JPWO2004075939A1 - Regenerative medical material containing biodegradable resin and calcium phosphate and method for producing the same - Google Patents
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Abstract
本発明は、欠損した骨組織や歯組織、その他の生体組織を再生させる際に好適に用いられる、吸収性がある再生医療用材料に関する。本発明の再生医療用材料は、生分解性樹脂９９．９〜１０重量％と、前記生分解性樹脂に練り込まれたリン酸カルシウム０．１〜９０重量％とを含有することを特徴とする。本発明によれば、組織修復物質の鍵となるリン酸カルシウムを基材に任意の比率で含有させることができ、また、安全性、機能性及び生体適合性に優れる。The present invention relates to an absorptive regenerative medical material that is suitably used for regenerating deficient bone tissue, dental tissue, or other living tissue. The regenerative medical material of the present invention is characterized by containing 99.9 to 10% by weight of a biodegradable resin and 0.1 to 90% by weight of calcium phosphate kneaded in the biodegradable resin. According to the present invention, calcium phosphate, which is a key of tissue repair material, can be contained in a base material at an arbitrary ratio, and is excellent in safety, functionality and biocompatibility.
Description
本発明は、欠損した骨組織や歯組織、その他の生体組織を再生させる際に好適に用いられる、吸収性がある再生医療用材料（「組織修復材」ともいう。）に関する。 The present invention relates to an absorptive regenerative medical material (also referred to as “tissue repair material”) that is suitably used for regenerating deficient bone tissue, tooth tissue, or other living tissue.
近年、顎骨の欠損や歯組織の欠損等の組織欠損・障害の治療法として、欠損した顎骨や歯組織を再生させる再生医療が注目されている。このような再生医療においては、通常、生体適合性がありかつ生体内で徐々に分解・吸収される生分解性材料がマトリックス（基材）として用いられる。
一方、生分解性プラスチックとしては、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリカプロラクトンなどの多くのものが知られている（生分解性プラスチック研究会編、編者代表土肥義治、「生分解性プラスチックハンドブック」、株式会社エヌ・ティー・エス、１９９５年５月２６日初版第１刷発行）。
また、ポリ乳酸、及びこれと他の生体分解吸収性ポリマーとの共重合体（又はＤ体、Ｌ体のステレオコンプレックス）を織成もしくは多孔質状に成形し、あるいはこれをハイドロキシアパタイトで被覆した下顎再建材や下顎再建用網トレーも提案されている（特開平５−４２２０２号公報および特開平５−３０９１０３号公報参照）。
しかし、上記公開特許に開示されている材料（再建材）は、生分解性を有するが、その生体内での分解速度を制御することは困難である。また、生体内におけるこれらの生分解性樹脂の分解速度は、時間の経過と共に加速され、マトリックス内部の酸性度が高くなり、そのマトリックスを埋め込んだ部位が炎症を起こしやすくなる問題がある。さらに、通常、マトリックス中には組織の修復に必要な物質のリン酸カルシウムを含有させるが、その含有率が低いという問題がある。In recent years, regenerative medicine for regenerating deficient jaw bones and dental tissues has attracted attention as a treatment method for tissue defects and disorders such as jaw bone defects and tooth tissue defects. In such regenerative medicine, a biodegradable material that is biocompatible and gradually decomposes and absorbs in vivo is generally used as a matrix (base material).
On the other hand, many biodegradable plastics such as polylactic acid, polyglycolic acid, and polycaprolactone are known (edited by Biodegradable Plastics Research Committee, Editor-in-Chief Yoshiharu Doi, “Biodegradable Plastics Handbook”, NTS Co., Ltd., issued on May 26, 1995, first edition first print).
In addition, polylactic acid and a copolymer of this and other biodegradable polymers (or stereocomplexes of D-form and L-form) are formed into a woven or porous shape or coated with hydroxyapatite. A mandibular reconstruction material and a mesh tray for mandibular reconstruction have also been proposed (see Japanese Patent Laid-Open Nos. 5-42202 and 5-309103).
However, although the material (reconstruction material) disclosed in the above-mentioned published patent has biodegradability, it is difficult to control the degradation rate in vivo. In addition, the degradation rate of these biodegradable resins in a living body is accelerated with the passage of time, and there is a problem that the acidity inside the matrix becomes high, and the site in which the matrix is embedded tends to cause inflammation. In addition, the matrix usually contains calcium phosphate, a substance necessary for tissue repair, but there is a problem that the content is low.
本発明が解決しようとする課題は、このようなリン酸カルシウムを任意の比率で含有することができ、安全性、機能性及び生体適合性に優れた再生医療用材料（組織修復材）を提供することにあり、また別の課題はそのような再生医療用材料の簡便な製造方法を提供することにある。
上記課題を解決するため、本発明者らは種々検討した結果、本発明者らの一人が先に開発した「球状複合粉体の製造方法」（特開２００２−１１４９０１号公報）の技術を発展させることで、本発明を完成することができた。すなわち、本発明は、
生分解性樹脂９９．９〜１０重量％と、その生分解性樹脂に練り込まれたリン酸カルシウム０．１〜９０重量％とを含有することを特徴とする再生医療用材料、である。
また、本発明は、このような再生医療用材料の簡便な製造方法も提供する。すなわち、その製造方法は、次の工程（ｉ）〜（ｉｉｉ）、
（ｉ）（ａ）生分解性樹脂９９．９〜１０重量部、
（ｂ）リン酸カルシウム０．１〜９０重量部、及び
（ｃ）前記生分解性樹脂及び前記リン酸カルシウムと相溶しない適量の水溶性分散媒、
を含む混合物を、前記生分解性樹脂の軟化点以上に加熱混合する工程、
（ｉｉ）前記軟化点より低い温度に冷却する工程、及び
（ｉｉｉ）水性の展開溶媒を用いて前記水溶性分散媒を除去（水洗）する工程、
を経て行うものである。
本発明によれば、組織修復物質の鍵となるリン酸カルシウムを基材に任意の比率で含有させることができ、また、安全性、機能性及び生体適合性に優れ、長時間経過後には、それ自身は吸収されて消失する再生医療用材料（組織修復材）を提供することができる。The problem to be solved by the present invention is to provide a regenerative medical material (tissue repair material) that can contain such calcium phosphate in any ratio and is excellent in safety, functionality, and biocompatibility. Another object is to provide a simple method for producing such a material for regenerative medicine.
In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors have made various studies, and as a result, developed the technique of “Production Method of Spherical Composite Powder” (Japanese Patent Application Laid-Open No. 2002-114901) previously developed by one of the present inventors. By doing so, the present invention was completed. That is, the present invention
A regenerative medical material comprising 99.9 to 10% by weight of a biodegradable resin and 0.1 to 90% by weight of calcium phosphate kneaded in the biodegradable resin.
The present invention also provides a simple method for producing such a material for regenerative medicine. That is, the manufacturing method includes the following steps (i) to (iii),
(I) (a) 99.9 to 10 parts by weight of a biodegradable resin,
(B) 0.1 to 90 parts by weight of calcium phosphate, and (c) an appropriate amount of a water-soluble dispersion medium that is incompatible with the biodegradable resin and the calcium phosphate,
A step of heating and mixing the mixture containing a biodegradable resin above the softening point thereof,
(Ii) a step of cooling to a temperature lower than the softening point, and (iii) a step of removing (washing with water) the water-soluble dispersion medium using an aqueous developing solvent.
It is something that goes through.
According to the present invention, calcium phosphate, which is a key of tissue repair material, can be contained in a base material at an arbitrary ratio, and is excellent in safety, functionality and biocompatibility, and after a long time, itself. Can provide a regenerative medical material (tissue repair material) that is absorbed and disappears.
本発明の再生医療用材料は、先に述べたように、生分解性樹脂９９．９〜１０重量％と、その生分解性樹脂に練り込まれたリン酸カルシウム０．１〜９０重量％とを含有する再生医療用材料である。以下、本発明を更に詳細に説明する。
〔生分解性樹脂（基材）〕
本発明で使用する生分解性樹脂（基材）は、本発明の再生医療用材料を簡便に製造し、また、安全性を高めるため、生分解性かつ熱可塑性樹脂（生分解性熱可塑性樹脂）であることが好ましい。
そのような生分解性熱可塑性樹脂としては、脂肪酸ポリエステル（ポリ乳酸を含む）、天然原料を化学的に変成した特定の生分解性熱可塑性樹脂、微生物生産プラスチック及び合成プラスチックが典型的な樹脂であるが、これらに限定されるものではない。
脂肪族ポリエステルとは、分子内のすべての炭素原子が一列の鎖状に繋がる構造で、分子内の炭素原子は枝分かれ構造を有していても良いが、環式構造を含まないポリエステルをいう。脂肪族ポリエステルは工業的な規模で生産されており、本発明の実施に好ましい脂肪族ポリエステルとしては開環重合法によるポリ乳酸（ＰＬＡ）、及び発酵法によるポリヒドロキシブチレート／ヴァリレート共重合体（ＰＨＢ／Ｖ）があげられる。
天然原料を化学的に変成した特定の生分解性熱可塑性樹脂の例としては、セルロースアセテートが挙げられる。アセテート置換度が、２．５以下のセルロースアセテートは生分解性熱可塑性樹脂として用いることができる。このセルロースアセテートを使用する場合には可塑剤を併用しても良い。
微生物生産プラスチックとしては、微生物ポリエステル、微生物多糖及び微生物ポリアミノ酸が代表的であり、微生物ポリエステルが本発明に好ましい。
微生物ポリエステルの例としては、ポリ［（Ｒ）−３−ヒドロキシブチラート（略して、Ｐ（３ＨＢ））］が挙げられる。微生物共重合ポリエステル、例えば３−ヒドロキシブチラートと３−ヒドロキシバリレートの共重合体（略して、Ｐ（３ＨＢ−ｃｏ−３ＨＶ））等は、単量体組成に依存してその物性を幅広く変化させることができるので、更に好ましく使用できる。
生分解性を付与したメタクリル酸エステル樹脂の例としては、ピリジニウム基を導入したポリメタクリル酸メチルがある。
生分解性コポリマーには、コポリエステル、コポリエステルエーテル、コポリエステルカーボネイト、コポリエステルアミドがある。
上記生分解性熱可塑性樹脂については、生分解性プラスチック研究会編、編者代表土肥義治、「生分解性プラスチックハンドブック」、株式会社エヌ・ティー・エス、１９９５年５月２６日初版第１刷発行、に詳細に記載されている。
入手可能な生分解性熱可塑性樹脂の種類とその製造メーカーを表１に列挙する。
また、生分解性樹脂と他の樹脂とをブレンドして用いてもよく、種々の充填剤を含有するものであってもよい。
〔リン酸カルシウム〕
本発明の再生医療用材料又はその製造方法では、生分解性樹脂と共にリン酸カルシウムを用いる。リン酸カルシウムとしては、ヒドロキシアパタイト、α−リン酸カルシウム、β−リン酸カルシウム、γ−リン酸カルシウム、リン酸八カルシウム等を用いることができる。用いるリン酸カルシウムは２種類以上を混合して用いてもよい。
なお、リン酸カルシウムは、骨組織や歯組織の主要な無機塩の供給源となる作用のほかに、基材への細胞の付着を助け、細胞増殖を促進する作用がある。また、生分解性樹脂が分解して生じる酸を緩和する作用もある。
本発明で用いるリン酸カルシウムの製造方法には特に制限はないが、乾式法、水熱法、湿式法で製造され、熱処理を行ってもよい。
本発明で用いるリン酸カルシウムの平均粒子径は、特に限定されないが０．０１μｍ以上５００μｍ以下が好ましく、０．１μｍ以上５００μｍ以下が更に好ましく使用できる。
本発明の再生医療用材料におけるリン酸カルシウムの含有率としては、０．１〜９０重量％、好ましくは１〜５重量％、より好ましくは２〜３重量％である。
本発明の再生医療用材料の好ましい形状（構造）の一つは微小球状である。また、本発明の再生医療用材料の別の好ましい形状（構造）は、繊維状若しくは不織布状、スポンジ状、又は微小球体を合体させた特定形状である。
ここで、形状が微小球状であるときの粒子径は、平均値で１μｍ以上３００μｍ以下が好ましい。
また、形状が繊維状若しくは不織布状であるときの繊維の太さ（直径）、又は形状がスポンジ状あるいは（微小球体を合体させた）特定形状であるときの骨格の太さ（直径）は、いずれの場合も平均値で１μｍ以上５００μｍ以下が好ましい。
次に、本発明の再生医療用材料の製造方法を詳細に説明する。
本発明のいずれの再生医療用材料も、生分解性樹脂（好ましくは、生分解性で熱可塑性）と、リン酸カルシウムと、必要に応じて添加する添加剤からなる組成物を、これと相溶性のない水溶性分散媒と共に生分解性樹脂の軟化点以上に加熱混合し、分散し、軟化点以下に冷却した後、水性の展開溶媒を用いて水溶性分散媒を除去することにより得ることができる。
このとき、得られる再生医療用材料の形状が繊維状若しくは不織布状となるか、スポンジ状となるか、あるいは微小球状となるかは、通常、生分解性樹脂（ｏ）と水溶性分散媒（ｗ）との体積比によって決まってくる。水溶性分散媒が生分解性樹脂よりも多い場合、例えば水溶性分散媒と樹脂との体積比が６：４以上では、生分解性樹脂は完全に島状となり、ｏ／ｗ型の２相分離構造（海島構造）を示して、得られる再生医療用材料の形状は微小球状となる。生分解性樹脂と水溶性分散媒との体積比が半々に近い場合、例えば水溶性分散媒と樹脂との体積比がほぼ５：５では、島（微小球）は互いに陸続きとなり、得られる再生医療用材料の形状はスポンジ状物（又はこれに近いもの）となる。更に生分解性樹脂の量が水溶性分散媒の量よりやや多めの場合、例えば樹脂と水溶性分散媒との体積比が５．５：４．５近くでは、得られる再生医療用材料の形状は繊維状若しくは不織布状となる。
本発明者らの一人が先に開発した球状複合粉体の製造方法（特開２００２−１１４９０１号公報）によれば、熱可塑性樹脂及び少なくとも１種の充填剤からなる組成物をこれと相溶性のない水溶性分散媒と共に組成物の軟化点以上に加熱混合し、微粒子として分散した後、冷却することにより、０．０１μｍ以上１，０００μｍ以下の球状複合紛体が得られる。目的とする球状粒子は、水性展開溶媒を用いて水洗することにより、水溶性分散媒から分離できる。
本発明に使用する水溶性分散媒の好ましい例は、ポリアルキレンオキシド（ポリエチレングリコール等）、ポリアルケンカルボン酸の単独重合体若しくは共重合体又はこれらの塩（例えばポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリアクリル酸ナトリウム）、ポリアルケンアミドの単独重合体又は共重合体（ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド）等であり、これらを単独で、あるいは組み合わせて使用することができる。
生分解性樹脂としてポリ乳酸を使用する場合には、水溶性分散媒としては、ポリアクリル酸を使用することが特に好ましい。
本発明で、生分解性樹脂とリン酸カルシウムと水溶性分散媒とを混合して、水溶性分散媒中に生分解性樹脂及びリン酸カルシウムを分散するための方法・装置は特に限定されない。例えば、ロール、バンバリーミキサー、ニーダー、短軸押出機、二軸押出機等によって分散することができる。
水溶性分散媒中に生分解性樹脂及びリン酸カルシウムを加熱・混合する場合、使用する生分解性樹脂の軟化点よりも、１０℃ないし２００℃高い温度に加熱し、好ましくは２０℃ないし１５０℃高い温度に加熱して、混合することが好ましい。
生分解性熱樹脂とリン酸カルシウムと水溶性分散媒とを混合した後に、この混合物を、生分解性樹脂の軟化点より低い温度に冷却する。その後、通常は、生分解性樹脂及びリン酸カルシウムの貧溶媒でかつ水溶性分散媒の良溶媒である展開溶媒とこの混合物を混合し、水溶性分散媒を除去する。この場合、冷却後の成形物を、クラッシャー等で粉砕したのち、展開溶媒中に浸漬してもよい。また、冷却後の微小球状物をペレタイザーでペレット化してもよい。冷却前の熱い混合物を、押出機、ロール等でシート状又は目的とする構造に成形してから展開溶媒中に浸漬してもよい。
ここで、展開溶媒としては、水、又は水性有機溶媒を用いることができる。水溶性分散媒がポリアルキレンオキシド又はポリアルキレンカルボン酸である場合、水を展開溶媒として使用することができる。
遠心分離、濾過、又はこれらの方法を組み合わせて、展開溶媒と共に水溶性分散媒を除去する。その後、必要に応じて、乾燥してから使用する。
生分解性樹脂、リン酸カルシウム、及び適量の水溶性分散媒を含む混合物を、前記生分解性樹脂の軟化点以上に加熱混合する工程、続いて前記生分解性樹脂の軟化点より低い温度に冷却する工程、更には水性の展開溶媒を用いて前記水溶性分散媒を除去する工程を経て、繊維状若しくは不織布状、スポンジ状、又は微小球体を合体させた特定形状の再生医療用材料を製造する方法に代えて、生分解性樹脂及びリン酸カルシウム含む混合物を、その生分解性樹脂の軟化点以上に加熱混合し、これを紡糸し、これを用いて繊維状若しくは不織布状の再生医療用材料を製造することもできる。また、種々の発泡剤（窒素、フロン等のガスや炭化水素ナトリウム等の化学発泡剤）を添加して、発泡体とし、スポンジ状再生医療用材料を製造することもできる。
球状粒子を合体して特定形状にする方法として、化学的、物理的および機械的な手段が採りうる。例えば、化学結合による合体、接着剤を用いた接着、磁気による合体があげられる。
本発明の再生医療用材料は、更に、Ｃａイオンおよびリン酸イオンを含む水溶液中に３０℃以上の温度で１２時間以上分散又は浸漬することにより、その表面をリン酸カルシウムからなる層で被覆することができる。
上記水溶液には、少なくともＣａイオン及びリン酸イオン（ＨＰＯ４ ２−）を含有させることが必要である。好ましくは、Ｃａイオンやリン酸イオンを含有した擬似体液を用いる。
上記水溶液は、リン酸カルシウムが過飽和の状態であることが必要である。過飽和状態を実現するためには、水溶液を中性以上のｐＨに保つことが重要である。ｐＨが下がると、リン酸カルシウムの溶解度が上がるため、結晶は析出しなくなる。
Ｃａイオン濃度は１．０（ｍＭ／Ｌ）以上であることが好ましく、２．０〜７．５（ｍＭ／Ｌ）であることが更に好ましい。
リン酸イオン濃度は０．４（ｍＭ／Ｌ）以上であることが好ましく、０．８〜３．０（ｍＭ／Ｌ）であることが更に好ましい。
水溶液として擬似体液を用いる場合は、擬似体液中の各種イオン濃度（ｍＭ／Ｌ）は、Ｃａ２＋：２．５、ＨＰＯ４ ２−：１．０、Ｎａ＋：１４２、Ｋ＋：５．０、Ｍｇ２＋：１．５、Ｃｌ−：１４７．８、ＨＣＯ３ −：４．２、ＳＯ４ ２−：０．５および緩衝剤（ＣＨ２ＯＨ）３ＣＮＨ２の濃度５０（ｍＭ／Ｌ）からなる標準濃度のものや、これらの１〜３倍濃度の水溶液を用いることができる。
浸漬中の水溶液のｐＨ値を７．２〜８．０、好ましくは７．４〜７．６、温度を３０〜８０℃、好ましくは３６〜３８℃、浸漬時間を１２時間以上、好ましくは３〜１０日とする。
Ｃａイオンやリン酸イオンを含む水溶液に浸漬する工程において、被覆前の再生医療用材料を水溶液中に浮遊させることが好ましい。浮遊させることでバラツキのない被覆が可能となる。浮遊させる手段としては、例えば水溶液に機械的な回転や循環の運動をあたえることで撹拌することが好ましい。また、撹拌操作を間歇的に行っても良い。
上記の方法によれば、表面をリン酸カルシウムからなる層で被覆した再生医療用材料を製造することができる。
被覆層となるリン酸カルシウムとしては、リン酸八カルシウム（Ｃａ８Ｈ２（ＰＯ４）６・５Ｈ２Ｏ）やヒドロキシアパタイト（Ｃａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２）があるが、ヒドロキシアパタイトであることが好ましい。ヒドロキシアパタイトの中でも、ボーンライクアパタイトであることが更に好ましい。ボーンライクアパタイトとは、ヒドロキシアパタイトのＰＯ４ ３−イオンの一部をＣＯ３ ２−イオンが置換し、電気的中性を保つためにＣａ２＋イオンの一部をＮａ＋イオンが置換し、その結果Ｃａ／Ｐ比が１．６７よりも小さくなっているアパタイトのことである。
本発明の再生医療用材料は、細胞分化及び細胞間質の産生を促進し、かつそれ自体徐々に分解される基材として用いることができる。
組織欠損・障害を再生させるためには、生体適合性があり、かつ徐々に生分解される基材であって、適当な条件下に導入した細胞の分化を可能なものとし、特異的な細胞間質を顕著に生成するものであることが好ましい。
上記目的を達成するために、本発明で得られる再生医療用材料と共に、生体に対する適合性を持たせるための他の材料を用いることができる。生体に対する適合性を持たせるための他の材料としては、ヒアルロン酸誘導体、ゼラチンが例示できる。
本発明により得られる再生医療用材料の好ましい形状（構造）の一つは、先に述べたように、スポンジ状（多孔質）である。スポンジ状（多孔質）であるときのその細孔（空隙）の大きさは、平均直径が１〜５００μｍであり、特に５０〜５００μｍが好ましい。細孔が５００μｍを超えると、細胞を取り込んだ場合マトリックスからの細胞逸失・欠損が生じやすくなる。細孔が１μｍより小さいと、細胞をマトリックスの深部域内にまで取り込むことができなくなる。微小球体を熱融着することにより、特定形状を有する多孔質の再生医療材料を得ることができる。
本発明の再生医療材料は、化学的に架橋させることもできる。架橋剤としては、シアナミドが例示できる。
本発明における再生医療材料は、少なくとも１種類の生理活性物質を含有していてもよい。生理活性物質としては、例えば、取り込まれた細胞のマトリックス特性を最適化させる化合物があり、例えば抗生物質、細胞接着性を改善する化合物、誘導因子などがあげられる。
抗生物質は、移植時の拒絶反応からくる炎症を軽減するために用い、クロキサシリン、リファンピシンなどが例示できる。
細胞接着性を改善する化合物としては、ポリ−Ｌ−リジン、フィブロネクチンなどが例示できる。
誘導因子としては、線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、形質転換成長因子（ＴＧＦ−β）、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）などが例示できる。これらの誘導因子を含有する基材は、軟骨細胞、間葉幹細胞とその前駆細胞、結合組織細胞、及び／又は骨芽細胞から、インビトロおよびインビボで分化組織を発生・生成させるために特に適している。
基材に取り込まれる細胞としては、妊娠中絶などから得られる胎性軟骨細胞、骨髄又は骨膜から得られる成体の間葉幹細胞およびその前駆細胞、さい帯から得られる胎性の間葉幹細胞およびその前駆細胞が例示できる。
本発明により得られる再生医療材料は、インビトロでの事前培養を伴うか又は伴うことなく、インビボでの分化を行わせて、種々の組織型の結合・支持器官、特に軟骨組織や骨組織を得るために適している。
本発明の再生医療用材料の形状は、繊維状若しくは不織布状、スポンジ状、微小球状、又は微小球体を合体させた特定形状である。これらは、再生医療の用途にあわせて使い分けることができる。
本発明のスポンジ状の形状を有する再生医療用材料は、リジッドな構造物なので、耳や指などの形を明確にとどめたい組織の再生医療に用いることができる。
本発明の、繊維状若しくは不織布状の形状を有する再生医療用材料は、例えば、次のような場合に用いる。β−リン酸カルシウムで被覆した繊維状若しくは不織布状の再生医療用材料に肝臓の幹細胞を取り込ませ、肝臓の幹細胞をインビトロで増殖させた後に、人工肝臓として用いる。
本発明の再生医療材料の一実施態様として、微小球状粒子を用いることができる。本発明における微小球状粒子は、本発明者が先に開発した微小球状粒子の製造方法（特開２００１−１１４９０１号公報）に従って製造することができる。１μｍ以上３００μｍ以下の球状粒子が好ましい。
繊維状若しくは不織布状の再生医療用材料と同様に、本発明の微小球状粒子を、Ｃａイオンおよびリン酸イオンを含む水溶液中に３０℃以上の温度で１２時間以上分散又は浸漬することにより、粒子表面をリン酸カルシウムからなる層で被覆することができる。
得られた微小球状粒子は、繊維状若しくは不織布状又はスポンジ状の再生医療用材料と同様に、細胞分化及び細胞間質の産生を促進し、かつそれ自体徐々に分解される材料として用いることができる。
本発明により得られる微小球状粒子からなる再生医療用材料は、少なくとも１種類の生理活性物質を含有させることができる。
繊維状若しくは不織布状又はスポンジ状の再生医療用材料と微小球状粒子からなる再生医療用材料は、その生理的機能という点では差異はないが、その用途の点で区別される。すなわち、微小球状粒子からなる再生医療用材料は、繊維状若しくは不織布状又はスポンジ状の再生医療用材料よりも粒子径が小さいために、精密さが要求される人工組織、例えば人工血管や人工筋肉などの材料として適している。
また、微小球状粒子を熱融着し特定形状にした再生医療用材料を使うことができる。骨の一部を再生するために、欠損形状にあわせて球状粒子を合体し、間隙に生理活性物質を充填することができる。
微小球状粒子を熱融着しフィルター状としたものを再生医療用材料として利用する方法もある。例えば、１００μｍの粒子径を有する粒子を熱融着させ、１０μｍの間隙を持つフィルター状の再生医療用材料である。The regenerative medical material of the present invention contains 99.9 to 10% by weight of biodegradable resin and 0.1 to 90% by weight of calcium phosphate kneaded in the biodegradable resin as described above. Regenerative medical material. Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
[Biodegradable resin (base material)]
The biodegradable resin (base material) used in the present invention is a biodegradable and thermoplastic resin (biodegradable thermoplastic resin) for easily producing the regenerative medical material of the present invention and enhancing safety. ) Is preferable.
Typical examples of such biodegradable thermoplastic resins include fatty acid polyesters (including polylactic acid), specific biodegradable thermoplastic resins obtained by chemically modifying natural raw materials, microbial production plastics, and synthetic plastics. However, it is not limited to these.
An aliphatic polyester refers to a polyester in which all carbon atoms in a molecule are connected in a chain, and the carbon atoms in the molecule may have a branched structure but do not contain a cyclic structure. Aliphatic polyesters are produced on an industrial scale, and preferred aliphatic polyesters for the practice of the present invention include polylactic acid (PLA) by ring-opening polymerization and polyhydroxybutyrate / valerate copolymer by fermentation. (PHB / V).
An example of a specific biodegradable thermoplastic resin obtained by chemically modifying a natural raw material is cellulose acetate. Cellulose acetate having an acetate substitution degree of 2.5 or less can be used as a biodegradable thermoplastic resin. When this cellulose acetate is used, a plasticizer may be used in combination.
As the microorganism-producing plastic, microbial polyester, microbial polysaccharide and microbial polyamino acid are representative, and microbial polyester is preferred in the present invention.
An example of the microbial polyester includes poly [(R) -3-hydroxybutyrate (abbreviated as P (3HB))]. Microbial copolyesters such as 3-hydroxybutyrate and 3-hydroxyvalerate copolymer (abbreviated as P (3HB-co-3HV)) vary widely depending on the monomer composition. Can be used more preferably.
An example of a methacrylic ester resin imparted with biodegradability is polymethyl methacrylate having a pyridinium group introduced.
Biodegradable copolymers include copolyesters, copolyester ethers, copolyester carbonates, and copolyesteramides.
Regarding the above biodegradable thermoplastic resin, edited by Biodegradable Plastics Study Group, Editor-in-Chief Yoshiharu Doi, “Biodegradable Plastic Handbook”, NTS Co., Ltd. Are described in detail.
Table 1 lists the types of biodegradable thermoplastic resins available and their manufacturers.
In addition, a biodegradable resin and another resin may be blended and used, or may contain various fillers.
[Calcium phosphate]
In the regenerative medical material or the method for producing the same of the present invention, calcium phosphate is used together with the biodegradable resin. As calcium phosphate, hydroxyapatite, α-calcium phosphate, β-calcium phosphate, γ-calcium phosphate, octacalcium phosphate and the like can be used. Two or more calcium phosphates may be used as a mixture.
Calcium phosphate has the effect of promoting cell growth by assisting cell adhesion to the base material in addition to the effect of supplying the main inorganic salts of bone tissue and tooth tissue. In addition, it also has an action of relaxing acids generated by the decomposition of the biodegradable resin.
Although there is no restriction | limiting in particular in the manufacturing method of the calcium phosphate used by this invention, You may manufacture with a dry method, a hydrothermal method, and a wet method, and may heat-process.
The average particle diameter of the calcium phosphate used in the present invention is not particularly limited, but is preferably 0.01 μm or more and 500 μm or less, and more preferably 0.1 μm or more and 500 μm or less.
The content of calcium phosphate in the regenerative medical material of the present invention is 0.1 to 90% by weight, preferably 1 to 5% by weight, more preferably 2 to 3% by weight.
One of the preferable shapes (structures) of the regenerative medical material of the present invention is a microsphere. In addition, another preferable shape (structure) of the regenerative medical material of the present invention is a specific shape obtained by combining a fibrous or non-woven fabric, a sponge, or a microsphere.
Here, when the shape is a microsphere, the average particle size is preferably 1 μm or more and 300 μm or less.
Further, the thickness (diameter) of the fiber when the shape is fibrous or non-woven, or the thickness (diameter) of the skeleton when the shape is sponge-like or a specific shape (combined with microspheres), In any case, the average value is preferably 1 μm or more and 500 μm or less.
Next, the manufacturing method of the regenerative medical material of this invention is demonstrated in detail.
Any of the regenerative medical materials of the present invention is compatible with a composition comprising a biodegradable resin (preferably biodegradable and thermoplastic), calcium phosphate, and additives added as necessary. It can be obtained by heating and mixing above the softening point of the biodegradable resin together with no water-soluble dispersion medium, dispersing, cooling to below the softening point, and then removing the water-soluble dispersion medium using an aqueous developing solvent. .
At this time, it is usually determined whether the resulting regenerative medical material is in the form of a fiber or a nonwoven fabric, a sponge, or a microsphere. The biodegradable resin (o) and the water-soluble dispersion medium ( It is determined by the volume ratio with w). When the amount of the water-soluble dispersion medium is larger than that of the biodegradable resin, for example, when the volume ratio of the water-soluble dispersion medium and the resin is 6: 4 or more, the biodegradable resin is completely island-shaped and has an o / w type two-phase. The separation structure (sea-island structure) is shown, and the shape of the obtained regenerative medical material is a microsphere. When the volume ratio between the biodegradable resin and the water-soluble dispersion medium is nearly half, for example, when the volume ratio between the water-soluble dispersion medium and the resin is approximately 5: 5, the islands (microspheres) are connected to each other and are obtained. The shape of the medical material is a sponge-like material (or something close to this). Furthermore, when the amount of the biodegradable resin is slightly larger than the amount of the water-soluble dispersion medium, for example, when the volume ratio of the resin to the water-soluble dispersion medium is close to 5.5: 4.5, the shape of the obtained regenerative medical material Is in the form of fibers or nonwovens.
According to a method for producing a spherical composite powder previously developed by one of the present inventors (Japanese Patent Laid-Open No. 2002-114901), a composition comprising a thermoplastic resin and at least one filler is compatible with this. A spherical composite powder having a size of 0.01 μm or more and 1,000 μm or less is obtained by heating and mixing with a water-soluble dispersion medium not containing water to a temperature above the softening point of the composition, dispersing as fine particles, and cooling. The target spherical particles can be separated from the water-soluble dispersion medium by washing with an aqueous developing solvent.
Preferred examples of the water-soluble dispersion medium used in the present invention include polyalkylene oxide (polyethylene glycol, etc.), polyalkenecarboxylic acid homopolymers or copolymers, or salts thereof (for example, polyacrylic acid, polymethacrylic acid, poly Sodium acrylate), polyalkeneamide homopolymers or copolymers (polyacrylamide, polymethacrylamide) and the like, which can be used alone or in combination.
When polylactic acid is used as the biodegradable resin, it is particularly preferable to use polyacrylic acid as the water-soluble dispersion medium.
In the present invention, the method and apparatus for mixing the biodegradable resin, calcium phosphate and the water-soluble dispersion medium and dispersing the biodegradable resin and calcium phosphate in the water-soluble dispersion medium are not particularly limited. For example, it can be dispersed by a roll, a Banbury mixer, a kneader, a short screw extruder, a twin screw extruder or the like.
When the biodegradable resin and calcium phosphate are heated and mixed in the water-soluble dispersion medium, the biodegradable resin and calcium phosphate are heated to a temperature that is 10 ° C to 200 ° C higher than the softening point of the biodegradable resin used, and preferably 20 ° C to 150 ° C higher It is preferable to mix by heating to temperature.
After mixing the biodegradable thermal resin, calcium phosphate and the water-soluble dispersion medium, the mixture is cooled to a temperature below the softening point of the biodegradable resin. Thereafter, this mixture is usually mixed with a developing solvent which is a poor solvent for the biodegradable resin and calcium phosphate and a good solvent for the water-soluble dispersion medium, and the water-soluble dispersion medium is removed. In this case, the molded product after cooling may be crushed with a crusher or the like and then immersed in a developing solvent. Moreover, you may pelletize the microsphere after cooling with a pelletizer. The hot mixture before cooling may be formed into a sheet or target structure with an extruder, roll or the like and then immersed in a developing solvent.
Here, water or an aqueous organic solvent can be used as a developing solvent. When the water-soluble dispersion medium is polyalkylene oxide or polyalkylene carboxylic acid, water can be used as a developing solvent.
Centrifugation, filtration, or a combination of these methods removes the water-soluble dispersion medium along with the developing solvent. Then, use it after drying if necessary.
A step of heating and mixing a mixture containing a biodegradable resin, calcium phosphate, and an appropriate amount of a water-soluble dispersion medium above the softening point of the biodegradable resin, followed by cooling to a temperature lower than the softening point of the biodegradable resin. A method for producing a regenerative medical material having a specific shape in which a fibrous or non-woven fabric, a sponge, or a microsphere is combined through a step, and further, a step of removing the water-soluble dispersion medium using an aqueous developing solvent. Instead, a mixture containing a biodegradable resin and calcium phosphate is heated and mixed at a temperature equal to or higher than the softening point of the biodegradable resin, and the mixture is spun and used to produce a fibrous or nonwoven regenerative medical material. You can also. Further, various foaming agents (gases such as nitrogen and chlorofluorocarbon and chemical foaming agents such as sodium hydrocarbon) can be added to obtain a foamed regenerative medical material.
Chemical, physical and mechanical means can be used as a method of combining the spherical particles into a specific shape. Examples include coalescence by chemical bond, adhesion using an adhesive, and magnetism.
The regenerative medical material of the present invention can be further coated with a layer made of calcium phosphate by dispersing or immersing in an aqueous solution containing Ca ions and phosphate ions at a temperature of 30 ° C. or more for 12 hours or more. it can.
The aqueous solution must contain at least Ca ions and phosphate ions (HPO 4 2− ). Preferably, a simulated body fluid containing Ca ions or phosphate ions is used.
The aqueous solution needs to be in a supersaturated state of calcium phosphate. In order to realize a supersaturated state, it is important to maintain the aqueous solution at a neutral or higher pH. When the pH is lowered, the solubility of calcium phosphate increases, so crystals do not precipitate.
The Ca ion concentration is preferably 1.0 (mM / L) or more, and more preferably 2.0 to 7.5 (mM / L).
The phosphate ion concentration is preferably 0.4 (mM / L) or more, and more preferably 0.8 to 3.0 (mM / L).
When using a simulated body fluid as an aqueous solution, various ion concentrations (mM / L) in the simulated body fluid are Ca 2+ : 2.5, HPO 4 2− : 1.0, Na + : 142, K + : 5.0. , Mg 2+ : 1.5, Cl − : 147.8, HCO 3 − : 4.2, SO 4 2− : 0.5 and buffer (CH 2 OH) 3 CNH 2 concentration 50 (mM / L) These can be used in a standard concentration or an aqueous solution having a concentration 1 to 3 times higher than these.
The pH value of the aqueous solution during immersion is 7.2 to 8.0, preferably 7.4 to 7.6, the temperature is 30 to 80 ° C., preferably 36 to 38 ° C., and the immersion time is 12 hours or more, preferably 3 10 days.
In the step of immersing in an aqueous solution containing Ca ions or phosphate ions, it is preferable to float the regenerative medical material before coating in the aqueous solution. By making it float, it is possible to cover without variation. As a means for suspending, for example, it is preferable to stir by applying mechanical rotation or circulation motion to the aqueous solution. Moreover, you may perform stirring operation intermittently.
According to said method, the regenerative medical material which coat | covered the surface with the layer which consists of calcium phosphate can be manufactured.
The calcium phosphate as a coating layer, octacalcium phosphate (Ca 8 H 2 (PO 4 ) 6 · 5H 2 O) and hydroxyapatite (Ca 10 (PO 4) 6 (OH) 2) There is, in hydroxyapatite Preferably there is. Among hydroxyapatites, bone-like apatite is more preferable. Bone-like apatite is a part of hydroxyapatite PO 4 3 - ion replaced by CO 3 2- ion, and a part of Ca 2+ ion is replaced by Na + ion to maintain electrical neutrality. Result It is apatite whose Ca / P ratio is smaller than 1.67.
The regenerative medical material of the present invention can be used as a base material that promotes cell differentiation and production of cell stroma and gradually degrades itself.
In order to regenerate tissue defects / disorders, it is a biocompatible and gradually biodegradable base material that enables differentiation of cells introduced under appropriate conditions. It is preferable that the stroma is remarkably generated.
In order to achieve the above object, the regenerative medical material obtained in the present invention can be used with other materials for providing compatibility with living bodies. Examples of other materials for adapting to a living body include hyaluronic acid derivatives and gelatin.
One of the preferable shapes (structures) of the regenerative medical material obtained by the present invention is sponge-like (porous) as described above. As for the size of the pores (voids) when it is sponge-like (porous), the average diameter is 1 to 500 μm, and 50 to 500 μm is particularly preferable. If the pores exceed 500 μm, cell loss and defects from the matrix are likely to occur when cells are taken up. If the pores are smaller than 1 μm, the cells cannot be taken into the deep region of the matrix. A porous regenerative medical material having a specific shape can be obtained by thermally fusing the microspheres.
The regenerative medical material of the present invention can also be chemically crosslinked. An example of the crosslinking agent is cyanamide.
The regenerative medical material in the present invention may contain at least one kind of physiologically active substance. Examples of the physiologically active substance include compounds that optimize the matrix characteristics of incorporated cells, such as antibiotics, compounds that improve cell adhesion, and inducers.
Antibiotics are used to reduce inflammation resulting from rejection at the time of transplantation, and examples thereof include cloxacillin and rifampicin.
Examples of compounds that improve cell adhesion include poly-L-lysine and fibronectin.
Examples of the inducing factor include fibroblast growth factor (bFGF), insulin-like growth factor (IGF), transforming growth factor (TGF-β), vascular endothelial cell growth factor (VEGF) and the like. Substrates containing these inducers are particularly suitable for generating and generating differentiated tissues in vitro and in vivo from chondrocytes, mesenchymal stem cells and their progenitor cells, connective tissue cells, and / or osteoblasts. Yes.
Examples of cells to be incorporated into the substrate include embryonic chondrocytes obtained from abortion and the like, adult mesenchymal stem cells and precursor cells obtained from bone marrow or periosteum, embryonic mesenchymal stem cells and precursor cells obtained from umbilical cord Can be illustrated.
The regenerative medical material obtained by the present invention can be differentiated in vivo with or without in vitro preculture to obtain various tissue types of connective / support organs, particularly cartilage tissue and bone tissue. Suitable for.
The shape of the regenerative medical material of the present invention is a fiber or nonwoven fabric, sponge, microsphere, or a specific shape in which microspheres are combined. These can be properly used according to the application of regenerative medicine.
Since the regenerative medical material having a sponge-like shape according to the present invention is a rigid structure, it can be used for regenerative medicine of a tissue where the shape of an ear, a finger or the like is desired to be clearly kept.
The regenerative medical material having a fibrous or non-woven shape according to the present invention is used, for example, in the following cases. Liver stem cells are incorporated into a fibrous or non-woven regenerative medical material coated with β-calcium phosphate, and the liver stem cells are proliferated in vitro and then used as an artificial liver.
As one embodiment of the regenerative medical material of the present invention, microspherical particles can be used. The fine spherical particles in the present invention can be produced according to the method for producing fine spherical particles previously developed by the present inventor (Japanese Patent Application Laid-Open No. 2001-114901). Spherical particles having a size of 1 μm to 300 μm are preferable.
Like the fibrous or non-woven regenerative medical material, the fine spherical particles of the present invention are dispersed or immersed in an aqueous solution containing Ca ions and phosphate ions at a temperature of 30 ° C. or more for 12 hours or more. The surface can be coated with a layer consisting of calcium phosphate.
The obtained microspherical particles can be used as a material that promotes cell differentiation and production of cell stroma and gradually degrades itself, as in the case of fibrous, non-woven or sponge-like materials for regenerative medicine. it can.
The material for regenerative medicine composed of microspherical particles obtained by the present invention can contain at least one type of physiologically active substance.
A regenerative medical material composed of fibrous, non-woven fabric or sponge-like material and a regenerative medical material composed of fine spherical particles are not different in terms of their physiological functions, but are distinguished in terms of their use. That is, the regenerative medical material composed of microspherical particles has a smaller particle size than the fibrous, non-woven or sponge-like regenerative medical material, and therefore requires an artificial tissue that requires precision, such as an artificial blood vessel or an artificial muscle. Suitable as a material.
In addition, a regenerative medical material in which fine spherical particles are heat-fused into a specific shape can be used. In order to regenerate a part of the bone, spherical particles can be combined in accordance with the defect shape, and the gap can be filled with a physiologically active substance.
There is also a method in which fine spherical particles are heat-fused into a filter shape and used as a regenerative medical material. For example, a regenerative medical material in the form of a filter having particles having a particle diameter of 100 μm and heat-sealing particles having a particle diameter of 10 μm.
以下に実施例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。 Examples are given below, but the present invention is not limited thereto.
ユニチカ（株）製のポリ乳酸ペレット（ＰＬＡ４０３１ＤＫ）１ｋｇにβ−リン酸カルシウム３０ｇを加え、日本純薬（株）製のポリアクリル酸ペレット（ジュリマーＡＣ−１０３ＡＰ）１．３ｋｇとよく混合した後、加圧混練機中で１８０℃において１０分間混練し、１９０℃で安定静置を５分間行った。その後、加圧混練機から押出すとともに、１２０℃まで冷却し、その後、分散水約２０リットル中にてポリアクリル酸を溶解・除去した。その結果、β−リン酸カルシウムを包含した繊維状若しくは不織布状のポリ乳酸（厚み約１０ｍｍ）が得られた。
＜筋肉修復材としての応用＞
β−リン酸カルシウムを包含した上記繊維状若しくは不織布状ポリ乳酸（厚み約１０ｍｍ）のβ−リン酸カルシウム部分に、ラットの大腿筋より分離した筋肉の幹細胞を植え付け、２４時間培養し、ある程度成長させる。この時、ポリ乳酸の繊維部分に沿って筋肉の幹細胞が成長する。これを同じラットの筋肉損傷部位に移植する。１週間後に、移植部位の組織を一部切除し、組織切片を電子顕微鏡で観察する。その結果、移植部位は元の組織に完全に癒着し、かつβ−リン酸カルシウムを包含したポリ乳酸は完全に分解している。30 kg of β-calcium phosphate was added to 1 kg of polylactic acid pellets (PLA4031DK) manufactured by Unitika Co., Ltd. and mixed well with 1.3 kg of polyacrylic acid pellets (Julimer AC-103AP) manufactured by Nippon Pure Chemical Co., Ltd. The mixture was kneaded at 180 ° C. for 10 minutes in a kneader and then allowed to stand at 190 ° C. for 5 minutes. Thereafter, the mixture was extruded from a pressure kneader and cooled to 120 ° C., and then polyacrylic acid was dissolved and removed in about 20 liters of dispersed water. As a result, fibrous or non-woven polylactic acid (thickness: about 10 mm) including β-calcium phosphate was obtained.
<Application as muscle repair material>
Muscle stem cells isolated from the rat thigh muscles are implanted in the β-calcium phosphate portion of the above-mentioned fibrous or non-woven polylactic acid (thickness: about 10 mm) containing β-calcium phosphate, cultured for 24 hours, and grown to some extent. At this time, muscle stem cells grow along the fiber portion of polylactic acid. This is transplanted to the same rat muscle injury site. One week later, a part of the tissue at the transplantation site is excised, and the tissue section is observed with an electron microscope. As a result, the transplanted site is completely adhered to the original tissue, and polylactic acid including β-calcium phosphate is completely decomposed.
ユニチカ（株）のポリ乳酸ペレット（ＰＬＡ４０３１ＤＫ）２ｋｇにβ−リン酸カルシウム２００ｇを加え、日本純薬のポリアクリ酸ペレット（ジュリーマーＡＣ−１０９）３．０ｋｇと混合した後、押出機にて２００℃にて混錬押出しし１９０℃で３分内安定静置した。１２０℃まで冷却後、分散水約４０リットル中にてポリアクリル酸を溶解・除去した。その結果、β−リン酸カルシウムを包含したポリ乳酸の平均５μｍの微小球状体を得た。
＜自家骨修復材としての応用＞
得られた微小球状体（粉体）を、ラットの、骨を傷つけた部分に埋め込み、１ヶ月後にレントゲン検査で骨の破断部分を視察すると、ポリ乳酸は溶解して破断部分は消滅し、自家骨の成長が見られる。After adding 200 g of β-calcium phosphate to 2 kg of Unitika's polylactic acid pellets (PLA4031DK) and mixing with 3.0 kg of Japanese pure drug polyacrylic acid pellets (Julimer AC-109) at 200 ° C. in an extruder. The kneading extrusion was allowed to stand stably at 190 ° C. for 3 minutes. After cooling to 120 ° C., polyacrylic acid was dissolved and removed in about 40 liters of dispersed water. As a result, an average 5 μm microsphere of polylactic acid containing β-calcium phosphate was obtained.
<Application as autologous bone repair material>
The obtained microspheres (powder) were embedded in the bone-injured part of the rat, and one month later, when the bone fractured part was inspected by X-ray examination, polylactic acid dissolved and the fractured part disappeared. Bone growth is seen.
加圧混練機から押出される熱い混合物をステンレスのバットに薄く（約０．５ｍｍ）受けた以外は、実施例１と同様に操作し、β−リン酸カルシウムを包含した厚さ約０．５ｍｍのポリ乳酸のシート状不織布を得た。
＜培養皮膚への応用＞
得られた上記シート状不織布を適当な大きさに切り取り、これを培養用シャーレに入れる。ウシ胎児血清１０％（容量）入りＲＰＭＩ１６４０培地を加えるとともに、別にトリプシン等で処理しバラバラにした動物の皮膚細胞を少量加え、細胞培養インキュベータ中、３７℃で、培養する。シート状不織布の上に、皮膚細胞が増殖するのが観察される。Except that the hot mixture extruded from the pressure kneader was thinly received by a stainless steel vat (about 0.5 mm), the same operation as in Example 1 was performed, and a polycrystal having a thickness of about 0.5 mm including β-calcium phosphate was used. A sheet-like nonwoven fabric of lactic acid was obtained.
<Application to cultured skin>
The obtained sheet-like non-woven fabric is cut into an appropriate size and placed in a culture dish. RPMI1640 medium containing fetal bovine serum 10% (volume) is added, and a small amount of separated animal skin cells treated with trypsin or the like are added and cultured at 37 ° C. in a cell culture incubator. It is observed that the skin cells grow on the sheet-like nonwoven fabric.
Claims (9)
前記生分解性樹脂に練り込まれたリン酸カルシウム０．１〜９０重量％とを含有することを特徴とする
再生医療用材料。99.9 to 10% by weight of biodegradable resin,
A regenerative medical material comprising 0.1 to 90% by weight of calcium phosphate kneaded in the biodegradable resin.
（ｉ）（ａ）生分解性樹脂９９．９〜１０重量部、
（ｂ）リン酸カルシウム０．１〜９０重量部、及び
（ｃ）前記生分解性樹脂及び前記リン酸カルシウムと相溶しない適量の水溶性分散媒、
を含む混合物を、前記生分解性樹脂の軟化点以上に加熱混合する工程、
（ｉｉ）前記軟化点より低い温度に冷却する工程、及び
（ｉｉｉ）水性の展開溶媒を用いて前記水溶性分散媒を除去する工程、
を含んでなることを特徴とする、
生分解性樹脂９９．９〜１０重量％と、前記生分解性樹脂に練り込まれたリン酸カルシウム０．１〜９０重量％とを含有する再生医療用材料の製造方法。Next steps (i) to (iii), that is,
(I) (a) 99.9 to 10 parts by weight of a biodegradable resin,
(B) 0.1 to 90 parts by weight of calcium phosphate, and (c) an appropriate amount of a water-soluble dispersion medium that is incompatible with the biodegradable resin and the calcium phosphate,
A step of heating and mixing the mixture containing a biodegradable resin above the softening point thereof,
(Ii) a step of cooling to a temperature lower than the softening point, and (iii) a step of removing the water-soluble dispersion medium using an aqueous developing solvent.
Characterized in that it comprises
A method for producing a regenerative medical material comprising 99.9 to 10% by weight of a biodegradable resin and 0.1 to 90% by weight of calcium phosphate kneaded in the biodegradable resin.
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