the membrane To do. Excess liquid is absorbed by the end pad. When an influenza antigen is present, a reddish purple line is observed at a predetermined part of the dipstick, so that the presence or type of the antigen can be identified and diagnosed.

本実施例は、上記の構成であるから、希釈検体液ａを収容した検体収容容器３内にカラム１を挿入するだけで希釈検体液ａを容易に濾過できる。そのため、希釈検体液ａを収容した検体収容容器３を希釈検体液ａの濾過のために押圧する必要がなく、フィルター２に余分な圧力がかからないので、検査を楽に行なうことができ、また、検査に要する時間を短縮できる。その上、本実施例では、希釈検体液ａを検体収容容器３の外へ出さないで濾過できると共に検体濾過液ａ’も外へ出さないで検体収容容器３内に保持できるので、希釈検体液ａや検体濾過液ａ’が検査者の手などに触れるおそれがなく、安全衛生面の不安がない検査を行なうことができる。 Since the present embodiment has the above-described configuration, the diluted sample liquid a can be easily filtered simply by inserting the column 1 into the sample storage container 3 containing the diluted sample liquid a. Therefore, it is not necessary to press the specimen container 3 containing the diluted specimen liquid “a” for filtering the diluted specimen liquid “a”, and no extra pressure is applied to the filter 2, so that the examination can be performed easily. Can be shortened. In addition, in the present embodiment, the diluted sample liquid a can be filtered without going out of the sample storage container 3 and the sample filtrate a ′ can be held in the sample storage container 3 without going out. It is possible to perform a test with no fear of safety and hygiene, since there is no fear that a or the specimen filtrate a ′ touches the hand of the examiner.

《参考例１》
＜イムノクロマトラテラルフロー式検査方法の一例＞
参考までに、イムノクロマトラテラルフロー式検査方法の一例を図２と図４に基づいて説明する。
実施例１と同じ方法により検体収容容器３内に希釈検体液ａを収容する。この希釈検体液ａを収容した検体収容容器３のキャップ装着部に、先端に小孔５１を有するノズル５２を備えた先端部突出型のキャップ５（実施例１で用いたフィルター２を装着してある。）を嵌着し、小孔５１を下にして検体収容容器３を指で押して小孔５１から検体濾過液ａ’をテストデバイスＹへ数滴滴下する。図４の（イ）は、検体収容容器３にキャップ５を装着する状態を示す。また、図４の（ロ）は、検体収容容器３からキャップ５に装着したフィルター２を通して検体濾過液ａ’をテストデバイスＹに滴下する状態を示す。以降の操作は、通常のイムノクロマトラテラルフロー式検査方法におけるテストデバイスの操作と異なるところはないが、インフルエンザウイルスの検査方法を例にして、以下に一通り説明する。<< Reference Example 1 >>
<Example of immunochromatographic flow inspection method>
For reference, an example of an immunochromatographic flow inspection method will be described with reference to FIGS.
The diluted sample liquid a is stored in the sample storage container 3 by the same method as in the first embodiment. The cap mounting portion of the sample storage container 3 that stores the diluted sample liquid a has a tip protruding cap 5 (with the filter 2 used in Example 1 mounted) that includes a nozzle 52 having a small hole 51 at the tip. ), The sample container 3 is pushed with a finger with the small hole 51 facing downward, and a few drops of the sample filtrate a ′ are dropped from the small hole 51 onto the test device Y. 4A shows a state in which the cap 5 is attached to the sample storage container 3. FIG. 4B shows a state in which the sample filtrate a ′ is dropped from the sample storage container 3 to the test device Y through the filter 2 attached to the cap 5. FIG. The subsequent operation is not different from the operation of the test device in the normal immunochromatographic flow type inspection method, but will be described in the following by taking the influenza virus inspection method as an example.

本参考例のテストデバイスＹ（参考例２で作製したもの）は、その表面のサンプル滴下用の開口部に検体濾過液ａ’を滴下すると、検体濾過液ａ’中の抗原は、サンプルパッドを通って、コンジュゲートパッドにて金コロイド標識抗インフルエンザＡ型マウス抗体又は金コロイド標識抗インフルエンザＢ型マウス抗体と反応して複合体を形成してメンブレン上を移動する。この複合体は、メンブレン上に固相化された抗インフルエンザＡ型抗体又は抗インフルエンザＢ型抗体に結合すると赤紫色のラインとして観察される。一方、余剰の金コロイド標識抗インフルエンザＡ型マウス抗体又は金コロイド標識抗インフルエンザＢ型マウス抗体は、メンブレン上に固相化された抗マウスＩｇＧ抗体に結合して赤紫色のコントロールラインとして観察される。このようにインフルエンザ抗原があると、テストデバイスの所定の部位に赤紫色のラインが観察されるので、抗原の有無や種別を鑑別・診断できる。 In the test device Y of this reference example (produced in Reference Example 2), when the specimen filtrate a ′ is dropped into the sample dropping opening on the surface, the antigen in the specimen filtrate a ′ Then, it reacts with the gold colloid-labeled anti-influenza A mouse antibody or the gold colloid-labeled anti-influenza B mouse antibody at the conjugate pad to form a complex and move on the membrane. This complex is observed as a red-purple line when bound to the anti-influenza A antibody or anti-influenza B antibody immobilized on the membrane. On the other hand, surplus gold colloid-labeled anti-influenza A mouse antibody or gold colloid-labeled anti-influenza B mouse antibody is observed as a red-purple control line by binding to anti-mouse IgG antibody immobilized on a membrane. . In this way, when there is an influenza antigen, a red-purple line is observed at a predetermined portion of the test device, so that the presence or type of the antigen can be identified and diagnosed.

《参考例２》
以下、本発明で用いるその他の部材の作り方の一例について説明する。
＜コンジュゲートパッドの作製法の一例＞
広く知られている金コロイド調製法により金コロイドを調製した後、抗インフルエンザＡ型抗体及び抗インフルエンザＢ型抗体を既知の方法で結合させて、それぞれの金コロイド標識抗体が混合している状態の金コロイド標識抗体混合溶液を作成した。すなわち、リン酸水素二ナトリウム２水和物１．０８ｇ、リン酸水素二カリウム０．３７４ｇ、塩化ナトリウム８．７６ｇ、アジ化ナトリウム０．９ｇに精製水７００ｍＬを加えて溶解し、ｐＨ７．４に調整した。さらにＴｗｅｅｎ２０（キシダ化学）２．０ｇ、ショ糖１０ｇ、ウシ血清アルブミン２．０ｇ、金コロイド標識抗Ａ型インフルエンザマウスモノクロナール抗体１４ｍｇ、金コロイド標識抗Ｂ型インフルエンザマウスモノクロナール抗体１０．５ｍｇを加えて溶解し、精製水を加えて全量を１０００ｍＬとした。
この溶液をコンジュゲートパッドに塗布した後、自然乾燥又は凍結乾燥させた。<< Reference Example 2 >>
Hereinafter, an example of how to make other members used in the present invention will be described.
<Example of method for preparing conjugate pad>
After preparing colloidal gold by a widely known gold colloid preparation method, anti-influenza A antibody and anti-influenza B antibody are bound by a known method, and each colloidal gold labeled antibody is mixed. A colloidal gold labeled antibody mixed solution was prepared. That is, dissolve by adding 700 mL of purified water to 1.08 g of disodium hydrogen phosphate dihydrate, 0.374 g of dipotassium hydrogen phosphate, 8.76 g of sodium chloride, and 0.9 g of sodium azide to obtain pH 7.4. It was adjusted. Further, 2.0 g of Tween 20 (Kishida Chemical), 10 g of sucrose, 2.0 g of bovine serum albumin, 14 mg of colloidal gold-labeled anti-influenza mouse monoclonal antibody, and 10.5 mg of colloidal gold-labeled anti-influenza B mouse monoclonal antibody were added. And purified water was added to make up a total volume of 1000 mL.
After this solution was applied to the conjugate pad, it was air-dried or freeze-dried.

＜ディップスティックの作製例＞
選択された流速条件に合致したメンブランに抗インフルエンザＡ型マウス抗体及び抗インフルエンザＢ型マウス抗体並びに抗マウスＩｇＧに対する抗体のそれぞれ至適量を所定の場所にラインとして塗布する。塗布間隔及び塗布量は、それぞれの抗体の反応後の視認性を考慮して決定すればよい。なお、抗マウスＩｇＧに対する抗体の代わりにヒトインフルエンザＡ型抗原及びＢ型抗原の混合体を選択してもよい。
このメンブランをホワイトビニルのベース型紙上に配置した後、一方の側にコンジュゲートパッドを重ね、さらにサンプルパッドを重ねる。他方の側には余剰の反応物を吸収するエンドパッドを重ねた後、全体をクリアマイラーで被覆し、幅約５ｍｍの短冊状にカットすることで、ディップスティックが完成する。<Example of dipstick production>
Optimum amounts of anti-influenza A mouse antibody, anti-influenza B mouse antibody, and anti-mouse IgG antibody are applied as a line at a predetermined location to the membrane that matches the selected flow rate condition. The application interval and the application amount may be determined in consideration of the visibility after reaction of each antibody. A mixture of human influenza A antigen and B antigen may be selected instead of the antibody against anti-mouse IgG.
After the membrane is placed on the white vinyl base paper, the conjugate pad is overlaid on one side and the sample pad is overlaid. On the other side, an end pad that absorbs surplus reactants is stacked, and then the whole is covered with clear mylar and cut into a strip of about 5 mm width to complete a dipstick.

＜イムノクロマトラテラルフロ−式テストデバイスの作製例＞
選択した流速条件に合致するメンブランに抗インフルエンザＡ型マウス抗体及び抗インフルエンザＢ型マウス抗体並びに抗マウスＩｇＧに対する抗体のそれぞれ至適量をテストデバイスの所定の場所にラインとして塗布した。その際、塗布する形状は任意の形状とすることが可能であり、反応後の視認性を考慮して塗布間隔及び塗布量を決定した。また、検体濾過液を滴下する開口部（サンプル滴下部）は、円形、楕円形、長四角形、菱形、台形などいずれでもよい。なお、抗マウスＩｇＧに対する抗体の代わりにヒトインフルエンザＡ型抗原及びＢ型抗原の混合体を選択してもよい。このメンブランをホワイトビニルのベース型紙上に配置した後、一方の側にコンジュゲートパッドを重ね、さらにサンプルパッドを重ねる。他方の側には余剰の反応物を吸収するエンドパッドを重ねた後、所定の幅に切断して、プラスティックカセットに組み込むと、イムノクロマトラテラルフロー式のテストデバイスが完成する。<Example of production of immunochromatographic flow test device>
Optimum amounts of anti-influenza A mouse antibody, anti-influenza B mouse antibody, and anti-mouse IgG antibody were applied as a line to a predetermined location of the test device on a membrane meeting the selected flow rate conditions. In that case, the shape to apply | coat can be made into arbitrary shapes, The application space | interval and the application amount were determined in consideration of the visibility after reaction. Further, the opening (sample dropping part) for dropping the specimen filtrate may be any of a circle, an ellipse, a long rectangle, a rhombus, a trapezoid, and the like. A mixture of human influenza A antigen and B antigen may be selected instead of the antibody against anti-mouse IgG. After the membrane is placed on the white vinyl base paper, the conjugate pad is overlaid on one side and the sample pad is overlaid. An end pad that absorbs surplus reactants is stacked on the other side, then cut to a predetermined width, and incorporated into a plastic cassette to complete an immunochromatographic flow test device.

＜検体希釈用の抽出液の調製例＞
緩衝液をベースとして界面活性剤などを添加して調製する。すなわち、リン酸水素二ナトリウム２水和物１．０８ｇ、リン酸水素二カリウム０．３７４ｇ、塩化ナトリウム８．７６ｇ、アジ化ナトリウム０．９ｇに精製水７００ｍＬを加えて溶解し、ｐＨ７．４に調整した。これに、ウシ血清アルブミン２．０ｇを加えて溶解し、精製水を加えて全量を１０００ｍＬとした。<Example of preparation of extract for specimen dilution>
It is prepared by adding a surfactant or the like based on a buffer solution. That is, dissolve by adding 700 mL of purified water to 1.08 g of disodium hydrogen phosphate dihydrate, 0.374 g of dipotassium hydrogen phosphate, 8.76 g of sodium chloride, and 0.9 g of sodium azide to obtain pH 7.4. It was adjusted. To this, 2.0 g of bovine serum albumin was added and dissolved, and purified water was added to make up a total volume of 1000 mL.

以下、試験例をもって本発明の検査方法をさらに説明する。
《試験例１》
＜本発明の検査方法と従来法の検査方法の精度確認試験＞
（１）試験方法
イ．希釈検体液の調製
ボランティアから採取した鼻腔吸引液に浸した綿棒を、あらかじめ一定量の検体希釈用の抽出液（例えば参考例２に示す抽出液）を入れた検体収容容器に入れ、綿球内の鼻腔吸引液をよく抽出して、希釈検体液（前処理検体液）を調製した。
ロ．フィルターの作製
ガラス繊維系の濾紙をポリエチレン重合体濾布の上下に重ねてフィルターとした。
ハ．ディップスティックとテストデバイス
参考例２で作製したディップスティックと同ラテラルフロー式テストデバイスを用いた。
ニ．試験方法
上記希釈検体液を３分して、Ａ．本発明の検査方法（ディップスティック式）、Ｂ．カラムを用いないディップスティック式検査方法、Ｃ．イムノクロマトラテラルフロー式検査方法の３通りの方法によって、希釈検体液の検査を行なった。Hereinafter, the inspection method of the present invention will be further described with test examples.
<< Test Example 1 >>
<Accuracy confirmation test of inspection method of the present invention and conventional inspection method>
(1) Test method a. Preparation of diluted specimen liquid A cotton swab dipped in nasal aspirate collected from a volunteer is placed in a specimen storage container containing a predetermined amount of specimen dilution extract (for example, the extract shown in Reference Example 2), and the inside of a cotton ball The nasal cavity aspirate was well extracted to prepare a diluted sample solution (pretreatment sample solution).
B. Preparation of filter Glass fiber filter paper was layered on top and bottom of a polyethylene polymer filter cloth to form a filter.
C. Dipstick and test device The dipstick prepared in Reference Example 2 and the same lateral flow test device were used.
D. Test method The diluted sample solution was mixed for 3 minutes. B. Inspection method of the present invention (dipstick type) Dipstick inspection method without using column, C.I. The diluted specimen liquid was inspected by three methods of immunochromatographic flow type inspection method.

すなわち、本試験例における検査方法は、以下の３通りである。
Ａ．本発明の検査方法
実施例１で用いたカラム（実施例１のフィルターを装着したもの）を、上記希釈検体液を収容してある検体収容容器（実施例１のもの）内に挿入して、実施例１と同じ方法によって検体収容容器内に検体濾過液を作り、実施例２の検査方法によって検体収容容器内方のカラム内に参考例２で作製したディップスティックを挿入して、反応を観察した。その結果を表１に示す
Ｂ．カラムを用いないディップスティック式検査方法
上記希釈検体液を収容した検体収容容器内へ（カラムを挿入しないで）直接上記ディップスティックを挿入して、反応を観察した。その結果を表２に示す。
Ｃ．イムノクロマトラテラルフロー式検査方法
頂部に小孔を有するキャップ（参考例１で用いたもの）に実施例１で用いたフィルターを装着して、上記希釈検体液を収容した検体収容器に被せ、希釈検体液を濾過しながら、参考例２で作製したテストデバイス上のサンプル滴下部に５滴滴下して反応を観察した。その結果を表３に示す。That is, the inspection methods in this test example are the following three methods.
A. Test method of the present invention The column used in Example 1 (with the filter of Example 1 attached) is inserted into a sample container (in Example 1) containing the diluted sample solution, Prepare the sample filtrate in the sample container by the same method as Example 1, and insert the dipstick prepared in Reference Example 2 into the column inside the sample container by the test method of Example 2 and observe the reaction. did. The results are shown in Table 1. Dipstick type inspection method without using a column The above dipstick was directly inserted into a sample container (without inserting a column) containing the diluted sample solution, and the reaction was observed. The results are shown in Table 2.
C. Immunochromatographic flow test method A cap having a small hole at the top (used in Reference Example 1) is fitted with the filter used in Example 1 and covered with a specimen container containing the diluted specimen liquid, and diluted specimen. While filtering the liquid, 5 drops were dropped on the sample dropping part on the test device prepared in Reference Example 2, and the reaction was observed. The results are shown in Table 3.

（２）試験結果
試験結果は表１〜表３に示すとおりである。
表１と表２の比較より、同一のディップスティックを用いた検査にも関わらず、フィルターを用いない場合は、陰性検体４８例中の３例で、誤ってＢ型陽性を示した。
また、表１と表３から、本発明の検査法は、イムノクロマトラテラルフロー式の検査方法とほぼ同じ結果が得られることが確認された。(2) Test results The test results are as shown in Tables 1 to 3.
From the comparison between Table 1 and Table 2, in spite of the test using the same dipstick, in the case of not using the filter, 3 out of 48 negative samples erroneously showed B type positive.
Further, from Tables 1 and 3, it was confirmed that the test method of the present invention yielded almost the same results as the immunochromatographic flow test method.

（３）所見
上記の試験結果から、本発明の検査方法は、精度が高く、かつ、参考例として示したラテラルフロー式検査方法と同等の精度であることが明らかとなった。(3) Findings From the above test results, it has been clarified that the inspection method of the present invention has high accuracy and the same accuracy as the lateral flow inspection method shown as a reference example.

《試験例２》
＜本発明の方法とイムノクロマトラテラルフロー式検査方法の検査所要時間比較試験＞
（１）試験方法
試験例１で用いた本発明の検査方法と同じくイムノクロマトラテラルフロー式検査方法について、検査所要時間を計測・比較した。すなわち、本発明の検査方法では、希釈検体液の調製開始からディップスティックを挿入するまでの所要時間を、また、イムノクロマトラテラルフロー式検査方法では、希釈検体液の調製開始からテストデバイスに希釈検体液を５滴滴下し終わるまでの所要時間をそれぞれ計測した。計測方法は、各試験方法ごとに５名のパネラー（全員が検体の免疫学的検査方法の未経験者）を選んで両試験を行なわせ、所要時間を計測した。<< Test Example 2 >>
<Examination time comparison test between the method of the present invention and the immunochromatographic flow inspection method>
(1) Test method The time required for the test was measured and compared for the immunochromatographic flow test method similar to the test method of the present invention used in Test Example 1. That is, in the test method of the present invention, the time required from the start of the preparation of the diluted sample solution to the insertion of the dipstick is determined. In the immunochromatographic flow test method, the diluted sample solution is supplied from the start of the preparation of the diluted sample solution to the test device. The time required to finish dropping 5 drops of each was measured. As the measurement method, five panelists (all of them were inexperienced in the immunological examination method of the specimen) were selected for each test method, and both tests were performed, and the required time was measured.

（２）試験結果
表４に本発明の検査方法による試験結果を、表５にイムノクロマトラテラルフロー式検査方法による試験結果をそれぞれ示す。また、表６にそれぞれの試験方法による平均所要時間を示す。(2) Test results Table 4 shows the test results obtained by the inspection method of the present invention, and Table 5 shows the test results obtained by the immunochromatographic lateral inspection method. Table 6 shows the average time required for each test method.

（３）所見
表６から、本発明の検査方法は、イムノクロマトラテラルフロー式検査方法に比べて、検査所要時間を大幅に短縮できることが確認された。(3) Findings From Table 6, it was confirmed that the inspection method of the present invention can significantly reduce the time required for inspection compared to the immunochromatographic flow inspection method.

以上、詳細に説明するとおり、本発明に係る検体の検査方法とその方法に用いる検査器具は、臨床検査、例えば、血液、尿、便、鼻孔・鼻腔・咽頭・鼻咽頭などを由来とする鼻汁液や鼻汁吸引液、痰或いはスワブ検体として収集された分泌液などの各種の検体を免疫学的に検査するのに有用であり、例えば、インフルエンザウイルスなどの感染症の検査や緊急簡易検査に用いるのに好適である。特に、ヒトインフルエンザＡ型ウイルス又はヒトインフルエンザＢ型ウイルスの存在を短時間のうちに検出し、かつ、鑑別するための方法及びその方法に用いる検査器具として大いに有用である。

As described above in detail, the specimen testing method and the testing instrument used for the method according to the present invention are clinical tests such as blood, urine, stool, nasal discharge derived from nostrils / nasal cavity / pharynx / nasopharynx, etc. It is useful for immunological examination of various specimens such as fluid, nasal aspirate, sputum or swab collected as a specimen, and is used, for example, for examination of infectious diseases such as influenza virus and emergency simple examination It is suitable for. In particular, the present invention is very useful as a method for detecting and distinguishing the presence of human influenza A virus or human influenza B virus in a short time and a test instrument used in the method.

Claims

A hollow cylinder that can be fitted with a filter on the inside of one tip, and when the filter is inserted into the bottomed cylindrical specimen storage container, the outer wall of the tip is accommodated in the specimen A column for use in an immunological test method for a specimen that can be in close contact with the inner wall near the bottom of the container.

2. The column according to claim 1, wherein a rib is provided on the outer wall of the tip of the side to which the filter is attached to adhere to the inner wall near the bottom of the specimen storage container.

A diagnostic kit comprising at least the following members (1) to (4) and used in a method for immunological examination of a specimen.
(1) The column according to claim 1 or 2 (2) A bottomed cylindrical specimen storage container (3), wherein the tip of the column to which the filter is attached can be closely attached to the inner wall near the bottom. (4) A dipstick for testing that can be inserted into the specimen container

The diagnostic kit according to claim 3 for use in testing for influenza virus.

The column according to claim 1 or 2, wherein a filter is attached to one end of the bottomed cylindrical sample storage container containing the sample liquid or a diluted solution thereof, from the tip of the side where the filter is attached. Insert and close the outer wall at the tip of the inner wall near the bottom of the sample container, and remove the sample liquid filtered by inserting the filter or its diluted solution outside the sample container. A method for immunological examination of a specimen characterized by inserting a test dipstick into a column, observing the reaction, and examining and diagnosing the presence and type of an antigen in the specimen.

The method for immunological examination of a specimen according to claim 5, wherein the antigen in the specimen is influenza virus.