JPS63277697A - デス−［１９−ロイシン、２０−グルタミン、２１−トレオニン］カルシトニン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は生物学的活性を有するカルシトニン及び生物学
。

的に活性なカルシトニンに変換できるペプチド及びか＼
るペプチド及びカルシトニンの製造法に関する。

〈従来の技術〉 既知の天然カルシトニンペプチドはすべて３２個のアミ
ノ酸のアミノ酸配列順序を有している。天然カルシトニ
ンには鮭、鰻、鶏、牛、豚、羊、ラット及びヒトカルシ
トニンがある。例えば鮭カルシトニンは次式を有してい
る：−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈ
ｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ
−Ｐｒｏ−ＮＨｚ米国特許第３．９２ｆ５，９３８号、
４，０６２，８１５号、３．９２α７５８号、４００３
９４０号、４，３３６，１８７号、４．４０１，５９３
号及び夷５２ａ１３２号には上述の鮭カルシトニンヲ含
めたカルシトニンの改良された合成法が開示されている
。

〈発明の構成〉 公知のカルシトニンと同一の種類の生物学的活性を有し
ており、２９個のアミノｃＲを持つ上述の天然産カルシ
トニンペプチドの合成カルシトニン類似体が見出された
。

構造上の顕著な相違点はこの新規なペプチドでは、１９
の位置にロイシン、２０の位置にグルタミン、及び２１
の位置にトレオニンが無いアミノ酸配列順序となってい
る。

この新規なペプチドはペプチドの合成的修飾についての
ＩＵＰＡＣ−ＩＵＰ命名法（Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、、
　（１９８４）２１９．３４５−３７７１を用いて、デ
ス〔−１９−ロイシン、２０−グルタミン、２１−）レ
オニンー〕カルシトニン（ｄｅｓ　Ｃ−１９−１ｅｕｃ
ｉｎｅ、　　２０−　ｇｌｕｔａｍｉｎｅ。

２１−　ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ　）ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ
　）と命名される。

この新規なペプチドは公知のカルシトニンと比較すると
より高い薬効と品質を有している。この新規なカルシト
ニンは、通常カルシトニンの形成に必要とされる、そし
て１９゜２０及び２１番の位置にそれぞれロイシン、グ
ルタミン及びトレオニンを入れないでデスＣ−１９−ロ
イシン、２０−グルタミン、２１−トレオニン−〕カル
シトニンヲ形成する遂次的なアミノ酸付加によって製造
される。

〈態様の詳細〉 公知の鮭カルシトニンと同一の種類の活性を有する新規
なデス〔−１９−ロイシン、２０−グルタミン、２１−
トレオニ／−〕酔カルシトニンの式は次のように書ける
ニーＰｒｏ−ＮＨ２ 新規なデス［−１９−ロイシン、２０−グルタミン。

２１−トレオニン−〕饅方力ントニンの式は次のように
書けるニ ーＰｒｏ−ＮＨ２ 新規ナデス［−１９−ロイシン、２０−グルタミン。

２１−トレオニ／−〕鶏カルシトニンの式は次のように
書ける： Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌ
ｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒｌｏ　　１１　１２　１
３　１４　１５　１６　１７　１８　１９−Ｐｒｏ−Ａ
ｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−８ｅｒ−Ｇｌ
ｙ−Ｔｈｒ−Ｐ　ｒ　ｏ　−ＮＨ２ Ｍｏｎｉｋａｗａ、　　ｅｔ　　ａｌ、　　（Ｅｘｐｅ
ｒｉｅｎｔｉａ、　　３２　（９）。

１１０４−１１０６（１９７６））は合成鰻カルシトニ
ンが４３００１Ｕ／１１Ｐ前後の低カルシウム血症力価
を有していることを示した、一方、合成類似体（１７−
（１−Ｌ−アミノスペリンｒｓ＞鰻カルシトニンは約３
４ｏｏ工Ｕ／Ｈ９の低カルシウム血症力価を有している
。

従って本発明にはｌ及び７の位置のシスティンがＱ−Ｌ
−アミノスペリン酸で置換されアミノ酸配列Ｉｌｌ序か
らロイシン−１８，グルタミン−１９及ヒトレオニン−
２０が欠失した鮭、鰻及び鶏カルシトニンの２８個のア
ミノ酸類似体を包含するものとする。

上記の式から明らかなようにこの式には２９個のアミノ
酸が関与し、鎖の一端のＣｙｓでの１の位置で始まり、
鎖の他端の２９の位置ＤＰｒｏで終る許容された方法に
従って配置、付番されている。記載を明瞭にするために
合成のサイクルについてもこの同一の付番方法に従うも
のとする。

アミノ酸の組立てはプロリンのカップリングを伴うサイ
クル２９で始まり、トレオニンのカップリングを伴うサ
イクル２８へと続く。

一般に（ペプチド）合成の固相法を用い、ベンズヒドリ
ルアミン樹脂（ＢＨＡ樹脂）と呼ぶ樹脂を用いて開始す
る。

この樹脂はスチレンとジビニルベンゼンの共重合で製造
された架橋ポリスチレンビーズ樹脂から誘導される。こ
の種類の樹脂は公知であって、その製造法はＰｉｅｔｔ
ａ　ｅｔ　ａｌ。

［Ｐｉｅｔｔａ、　Ｐ、　Ｓ、　ａｎｄ　Ｍａｒｓｈａ
ｌｌ、　Ｇ、　Ｒ，、Ｃｈｅｍ。

Ｃｏｍｍｕｎ、、６５０（１９７０）］及びＯｒｌｏｗ
ｓｋｉ　　ｅｔによって更に示されている。架橋ポリス
チレンＢＨＡ樹脂は化学品販売業者から入手できる。以
後、記号Ｃ，Ｈ５ ［Ｆ］−〇ＨＮＨ２ でＢＨＡ樹脂を示し、［Ｆ］は樹脂のポリスチレン部分
である。

この合成法では、全ペプチド配列順序が樹脂上に形成さ
れる迄、アミノ酸を一時に１種類宛、不溶性の樹脂に添
加する。アミノ酸の官能基はブロッキング基で採機され
る。

ａ−アミノ酸はブロッキング基で保護される。アミノ酸
のＣ−アミン基は第３級ブチルオキシカルボニル基又は
その等価物で保挿される。このａ−第３級ブチルオキシ
カルボニル基金ＢＯＣと略称する。セリン及びトレオニ
ンのヒドロキシル官能はベンジル又はぺ／ジル誘導体基
例えば４−メトキシベンジル、４−メチルベンジル、３
．４−ジメチルベンジル４−クロロベンジル、ｚ６−ジ
クロベンジル、４−ニトロベンジル、ベンズヒドリル又
はその等価物で保護される。ヘンシル又はベンジル誘導
体基を表わすのに用語Ｂｚを用いる。

チロシンのヒドロキシル官能は保護されていなくても、
ＢＺとして上述されるようなベンジル又はベンジル誘導
体基で保護されていても、又はベンジルオキシカルボニ
ル又はベンジルオキシカルボニル誘導体基例えば２−ク
ロロベンジルオキシカルボニル又は２−ブロモベンジル
オキシカルボニル基又はその等価物で保護されていても
良い。用語Ｗで保護基無しと、ＢＺ基、ベンジルオキシ
カルボニル基又はベンジルオキシカルボニル誘導体基を
示すものとする。

システィンのチオール官能はＢｚと命名されている上述
のベンジル又はベンジル誘導体の保護基、又はｎ−アル
キルチオ基例えばメチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピ
ルチオ、ｎ−ブチルチオ又はその等価物で保護できる。

文字Ｒ２がｎ−アルキルチオ基又はＢｚ’ｊＨｆｉわす
のに用いられ、そして文字Ｒ，は、Ｒ２がｎ−アルキル
チオの時のＢＺを表わし、そしてＲ２がＢｚの時のｎ−
アルキルチオを表わすのに用いられる。換言するとＲ１
は別のシスティン基となり得るので、これはＲ２がＢｚ
である場合の時である。アルギニンのグアニジン官能は
ニトロ基、トシル基又はその等価物で保護できる。文字
Ｔをニトロ基とトシル基の両方を表わすのに用いる。リ
シンのε−アミノ官能はベンジルオキシカルボニル基又
はベンジルオキシカルボニル誘導体例えば２−クロロベ
ンジルオキシカルボニル、ス４−ジ、メザルペンジルオ
キシカルボニル、又はその等何物で保護できる。文字Ｖ
がベンジルオキシカルボニル基又はベンジルオキシカル
ボニル誘導体基を表わすのに用いられる。ヒスチジンの
イミダゾール窒素に用いられる保護基はベンジルオキシ
カルボニル基又はベンジルオキシカルボニル誘導体基で
、例えば上でリシンについて述べ、■で略称されている
ものである。グルタミン酸のｒ−カルボン酸基はセリン
及びトレオニンのヒドロキシル官能の保護について述べ
られたようなベンジル又はベンジル誘導体基で保護され
る。これらの保護基は文字Ｂｚで表わされている。

（例示としてだけ用いられる）鮭カルシトニンの合成の
２９サイクルのそれぞれで用いる好ましいアミノ酸反応
剤は次の表１に示されている。

表　１ ２９　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−プロリン ２８　　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−トレオニン
２７　　　　　ＢＯＣ−グリシン ２６　　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−セリン２５
　　　　　ＢＯＣ−グリシン ２４　　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｉ、−トレオニ
ン２３　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンｐ−二トロ
フェニルエステル ２２　　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−トレオニン
２１　　　　　ＢＯＣ−ω−ニトロ−Ｌ−アルギニン又
はＢＯＣ−ω−トシル−Ｌ−アルギニン２０　　　　　
　ＢＯＣ−Ｌ−プロリン１９　　　　　ＢＯＣ−０−ブ
ロモベンジルオキシカルボニル−Ｌ−チロシン １８　　　　　ＢＯＣ−ｔ−ＣＢＺ−Ｌ−リシン又はＢ
ＯＣ−ε−２−クロロ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ
−リシン １７　　　　　　ＢＯＣ−Ｎ（ｉｍ）−ＣＢＺ−Ｌ−ヒ
スチジン１６　　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン１５　
　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−グルタミンＨ−ｒ−ベンジルエ
ステル １４　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−グルタミンｐ−ニトロフェ
ニルエステル １３　　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−セリン１２
　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン １１　　　　　ＢＯＣ−１−ＣＢＺ−Ｌ−リシン又はＢ
ＯＣ−ε−２−クロロ−ベンジルカルボニル−し−リシ
ン ｌ　Ｑ　　　　　ＢＯＣ−グリシン ９　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン ８　　　　　ＢＯＣ−Ｌ−バリン ７　　　　　　ＢＯＣ−８−エチルチオ−し−７ステイ
ン、ＢＯＣ−８−メチルチオ−Ｌ−システィン、ＢＯＣ
−８−ｎ−プロピルチオ−Ｌ−システィン又はＢＯＣ−
８−ｎ−ブチルフォーし一システィン ６　　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−）レオニン５
　　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−セリン４　　　
　　ＢＯＣ−Ｌ−ロイシン ３　　　　　ＢＯｅ−Ｌ−７スパラギンｐ−ニトロフェ
ニルエステル ２　　　　　ＢＯＣ−０−ベンジル−Ｌ−セリンＩ　　
　　　　　ＢＯＣ−Ｓ　−ｐ−メトキシベンジル−Ｌ−
システィン、ＢＯＣ−８−：ｌ−ジメチルベンジル−Ｌ
−７ステイン又はＢＩＳ−ＢＯＣ−Ｌ−シスチン 表１に示したアミノ酸銹導体の各々は業者から入手でき
る。

サイクル２９ ＢＨＡｍ脂へのプロリンのカップリング樹脂ペプチド合
成のすべてで使用する反応容器は、物質添加用に頂部に
入口孔を、そして濾過で可溶性反応混合物及び洗浄溶媒
を除去するためのジンタート（焼結）ガラスディスクを
底部に有しているガラス容器であろう。濾過は真空（減
圧）でも窒素加圧で実施し得る。容器内容物は容器全体
の振盪又は機械的攪拌器で攪拌できる。

サイクル２９ではＢＨＡ樹脂を反応容器に入れ、樹脂１
２当り約３乃至２１＃！／の割合の溶媒例えば塩化メチ
レン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ベンゼン
等に懸濁させる。これに用いたＢＨＡ樹脂の遊離アミン
当量当シ約１乃至６当量の量でＢＯＣ−Ｌ−プロリンを
添加する。５乃至１０分の混合時間後、カップリング剤
（ＣＡ）例えばジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣ
Ｃ）を添加するか、他のジイミドカップリング剤を使用
する。ジイミドカップリング剤は使いるＢＯＣ−Ｌ−プ
ロリン１当量当り０．５乃至２．０当騎の量を使用する
。

ＢＯＣ−Ｌ−プロリンはその活性エステル誘導体、その
アジド誘導体、その対称（酸）無水物誘導体又は適切に
選ばれた混合（酸）無水物誘導体を用いると、カップリ
ング剤無しでもカップリングできる。使用可能な活性エ
ステル誘導体は２−ニトロフェニルエステル、４−ニト
ロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル
、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル等である。活
性エステルはＢＨＡ樹脂の遊離アミン１当量当り１乃至
１０当量の量で使用する。

ＢＨＡ樹脂、ｍｔＬ　　ＢＯＣ−Ｌ−プロリン及びカッ
プリング剤又はＢＯＣ−Ｌ−プロリン活性エステルから
成る反応混合物は試験試料でニンヒドリン試験［Ｅ、　
Ｋａｉｓｅｒ。

（１９７０））で示されるように反応が完結する迄、機
械的に攪拌又は振盪する。反応完結後、ＢＯＣ−Ｌ−プ
ロリン樹脂を溶媒例えば塩化メチレン、クロロホルム、
メチルアルコール、ベンゼン、ジメチルホルムアミド又
は酢酸で洗浄できる。洗浄溶媒の量は当初用いたＢＨＡ
樹脂１２について５乃至２０−が適切であろう。完結前
にカップリング反応を終結させることが望まれる時には
洗浄プロセスを用い且つＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂上の
残余の遊離アミン基を過剰のアセチル化剤を用いたアセ
チル化で更なる反応からブロックできる。アセチル化法
はＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂をアセチル化剤の溶液と０
．５乃至１２時間の間攪拌して実施できる。アセチル化
試薬例えば塩化メチレン溶液中のＮ−アセチルイミダゾ
ール又はクロロホルム中の無水酢酸とトリエチルアミン
の混合物が用いられる。アセチル化試薬は原料ＢＨＡ樹
脂の遊離アミンタイターの１当量当９０．５乃至５．０
当量の喰を用いる。ＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂を生ずる
カップリング反応は次式のように書ける：上述のように
して製造されたＢＯＣ−Ｌ−プロリン樹脂は前述したよ
りな溶媒で洗浄し、これを溶媒例えば塩化メチレン、ク
ロロホルム、ベンゼン等中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ
）の混合物の様な剤と攪拌することによって保護基を外
すことができる。溶媒中のＴＦＡの騨は混合物の１０乃
至１００％に変え得る。ＴＦＡ−溶媒混合物の険は当初
使用した樹脂１２当り３乃至２０ｍ１に変え得る。反応
時間は約１０分乃至４時間である。脱保護基工程はＴＦ
Ａ−溶媒混合物を濾過して除去すると終了する。残留Ｔ
ＦＡは、溶媒例えば塩化メチレン、クロロホルム、ベン
ゼン等中の５乃至３０％のトリエチルアミン溶液を、Ｂ
ＨＡ樹脂１１当り３乃至２〇−用いて洗浄することで、
見−プロリン樹脂から除去できる。トリエチルアミンの
代りに他の第３級又は第２級有機アミｙ例えばトリメチ
ルアミン、Ｎ−エチルピペリジン、ジインプロピルアミ
ン等も使用できる。Ｌ−プロリンａＦｆの遊離アミンタ
イターはドルマン滴定法２３１９−２１１で測定できる
。脱保護基反応は次式のように書ける： サイクル２８ サイクル２９の結果として得られたプロリル−ＢＨＡ樹
脂をカップリング溶媒中に懸濁し、ＢＯＣ−０−Ｂｚ−
Ｌ−トレオニンを添加して同一の方法で混合物を平衡化
できる。カップリング剤、ＤＣＣを加えて良く、イサチ
ン試験１４９−５１（１９８０））で示される反応完結
後、反応混合物は濾過でＢＯＣ−０−Ｂｚ−トレオニル
ブロリルーＢＨＡ樹脂から除き得る。ペプチド樹脂は溶
媒洗浄し得る。

反応物及び溶媒の量及び反応時間はサイクル２９で述べ
たものと同一である。サイクル２９で述べた脱保護基方
法によってＢＯＣ基を外すことができる。得られた０−
Ｂｚ−トレオニルプロリルーＢＨＡ樹脂は次にサイクル
２７に用い得る。サイクル２８の反応は次式のように書
ける：？Ｂｚ ？Ｂｚ 便宜上、この得られた樹脂ペプチドを三文字記号を用い
て次のように−Ｈいても良い： サイクル２７ サイクル２７では、ＢＯＣ−０−Ｂｚ−Ｌ−）レオニン
の代シにＢＯＣ−グリシンを用いる以外はサイクル２８
と同一の方法でカップリング反応及び脱保護基反応を実
施できる。カップリング及び脱保護基を通じて反応は次
のように書ける： サイクル２６ サイクル２６では、アミン＃！誘導体をＢＯＣ−０−Ｂ
ｚ−に−セリンで置換える以外はサイクル２８と同一の
方法でカップリング及び脱保護基反応を実施できる。こ
れは次のように曹ける： サイクル２５ サイクル２５では、アミノ酸反応物としてＢＯＣ−グリ
シンを用いる以外は、カップリング及び脱保護基反応を
サイクル２９に記載のように実施できる。カップリング
及び脱保護基を通しての反応は次のように書ける：サイ
クル２４ このサイクルでは、カップリング及び脱保護基反応をサ
イクル２８と同一のアミノ酸反応物を用いてサイクル２
８と同様に実施して次式の化合物を得る：Ｔｈｒ−Ｇｌ
ｙ−８ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ−＠サ
イクル２３ サイクル２３では、ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンの活性エ
ステル誘導体を用いてカップリング反応を実施する。活
性エステル法はＢＯＣ−Ｌ−アスパラギン又はＢＯＣ−
Ｌ−グルタミンとＤＣＣカップリング剤の代りに用いら
れる。

ＢＯＣ−Ｌ−アスパラギンの活性エステル誘導体を用い
る反応は当初に使用したＢＨＡ樹脂１２当り２乃至２０
−の溶媒の量の、ジメチルホルムアミド、ジメチルホル
ムアミドとベンゼンの混合物、塩化メチレン又はクロロ
ホルム等中のＢＨＡ樹脂の遊離アミン１当量当り２乃至
１０当量の量を用いて実施できる。反応時間は１乃至７
２時間である。

ニンヒドリン試験で示されるような反応の完結後、反応
混合物は濾過でＢＯＣペプチド樹脂から除去できる。使
用すル活性エステルｎａ体は２−ニトロフェニルエステ
ル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェ
ニルエステル等である。誘導体の活性エステル部分をＡ
Ｅで示す。

カップリング反応は次のように書ける：ＢＯＣ基を外す
脱保護基反応はサイクル２９と同様に実施される。

サイクル２２乃至１９のそれぞれでは、カップリング及
び脱保護基反応はサイクル２８と同じ方法及び反応物の
割合を用い、但しサイクル２２ではＢＯＣ−０−Ｂｚ−
Ｌ−トレオニンを用い、サイクル２１ではＢＯＣ−ω−
Ｔ−Ｌ−アルギニンを用い、サイクル２０ではＢＯＣ−
Ｌ−プロリンを、サイクル１９ではＢＯＣ−ω−Ｔ−Ｌ
−チロシンを用いて、実施できる。サイクル１９の児鯖
でイｔ＞られた化合物は次のように書ける： ６Ｈ５ −Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ−＠ サイクル１８ サイクル１８では、アミノｆｉｄ導体としてＢＯＣ−ε
−Ｖ−Ｌ−リシンを使うことができる。さもなくばサイ
クル１８の方法はサイクル２９と同様に’Ｊｉ４Ｍでき
、次の化合物を生じる： Ｂｚ　　　　　　　　Ｃ６Ｈ５ Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ−［Ｆ］プサイル１
７乃至１５は、サイクル１５で反応物としてＢＯＣ−Ｎ
（ｉｍ）−Ｖ−Ｌ−グルタミンｅＢｚエステル（Ｂｚは
セリン及びトレオニンについて用いられるのと同一の基
を示す）を用いる以外は、サイクル２８と同様に実施で
き、サイクル１５から次の化合物が得られる：サイクル
１４はＢＯＣ−Ｌ−グルタミン−ＡＥをアミノ酸誘導体
として用いてサイクル２３と同じ〈実施できる。

サイクル１３乃至８は、サイクル１３ではＢＯＣ−０−
Ｂｚ−Ｌ−セリンを、サイクル１２ではＢＯＣ−Ｌ−０
イシンを、サイクル１１ではＢＯＣ−ε−Ｖ−Ｌ−リシ
ンを、サイクル１０ではＢＯＣ−グリシンを、サイクル
９ではＢＯＣ−Ｌ−ロイシンを、そしてサイクル８では
ＢＯＣ−只一バリンを使いる以外はサイクル２８と同様
に実施でき、次の化合物を生じる： サイクル７ アミノ酸誘導体としてＢＯＣ−８−エチルチオ−に−シ
スティン又は等何物を用いる以外はサイクル７はサイク
ル２８と同様にして実施できるサイクル７から得られた
化合物は次式で示される： Ｂｚ　　　　　Ｂｚ　　　　　　Ｃ６Ｈ３Ｇｌｙ−８ｅ
ｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ→但しＲ２けア
ルキルチオ又はＢＺ基である。

サイクル６乃至２は、サイクル６ではアミノ酸誘導体と
してＢＯＣ−０−Ｂｚ−Ｌ−）レオニンが用いられ、サ
イクル５及び２ではアミノ酸誘導体としてＢＯＣ−０−
Ｂｚ−Ｌ−セリンが用いられ、アミノ酸誘導体としてサ
イクル４ではＢＯＣ−Ｌ−ロイン／が用られる以外はサ
イク玲と同様に実施できる。サイクル３はＢＯＣ−Ｌ−
アスパラギン活性エステルを用いてサイクル２４と同じ
〈実施できる。

サイクル２から得られる化合物は次のとおりである：６
Ｈ５ ＮＨＣＨ→ サイクル１ このサイクルはＢＯＣ−８−Ｒ１−Ｌ−システィン誘導
体を用いてサイクル７と同じ〈実施できる。システィン
についての選ばれるＲ１基はサイクル７で用いられたも
のと同一でも、異なっていても良い。例えばサイクル７
で選ばれた誘導体がＢＯＣ−Ｓ−エチルチオ−見−シス
ティ／の時はサイクル１の誘導体はＢＯＣ−８−４−メ
トキシベンジル−し−システィンとなり得る、又はサイ
クル７でＢＯＣ−８−４−メ）キシベンジル−に−７ス
テインが選ばれた時は、この誘導体又はＢＯＣ−８−エ
チルチオ−見−システィ／もサイクル１で用いられる。

サイクル１から得られた化合物は次式で示される二 Ｂｚ　　　　　　（４Ｈ５ Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ→ 但し、Ｒ１は５−ｎ−アルキル、Ｃｙｓ又はＢｚであり
、そしてＲ２は５−ｎ−アルキル又はＢｚであって；而
してＲ２がＢｚＯ時はＲ１は５−ｎ−アルキル又はＣｙ
ｓであり、且つＲ２が５−ｎ−アルキルの時はＲ，はＢ
ｚである。

サイクル１は樹脂ペプチドの完結を示している。樹脂ペ
プチドを反応容器から取出して真空中で乾燥する。樹脂
ペプチドの重量は合成に当初使用したＢＨＡ樹脂の重量
の２０乃至３．５倍と考えられる。

液体弗化水素（ＨＦ）を用いる処理でサイクル１で得ら
れた樹脂ペプチドからペプチドをひきはなす。ＨＦ開裂
反応は樹脂ペプチドとアニソール（樹脂ペプチド１２当
り０．５乃至５−）の混合物を（樹脂ペプチド１１当り
２乃至２０屑ｌの）液体ＨＦで０．５乃至２０時間−２
０乃至＋１５℃で処理して実施できる。反応時間後は、
過剰のＨＦを蒸発させて除去し、ペプチドと樹脂ビード
の混合物を有機溶媒例えば酢酸エチル、ジエチルエーテ
ル、ベンゼン等で抽出して、アニソール及び残留ＨＦ金
除去することができる。

樹脂ビードからペプチドを酢酸水溶液で抽出して除去で
きる。この段階のペプチドは環状では無く、分子の１と
７の位置のシスティンの間にジスルフィド結合の無い非
環状生成物である。

ＨＦ処理はペプチドからすべてのブロッキング基を除去
する、唯一の例外はシスティン残基のチオール官能（性
）上のＳ−アルキルチオブロッキング基であって、ＨＦ
開裂法に対して安定で、開裂及び抽出処理中ずつとその
ま＼である。５−Ｂｚ−Ｌ−システィン残基ＶｉＨＦに
よって開裂してシスティン残基と遊離のチオール官能を
生じる。両種類のブロッキング基が位置１及び７で相互
に組合されて合成中漬用されている。

従って、ＨＦ開裂後に得られたペプチドは樹脂ペプチド
合成中に用いたシスティン誘導体のチオール官能につい
て選定されたブロッキング基によって４種類のいずれか
となり得る。

樹脂ペプチド合成のサイクル１でＢＯＣ−８−Ｂｚ−Ｌ
−システィン誘導体が用いられ、そしてサイクル７でＢ
ＯＣ−８−ｎ−アルキルチオ−Ｌ−システィンが用いら
れるＨＦ開裂後に得られたペプチドはタイプＩで、位置
１に遊離チオール官能を有し、位置７のシスティン残基
上には５−ｎ−アルキルチオ官能を有している。このタ
イプ■のペプチドを次式で表わすこととする：５−ｎ−
アルキル Ｃｙｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−８ｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ
−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−
８ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ２ 逆にサイクル１でＢＯＣ−８−ｎ−アルキルチオ−見−
システィン誘導体を用い、そして位置７でＢＯＣ−Ｓ　
−Ｂｚ−Ｌ−システィンを用いると開裂で得られるペプ
チドはタイプ■であって次式で表わされる：５−ｎ−ア
ルキル Ｃｙｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−８ｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ
−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−
８ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ２ 位４１の５−ｎ−アルキル保護基の代りにＳ−システイ
ニル基それとこの位置のシスティンはシスチン基を形成
するを使用し、そうすると位＃７のシスティンの保護に
Ｂｚ基を用いることになる。サイクル１の反応物にビス
ーＢＯＣ−Ｌ−システィンが用いられ、サイクル７の反
応物にＢＯＣ−８−Ｂｚ−Ｌ−システィンを用いると開
裂で得られたペプチドはタイプ■で、次式で表わされる
：ｙｓ Ｃｙｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−８ｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ
−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−
８ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＮＨ２ 両位置１及び７の反応物にＢＯＣ−８−Ｂｚ−Ｌ−シス
ティンを用いると、開裂で得られるペプチドはタイプ■
で、次式で表わされる： Ｃｙｓ−８ｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−８ｅｒ−Ｔｈｒ−Ｃ
ｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−８ｅ
ｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ
−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−
８ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−ＭＨＩ タイプ１１　■及び■のペプチドの環状ジスルフィドペ
プチドへの変換ＶｉＨＦ開裂からの粗ペプチドの酢酸水
溶液を開裂樹脂ペプチド１ｆ当り５０乃至２００　ｍｅ
の栄終容積に蒸留水で稀釈して用なうことができる。こ
の溶液のｐＨは水酸化アンモニウム溶液の添加で５乃至
１０に調節し、混合物を密閉容器中で不活性ガス例えば
窒素流下で約２乃至４８時間攪拌するとよい。流出ガス
中にｎ−アルキルメルカプタンが含まれなくなったら反
応を中止して良い。氷酢酸の添加で反応混合物のｐＨを
約３．５乃至５．５に下げる。

タイプ■のペプチドの環状ジスルフィドペプチドへの変
換はペプチドを酸化して環状構造にし、位置１及び７に
システィンを有するようにさせる当業者に知られた古典
的方法で実施できる。

中間体ペプチドがタイプＩ、ＩＩ、ＩＩＩ又は■のいず
れであっても公知のカルシトニンに対応するアミノ酸鎖
を有しているペプチドを合成できる。ここに示すように
合成されたか＼るペプチドは精製が可能で公知のカルシ
トニンと同一の種類の生物学的活性を有していることが
判明した。このようにして合成されたカルシトニンはデ
ス−１９−ロイシフ、２０！ルタミン、２１−）レオニ
ンーカルシトニンと呼ばれる。これはＩＵＰＡＣ−ＩＵ
Ｂ命名法に従ったものである。

上記の合成法からのｐＨ５，０の粗ペプチド溶液はイオ
ン交換法を用いて濃縮できる。濃縮物はゲル濾過法、イ
オン交換クロマトグラフ法及び分配クロマトグラフィー
を組合わせて精製できる。最終精製生成物は溶液から凍
結乾燥でふわふわした白色固体として得られる。生成物
は所望ペプチドについての正しいアミノ酸分析を与える
。

以下はペプチドの製法についての実施例である。

実施例１ 樹脂活性化 ０．６１ｍｅｑ／ＳＦのアミンタイターを持つＢＨＡ樹
脂（５？）をＡＸ　ｉ　ｚｏｎａ　州　Ｔｕｃｓｏｎの
Ｍｅｇａ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓが販売するペプチ
ド合成器に入れた。樹脂ｆ　２５　ｍｌの以下の溶媒で
処理し、各処理後濾過した： 塩化メチレン　２分間 クロロホルム　２分間２回 トリエチルアミンの１０％クロロホルム溶液５分間２回 クロロホルム　２分間 塩化メチレン　２分間３回 サイクル２９ カップリング：　ＢＨＡ樹脂、２５ｍ／の塩化メチレン
及び１．３１　？　（０，００６１ｍｏｔ）のＢＯＣ−
Ｌ−プロリンを１０分間攪拌した。（１ｍ／の溶液当り
１ミリ当量のＤＣＣの）ジシクロへキシルカルボジイミ
ドの塩化メチレン溶液の６．１４を反応器に加えて、混
合物を６時間かきまぜた。

濾過で反応混合物を除いてＢＯＣ−プロリル−ＢＨＡ樹
脂を次々と２分間、２５ｍ／の以下の洗浄を行ない、洗
液を毎回濾過で除去した： 塩化メチレン　　２回 メチルアルコール　　２回 塩化メチレン　　３回 （ＴＥＡ）、１−の無水酢酸及び２５−のクロロホルム
の混合物と２時間攪拌した。濾過で反応混合物を除去し
、樹脂を次に２分間宛２５−で洗浄した： クロロホルム　　２回 メチルアルコール　　２回 塩化メチレン　　３回 脱保護基：　ＢＯＣ保護した樹脂を５分間、１５ｒｎｔ
のトルフルオロ酢酸（ＴＥＡ）と１５ｍ／の塩化メチレ
ンの混合物と攪拌した。この混合物を濾過で除いて樹脂
を次の１５ｍ／のＴＥＡと１５ｍ／の塩化メチレンの混
合物と３０分間攪拌した。反応混合物を濾過て除いて、
樹脂を次のもので２５−宛洗浄した： 塩化メチレン　　　２回　２分間宛 メチルアルコール　２回　２分間宛 クロロホルム　　　２回　２分間宛 ＴＥＡの１０％クロロホルム溶液　２回　１０分間宛ク
ロロホルム　　　２回　２分間宛 塩化メチレン　　　２回　２分間宛 塩化メチレン　　　２回　２分間宛 し−プロリン樹脂を滴定してアミン又はプロリンタイタ
ーをきめた。この値はアミン樹脂１２当り又はプロリン
の０．５５ミリ当量であった。

サイクル２８ ン及び１．６４　ｆ　（０，００５３ｍｏｔ）のＢＯＣ
−０−ベンジル−（−トレオニンを１０分間攪拌した。

（１ミリ当址のＤＣＣ）のジシクロへキシルカルボジイ
ミドの塩化メチレン溶液の５．５−を反応器に加えて、
混合物を２時間攪拌した。反応混合物を反応器から除き
、樹脂を次のもので２分間宛、２５−宛洗浄し、毎回濾
過で洗液を除いた：塩化メチレン　２回 メチルアルコ−ｋ　２回 塩化メチレン　３回 イサチン試験は陰性であった。

脱保挿基：サイクル２９記載の脱保護基方法をこのサイ
クルでも繰返した。

これらのサイクルのカップリング及び脱保護基方法は次
のアミノ酸誘導体をトレオニン誘導体の代りに用いた以
外けサイクル２９と同一であった： サイクル２７・　ＢＯＣグリシ７の０．９３　Ｆ　（０
，００５３ｍｏｌ）サイクル２６・・・ＢＯＣ−０−ベ
ンジル−Ｌ−セリンの１．５！１Ｍ’（０，００５３ｍ
ｏｔ）サイクル２５・・・使用反応物サイクル２７に同
じサイクル２４・・・使用反応物サイクル２８に同じサ
イクル２３ カップリング：サイクル２４から得られたペプチド樹脂
をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の２５ｍ１部で２回
洗った。樹脂を次に３５ｍ／のＤＭＦ中（７）２．８２
Ｆ（０，００８ｍｏｌ）ノＲＯＣ−Ｉ、−アスパラギン
ｐ−ニトロフェニルエステルと２４時間攪拌した。反応
混合物を濾過し、樹脂を次の溶媒の２５ｍ１部で２回宛
２分間洗っ念：ＤＭＦ、塩化メチレン、メタノール、塩
化メチレンそれぞれ溶媒は濾過で除い念。ニンヒドリン
試験は陰性であった。

脱保護基：サイクル２９で使用した脱保護基方法を繰返
した。

サイクル２２ サイクル２８で使用したのと同一の反応剤全同量用いて
カップリング及び脱保護基を行なった。

サイクル２１ カップリング：サイクル２２で得た樹脂ペプチドを頁の
２５一部で続けて２回洗った。次に樹脂ペプチドを１０
分間、３．４２　ｔ　（０，００８ｍｏｔ）のＢＤＣ−
Ｎ−ω−）シル−に一アルギニンと２５ｍ１のＤＭＦの
混合物と攪拌した。

次に（０，００８ｍｏｔのＤＣＣに相当する）ＤＣＣの
塩化メチレン溶液８ｄ′＋！ｉ−加えて、混合物を６時
間攪拌した。濾過で反応混合物金除き、樹脂ペプチドを
２回続けて２５ゴの次の溶媒で２分間洗った：ＤＭＦ、
塩化メチレン、メチルアルコール、塩化メチレン。ニン
ヒドリン試験は陰性であつた。

脱保＾基：サイクル２９で用いた脱保護基を繰返した。

サイクル２０ カッブリ／グ：サイクル２１で得たペプチド樹脂を１０
分間、１．７２　Ｆ　（０，００８ｍｏｔ）のＢＯＣ−
レープロリンと２５ｍ１の塩化メチレンのと攪拌した。

（ＤＣＣの０．００８ｍｏｌ相当の）ＤＣＣの塩化メチ
レン溶液８ｍｌを加え混合物を６時間攪拌した。反応混
合物全濾過て除き、樹脂ペプチドを２分宛、２５ｒｎｌ
宛で２回宛次の溶媒で洗った：塩化メチレン、メチルア
ルコール、塩化メチレン。各洗液は濾過で除いた。ニン
ヒドリン試験は陰性であった。

脱保護基：サイクル２９で用いた脱保護基を繰返した。

サイクル１９ ＢＯＣ−Ｌ−プロリンの代りに４．０７　？　（０，０
０８ｍｏｔ）ＢＯＣ−０−２−ブロモベンジルオキシカ
ルボニル−し−チロシンというアミノ１１．ｌＪ誘導体
カップリング反応に用いた以外は、このサイクルで用い
たカップリング及び脱保護基方法はサイクル２０と同一
であった。

トレオニン誘導体の代りに次のアミノ酸誘導体を用いた
以外はサイクル２８で用いた方法と同一であった。

サイクル１８・・・ＢＯＣ−ｇ　−２−クロロベンジル
オキシ−Ｌ−リシンの２．２０ｒ（０，００５３ｍｏｔ
） サイクル１７・・・ＢＯＣ−Ｎ（ｉｍ）−カルボベンジ
ルオキシ−Ｌ−ヒスチジンの２．０６Ｆ （０，００５３ｍｏｔ） サイクル１６・・・ＢＯＣ−Ｌ−ロイシンの１．３２ｒ
（０゜００５３ｍｏｔ） サイクル１５・・・ＢＯＣ−Ｌ−グルタミン酸−γ−ペ
ンジルエステルの１．７９Ｆ（０，００５３ｍｏｔ） サイクル１４ アスパラギン誘導体の代りに２．９４ｔ　（０，００８
ｍｏｔ）のＢＯＣ−Ｌ−グルタミンｐ−ニトロフェニル
エステルを用いた以外は方法はサイクル２３と同一であ
った。

サイクル１３ プロリン誘導体の代りに２．３６　Ｆ　（０，００８ｍ
ｏｔ）のＢＯＣ−０−ベンジル−只−セリンをカップリ
ング反応で用いた以外は方法はサイクル２１で用いたも
のと同一であった。

カップリング反応で次のアミノ酸誘導体をトレオニン誘
導体の代りに用いた以外は使用した方法はサイクル２８
と同一であった。

サイクル１２・・・サイクル１６に用いたのと同一反応
物サイクル１１・・・サイクル１８と同一の反応物サイ
クル１０・・・サイクル２７で用いたのと同一の反応物
サイクル９　・・・サイクル１６で用いたのと同一の反
応物サイクル８ カップリング：サイクル９からの樹脂ペプチドを１０分
間、１．７４　ｔ　（０，００８ｍｏｔ）のＢＯＣ−Ｉ
、−バリン及び２５１／の塩化メチレンと攪拌した。次
にＤＣＣの塩化メチレン溶液の８ｍ／（ＤＣ’Ｃの０．
００８ｍｏｌに相当）を加えて混合物を１６時間攪拌し
た。濾過で反応混合物を除去した。

樹脂ペプチドを次の溶媒の２５一部で続けて２回宛、２
分間宛洗浄した：塩化メチレン、メチルアルコール、塩
化メチレン。それぞれの洗液は濾過で除去した。

脱保護基：サイクル２８参照 サイクル７ カップリング反応でトレオニン誘導体の代りに１．５９
Ｆ（０，００５３ｍｏｔ）のＢＯＣ−８−エチルチオ−
に−システィンを用いた以外は、方法はサイクル２８で
用いたものと同一であった。

サイクル６ 使用した方法及び反応物はサイクル２８と同一であった
。

サイクル５ 使用した方法及び反応物はサイクル２６と同一であった
。

サイクル４ 使用した方法及び反応物はサイクル１６と同一であった
。

サイクル３ 使用した方法及び反応物はサイクル２４と同一であった
。

サイクル２ 使用した方法及び反応物はサイクル２６と同一であった
。

サイクル１ トレオニン誘導体の代りに１．８１Ｆ（０，００５３ｍ
ｏｔ）のＢＯＣ−８−メトキシベンジル−に−システィ
ンを用いた以外は反応物と方法はサイクル２８と同一で
あった。

サイクル１の完結後、樹脂ペプチドｋｎ−ヘキサンの２
５一部で２回洗った。ペプチド物質を反応器から取出し
て真空炉中４０℃、０．１ｍＨｙで２４時間乾燥した。

乾燥した樹脂ペプチド（２１）と２ｍｌのアニソールを
テフロン製反応器に入れた。容器はテフロンコートした
磁気攪拌子付でドラアイス−アセトン浴中に入れてあり
、１５ｄの弗化水素ガスを容器に凝縮させた。この混合
物を水浴中０℃で１時間撹拌した。蒸発と減圧で弗化水
素を除去した。残渣を酢酸エチルの２５−の６部で磨砕
した。樹脂ビードからペプチドを０．　Ｉ　Ｎ酢酸溶液
の１２０ｄで抽出した。

ペプチドの環化 弗化水素開裂から得た酢酸水溶液抽出物を８０ｍ１の蒸
留水を加えて２００ｍ／に稀釈した。この溶液のｐＨを
、濃水酸化アンモニウムを添加して、′１．５に調節し
た。溶液を密閉容器中、窒素流下で２４時間攪拌した。

この時点で排出窒素ガス中にエチルメルカプタンが検出
できなくなった。

♀素中のエチルメルカプタン含量は流れをＥｌ１ｍａｎ
試薬８２．７Ｏ−７（１９６９）：］の泪溶液を通して
測定した。

氷酢酸を添加して反応混合物のｐＨを５．０にｆＡｗＪ
シた。

上記合成からのｐＨ５，０の溶液２００　ａｔを５Ｐ−
２５イオン交換カラムを用いて濃縮した。カラムから２
５＊／の濃縮物を０．７　Ｍ塩化ナトリウム溶液で取出
して、セファデックス［５ｅｐｈａｄｅｘ　］　Ｇ　−
２５（ファイン）ゲル濾過カラムを通し、０．０３Ｍの
酢酸水溶液で溶離させて脱塩し精製した。このカラムか
らのデス［−Ｌｅｕ１９．Ｇｌｎ”。

Ｔｈｒ”−）ＳＣＴフラクションを水酸化アンモニウム
溶液を添加してｐＨ６に調節した。このｆｆ１Ｕを更に
ワットマン（Ｗｈａｔｍａｎ）ＣＭ−５２カラムを用い
、酢酸アンモニウム緩衝液で溶離させるイオン交換クロ
マトグラフィーで精製した。このカラムからのデス［−
Ｌｅｕ１９．　　Ｇｌｎ”。

Ｔｈｒ”　）　ＳＣＴフラクションを氷酢酸を添加して
ｐＨ５，０に調節した。この溶液をＳＰ−セファデック
スＣ−２５イオン交換カラムを用いて濃縮した。０．７
Ｍｉ化ナトナトリウム溶液いてカラムから取出した３０
ｍ１の濃縮物をセファデックスＧ−２５（ファイン）ゲ
ル濾過カラムで脱塩した。

ペプチドフラクションを集めて凍結乾燥した。生成物を
更にセファデックスＧ−２５フアインカラムと溶媒系：
ｎ−ブタノール、エタノール、０．０４％酢酸含有０．
２　Ｎ酢酸アンモニウム（４−１−５）ｉ用いる分配ク
ロマトグラフィーで精製した。生成物はカラムから０．
４２のＲｆ値で溶離する。生成物含有フラクションを合
併し、ｎ−ブタ、ノールを蒸発除去した。生成物を凍結
乾燥で回収した。固体を次にセファデックスＧ−２５（
７アイン）カラム上で０．２Ｍ酢酸溶液を用いてゲル濾
過した。精製したペプチドフラクションを果めて凍結乾
燥した。

生成物はふわふわした白色固体として得られた。生成物
のアミノ酸分析は次の値を与えた、カッコ内は理論値で
ある：　Ａｓｐ　２．０　（２）、　Ｔｈｒ　４．１　
（４）、　Ｓｅｔ　３．８　（４）。

Ｇｌｕ　１．９　（２）、　　Ｐｒｏ　２．０　（２）
、　Ｇｌｙ　３．０　（３）、　ＶａｔＯ，９（１）、
　　Ｌｅｕ　４．０　（４）、　Ｈｉｓ　Ｏ，９２（１
）、　　Ｌｙｓ　１．９（２）、　Ａｒｇｏ、９４　（
１）、　Ｃｙｓ　１．９１　（２）、　　Ｔｙｒ　０．
９１（１）。

デス〔−１９−ロイシン、２０−グルタミン、２１−）
レオニンー〕鮭カルシトニンの生物学的効力（力価）を
、デス（−Ｌｅｕ１９．Ｇｉｎ”、Ｔｈｒ”−）ＳＣＴ
と合成鮭カルシトニン標準品の等部分けした用量を投与
して後の血清カルシウム濃度の減少を比較して測定した
。ラットを７匹宛の４群に分け、各群を標準品及び試験
溶液の用量に無作意に割当てた。低及び高用量は用量一
応答曲線の直線部分を選んだ。鮭カルシトニ、ン標準品
については、値は０．７及び２．１ｎｐペプチド／１０
０　？体重（ＢＷ）であった。この用量は３及び９ＭＵ
／１００　ｔＢＷに近い。ペプチドは皮下注射（０，２
屑１／１ｏｏｔＢＷ）で与え、１時間後に血清カルシウ
ム測定用に血液をホつた。血清は２時間以内の捕集を分
析した。結宋は２Ｘ２平行線アッセイＣＧａｄｄｕｍ。

Ｊ、　Ｈ，、Ｊ、　Ｐｈａｒｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ
、、　６．　３４５（１９５３）］で分析した。使用し
た標準鮭カルシトニンは独立して４０００ｒＵ／岬より
犬を有していると測定された。デスＣ−Ｌｅｕ”、　Ｇ
ｌｎ”、　Ｔｈｒ”　−）　ＳＣＴは７１００ＩＵ／ｑ
と分析された。

発明のある態様のみを特に詳細に記載したが、だが本発
明の精神と特許請求の範囲内で当業者にとっては多くの
別の特定態様を実施でき、多くの変更も可能であろう。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、デス−〔１９−ロイシン、２０−グルタミン、２１
   −トレオニン〕カルシトニンから成ることを特徴とする
   修飾カルシトニン。 ２、該カルシトニンが鮭カルシトニン欠失類似体、鰻カ
   ルシトニン欠失類似体又は鶏カルシトニン欠失類似体で
   ある請求項１記載のカルシトニン。 ３、構造式： 【アミノ酸配列があります】 （鮭）、 【アミノ酸配列があります】（鰻）、又は 【アミノ酸配列があります】（鶏） を有する請求項１記載のカルシトニン。 ４、構造式： 【アミノ酸配列があります】 【アミノ酸配列があります】（鮭）、 【アミノ酸配列があります】（鰻）、又は 【アミノ酸配列があります】（鶏） 但しＲ＿１はＳ−ｎ−アルキル、Ｃｙｓ又はＨであり、
   そしてＲ＿２はＳ−ｎ−アルキル又はＨであって、而し
   てＲ＿２がＨの時はＲ＿１はＳ−ｎ−アルキル、Ｃｙｓ
   又はＨであり、且つＲ＿１がＨの時はＲ＿２はＳ−ｎ−
   アルキル又はＨである、を有する請求項１記載のカルシ
   トニン。 ５、該カルシトニンが構造式： 【アミノ酸配列があります】（鮭） を有する１，７−α−￥Ｌ￥−アミノスベリン酸−デス
   〔−１８−ロイシン、１９−グルタミン、２０−トレオ
   ニン−〕鮭カルシトニンである請求項１記載のカルシト
   ニン。 ６、該カルシトニンが構造式： 【アミノ酸配列があります】（鰻） を有する１，７−α−￥Ｌ￥−アミノスベリン酸−デス
   〔−１８−ロイシン、１９−グルタミン、２０−トレオ
   ニン−〕鰻カルシトニンである請求項１記載のカルシト
   ニン。 ７、該カルシトニンが構造式： 【アミノ酸配列があります】（鶏） を有する１，７−α−￥Ｌ￥−アミノスベリン酸−デス
   〔−１８−ロイシン、１９−グルタミン、２０−トレオ
   ニン−〕鶏カルシトニンである請求項１記載のカルシト
   ニン。 ８、請求項１記載の修飾カルシトニンの有効量と製薬用
   キャリヤーを含有することを特徴とする血液カルシウム
   濃度調節に有用な薬用組成物。 ９、該修飾カルシトニンの約０．７乃至約２．１ｎｇの
   単位用量を有している請求項８記載の組成物。