JPS63287800A - ［１９−アラニン］カルシトニン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は生物学的活性を有するカルシトニン及び生物学
的に活性なカルシトニンに変換できるペプチド及びか＼
るペプチド及びカルシトニンの製造法に関する。

〈従来の技術〉 既知の天然カルシトニンペプチドはすべて３２個のアミ
ノ酸のアミノ酸配列順序を有している。天然カルシトニ
ンには鮭、鰻、鶏、牛、豚、羊、ラット及びヒトカルシ
トニンがある。例えは鮭カルシトニンは次式を有してい
る：６一 米国特許第３．９２６．９３８号、４，０２６．８１５
号、３，９２９，７５８号、４，０３３，９４０号、４
，３３６，１８７号、４．３８８，２３５号及び４，３
９１，７４７号には上述の鮭カルシトニンを含めたカル
シトニンの改良された合成法が開示されている。

〈発明の構成〉 公知のカルシトニンと同一の種類の生物学的活性を有し
ており、３２個のアミノ酸を持つ上述の天然産カルシト
ニンペプチドの合成カルシトニン類似体が見出された。

構造上の顕著な相違点はこの新規なペプチドでは、アミ
ノ酸配列順序が１９の位置にアラニンを有している。ペ
プチドの合成修飾についてのＩｔ）ＰＡＣ−ＩＩＪＡ命
名法［Ｂｉｏｅｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｇ、　Ａｅｔａ
、　　１３３、１−５（１９６７）］ｋ用いて、これら
の新規ペプチドは〔１９−アラニン〕カルシトニンと命
名される。この新規なペプチドは公知のカルシトニンと
比較すると、より高い薬効及び品質を有している。この
新規ペプチドはカルシトニンの形成に通常必要とされる
アミノ酸の逐次的付加と〔１９−アラニン〕カルシトニ
ンを形成する１９の位置でのアラニンの導入によって製
造される。

く態様の記載〉 公知の鮭カルシトニンと同じ種類の活性を有する新規な
〔１９−アラニン〕鮭カルシトニンの式は次の様に曹け
る；新ｍ−１［１９−アラニン〕鰻カルシトニンの構造
は次の様に書ける： 新規な〔１９−アラニン〕ヒト、カルシトニンの構造は
次のように書ける： Ｍｏｎｉｋａｗａ　ｅｔ　ａｌ、　　（Ｅｘｐｅｒｉｅ
ｎｔｉａ、　　３２　（９）、１１０４−１１０６（１
９７６））は合成鰻カルシトニンが４３００ＩＵ／η前
後の低カルシウム血症力価、を有していることを示した
が、合成類似体（１，７−α−Ｌ−アミノースペ・リン
酸）鰻カルシトニンは約３４００ＩＵ／〜の低カルシウ
ム血症力価を有している。

従って、第１番及び第７番のシスティンをα−Ｌ−アミ
ノスペリン酸で置換し、第１５罪及び第１８香のアミノ
酸部分がアラニンである鮭及び鰻カルシトニンの３１−
アミノ酸類似体も本発明に包含される。

本発明には〔１９−アラニン〕牛、豚、羊及びラットカ
ルシトニン類似体も包含する。

上で示した式から明らかなように３２個のアミノ酸がこ
の式に関与して配置され、鎖の一端のＣｙ８についての
位置１で始まり鎖の他端の位置３２のＰｒｏで終る許容
された方法に従って付番されている。記載を明瞭化する
ために、この同一の付番システムを合成サイクルでも引
用する。アミノ酸の組立はプロリンのカップリンを伴な
うサイクル３２で始まり、トレオニンのカップリンを伴
なうサイクル３１等へと続いてゆく。

一般的に（ペプチド）合成の固相法を用い、ベンズヒド
リルアミン樹脂（ＢＨＡ樹脂）と呼ぶ樹脂を用いて始め
る。

この樹脂はスチレンとジビニルベンゼンの共重合で製造
された架橋ポリスチレンビーズ樹脂から誘導される。こ
の種類の樹脂は公知であって、その製造法ｉｊ　Ｐｉｅ
ｔｔａ　ｅｔ　ａｌ。

［Ｐｉｅｔｔａ、　Ｐ、Ｓ、　ａｎｄ　Ｍａｒｓｈａｌ
ｌ、　Ｇ、Ｒ，、Ｃｈｅｍ。

Ｃｏｍｍｕｎ、、６５０（１９７０））、及びＯｒｌｏ
ｗｓｋｉ　ｅｔ　ａｌ、。

［Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、、４１．３７０１［１９７６
）］　　によって更に示されている。架橋ポリスチレン
ＢＨＡ樹脂は化学品販売業者から入手できる。以後、記
号でＢＨＡ樹脂を示し、［Ｆ］は樹脂のポリスチレン部
分である。

樹脂ペプチド合成 この合成法では、全ペプチド配列順序が樹脂上に形成さ
れる迄、アミノ酸を一時に１種類宛、不溶性の樹脂に添
加する。アミノ酸の官能基はブロッキング基で保護され
る。

α−アミノ酸はブロッキング基で保護される。アミノ酸
のα−アミノ基は第３級ブチルオキシカルボニル基又は
その等価物で保護される。このα−第３級ブチルオキシ
カルボニル基をＢＯＣと略称する。セリン及びトレオニ
ンのヒドロキシル官能はベンジル又はベンジル誘導体基
例えば４−メトキシベンジル、４−メチルベンジル、３
，４−ジメチルベンジル、４−クロロベンジル、２．６
−シクロロベンジル、４−ニトロベンジル、ベンズヒド
リル又はその等価物で保護される。ベンジル又はベンジ
ル誘導体基を表わすのに用語Ｂｚを用いる。

チロシンのヒドロキシル官能は保護されていなくても、
Ｂｚとして上述されるようなベンジル又はベンジル誘導
体基で保護されていても、又はペンジルオキシ力ルホニ
ル又はベンジルオキシカルボニル誘導体基例えば２−ク
ロロベンジルオキシカルボニル又は２−ブロモベンジル
オキシカルボニル基又はその等価物で保護されていても
良い。用語Ｗで保設基無しと、Ｂｚ基、ベンジルオキシ
カルボニル基又はペンジルオキシ力ルホニル誘導体基を
示すものとスル。

システィンのチオール官能はＢｚと命名されている上述
のベンジル又はベンジル誘導体の保護基、又はｎ−アル
キルチオ基例えばメチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピ
ルチオ、ｎ−ブチルチオ又はその等価物で保護できる。

文字Ｒ２がｎ−アルキルチオ基又はＢｚを表わすのに用
いられ、そして文字Ｒ１は、Ｒ２がｎ−アルキルチオの
時のＢｚを表わし、そしてＲ２がＢｚの時のｎ−アルキ
ルチオを光わすのに用いられる。換言するとＲ１ｆ’ｊ
別のシスティン基となり得るので、これはＲ２がＢｚで
ある場合の時である。アルギニンのグアニジンの官能は
ニトロ基、トシル基又はその等価物で保護できる。文字
Ｔをニトロ基とトシル基の両方を表わすのに用いる。リ
シンのε−アミノ官能はベンジルオキシカルボニル基又
はベンジルオキシカルボニル誘導体例工ｌｄ：２−クロ
ロベンジルオキシカルボニル、３．４−ジメチルベンジ
ルオキシカルボニル、又はその等価物で保護できる。文
字Ｖがベンジルオキシカルボニル基又はベンジルオキシ
カルボニル誘導体基を表わすのに用いられる。ヒスチジ
ンのイミダゾール窒素に用いられる保護基はベンジルオ
キシカルボニル基又はペンジルオキシカルホニル誘導体
基で、例えは上でリシンについて述べ、■で略称されて
いるものである。グルタミン酸のγ−カルボン酸基はセ
リン及びトレオニンのヒドロキシル官能の保護について
述べられたようなベンジル又はベンジル誘導体基で保護
される。

これらの保護基は文字Ｂｚで表わされている。

（例示としてだけ用いられる）鮭カルシトニンの合成の
３２サイクルのそれぞれで用いる好ましいアミノ酸反応
剤は次の表１に示されている。

表　　１ ３２　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−プロリン ３１　　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−）レオニン
３０　　　　　ＢＯＣ−グリシン ２９　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−セリン２８　
　　　　ＢＯＣ−グリシン ２７　　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−トレオニン
２６　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンｐ−ニトロフ
ェニルエステル ２５　　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−）レオニン
２４　　　　　ＢＯＣ−ω−ニトロ−Ｌ−アルギニン又
はＢＯＣ−ω−トシル−Ｌ−アルギニン ２３　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−プロリン ２２　　　　　ＢＯＣ−０−７”ロモペンジルオキシヵ
ルボニルーＬ−チロシン ２１　　　　　ＢＯＣ−２−０−ベンジル−Ｌ−）レオ
ニン ２０　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−グルタミンｐ−ニトロフェ
ニルエステル １９　　　　ＢＯＣ−Ｌ−アラニン １８　　　　　ＢＯＣ−ｇ−ＣＢＺ−Ｌ−リシン　　又
はＢＯＣ−ε−２−クロロベンジルオキシカルボニル−
Ｌ−リシン １７　　　　　ＢＯＣ−Ｎ　（ｉｍ）−ＣＢＺ−Ｌ−ヒ
スチジン １６　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン １５　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−グルタミン酸γ−ベンジル
エステル １４　　　　ＢＯＣ−Ｌ−グルタミンｐ−ニトロフェニ
ルエステル １３　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−セリン１２　
　　　　ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン １１　　　　　ＢＯＣ−ｇ−ＣＢＺ−Ｌ−リシン　　又
はＢＯＣ−ａ−２−クロロ−ベンジルカルボニル−Ｌ−
リシン １０　　　　　ＢＯＣ−グリシン ９　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン ８　　　　ＢＯＣ−Ｌ−バリン ティン、又は ＢＯＣ−８−ｎ−ブチルチオ−Ｌ−システィン ６　　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−）レオニン５
　　　　ＢＯＣ−Ｑ−ベンジル−Ｌ−セリン４　　　　
　ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン ３　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンｐ−ニトロフェ
ニルエステル ２　　　　ＢＯＣ−Ｑ−ベンジル−Ｌ−セリンシスティ
ン、 ＢＯＣ−８−３，４−ジメチルベンジル−Ｌ−システイ
ン、又は ＢＩＳ−ＢＯＣ−Ｌ−シスチン 表１に示したアミノ酸誘導体の各々は業者から入手でき
る。

サイクル３２ ＢＨＡ樹脂へのプロリンのカップリング樹脂ペプチド合
成のすべてで使用する反応容器は、物質添加用に頂部に
入口孔を、そして？濾過で可溶性反応混合物及び洗浄溶
媒を除去するためのジンタート（焼結）ガラスディスク
を底部に有しているガラス容器であろう。ｒ過は真空（
減圧）でも窒素加圧で実施し得る。容器内容物は容器全
体の振盪又は機械的攪拌器で攪拌できる。

サイクル３２ではＢＨＡ樹脂を反応容器に入れ、樹脂１
２当り約３乃至２１ｍの割合の溶媒例えば塩化メチレン
、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ベンゼン等に
懸濁させる。これに用いたＢＨＡ樹脂の遊離アミン当量
当り約１乃至６当量の量でＢＯＣ−Ｌ−プロリンを添加
する。５乃至１０分の混合時間稜、カップリング剤（Ｃ
Ａ）例えばジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）
を添加するが、他のジイミドカップリング剤を使用する
。ジイミドカップリング剤は用いるＢＯＣ−Ｌ−プロリ
ン１当量当り０．５乃至２．０当量の量を使用する。

ＢＯＣ−Ｌ−プロリンはその活性エステル誘導体、その
アジド誘導体、その対称（ｆＩＩ）無水物誘導体又は適
切に選ばれた混合（酸）無水物誘導体を用いると、カッ
プリング剤無しでもカップリングできる。使用可能な活
性エステル誘導体Ｕ２−二トロフェニルエステル、４−
ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエス
テル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル等である
。活性エステル＃’ｊ：ＢＨＡ樹脂の遊離アミン１当量
当シ１乃至１０当量の量で使用すＢＨＡ樹脂、溶媒、Ｂ
ＯＣ−Ｌ−プロリン及びカップリング剤又はＢＯＣ−Ｌ
−プロリン活性エステルから成る反応混合物は試験試料
でニンヒドリン試験［Ｅ、　Ｋａｉｓｅｒ。

ｅｔ　ａｌ、　Ａｎａｌ、　Ｂｆｏｃｈｅｍ、、　３４
．５９５−８　（１９７０））で示されるように反応が
完結する迄、機械的に攪拌又は振盪する。反応完結後、
ＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂を溶媒例えば塩化メチレン、
クロロホルム、メチルアルコール、ベンゼン、ジメチル
ホルムアミド又は酢酸で洗浄できる。洗浄溶媒の量は当
初用いたＢＨＡ樹脂１りについて５乃至２〇−が適切で
あろう。完結前にカップリンク反応を終結させることが
望１れる時には洗浄プロセスを用い且つＢＯＣ−Ｌ−プ
ロリン樹脂上の残余の遊離アミノ基を過剰のアセチル化
剤を用いたアセチル化で更なる反応からブロックできる
。アセチル化法はＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂をアセチル
化剤の溶液と０．５乃至１２時間の間攪拌して実施でき
る。

アセチル化試薬例えば塩化メチレン溶液中のＮ−アセチ
ルイミダゾール又はクロロホルム中の無水酢酸とトリエ
チルアミンの混合物が用いられる。アセチル化試薬は原
料ＢＨＡ樹脂の遊離アミンタイターの１当量肖り０．５
乃至５．０当量の量を用いる。ＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹
脂を生ずるカップリング反応は次式のように曹ける： 上述のようにして製造されたＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂
は前述したような溶媒で洗浄し、これを溶媒例えば塩化
メチレン、クロロホルム、ベンゼン等中のトリフルオロ
酢酸（ＴＦＡ）の混合物の様々剤と攪拌することによっ
て保護基を外すことができる。溶媒中のＴＦＡの量は混
合物の１０乃至１００チに変え得る。ＴＦＡ−溶蜆混合
物の量は尚初使用した樹脂１ｆ当り３乃至２０−に変え
得る。反応時間は約１０分乃至４時間である。脱保護基
工程はＴＦＡ−溶媒混合物ｋｆ’過して除去すると終了
する。残留ＴＦ’Ａは、溶媒例えば塩化メチレン、クロ
ロホルム、ベンゼン等中の５乃至３０％のトリエチルア
ミン溶液を、ＢＨＡ樹脂１ｆ当り３乃至２０ｍ１用いて
洗浄することで、ｈ−プロリン樹脂から除去できる。ト
リエチルアミンの代シに他の第３級又は第２級有機アミ
ン例えばトリメチルアミン、Ｎ−エチルピペリジン、ジ
イソプロピルアミン、等も使用できる。Ｌ−プロリン樹
脂の遊離アミンタイターはドルマン滴定法［Ｄｏｒｍａ
ｎ、　Ｌ、Ｄ、、　Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ
ｅｒｓ。

１９６９．２３１９−２１　）で測定できる。脱保護基
反応は次式のように書ける： サイクル３１ サイクル３２の結果として得られたプロリル−ＢＨＡ樹
脂をカップリング溶媒中に懸濁し、ＢＯＣ−０−Ｂｚ−
Ｌ−トレオニンを添加して同一の方法で混合物を平衡化
できる。

カップリング剤、ＤＣＣを加えて良く、イサチン試験（
Ｅ。

Ｋａｉｓｅｒ、　　ｅｔ　ａｌ、、　　Ａｎａｌ、　Ｃ
ｈｅｍｅ、　Ａｅｔａ、　　１１８．１４９−５１（１
９８０））で示される反応完結後、反応混合物はｔ過で
ＢＯＣ−０−Ｂｚ−）レオニルプロリル−ＢＨＡ樹脂カ
ニら除き得る。ペプチド樹脂は溶媒洗浄し得る。反応物
及び溶媒の量及び反応時間はサイクル３２で述べたもの
と同一である。サイクル３２で述べた脱保膿基方法によ
ってＢＯＣ基を外すことができる。得られたＯ　−Ｂｚ
　−）レオニルプロリル−ＢＨＡ樹脂に次にサイクル３
０に用い得る。サイクル３１の反応は次式のように書け
る：Ｂｚ Ｂｚ ■ 便宜上、この得られた樹脂ペプチドを三文字記号を用い
テ次のように書いても良い： サイクル３０ サイクル３０では、ＢＯＣ−０−Ｂｚ−Ｌ−トレオニン
の代りにＢＯＣ−グリシンを用いる以外はサイクル３１
と同一の方法でカップリング反応及び脱保護基反応を実
施できる。カップリング及び脱保設基を通じて反応は次
のように書ける： サイクル２９ サイクル２９では、アミノ酸誘導体をＢＯＣ−０−Ｂｚ
−Ｌ−セリンで置撥える以外はサイクル３１と同一の方
法でカップリング及び脱保護基反応を実施できる。これ
は次のように省ける： サイクル２８ サイクル２８では、アミノ酸反応物としてＢＯＣ−グリ
シンを用いる以外は、カップリング及び脱保護基反応を
サイクル３１に記載のように実施できる。カップリング
及び脱保護基を通しての反応は次のように書ける：サイ
クル２７ このサイクルでは、カップリング及び脱保護基反応を、
同一のアミノ酸反応物を用いてサイクル３１と同様に実
施して次式の化合物を得る： サイクル２６ サイクル２６では、ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンの活性エ
ステル誘導体を用いてカップリング反応を実施する。活
性エステル法はＢＯＣ−Ｌ−アスパラギン又はＢＯＣ−
Ｌ−グルタミンとＤＣＣカップリング剤の代りに用いら
れる。

ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンの活性エステル誘導体を用い
る反応は当初に使用したＢＨＡ樹脂１２当り２乃至２０
ｍ１の溶媒の量の、ジメチルボルムアミド、ジメチルホ
ルムアミドとベンゼンの混合物、塩化メチレン又はクロ
ロホルム等中のＢＨＡ樹脂の遊離アミン１轟量当シ２乃
至１０当量の旬を用いて実施できる。反応時間は１乃至
７２時間である。

ニンヒドリン試験で示されるような反応の完結Ｏ・、反
応混合物は１過でＢＯＣペプチド樹脂から除去できる。

使用すル活性エステルａｓｗ２−ニトロフェニルエステ
ル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェ
ニルエステル等である。誘導体の活性エステル部分をＡ
Ｅで示す。

カップリング反応は次のように書ける：ＢＯＣ基を外す
脱保誇基反応はサイクル３２と同様に実施される。

サイクル２５でＢＯＣ−０−Ｂｚ−Ｌ−トレオニンを、
サイクル２４でＢＯＣ−ω−Ｔ−Ｌ−アルギニンを、サ
イクル２３でＢＯＣ−Ｌ−プロリンを、サイクル２２で
ＢＯＣ−Ｗ−Ｌ−チロシンを、そしてサイクル２１でＢ
ＯＣ−０−Ｂｚ−Ｌ−トレオニンを用いて、サイクル２
５乃至２１の各々では、カップリング及び脱保護基反応
を、サイクル３１と同じ方法及び反応物の割合で実施で
きる。サイクル２１の完結で得られた化合物は次のよう
に書ける： サイクル２０ サイクル２０では、アミノ酸誘導体としてＢＯＣ−Ｌ−
グルタミン活性エステル誘導体を用いて、サイクル２６
と同一の方法及び反応物の割合を用いて実施でき、次の
化合物を生じる： サイクル１９ サイクル１９では、アミノ酸誘導体としてＢＯＣ−Ｌ−
アラニンを用い、サイクル３０と同様に実施できる。サ
イクル１９の生成化合物は： である。

サイクル１８ サイクル１８では、アミノ酸誘導体としてＢＯＣ−ｇ−
Ｖ−Ｌ−リシンを使うことができる。さもなくばサイク
ル１８の方法はサイクル３１と同様に実施でき、次の化
合物を生じる： サイクル１７乃至１５は、サイクル１７でＢＯＣ−Ｎ（
ｉｍ）−Ｖ−Ｌ−ヒスチジンを用い、サイクル１６の反
応物としてＢＯＣ−Ｌ−ロイシンを、サイクル１５で反
応物としてＢＯＣ−Ｎ　（ｉｍ）−Ｖ−Ｌ−グルタミン
酸１３ｚｊ−ステル（Ｂｚａセリン及びトレオニンにつ
いて用いられるのと同一の基を示す）を用いる以外は、
サイクル３１と同様に実施でき、サイクル１５から次の
化合物が得られる：サイクル１４はＢＯＣ−Ｌ−グルタ
ミン−ＡＥをアミノ酸誘導体として用いてサイクル２０
と同じ〈実施できる。

サイクル１３乃至８はサイクル１３ではＢＯＣ−０−Ｂ
ｚ−Ｌ−セリンを、サイクル１２でＦｉＢＯｃ−Ｌ−ロ
イシンを、サイクル１１ではＢＯＣ−ε−Ｖ−Ｌ−リシ
ンを、サイクル１０でＦｉＢＯＣ−グリシンを、サイク
ル９ではＢＯＣ−Ｌ−ロイシンを、そしてサイクル８で
はＢＯＣ−Ｌ−バリンを用いる以外はサイクル３１と同
様に実施でき、次の化合物を生じる： サイクル７ アミノ酸誘導体としてＢ６ｃｍｓ−エチルチオ−と−シ
スティン又は等側御を用いる以外はサイクル７はサイク
ル３１と同様にして実施できるサイクル７から得られた
化合物は次式で示される： 但しＲ２はアルキルチオ又はＢｚ基である。

サイクル６−２ サイクル６乃至２は、サイクル６ではアミノ酸誘導体と
してＢＯＣ−０−Ｂｚ−Ｌ−）レオニンが用いられ、サ
イクル５及び２ではアミノ酸誘導体としてＢＯＣ−０−
Ｂｚ−Ｌ−セリンが用いられ、アミノ酸誘導体としてサ
イクル４ではＢＯＣ−Ｌ−ロイシンが用いられる以外は
ザイクル３１と同様に実施できる。サイクル３１はＢＯ
Ｃ−Ｌ−アスパラギン活性エステルを用いてサイクル２
６と同じ〈実施できる。

サイクル２から得られる化合物は次のとおりである：５
ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｖａ
ｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−サイクル１ このサイクルはＢＯＣ−３−Ｒ１−Ｌ−システィン誘導
体を用いてサイクル７と同じ〈実施できる。システィン
についての選ばれるＲ、基はサイクル７で用いられたも
のと同一でも、異なっていても良い。例えばサイクル７
で選ばれた誘導体がＢＯＣ−８−エチルチオ−し−シス
ティンの時はサイクル１の誘導体ｆｉＢＯｃ−８−４−
メトキシベンジル−し−システィンとなり得る、又はサ
イクル７でＢＯＣ−８−４−メトキシベンジル−Ｌ−シ
スティン残基ばれた時は、この誘導体又はＢＯＣ−８−
エチルチオ−Ｌ−システィンもサイクル１で用いられる
。サイクル１から得られた化合物は次式で示される： Ｃｙｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−８ｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ
−但し、Ｒ１は５−ｎ−アルキル、Ｃｙｓ又はＢｚであ
り、そしてＲ２１ｄ　Ｓ　−ｎ−アルキル又ＦｉＢｚで
あって；而してＲ２がＢｚＯ時はＲ１は５−ｎ−アルキ
ル又はＣｙｓであり、且つＲ２が５−ｎ−アルキルの時
はＲ，はＢｚであるうサイクルＩＦｉ樹脂ペプチドの完
結を示している。樹脂ペプチドを反応容器から取出して
真空中で乾燥する。樹脂ペプチドの重量は合成に当初使
用したＢＨＡ樹脂の重量の２０乃至３．５倍と考えられ
る。

樹脂ペプチドの開裂 液体弗化水素（ＨＦ）を用いる処理でサイクル１で得ら
れた樹脂ペプチドからペプチドをひきはなす。ＨＦ開裂
反応は樹脂ペプチドとアニソール（樹脂ペプチド１１当
り０．５乃至５−）の混合物を（樹脂ペプチド１２当’
り２乃至２０−の）液体ＨＦで０．５乃至２０時間−２
０乃至＋１５℃で処理して実施できる。反応時間後は、
過剰のＨＦを蒸発させて除去し、ペプチドと樹脂ビード
の混合物を有機溶媒例えば酢酸エチル、ジエチルエーテ
ル、ベンゼン等で抽出して、アニソール及び残留ＨＦを
除去することができる。

樹脂ビードからペプチドを酢酸水溶液で抽出してできる
。

この段階のペプチドは環状では無く、分子の１と７の位
置のシスティンの間にジスルフィド結合の無い非環状生
成物である。

ＨＦ処理はペプチドからすべてのブロッキング基を除去
する、唯一の例外はシスティン残基のチオール官能（性
）上のＳ−アルキルチオブロッキング基であって、ｆ（
Ｆ開裂法に対して安定で、開裂及び抽出処理中ずつとそ
のま＼である。

５−Ｂｚ−Ｌ−システィン残基はＨＦによって開裂して
システィン残基と遊離のチオール官能を生じる。両種類
のブロッキング基が位置１及び７で相互に組合されて合
成中細用されている。

従って、ＨＦ開裂後に得られたペプチドは樹脂ペプチド
合成中に用いたシスティン誘導体のチオール官能につい
て選定されたブロッキング基によって４種類のいずれが
となり得る。

樹脂ペプチド合成のサイクル１でＢＯＣ−８−Ｂｚ−Ｌ
−システイン誘導体が用いられ、そしてサイクル７でＢ
ＯＣ−８−ｎ−アルキルチオ−Ｌ−システィンが用いら
れる。ＨＦ開裂後に得られたペプチドはタイプＩで位置
１に遊離チオール官能を有し、位置７のシスティン残基
上にＦｉＳ　−ｎ−アルキルチオ官能を有している。こ
のタイプＩのペプチドを次式で表わすこととする：５−
ｎ−アルキル Ｃｙｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙａ−Ｌｅｕ−８ｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙａ−Ａｌａ
−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−
Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−８ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐ
ｒｏ−ＮＨ２ 逆にサイクル１でＢＯＣ−８−ｎ−アルキルチオ−Ｌ−
システィン誘導体を用い、そして位置７でＢＯＣ−８−
Ｂｚ−Ｌ−システィンを用いると開裂で得られるペプチ
ドはタイプ■であって次式で表わされる； ５−ｎ−アルキル Ｃｙｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−８ｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉａ−Ｌｙａ−Ａｌａ
−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−
Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−８ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐ
ｒｏ−ＮＨ２ 位置１の５−ｎ−アルキル保護基の代りにＳ−システイ
ニル基　そわとこの位置のシスティンはシスチン基を形
成する）を使用し、そうすると位置７のシスティンの保
護にＢｚ基を用いることに力る。サイクル１の反応物に
ビスーＢＯＣ−Ｌ−システィンが用いられ、サイクル７
の反応物にＢＯＣ−８−Ｂ７．−Ｌ−システィンを用い
ると開裂で得られたペプチドはタイプＩＩＩで、次式で
表わされる：ｙｓ Ｃｙａ−８ｅｒ−Ａａｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−８ｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ
−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−
Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−８ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐ
ｒｏ−Ｎ’Ｈ２ 両位置１及び７の反応物にＢＯ３−８−Ｂｚ−Ｌ−シス
ティンを用いると、開裂で得られるペプチドはタイプ■
で、次式で表わされる： Ｃｙｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−８ｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ
−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−
ＡＢｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−８ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐ
ｒｏ−ＮＨ２ タイプ■、■及び■のペプチドの環状ジスルフィドペプ
チドへの変換はＨＦ開裂からの粗ペプチドの酢酸水溶液
を開裂樹脂ペプチド１７当り５０乃至２００ｒｎ！、の
最終容積に蒸留水で稀釈して用いることができる。この
溶液のｐＨは水酸化アンモニウム溶液の添加で５乃至１
０に調節し、混合物を密閉容器中で不活性ガス例えば窒
素流下で約２乃至４８時間技拌するとよい。流出ガス中
にｎ−アルヤルメルカブタンが含まれなく彦ったら反応
を中止して良い。氷酢酸の添加で反応混合物のｐＨを約
３．５乃至５．５に下ける。

タイプ■のペプチドの環状ジスルフィドペプチドへの変
換はペプチドを酸化して環状構造にし、位置１及び７に
システィンを有するようにさせる当業者に知られた古典
的方法で実施できる。

中間体ペプチドがタイプ１、Ｉｔ、ｎｌ又は■のいずれ
であっても公知のカルシトニンに対応するアミノ酸鎖を
有しているペプチドを合成できる。ここに示すように合
成婆れたか＼るペプチドは精製が可能で公知のカルシト
ニンと同一の種類の生物学的活性を有していることが判
明した。

このようにして合成されたカルシトニンは〔１９−アラ
ニン〕−力ルシトニンと呼ばれる。これはＩＵＰＡＣ−
ＩＵＢ命名法に従ったものである。

粗〔１９−アラニン〕カルシトニンの精製上記の合成法
からのｐＨ５，０の粗ペプチド溶液はイオン交換法を用
いて濃縮できる。濃縮物はゲル濾過法、イオン交換クロ
マトグラフ法及び分配クロマトクラフィーを組合わせて
精製できる。最終精製生成物は溶液から凍結乾燥でふわ
ふわした白色固体として得られる。生成物は所望ペプチ
ドについての正しいアミノ酸分析を与える。

以下はペプチドの製法についての実施例である。

実施例　１ 樹脂活性化 ０．６１ｍｅＶりのアミンタイターを持つＢＨＡ樹脂（
５２）をＡｒ１ｚｏｎａ　州　ＴｕｃｓｏｎのＶｅｇａ
　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓが販売するペプチド合成器
に入れた。樹脂を２５ｍ／！以下の溶媒で処理し、各処
理後濾過した： 塩化メチレン　　　　　　　　　　　　２分間クロロホ
ルム　　　　　　　　　　　　　２分間２回トリエチル
アミンの１０チクロロホルム溶液　５分間２回クロロホ
ルム　　　　　　　　　　　　　２分間塩化メチレン　
　　　　　　　　　　　２分間３回サイクル３２ カップリング：　　ＢＨＡ樹脂、２５ｔｄの塩化メチレ
ン及び１．３１ｆ　（０，００６１ｍｏｌ　）のＢＯＣ
−Ｌ−プロリンを１０分間攪拌した。（１−の溶液当り
１ミリ当量のＤＣＣの）ジシクロへキシルカルボジイミ
ドの塩化メチレン溶液の６．１　ｍ１！を反応器に加え
て、混合物を６時間かきませた。

濾過で反応混合物を除いてＢＯＣ−プロリル−ＢＨＡ樹
脂を次々と２分間、２５ｔｎｅ以下の洗浄を行ない、洗
液を毎回濾過で除去した。

塩化メチレン　　　　　２回 メチルアルコール　　　２回 塩化メチレン　　　　　３回 アセチル化：樹脂を次に１．５−のトリエチルアミン（
ＴＥＡ）、１−の無水酢酸及び２５−のクロロホルムの
混合物と２時間攪拌した。濾過で反応混合物を除去し、
樹脂を次に２分間宛２５−で洗浄した： クロロホルム　　　　　２回 メチルアルコール　　　２回 塩化メチレン　　　　　３回 脱保護基：　　ＢＯＣ保護した樹脂を５分間、１５ｔｎ
ｌのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と１５−の塩化メチレ
ンの混合物と攪拌した。この混合物を濾過で除いて樹脂
を次の１５一のＴＥＡと１５ｍの塩化メチレンの混合物
と３０分間攪拌した。反応混合物を濾過で除いて、樹脂
を次のもので２５１ｎ１．宛洗浄した： 塩化メチレン　　　　　　　　　２回　２分間宛メチル
アルコール　　　　　　　２回　２分間宛クロロホルム
　　　　　　　　　２回　２分間宛ＴＥＡの１０％クロ
ロホルム溶液　　２回１０分間宛クロロホルム　　　　
　　　　　　２回　２分間宛塩化メチレン　　　　　　
　　　２回　２分間宛し−プロリン樹脂を滴定してアミ
ン又はプロリンタイターをきめた。この値は樹脂１ｆ当
シアミン又はプロリンの０．５５ミリ当量であった。

サイクル３１ カップリング：　Ｌ−プロリン樹脂、２５−の塩化メチ
レン及び１．６４Ｆ　（０，００５３ｍｏｌ　）のＢＯ
Ｃ−０−ペンジル−Ｌ−）レオニンｆ１０分間攪拌した
。（１ミリ当量のＤＣＣ）のジシクロへキシルカルボジ
イミドの塩化メチレン溶液の５．５−を反応器に加えて
、混合物を２時間攪拌した。反応混合物を反応器から除
き、樹脂を次のもので２分間宛、２５ｄ宛洗浄し、毎回
ｅ過で洗液を除いた：塩化メチレン　　　　　２回 メチルアルコール　　　２回 塩化メチレン　　　　　３回 イサチン試験は陰性であった。

脱保護基：サイクル３２記載の脱保護系方法をこのサイ
クルでも繰返した。

これらのサイクルのカップリング及び脱保護系方法は次
のアミノ酸誘導体をトレオニン誘導体の代りに用いた以
外はサイクル２９と同一であった： サイクル３０−Ｂ　ＯＣグリシンの０．９３ｆ　（０，
００５３ｍｏｌ）サイクル２９・・・ＢＯＣ−０−ベン
ジル−Ｌ−セリンの１．５５９　（０，００５３ｍｏｌ
　） サイクル２８・・・使用反応物サイクル３０に同じサイ
クル２７・・・使用反応物サイクル３１に同じサイクル
２６ カツプリンク：サイクル２７から得られたペプチド樹脂
をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の２５ｍ１部で２回
洗った。樹脂を次に３５ｆｆ１７！ＯＤＭＦ中の２．８
２ｆ（０，００８ｍｏｌ　）　（Ｄ　Ｂ　ＯＣ−Ｌ　−
７スパラギンｐ−ニトロフェニルエステルと２４時間攪
拌した。反応混合物ｆ：沢過し、樹脂を次の溶媒の２５
一部で２回宛２分間洗った：ＤＭＦ、塩化メチレン、メ
タノール、塩化メチレンそれぞれ溶媒は１過で除いた。

ニンヒドリン試験は陰性であった。

脱保護基：　サイクル３２で使用した脱保護系方法を繰
返した。

サイクル２５ サイクル３１で使用したのと同一の反応剤を同量用いて
・　　　カップリング及び脱保護基を行なった。

サイクル２４ カップリング：　サイクル２５で得た樹脂ペプチドをＤ
ＭＦの２５ｍ７！部で続けて２回洗った。次に樹脂ペプ
チドを１０分間、３．４２　ｆ　（０，００８ｍｏｌ　
）のＢＯＣ−Ｎ−ａ＋−トシル−Ｌ−アルギニンと２５
−のＤＭＦの混合物ト攪拌した。次に（０，００８ｍｏ
ｌのＤＣＣに相当する）ＤＣＣの塩化メチレン溶液８−
を加えて、混合物を６時間攪拌した。ｒ過で反応混合物
を除き、樹脂ペプチドを２回続けて２５−の次の溶媒で
２分間洗った：ＤＭＦ、塩化メチレン、メチルアルコー
ル、塩化メチレン、ニンヒドリン試験は陰性であった。

説保護基：サイクル３２で用いた脱保護基を繰返した。

サイクル２３ カップリング：　サイクル２４で得たペプチド樹脂ヲ１
０分間、１．７２９　（０，００８ｍｏｌ　）のＢＯＣ
−Ｌ−プロリンと２５−の塩化メチレンと攪拌した。（
ＤＣＣのｏ、ｏｏｓｍｏｌ相当の）ＤＣＣの塩化メチレ
ン溶液８ゴを加え混合物を６時間攪拌した。反応混合物
を１過で除き、樹脂ペプチドを２分宛、２５−宛で２回
宛次の溶媒で洗った：塩化メチレン、メチルアルコール
、塩化メチレン、各洗液は１過で除いた。ニンヒドリン
試験は陰性であった。

脱保睦基：サイクル３２で用いた脱保護基を繰返した。

サイクル２２及び２１ カップリング反応でＢＯＣ−Ｌ−プロリンの代りに次の
アミノ酸誘導体を用いた以外はこのサイクルのカップリ
ング及び脱保護基反応方法はサイクル２３と同一であっ
た。

サイクル２２・・・ＢＯＣ−０−２−ブロモベンジルオ
キシカｈホ＝ｈ　−Ｌ　−チｏ　シンの４．０７９　（
０，００８ｍ０１） サイクル２１・・・ＢＯＣ−０−Ｌ−）レオニンの２．
４７９（０，００８ｍｏｌ） サイクル２０ アスパラギン誘導体の代りにＺ９４ｆ　（０，００８ｍ
ｏｌ　）＋７）ＢＯＣ−Ｌ−グルタミンｐ−ニトロフェ
ニルエステルを用いた以外は方法はサイクル２６と同一
であった。

トレオニン誘導体の代シに以下のアミノ酸誘導体を用い
た以外は方法はサイクル３０に用いたものと同一であっ
た。

サイクル１９・・・ＢＯＣ−Ｌ−アラニンの１．０６９
　（０，００５３ｍｏｌ　） サイクル１８・・・ＢＯＣＩ−２−クロロベンジルオキ
シ−Ｌ−リシンの２．２Ｏｆ　（０，００５３ｍｏｌ　
）サイクル１７・・・ＢＯＣ−Ｎ（ｉｍ）−カルボベン
ジルオキシ−Ｌ−ヒスチジンの２．０６９（０，００５
３ｍ０１） サイクル１６・・・ＢＯＣ−Ｌ−ロイシンの１．３２９
　（０，００５３ｍｏｌ　） サイクル１５・・・ＢＯＣ−Ｌ−グルタミン酸−γ−ベ
ンジルエステルの１．７９９　（０，００５３ｍｏｌ　
）サイクル１４ サイクル２０と同一。

サイクル１３ プロリン誘導体の代りに２．３６２（０，００８ｍｏｌ
）のＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−セリンをカップリング
反応で用いた以外は方法はサイクル２３で用いたものと
同一であった。

サイクル１２乃至９ カップリング反応で次のアミノ酸誘導体をトレオニン誘
導体の代りに用いた以外は使用した方法はサイクル２８
と同一であった。

サイクル１２・−・サイクル１６に用いたのと同一反応
物サイクル１１・・・サイクル１８と同一の反応物サイ
クル１０・・・サイクル３０で用いたのと同一の反応物
サイクル９・・・・・・サイクル１６で用いたのと同一
の反応物サイクル８ カップリング　：　サイクル９からの樹脂ペプチドを１
０分間、１．７４２（０，００８ｍｏｌ）のＢＯＣ−Ｌ
−バリン及び２５ｍの塩化メチレンと攪拌した。次にＤ
ＣＣの塩化メチレン溶液の８ｍ／（ＤＣＣの０．００８
　ｍｏｌに相当）を加えて混合物を１６時間攪拌したっ
ｅ過で反応混合物を除去した。樹脂ペプチドを次の溶媒
の２５ｍ部で続けて２回宛、２分間宛洗浄した：塩化メ
チレン、メチルアルコール、塩化メチレン、それぞれの
洗液は１過で除去した。

脱保護基：サイクル３１参照。

サイクル７ カップリング反応でトレオニン誘導体の代りに１．５’
１（０，００５３ｍｏｌ）のＢＯＣ−８−エチルチオ−
Ｌ−システィンを用いた以外は、方法はサイクル３１で
用いたものと同一であった。

サイクル６ 使用した方法及び反応物はサイクル３１と同一であった
。

サイクル５ 使用した方法及び反応物はサイクル２９と同一であった
。

サイクル４ 使用した方法及び反応物はサイクル１６と同一であった
。

サイクル３ 使用した方法及び反応物はサイクル２６と同一であった
。

サイクル２ 使用した方法及び反応物はサイクル２９と同一であった
。

サイクル１ トレオニン誘導体の代りに１．８１ｆ　（０，００５３
ｍｏｌ　）のＢＯＣ−８−メトキシベンジル−Ｌ−シス
ティンを用いた以外は反応物と方法はサイクル３１と同
一であった。

サイクル１の完結後、樹脂ペプチドをｎ−ヘキサンの２
５一部で２回洗った。ペプチド物質を反応器から取出し
て真空炉中４０℃、０．１ｍＨｆ　で２４時間乾燥した
。

弗化水素を用いる開裂 乾燥した樹脂ペプチド（２９）と２−のアニソールをテ
フロン製反応器に入れた。容器はテフロンコートした磁
気攪拌子付でドライアイス−アセトン浴中に入れてあり
、１５−の弗化水素ガスを容器に凝縮させた。この混合
物を水浴中Ｏ℃で１時間欅拌した。蒸発と減圧で弗化水
素を除去した。残渣を酢酸エチルの２５−の６部で磨砕
した。樹脂ビードからペプチドを０．　Ｉ　Ｎ酢酸溶液
の１２０ｔｎｌで抽出した。

ペプチドの環化 弗化水素開裂から得た酢酸水溶液抽出物を８０ｍ／！の
蒸留水を加えて２００−に稀釈した。この溶液のｐＨを
、濃水酸化アンモニウムを添加して、７．５に調節した
。溶液を密閉容器中、窒素流下で２４時間攪拌した。こ
の時点で排出窒素ガス中にエチルメルカプタンが検出で
きなくかった。

窒素中のエチルメルカプタン含量は流れをＥｌ　１ｍａ
ｎ試薬Ｃ，Ｅｌｌｍａｎ、　Ｇ、Ｌ、、　　Ａｒｃｈ、
　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、。

８２．７０−７　（１９６９））の溶液中を通して測定
した。

氷酢酸を添加して反応混合物のｐＨを５．０に調節した
。

粗［Ａ１ａ１９］ＳＣＴの精製 上記合成からのｐＨ５，０の溶液２００−を５Ｐ−２５
イオン交換カラムを用いて濃縮した。カラムから２５−
の濃縮物を０．７Ｍ塩化ナトリウム溶液で取出して、セ
ファデックス［５ｅｐｈａｄｅｘ］　Ｇ−２５（ファイ
ン）ゲル１過カラムを通し、０．０３Ｍの酢酸水溶液で
溶離させて脱塩し精製した。このカラムからのジ［Ａｌ
ａ１６＋”　：］　Ｓ　ＣＴフラクションを水酸化アン
モニウム溶液を添加してｐＨ６に調節した。

この溶液を更にワットマン［Ｗｈ　ａ　ｔｍａ　ｎ″Ｉ
ｃＭ−５２カラムを用い酢酸アンモニウム緩衝液で溶離
させるイオン交換クロマトグラフィーで精製した。この
カラムからの［Ａｌａ”’：ｌ５ＣＴフラクションを氷
酢酸を添加してｐＨ５，０に調節した。この溶液をＳＰ
−セファデックスＣ−２５イオン交換カラムを用いて濃
縮した。０，７Ｍ塩化ナトリウム溶液を用いてカラムか
ら取出した３０−の濃縮物をセファデックスＧ−２５（
ファイン）ゲル１過カラムで脱塩した。ペプチドフラク
ションを集めて凍結乾燥した。生成物を更にセフアデツ
クスＧ−２５ファインカラムと溶媒系：ｎ−ブタノール
、エタノール、０．４チ酢酸含有０．２Ｎ酢酸アンモニ
ウム（４−１−５）を用いる分配クロマトグラフィーで
精製した。生成物はカラムから０．４２のＲｆ値で溶離
する。生成物含有フラクションを合併し、ｎ−ブタノー
ルを蒸発除去した。生成物を凍結乾燥で回収した。固体
を次にセファデックスＧ−２５（ファイン）カラム上で
０．２Ｍ酢酸溶液を用いてゲル沢過した。精製したペプ
チドフラクションを集めて凍結乾燥した。

生成物はふわふわした白色固体として得られた。生成物
のアミノ酸分析は次の値を与えた、カッコ内は理論値で
ある。

ＡｓｐｌＯ（２）、Ａｌａ　１．０　（１）、Ｔｈｒ　
５．２（５）、Ｓｅｒ　３．８（４）、Ｇｌｕ　２．８
（３）、Ｐｒｏ　２．０　（２）、Ｇｌｙ３．０（４）
、Ｖａｌ　Ｏ，９（１）、Ｌｅｕ　４．０　（３）、Ｈ
ｉｓ　Ｏ，９２（１）、Ｌｙｅ　１．９（２）、Ａｒｇ
　Ｏ，９４（１）、Ｃｙｓ　１．９１（２）、Ｔｙｒ　
０．９１　（１）。

インビボのカルシトニン類似体の生物学的アッセイ〔１
９−アラニン〕鮭カルシトニンの生物学的効力（力価）
を、〔アラニン”）ＳＣＴと合成鮭カルシトニン標準品
の等部分けした用量を投与して後の血清カルシウム濃度
の減少を比較して測定した。ラットを７匹宛の４群に分
け、各群を標準品及び試験溶液の用量に無作意に割自て
た。低及び高用量は用量一応答曲線の直線部分を選んだ
。鮭カルシトニン標準品については、値Ｕ０．７及び２
．１　ｎｆペプチド／１０（１体重（ＢＷ）であった。

この用量は３及び９ＭＵ／１００ｆＢＷに近い。ペプチ
ドは皮下注射（０，２ｍ／／１００ｆＢＷ）で与え、１
時間後に血清カルシウム測定用に血液を取った。血清は
２時間以内の捕集を分析した。結果は２×２平行線アッ
セイ［Ｇａｄｄｕｍ、Ｊ、Ｈ，、Ｊ、Ｐｈａｒｍ。

Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、、　６．３４５（１９５３））　
　で分析した。使用した標準鮭カルシトニンは独立して
４，０００　ＩＵＡよυ大を有していると測定された。

［Ａｌａ１９］ＳＣＴは５．４００ＩＵ／〜と分析され
た。

発明のある態様のみを特に詳細に記載したが、だが本発
明の精神と特許請求の範囲内で当業者にとっては多くの
別の特定態様を実施でき、多くの変更も可能であろう。

出願人　　ローラーインターカβナルオーバーシーズイ
ンコーボレーテツド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、〔１９−アラニン〕カルシトニンから成ることを特
   徴とする修飾カルシトニン。 ２、該カルシトニンが鮭カルシトニン置換類似体、鰻カ
   ルシトニン置換類似体、ヒトカルシトニン置換類似体又
   は鶏カルシトニン置換類似体である請求項１記載のカル
   シトニン。 ３、構造式： 【アミノ酸配列があります】、 【アミノ酸配列があります】、 【アミノ酸配列があります】、又は 【アミノ酸配列があります】 を有する請求項１記載のカルシトニン。 ４、構造式： 【アミノ酸配列があります】、 【アミノ酸配列があります】、 【アミノ酸配列があります】、又は 【アミノ酸配列があります】 但し、Ｒ＿１はＳ−ｎ−アルキル、Ｃｙｓ又はＨであり
   、そしてＲ＿２はＳ−ｎ−アルキル又はＨであつて、而
   してＲ＿２がＨの時はＲ＿１はＳ−ｎ−アルキル、Ｃｙ
   ｓ又はＨであり、且つＲ＿１がＨの時はＲ＿２はＳ−ｎ
   −アルキル又はＨである、を有する請求項１記載のカル
   シトニン。 ５、該カルシトニンが構造式： 【アミノ酸配列があります】 を有する〔１，７−α−￥Ｌ￥−アミノスベリン酸−１
   ８−アラニン〕鰻カルシトニンである請求項１記載のカ
   ルシトニン。 ６、該カルシトニンが構造式： 【アミノ酸配列があります】 を有する〔１，７−α−￥Ｌ￥−アミノスベリン酸−１
   ８−アラニン〕鮭カルシトニンである請求項１記載のカ
   ルシトニン。 ７、該カルシトニンが構造式： 【アミノ酸配列があります】 を有する〔１，７−α−￥Ｌ￥−アミノスベリン酸−１
   ８−アラニン〕鶏カルシトニンである請求項１記載のカ
   ルシトニン。 ８、請求項１記載の修飾カルシトニンの有効量と製薬用
   キャリヤーを含有することを特徴とする血液カルシウム
   濃度調節に有用な薬用組成物。 ９、該修飾カルシトニンの約０．７乃至約２．１ｎｇの
   単位用量を有している請求項８記載の組成物。