JPS63293465A - Column holder - Google Patents
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Classifications
-
- G—PHYSICS
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
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- G01N30/02—Column chromatography
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- G01N30/6047—Construction of the column with supporting means; Holders
Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、物質を分離分析するクロマトグラフィーに用
いられるカラムを処理操作するに際して。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION (Industrial Application Field) The present invention is applicable to processing columns used in chromatography for separating and analyzing substances.
該カラムを保持するカラムホルダーに関する。The present invention relates to a column holder that holds the column.
（従来の技術） 物質を分離分析するクロマトグラフィーでは。(Conventional technology) In chromatography, which separates and analyzes substances.
送液から溶出液の分析までを行う高性能液体クロマトグ
ラフィー（ＩＩＰＬＣ）が、高性能であり、しがち再現
性に優れていることがら、広範囲に利用されている。し
かしながら、該ＨＰＬＣは装置が高価であり、しかも高
圧下で行う必要があることがら。High performance liquid chromatography (IIPLC), which performs everything from liquid delivery to analysis of eluate, is widely used because of its high performance and excellent reproducibility. However, HPLC requires expensive equipment and needs to be performed under high pressure.
オープンカラムやミニカラムにより簡便に物質を分離す
る方法も多用されている。Simple methods of separating substances using open columns or mini columns are also frequently used.
オープンカラムは、カラム本体内に充填された充填剤層
上に空気層が存在するタイプのカラムである。ミニカラ
ムは８亥オープンカラムをさらに簡便化したものであり
、使い捨てのディスポカラムとして一般的に使用されて
いる。An open column is a type of column in which an air layer exists above a packing layer packed inside the column body. The mini column is a simpler version of the 8H open column, and is generally used as a disposable disposable column.
オープンカラムやミニカラムでは、物質の分離に際して
、充填剤に精製すべき物質あるいは除去すべき物質を吸
着させた後に、カラム内の洗浄のために、あるいは物質
の溶出のために、洗浄液あるいは溶離液がカラム内に注
入される。しかし。In open columns and mini-columns, when separating substances, after the substance to be purified or removed is adsorbed onto the packing material, a cleaning solution or an eluent is used to clean the inside of the column or to elute the substance. injected into the column. but.
前述のようにオープンカラムでは、充填剤の上方に空気
層が存在するため、充填剤に洗浄液等を注入する際の圧
力調整が容易ではなく、充填剤上に洗浄液等が溜まって
、しばしば液層が形成される。As mentioned above, in open columns, there is an air layer above the packing material, so it is not easy to adjust the pressure when injecting cleaning liquid etc. into the packing material, and cleaning liquid etc. often accumulates on the packing material, causing a liquid layer. is formed.
洗浄液層等が充填剤層上に形成された状態で、洗浄処理
後に、カラム内の液組成を変更すべく溶離液を注入する
と、注入された溶離液が充填剤上の洗浄液により希釈さ
れ、物質を再現性よ（効率的に分離することができない
。When an eluent is injected to change the liquid composition in the column after cleaning with a cleaning liquid layer etc. formed on the packing material layer, the injected eluent is diluted by the cleaning liquid on the packing material, and the substances are reproducibility (cannot be separated efficiently).
このため、充填剤上に形成される洗浄液等の液層は１例
えばカラムを密閉状態として、ポンプ等にてカラム内を
高圧にし、充填剤上の洗浄液等を充填剤内に押し込み、
充填剤上に洗浄液層が存在しない状態としてから、溶離
液を注入することが行われる。しかし、このような方法
では、カラム内の充填剤の圧損が小さい場合等には、充
填剤層から溶液が流出することにより、カラム内が液切
れ状態になり、空気が充填剤内に侵入して充填剤内に気
泡を形成するおそれがある。充填剤内の気泡は、該充填
剤内にてショートバスを形成し、良好な充填剤層を破壊
するおそれがある。このため。For this reason, the liquid layer of the cleaning liquid etc. formed on the packing material is 1. For example, the column is sealed, the inside of the column is made high pressure with a pump, etc., and the cleaning liquid etc. on the packing material is forced into the packing material.
The eluent is injected after there is no cleaning liquid layer on the filler. However, with this method, if the pressure drop of the packing material in the column is small, the solution may flow out of the packing layer, causing the column to run out of liquid and air to enter the packing material. This may lead to the formation of air bubbles within the filler. Air bubbles within the filler can form short baths within the filler and destroy a good filler layer. For this reason.
充填剤中に気泡が存在すれば、充填剤中より気泡を除去
しなければならないが、気泡を除去すべくカラム内に液
体を通流させても、気泡を完全に除去することは非常に
困難である。従って、充填剤に空気等が侵入しないよう
にしなければならない。If air bubbles exist in the packing material, they must be removed from the packing material, but it is extremely difficult to completely remove the air bubbles even if liquid is passed through the column to remove the air bubbles. It is. Therefore, it is necessary to prevent air from entering the filler.
ミニカラムにおいては、カラムの充填剤中へ溶液を注入
する方法として、遠心力を利用する方法も採用されてい
る。遠心力を利用する方法は１例えば、遠心分離機にて
カラムを回転させてカラムに遠心力を付与する。このよ
うに、遠心力を利用する方法では、遠心分離機における
カラムの回転数を変化させれば、カラムに加わる遠心力
を容易に変更し得るため、充填剤中への溶液の注入速度
を効率的に変更し得る。また、カラムに作用する遠心力
は、カラム内の充填剤を加圧して、該充填剤を高密度化
し得るため、シリカゲルのように比較的硬い材質の充填
剤の場合には、充填剤が圧密化するおそれがなく、緻密
な充填剤層が得られ。In mini-columns, a method using centrifugal force is also adopted as a method for injecting a solution into the column packing material. One method using centrifugal force is to apply centrifugal force to the column by rotating the column in a centrifuge, for example. In this way, in the method that uses centrifugal force, the centrifugal force applied to the column can be easily changed by changing the rotation speed of the column in the centrifuge, so the injection speed of the solution into the packing material can be efficiently controlled. can be changed accordingly. In addition, the centrifugal force acting on the column can pressurize the packing material in the column and make the packing material densified. A dense filler layer can be obtained without the risk of oxidation.
ＨＰＬＣを用いた場合のように、高精度にて物質を分離
することも不可能ではない。しかしながら、遠心力を利
用する方法は、このように、優れた特性を有する反面、
前述したように、遠心力を付与している間に、カラム内
の充填剤が液切れを起こして該充填剤内に気泡が形成さ
れるおそれがある。It is not impossible to separate substances with high precision, such as when using HPLC. However, while the method using centrifugal force has excellent characteristics as described above,
As described above, while applying centrifugal force, there is a risk that the packing material in the column may run out of liquid and bubbles may be formed within the packing material.
このため、遠心力を利用する方法は、精密な分離には使
用されず、物質の分離精度をあまり要求されない場合に
、物質の充填剤への吸着、充填剤の洗浄、溶出等の操作
に利用されているにすぎない。For this reason, methods that utilize centrifugal force are not used for precise separation, and are used for operations such as adsorption of substances to packing materials, cleaning of packing materials, and elution when high separation precision of substances is not required. It's just that it's being done.
（発明が解決しようとする問題点）
本発明は上記従来の問題点を解決するものであり、その
目的は、遠心力を利用したカラム操作時に、カラム装着
して使用され、カラム内の充填剤中に気体を侵入させる
ことなく充填剤上の余剰の液体を除去し得、その結果、
試料を再現性よく高効率で分離し得るカラムホルダーを
提供することにある。(Problems to be Solved by the Invention) The present invention solves the above-mentioned problems of the conventional art. Excess liquid on the filler can be removed without introducing gas into the filler, so that
The object of the present invention is to provide a column holder that can separate samples with good reproducibility and high efficiency.
（問題点を解決するための手段）
本発明のカラムホルダーは、底面に流出口を有し、かつ
上部に空気層が形成されるように充填剤が充填されたカ
ラムを保持するカラムホルダーであり、前記カラムの流
出口が液密に密着されるように該カラムが嵌合される係
合部と、該係合部に一方の開口端が連通し、他方の開口
端が複数となるように、該係合部に嵌合されたカラムに
おける充填剤の上面に等しいかまたはそれよりも上方に
位置する分岐部にて分岐されており、該複数の開口端の
一つが、該カラムに注入されて充填剤上に貯留される溶
液の液面よりも上方に位置され、他の一つが前記分岐部
よりも下方に位置された管路と、を有してなり、そのこ
とにより上記目的が達成される。(Means for Solving the Problems) The column holder of the present invention is a column holder that has an outlet at the bottom and holds a column filled with a packing material so that an air layer is formed at the top. , an engaging part into which the column is fitted so that the outlet port of the column is in close contact with the column in a liquid-tight manner, one open end communicates with the engaging part, and the other open end is plural. , branched at a branch part located equal to or above the upper surface of the packing material in the column fitted in the engaging part, and one of the plurality of open ends is injected into the column. one pipe line is located above the liquid level of the solution stored on the filler, and the other pipe line is located below the branch part, thereby achieving the above object. be done.
（実施例） 以下に本発明を、実施例について説明する。(Example) The present invention will be described below with reference to Examples.
第１図は２本発明のカラムホルダーにカラムを装着した
状態の断面図である。図において２０は。FIG. 1 is a sectional view of two columns mounted on the column holder of the present invention. 20 in the figure.
カラムであり、該カラム２０は、底部に下方へ突出する
流出口２１ａを有する円筒状のカラム容器２１内に、充
填剤２２が充填されている。カラム容器２工の上端部に
はフランジ部２１ｂが設けられている。該充填剤２２の
上面および下面には、フィルター２３および２４が、そ
れぞれ当接されている。カラム容器２１内において、上
側のフィルター２３の上方には。The column 20 is a cylindrical column container 21 having a downwardly protruding outlet 21a at the bottom and a filler 22 filled therein. A flange portion 21b is provided at the upper end of the second column container. Filters 23 and 24 are in contact with the upper and lower surfaces of the filler 22, respectively. In the column container 21, above the upper filter 23.
空気層２５が形成されている。該フィルター２３は充填
剤２２が乱れることを防止する。An air layer 25 is formed. The filter 23 prevents the filler 22 from being disturbed.
このようなカラム２０が装着される本発明のカラムホル
ダー１０は１円柱状をしており、その軸心に沿ってカラ
ム本体２１を嵌合し得る円筒状の係合部１１を有する。The column holder 10 of the present invention to which such a column 20 is mounted has a cylindrical shape, and has a cylindrical engagement portion 11 into which a column body 21 can be fitted along its axis.
該係合部１１は、カラム本体２１のフランジ部２１ｂを
除く部分が係合し得る形状をしており、該係合部１１の
下部は、カラム本体２１の流出口２１ａとは、液密に密
着し得る。カラム２０のフランジ部２１ｂは、該カラム
ホルダー１０上面に係止される。The engaging part 11 has a shape that can be engaged with the column body 21 except for the flange part 21b, and the lower part of the engaging part 11 is liquid-tight with the outlet 21a of the column body 21. Can be closely attached. The flange portion 21b of the column 20 is secured to the upper surface of the column holder 10.
該係合部１１の下部には管路１２の一方の開口端１２ａ
が連通している。該管路１２は、該係合部１１の下面か
ら下方へ延出して側方へ屈曲され、さらに係合部１１の
側方を該係合部１１に沿うように上方へ屈曲されている
。咳管路１２は、係合部１１内に装着されるカラム２０
の充填剤２２上面よりも上方に位置する分岐部１２ｄに
て二手に分岐されている。分岐された一方の分岐管路部
１２ｂは係合部１１に沿ってさらに上方へ延出し、その
開口端１２８は、このカラムホルダー１０上面から上方
へ開口している０分岐部１２ｄから分岐された他方の分
岐管路部１２ｃは、カラムホルダー１０の外周側へ延出
して、その外周面に沿って下方へ屈曲されている。そし
て、係合部１１の下方位置にて軸心側へ屈曲され、さら
に、その軸心に沿うように下方へ屈曲されている。その
開口端１２ｆはこのカラムホルダー１０上面から下方へ
開口している。One open end 12a of the conduit 12 is provided at the lower part of the engaging portion 11.
are communicating. The conduit 12 extends downward from the lower surface of the engaging portion 11 and is bent laterally, and is further bent upward along the side of the engaging portion 11 . The cough pipe line 12 has a column 20 installed in the engaging part 11.
The filler 22 is branched into two parts at a branch portion 12d located above the upper surface of the filler 22. One branched pipe line portion 12b extends further upward along the engaging portion 11, and its open end 128 is branched from the zero branch portion 12d that opens upward from the top surface of the column holder 10. The other branch pipe section 12c extends toward the outer circumferential side of the column holder 10 and is bent downward along the outer circumferential surface. Then, it is bent toward the axis at a position below the engaging portion 11, and further bent downward along the axis. The open end 12f opens downward from the upper surface of the column holder 10.
咳管路１２における分岐部１２ｄは、係合部１１に装着
されるカラム２０の充填剤２２上面よりも下方に位置し
ていなければよく、該充填剤２２上面と等しい高さ位置
もしくは該充填剤２２上面よりも上方位置とされる。ま
た、該分岐部１２ｄから上方へ延出する分岐管路部１２
ｂの開口端１２ｅは、係合部１１に装着されるカラム２
０内に注入される溶液が充填剤２２上に溜まった場合に
、その液面よりも上方に位置していればよい。他方の分
岐管路部１２Ｃの開口端１２ｆは、カラムからの流出液
が回収できる位置。The branch part 12d in the cough pipe 12 does not need to be located below the upper surface of the filler 22 of the column 20 attached to the engaging part 11, and is at a position equal to the upper surface of the filler 22 or at a position below the filler 22. 22 upper surface. Further, a branch pipe section 12 extending upward from the branch section 12d
The open end 12e of b is connected to the column 2 attached to the engaging part 11.
When the solution injected into the filler 22 accumulates on the filler 22, it is sufficient that the solution is located above the liquid level. The open end 12f of the other branch pipe section 12C is a position where the effluent from the column can be collected.
即ち該分岐部１２ｄよりも下方に位置していればよい。That is, it is sufficient if it is located below the branch portion 12d.
このような構成の本発明のカラムホルダー１０は。The column holder 10 of the present invention has such a configuration.
次のように使用される。まず、充填剤２２が充填された
カラム２０をカラムホルダー１０の係合部１１に嵌合さ
せる。そして、カラム２０が装着されたカラムホルダー
１０をアクセプター容器内にセットする。Used as follows: First, the column 20 filled with the filler 22 is fitted into the engaging portion 11 of the column holder 10. Then, the column holder 10 with the column 20 attached thereto is set in the acceptor container.
次いで、カラム２０内に精製すべき物質を注入した後に
、カラムホルダー１０を１例えばスウィング型遠心分離
機に装着する。そして、該遠心分離機を動作させると、
精製すべき物質は、充填剤２２内に侵入して該充填剤２
２に吸着される。吸着されない分画を含む溶液は、カラ
ム２０の流出口２１ａからカラムホルダー１０の管路１
２における開口端１２ａを通って該管路１２内へ流入す
る。この場合、カラム２０におけるカラム容器２１の流
出口２１ａとカラムホルダー１０の係合部１１下部とは
液密状態に密着されており、流出口２１ａから流出する
溶液は、カラムホルダー１０における管路１２内へ確実
に通流される。Next, after injecting the substance to be purified into the column 20, the column holder 10 is attached to a swing type centrifuge, for example. Then, when the centrifuge is operated,
The substance to be purified enters the filler 22 and
It is adsorbed by 2. The solution containing the unadsorbed fraction is passed from the outlet 21a of the column 20 to the pipe line 1 of the column holder 10.
It flows into the pipe line 12 through the open end 12a at 2. In this case, the outlet 21a of the column container 21 in the column 20 and the lower part of the engaging part 11 of the column holder 10 are in close contact with each other in a liquid-tight state, and the solution flowing out from the outlet 21a is transferred to the pipe 12 in the column holder 10. The flow is ensured inside.
カラムホルダー１０の管路１２内へ流入した溶液は。The solution that has flowed into the pipe line 12 of the column holder 10 is as follows.
遠心力により、カラム２０における充填剤２２の上方に
位置する分岐部１２ｄまで送給され該分岐部１２ｄから
、その開口端１２ｆが充填剤２２の下方に位置する分岐
管路部１２ｃへと通流される。そして、該溶液は、その
開口端１２ｆからアクセプター容器内へ流入し、該容器
内に貯留される。The centrifugal force causes the column 20 to be fed to the branch section 12d located above the packing material 22, and from the branch section 12d to the branch pipe section 12c whose open end 12f is located below the packing material 22. It will be done. Then, the solution flows into the acceptor container from the open end 12f and is stored in the acceptor container.
カラム２０の充填剤２２に吸着されない分画が必要な場
合には、該アクセプター容器内に貯留された溶液を回収
する。If a fraction that is not adsorbed by the packing material 22 of the column 20 is required, the solution stored in the acceptor container is recovered.
カラム２０の充填剤２２に吸着された分画を必要とする
場合には、上述のようにしてアクセプター容器内に貯留
される溶液を廃棄する。そして、カラム２０内に洗浄液
を注入しておき、該カラム２０が装着されたカラムホル
ダーＩＯを遠心分離機に装着して、該遠心分離機を動作
させる。これにより、カラム２０内の洗浄液は、充填剤
２２内へ侵入する。該洗浄液は充填剤２２内の不純物を
除去し、カラムホルダ−１Ｏの管路１２内へ流入する。If the fraction adsorbed on the packing material 22 of the column 20 is required, the solution stored in the acceptor container is discarded as described above. Then, a washing liquid is injected into the column 20, the column holder IO with the column 20 attached thereto is attached to a centrifuge, and the centrifuge is operated. As a result, the cleaning liquid in the column 20 enters the packing material 22. The cleaning liquid removes impurities in the packing material 22 and flows into the pipe line 12 of the column holder 1O.
そして、該管路１２内へ流入した洗浄液は１分岐部１２
ｄから一方の分岐管路部１２Ｃへ流入し、その開口部１
２ｆを通ってアクセプター容器内に貯留される。Then, the cleaning liquid that has flowed into the pipe line 12 is transferred to the first branch part 12.
d into one branch pipe section 12C, and its opening 1
2f and is stored in the acceptor container.
この洗浄操作は必要に応じて、数回行ってもよく、また
行わなくてもよい。This washing operation may or may not be performed several times as necessary.
次いで、アクセプター容器内の貯留した溶液を廃棄し、
カラム２０内へ溶離液を注入する。このような状態で、
カラム２０が装着されたカラムホルダー１０を遠心分離
機に装着して遠心分離機を動作させる。これにより、溶
離液は充填剤２２内へ侵入し。Then, discard the accumulated solution in the acceptor container,
Inject the eluent into the column 20. In this situation,
The column holder 10 with the column 20 attached thereto is attached to a centrifuge and the centrifuge is operated. As a result, the eluent enters into the filler 22.
充填剤２２から精製された物質が溶出される。充填剤２
２から流出した溶液は、カラムホルダー１０内の管路１
２内へ流入され、一方の分岐管路部１２ｃを通ってその
開口部１２ｆからアクセプター容器内へ注入される。The purified material is eluted from the packing material 22. Filler 2
The solution flowing out from column holder 10 is
2, passes through one branch pipe section 12c, and is injected into the acceptor container from its opening 12f.
このような溶離操作は、複数種類の溶離液を用いて複数
回行うことにより、一層精密に物質を分離させることも
できる。By performing such an elution operation multiple times using multiple types of eluents, substances can be separated more precisely.
このように１本発明のカラムホルダーｌＯを用いてカラ
ム操作をすれば、カラム２０から流出する溶液は、一旦
、カラムホルダー１０における管路１２内へ流入され、
カラム２０内の充填剤２２上面と等しい高さ位置もしく
は該充填剤２２上面よりも上方位置にある分岐部１２ｄ
にまで上昇される。そして、該分岐部１２ｄから一方の
分岐管路部１２ｃ内へ溶液が徐々に通流されるため、カ
ラムン０における充填剤？
社の液切れを招来することなく、物質を再現性よく晴製
し得る。In this manner, when a column is operated using the column holder 10 of the present invention, the solution flowing out from the column 20 is once flowed into the pipe line 12 in the column holder 10.
A branch portion 12d located at a height equal to the top surface of the filler 22 in the column 20 or at a position above the top surface of the filler 22.
It will be raised to . Then, since the solution is gradually passed from the branch section 12d into one of the branch pipe sections 12c, the filler in column 0? Substances can be purified with good reproducibility without causing liquid shortage.
カラムホルダー１０内に装着されたカラム２０内に遠心
力を付与すれば、該カラム２０のカラム容器２１は該遠
心力にてカラムホルダー１０の係合部１１内に押圧され
るため、カラム２０の流出口２１ａと係合部１１内周面
とが強く密着され２両者の液密効果は一層向上する。When a centrifugal force is applied to the column 20 installed in the column holder 10, the column container 21 of the column 20 is pressed into the engaging part 11 of the column holder 10 by the centrifugal force. The outflow port 21a and the inner circumferential surface of the engaging portion 11 are brought into close contact with each other, and the liquid-tight effect between the two is further improved.
本発明のカラムホルダーを用いたカラム操作では、複数
のカラムに同時に遠心力を付与することも可能である。In column operation using the column holder of the present invention, it is also possible to apply centrifugal force to multiple columns simultaneously.
この場合には遠心力の付与時間を若干過剰にすることに
より、カラム相互間における液の流れのばらつきを抑制
し得る。In this case, by slightly extending the application time of centrifugal force, variations in liquid flow between columns can be suppressed.
本発明のカラムホルダーを用いてカラム操作する場合に
おいて、カラムにおける充填剤の圧損が小さければ、遠
心力を付与する必要がない。この場合も、カラム内の液
切れを防止しつつ再現性よく物質を精製し得る。When operating a column using the column holder of the present invention, if the pressure loss of the packing material in the column is small, there is no need to apply centrifugal force. In this case as well, the substance can be purified with good reproducibility while preventing the liquid from running out in the column.
次に１本発明のカラムホルダーを用いて合成りＮＡオリ
ゴマー、およびマウスモノクローナル抗体を精製したの
で、その詳細について説明する。Next, a synthetic NA oligomer and a mouse monoclonal antibody were purified using the column holder of the present invention, and the details will be described below.
ｌＯＦ例」−（合成りＮＡオリゴマーの精製）まず、固
相法により１５マーのＤＮＡオリゴマーを合成した。合
成終了後に、オリゴマーの核酸塩基および燐酸部分の保
護基を常法によりすべて取り除き、５′−末端の水酸基
のみジメトキシトリチル体のままで残した。このような
操作は、 ＤＮＡ自動合成機を用いることにより、容易
に行なえる。このようにして合成されたＤＮＡオリゴマ
ーから２合成が不完全であるために生じる５゛−末端水
酸基を不純物として取り除き、５°−末端ジメトキシト
リチル体を精製すべく２本発明のカラムホルダーを用い
てカラム操作した。1OF Example - (Purification of synthesized NA oligomer) First, a 15-mer DNA oligomer was synthesized by a solid phase method. After completion of the synthesis, all the protecting groups on the nucleobase and phosphoric acid moieties of the oligomer were removed by a conventional method, leaving only the 5'-terminal hydroxyl group as a dimethoxytrityl form. Such operations can be easily performed using an automatic DNA synthesizer. The column holder of the present invention was used to remove the 5'-terminal hydroxyl group resulting from incomplete synthesis from the DNA oligomer thus synthesized, and to purify the 5'-terminal dimethoxytrityl compound. Column operation.
カラムとして、内径１ ｃｍのカラム容器内に、５０Ｉ
ＩＩＭトリエチルアミン・酢酸緩衝液（ｐｌ＋ ８．０
）で平衡化されたＣ−１８シリカゲルを充填剤として５
ｙｎｌ。As a column, 50I was placed in a column container with an inner diameter of 1 cm.
IIM triethylamine/acetate buffer (pl+ 8.0
) using C-18 silica gel as a filler.
ynl.
充填してなるミニカラムを用いた。そして、該ミニカラ
ムに前述のＤＮＡオリゴマー溶液をＱ 、 ３ ｒｄ注
入し２本発明のカラムホルダーに装着した。We used a mini-column packed with Then, the above-mentioned DNA oligomer solution was injected into the mini-column for Q and 3rd, and the mini-column was attached to the column holder of the present invention.
次いで、ミニカラムが装着されたカラムホルダーに遠心
力を作用させ、 ＤＮＡオリゴマー溶液を充填剤（Ｃ−
１８シリカゲル）に吸着させた。Next, centrifugal force is applied to the column holder equipped with the mini-column, and the DNA oligomer solution is transferred to the packing material (C-
18 silica gel).
その後、５０ｍＭ）リエチルアミン・酢酸緩衝液（ｐＨ
８，０） ５−をミニカラム内に注入して、カラムホル
ダーと共に該ミニカラムに遠心力を作用させ。Then, 50mM) ethylamine-acetate buffer (pH
8,0) Inject 5- into the minicolumn and apply centrifugal force to the minicolumn together with the column holder.
ミニカラムの充填剤を洗浄した。The packing material of the minicolumn was washed.
次に、１５％アセトニトリル−５０ｍＭ ）リエチルア
ミン・酢酸緩衝液（ｐＨ８，０＞ ５−を、ミニカラム
に注入し、カラムホルダーと共に遠心力を作用させてミ
ニカラムの充填剤を洗浄した。Next, 15% acetonitrile-50mM) ethylamine-acetic acid buffer (pH 8,0>5-) was injected into the minicolumn, and the packing material of the minicolumn was washed by applying centrifugal force together with the column holder.
最後に、３５％アセトニトリル−５０ｍＭ ）リエチル
アミン・酢酸緩衝液（ｐＨ８，０） ５ ｍｌを、ミニ
カラム内に注入して、カラムホルダーと共に遠心力を作
用させた。これにより５゛−末端ジメトキシトリチル体
が不純物である５′−末端水酸基から分離されて？容量
された。Finally, 5 ml of 35% acetonitrile-50 mM) ethylamine/acetate buffer (pH 8,0) was injected into the minicolumn, and centrifugal force was applied together with the column holder. As a result, the 5'-terminal dimethoxytrityl compound is separated from the impurity 5'-terminal hydroxyl group. capacitated.
このような処理工程において、遠心力を付与させる都度
、ミニカラムおよびカラムホルダーを観察したが、ミニ
カラムから流出した溶液はカラムホルダー内へ完全に流
入し、液漏れは生じなかった。各溶液はカラム充填剤に
より十分に処理されており、カラム充填剤の液切れは全
く認められなかった。In such a treatment step, the mini-column and column holder were observed each time centrifugal force was applied, and the solution flowing out from the mini-column completely flowed into the column holder, and no liquid leakage occurred. Each solution was sufficiently treated by the column packing material, and no liquid shortage of the column packing material was observed.
また、上述のカラム充填剤を、それぞれカラムホルダー
内に支持して、同時に遠心力を作用させることにより、
１０種類の試料を同一条件下で同時に処理した。各カラ
ムの溶離挙動はほとんど同一であった。In addition, by supporting each of the above-mentioned column packing materials in a column holder and applying centrifugal force at the same time,
Ten different samples were processed simultaneously under the same conditions. The elution behavior of each column was almost identical.
３（マウスモノクローナル抗体の精製）１０ｍＭ燐酸ナ
トリウム（ｐＨ８，２） −０，１５Ｍ塩化ナトリウム
で平衡化されたプロティンＡを固定化したアフィニティ
ーゲルであるアフィゲルプロティンＡ （Ｂｉｏ−Ｒａ
ｄ製）ｌＴｎｌを、充填剤として、内径８鰭のカラム容
器に充填して、ミニカラムを得た。3 (Purification of mouse monoclonal antibody) 10mM sodium phosphate (pH 8,2) - Affigel Protein A (Bio-Ra
A mini-column was obtained by filling a column container with an inner diameter of 8 fins with 1Tnl (manufactured by D.D.) as a filler.
そして、該ミニカラムを本発明のカラムホルダーに装着
した。Then, the mini-column was attached to the column holder of the present invention.
該ミニカラムに、２倍希釈されたマウス血清１−を注入
してカラムホルダーと共に遠心力を作用させることによ
り、該血清をカラム充填剤に吸着させた。Two-fold diluted mouse serum 1- was injected into the mini-column and centrifugal force was applied together with the column holder to adsorb the serum onto the column packing material.
次いで、 １０ｍＭ燐酸ナトリウム（ｐＨ８，２） −
０，１５Ｍ塩化ナトリウム緩衝液２０−を、カラム内に
注入して、カラムホルダーと共に遠心力を作用させ、カ
ラム充填剤を洗浄した。この洗浄後、 ０．１Ｍグリシ
ン・塩酸（ｐＨ３，０）溶出液をカラムに注入して。Then 10mM sodium phosphate (pH 8,2) -
0.15M sodium chloride buffer solution 20-2 was injected into the column, centrifugal force was applied together with the column holder, and the column packing material was washed. After this washing, a 0.1M glycine/hydrochloric acid (pH 3,0) eluate was injected into the column.
カラムホルダーと共に遠心力を作用させ、モノクローナ
ル抗体を含む溶離液をサンプルアクセプターにより回収
した。Centrifugal force was applied together with the column holder, and the eluent containing the monoclonal antibody was collected using the sample acceptor.
さらに、カラムを再使用すべ（、カラム内に。Additionally, the column should be reused (within the column).
１０ｍＭ燐酸ナトリウム（ｐＨ８，０） −０，１５Ｍ
塩化ナトリウムを注入して、カラムホルダーと共に遠心
力を作用させ、カラム内を洗浄した。10mM sodium phosphate (pH 8.0) -0.15M
Sodium chloride was injected and centrifugal force was applied together with the column holder to wash the inside of the column.
各遠心操作の都度、カラムを観察したところ。The column was observed after each centrifugation operation.
各溶液はカラム充填剤により十分に処理されており、カ
ラム充填剤の液切れは全く認められなかった。Each solution was sufficiently treated by the column packing material, and no liquid shortage of the column packing material was observed.
また、大量のモノクローナル抗体を精製するために、上
述のミニカラムを複数本用いて、同時にカラム操作した
ところ、各カラムの溶離挙動はほとんど同一であった。Furthermore, in order to purify a large amount of monoclonal antibody, multiple mini-columns described above were used and the columns were operated simultaneously, and the elution behavior of each column was almost the same.
（発明の効果）
本発明のカラムホルダーは、このように、カラム内の充
填剤に液切れを生じさせることなく、物質を再現性よく
精製し得る。特に、カラムに遠心力を作用させてカラム
操作を行っても、充填剤が液切れ状態になるおそれがな
いために、簡便なカラム操作にて、効率的に再現性よく
物質を精製し得る。(Effects of the Invention) As described above, the column holder of the present invention can purify a substance with good reproducibility without causing liquid shortage in the packing material in the column. In particular, even if the column is operated by applying centrifugal force to the column, there is no fear that the packing material will run out of liquid, so that substances can be purified efficiently and with good reproducibility by simple column operation.
４、 パ の ゛ な晋゛■
第１図は本発明のカラムホルダーにカラムを装着した状
態の断面図である。4. The details of the column Figure 1 is a cross-sectional view of a column mounted on the column holder of the present invention.
１０・・・カラムホルダー、 １１・・・係合部、１２
・・・管路。10... Column holder, 11... Engagement part, 12
...Pipeline.
１２ａ 、 １２ｅ 、 １２ ｆ −・−開口端、
１２ｂ、 １２ｃｍ・・分岐管路部、１２ｄ・・・分岐
部、２０・・・カラム、２２・・・充填剤。12a, 12e, 12f--open end,
12b, 12cm...branch pipe section, 12d...branch section, 20...column, 22...filler.
以上that's all
Claims (1)
るように充填剤が充填されたカラムを保持するカラムホ
ルダーであり、 前記カラムの流出口が液密に密着されるように該カラム
が嵌合される係合部と、 該係合部に一方の開口端が連通し、他方の開口端が複数
となるように、該係合部に嵌合されたカラムにおける充
填剤の上面に等しいかまたはそれよりも上方に位置する
分岐部にて分岐されており、該複数の開口端の一つが、
該カラムに注入されて充填剤上に貯留される溶液の液面
よりも上方に位置され、他の一つが前記分岐部よりも下
方に位置された管路と、 を有するカラムホルダー。[Claims] 1. A column holder having an outlet at the bottom and holding a column filled with a packing material so as to form an air layer at the top, the outlet of the column being liquid-tight. an engaging part into which the column is fitted so as to be in close contact with the engaging part; and an engaging part into which the column is fitted so that one open end communicates with the engaging part and a plurality of other opening ends are fitted into the engaging part. The column is branched at a branch part located equal to or above the upper surface of the packing material in the column, and one of the plurality of open ends is
A column holder comprising: a conduit located above the liquid level of the solution injected into the column and stored on the packing material, and one conduit located below the branch part.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13043387A JPS63293465A (en) | 1987-05-27 | 1987-05-27 | Column holder |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13043387A JPS63293465A (en) | 1987-05-27 | 1987-05-27 | Column holder |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63293465A true JPS63293465A (en) | 1988-11-30 |
Family
ID=15034121
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13043387A Pending JPS63293465A (en) | 1987-05-27 | 1987-05-27 | Column holder |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63293465A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2440243A (en) * | 2006-07-19 | 2008-01-23 | Ge Healthcare Bio Sciences Ab | Chromatography column |
-
1987
- 1987-05-27 JP JP13043387A patent/JPS63293465A/en active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2440243A (en) * | 2006-07-19 | 2008-01-23 | Ge Healthcare Bio Sciences Ab | Chromatography column |
| GB2440243B (en) * | 2006-07-19 | 2009-10-07 | Ge Healthcare Bio Sciences Ab | Chromatography columns,systems and methods |
| JP2010513848A (en) * | 2006-07-19 | 2010-04-30 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | Chromatography column, system and method |
| US9527009B2 (en) | 2006-07-19 | 2016-12-27 | Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab | Chromatography columns, systems and methods |
| US10048235B2 (en) | 2006-07-19 | 2018-08-14 | Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab | Chromatography columns, systems and methods |
| US10928365B2 (en) | 2006-07-19 | 2021-02-23 | Cytiva Bioprocess R&D Ab | Chromatography columns, systems and methods |
| US11927573B2 (en) | 2006-07-19 | 2024-03-12 | Cytiva Bioprocess R&D Ab | Chromatography columns, systems and methods |
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